TR201814973T4 - Gluten ile ilgili bozukluklar. - Google Patents

Gluten ile ilgili bozukluklar. Download PDF

Info

Publication number
TR201814973T4
TR201814973T4 TR2018/14973T TR201814973T TR201814973T4 TR 201814973 T4 TR201814973 T4 TR 201814973T4 TR 2018/14973 T TR2018/14973 T TR 2018/14973T TR 201814973 T TR201814973 T TR 201814973T TR 201814973 T4 TR201814973 T4 TR 201814973T4
Authority
TR
Turkey
Prior art keywords
cba
paracasei
composition
gluten
cells
Prior art date
Application number
TR2018/14973T
Other languages
English (en)
Inventor
Francesca Fasano Romana
Andrea Budelli Luigi
Original Assignee
Heinz Co Brands H J Llc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Heinz Co Brands H J Llc filed Critical Heinz Co Brands H J Llc
Publication of TR201814973T4 publication Critical patent/TR201814973T4/tr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/164—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/30—Dietetic or nutritional methods, e.g. for losing weight
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/045—Hydroxy compounds, e.g. alcohols; Salts thereof, e.g. alcoholates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A61K31/197—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group the amino and the carboxyl groups being attached to the same acyclic carbon chain, e.g. gamma-aminobutyric acid [GABA], beta-alanine, epsilon-aminocaproic acid or pantothenic acid
    • A61K31/198—Alpha-amino acids, e.g. alanine or edetic acid [EDTA]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/401—Proline; Derivatives thereof, e.g. captopril
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4164—1,3-Diazoles
    • A61K31/4172—Imidazole-alkanecarboxylic acids, e.g. histidine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7076—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines containing purines, e.g. adenosine, adenylic acid
    • A61K31/708—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines containing purines, e.g. adenosine, adenylic acid having oxo groups directly attached to the purine ring system, e.g. guanosine, guanylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A61P29/02—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID] without antiinflammatory effect
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/335—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Lactobacillus (G)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Mevcut buluş, gluten ile ilişkili bozuklukların tedavi edilmesine yönelik bileşimler ve yöntemler içerir. Gliadin peptitlerinin hücresel girişini azaltan, Lactobacillus paracasei CBA L74, Uluslararası Depozitör Erişim Numarası LMG P-24778 tarafından üretilen bir veya daha fazla metabolit içeren bileşimler açıklanır. Bileşimler, fizyolojik olarak kabul edilebilir bir taşıyıcı, örneğin, bir gıda ürünü veya bir farmasötik taşıyıcı içerebilir. Bileşimler, gluten ile ilişkili bir bozukluğa, örneğin, çölyak hastalığı veya gluten duyarlılığına sahip bir deneğe verilebilir.

Description

TARIFNAME GLUTEN iLE ILGILI BOZUKLUKLAR I_lgili Uvulamalara Çapraz-referans Bu basvuru, U.S. Geçici Basvuru No. 61/661,105 ve U.S. Geçici Basvuru No. 61/725,693'ün avantajini talep edebilecek olan herhangi bir U.S. basvurusuna yönelik, avantajini talep eder.
Bulusun Sahasi Mevcut bulus, probiyotik organizmalar ve bilesimlere yöneliktir. Bu bilesimler, gluten ile ilgili hastaliklarin, örnegin, çölyak hastaliginin tedavisine yönelik kullanislidir.
