TR2021004032A2 - Li̇pozomal ozon nanosolüsyonlari - Google Patents

Li̇pozomal ozon nanosolüsyonlari

Info

Publication number
TR2021004032A2
TR2021004032A2 TR2021/004032A TR2021004032A TR2021004032A2 TR 2021004032 A2 TR2021004032 A2 TR 2021004032A2 TR 2021/004032 A TR2021/004032 A TR 2021/004032A TR 2021004032 A TR2021004032 A TR 2021004032A TR 2021004032 A2 TR2021004032 A2 TR 2021004032A2
Authority
TR
Turkey
Prior art keywords
ozone
oil
nanosolution
ozonated
acid
Prior art date
Application number
TR2021/004032A
Other languages
English (en)
Inventor
Ümi̇t Sabanci Ahmet
Original Assignee
Ahmet Uemit Sabanci
Ümi̇t Sabanci Ahmet
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ahmet Uemit Sabanci, Ümi̇t Sabanci Ahmet filed Critical Ahmet Uemit Sabanci
Priority to TR2021/004032A priority Critical patent/TR2021004032A2/tr
Priority to US18/004,973 priority patent/US20230240989A1/en
Priority to CN202280005798.1A priority patent/CN116033824A/zh
Publication of TR2021004032A2 publication Critical patent/TR2021004032A2/tr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N25/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests
    • A01N25/02—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests containing liquids as carriers, diluents or solvents
    • A01N25/04—Dispersions, emulsions, suspoemulsions, suspension concentrates or gels
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N37/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids
    • A01N37/02—Saturated carboxylic acids or thio analogues thereof; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
    • A01N43/90—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having two or more relevant hetero rings, condensed among themselves or with a common carbocyclic ring system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N53/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing cyclopropane carboxylic acids or derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N59/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing elements or inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N65/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing material from algae, lichens, bryophyta, multi-cellular fungi or plants, or extracts thereof
    • A01N65/08—Magnoliopsida [dicotyledons]
    • A01N65/22—Lamiaceae or Labiatae [Mint family], e.g. thyme, rosemary, skullcap, selfheal, lavender, perilla, pennyroyal, peppermint or spearmint
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N65/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing material from algae, lichens, bryophyta, multi-cellular fungi or plants, or extracts thereof
    • A01N65/08—Magnoliopsida [dicotyledons]
    • A01N65/36—Rutaceae [Rue family], e.g. lime, orange, lemon, corktree or pricklyash
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01P—BIOCIDAL, PEST REPELLANT, PEST ATTRACTANT OR PLANT GROWTH REGULATORY ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR PREPARATIONS
    • A01P1/00—Disinfectants; Antimicrobial compounds or mixtures thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01P—BIOCIDAL, PEST REPELLANT, PEST ATTRACTANT OR PLANT GROWTH REGULATORY ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR PREPARATIONS
    • A01P3/00—Fungicides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01P—BIOCIDAL, PEST REPELLANT, PEST ATTRACTANT OR PLANT GROWTH REGULATORY ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR PREPARATIONS
    • A01P5/00—Nematocides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01P—BIOCIDAL, PEST REPELLANT, PEST ATTRACTANT OR PLANT GROWTH REGULATORY ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR PREPARATIONS
    • A01P7/00—Arthropodicides
    • A01P7/02—Acaricides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A61K31/165—Amides, e.g. hydroxamic acids having aromatic rings, e.g. colchicine, atenolol, progabide
    • A61K31/167—Amides, e.g. hydroxamic acids having aromatic rings, e.g. colchicine, atenolol, progabide having the nitrogen of a carboxamide group directly attached to the aromatic ring, e.g. lidocaine, paracetamol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/40—Peroxides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/44—Oils, fats or waxes according to two or more groups of A61K47/02-A61K47/42; Natural or modified natural oils, fats or waxes, e.g. castor oil, polyethoxylated castor oil, montan wax, lignite, shellac, rosin, beeswax or lanolin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Insects & Arthropods (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Buluş, antiviral, antifungal ve antibakteriyel, yara iyileştirici , doku iyileştirici özelliği haiz beşeri, veterinerlik, gıda, tarım ve kimya alanlarında kullanıma uygun lipozomal ozon nanosolüsyonları ile ilgilidir. Buluş konusu lipozomal ozon nanosolüsyon hijyen amaçlı beşeri ve veteriner kullanıma uygun burun spreyi, ağız spreyi, kulak damlası, göz damlası, el yüz dezenfektanı, vaginal, rektal solüsyonlar, eklem içi, cilt altı, kas içi enjeksiyon solüsyonları olarak kullanılabileceği gibi yüzey temizleyici olarak da kullanıma uygundur. Buluş konusu lipozomal ozon nanosolüsyonların, influenza veya corona virus gibi virüsler, özellikle Sars-Cov-2 ve bakteriler özellikle Staphylococcus aureus ve Escherichia coli üzerinde etkinliği kanıtlanmıştır.

Description

TARIFNAME LIPOZOMAL OZON NANOSOLUSYONLARI Teknik Alan Bulus, antiviral, antifungal ve antibakteriyel etkili; beseri, veterinerlik, gida, tarim ve kimya alaninda kullanima uygun Iipozomal ozon nanosolüsyonlari ile ilgilidir. Teknigin Bilinen Durumu Kimya sektöründe son yillarda nanopartiküllerin kullanimi yayginlasmaktadir. Bu teknolojiler sayesinde daha küçük partiküllerle nanoboyutlarda etkinlik saplanmakta virüsler ve bakteriler üzerinde etkinlikler artmaktadir. Ayni zamanda hücre içindeki mitokondri gibi organellere aktif ilaçlari tasinmasi ve daha az kimyasal madde ile daha etkin tedaviler saglanabilmektedir. Ayni zamanda kimya sektörünün diger sektörlerinde de nano boyutlarda ürünlerin kullanilmasi avantajlar saglamaktadir. Ornegin nanopartiküllerle yapilan dezenfektan ürünler uygulama alaninda film olusturarak ortami kaplamakta ve az miktarda ürünle daha uzun süre etki saglamak mümkün olmaktadir. Bu amaçla yapilan diger partikül sistemide Iipozomlarin olusturulmasidir. Lipozomlar Iipidlerin utrasonik yag parçalama cihazlari veya benzeri nanoteknolojik yöntemler ile parçalanmasi yoluyla yapilmaktadir. Bu lipozomlar içinde ilaçlar, aktif maddeler tasinabilmekte ve hücrelerin içine aktif maddelerin tasinmasi kolaylasmaktadir. Kanser hücrelerine normalde aktif maddelerin girmesi mümkün olmazken lipozom içinde aktif maddenin kanser hücresine sokulmasi mümkün olmaktadir. Yaglarla olusturulan lipozomlar ve nano tasiyicilarin medikal, gida, tarim, veterinerlik, kozmetik, dezenfeksiyon alanlarinda kullanilmasi ile ilgili teknik alanda gelistirmeler devam etmektedir. Ornegin EP174697651 patenti ikame amonyum ve/veya polianyon ve istege bagli olarak arzu edilen bir terapötik veya görüntüleme entitesi içeren lipozom kompozisyonlari temin etmektedir. TR97/01683 ulusal patent basvurusunda ise siklosporin A veya benzeri hidrofobik ilaçlarin vücut sivilari ve I veya dokularindaki biyolojik dagilimi için Iipozomal ilaç tasiyici sistemlerinin gelistirilmesi ile ilgilidir. Ozonun gaz halinde medikal, dezenfeksiyon, antibakteriyel etkinlik, rapellant etki, insektisit etkileri, kozmetik etkileri, gida koruyucu etkileri, tarimda kullanimi, veterinerlik alaninda kullanim yöntemleri yaygin olarak yillardir kullanilmaktadir. Ancak bu yöntemler ozon gazinin stabil olmamasi ve yari ömrünün 20 dakika olmasi nedeniyle yayginlasmasini zorlastirmaktadir. Son yillarda ozonun sularla tasinmasi sularin dezenfeksiyonu gibi yöntemlerde yayginlasmaya baslamistir. Ancak bu yöntemlerde ozon kullanimini yayginlastirmaya yetmemistir. Bu sorunlarin çözümlenmesi amaciyla yaglarin ozon tasiyici olarak kullanimi hakkinda farkli alanda çalismalar yapilmaktadir. Fakat mevcut uygulamalarda yaglarin sabit ozon tasima, salinim kapasiteleri ve uygulama alanina göre etkin partikül boyutu optimizasyonunun saglanmamasi gibi sorunlarla karsilasilmaktadir. Sonuç olarak yukarida anlatilan olumsuzluklardan dolayi ve mevcut çözümlerin konu hakkindaki yetersizligi nedeniyle ilgili teknik alanda bir gelistirme yapilmasi gerekli kilinmistir. Bulusun Kisa Açiklamasi Mevcut bulus, yukarida bahsedilen gereksinimleri karsilayan, tüm dezavantajlari ortadan kaldiran ve ilave bazi avantajlar getiren Iipozomal ozon nanosolüsyonlari ile ilgilidir. Bulusun bir diger amaci, beseri , veteriner, tarim, kimya alanlarinda kullanima uygun bir antiviral, antibakteriyel, antifungal insektisit, akarisit etkili, yara iyilestirici doku iyilestirici özelligi haiz, Iipozomal ozon nanosolüsyonlari ortaya koyarak global ölçekte toplum Bulusun bir diger amaci kullanim alanina ve uygulama türüne yönelik olarak nanopartikül boyut dagilimi, etkin ozon dozu ve ozon salinim profili belirlenebilen stabilitesi kanitlanmis formülasyonlarda Iipozomal ozon nanosolüsyonlari ortaya koymaktir. Bulusun bir amaci; hem anti viral hem de anti bakteriyal etkinligi olan ; toksik etkiye yol açmayan; saglikli hücrelerin canliligi üzerine negatif etkisi görülmeyen; insan solunum sistemi (trakeo-bronsiyal) hücreleri üzerine hem rejeneratit hem de proliteratif etkisi olan Bulsun bir diger amaci; Staphylococcus aureu veya Escherichia coli gibi bakteriler üzerinde stabil anti bakteriyal, Sars-Cov-2 gibi virüsler üzerinde stabil antiviral etkinlik sunan Iipozomal ozon nanosolüsyonlari ortaya koymaktir. Bulusun bir diger amaci; deri, mukozal dokularda veya oküler, vaginal, rektal tahris edici veya irritan etkiye sahip olmayan Iipozomal ozon ve nanotasiyici polimer nanosolüsyonlari ortaya koymaktir. Bulusun bir diger amaci; mukozal dokularda sitotoksik etkiye sahip olmayan Iipozomal ozon nanosolüsyonlari ortaya koymaktir. Bulusun bir diger amaci, kisisel hijyen saglamak, viral ,bakteriyel ya da fungal hastaliklarin önlenmesi ve iyilesmesinde kullanilmak amaciyla burun spreyi, agiz spreyi, kulak damlasi, göz damlasi, vaginal solüsyon, rektal solüsyon, el yüz dezenfektani, yüzey temizleyici olarak kullanima uygun ürünler sunmaktir. Bulusun bir diger amaci, Iipozomal ozon nanosolüsyonlari içeren beseri , veteriner, tarim, kimya alanlarinda kullanima uygun antiviral, antibakteriyel, antiparaziter, antifungal etkili cillte ve yüzeylerde bariyer olusturma amaçli bariyer solüsyonlari ortaya koymaktir. Bulusun bir diger amaci, lipozomal ozon nanosolüsyonlari içeren beseri , veteriner kullanima yönelik antiviral, antibakteriyel, antifungal etkili, yara iyilestirici doku iyilestirici etkili eklem içi !cilt alti/kas içi enjeksiyon solüsyonlari ortaya koymaktir. Yukarida anlatilan amaçlarin yerine getirilmesi için bulus en temel halinde ozonlanmis emülgatörden elde edilen nanomateryaller içermekte olup ayrica sinerjetik etki saglayan ozonlanmis yagdan elde edilen nanopartikül Iipozomlar içermektedir. Bulusun yapisal ve karakteristik özellikleri ve tüm avantajlari asagida verilen detayli açiklama sayesinde daha net olarak anlasilacaktir ve bu nedenle degerlendirmenin de bu detayli açiklama göz Önüne alinarak yapilmasi gerekmektedir. Sekillerin Açiklamasi Sekil 1. Ozonlanmis yagdan elde edilen nanosolüsyonun yogunluga göre boyut dagilimi grafigidir. [Yogunluk (Yüzde) x Boyut (d.nm)] Sekil 2. Ozonlanmis emülgatörden elde edilen nanosolüsyon yogunluga göre boyut dagilimi grafigidir. [Yogunluk (Yüzde) x Boyut (d.nm)] Bulusun Detayli Açiklamasi Bu detayli açiklamada bulus konusu nanosolüsyonlar ve tercih edilen yapilanmalari sadece konunun daha iyi anlasilmasina yönelik olarak ve hiçbir sinirlayici etki olusturmayacak sekilde açiklanmaktadir. Mevcut teknikte ozonun sadece yaglarla tasindigi sistemlerde ozonun hücre gibi uygulama alanlarina penetrastonunu saglayacak boyutlarda nanopartiküllerin elde edilmesi ve bu partiküllerle saglanan ozonunun salinim hizlari sinirli kalmaktaydi. Teoride bu nanopartiküller mikron boyutlara kadar tüm nano boyutlari kapsiyor görünmesine ragmen pratikte 'örnegin 50 nm alti gibi hücre içine penetrasyonu saglayacak nano boyutta stabil partiküllerin elde edilmesi mümkün olmamaktaydi. Bulusla birlikte ozonun uygulama etkinliginin artirilmasi amaci ile ozonu tasiyabilecek en küçük boyuttaki nanpartikülleri içeren stabil sistemler saglamak üzere çalismalar yürütülmüstür. Bu çalismalarla sasirtici bir sekilde emülgatör grubuna giren Polisorbatlar, PEG gibi maddelerin ozonlanabildigi ve tasiyici yaglara göre daha küçük boyutta stabil nanopartiküller olusturabildigi ortaya konmustu r. Bulus kapsaminda yapilan çalismalarda; sadece ozonlanmis yagdan elde edilen nanosolüsyonlarda boyut dagilim analizi yapilmis olup ve yogunluga göre boyut dagilimi grafigi Sekil 1'de verilmistir. Agirlikça % 10 ozon gazi içeren ozonlanmis yag ile yapilan 1000 nanometre boyutlarda yogunlasmis solusyonlar olusturulabilmistir. Boyut analiz sonuçlari ise asagida Çizelge 1'de gösterilmektedir. Çizelge 1. Ozonlanmis yagdan elde edilen nanosolüsyonda yogunluga göre boyut dagilimi analiz sonuçalari (Dispersant RI 1,330 Ornek RI 1, Vizkozite Boyut % Standart Sapma (d.nm) Yogunluk: (d.nm) Çalismalarda karsilastirmali olarak sadece ozonlanmis emülgatöreden elde edilen nanosolüsyonun da boyut dagilim analizi yapilmis olup, yogunluga göre boyut dagilimi grafigi Sekil Zide verilmistir. Bu örnekte, Polisorbat 80 emülgatörü agirlikça %3 oraninda ozonlanmistir. Ozonlanmis polisorbat 80 konsantratinin 16 nm boyutuna kadar nanopartikül olusturabildigi göslemlenmistir. Ozonlanmis polisorbat 80 den su ile elde edilen nanosolüsyonda ise 7 nm boyutuna kadar nanopartikül olusabildigi gözlemlenmistir. Boyut dagilimi analizinde ise Sekil 2ide görüldügü gibi 7 nm - 50 nm arasi dagilim gösteren nanopartiküller elde edilmistir. Bu boyuttaki nanopartiküller ozonun hücre içine tasinmasini saglayabilecegi için örnegin virüsler üzerinde antivirüs etki saglayabilecektir. Ayni zamanda hücre içinde mitekondriye kadar girerek hücrenin enerji olusturma potansiyelini arttiracak, hücre içi growth faktörleri indükleyerek hücre içi tamir mekanizmasini aktive edecektir. Çizelge 2. Ozonlanmis emülgatörden elde edilen nanosolüsyon yogunluga göre boyut dagilimi analiz sonuçalari (Dispersant Rl 1,330 Ornek Rl 1, Vizkozite Boyut % Standart Sapma (d.nm) Yogunluk: (d.nm) Bulus kapsaminda yapilan çalismalarda ozonlanmis emülgatör ve ozonlanmis yaglardan elde edilen Iipozomal ozon nanosolüsyonlarinda uygulama alanina yönelik olarak nanopartikül boyut dagiliminin ve ozon salinim hiz dagiliminin belirlenebildigi alternatif formülasyonlarin içerige uygun bir nanoteknolojik yöntemle gelistirilebilecegi ortaya konmustur. Emülgatörlerin ozonlanmasiyla elde edilen nanopartküller yaglara göreceli olarak daha küçük boyutta ve hizli ozon salinimi saglamaktadir. Ozonlu yaglarin nanoteknolojik yöntemlerle parçalanmasi yoluyla olusturulan ozonlu Iipozomal nanosolüsyonlar stabil olmalari ve uzun etkili olmalari nedeniyle pek çok kullanim alani olusturmaktadirlar. Ozonlanmis yag, ozonlanmis emülgatör, su ile yapilan solüsyonlarda yag içindeki ozon orani belirlenmekte ve ayni standartlarda solüsyonlar olusturulmaktadir. Ornegin uzun etkili solüsyon için yag orani yüksek solüsyon kullanilir ve ozon gazi agirlikça yag içinde %1-5 oranlarinda tutulur. Daha kisa etkili ürünler olusturmak amaciyla % 6-15 oraninda agirlikça ozon gazi içeren solüsyonlar olusturulur. Bu sayede içerige göre elde edilen lipozomal ozon nanosolüsyonlarin etkinligi beseri, veteriner ve gida, tarim alanlarinda bilimsel çalismalarla kanitlanmis olup; bu alanlara yönelik formülasyonlarda kullanimi da bulus kapsamindadir. Yukarida açiklanan bulus en temel halinde Iipozomal ozon nanosolüsyonlari olup ozonlanmis emülgatör içermektedir. Bulusta bahsedilen "emülgatör"; Iesitin, Iisofosfolipid, polietilen glikol (PEG), fosfatidiletanolaminin (PEG-PE), pluronik, polisorbatlar (polisorbat 20, polisorbat 80 vb.) veya farmasötik olarak uygun bir em'ülgatör arasindan seçilen birey veya kombinasyonlardir. Bulusun tercih edilen uygulamalarinda bahsedilen emülgatör bir polisorbat veya PEG'dir. Bulusta bahsedilen "ozon gazi"; Oksijenin allotropu olup (03) , 3 oksijen atomundan olusan molekülleriyle renksiz bir gazdir ve dogada atmosferin `üst katmanlarinda yer alir. Normal kosullarda atmosferin alt kisimlarinda ozon miktari yaklasik 0,04 ppm degerindedir. Bulusun tercih edilen bir uygulamasi ayrica su içermektedir. Bulusta bahsedilen "su", distile su, tuzlu su (NaCI-H20), sekerli su, mineralli su, deiyonize su, deminarilize su, kaynak suyu, saline solüsyonu, serum fizyolojik, bitki sulari arasindan seçilen birey veya kombinasyonlardir. Bulusun tercih edilen bir uygulamasi ayrica bir tasiyici yagdan ozon gazi geçirilmesi ile elde edilen ozonlanmis yag içermektedir. Bulusta bahsedilen "tasiyici yag"; soya yagi, kantaron yagi, susam yagi, palmiye yagi, hashas yagi, soya Iesitin, kolesterol, b-sterol, trigliserid, zeytin yagi, balik yagi, ayçiçek yagi, hint yagi, safran yagi, hindistan cevizi yagi, trigliserid türevleri, tributirin, tricaproin, tricaprylin ile parafin, etil oleat, metil oleat arasindan seçilen birey veya kombinasyonlardir. Bulusun tercih edilen bir uygulamasi ayrica en az bir fonksiyonel yag içermektedir. Bulusta bahsedilen "fonksiyonel yag"; sabit velveya uçucu bitkisel yaglar arasindan seçilen birey veya kombinasyonlardir. Burada bahsedilen sabit yaglar, hindistan cevizi yagi badem yagi, jojoba yagi, kusburnu çekirdegi yagi, avokado yagi, susam yagi, kayisi çekirdegi yagi, hindistan cevizi yagi, zeytinyagi, ayçiçek yagi, soya yagi gibi bitkisel sabit yaglardir. Burada bahsedilen uçucu yaglar, adaçayi yagi, anason yagi, aynisafa yagi, biberiye yagi, çam terebentin, servi yagi , çay agaci yag, çuha çiçegi yagi, defne yapragi yagi, feslegen yagi, g'L'il yagi, hodan yagi, karabiber yagi, karanfil yagi, kekik yagi, kimyon yagi, kisnis yagi, papatya yagi, portakal yagi, greyfurt yagi, isirgan otu yagi, rezene yagi, sandal agaci yagi, sarimsak yagi, servi yagi ,yasemin yagi ,ylang ylang yagi, itir yagi, paçuli yagi , zencefil Bulusun tercih edilen bir uygulamasi ayrica en az bir organik asit içermektedir. Bulusta bahsedilen "organik asit "; formik asit , asetik asit , propiyonik asit , butirik asit , valerik asit asit ,fenol ,'ürik asit, taurin , aminometilfosfonik asit arasindan seçilen birey veya kombinasyonlardir. Bulusun tercih edilen bir uygulamasi ayrica en az bir yardimci madde içermektedir. Bulusta bahsedilen "yardimci madde"; suda ve/veya yagda çözünen vitaminler, mineraller, hyarulonik asit, timol, mentol, gliserin, etil alkol, setil alkol, butil alkol , benzil alkol, amino asitler, asetil sistein, glutatyon, bitkisel ekstraktlar, Iidokain, ksilokain gibi anestezikler, farmasötik etken maddeler arasindan seçilen birey veya kombinasyonlardir. Bulusun tercih edilen uygulamalari; ozonlanmis em'ulgat'or velveya ozonlanmis tasiyici yag içeren Nanopartik'ül Iipozomlar, gliserin, hyaluronik asit, mentol, distile su, NaCI kompozisyonundan olusmaktadir. Bulusun uygulamalari, 100 stok ppm- 60 000 stok ppm ozon gazi içermektedir. Bulusun tercih edilen uygulamalari, 1000 nm alti, tercihen 200 nm alti, daha tercihen 50 nm alti boyutlarda Iipozomal ozon nanopartik'ülleri içermektedir. Bulusun bir uygulamasina göre; Iipozomal ozon nanosolüsyonlari olusturma yöntemi asagidaki islem basamaklarini içermektedir: - Uygulama amacina yönelik uygun emülgatör vei'veya tasiyici yagin seçilmesi, - em'ulgatör ve/veya tasiyici yagin tartilmasi, - emülgat'or ve/veya tasiyici yagin içinden ozon gazi veya ozonlanmis su geçirilerek ozonlanmasi, -ozonlanmis emülgatör ve/veya tasiyici yagin tekrar tartilarak içindeki ozon miktarinin belirenmesi, - ozonlanmis emL'ilgatör ve/veya tasiyici yagin nanoboyuta indirgenmesi, tercihen su ile min.12000 devirli mikser ile en az 1 saat parçalanarak, - tercihen en az bir yardimci madde, en az bir fonksiyonel yag, en az bir organik asit arasindan seçilen bilesenlerin eklenerek karistirilmasi. Bulusun bir örnegi ozonlanmis emülgatörden olusmaktadir. Bu örnek kompozisyonun gazi geçirilerek ozonlanmaktadir. Ozonlanma islemleri ozon mikro/nano- bubble jeneratörleri ile yapilmaktadir. Ozonlanan em'ülgatör tekrar tartilarak içerisinde absorblanan ozon gazi miktari agirlikça ölçülmektedir. Nanoteknolojik yöntemlerle ozon nano-bubble içeren nanopartik'ul boyutlari 5-50 nm araligina indirgenebilmektedir. Tablo 1 de bu yöntemle elde edilen bulusun bir örnegine ait içerik bilgisi verilmektedir. Buna göre 1000 - 50 000 stok stok ppm ozon gazi içeren emi'ilgatörler elde edilmektedir. Burada tercih edilen ozonlanmis emL'ilgatör bir polisorbat veya PEG dir. Bu nanosolüsyon konsatratlari tercihen 10 000 stok ppm ozon gazi içermektedir. Tablo 1. Bulusa ait örnek içerigi Agirlikça Tercih Agirlikça Kullanilabilir Içerik edilen miktar (%) miktar (%) Emölgatör 99 95-99 Ozon gazi 1 0,1-5 Bulusun diger bir örnegi ise ozonlanmis emülgatörlerlerden su ile elde edilen ozonlu nanosolüsyondur. Yukarida belirtildigi sekilde ozon miktari belirlenen ozonlanmis em'L'iIgatör gerekli miktarda su ile en az 12000 devirli biçakli mikserlerle karistirilarak nano solüsyon elde edilir. Nanoteknolojik yöntemlerle ozon nano-bubble içeren nanopartik'ul boyutlari 5- 50 nm araligina indirgenebilmektedir. Alternatif yöntemlerde önce su ozonlanmakta ve em'ülgatör ozonlu su karistirilmaktadir. Tablo 2 de bahsedilen yöntemlerle elde edilen bulusun bir örnegine ait içerik bilgisi verilmektedir. Buna göre 100 - 35 000 stok ppm ozon gazi içeren nanosol'usyonlar elde edilmektedir. Burada tercih edilen ozonlanmis emülgatör örnegi ozonlanmis polisorbat veya PEG dir. Bu örnekler tercihen yukarida açiklanan en az bir yardimci madde içerebilir. Bu nanosolüsyonlar tercihen 5 000 stok ppm ozon gazi içermektedir. Tablo 2. Bulusa ait örnek Içerigi Agirlikça Tercih Agirlikça Kullanilabilir Içerik edilen miktar (%) miktar (%) Emülgatör 50 1-70 Ozon gazi 0,5 0,01-3,5 Su 49,5 23-98,9 Bulusun diger bir örnegi ise ozonlanmis emülgatörlerlerden ozonlanmis tasiyici yag ve su ile elde edilen nanosolüsyondur. Bu örnekte öncelikle em'ulgatör miktarlari belirlenerek ozonlanir ve tartilarak içerigindeki ozon mikari belirlerinir. Diger yanda seçilen tasiyici yaglar miktarlari belirlenerek ozonlanir ve tartilarak içerigindeki ozon mikari belirlerinir. Elde edilen ozonlanmis emülgatör, ozonlanmis tasiyici yag gerekli miktarda su ile en az 12000 devirli biçakli mikserlerle karistirilarak nano solüsyon elde edilir Nanoteknolojik yöntemlerle ozon nano-bubble içeren Iipozomlarin boyutlari istenen araliga küçültmek amaciyla ultrasonik kavitasyon kullanilabilir. Nanoteknolojik yöntemlerle ozon nano-bubble içeren bahsedilen yöntemlerle elde edilen bulusun bir örnegine ait içerik bilgisi verilmektedir. Buna göre 100 - 45 000 stok ppm ozon gazi içeren nanosolüsyonlar elde edilmektedir. Burada tercih edilen ozonlanmis em'ülgatör örnegi ozonlanmis polisorbat veya PEG, ozonlanmis tasiyici yag ise ayçiçek yagi veya zeytinyagidir. Tercihen timol,portakal yagi, karanfil yagi, limon yagi eklenebilir. Bu örnekler tercihen yukarida açiklanan en az bir yardimci madde içerebilir. Bu nanosol'üsyonlar tercihen 1100 stok ppm ozon gazi içermektedir. Tablo 3. Bulusa ait örnek içerigi Agirlikça Tercih Agirlikça Içerik edilen miktar (%) Kullanilabilir miktar (%) Tasiyici yag 10 01-30 Ozon gazi 0,11 0,01-4,5 Emülgatör 10 0.1-30 Su 97.9 39-99.79 Bulusun diger bir örnegi ise ozonlanmis emülgatörlerlerden ozonlanmis tasiyici yag, ve en az bir organik asitle ile elde edilen ozonlu lipozomal nanosolüsyonlardir. Bu örnekte öncelikle em'L'iIgatör miktarlari belirlenerek ozonlanir ve tartilarak içerigindeki ozon miktari belirlenir. Diger yanda seçilen tasiyici yaglar miktarlari belirlenerek ozonlanir ve tartilarak içerigindeki ozon mikari belirlerinir. Elde edilen ozonlanmis em'ülgatör, ozonlanmis tasiyici yag gerekli miktarda su ve seçilen organik asit ile en az 12000 devirli biçakli mikserlerle karistirilarak nanosol'üsyon elde edilir. Partik'L'iI boyutlarini küçültmek için ultrasonik kavitasyon kullanilabilir. Tablo 4 te bahsedilen yöntemlerle elde edilen bulusun bir örnegine nanosolüsyon elde edilmektedir. Burada tercih edilen ozonlanmis polisorbat veya PEG, ozonlanmis tasiyici yag ise bitkisel bir yag tercihen ayçiçek yagi, zeytinyagi, soya yagi, timol, portakal yagi, karanfil yagi, Iavanta yagi, isirgan otu yagi, limon yagi organik asit ise tercihen %100 lük asetik asitttir. Bu örnekler tercihen yukarida açiklanan en az bir yardimci madde içerebilir. Bu nanosol'üsyonlar tercihen 30 000 stok ppm ozon gazi içermektedir. Tablo 4. Bulusa ait örnek içerigi Agirlikça Tercih Agirlikça Içerik edilen miktar (%) Kullanilabilir miktar (%) Tasiyici yag 30 20-40 Ozon gazi 3 1-6 emülgatör 33 20-40 Organik asit 34 20-40 Bulusun diger bir örnegi ise ozonlanmis emülgatörlerlerden ozonlanmis tasiyici yag, en az bir organik asit ve en az bir fonksiyonel yag ile yerinde elde edilen ozonlu lipozomal nanosolüsyonlardir. Bulusun örnek uygulamalarinda ozonlanmis yag , ozonlanmis emulgatör ve organik asit ve fonksiyonel yaglar birbirine karistirilmadan kompozisyon olarak sunulmaktadir. Birbirinden ayri tabakalar halinde durmaktadir. Bunlarin tarimda su kazanlarina atilmasiyla mikser ve su ile karistirilmasi sonucu nanopartiküller olusmaktadir. Burada amaç tasimayi kolaylastirmaktir. Örnegin 1 ton suya 1-6 kilo stok kompozisyon atilarak tarlaya spreyleme yapilabilmektedir. Tablo 5 te bahsedilen yöntemlerle elde edilen gazi içeren nanosolüsyon elde edilmektedir. Burada tercih edilen ozonlanmis emülgatör örnegi ozonlanmis polisorbat veya PEG, ozonlanmis tasiyici yag ise bitkisel bir yag tercihen ayçiçek yagi, zeytinyagi, soya yagi, fonksiyonel yag tercihen timol, portakal yagi,karanfil yagi, limon yagi, Iavanta yagi, isirganotu yagi, organik asit ise asetik asittir. Bu örnekler tercihen yukarida açiklanan en az bir yardimci madde içerebilir Bu nanosol'üsyonlar tercihen 30 000 stok ppm ozon gazi içermektedir. Tablo 5. Bulusa ait 'ornek içerigi Agirlikça Tercih Agirlikça Içerik edilen miktar (%) Kullanilabilir miktar (%) Tasiyici yag 27 20-40 Ozon gazi 3 1-6 Emülgatör 30 20-40 Organik asit 30 20-40 Fonksiyonel yag 10 5-20 ORNEKö Bulusun diger bir örnegi ise ozonlanmis emülgatörlerlerden ozonlanmis tasiyici yag, en az bir organik asit, en az bir fonksiyonel yag ve alkol ile elde edilen ozonlu Iipozomal nanosolüsyonlardir. Bu örnekte öncelikle em'ülgatör miktarlari belirlenerek ozonlanir ve tartilarak içerigindeki ozon miktari belirlenir. Diger yanda seçilen tasiyici yaglar miktarlari belirlenerek ozonlanir ve tartilarak içerigindeki ozon mikari belirlerinir. Elde edilen ozonlanmis emülgatör, ozonlanmis tasiyici yag gerekli miktarda su , seçilen organik asit , fonksiyonel yag ve alkol ile en az 12000 devirli biçakli mikserlerle karistirilarak nanosol'üsyon elde edilir. Tablo 6 da bahsedilen yöntemlerle elde edilen bulusun bir nanosolüsyon elde edilmektedir. Burada tercih edilen ozonlanmis emülgat'or polisorbat veya PEG, ozonlanmis tasiyici yag tercihen ayçiçek yagi, zeytinyagi velveya soya yagi; tercih edilen organik asit ise %100 asetik asit, alkol ise %100 saf bitkisel alkol; tercih edilen fonksiyonel yag kekik yagi, portakal yagi, karanfil yagi, Iavanta yagi, isirgan otu yagi velveya limon yagidir. Bu örnekler tercihen yukarida açiklanan en az bir yardimci madde daha içerebilir. Bu nanosolüsyonlar tercihen 30 000 stok ppm ozon gazi içermektedir. Tablo 6. Bulusun bir örneginin içerigi Agirlikça Tercih Agirlikça Kullanilabilir Içerik edilen miktar (%) miktar (%) Tasiyici yag 27 20-40 Ozon gazi 3 1-6 Emülgatör 20 10-40 Organik asit 30 20-40 Fonksiyonel yag 10 5-15 Yukarida açiklanan Iipozomal ozon nanosolüsyonlarin anti bakteriyel, anti virüs, anti fungal, antiparaziter yara iyilestirici , doku iyilestirici özellikleri asagidaki bilimsel analizlerle kanitlanmistir. Bulusun bariyer olusturma amaçli bariyer solüsyonu ve eklem içi !cilt alti/kas içi enjeksiyon amaçli uygulamalari beseri , veterinerlik, gida, tarim ve kimya alaninda kullanima uygun olup örnekleri asagidaji gibidir: gida sektöründe dezenfektan, koruyucu veya gida takviyesi olarak; hayvancilik sektöründe dezenfektan, kovucu, yem- besi katkisi olarak ; saglik sektöründe özellikle dermatoloji, kulak-burun-bogaz, göz hastaliklari, agiz-dis hastaliklari, sindirim sistemi, üroloji, kadin hastaliklari, ortopedi, dolasim sistemi hastaliklarinda, gastroenteroloji, ozon terapi ve mezoterapide tedaviye yönelik farmasötik kompozisyonlarda kullanimi, Gaz ozonla yapilan tedavilere esdeger tedavi alanlarinda, kozmetik sektöründe özellikle cilt, agiz, saç bakimi için kullanilan kisisel bakim ürünlerinin üretiminde; kimya sektöründe deterjan ve dezenfektan ürünlerin üretiminde ve petrol ürünleri için katki maddesi olarak; tekstil sektörün agartici, dezenfektan, anti bakteriyel özellikte tekstil kimyasali tarim sektöründe son ürünlerde koruyucu ve kovucu, ekili ürünlerde insektisit, pestisit, fungisit, virüsit , bakteri öldürücü, bitki ve toprak dezenfektani; toprakli veya topraksiz tarimda gübre olarak Bulus kapsaminda bahsedilen antiviral etkinlik Herpesviridae, Hepadnaviridae, HfV , Togaviridae, Arenaviridae, Flaviviridae, Orthomyxoviridae (Influenzavirus A, influenzavirus B, influenzavirus C, isavirus, thogotovirus), Paramyxoviridae, Bunyaviridae, Rhabdoviridae, Filoviridae, Coronaviridae (Corona virus, özellikle Sars-Cov-2), Bornaviridae, Arteriviridae ve Retroviridae gibi viral siniflari içerebilmektedir. Bulus kapsaminda bahsedilen antibakteriyel etkinlik Aeromonas hydrophila, Arcanobacterium pyogene , Baoillus thurgiensis, Bacillus anthracis, Baoillus cereus, Clostridium botulinum, Clostridium perfringens, Clostridium septicum, Clostridium sordellii, Clostridium tetani, Corynebacterium diphtheriae, Escherichia coli, Listeria monocytogenes, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus,, Streptococcus pneumonia, Streptococcus pyogenes intermedius veya Vibrio cholera gibi bakteriyel siniflari içerebilirmektedir. Göz önüne alinan diger bakteriyel enfeksiyonlar göz , kulak , burun , bogaz, kulak, vajinal, rektal enfeksiyonlaridir. Yukarida açiklanan alanlarda kullanima yönelik formülasyonlarinda bulus konusu - Beseri veya veteriner alanda kullanima yönelik formüle edilen burun, göz, kulak, bogaz solüsyon, vaginal, rektal solüsyonlar, damla veya spreyleri. 