Bulusun Altyapisi Gluten ve gluten ile iliskili polipeptitler, bugday, çavdar ve arpa dahil birçok tahil tanecigi içinde bulunur. Çölyak hastaligi ve gluten duyarliligi gibi gluten ile ilgili bozukluga sahip bireylerin, gluten içeren gidalarin tüketmesi, siddetli ve uzun süreli saglik sorunlarina neden olabilir. Çölyak hastaligi, genetik olarak yatkin kisilerde gluten tüketimi tarafindan tetiklenen bir ince bagirsak otoimmün bozukluktur. Glutenin belirli fragmentleri ("gliadinler"), ince bagirsaga kalici hasar veren ve besin absorpsiyonunu önleyen bir otoimmün tepki stimüle eder. Çölyak hastaligi genis bir semptom spektrumuna sahip olabilir. En yaygin olanlarina, kronik ishal, karin sisligi, kilo kaybi ve büyüme aksakligi (çocuklarda) dahildir. Çölyak hastaligi ayrica demir eksikligi anemisi, osteoporoz, kisa boyluluk, artrit, kisirlik, periferal nöropati ve karaciger yetmezligi ile iliskilendirilebilir. Çölyak hastaligi hastalari ayrica, ince bagirsak karsinomu ve Hodgkin olmayan lenfoma gibi belirli kanser çesitlerine yönelik yüksek riske sahiptir. Avrupa asilli popülasyonlardaki çölyak hastaligi oraninin %0.5 ve 1.5 arasinda oldugu tahmin edilir. Bu oran, Birlesik Devletler ve Avrupa'nin her ikisinde, ayrica kismen, batililasmis beslenme biçimlerinin benimsenmesi nedeniyle Asya'da da artmaktadir. Çölyak hastaligi, yetiskinlikte yapilan teshis sayinin da artista olmasina ragmen, tipik olarak bebeklik veya çocuklukta teshis edilir. Günümüzde çölyak hastaligina yönelik tedavi yoktur ve standart tedavi, ömür boyu glutensiz diyete bagli kalinmasidir.
Gluten duyarliligi, çölyak hastaligina göre daha az karakterize edilmistir. Çogunlukla ayni semptomlara sahiptir ancak bunlara ince bagirsak hasari dahil degildir. Teshis, dislama kriterleri ve hastanin glutensiz diyete alinmasi sonrasinda semptomlarda iyilesmeye göre yapilma egilimindedir.
Glutensiz bir diyete bagli kalinmasi, bugday, çavdar ve arpa ürünlerinden kaçinilmasina yönelik siki sekilde baglilik gerektirir. Bu, gidalarin gluten içerikleri ile ilgili çogunlukla yetersiz etiket bilgisine sahip olmasi; özellikle, ev disarisinda hazirlanan gidalar için olmak üzere, gida isleme ve hazirlanmasi sirasinda kontaminasyon ihtimali; glutensiz ürünlerin mali yükü ve siki bagliliga yönelik gerekli olan irade nedeniyle zorlu olabilir. Uyumluluk, egitim ve danismanliga ulasim, aile ve sosyal destek ve psikolojik faktörlerden de etkilenebilir. Ayrica, glutensiz bir diyete siki sekilde bagli kalinmasi, mikro besin eksikligi ile sonuçlanabilir. Bu tür eksiklikler, belirli olarak 8 vitamin (vitamin 86, vitamin 812 ve folik asit) ve belirli eser elementler, örnegin, demir, çinko ve bakir, özellikle çocuklarda potansiyel olarak önemli saglik sorunlari ile sonuçlanabilir. Gluten ile iliskili bozukluklarin tedavisine yönelik sürekli bir terapötik ajan ihtiyaci söz konusudur.
Bulusun Kisa Açiklamasi Mevcut bulus, gluten ile iliskili bir bozukluga sahip bir denekte gliadin peptiti toksisitesinin azaltilmasinda kullanilmak üzere Lactobaci'I/us paracasei' CBA L74, Uluslararasi Depozitör Erisim Numarasi LMG P-24778 içeren bilesimler saglar.