500-3000ppm - Subkutan, intraartkuler, intramuskuler, intra peritoneal mezoterapi uygulamalarina yönelik, ozon etkilesiminden dolayi hazir cam enjektör, silikon kapak, cam flakon, silikon kapak, ampul, vaginal rektal aparatli siseler, ozona dayanikli serum siseleri ve plastik posetlerle sunulan enjektabl solüsyonlar. 500-3000ppm - Saç gelistirmek ve yeni saç çikarmak amaciyla kombine vitaminler, mineraller ve minoxidil, finasterid gibi etken maddelerle içeren saç solüsyonlari. 500-2000ppm - Aricilik tedavilerinde kullanima yönelik ari solüsyonlari. (2000 ppm Iipozomal ozon nanosoIüsyonu+timol+sekerli su karisimi) - Kurutulmus meyve sebzelerde ve yas meyve sebzelerde raf ömrünü arttirmak amaciyla yag içerigi ile uzun süre saklanmak ve parlak görünmesini saglamak üzere pestisitlerin zararlarini azaltmak yada kullanimini azaltmak amaciyla kullanilan meyve ve sebze solüsyonudur. Insektisit,antiparaziter ve antibakteriyel olarak 1000- 2000 ppm ozon içeren, gliserin , ozonlanmis ayçiçek ve/veya ozonlanmis polisorbat içeren lipozomal ozon nanosolüsyonu. Alerjik hastaliklarda dermatit tedavilerine yönelik uygun cilt solüsyonu. 500-10000 ppm ozon içeren, ozonlu emülgatör ve yag karisimi, veya ozonlu emülgatör su karisimi Parenteral enjeksiyonlarda kullanilmak üzere serum solüsyonu. 1-6 mg/kg 200ppm- 2000 ppm ozon içeren, ozonlu emülgatör su karisimi veya ozonlu emülgatör, ozonlu Subkutan, intramuskuler, intraartikuler mezoterapiye yönelik kombine yagda eriyen vitaminler, hyaluronik asit, aminoasit ve mineraller Iidokain gibi anestezik maddeler gibi etken maddeler içeren enjektabl solüsyon. 300-2000 ppm ppm ozon içerir. Batin içi ve diger kavitelerde ameliyat esnasinda kullanilan yikama solüsyonu. 300- 2000ppm ppm ozon içerir. Yara tedavisine yonelik sprey formda sunulan vitamin mineral veya iyot, çinko, betadin, gümüs iyonlari içeren dezenfektanlarla kombine edilmis sprey formunda sunulan solüsyon. 500-10000 ppm ppm ozon içeren, ozonlu emülgat'or su ya da ozonlu emülgatbr ve ozonlu yag su. Cilt gençlestirmek amaçli Cilt gençlestirici ve leke açici diger ürünlerle kombine olarak sprey formlarda sunulan solüsyon veya kremler. 500-40000 ppm ozon içeren, ozonlu emülgatbr su ya da ozonlu emülgatör ozonlu yag su. Urolojide antiseptik sonda için enjektör ya da tek sikimlik silikon içinde Iubrikant olarak sunulmak üzere s0Iüsy0n.100-2000 ppm ozon içeren, ozonlu emülgat'or su ya da ozonlu emülgat'or ozonlu yag su. Urolojide antibakteriyel mesane için cam enjeksiyon, ozona dayanikli puar formlarda sunulmak için solüsyon.300-2000 ppm ozon içerir. Vajinal antisepsi için tek kullanimlik paketler, posetler veya enjektör formunda sunulan solüsyon.1000-4000 ppm ozon içerir. Infertilite amaçli tubalar için enjeksiyon formunda sunulan enjektabl solüsyon. 300- 2000 ppm ozon içerir. Dis sagliginda kavite içi ve kanal tedavisine yönelik antiseptik sprey, ampul, enjeksiyon ve flakon formlarinda sunulan enjektabl solüsyon. 300-2000 ppm ozon Sindirim sistemi sagligi için midede eriyen, ince barsakta eriyen, kalin barsakta eriyen kapsül veya jel formlarinda ozonlu emülget'or, ozonlu emülgat'or ve yag su içeren solüsyondur.10-200 ppm ozon içerir. Kalin barsak hastaliklarinda kullanilmak üzere litrelik ya da tek kullanimlik rektal solüsyondur.500-2000ppm ozon içerir. Kalin barsak hastaliklarinda kullanilmak üzere kati parafin ya da witepsol ile katilastirilmis fitil.2000-10000 ppm ozon içerir. Agiz sagligina yönelik dis macunu, sprey, gargara ve tercihen tatlandirici içeren pastildir. Hayvan sagliginda yem katkisi olarak kullanilmak üzere solüsyon. Hayvan sagligini korumak amaciyla enfeksiyon tedavisine yönelik, intramuskuler, intraartiküler, intravenöz, subkutan, intravaginal, intraperitoneal enjeksiyon amaciyla enjektbr, flakon, ampul formlarinda sunulan enjektabl solüsyon.300-3000ppm ozon içerir. Hayvan sagligini korumak amaciyla litrelik ya da tek kullanimlik rektal solüsyon. 300-3000 ozon içerir. Hayvan sagligini korumak amaciyla kati parafin ya da ya da witepsol ile katilastirilmis fitil 2000-10000 ozon içerir. Tavuk çiftlikleri, ahir, agil gibi ortamlarda rapellant, insektisit ve dezenfektan olarak kullanima yönelik solüsyon 500-10000ppm ozon içerir. Hayvan sagligini korumak amaciyla, yara ve cilt bakim, dezenfeksiyon, hijyen amaciyla sprey veya solüsyon formunda sunulan hijyen ürünü 2000-10000ppm ozon içerir. Insan sagligina yönelik, yara ve cilt bakim, dezenfeksiyon, hijyen amaciyla sprey veya solüsyon formunda hijyen ürünü 2000-10000ppm ozon içerir. Gida sektöründe etlerin, meyve sebzelerin korunmasi, pestisit yok etmek ve antibakteriyel etki için daldirma veya spreyleme yöntemi ile kullanilan gida solüsyonu.300-3000ppm ozon içerir. Kurutulmus gidalarin, bakliyatlarin bozulmasini 'önlemek, insektisit ve rapellant etki saglamak için daldirma veya spreyleme yöntemi ile kullanilan, gida solüsyonu 500- 3000ppm ozon içerir. Gida takviyesi amaciyla, tek kullanimlik içecek olarak ya da diger içeceklerle ve tatlandiricilarla kombine halde sunulan gida solüsyonu. 100-1000ppm ozon içerir. Tek kullanimlik ya da çoklu islak mendil. 1000-1 OOOOppm ozon içerir. Ortam, yüzey, cihaz temizleyici ya da deterjanlar.1000-10000ppm ozon içerir. Bitkilerde antibakteriyel, antifungal, antiparaziter ve rapellant etki saglayan, sulandirmaya uygun yogun dozlarda veya sprey formda sunulan bitki solüsyonu 500-2000ppm ozon içerir. Topraksiz tarimda kullanima yönelik antibakteriyel, antivirütik, antifungal, antiparaziter gübre solüsyonu, 500-5000ppm ozon içerir. - Tohum gelistirmek ve tohumda yetistiricilikte anti bakteriyel etki saglamak, toprak patojenlerini uzaklastirmak amaciyla çimlendirmede kullanima yönelik tohum solüsyonu 500-5000ppm ozon içerir. - Süs bitkilerinde hem parlaklik saglamak hem de bitki sagligini arttirmak amaçli bitki solüsyonu 200-1000ppm ozon içerir. - Kimya sektöründe araç performansini arttirmak amaciyla petrol ürünlerine - Oksijensiz ortamlarda bitki gelistirmek amaciyla olusturulan solüsyon 500-3000ppm ozon içerir. - Kanser tedavisinde ozonlanmis emülgat'or tercihen polisorbate ve su, timol, carvacrol ve diger kemoterapatik etken maddeler ve ilaçlarla kombine Iipozom içinde ozonlu yag ve nanotasiyicilar ile paklitaksel gibi kanser ilaçlarinin kombine tasindigi solüsyonlar intravenöz yada lokal enjeksiyon 500-5000ppm ozon içerir. Bulusun örnek bir uygulamasi asagida içerikleri açiklanan mezoterapi ürünleridir.: Cilt onarimina yönelik mezoterapi ürünleri ozonlanmis emülgatür ozonlanmis yagdan elde edilen nanopartikül Iipozomlari, amino asit kompleksi, mineral kompleksi, panthotenic asi; içermekte olup; özellikle nanopartikül ozon Iipozomlari, I-arjinin, glisin, I-histidin, I-izolösin, sodyum asetat, sodyum gliserofosfat, potasyum klorür, magnezyum klorür, kalsiyum klorür, panthotenic asit, sodyum klorür, distile su içermektedir. Cilt için Yaslanma karsiti mezoterapi ürünleri ozonlanmis emülgat'or ozonlanmis yagdan elde edilen nanopartikül Iipozomlari, vitamin kompleksi, traneksamik asit, asetil sistein içermekte olup; 'özellikle nanopartikül ozon Iipozomlari, tiamin pirofosfat, riboflavin, piridoksin hidroklorür, niasinamid, d panthenol, askorbik asit, glutasyon, traneksamik asit, asetil sistein, sodyum klorür, distile su içermektedir. Saç bakimina yönelik mezoterapi ürünleri ozonlanmis emülgatör ozonlanmis yagdan elde edilen nanopartikül Iipozomlari, vitamin kompleksi, biotin, asetil sistein, panthotenic asit; içermekte olup; 'özellikle nanopartikül ozon Iipozomlari, tiamin pirofosfat, riboflavin, piridoksin hidroklorür, niasinamid, d panthenol, askorbik asit, biotin, glutasyon, asetil sistein, magnezyum sülfat, sodyum klorür, distile su içermektedir. -BARIYER SOLUSYONLARI TEST ANALIZ SONUÇLARI- Lipozomal Ozon Nanosol'i'isvonlari Hizlandirilmis Yaslandirma (Stabilite) ve Antibakteriyel Etkinlik Testleri: Bulus konusu Iipozomal ozon nanosol'usyon numunelerinde ASTM F1980 standardina göre hizlandirilmis yaslandirma (stabilite) testleri, ISO 11737-2 standardina göre sterilite testleri ve CLSI M0?' A9 standardindan uyarlanan test yöntemine göre de antibakteriyel etkinlik testleri yapilmistir. CLSI M0? A9 standardindan uyarlanan test yöntemine göre nanosolüsyonun 1.000 ppm ve 1.600 ppm uygulamalarinin, Staphylococous aureus (ATCC bakterisine karsi ise 1 saat sonrasinda antibakteriyel (bakterisidal) etkinlige sahip oldugu belirlenmistir. hizlandirilmis yaslandirma (stabilite) testleri ile 365 gün (1 yil) Gerçek Zamanli Yaslandirma (RT)iya karsililik olarak Hizlandirilmis Yaslandirma Zamani (AAT) 37 gün olarak hesaplanmistir. Hizlandirilmis Yaslandirma Zamani 37 gün sonunda, solüsyonlarin stabil kaldigi tespit edilmistir. Hizlandirilmis yaslandirma (stabilite) testleri sonrasi yapilan sterilite testlerinde, solüsyonlarda herhangi bir bakteri üremesi görülmemistir. 365 gün hizlandirilmis yaslandirmasi (stabilite) sonrasi, CLSI M0? A9 standardindan uyarlanan test yöntemine göre Staphylococcus aureus (ATCC 25923) bakterisine karsi 2 saat sonrasinda ve Escherichia coli (ATCC 25922) bakterisine karsi ise 1 saat sonrasinda antibakteriyel (bakterisidal) etkinlige sahip oldugu belirlenmistir. Bulus konusu nanosol'usyonun 1.000 ppm ve 1.600 ppm uygulamalarinin antibakteriyel etkinlikleri, CLSI M0? A9 standart test yönteminden uyarlanan yönteme göre belirlenmistir. Staphylococcus aureus (ATCC bakteri uygulanmistir. 2-360 dakika süreleri sonunda kültür ortamina aktarilmis ve sonrasinda besiyerlerinde üreme olup olmadigi degerlendirilmistir. Test sonuçlari, Çizelge 1 ve 2'de verilmistir. Çizelge 1. Staphylococcus aureus (ATCC 25923)=a karsi antibakteriyel etkinlik degerleri Numune adi Bakteri üremesi Çizelge 2. Escherichia coli (ATCC 25922)'ye karsi antibakteriyel degerler Numune adi . .. . Bakteri uremesi CLSI M0? A9 standardindan uyarlanan test yöntemine göre nanosol'üsyonun 1.000 ppm ve bakterisine karsi 2 saat sonrasinda ve Escherichia coli (ATCC 25922) bakterisine karsi ise 1 saat sonrasinda antibakteriyel (bakterisidal) etkinlige sahip oldugu belirlenmistir. Bulus konusu Iipozomal ozon nanonanosolüsyonun 1.000 ppm ve 1.600 ppm uygulamalarinin hizlandirilmis yaslandirma (stabilite) testleri, ASTM F1980 standardina sicakliga ayarlanmis N'L'ive FN 120 marka eti'iv içerisinde hizlandirilmis yaslandirmaya (stabilite) maruz birakilmis ve Arrhenius Denklemi [Q10(TAA-TRT)/10] ile hizlandirilmis yaslandirma (stabilite) zamani hesaplanmistir. Test sonuçlari, Çizelge 3'te verilmistir. Çizelge 3. Hizlandirilmis yaslandirma (stabilite) zamani Hizlandirilmis Hizlandirilmis . Yaslandirma Numune adi Yaslandirma Sicakligi Yaslandirma Zamani (Stabilite) hizlandirilmis yaslandirma (stabilite) testleri ile 365 gün (1 yil) Gerçek Zamanli Yaslandirma (RT),ya karsililik olarak Hizlandirilmis Yaslandirma Zamani (AAT) 37 gün olarak hesaplanmistir. Hizlandirilmis Yaslandirma Zamani 37 gün sonunda, solüsyonlarin stabil kaldigi tespit edilmistir. Bulus konusu lipozomal ozon nanonanosolüsyonun Hizlandirilmis yaslandirma (stabilite) testleri sonrasi nanosolüsyonun 1.000 ppm ve 1.600 ppm uygulamalarinin sterilite testleri, ppm uygulamalarinda, Triptone soy broth besiyerinde 30±2ctl` sicaklikta ve 14 gün süresince aerobik mezofilik bakteri üreyip üremedigi, Sivi Tiyoglikolat besiyerinde 30±2°C sicaklikta ve 14 gün süresince anaerobik mezofilik bakteri üreyip üremedigi, Triptone soy broth ve Sivi Tiyoglikolat besiyerlerinde 30±2°C sicaklikta ve 14 gün süresince negatif kontrolünde bakteri üreyip üremedigi, Triptone soy broth ve Sivi Tiyoglikolat besiyerlerinde ±2°C sicaklikta ve 14 gün süresince pozitif kontrolünde Bacillus atropheus üreyip üremedigi gözlemlenmistir. Test sonuçlari, Çizelge 4ite verilmistir. Çizelge 4. Hizlandirilmis yaslandirma (stabilite) testleri sonrasi nanosolüsyonun 1.000 ppm ve 1.600 ppm uygulamalarinin sterilite degerleri Aerobik mezofilik bakteri Üreme yok Üreme yok Anaerobik mezofilik bakten Üreme yok Üreme yok Negatif kontrol Üreme yok Üreme yok Pozilif kontrol . Üreme var Üreme var Bacilius atropheus Hizlandirilmis yaslandirma (stabilite) testleri sonrasi nanosolüsyonun 1.000 ppm ve 1.600 ppm uygulamalarinin ISO 11737-2 standardina göre yapilan sterilite testlerinde, solüsyonlarda herhangi bir bakteri üremesi görülmemistir. Bulus konusu Iipozomal ozon nanonanosolüsyonun 1.000 ppm ve 1.600 ppm uygulamalarinin ASTM F1980 standardina göre 365 gün hizlandirilmis yaslandirmasi (stabilite) sonrasi antibakteriyel etkinlikleri, CLSI M0? A9 standardindan uyarlanan test yöntemine göre belirlenmistir. ASTM F1980 standardina göre 365 gün hizlandirilmis yaslandirmasi (stabilite) sonrasi Staphylococcus aureus (ATCC 25923) ve Escherichia coli ppm solüsyonlara uygulanmistir. 2-360 dakika süreleri sonunda kültür ortamina aktarilmis ve sonrasinda besiyerlerinde üreme olup olmadigi degerlendirilmistir. Test sonuçlari, Çizelge 5. Staphylococcus aureus (ATCC 25923)=a karsi antibakteriyel etkinlik degerleri Numune adi . .. . Bakteri uremesi 1.000 ppm ' ` ' (365 gün yaslandirma) ar ar . ar ar o o 0 1.600 ppm (365 gün yaslandirma) Var Var Var Var Yok Yok ok Çizelge 6. Escherichia coli (ATCC 25922)!ye karsi antibakteriyel degerler Numune adi › ~ ~ - Bakteri uremesi 1.000 ppm (365 gün yaslandirma) Var Var Var Yok Yok Yok Yok 1.600 ppm (365 gün yaslandirma) Var Var Var Yok Yok Yok Yok 365 gün hizlandirilmis yaslandirmasi (stabilite) sonrasi, CLSI M0? A9 standardindan uyarlanan test yöntemine göre Staphylococcus aureus (ATCC 25923) bakterisine karsi 2 saat sonrasinda ve Escherichia coli (ATCC 25922) bakterisine karsi ise 1 saat sonrasinda antibakteriyel (bakterisidal) etkinlige sahip oldugu belirlenmistir. Bulus konusu nanosol'üsyonun 2000 ppm ve 3000 ppm uygulamalarinin antibakteriyel etkinlikleri degisen dozlarla karsilastirmali olarak CLSI M0? A9 standart test ybnteminden uyarlanan yönteme göre belirlenmistir.Staphylococcus aureus (ATCC 6538) ve Escherichia ppm solüsyonlara uygulanmistir. 2-360 dakika süreleri sonunda kültür ortamina aktarilmis ve sonrasinda besiyerlerinde üreme olup olmadigi degerlendirilmistir. Test sonuçlari, Çizelge 6-14 'de verilmistir. Çizelge 6. Lipozomal ozon nanosolüsyonu+ %1 HYALURONIK ASIT E.COLI 25922 2000ppm 3 koloni 3 koloni 2.dk 2.dk 2.dk 2.dk 2.dk 2.dk 1.2k0loni AZALMA 1 koloni 3 koloni 3 koloni 2 koloni AZALMA AZALMA AZALMA 2 koloni 2000ppm AZALMA 2000ppm Çizelge 13. Lipozomal ozon nanosolüsyon+ gliserin Bogaz Spreyi E.Coli BOOOppm AZALMA 4 koloni AZALMA 2 koloni 5 koloni 2 koloni 365 gün hizlandirilmis yaslandirmasi (stabilite) sonrasi, CLSI M0? A9 standardindan uyarlanan test yöntemine göre Staphylococcus aureus bakterisine ve Escherichia coli bakterisine karsi ise artan hizda antibakteriyel (bakterisidal) etkinlige sahip oldugu belirlenmistir. Lipozomal Ozon Nanosolüsvonlari Deri irritasyon Testi: yapilmistir. Deney hayvani olarak 'üç adet saglikli genç 2-3 kg vücut agirligina sahip Yeni Zelanda albino tavsanlar kullanildi. verilen; Sivilar seyreltilmeden veya dogrudan çöktürme ile veya uygulanamaz ise deneye tabi tutulmalidir direktifine göre kullanim dozu olan 1600 ppm dozunda uygulanmistir. Pozitif kontrol olarak Sodium lauryl sulphate (SLS), negatif kontrol olarak distile su kullanilmistir. Bulus konusu nanosolüsyonun emdirilmis spanç örnek uygulama bölgelerine direk temasta tutulmustur. Pozitif kontrol alanina SLS emdirilmis spanç uygulanmistir. Numuneler gazli bezle örtülerek bandajla sabitlenmis ve 4 saat süreyle sirt derisiyle topikal olarak temasi saglanmistir. Uygulama bölgeleri 4. Saatlik uygulamadan sonra (1 ± 0,1) 5, skoruna göre degerlendirilerek birincil irritasyon indeksi belirlendi. Hesaplamada standartta belirtildigi sekliyle 1. saat hesaplamaya alinmadi. Çizelge 1: Deri reaksiyonu için puanlama sistemi Reakslyon | Tahrls skoru Eritem ve Eskar Olusumu Eritem yok Çok haüf entem (zor algilanabilen) Iyi tanimlanan eritem Orta düzeyde eritem Ciddi eritem (pancar gibi kirmizi) ile erilemin dereoelendirilmesini önleyen eskar olusumu arasinda Ödem olusumu Ödem yok Çok hafif ödem Belirgin ödem (Belirgin ödem alani sinirlari siskinligi') Orta düzeyde ödem (yaklasik 1mm yükselmis) Siddetli ödem ( 1mm fazla yükselmis ve uygulama alaninin disina tasmis) Tahris Için olasi en yüksek puan Çizelge 2: Birincil veya Kümülatif irritasyon indeksi kategorileri degerlendirme Çizelgesu Ortalama puan Yanit Siniflandirmasi 0-0,4 Önemsiz 0,5-1.9 Hafif 24,9 Orta derecede -8 Siddetli Çizelge 3 ve Çizelge 4 de verilmistir. Çizelge 3: Irritasyon skoru No alanlari Eritem Ödem kontrol Negatif Sol Arka 0 0 0 0 0 0 0 0 kontrol Pozitif Sag ön 3 3 2 l 3 kontrol Negatif Sol Arka 0 0 0 0 O 0 0 0 kontrol 3 Numune Sol ön 0 0 0 0 O 0 0 0 Sag arka 0 0 0 0 O 0 0 kontrol Negatif Sol Arka 0 0 0 0 0 0 0 0 kontrol Çizelge 4: Skor ortalamasi Örnek Birinci! irritasyon Skoru Birinci! Tavsan 1 Tavsan 2 Tavsan 3 Indeksi Bulus konusunu nanosolüsyonun irritasyon (tahris) deneyinde uygulama sonrasi 24. 48. 72. saatlerde yapilan gözlem degerlerine (Çizelge 3, 4) bagli olarak yapilan degerlendirmede, deneklerin hiçbirinde örneklerin dikkate deger eritem ve ödeme neden olmadigi belirlendi. göre Bulus konusu nanosolüsyonun herhangi bir tahris edici etkiye sahip olmadigi belirlenmistir. Lipozomal Ozon Nanosolüsvonlari In Vitro Sitotoksisite Testi: Sitotoksisite; canli hücreler üzerindeki toksik etki oranini ifade eder. Sitotoksisite testleri, toksik oldugu düsünülen maddenin, uygun hücre kültüründe, hücre çogalma orani ve hücre üzerindeki toksik etkisi dikkate alinarak degerlendirme yapilan testlere denir. Bu test sistemleri; morfolojik olarak hücresel hasarin gözlenmesi, hücresel hasarin çesitli ölçüm yöntemleri ile belirlenmesi, hücresel büyümenin belirlenmesi, hücresel metabolizmadaki herhangi bir degisikligin belirlenmesi amaciyla yapilmaktadir. Sitotoksisite testleri in vivo veya in vitro olarak yapilabilmektedir. In vitro testlerde, sitotoksisitesi arastirilan madde artan konsantrasyonlarda hücrelere uygulanir. Bu maddenin hücre morfolojisi ve hücrelerin yasama oranlari üzerine etkileri arastirilir. MTT yöntemi [3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolium bromid]: Bu yöntemde MTT formazana indirgenir, bu esnada olusan renk kolorimetrik olarak ölçülür. Olusan formazan miktari canli hücre sayisini verir. MTT, hücrelere aktif olarak absorbe olan ve mitokondriye bagli bir reaksiyon ile renkli, suda çözünmeyen formazana indirgenen bir maddedir. Hücrelerin MTT indirgeme özelligi hücre canliliginin ölçütü olarak alinir ve MTT analizi sonucunda elde edilen boya yogunlugu canli hücre sayisi ile korelasyon göstermektedir. Bu arastirmada kullanilan test sistemi asagidaki standartlara dayanmaktadir; - Biological reactivity tests, in vitro . standartlarina uygun olarak 24 saat 37 oC'de 1600 ppm Iipozomal ozon nanosolüsyonu ile çalisma yapildi. Sitotoksisite test çalismasi için ATCC firmasindan temin edilen BALB/c hücre dizisi kullanildi. Hücreler, %10 FBS (fetal sigir serumu) ve %2 glutamin ile desteklenmis DMEM (dulbeccos modified eagle ortami) (ATCC Kat No: 30-2006) besiyerinde çogaltilarak, %5 C02'Ii etüvde 37°C'de inkübe edildi. ATCC'nin önerdigi sekilde hücrelerin tripsinazyonu için %025 tripsin, %0,03 EDTA karisimi kullanildi. Hücreler kültür medyumu içerisinde süspanse edilerek 96 kuyucuklu pleytlere her bir kuyucukta 104 hücre olacak sekilde 100pl aktarildi. 24 saatlik hücre kültürü sartlarindan sonra kültür üzerindeki medyum uzaklastirilarak 100pl test materyali, pozitif ve negatif kontrol özütlerinden eklendi. Tüm dozlar en az 5 tekrar olacak sekilde uygulandi. 48 saatlik %5 CO2*Ii etüvde 37°C' de % 95 nemde bekleme sonunda pleytler incelendikten sonra kültür medyumu uzaklastirildi. Negatif kontrol (NK): Poli etilen tüp Pozitif kontrol (PK): DMSO (Dimetilsülfoksit) seri dilusyonlari (10-30 v/v) Test Materyali (TM) konsantrasyonlari: 100 -30-10 -3-v/v Pleytlerin incelenmesinden sonra, kültür ortami kuyucuklardan uzaklastirildi. 50 pl MTT çözeltisi her bir test kuyucuguna ilave edildi. Pleytler 2 saat 37' DC inkübe edildi. Sonra MTT çözeltisi kuyucuklardan uzaklastirilarak her bir kuyucuga 100 ul izopropanol ilave edildi. 570 nm filtre içeren mikroplaka okuyucu ile absorbans ölçümler alindi ve degerlendirme yapildi. Test materyalinin canlilik oraninin %70 den az olmasi sitotoksik olarak degerlendirilir. Çizelge 1. lVITT Testi ile sitotoksik etkilerin nicel ölçümü sonuçlari. Optik yogunluk (oo) ortalama degeri 570 nm'± standart sapma Canlilik °/. Canlilik %= 100 x OD570TM /ODSYONK ODmTM = Blank Çikarildiktan sonra test materyalinin optik yogunluk degerinin ortalama OD57ONK= Blank çikarildiktan sonra negatif kontrolün optik yogunluk degerinin ortalama göre test materyali olan bulus konusu Iipozomal ozon nanosolüsyonunun sitotoksik etkiye Lipozomal Ozon Nanosolüsvonlari In vivo Akut Oküler Irritasvon Testi: Deney oküler tahris olusturma potansiyeline sahip malzeme veya ürünün test edilmesini amaçlamaktadir. Oküler tahris deneyi sadece, diger yollarla güvenlik bilgisi elde edilemediginde ve göz veya göz kapagiyla temas edecek malzemeler için uygulanmaktadir. gerçeklestirilir. Teste tabii tutulacak malzemesi sivi ise, bir gözün ait konjunktival kesesine 0,1 ml seyreltilmeden (1600 ppm dozda) damlatilir. Deney malzemesi sprey pompasi içinde ise, pompadan çikartilir ve sivilarda oldugu gibi 0,1 mL damlatilarak test edilir. Tek bir sustan her iki cinsiyette 2 kg ila 3 kg agirliginda saglikli genç yetiskin 3 adet albino tavsanlar Deneyin baslangicindan en fazla 24 h önce her bir tavsanin her iki gözü oküler bir anormalligin olup olmadigini belirlemek için gözle muayene edilir. Gözler muayene edildiginde, % 2 sodyum floresein BP (Ingiliz Farmokopesi) herhangi kornea hasarini gözle görebilmek için kullanilabilir. Deney numunesi konjunktival keseye damlatildiktan sonra göz kapaklari yaklasik 1 saat süreyle bir arada tutuldu. Hayvanlarin Gözlenmesi ve Irritasyon indeksinin belirlenmesi için izlenmediginden gözlemlerin daha uzun sürelere ilerletilmesine gerek görülmedi. Gözlemler Çizelge 1'de verilen oküler Iezyonlari derecelendirme ölçegine göre derecelendirildi. Çizelge 1: Oküler Iezyonlarin derecelendirme sistemi Reakslyon Sayisal Derecelendlnne 1-KORNEA Opaklik derecesi (en yogun alan) Opaklik yok 0 Dagilmis veya yayilmis alanlar` irisin ayrintilari açikça görülebilir 1' Kolayca ayirt edilebilir yarisaydam alanlar, irisin ayrintilari hat'if bulanik 2' Opak alanlar. irisin ayrintilari görülebilir degil. gözbebegi büyüklügü zor ayirt edilebilir) 3* Opak. irisin ayrintilari gürülemez 4' Etkilenen kornea alani Dome bir alan (veya daha az). sifir degil 0 Dome bir alandan daha genis, yarisindan az 1 Yarisi ndan daha genis. ancak dörtte üçünden daha az 2 Daha Üçünden daha genis. bütün alana kadar 3 Normal 0 Normalin üstünde kivrilmalar, komisyon sismesi, kornea çevresi enjeksiyonu (herhangi biri veya 1* tamami veya bunlarin kombinasyonu). isiga hâlâ tepki veren iris (tembel reaksiyon pozitif) 3. Koriiunktlvalar Kizariklik [kornea ve Iris hariç plevral (goz kapagina alt) ve bulber (göze ait) konjunktiva] Damarlar normal 0 Damarlar normalin üstünde tamamiyla dolmus 1* Daha yaygin, koyu kirmizi (deeper orimson red), her bir damar kolaylikla ayirt edilebilir degil 2* Yaygin koyu kirmizi (beely red) 3* Kemozls Sisme v0 0 Nomalin üstünde sisme (niktitan membran dahil) 1* Göz kapaklarinin kismen disa dönmesi ile birliite belirgin sisme 2* Yari kapali göz kapaklari ile bilikte sisme 3* Yaklasik yari kapali ila tamamen kapali goz kapagi ile birlikte sisme 4* Akinti yok O Norrnalden farkli herhangi miktarda (normal hayvanlarin iç kantusunda gözlenen küçük miktarlar 1 Göz kapaklarinin ve göz kapagi bitisigindeki tüylerin nemlenrnesi ile birlikte akinti 2 Göz kapaklarinin ve tüylerin nemlenmesi ile birlikte akinti ve göz çevresindeki kaydedeger alan 2 Sol gözüne bulus konusu nanosolüsyonun ürünü 0.1 ml damlatilan tavsanlarin, damlatmadan yaklasik (1 ± 0,1) saat sonra her iki gözü de muayene edilerek degerlendirildi. Uygulamadan kaynaklanan herhangi bir konjunktival tahrisle ilgili bir belirti gözlenemedi. % 2 sodyum floresein damlatilarak yapilan muayenede ortaya çikan kalici veya diger kornea tahrisi belirtileri görülmediginden gözlem süresinin uzatilmasina gerek duyulmadi. Degerlendirmeler Çizelge 1'e göre derecelendirildi. Hiçbir hayvanda herhangi bir pozitif reaksiyon izlenmedi. Hayvanlarda hafif ya da konjunktival zarin soyulmasi ve ülserasyon, kornea delinmesi (perforasyon), gözün ön odaciginda kan veya püy olmasi) veya - Kanli veya tüylü (cerahatli) akinti veya - Ciddi kornea ülserasyon gibi oküler degisikliklere rastlanmadi. Çizelge 2: Oküler Iezyonlarin derecelendirme sonuçlari Reakslyon Sayisal Derecelendlrme iklik ve iris (göz kapagina ) ve bulber (göze ait) konjunktiva 0 Kemozis 0 Bulus konusu lipozomal ozon nanosolüsyonun oküler irritasyon deneyinde kontrol gözlerle uygulama yapilan gözler degerlendirildiginde herhangi bir farkliligin olusmadigi, Bulus konusu nanosolüsyonun oküler yapilarda (Konjunktival, kornea, iris) herhangi bir tahris standardinin direktifi dogrultusunda yapilan "Oküler irritasyon Testi" gözlemlerine göre bulus konusu lipozomal ozon nanosolüsyonunun oküler tahris etkisinin bulunmadigi tespit edilmistir. Lipozomal Ozon Nanosolüsvonlari Oral Mukozal IrritasvonTesti: 12:2012 standardi yönlendirmeleri dikkate alinarak yapilmaktadir. Test oral dokuyla temas etmesi tasarlanan malzemeler için ve güvenlik verileri diger yollarla elde edilemedigi durumlarda uygulanmaktadir. tek bir sustan akraba olmayan her iki cinsiyette saglikli genç yetiskin Suriye hamsterlari kullanildi. Her bir hayvana ketaminlXyIazin anestezisi altinda iç yanak cepi içerisne ürün örnegi emdirilmis gazli bez yerlestirildi. Maruz kalma süresi malzemenin beklenen gerçek kullanim s'üresini yansitmasi kuralina göre degerlendirilerek, örnek 1 saat süreyle iç yanak cebinde tutuldu. Test materyali ISO 10993-10 ek A A.2.2 Sivi deney malzemeleri basligi altinda verilen; Sivilar seyreltilmeden veya dogrudan çöktürme ile veya uygulanamaz ise deneye tabi tutulmalidir direktifine göre kullanim dozu olan 1600 ppm dozunda uygulanmistir. Negatif kontrol olarak serum fizyolojik emdirilmis emici gazli bez kullanildi. Pozitif kontrol olarak pH 2 ve altinda olan sivilarin tahris edici kabul edilmesi kurali dayanak alinarak Her hayvanin sol iç yanak kesesi deney örnegi için, karsi taraf (Sag) iç yanaklari ise negatif kontrol olarak degerlendirildi. Sag taraf iç yanak kesesi içerisine herhangi bir materyal yerlestirilmedi, sadece serum fizyolojikle yikanarak deney sonunda diseke edildi. Ketamin/Xylazin anestezisi altinda iç yanaklari bosaltilarak serum fizyolojikle yikanan Suriye hemsterlarinin sol iç yanak kesesine Bulus konusu nanosoli'isyonun kullanim dozu 1600 ppm emdirilmis gazli bez yerlestirildi. Denegin örnege 1 saat maruz kalmasini takiben, örnek çikartildi ve iç yanak, diger yanak içini kontamine etmemeye dikkat ederek serum fizyolojik solüsyonuyla yikandi. Deney (Sol) ve kontrol (sag) iç yanak keseleri makroskobik olarak çizelge 1 e göre degerlendirildi. Deney 1 saatlik temas sonunda sonlandirildi. Çizelge 1- Agiz ve Penil reaksiyonlar için derecelendirme sistem Reaksiyon Sayisal Derecelendirme Eritem ve eskar olusumu Erilem yok 0 Çok haüf eritem (zorlukla fark edilebilir) 1 Belirgin eriten) 2 Orta derecede eritem 3 Ciddi eritem (pancar gibi kirmizi) ile eritemin 4 derecelendirilmesini önleyen eskzir olusumu arasinda Dokulardaki diger ters degisimler kaydedilmeli ve rapor edilmelidir. Standart direktifine göre maruz kalma süresi malzemenin beklenen gerçek kullanim süresini yansitmali, ancak 5 dakikadan daha kisa olmamalidir. Uzun süreli kronik maruziyetlerde gerçeklestirilen tekrarlanan gözlem derecelendirmesi (Çizelge 1) toplanir ve bu toplam uygulama tekrari olan 4 e bölün'ur. Subakut kullanimi olan cihaz olmasi nedeniyle uygulama birer saatlik aralarla, 4 kez gerçeklestirildi. Ornek uygulanan sol iç yanak gözlemleri serum fizyolojikle yikanan sag taraf iç yanaklari (negatif kontrol) ile karsilastirildi. Çizelge 2 - Agiz, penil, rektal ve vajinal doku reaksiyonunun mikroskopik incelenmesi için derecelendirme Reakslyon Sayisal Derecelendlrme Epitel Normal. saglam Hücre dejenerasyonu veya yassilasmasi Metaplazi Fokal erozyon Genel erozyon Lökosit Infiltrasyonu (her yüksek nüfuz alani Için) En az [ZS'ten daha az) Hatîf[26 ila 50) Orta (51 ila 100] Belirgin [IOD'den daha büyük) Vasküler konjesyon Belirgin, damarlarin yikimi ile birlikte Belirgin Çizelge 3 - Irritasyon (Tahris) Indeksi Tahris Indeksi 1 - 4 En az - 8 Hatîf 9 - 11 Orta 12 - 16 Ciddi degerlendirmeleri Çizelge-4 3 verilmistir. Yapilan makroskobik incelemede örnek uygulanmis iç yanak mukozasinda, kontrollere benzer sekilde herhangi bir tahris görünümü (eritem veya eskar) izlenmemistir. Pozitif kontrollerde mukozal erozyon alanlari dikkat çekmistir Ortalama tahris indeksi pozitif kontrol disinda her hayvan için sifir (0) olarak hesaplanmistir. Çizelge 3: Makroskobik irritasyon skoru Gözlem Haz?" Uygulama alanlari Eritcm Eskar 1 Sol Yanaleeney] 0 0 Sag Yanal( [Negatll Kontrol] 0 0 2 Sag Yanak [Negatil Kontrol] 0 0 Sol Yanaklßeney] 0 D 3 Sag Yanal( [Negatil Kontrol] O 0 Pozitif Sol YanaklPozititKontrol) 4 3 Kontrol Sag Yanak [Negatil Kontrol] O 0 Çizelge 4: Mikroskobik irritasyon skoru Reaksiyon Sayisal Derecelendirme 1. Denek 2. Denek 3. Dantel: Pozitif Kontrol Yunak Yanal( Yanal( Yanak (D n ) (Negatif (D ne } (Negauf [D ne ) (Negatif (D ne 1 (Negatif Epitel 0 0 0 0 0 0 3 0 Lökosit infiltrasyonu nüfuz alani Vasimler 0 0 0 0 0 0 l 0 konjesyon Test `ürünü uygulanmis guruptan, histopatolojik inceleme için alinan iç yanak örneklerinden hazirlanan Hematoksilen-Eosin (HE) boyanmis preparatlar mikroskop altinda incelendiginde, mukozada, epitelde herhangi bir erozyona ya da ulserasyona I'okosit inflitrasyonu ve vasküler konjesyona rastlanmadi.. Histopatolojik inceleme için alinan iç yanak örneklerinden hazirlanan Hematoksilen-Eosin (HE) boyanmis preparatlar mikroskop altinda incelenerek, mukozada epitel de herhangi bir erozyona ya da ulserasyon olusup olusmadigi, I'okosit inflitrasyonu, vasküler konjesyon gerçeklesip gerçeklesmedigi degerlendirildi. Isik mikroskobik histopatolojik incelemede, deneklerde Bulus konusu nanosolüsyonun ürünü örneklerinin uygulamasinin oral mukozal yapilarda tahris edici görünümü yansitan hiçbir bulguya rastlanilmadi. Oral dokuyla temas etmesi olasi malzemeler için uygulanan (TS EN ISO 10993-10) oral mukozal irritasyon deneyinin makroskobik ve histopatolojik degerlendirmeleri sonuçlarina göre bulus konusu nanosolüsyonun oral mukoza üzerinde iritan ettkiye sahip olmadigi belirlenmistir. Lipozomal Ozon Nanosolüsvonlari Nazal Mukoza irritasyon Testi: 12:2012 standardi yönlendirmeleri dikkate alinarak yapilmaktadir. Test nazal dokuyla temas etmesi tasarlanan malzemeler için ve güvenlik verileri diger yollarla elde edilemedigi durumlarda uygulanmaktadir. tek bir sustan akraba olmayan her iki cinsiyette saglikli genç yetiskin 12 adet (6 deney, 6 kontrol) Bale fare kullanildi. Her bir hayvana burun bosluguna 4 gün süreyle 1600 ppm Bulus konusu nanosolüsyonunndan tek doz (1 ml) damlatildi. Test materyali ISO 10993-10 ek A A.2.2 Sivi deney malzemeleri basligi altinda verilen; Sivilar seyreltilmeden veya dogrudan çoktürme ile veya uygulanamaz ise uygun bir sivi ile seyreltilerek deneye tabi tutulmalidir direktifine göre kullanim dozu olan 1600 ppm olarak uygulanmistir. Karsilastirma sadec serum fizyolojik kullanilan Negatif kontrol gurubuyla yapilmistir. Pozitif kontrol 4 günlük irritan uygulamasi hayvan refahi bakimindan etik bulunmadigindan uygulanmamistir. Burun bosluguna 4 gün süreyle 1600 ppm Bulus konusu nanosolüsyonunndan tek doz (1 ml) damlatilarak deney grubu olusturuldu. Kontrol grubu ise 4 gün ayni miktarda serum fizyolojik nanosolüsyonunun burun bosluguna damlatilmasiyla olusturuldu. 4 günlük uygulama sonrasi yüksek doz Ketamin/Xylazin anestezisi altinda btenaziye alinan deneklerin burunlari diseke edilerek %10 luk formalin fiksatifini takiben kemiklerin yumusatilmasi için dekalsifijkasyon islemine alindi. Çizelge 1- Nazal reaksiyonlar için derecelendirme sistem Reaksiyon Sayisal Derecelendi rme Eritem ve eskar olusumu Eritem yok 0 Çok hafiferitem [zorlukla fark edilebilir] 1 Belirgin eritem 2 Orta derecede eritem 3 Ciddi eritem [pancar gibi kirmizi] ile eritemin derecelendirilmesini 4 Dokulardaki diger ters degisimler kaydedilmeli ve rapor edilmelidir. Test örneginin 4 günlük uygulamasi boyunca hayvanlar klinik olarak gözlendiler. Deney ve kontrol gubu deneklerinde burun kizarikligi, akinti, huzursuzluk belirtileri izlenmedi. Hayvanlar normal beslenmelerine ve sosyal davranislari gösterdiler. Nazal mukozal irritasyon testinde mikroskobik degerlenirme vajinal, rektal, penil irritasyon testlerindeki incelenen parameteler göz 'önünde bulundurularak yapildi (Çizelge 2). Çizelge 2 - Agiz, penil, rektal ve vajinal doku reaksiyonunun mikroskopik incelenmesi için derecelendirme Reakslyon Sayisal Derecelendlrme Epitel Normal. saglam Hücre deienerasyonu veya yassilasmusi Metaplazi Fokal erozyon Genel erozyon Lökosit Infiltrasyonu (her yüksek nüfuz alani Için) En az (25'ten daha az] Halîf[26 ila 50) Orta [51 ila 100) Belirgin [100'den daha büyük) Vasküler konlesyon Bel n, damarlarin mi ile birlikte Çizelge 3 - irritasyon (Tahris) Indeksi Tahris Indeksi 1 - 4 En az L 8 Harif 9 - 11 Orta 12 - 16 Ciddi mikroskobik degerlendirmeleri Çizelge 1 de verilmistir. Yapilan makroskobik incelemede örnek uygulanmis nasal mukozasinda, kontrollere benzer sekilde herhangi bir tahris görünümü (eritem veya eskar) izlenmemistir. Pozitif kontrollerde mukozal erozyon alanlari dikkat çekmistir . Ortalama tahris indeksi pozitif kontrol disinda her hayvan için sifir (0) olarak hesaplanmistir. Çizelge 1: Mikroskobik irritasyon skoru Gruplar Hayvan Epitel Lökosit Vasküler Ödem Tahris No inl'iltrasyonu koniesyon Indeksi (her yüksek nüfuz alani Negatif 1 0 0 0 0 0 Kontrol 2 0 0 0 0 0 4 0 0 0 0 0 O 0 0 0 O 6 0 0 0 0 3 O 0 0 0 0 4 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 6 0 0 0 0 0 Histopatolojik inceleme için alinan burun örneklerinden hazirlanan Hematoksilen-Eosin (HE) boyanmis preparatlar mikroskop altinda incelenerek, mukozada epitel de herhangi bir erozyona ya da ulserasyon olusup olusmadigi, Iökosit inflitrasyonu, vasküler konjesyon gerçeklesip gerçeklesmedigi degerlendirildi. Isik mikroskobik histopatolojik incelemede, deneklerde Bulus konusu nanosol'usyonun ürünü örneklerinin uygulamasinin nazal mukozal yapilarda tahris edici etkisini yansitan hiçbir bulguya rastlanilmadi. Nazal dokuyla temas etmesi olasi malzemeler Için uygulanan (TS EN ISO 10993-10) nazal mukozal irritasyon deneyinin makroskobik ve histopatolojik degerlendirmeleri sonuçlarina göre bulus konusu nanosolüsyonun nazal mukoza 'üzerinde irritan etkiye sahip olmadigi belirlenmistir. Lipozomal Ozon Nanosol'usyonlari Sensitizasyon Testi: materyal hazirlanmasi Ek-A standardi yönlendirmeleri dikkate alinarak yapilmistir. Deney baslangicinda 300 9 ila 500 g agirliginda olan tek bir sustan akraba olmayan 10 adet her iki cinsiyette (5 erkek, 5 disi) saglikli genç yetiskin albino kobaylar (Guinea pig) kullanilmistir. Hayvanlar uyarima maruz birakilmadan 24 saat önce tüylerinden arindirildiktan sonra uygulama yapilacak bölgeler tiraslandi. Hayvanlar kafeslere alinmadan önce tüylerinden arindirilan bölgeler ilik suyla tamamen yikanip havluyla kurulandi. Tüylerin kirpilmasinda 2 saat sonra deney yerleri Çizelge 1 de verilen Magnusson ve Kligman derecelendirmesine göre derecelendirildi. Çizelge 1 - Magnusson and Kligman derecelendirme ölçegi Yama deneyi reaksiyonu Derecelendirme ölçegi Görünür bir degisim yok Ayrik veya yamali eritem Orta derecede ve bitisik eritem Belirgin eritem Ciddi erilem ve/veya sisme Test materyali ISO 10993-10 ek A A.2.2 Sivi deney malzemeleri basligi altinda verilen; Sivilar seyreltilmeden veya dogrudan çöktîirme ile veya uygulanamaz ise uygun bir sivi ile seyreltilerek deneye tabi tutulmalidir direktifine göre kullanim dozu olan 1600 ppm olarak uygulama yapilmistir. Negatif kontrol olarak serum fizyolojik emdirilmis emici gazli bez kullanildi. Pozitif kontrol olarak Iaboratuvarimizda % 0,8 Iik paraformaldehit solüsyonu kullanilmaktadir. Bulus konusu nanosolüsyonun emdirilmis gazli bez trasli alanin sol 'üst ve sag alt bölgelerine direk temas edecek sekilde uygulandi. Ornekler bu sekilde 6 saat süreyle hayvanin tiraslanmis sirt derisiyle temas halinde tutuldu. Tiraslanmis alana uygulanmis örnekler gazli bezle örtülüp distan plasterle korundu. Bu uygulama 'üç hafta boyunca haftada üç: kez gerçeklestirildi. Üç: hafta indükleme uygulamasini takiben iki hafta dinlenme süreci sonrasi, örnekler daha önce ind'üksiyon yapilmis alanlarin karsi taraflarina uyarilma deneyi için uygulanarak 6 saat tutuldu. Uyarim uygulamasini takiben 24. ve 48. saatlerde degerlendirme yapildi. Indi'ikleme fazinda 'üç hafta boyunca, haftada 'üç uygulamayi takiben 24±2 ve 48±2 saatlerde Magnusson ve Kligman derecelendirmesine göre gözlem gerçeklestirildi. Iki haftalik aradan sonra yapilan uyarim yamasinin kaldirilmasindan 24±2 ve 48±2 saat sonra da tekrar derecelendirme yapildi. Magnusson ve Kligman derecelendirmesine göre test ve kontrol hayvan gözlem kayitlari asagida Çizelge 2 de verilmistir. Çizelge 2: Gruplarda Magnusson ve Kligman Derecelendirmesi Uygulama Tirlhliri Indüliiyon birinci m "MNO" Ikinci m Inmniyon ucuncu iiirii Uyum 24. nm u_ un 1 . Kontrol 3. Negatif Kontrol 0 0 0 4 Negatif Kontrol 1 . Pozitif Kontrol . Poiitil Kontrol 2. Test Hayvani asi Hayvani Test Hayvani - 6 TaslHayvairii 7 asi Hayvani Bulus konusu nanosolüsyonun ürününün Kapali Yama-Buehler Deneyi yöntemiyle yapilan sensitizasyon testinde, 5 hafta boyunca yapilan uygulamalar ve gözlemlerde deneklerin hiç birinde, numunelerin, duyarlilik/hassasiyet göstergesi olan herhangi bir eritem ve ödem görünümüne neden olmadigi belirlenmistir. Deneyi yöntemiyle yaptigimiz test gözlemlerimizin degerlendirilmesi sonucunda bulus konusu lipozomal ozon nanosolüsyonun gecikmis duyarlilik Olusturucu etkiye sahip olmadigi tespit edilmistir. Lipozomal Ozon Nanosolüsvonlari Antivirüs Etkinlik Testi: Bulus konusu lipozomal ozon nanosolüsyonun biyolojik etkisi ve olasi toksik etkisini de arastirmak üzere öncelikle epitelyal hücre kültürü yapildi. Bunun için bir biyobankadan temin edilen epitelyal doku parçasi çözme islemi sonrasi serum fizyolojik (%009 NaCI) içine alinarak steril petri kaplari içerisinde küçük parçalara ayristirildi. Içerisinde %10 fetal bovin serum ve %1 antibiyotik bulunan önceden hazirlanmis medyum kültüre edildi. Hücre kültür kaplarinda yeterli olgunluk ve doygunluga ulastiktan sonra ürünün degisen dozlari ile degisen sürelerde inkübasyona birakildilar. Temin edilen ve genel olarak insan respiratuvar sistem virüslerinin hedefledigi trakeo- bronsiyal epitelyal hücreler organotipik kültür ortami saglayacak sekilde altyapisinda bulunan biyoreaktör sistem aracili hücre kültürü islemine tabi tutulmustur. Bu süreçte, içerisinde %10 fetal bovin serum ve %1 antibiyotik bulunan, önceden hazirlanmis medyum (DMEM) ile 48 saat 37"(3 ve %5 CO 2 içeren 3-boyutlu, kapali sistem biyoreaktör içerisinde inkübe edildikten sonra hazir besi yeri ile yikama islemleri yapilarak 48 saat daha hücre kültürüne devam edilmistir. Bu süre sonunda %025 tripsin-EDTA ile tripsine edilerek hücreler biyoreaktör sistemin pasajlamaya imkan veren diger ünitelerine yine ayni besiyeri içerisine pasajlanmistir. Buralara ekimi yapilan hücreler yüzey alanini %80 oraninda kaplayana kadar renk ve pH degisikligine istinaden besiyeri yenilemeleri ile kültür idame ettirilmistir. Hücreler bulunduklari ortamlarda doygunluk seviyesine ulasinca tek bir haznedeki hücreler tripsin aracili isleme maruz birakilarak 3-boyutlu hücre kültürü yüzeyinden ayristirilip yikama islemi gerçeklestirilmistir. Geri kalan hazneler de ise etken madde çalismalari zaman ve doz ayarli olarak devam ettirilmistir. Çalismalar neticesinde hücre proliferasyonuna da pozitif etkisi belirlenmistir. Bu çalisma birebir insan dogasini taklit etme yetenegine sahip özellikteki biyoreaktörler ve kültür ortamlari kullanilarak gerçeklestirilmistir. Yikamalar sonrasi hücreler sayilarak akim sitometri ile canlilik testi uygulandi. Resüspanse edilmis hücreler 3 Iazerli akim sitometri cihazinda 10000 hücre oluncaya kadar okutuldu ve canlilik boyasi (TAAD) ile boyama yapilarak kültürden elde edilen hücrelerin canlilik yüzdeleri tayin edildi. Ayrica kültüre edilmis ve toplanacak seviyede olan kültüre hücreler yikanarak 500 pL hacimde bir ependorfa alindi. Bu hücre süspansiyonu üzerine 100 pL sonra içerisinden 10 uL alindi. Bu alinan hacim, hücre sayimi slaytina konularak, hücre görüntüleme ve sayim cihazinda okutularak hücre canlilik yüzdeleri tayin edildi. Çizelgede da görülecegi üzere saglikli konakci hücreler üzerinde ne proliferasyon ne de canlilik üzerine etkisinin görülmemesi ürünün toksik etkiye yol açmayacaginin bulgusu olarak düsünülmektedir. DOZ INKÜBASYON SÜRESI CANLILIK (9:.) Kontrol - O 2 saat 67 Kontrol - O 24 saat 60 1600 ppm 2 saat 67 1600 ppm 12 saat 74 1600 ppm 24 saat 88 1000 ppm 2 saat 66 1000 ppm 12 saat 61 1000 ppm 24 saat 59 600 ppm 2 saat 68 600 ppm 12 saat 68 600 ppm 24 saat 67 300 ppm 2 saat 69 300 ppm 12 saat 68 300 ppm 24 saat 69 Etken maddenin corona virüs SARS COV-2 virüs Iizati üzerindeki etkisi hem baslangiç volüme olan etkisi hem de cDNA dönüsümüne olan etkisi açisindan doz ve zaman bagimli olarak florometrik olarak ölçülmüs olup, asagidaki Çizelgede sunulmustur. Student t-testi ile yapilan istatistiksel analizlerde 1000 ppm'de 5 dakikalik inkübasyon süresinde istatistiksel olarak anlamli etkinlik tespit edilmesi daha önce yapilmis olan bakteriyal etkinlik çalismalari ile de 'ortüsmekte olup, çalisma konusu ürünün hem viral hem de bakteriyal etkinliginin olabilecegi sonucunu ortaya koymustur. Baslangiç Inkübas on K 1: cDNA kons. Konsantrasyonu Ornek _ V Y H (florometre (florometre n s/UI) süresi (florometre - n gjul) 38,8 5 dk 14,4* 7,8" Yukarida detaylari ile verilen çalismalar neticesinde bulus konusu Iipozomal ozon nanosolüsyonun; hem viral hem de bakteriyal etkinliginin oldugu; toksik etkiye yol açmadigi;saglikli hücrelerin canliligi üzerine negatif etkisinin görülmedigi ;-insan solunum sistemi (trakeo-bronsiyal) hücreleri üzerine hem rejeneratif hem de proliferatif etkisinin oldugu sonuçlarina ulasilmistir. -ENJEKSIYON SOLUSYONLARI TEST ANALIZ SONUÇLARI- Lipozomal Ozon Nanosolüsvonlari In vitro Genotoksisite Bakteriyel Ames Testi: Bulusa ait Eklem Içi/Cilt Alti/Kas Içi Enjeksiyon amaçli Iipozomal ozon nanosolüsyonlari örneklerinde genotoksisite testleri yapilmis ve Mutajenik potansiyele sahip olmadigi ortaya konulmustur. Genotoksisite (Bakterial Ames Testi) (OECD 471)Bilgileri: Mutajenik etkinin aydinlatilmasi ve mutajenlerin saptanmasi için çesitli test sistemlerinin gelistirilmesi ve mutajenezisin insanlar için olusturdugu kalitsal hastalik ve kanser riskinin azaltilmasi için yapilan çalismalar genetik toksikolojinin en önemli arastirma alanlarindan birini olusturmaktadir. 