Lactobaci/Ius paracasei CBA L74, Uluslararasi Depozitör Erisim Numarasi LMG P- 24778, standart fizyolojik sicakliklarin üzerindeki sicakliklarda büyük ölçüde stabil olan metabolitler üretir, gliadin peptitlerinin hücreler girisini azaltir. Gliadin peptiti degiskenlik gösterebilir ve T-hücreleri tarafindan taninan bir veya daha fazla epitopu kapsayan peptitleri, örnegin, P57-68'i ve kalitsal immün sistem tarafindan taninan peptileri, örnegin, P31-43'ü içerir. Örnek peptitler, a-gliadin peptitlerini, örnegin, LGOOOPFPPOOPY (SEO ID NO: 1); OLOPFPOPOLPY (SEO ID NO: 2); LGOOOPFPPOOPYPOPOPF (SEO ID NO: 3) ve LOLOPFPOPOLPYPOPOLPYPOPOLPYPOPOPF'den (SEO ID NO: 4) olusan grup içerisinden seçilen bir amino asite sahip peptitleri içerir. Bilesimler ayrica, fizyolojik olarak kabul edilebilir bir tasiyici, örnegin, bir gida ürünü veya bir farmasötik tasiyici içerebilir.
Bilesimler, çesitli alt türler örnegin, klasik çölyak hastaligi, atipik çölyak hastaligi, gizli çölyak hastaligi ve sessiz çölyak hastaligi gibi çesitli alt tipleri dahil çölyak hastaligi, dermatitis herpetiformis, gluten ataksisi ve gluten duyarliligi dahil herhangi bir gluten ile iliskili bozukluguna yönelik kullanislidir. Bilesimler, örnegin beslenme terapileri gibi, gluten ile iliskili bozukluklara yönelik standart terapiler ile birlikte verilebilir.
Sekillerin Kisa Açiklamasi Mevcut bulusun bu ve diger özellikleri ve avantajlari, bulusun tercih edilen düzenlemesinin asagidaki detayli açiklamasi ile tamamiyla anlasilacaktir veya bu açiklama tarafindan açik hale getirilecektir, bu açiklama, benzer numaralarin benzer parçalari refere ettigi ekli sekiller ile birlikte dikkate alinir, burada: Sekil 1, CaCo2 hücreleri içine P31-43'iss girisi üzerinde, Lactobaci'llus paracasei, sus CBA L74'ün etkisinin bir analizidir.
Sekil 2, CaCoZ hücreleri içine P31-43'iss girisi üzerinde, Lactobaci'llus paracasei, sus CBA L74”ün farkli konsantrasyonlarinin etkisinin bir analizinin sonuçlarini gösteren bir grafiktir.
Sekil 3, CaCoZ hücreleri içine 57-68'iss girisi üzerinde, LactobaciI/us paracasei, sus CBA L74'ün farkli konsantrasyonlarinin etkisinin bir analizinin sonuçlarini gösteren bir grafiktir.
Sekil 4, CaC02 hücreleri içine P31-43'iss girisi üzerinde, Lactobacil/us paracasei', sus CBA L74 DNA'nin etkisinin bir analizidir.
Sekil 5a, CaC02 hücreleri içine P31-43'iss girisi üzerinde, Lactobacillus paracasei, sus CBA L74 Süpernatantinin etkisinin bir analizinin sonuçlarini gösteren bir grafiktir. Sekil 5b, CaCo2 hücreleri içine P31-43'ISS girisi üzerinde, LactobaciI/us paracasei, sus CBA L74 süpernatantinin etkisinin bir analizidir.
Sekil öa, CaCoZ hücreleri içine P57-68'ISS girisi üzerinde, Lactobacillus paracasei, sus CBA L74 süpernatantinin etkisinin bir analizinin sonuçlarini gösteren bir grafiktir. Sekil 6b, CaCo2 hücreleri içine P57-68'iss girisi üzerinde, Lactobacil/us paracasei, sus CBA L74 süpernatantinin etkisinin bir analizidir.