19725de Dr. Bruce Ames tarafindan gelistirilmis olan ve kimyasal maddelerin mutajenik etkilerini belirlemek amaciyla tarama testi olarak uygulanan Ames testi, çok yaygin ve güvenilir bir biçimde kisa zamanli bakteriyel test sistemi olarak kullanilmaktadir. Kimyasallar tarafindan meydana gelen mutasyonlarin hücre düzeyinde belirlenmesi amaciyla kullanilan kisa zamanli test sistemlerinden biri de Ames testidir. Ames testi, özellikle ilaç ham maddesi olarak kullanilmakistenen test maddelerinin toksik, mutajenik- karsinojenik etkilerini incelemek için güvenilir yöntemler arasinda kabul edilmektedir. Test maddesi ve kontrol maddesinin hazirlanmasi: A. Kati test materyali için: OECD 471 kilavuzuna göre, 0,5 9 test ürününü 10 mL DMSO, vorteks içine çözüldü ve 2 kat seri seyreltme yapildi.Testin son konsantrasyonlari 5 mg / B. Sivi test materyali için: OECD 471 kilavuzuna göre 50 uL test ürününü 1 mL DMSO, vorteks içine çözüldü ve 2 kat seri seyreltme yapildi.Testin son konsantrasyonlari 5 pL / Çalismada kullanilan suslar: Tüm suslar MOLECULAR TOXICOLOGY, INC.'den satin alinmistir. Sus numaralari asagida gösterilmistir: a. Salmonella typhimurium TA98 : # 71-098L b. Salmonella typhimurium TA100 : # 71-100L Pozitif Kontrol: Farkli bakteri suslarina dayali olarak farkli pozitif kontrol ürünleri kullanilir. Bakteri suslarinin tanimi ve mutajenlerin bireysel konsantrasyonlari asagida gösterilmistir: Pozitif kontrol kimyasallari Çözücü Bakteri suslari 2- aminoanthracene 100iig DMSO Salmonella suslari +89 4-niti'oquin01ine-N-oxide SÜug DMSÜ TAIÜÜ N-Aminoqrticline 2.5 mg Saf su TAIÜÜ Negatif Kontrol: DMSO Metabolik aktivasyon sistemi (89 karisimi) için, Araklor 1254 ile indüklenen liyofilize siçan karacigeri 89 mikrozomal fraksiyonu kullanilmistir. Ekstraktlarin mutajenik potansiyelleri, 89 karisiminin varliginda ve yoklugunda degerlendirilmistir. Testlerde %30'Iuk 89 karisimi kullanilmistir. Bakteriler 1 gece önceden, ampisilinli besiyerine ekilerek inkübasyona birakildi. Kontrol çözeltileri, her bakteri için ayri olarak, kontrol Çizelgesunda belirtilen 1 mlilik uygun çözücüde (DMSO veya steril distile su) hazirlandi. Test materyali için 6 tane konsantrasyon belirlendi. Hazirlanan kültür çözeltileri, 384'I`u wellplate'lere eklendi. Test protokolüne göre 37 derece etüvde 48 saatlik ink'übasyona birakildi. Süre sonunda konsantrasyon basina 64 kuyucuk sayilmis ve pozitif [(sari-revertant)] ve negatif [(mor-non revertant)] kuyularina göre degerlendirilme yapilmistir. 89 içeren ve 89 içermeyen test suslarinda negatif kontrol grubuna göre 2 kat fazla mutasyon görülmesi durumunda test pozitif (mutasyon etkisi) olarak degerlendirilmistir. Genotoksisite (Bakteriyel Ames Testi) Sonucu Çizelge 1. Test materyalinin 89 ve 89'suz ortamda bakteri suslarinin mutant koloni sayilarinin gösterilmesi 89 + ' . -i- - Negalrf kontrol 10 9 8 12 Pozitif Kontrol 48 52 45 44 â' 5 18 17 15 12 Yorum : "Eklem Içi/Cilt Alti/Kas Içi Enjeksiyon Solüsyonu" test ürününün, Salmonella typhimurium TA98,TA100, kolonilerinin negatif kontrol grubu kolonilerinden 2 kat yüksek görünmedigini görülmüst'ür. Sonuç olarak test prosedürleri (OECD 471) sonucuna göre test materyalinin 2 farkli bakteri susu ile tüm alt konsantrasyonlarinda mutajenik özellikte olmadigi tespit edilmistir. Lipozomal Ozon Nanosol'usvonlari Akut Sistemik Toksisite Testi (TS EN ISO 10993- 112018): Bulusa ait Eklem Içi/Cilt Alti/Kas Içi Enjeksiyon amaçli Iipozomal ozon nanosolüsyonlari örneklerinde akut sistemik toksiste testi yapilmis ve akut toksisite etkisinin bulunmadigi tespit edilmistir. 122012 standardi yönlendirmeleri dikkate alinarak yapilmistir. gerçeklestirilmistir. Eklem Içi [Cilt Alti/Kas Içi Enjeksiyon nanosolüsyonukas içine 2mli'kg Lipozomal ozon nanosolüsyonu deneklerin gluteal bölgesine kas içerisine 2mI/kg vücut agirligi miktarinda enjekte edildi. Kontrol grubu olarak 6 adet (3 52/ 3 6) Bale fareye 2mli'kg vücut agirligi miktarinda serum fizyolojik enjekte edilerek kontrol grubu olusturuldu Kontrol grubu denekler deney grubuyla ayni ortamda tutularak ayni sekilde beslendi. Uç gün boyunca denekler klinik gözlem altinda tutuldu (Çizelge 1). Klinik Gözlem: Vücut agirligi: Deneklerde vücut agirligi 23-33 9 araliginda olup, agirliklarda dikkat çekici bir degisiklik görülmemistir. Kontrol Baslangiç 1. Gün Agirlik 2. Gün Agirlik 3. Gün Agirlik 4. Denek (S) 31 31 32 31 Deney Grubu 2. Denekß) 32 31 31 31 4. Denekß) 33 32 32 32 Deney Grubu 1. Denekü') 26 26 27 26 2. Denekßg') 29 29 29 29 3. Denekfg') 30 30 30 30 4. Denekfg') 30 30 31 30 . Denekß?) 31 30 31 31 6. Denekü) 31 31 31 31 Çizelge 1: Yaygin klinik belirtiler gözlemler. Klinik Gözlem Gözlem Belirtileri Etkilenen sistem Degerlendirme Solunum Nefes darligi (abdominal solunum. MSS (Merkezi Sinir Görulmedi nefes almada zorluk), apne. siyanoz. tasipne. burun akintisi Sistemi), Akciger, kalp Motor hareketler Artan /azalan uyuklama. dogrulma kaybi, anestezi, katalepsi, dengesizlik (ataksi), alisilmadik hareket yetenegi, MSS, somatomotor, duyusal, nöromüsküler, otonom Görülmed'i (fasikulasyon) Konvülsiyon Klonik. touik. tonik-klonik. asfiksiyal, MSS. nöromuskuler. Gorulmedi opistotonus otonom Refleksler Korneal, dogrulma, miyotakt, isik, MSS; duyusal. otonom, Normal irkilme reklefsi noromuskuler Gözle ilgili (okuler) Lakrimasyon (göz yasarmasi). Otonom, irritasyon Görulmedi belirtiler miyosis. midriyasis. ekzoltalmus. konjunktivit. kromodakriyorea, goz kirpma zarinin gevsemesi Kardiyovaskuler Bradikardi. tasikardi. aritmi MSS. otonom, kalp, Gorulmedi belirtiler akciger Salivasyon Asiri Otonom Gorulmedi Piloereksiyon Sert kil Otonom Gürulmedi Kas tonusu Hipotoni, hipertoni Otonom Normal tonus Gastrointestinal Yumusak gaita. diyare. bulanti, dii'irez, MSS. otonom. duyusal. Gorulmedi rinore Mide barsak hareketi, Cilt Ödem eritem Doku hasari. tahris Gorulmedi Aktivasyon: Deneklerin hareketliliginde. günlük aktivasyonlarinda herhangi bir degisiklik izlenmemistir. Artan azalan uyuklama, bitkinlik, titreme, segirme davranislari izlenmemistir. Stres: Deneklerin davranislarinda stres göstergesi, sürekli turlama, saldirganlik veya köseye çekilme gibi nevrotik davranislar izlenmemistir. Kafes içerisinde normal aktivite içinde davranislar sergilemislerdir. Olüm: Hiçbir grupta 'Ölüm vakasi görülmemistir. Agri: Agri göstergesi olarak pasiflesme, sürünme, kesintili hareketlilik. bagirma davranisi görülmemistir. Solunum: Solunum davranislarinda farklilik ve siyanoz. burun akintisi. tasipne izlenmemistir Gida ve su tüketimi: Kontrollerle benzer sekilde gida ve su tüketimi izlenmistir. Görme: Gözlerde konjunktival hiperemi, Iakrimasyon. konjunktivit. opaklasma, iris iltihabi izlenmemistir. Kardiyak gözlem: Tasikardi, bradikardi izlenmemistir. Vücut sicakligi: 36,5 00 normal düzeyde izlenmistir. Gastrointestinal gözlem: Asiri salivasyon, diare, yumusak gaita izlenmemistir degerlendirme kriterlerine göre gerçeklestirilen klinik gözlem ve ölçümlerle test edilen Eklem Içi !Cilt Alti/Kas Içi Enjeksiyon Iipozomal ozon nanosolüsyonu akut uygulamalarinda toksisiteye neden oldugunu gösteren hiçbir bulguya rastlanilmamistir. Sonuç olarak, Eklem Içi /Cilt Alti/Kas Içi Enjeksiyon amaçli Iipozomal ozon nanosolüsyonunun akut toksisite etkisinin bulunmadigi tespit edilmistir. Bulusa ait Eklem Içi/Cilt Alti/Kas Içi Enjeksiyon amaçli Iipozomal ozon nanosolüsyon örneklerinde In Vitro Sitotoksisite testi yapilmis ve Sitotoksik potansiyele sahip olmadigi ortaya konmustur. Test materyali, negatif ve pozitif gruplarinin özütlemesi ISO 10993-12 standartlarina uygun oC'de çalkalamali inkübatörde 200 rpm de bekletilerek özüt hazirlandi (Belirtilen standartta düzensiz sekilli kati cihazlar baz olarak alinmistir. Bu durum en kötü senaryo olarak seçilmistir). 0.22 pm steril filtreden geçirildi ve % 100 özüt olarak tanimlandi. Diger özütlerin yüzdeleri DMEM %10 FBS seyreltilme ile olusturuldu. Renk degisimi gözlenmedi Sitotoksisite test çalismasi için ATCC firmasindan temin edilen L-929 fare fibroblast hücre hatti (NCTC clone 929: CCL 1, American Type Culture Collection [ATCC] kullanildi. %10 FBS (fetal sigir serumu) ve %2 glutamin ile desteklenmis DMEM (dulbecco's modified eagle edildi. ATCCHnin önerdigi sekilde hücrelerin tripsinazyonu için %025 tripsin, %0,03 EDTA karisimi kullanildi. Hücreler kültür medyumu içerisinde süspanse edilerek 96 kuyucuklu pleytlere her bir kuyucukta 104 hücre olacak sekilde 100pl aktarildi. 24 saatlik hücre kültürü sartlarindan sonra kültür üzerindeki medyum uzaklastirilarak 100p| test materyali, pozitif ve negatif kontrol özütlerinden eklendi. Tüm dozlar en az 5 tekrar olacak sekilde uygulandi. 48 saatlik %5 CO2=Ii etüvde 37°C' de % 95 nemde bekleme sonunda pleytler incelendikten sonra kültür medyumu uzaklastirildi. Negatif kontrol (NK): Hücre kültürü ortami (DMEM +% 10 FBS), 72 saat boyunca bzütler ile Pozitif kontrol (PK): DMSO (Dimetilsülfoksit) seri dilusyonlari (10-30 v/v) DMEM+ 0/010 FBS ile yapildi. seyreltildi. Pleytlerin mikroskobik olarak incelenmesinden sonra, kültür ortami kuyucuklardan uzaklastirildi. 50 ul MTT çözeltisi onun bir testi kuyucuguna ilave edildi. Pleytler 2 saat 37 0C inkübe edildi. Sonra MTT çözeltisi kuyucuklardan uzaklastirilarak her bir kuyucuga 100 pl izopropanol ilave edildi. 570 nm filtre içeren mikroplaka okuyucu ile absorban ölçümler yapildi ve degerlendirme yapildi. Absorbanslarin 0,2 2 den büyük olmasi testin genel geçerlilik kriteri olarak kabul edildi. Test materyalinin canlilik oraninin %70 den az olmasi sitotoksik olarak degerlendirilir. Çizelge 1. MTT Testi ile sitotoksik etkilerin nicel ölçümü sonuçlari. TS EN ISO 10993-5 standardinin direktifi dogrultusunda yapilan deney sonuçlarina test materyalinin sitotoksik etkiye sahip olmadigi belirlenmistir. Bulusa ait Eklem Içi/Cilt Alti/Kas Içi Enjeksiyon amaçli lipozomal ozon nanosolüsyon 122013 standardi yönlendirmeleri dikkate alinarak yapilmistir. Deney hayvani olarak üç adet saglikli genç 2-3 kg vücut agirligina sahip Yeni Zelanda albino tavsanlar kullanildi. verilen; Sivilar seyreltilmeden veya dogrudan çöktürme ile veya uygulanamaz ise uygun bir sivi ile seyreltilerek deneye tabi tutulmalidir direktifine göre kullanim dozu olan 1/4 dozuna serum fizyolojik ile seyreltilerek uygulanmistir Pozitif kontrol olarak Sodium lauryl sulphate (SLS), negatif kontrol olarak distile su kullanilmistir. Lipozomal ozon nanosol'usyonu emdirilmis spanç sekil 2 de gösterildigi gibi 2 nolu örnek uygulama bölgelerine direk temasta tutulmustur. Pozitif kontrol alanina (3 nolu alan) SLS emdirilmis spanç uygulanmistir. Numuneler gazli bezle örtülerek bandajla sabitlenmis ve 4 saat süreyle sirt derisiyle topikal olarak temasi saglanmistir. ± 2) saatlerde incelenerek Çizelge 1 de verilen deri reaksiyon skoruna göre degerlendirilerek birincil irritasyon indeksi belirlendi. Hesaplamada standartta belirtildigi sekliyle 1. saat hesaplamaya alinmadi. Çizelge 1 ve Çizelge 2 de verilmistir. Çizelge 1: irritasyon skoru No alanlari Eritem Ödem kontrol Negatif Sol Arka 0 0 0 0 0 0 0 0 kontrol kontrol Negatif Sol Arka 0 0 0 0 0 0 0 0 kontrol 3 Numune Sol ön 0 0 0 0 O 0 0 0 Sag arka 0 0 0 0 0 0 O 0 Pozitif Sag ön 3 3 2 '1 2 2 1 0 kontrol Negatif Sol Arka 0 D 0 0 0 0 0 0 kontrol Çizelge 2: Skor ortalamasi Örnek Birincil Irritasyon Skoru Birincil Irritasyon sonuçlarina göre Eklem Içi /Cilt Alti/Kas Içi Enjeksiyon amaçli Iipozomal ozon nanosol'üsyonunun herhangi bir tahris edici etkiye sahip olmadigi belirlenmistir. Lipozomal Ozon Nanosolüsvonlari Deri Alti Implantasyon" 7-14 Gün" Testi (TS EN ISO Bulusa ait Eklem Içi/Cilt Alti/Kas Içi Enjeksiyon amaçli lipozomal ozon nanosol'üsyon örneklerinde Deri Alti Implantasyon testi yapilmis ve herhangi inflamatuvar reaksiyona neden olmadigi ortaya konmustur. Test yönteminin amaci, tibbi cihaz / biyomateryal implantasyonundan sonra materyalin nihai entegrasyonu veya rezorpsiyon i' degradasyonunu içeren doku tepkisinin tarihini ve sürecini belirlemektir. Ozellikle parçalanabilir / emilebilen malzemeler için malzemenin bozunma 'özelliklerini ve doku cevabi belirlenmektedir. Implantlar yetiskin fareler, siçanlar, kobay veya tavsanlarin sirt deri alti dokusuna yerlestirilerek test edilmektedir. Test çalismalarinda denek olarak 200-300 9 agirliginda, her iki cinsiyetten 10 haftalik saglikli Wistar ratlar kullanilmistir. Denekler test süresince %60 nem, 220C sabit sicakliga sahip barinma alaninda tutulmuslardir. Deneklere normal siçan yemi ve musluk suyu verilmistir. Altlik olarak tozsuz otoklavlanmis agaç talasi kullanilmistir. Deney sonunda tüm hayvanlara ötenazi uygulanmistir. Lipozomal ozon nanosolüsyonu örnekleri deri altina direk uygulama (implantasyon) yapilamamistir. Ur'un implantasyonu ameliyathane kosullari altinda, Ketamin 85 mg/kg, Ksilazin 15 mg/kg vücut agirligi doz uygulamasiyla anestezi edilmis siçanlarin omurganin iki tarafinda sirt derilerinin altina yerlestirilerek gerçeklestirildi. Operasyon alani tiraslanarak tüyler uzaklastirildiktan sonra antiseptik solüsyonla silinerek temizlendi. Implantasyon periyodu 2 hafta olarak belirlenerek süreç sonunda derin anestezi yöntemiyle denekler ötenazi yapilarak implantasyon alanlari açilip makroskobik gözlem yapildi. Implantasyon alanindan disekse edilen doku örnekler mikroskobik incelemeye alindi. Uygulama yapilan hayvanlar günlük davranislari ve aktivasyonlari bakimindan herhangi bir anormallik göstermediler. Hareketlerinde ve yürüyüslerinde herhangi bir anormallik izlenmedi. Beslenme aliskanliklari ve kafes içerisinde sosyal davranislari normaldi. On dört günlük implantasyon süreci sonunda implantasyon alaninda yapilan makroskobik incelemede Eklem Içi /Cilt Alti/Kas Içi Enjeksiyon nanosolüsyonuürününün deri altinda hipodermis içerinde emilerek kayboldugu görüldü. Implantasyon odagi çevresinde lenf dügümü olusumu ve inflamatüvar yapi gözlenmedi. Histopatolojik incelemede hipodermal dokularda implantasyon bölgesinde Ienfatik odaklanma veya ekstra Ienfosit inflitrasyonu ve metaplazik degisikler izlenmedi . gerçeklestirilen gözlem ve ölçümlerle test edilen Eklem Içi !Cilt Alti/Kas Içi Enjeksiyon nanosolüsyonuürünü implantasyon deneyleri sonucunda, 14 günlük subkutan implantasyon uygulamasinda, Eklem Içi !Cilt Alti/Kas Içi Enjeksiyon Nanosolüsyonunun tamamen emilmis ve kaybolmus oldugu, implantasyon alaninda yer alan deri alti siki bag dokusuyla uyum içinde herhangi inflamatuvar veya metaplazik degisiklige neden olmadigi izlendi. Sonuç olarak Eklem Içi/Cilt Alti/Kas Içi Enjeksiyon Nanosolüsyonunun 14 günlük sub kutan implantasyonunu takiben implantasyon alaninda herhangi bir kalinti birakmadan tamamen emilerek çevre dokuyla bütünlestigi, herhangi inflamatuvar reaksiyona neden olmadigi tespit edilmistir. Bulusa ait Eklem Içi/Cilt Alti/Kas Içi Enjeksiyon amaçli Iipozomal lipozomal ozon nanosolüsyonu örneklerinin Kas içi Implantasyon testi yapilmis ve kas dokusunda herhangi bir deformatif veya inflamatuvar etkiye neden olmadigi ortaya konmustur. Test yönteminin amaci, tibbi cihaz/biyomateryal implantasyonundan sonra materyalin nihai entegrasyonu veya rezorpsiyon/degradasyonunu içeren doku tepkisinin tarihini ve sürecini belirlemektir. Ozellikle parçalanabilir / emilebilen malzemeler için malzemenin bozunma özelliklerini ve doku cevabi belirlenmektedir. Implantlar yetiskin fareler, siçanlar, kobay veya tavsanlarin Pannikulus carnosa veya gluteal bölge kaslari içine yerlestirilmelidir. Implant örnekleri aseptik olarak ve implantasyondan önce veya implantasyon sirasinda herhangi bir sekilde hasar görmeden implante edilmelidir. Her malzeme ve implantasyon periyodu için toplam 10 test ve 10 kontrol örnegi elde etmek için en az üç hayvan ve yeterli alan kullanilir. Tek bir implant bölgesinden çoklu doku örnekleri alindiginda, histoloji bölümleri Test çalismalarinda denek olarak 17-20 gr agirliginda, 6 adet (3 disi/3 erkek) BALB/c fare kullanilmistir. Denekler test süresince %60 nem, 22°C sabit sicakliga sahip barinma alaninda tutulmuslardir. Deneklere normal rat yemi ve musluk suyu verilmistir. Altlik olarak tozsuz otoklavlanmis agaç talasi kullanilmistir. Deney sonunda tüm hayvanlara ötenazi uygulanmistir. Deneklerin sag ve sol gluteal kasina Eklem Içi /Cilt Alti/Kas Içi Enjeksiyon Solüsyondan 2mI enjekte edildi. Enjeksiyondan 14 gün sonra, Ketamin 85 mg/kg, Ksilazin 15 mglkg anestezisi uygulanan deneklerden sag ve sol bacak gluteal kaslari disekse edilerek mikroskobik olarak incelendi. Uygulama yapilan hayvanlar günlük davranislari ve aktivasyonlari bakimindan herhangi bir anormallik göstermediler. Hareketlerinde ve yürüyüslerinde herhangi bir anormallik izlenmedi. Beslenme aliskanliklari ve kafes içerisinde sosyal davranislari normaldi. 14 günlük implantasyon süreci sonunda, deneklere eter anestezisi sonrasi servikal dislokasyon uygulanarak arka ekstremitelerde gluteal kaslarda enjeksiyon uygulama bölgeleri açildi. Makroskobik olarak enjeksiyon alanlari incelendi. Eklem Içi !Cilt Alti/Kas Içi Enjeksiyon Nanosolüsyonuna bagli herhangi bir kalintiya rastlanmadi. Ayrica kas içerisinde imflamasyona bagli Ienfatik odak olusumu da izlenmedi. Lipozomal ozon nanosolüsyonu enjeksiyonu yapilan gluteal bölgeler incelendiginde; makroskobik olarak kas yapilarini normal görünüme sahip oldugu. Kasin diseksiyonu esnasinda kas içerisinde herhangi bir farkli doku kitlesi varligi veya Ienfatik odaklarin bulunmadigi görüldü. Kas dokusu içerisine enjekte edilen lipozomal ozon nanosolüsyonun doku tarafindan tamamen emildigi ve herhangi bir kalinti birakmadigi gözlendi. Kas dokusunda lipozomal ozon nanosolüsyonu enjeksiyonunun dokuda herhangi bir olumsuz yönde yapisal degisiklige neden olmadigi izlendi. Mikroskobik incelemelerde Eklem Içi /Cilt Alti/Kas Içi Enjeksiyon amaçli Iiozomal ozon nanosolüsyonu örneklerinin kas dokusunda herhangi bir bozulmaya veya deformasyona kas içerisinde lenfosit inflitrasyonununa neden olmadigi belirlendi. belgesinde belirtilen protokol ve degerlendirme kriterlerine göre gerçeklestirildi. Gözlem ve degerlendirmelerde; Eklem Içi /Cilt Alti/Kas Içi Enjeksiyon ürünü 2 haftalik gluteal deney süreci sonunda, örneklerin tamamen emildigi herhangi bir kalinti kalmadigi belirlendi. Enjeksiyonun kas dokusunun uyum içerisinde oldugu ve kas yapisinda deformasyona ve inflamatüvar reaksiyona neden olmadigi makroskobik ve mikroskobik olarak belirlendi. Sonuç olarak Eklem Içi /Cilt Alti/Kas Içi Enjeksiyon amaçli lipozomal ozon nanasolüsyon ürününün kas içi implantasyon uygulamalarinin kas dokusunda herhangi bir deformatif veya inflamatuvar etkiye neden olmadigi belirlenmistir. Lipozomal Ozon Nanosolüsvonu Bivopsi+Histopatoloij/Hematoksilen Eozin Boyama Testi: Bulusa ait Eklem Içi /Cilt Alti/Kas Içi Enjeksiyon amaçli lipozomal ozon nanosolüsyon örneklerinde "Bölgesel Subkutan Uygulamalarda iyilestirici Etkilerinin" gözlenmesi için ratlar üzerinde yapilan deneysel arastirmada Sprague downey irki, 2 aylik, 56 disi rata ait 280 deri biyopsi materyaller birlikte bu hayvanlarin deney sonundaki ötenazisi sonucunda akciger karaciger ve böbreklerine ait dokularin mikroskobik incelemeleri yapilmistir. ppm derialti olmak üzere hergrupta hayvanin sirt bölgesinden 56 hayvana ait, uygulamayi takiben 1.,2.,3.,4. Ve 30. Günlerde, toplam 280 deri biyopsisi incelenmistir. Lezyonlar skorlanarak grup prtalama skorlari alinmistir. Incelenen deri biyopsilerinde; Deri epidermis oraninda (% olarak) ilk 4 gün ortalamasi; 10 oldugu görüldü. Damarlasma sayisi (adet olarak) ilk 4 gün ortalamasi; 10 ppm lik dozda 7 iken 30. günde Genel olarak bütün gün ve gruplarda deride nötrofil sayilarinda artis görülmemistir. Akcigerde, karacigerde, böbrekte herhangibir patolojik bulguya rastlanmamistir. Bulusa ait Eklem Içi/Cilt Alti/Kas Içi Enjeksiyon amaçli Iipozomal ozon nanosolüsyon örnekleri ile "Laparatomi Ensizyon Hattina enjeksiyon sonucu yara etkilerinin klinik ve hisopatolojik yönlerden arastirilmasi" için ratlar üzerinde yapilan deneysel arastirmada Sprague downey irki, 2 aylik, 72 disi rata ait 72 deri biyopsi materyaline ait dokularin mikroskobik incelemeleri yapilmistir. Kesi yapilan deri hattindaki yara dudaklari üzerine yapilan uygulamalardaki deney gruplari; Fizyolojik Tuzlu Su (FTS), %1 Lidocaine, ozon bulunmayan nanosolüsyon, 250 ppm ozon nanosolüsyonu, 500 ppm ozon nanosolüsyonu, 500 ppm ozon nanosolüsyonu +%2 Lidocaine (%50 oraninda karisim) , 1000 ppm Ozon nanosolüsyonu+ %2 Lidocaine (%50 oraninda karisim) ve 2000 ppm ozon nanosolüsyonu + %2 Lidocaine (%50 oraninda karisim) her grupta 8 hayvanin batin bölgesinden 72 hayvana ait toplam 72 deri biyopsisi incelendi. Lezyonlar skorlanarak grup ortalama skorlari alindi. Mikroskopik Bulgular: Incelenen deri biyopsilerinde 3 üzerinden *skorlama degerleri aasagidaki Çizelgede sunulmustur. -..0- _"..TMW..-,. "Mamma "i Omar !Manti ', 1.522 - "W" W. 'w ma i'm. "MM saglam..." i tasa.. i maci› maar. wmgamaamzamamj . `. nur-.i mêgikwuil *Wwwwimmmwa ag www amini-ßi) 5- tüm" '5`i' 5-' "hmm" 53% g› g g L &gg-5:33:41:: -.iq I iii-i Lu'gin' `r û. un; .1 › n 'i i-_-. _gxî'l :::W-...I Bulusa ait Eklem Içi /Cilt Alti/Kas Içi Enjeksiyon nanosolüsyon örneklerinde "Bölgesel Subkutan Uygulamalardan Sistemik Etkilerinin" gözlenmesi için tavsanlar 'üzerinde yagilan çalismada 6 adet Albino Laboratuvar tavsaninin ötenazisi soncunda akciger , karaciger, kalp kasi ve böbreklerine ait dokular ile periferik yayma frotisinin mikroskobik incelemeleri yapilarak sonuçlari asagida sunulmustur. Makroskobik Bulgular: Damar içi 200 ppm (6mg/kg) ozon nanosol'üsyonu içeren 100 ml serumun 10 gün tekrarlanmasi sonucu hayvanlarin ötenazisi yapilmistir. Mikroskonik bulgular: Incelenen kan frotilerinde ozon uygulanmadan ve ozon uygulandiktan sonra ayni hayvanlarin periferik kan yaymalarinda eritrositlerin zar yapilari ve morfolojilerinde; ayrica akciger, karaciger, kalp kasi, böbrek dokularinda da herhangi bir patolojik bulguya rastlanmamistir. Bulusa ait Eklem Içi/Cilt Alti/Kas Içi Enjeksiyon amaçli Iipozomal ozon nanosol'usyon örneklerinde "Bölgesel diz içi enjeksiyonda iyilestirici etkilerinin klinik ve histopatolojik yönden arastirilmasi; hyal'üronik asit ve nanopartik'L'il vitamin enjeksiyonu yapilan dizler ile karsilastirilmasi" için ratlar 'üzerinde yapilan deneysel arastirmada Sprague downey irki, 2 aylik, 64 disi rata ait kemik kikirdak dokularinin mikroskobik incelemeleri yapilarak raporu asagida sunulmustur. Makroskobik bulgular: Daha önceden medial kondilüsa 250 mikrometre stoperli göz bistürisi ile yapilan defekt sonrasi 6. Haftadaki dezartikülasyon sonucu diz eklemei ile birlikte Serum eklem içi, 4000 ppm +HA (1/2 oraninda karisim) eklem içi olmak üzere 8 hayvanin eklem bölgesinden toplam 64 doku incelendi. I "ayni `mm - ' Ilsilllruiili ' mWii-_IIIW_ __î-2911990; i iiîio mm 4... -. I'll! pirim . i'-iliu'IivpçirnI ' unu' "mt-i" im um [ ` ms- 1 :ne-m i in ii : Nur: i in ii : I adimi-di› I uriiiiiihi 5 Mikroskobik bulgular: Semi kantitaif olarak Pineda et al. (1992)* ve Wakitani et al. (1994)** isimli çalismalara ait skorlarinin modifiye sekli kullanilmistir. -BITKI SOLUSYONLARI TEST ANALIZ SONUÇLARI- Lipozomal Ozon Nanosolüsvonlari Kuru Kavisilarda Zararli Carpoqlvphus Iactis (L.) (Acari: Carpoquphidae)'in Biyoloiik Aktivitelerine Etkisi Uzerine Laboratuvar Testi: Kuru meyvelerin önemli bir akar zararlisi olan Carpoglyphus lactis (L.) (Astigmata: Carpoglyphidae), kuru kayisilarin meyve sekerleri ile beslendiginde ürünün bozulmasina, istenmeyen kokular salmasina ve nihayetinde pazar degerini kaybetmesine neden olmaktadir. Daha önce yapilan çalismalar ozon gazinin akara karsi zehirli özelliginden dolayi kuru meyvelerde mücadele amaçli olarak kullanilabilecegini göstermistir. Ancak, ozon gazinin hizlica 02 ve 0- 'ye parçalanmasi nedeniyle kisa kalicilik özelligi, bu gazin akarin mücadelesinde kullanimini sinirlamaktadir. Bulus kapsaminda yapilan çalismada, bulusa ait lipozomal ozon nanosolüsyonlarin bu zararli akar üzerindeki biyolojik aktiviteleri arastirilmistir. Arastirmada formülasyonun akar üzerinde öldürücü [lethal konsantrasyonlar (LC), Iethal zaman (LT)], uzaklastirici ve yumurta birakmayi engelleyici etkileri ve kaliciligi degerlendirilmistir. Bu çalisma, formülasyonun %027 konsantrasyonunun disi akarlarin konusu Iipozomal ozon nanonanosolüsyonun akara karsi 0.1, 0.2 and 04% oranlarda belirlenmistir. Kalicilik testlerinde, formülasyonun öldürücü etkilerinde ilk 7 gün boyunca istatistiki anlamda önemli bir degisikligin olmadigini göstermistir. Ancak, 10 günden sonra öldürücü etkisinde %12-17 arasinda bir düsüs saptanmistir. Kaçirici etki için yapilan Pearsoniin ki-kare testine göre, formülasyonun %0.1 üzerindeki konsantrasyonlarla ilaçlanan kayisilardan C. lactis disilerinin güçlü bir sekilde kaçtiklari görülmüstür. Sonuç olarak, bu çalisma sayesinde bulus konusu nanosolüsyonlarin belirlenen dozlarinin C. lactis disilerinin toksik ve kaçirici etkilerinin oldugu belirlenmistir. Formülasyonun 10 gün süren kaliciligi ile kuru kayisilarin ilacin burada belirlenen dozlarina maruz birakilmasi durumunda C. lactis mücadelesinde kullanilabilecegi bu çalisma ile ortaya konulmustur. Lipozomal Ozon Nanosolüsvonlarin Kök-Ur Nematodu (Meloidoqvne sp.) Uzerindeki Toksik Etkisi Uzerine Laboratuvar Testi: Bulusa ait Iipozomal nanosolüsyonlarin Ozon (1), Ozon+Asetik Asit (2) , Ozon+Asetik Asit+Timol (3) içeren üç farkli örnekleri ile tarimda kullanim olanaklarinin arastirilmasina yönelik olarak Bitki Koruma alaninda kullanimi arastirilmiltir. Yapilan çalismalarda tarimda ürün kayiplarina neden olan ve mücadele imkani kisitli olan kök-ur nematodlari ele alinmis olup, bulus konusu nanosolüsyonlarin kök-ur nematodu (Meloidogyne sp.) üzerindeki etkileri test edilerek bu zararli ile mücadele imkanlarinin olup olmadigi arastirilmistir. Nanosolüsyonlar kullanima kadar +4 @de muhafaza edilmislerdir. Hedef zararli olarak kullanilan kök-ur nematodlari Bursa Karacabey domates tarlalarindaki bulasik bitki köklerindeki urlardan disi birey olarak toplanmislardir. Toprakta serbest olarak hareket eden ve bitkiyi enfekte eden dönem 2. dönem oldugu için toplanan disi bireylerden 2. dönem larvalar elde edilmis ve denemeler 2. dönem larvalar üzerinde yapilmistir. Ancak, kök-ur nematodu Meloidogyneinin tür teshisi yapilmamis, cins üzerinden ifade edilmistir (Meloidogyne sp.). Solüsyonlar steril saf su içinde seyreltilerek asagidaki dozlar elde edilmistir: 1 Numarali Numarali solüsyonlar: %0.1, %02, %03 ve %0.4. Her bir solüsyon 6 cm çapli steril cam petrilere yukaridaki dozlarda yaklasik 20 ml olarak konulmus ve hemen sonrasinda her bir petriye yaklasik 100 adet (±10) 2. dönem nematod homojenizasyon saglanmistir. Daha sonra petriler üsteleri kapatilarak oda sicakliginda deneme sonuna kadar oda sicakliginda inübasyona birakilmislardir. Kontrol grubu olarak nematodlar sadece streil saf su içinde belirlenen sürelerde tutulmuslardir. Her bir solüsyon denemesi 6, 12 ve 24 saat sonunda ölü nematodlar sayilarak nanosolüsyonun etkinligi (toksisitesi) belirlenmistir. Her bir deneme 3 tekerrürlü olarak yürütülmüstür. Solüsyon 1 yani içeriginde sadece "Ozon" bulunan nanonanosolüsyonun nematod üzerinde maruz kalma süresi arttikça toksik etkisinde artma egilimi görülmektedir. Ancak, 12 saat ile 24 saat arasinda etkinlik farki görünmemektedir. En düsük etki 6 saat sonra ve en düsük neredeyse nematodlarin tamami üzerinde etkili oldugu yani toksik etki gösterdigi tespit edilmistir. Bu 3 sonuç, solüsyon 1iin Meloidogyne sp ile mücadelede ümit var etkide oldugunu göstermektedir. Solüsyon 2 yani içeriginde "Ozon+Asetik Asit" bulunan nanonanosolüsyonun nematod üzerinde maruz kalma süresi arttikça toksik etkisinde artma egilimi görülmektedir. Ancak, 12 saat ile 24 saat arasinda etkinlik farki görünmemektedir. En düsük etki 6 saat sonra ve en düsük doz olan %O.1'de, %35 oraninda tespit edilirken, 12 ve 24 saat sonra %03 ve gösterdigi tespit edilmistir. Bu sonuç, solüsyon 2iin Meloidogyne sp ile mücadelede ümit var etkide oldugunu göstermektedir. Solüsyon 3 yani içeriginde "Ozon+Asetik Asit+Tim0I" bulunan nanosolüsyonun nematod üzerinde maruz kalma süresi arttikça toksik etkisinde artma egilimi görülmektedir. Ancak, 12 saat ile 24 saat arasinda etkinlik farki görülmemektedir. En düsük etki 6 saat sonra ve edilmistir. Bu sonuç, solüsyon 3rün Meloidogyne sp ile mücadelede ümit var etkide oldugunu göstermektedir. Sonuç olarak 3 farkli içerikli nanosolüsyonlarin kök-ur nematodu Meloidogyne sp. üzerinde artan sinerjetik toksik etkisi gösterilmistir. Bulus konusu Iipozomal ozon nanosolüsyonlarinin bu nematodla özellikle seralarda yapilacak mücadelede zararli nematodu baski altina alma potansiyeli yüksek oldugu ortaya konmustur. Lipozomal Ozon Nanosolüsvonlarin Ikinoktali Kirmizi'orümcek (Tetranychus Urticae (Koch) (Acari: TetranychidaelUzerindeki Toksik Etkisi Uzerine Laboratuvar Testi: Bu testte deneme materyali olarak kirmiziörümcegin en çok zarar olusturdugu bitki türü olan patlican (Pala çesidi) [Solanum melongena L.(Solanaceae)] bitkilerinin 10 haftalik fideleri kullanilmistir. Fideler yapay isiklandirmali (16 saat aydinlik: 8 saat karanlik) 27°C±1 ve Denemede kullanilan Ikinoktali kirmizi'orümcek (Tetranychus urticae Koch) (Acari: Tetranychidae) bireyleri 8 yil önce Bursaidan toplanan ve sürekli olarak ilaçsiz olarak yetistirilen hassas bir popülasyondan alinmistir. Zararlinin kolonileri yine kontrollü kosullarda ayni patlican fideleri üzerinde çogaltilmistir. Bu testlerde bulus konusu Iipozomal ozon nanosolüsyonlari kullanilmistir. Birinci denemede iki farkli formülasyonun (N ve 8) iki farkli (I ve II) konsantrasyonu kullanilmistir. Ikinci denemede ise 8 kodlu formülasyonun I nolu konsantrasyonuna asetik asit (8+AA), portakal yagi (8+P), kekik yagi (8+K) veya Iavanta yagi (S+L)'nin farkli konsantrasyonlarinin karistirildigi kombine formülasyonlar denenmistir. Patlican fidelerinin yapraklarinin üzerine ve altina el spreyleri kullanilarak ayni hacimde sadece su püskürtülmüstür. Daha sonra yapraklara uygulanan su ve solüsyonlarin kurumasi için 30 dk bitkiler laboratuvar kosullarinda bekletilmistir. Her yapragin üzerine 5 adet ergin disi (patlican için belirlenen ekonomik zarar esigine göre) firça yardimiyla tek tek yerlestirilmistir. Denemeler 3 tekerrürlü olarak yapilmistir. Bitkiler yapay isiklandirmali (16 saat aydinlik: 8 saat karanlik) 27°C±1 ve %60±5 oransal rutubetli steril iklim odasi kosullarinda 7 gün boyunca bekletilmistir. Üçüncü 4 ve 7. gün sonlarinda kirmizibrümcegin canli biyolojik evreleri (yumurta, larva, nimf, ergin) steoromikroskop altinda tek tek sayilarak not edilmistir. Sadece su uygulanan kontrol grubundaki patlican bitkilerinde görülen canli kirmizi örümcek sayilari ve farkli formülasyonlarin uygulandigi patlican yapragindaki canli bireylerin sayilari kullanilarak Abbott formülüne yerlestirilmistir (Abbott 1925). Laboratuvar kosullarinda yapilan testlerin 3. gün sonuçlarina göre N formülasyonunun I ve oranda; nimflere %55 ve 0 oraninda ve erginlere %46 ve 53 oraninda toksik etki göstermistir. S formülasyonun ayni konsantrasyonlari ise sirasiyla yumurtalara %30 ve 93 oranda; Iarvalara %66 ve 94 oranda; nimflere %0 ve 0 oraninda ve erginlere %8 ve 69 oraninda toksik etki göstermistir. Laboratuvar kosullarinda yapilan testlerin 7. gün sonuçlarina göre N formülasyonunun I ve oranda; nimflere %68 ve 95 oraninda ve erginlere %14 ve 71 oraninda toksik etki göstermistir. S formülasyonun ayni konsantrasyonlari ise sirasiyla yumurtalara %5 ve 0 oraninda toksik etki göstermistir. Laboratuvar kosullarinda yapilan testlerin 3. gün sonuçlarina göre tek formülasyonun 1000 mg/Lilik konsantrasyonuna kekik yagi (S+K), Iavanta yagi (S+L), portakal yagi (S+P) ve asetik asit (S+AA) ile kombine edildigi formülasyonlari sirasiyla yumurtalara %97, 99, 99 ve Laboratuvar kosullarinda patlican bitkileri üzerinde yapilan test sonuçlarina göre bulus konusunu Iipozomal ozon nanosolüsyonlari üç gün sonra Ikinoktali kirmiziörümcegin öldürmüstür. Nimfler ilk 3 günde meydana gelmedigi için sonuçlar dikkate alinmamistir. Testin 7. gününde nimf popülasyonlari dogal olarak arttigindan etkiler %19-76 arasinda olmustur. Buna göre bulusun farkli formülasyonlari ve konsantrasyonlari degisen oranlarda kirmiziörümcegin tüm biyolojik dönemlerine degisen oranlarda toksik etki göstermistir. En iyi sonuçlara göre, yumurtalarin %93!üne, Iarvalarin %100'üne, nimflerin %76'sina ve erginlerin %695una kadar varan oranlarda öldürücülük (toksik etki) gözlemlenmistir. Formülasyonlara bitkisel bazli yaglarin eklenmesi kirmiziörümcege olan toksik etkiyi oldukça arttirmis ve sinerjist etki göstermistir. Bulus konusu nanosolüsyon en düsük konsantrasyonu dahi (I nolu konsantrasyon) kekik, Iavanta, portakal yagi veya asetik asit oranda; erginlere %100 oraninda toksik etki göstermistir. Bu karisimlar 3 gün içinde hizli bir etki gösterdigi için nimflerin olusmasina imkan vermeden kirmiziörümcek bireylerinin çok yüksek oranda ölmelerine neden olmustur. Sonuç olarak, bulusun formülasyonlarina ve konsantrasyonlarina bagli olarak Ikinoktali kirmiziörümoege toksik (zehir) etkisi göstermistir. Bu çalisma ile bulus konusu Iipozomal ozon nansolüsyon formülasyonlarinin Tarim'da Bitkisel Üretim asamalarinda Bitki Koruma Urünü olarak kullanilabilme potansiyeli ortaya konmustur. Lipozomal Ozon Nanosolüsvonlarin Kirmiziörümcek Uzerindeki Toksik Etkisi Uzerine Saha Testleri: Çanakkale Biga ilçesine bagli Çesmealti köyünde çiftçi Halil BagciogIU'nun 1 Mayis tarihinde 80-85 günlük hasada erken gelen domates fide dikilisi yapmis oldugu 4 dekar arazi 100 metrekarelik parsellere ayrilip yapilip atilan ilaçlarin doz, karisim denemeleri seklinde yukaridaki tabloya ulasilmistir. 4 Mayis tarihi ile tablodaki doz ve karisimlar seklindeki parseller fide döneminden itibaren kirmizi örümcege, erken yaprak yanikligina bakilmis. Çiçeklenme döneminden itibaren küllemeye ve meyve tutum döneminden sonra yesil kurda karsi Lambda-cyhalothrin ilave edilerek 10-12 gün araliklar ile parsellerin ilaçlamasi yapilmis olup 10-11 gün ara ile kontrolleri yapilmistir. Mayis Cuma günü yapilan gözlemlerde kirmizi örümcek zararlisina, erken yaprak yanikligina, küllemeye ve yesil kurda fideleme döneminden bu güne kadar rastlanilmamistir. 26 Mayis Sali günü yapilan gözlemde 75-100 ml dozlarda kullanilan ilaç A (%33 ozonlu emülgatör, %34 ozonlu yag, %33 asetik asid) ve ilaç B (%30 ozonlu emülgatör, %30 ozonlu yag, %30 asetik asid, %10 fonksiyonel yag timol) parsellerindeki kirmizi örümcek popülasyonunun mz'de 2-3 adet canli oldugu gözlemlenmis, 50 ml dozda uygulanan ilaç A ve ilaç B parsellerindeki kirmizi örümceklerin mz'de 7-8 adet canli görülmüs olup bunun da düsük popülasyonda oldugu saptanmistir. Erken yaprak yanikligina, küllemeye ve yesil kurda fideleme döneminden bu güne kadar rastlanilmamistir. Yesil aksamlari inceledigimizde ise yesil kurt yumurtasina ve Iarvasina rastlanilmamistir. Haziran Cuma günü yapilan gözlemle birlikte 75-100 ml dozlarda kullanilan ilaç A ve ilaç B parsellerinde Haziran ayinin gelmesi ile olusan uygun hava kosullarindan kaynakli kirmizi örümcek popülasyonunun m2ide 4-5 adet canli oldugu gözlemlenmis, 50 ml dozda uygulanan ilaç A ve Ilaç B parsellerindeki kirmizi örümceklerin mz'de 8-9 adet canli oldugu saptanmistir. Ilaç A ve ilaç Binin parsellerde tek basina kullanilan tüm dozlarinda erken yaprak yanikligina ve küllemeye karsi kullanilan diger ilaçlarla karsilastirdigimizda hiçbir etkisinin olmadigi gözlemlenmistir. Tüm parseller gözlemlendiginde yesil aksamlari inceledigimizde 100 bitkide 1 adet ortalama ile yesil kurt yumurta ve larva agirlikli bir bulasma oldugu gözlemlenmistir. Yesil kurda karsi %5lik bulasma oldugunda ilaçlama yapilacaktir. 16 Haziran Sali günü yapilan gözlemde 75-100 ml dozlarda kullanilan ilaç A ve ilaç B parsellerinde uygun hava kosullarin hala devam etmesi ile birlikte kirmizi örümcek popülasyonunun mz'de 4-5 adet canli oldugu gözlemlenmis, 50 ml dozda uygulanan ilaç A ve ilaç B parsellerindeki kirmizi örümceklerin mz'de 9-10 adet canli oldugu saptanmistir. Parsellerdeki gözlemlere göre tek basina kullanilan ilaç A ve B'nin tüm dozlarinda erken yaprak yanikligina ve küllemeye karsi kullanilan diger ilaçlarla karsilastirdigimizda hiçbir etkisinin olmadigi yeniden gözlemlenmistir. Tüm parseldeki bitkilerin yesil aksamlari incelenmis ve yer yer ölü yesil kurt Iarvalarina rastlanilmistir. Olen yesil kurt Iarvalarin ilaç A ve ilaç B parsellerinde 50 ml dozda %1-2 lik ortalama ile ölüm meydana getirmis, 75-100 ml dozda uygulanan ilaç A ve ilaç B parsellerindeki ölüm oranin ise %3-4 oraninda oldugu görüldü. Lambda-cyhalothrinli olan karisimlarda tek basina kullanilan ilaç A ve ilaç B ye göre performans bakimindan daha iyi oldugu görüldü. 26 Haziran Cuma günü yapilan gözlemde 75-100 ml dozlarda kullanilan ilaç A ve ilaç B parsellerinde uygun hava kosullarin hala devam etmesi ile birlikte kirmizi örümcek popülasyonunun m2*de 3-4 adet canli oldugu gözlemlenmis, 50 ml dozda uygulanan ilaç A ve ilaç B parsellerindeki kirmizi örümceklerin mz'de 7-8 adet canli oldugu görülmüstür. Yesil aksamlarin incelenmesi sonunca 100 bitkide 2 adet canli yesil kurt yumurta ve Iarvasina rastlan iIm istir. Ilaç A -l- Ilaç B + Fi totoksi Ilaç A + Abamectin Ilaç B + Abamectin . Abamectin -l- Lambda- - Abamectin + Lambda- t Doz [laç A + . Ilaç B -l- . Kontrol - . + Erken cyhalothri . + Erken cyhalothri 200 ml yaprak 11 + Erken yaprak 11 + Erken yanikligi yanikligi Ilaç A -l- Ilaç B + Fitotoksi Ilaç A + - Abamectin Ilaç B + - Abamectin t Doz Ilaç B Lambda- Ilaç Af -l- Lambda- Lambda- Ilaç B +. + Lambda- - . Abamectin . . Abamectin . Ilaç A 100 ml cyhalothri .. cyhalothri cyhalothri .. cyhalothri 200 ml n n + n 11 + Ilaç A Ilaç B 75 Erken cyhalothri + Erken Erken cyhalothri + Erken 100 mi 1111 Yaprak 11 + Erken yaprak Yaprak n + Erken yaprak Yanikligi yaprak yanikligi + Yamkligi yaprak yanikligi + yanikligi Külleme yanikligi Külleme Ilaç A + Ilaç B + Ilaç A -l- Lambda- Ilaç B + Lambda- Ilaç A 75 Ilaç B 50 Ilaç A + Lambda-i cyhalothri Ilaç B + Lambdaî cyhalothri .. cyhalothri 11 + Erken .. cyhalothri n + Erken ml 1111 Kulleme Kulleine 11 + yaprak 11 + yaprak Külleme yanikligi + Külleme yanikligi + Küllcme Külleme Ilaç A -l- Ilaç B + Ila A 50 Abamectin Erken cyhalothri Abamectin Erken cyhalothri çml Kontrol + Lambda- yaprak n + + Lainbda- yaprak n + cyhalothri yanikligi Külleme + cyhalothri yanikligi Külleine + 11 +Külleme Erken 11 +Külleine Erken yanikligi yanikligi Içerikte bulunan A: Ozonlu yag+ozonlu polisorbat 80 ve Asetik asit B: Ozonlu yag+ozonlu polisorbat 80+Asetik asit+Kekik yagi içermektedir. Çanakkale Biga ilçesine bagli Çesmealti köyünde çiftçi Halil Bagcioglu'nun arazisinde yaptigimiz deneme parsellerinde genel gözlemler sonucunda ilaç A ve ilaç Binin kirmizi sergilemis oldu. Ilaç A ve Ilaç Bye Abamectin ilave edilmis olarak gözlemlenen deneme parsellerinde beklenen performansin daha da iyi oldugu gözlenmistir. Yapilan deneme parsellerinde ilaç A ve ilaç B'nin erken yaprak yanikligina ve küllemeye karsi hiçbir etkisinin olmadigi karsilastirdigimiz diger ilaçlara göre gözlemledigimiz tarihiler arasinda kesinlesmis oldu. Deneme parselinde kullanilan ilaç A ve ilaç B'nin yesil kurda karsi 50 B'ye Lambda-cyhalothrin ilave edilmis olarak gözlemlenen deneme parsellerinde yesil kurda karsi performansin daha iyi oldugu gözlenmistir. Yapilan tablodaki ilaç karisimlarinda ise herhangi bir problem yasanmamis olmasi da gözlemlerden kaçmamistir. Lipozomal Ozon Nanosolüsvonlarin erciin bal arilarinda Nosema apis ve Nosema cerenae enfeksiyonlarina karsi etkinliklerinin arastirilmasi: Nosema apis ve Nosema cerenae ergin bal arilarinda (Apis mellifera) Nosemosisre neden olur ve bu etkenler ergin arilarin sindirim sistemine yerlesir. Nosemosis en yaygin ari hastaliklarindan birisidir ve dünya Çapinda önemli ari kayiplarina neden olur. Bu hastalik sindirim sistemi bozukluklarina, arilarin ortalama ömrünün, koloni sayisinin, bal üretiminin, polen toplamanin azalmasina ve kolonide önemli kis kayiplarina neden olur. Nosemosis bakteriyel, protozoon ve viral hastaliklarla birlikte seyredebilir, bu durum ari koloni sagligini, ari ürünlerini ve üretimini olumsuz yönde etkiler. Nosemosis tedavisinde günümüze kadar çesitli etken maddeler kullanilmis bunlardan en yaygin kullanilani Fumagillin (Ticari isim: Fumidil-B)idir. Fakat bu etken madde balda kalinti sorunu teskil ettigi için günümüzde yasaklanmistir. Bu sebepten dolayi son yillarda organik asit, dogal bitki ekstrat ve benzeri maddelerle tedavi denemeleri yapilmaktadir. Bu çalismada da Origanum minutiflorum (Timol) ve Artemisia absinthium (Pelin otu) ekstrati gibi esansiyel yaglar ile Lipozomal Ozon Nanosolüsyonlarin Nosemosis=e karsi etkinlikleri arastirilmistir. Bu çalismada olusturulan kombinasyonlar uygulanmadan önce 0. gün sayimlari yapilmis, saha denemelerinde kontrol gruplarina arilarin beslenmesinde kullanilan seker serbeti verilmistir. Denemelerde kombinasyonlar seker surubuna (arilarin beslenmesinde kullanilir) karistirilarak kovan içindeki serbetlige ya da sprey yoluyla çerçevelere uygulanmistir. Denemelere baslanmadan önce ariliklardan her kovandan 50=ser adet ari örnegi alinmis ve protokol numarasi verilmistir. Ornekler bir gün derin dondurucuda bekletildikten sonra Nosema sporlari yönünden pozitifliknegatiflik kontrolü için digestion yöntemi uygulanmistir. Bu yöntemde her kovandan 10 adet ari örnegi alinmis ve arilarin abdomenleri vücutlarindan bistüri yardimiyla ayrilmistir. Abdomen basina 1 ml, toplamda 10 ml distile su ilave edilmistir. Abdomenler uygun bir beherde ezilmis, elde edilen abdomen sivilarindan bir damla Neubauer Torna lamina aktarilarak 40x10"luk büyütmede Nosema sporlari arastirilmistir. Pozitif bulunan kovanlarda yukarida belirtilen digestion yöntemiyle Nosema mantari spor yükünü tespit etmek için 20!ser adet ari örnegi alinip mikroskopta Nosema etkenleri sayilmistir. Herbir kombinasyon için belirli sayida kovanla deneme gruplari olusturulurken deneme gruplari arasi Nosema spor sayi ortalamalarinin esite yakin olmasina dikkat edilmistir. Kombinasyonlar kovanlara sprey ya da kovan içindeki serbetlige konularak oral yolla uygulanmistir. Belirli gün araliklarinda her kovandan 20 adet ari numunesi toplanip digestion yöntemiyle Nosema spor sayimlari yapilmistir. Ozon (Lipozomal Ozon NanosoI'L'isyon), Timol ve Artemisia absinthium ekstratlari ve bunlarin kombinasyonlarindan farkli derisim ve dozajlarda 5 adet saha denemesi yapilmistir. Bu bes saha demesinde en etkin bulunan 'üç kombinasyon etkinlik oranlarina göre; Ozon+Tim0I verilmistir. Bu sonuç daha önceden Timolle yapilan çalismalari desteklemis olup kombinasyon nano partikül ozonla zenginlestirilince sonuçlar Nosema=ya karsi daha etkin bulunmustur. Uygulamadan kaynaklanan herhangi bir ölüm veya yari etkiye rastlanmamistir. TR TR

Claims (1)

1.ISTEM LER Ozonlanmis emülgatör içeren Iipozomal ozon nanosolüsyonudur. Istem 1ie uygun nanosol'usyon olup, Özelligi; Iesitin, Iisofosfolipid, polietilen glikol, fosfatidiletanolaminin, pluronik, polisorbatlar veya farmasötik olarak uygun bir emülgatör arasindan seçilen birey veya kombinasyonlardir. Istem 1=e uygun nanosolüsyon olup, özelligi; ayrica distile su, tuzlu su, sekerli su, mineralli su, deiyonize su, deminarilize su, kaynak suyu, saline solüsyonu, serum fizyolojik, bitki sulari arasindan seçilen birey veya kombinasyonlari içeren su içermesidir. Istem 1›e uygun nanosolüsyon olup, özelligi; ayrica soya yagi, kantaron yagi, susam yagi, palmiye yagi, hashas yagi, soya Iesitin, kolesterol, b-sterol, trigliserid, zeytin yagi, balik yagi, ayçiçek yagi, hint yagi, safran yagi, hindistan cevizi yagi, trigliserid türevleri, tributirin, tricaproin, tricaprylin ile parafin, etil oleat, metil oleat arasindan seçilen birey veya kombinasyonlari içeren tasiyici yag içermesidir. istem 'l'e uygun nanosolüsyon olup, özelligi; ayrica sabit velveya uçucu bitkisel yaglar arasindan seçilen birey veya kombinasyonlari içeren fonksiyonel yag içermesidir. istem 1'e uygun nanosol'üsyon olup, özelligi; ayrica formik asit , asetik asit, propiyonik asit , butirik asit , valerik asit ,kaproik asit, oksalik asit , Iaktik asit ,malik asit ,sitrik asit , benzoik asit ,karbonik asit ,fenol ,'ürik asit, taurin , aminometilfosfonik asit arasindan seçilen birey veya kombinasyonlari içeren organik aist içermesidir. Istem 1'e uygun nanosolüsyon olup, özelligi; ayrica suda velveya yagda çözünen vitaminler, mineraller, hyarulonik asit, timol, mentol, gliserin, etil alkol, setil alkol, butil alkol, benzil alkol, amino asitler, asetil sistein, glutatyon, bitkisel ekstraktlar, Iidokain, ksilokain gibi anestezikler, farmasötik etken maddeler arasindan seçilen birey ve kombinasyonlari içeren yardimci madde içermesidir. Istem 1'e uygun nanosol'usyon olup, özelligi; 100 stok ppm- 60 000 stok ppm ozon gazi içermektedir. istem 8*e uygun nanosolüsyon olup, özelligi; uygulama alanina göre 100 ppm, 200 ozon gazi içermesidir. Istem 1ie uygun nanosol'usyon olup, özelligi; 1000 nm alti, tercihen 200 nm alti, daha tercihen 50 nm alti boyutlarda ozon nanopartik'ulleri içermesidir. Yukaridaki istemlerden herhangi birinde bahsedilen Iipozomal ozon nanosolüsyonu - Uygulama amacina yönelik uygun emülgatör velveya tasiyici yagin seçilmesi, - em'ulgatör velveya tasiyici yagin tartilmasi, - em'ulgatör velveya tasiyici yagin içinden ozon gazi veya ozonlanmis su geçirilerek ozonlanmasi, -ozonlanmis emülgatör velveya tasiyici yagin tekrar tartilarak içindeki ozon miktarinin belirenmesi, - ozonlanmis emülgatör velveya tasiyici yagin tercihen su ile nanoboyuta indirgenmesi, - tercihen en az bir yardimci madde, en az bir fonksiyonel yag, en az bir organik asit arasindan seçilen bilesenlerin nanosol'üsyona eklenerek karistirilmasi. 12. Yukaridaki istemlerden herhangi birinde bahsedilen lipozomal ozon nanosol'usyonun beseri, veteriner, gida, tarim ve kimya alaninda 'ürün formülasyonlarinda kullanimidir. Istem 13!e uygun kullanim olup, özelligi; bahsedilen Iipozomal ozon nanosolüsyonun beseri, veteriner uygulamalara yönelik, ciltte bariyer olusturma veya eklem içilcilt alti/kas içi enjeksiyon amaçli, antiviral, antifungal ve antibakteriyel etkili formülasyonlarda kullanimidir. 14. istem 135e uygun kullanim olup, özelligi; kuru gidalarda Carpoglyphus Lactis (L.) zararlisi karsiti formülasyonlarda kullanimidir. 15. Istem 131e uygun kullanim olup, özelligi; tarimda kök-ur nematodu karsiti form'ulasyonlarda kullanimidir. 16. istem 13'e uygun kullanim olup, özelligi; tarimda Ikinoktali Kirmizi örümcek karsiti formülasyonlarda kullanimidir. 17. istem 139 uygun kullanim olup, özelligi; aricilikta Nosema enfeksiyonlarina karsi formülasyonlarda kullanimidir. TR TR
TR2021/004032A 2021-03-01 2021-03-01 Li̇pozomal ozon nanosolüsyonlari TR2021004032A2 (tr)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
TR2021/004032A TR2021004032A2 (tr) 2021-03-01 2021-03-01 Li̇pozomal ozon nanosolüsyonlari
US18/004,973 US20230240989A1 (en) 2021-03-01 2022-03-01 Liposomal ozone nanosolutions
CN202280005798.1A CN116033824A (zh) 2021-03-01 2022-03-01 脂质体臭氧纳米溶液

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
TR2021/004032A TR2021004032A2 (tr) 2021-03-01 2021-03-01 Li̇pozomal ozon nanosolüsyonlari

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TR2021004032A2 true TR2021004032A2 (tr) 2022-09-21

Family

ID=84603388

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TR2021/004032A TR2021004032A2 (tr) 2021-03-01 2021-03-01 Li̇pozomal ozon nanosolüsyonlari

Country Status (3)

Country Link
US (1) US20230240989A1 (tr)
CN (1) CN116033824A (tr)
TR (1) TR2021004032A2 (tr)

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008001553A1 (fr) * 2006-06-28 2008-01-03 Erc Technology Inc. Tensioactif ozonisé
KR20160042209A (ko) * 2014-10-07 2016-04-19 세연에스앤알 주식회사 오존화 오일 조성물의 제조방법 및 이에 의하여 제조된 오존화 오일 조성물
IT201600078872A1 (it) * 2016-07-27 2018-01-27 Fb Vision S R L Olio e dispositivo per l'igiene dell'area oculare e perioculare
CN106489990A (zh) * 2016-11-01 2017-03-15 侯建生 臭氧化表面活性剂在鸡养殖中的应用
CN108653320A (zh) * 2017-04-02 2018-10-16 西北农林科技大学 臭氧化油促进创伤、炎症愈合的医药用途
CN108685721A (zh) * 2017-04-04 2018-10-23 西北农林科技大学 一种臭氧化表面活性剂花露水
TR201804452A2 (tr) * 2018-03-29 2018-06-21 Ahmet Uemit Sabanci Ozonlanmiş yağ i̇çeren solüsyonlar

Also Published As

Publication number Publication date
US20230240989A1 (en) 2023-08-03
CN116033824A (zh) 2023-04-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2011139794A2 (en) A composition for skin sanitization and protection and method of its use
EP4203920A1 (en) Liposomal ozone nanosolutions
EP2404502A2 (en) Compositions containing pyrrolidone carboxylic acid (PCA) and metallic salts
WO2016084078A1 (en) Antimicrobial preservative compositions
CN105031609A (zh) 含抗菌肽Cbf-14的消毒剂及其制备和用途
EP2081428B1 (en) Antipediculosis composition having a lice-suffocating activity
JP4820662B2 (ja) 天然植物抽出物を利用した魚類寄生虫駆虫用組成物｛Ａｎｔｈｅｌｍｉｎｔｉｃｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｆｏｒｆｉｓｈｐａｒａｓｉｔｅｕｓｉｎｇｎａｔｕｒａｌｐｌａｎｔｅｘｔｒａｃｔｓ｝
KR101500514B1 (ko) 피부자극이 없는 방부제 조성물을 함유하는 물티슈
KR20140042008A (ko) 시트로넬라 오일을 함유하는 모기 기피제 조성물
CN104490679B (zh) 一种复合型抗菌洗手液及其制备方法
CN105853295B (zh) 一种用于儿童皮肤粘膜炎症护理的外用制剂及其应用
WO2005025587A1 (en) Composition comprising ginkgolides and bilobalide
CN100431617C (zh) 含有柑橘精华的杀菌消毒液
CN104435607A (zh) 一种中草药皮肤黏膜消毒液
US20230301884A1 (en) Antiseptic compositions
TR2021004032A2 (tr) Li̇pozomal ozon nanosolüsyonlari
CN104815096A (zh) 一种纳米复合皮肤消毒乳液及其制备方法
CN1194662C (zh) 含有印楝活性成分的润肤霜及制备方法
US11484483B2 (en) Topical lotion having sanitizing properties
CN105770999A (zh) 一种消除细菌生物被膜的复合生物材料
CN103110541A (zh) 纯天然免洗消毒净手液
KR101808851B1 (ko) 프로폴리스를 이용한 주방 세제 조성물
EP3638219B1 (en) Composition comprising terpinene-4-ol for the treatment of demodicosis
CN112807259A (zh) 一种安全无毒的驱蚊组合物及其制备方法、应用
KR102086160B1 (ko) 천연 방부제 조성물 및 이 천연 방부제 조성물이 함침된 물티슈