Sekil 7a, CaCoZ hücreleri içine P31-43'i5's girisi üzerinde, Lactobacillus paracasei', sus CBA L74 süpernatantinin isil islem etkisinin bir analizinin sonuçlarini gösteren bir grafiktir. Sekil 7b, CaCoZ hücreleri içine P31-43'iSS girisi üzerinde, Lactobacillus paracasei, sus CBA L74 süpernatantinin isil islem etkisinin bir analizidir.
Sekil 8, CaC02 hücreleri içine P31-43'iss girisi üzerinde, fermente pirinçten elde edilen Lactobacillus paracasei, sus CBA L74 süpernatantinin etkisinin bir analizidir.
Sekil 9, CaCoZ hücreleri içine P31-43'iss girisi üzerinde, fermente pirinç ve fermente yulaftan elde edilen Lactobaci/Ius paracasei, sus CBA L74 süpernatantinin etkisinin bir analizinin sonuçlarini gösteren bir grafiktir.
Sekil 10, 03002 hücreleri içine Dextran-Texas Kirmizisi girisi üzerinde, fermente pirinç ve fermente yulaftan elde edilen Lactobacillus paracasei', sus CBA L74 süpernatantinin etkisinin bir analizinin sonuçlarini gösteren bir grafiktir.
Sekil 11, CaCo2 hücreleri içine Alexa FIuor®-k0njüge EGF girisi üzerinde, Lactobaci/Ius paracasei, sus CBA L74 süpernatantinin etkisinin bir analizinin sonuçlarini gösteren bir grafiktir.
Sekil 12, CaC02 hücreleri içine Alexa FIuor®-k0njüge EGF girisi üzerinde, Lactobacillus paracasei, sus CBA L74 süpernatantinin etkisinin bir analizidir.
Lactobacillus paracasei, sus CBA L74'ün etkisinin bir analizidir. Sekil 13a, islem görmemis kontrol hücrelerini gösterir. Sekil 13b, 104 cfu/ml L. paracasei CBA L74 ile isleme tabi tutulmus Caco2 hücrelerini gösterir. Sekil 130, 106 cfu/ml L. paracasei CBA L74 ile isleme tabi tutulmus Cac02 hücrelerini gösterir. Sekil 13d, 108 cfu/ml L. paracasei' CBA L74 ile isleme tutulmus CacoZ hücrelerini gösterir.
Sekil 14, CaCo2 hücreleri içine P31-43'iss girisi üzerinde, LactobaciI/us paracasei', sus CBA L74'ün farkli konsantrasyonlarinin etkisinin bir analizinin sonuçlarini gösteren bir grafiktir.
Lactobaci/Ius paracasei, sus CBA L74`ün etkisinin bir analizidir. Sekil 15a, isleme tabi tutulmamis kontrol hücrelerini gösterir. Sekil 15b, 104 cfu/ml L. paracasei CBA L74 ile isleme tabi tutulmus Ca002 hücrelerini gösterir. Sekil gösterir. Sekil 15d, 108 cfu/ml L. paracasei CBA L74 ile isleme tutulmus CacoZ hücrelerini gösterir.
Sekil 16, CaCo2 hücreleri içine P57-68'iss girisi üzerinde, Lactobaci/Ius paracasei, sus CBA L74'ün farkli konsantrasyonlarinin etkisinin bir analizinin sonuçlarini gösteren bir grafiktir.
LactobaciI/us paracasei, sus CBA L74iün etkisinin bir analizinin sonuçlarini gösteren bir grafiktir.
Lactobaci/Ius paracasei, sus CBA L74 süpematantinin etkisinin bir analizidir.
Sekil 183, isleme tabi tutulmamis kontrol hücrelerini gösterir. Sekil 18b, 108 cfu/ml L. paracasei' CBA L74 ile isleme tabi tutulmus CacoZ hücrelerini gösterir.
Sekil 180, 108 cfu/ml L. paracasei CBA L74'ten toplanan süpernatant ile isleme tabi tutulan CacoZ hücrelerini gösterir.
Sekil 19, CaCoZ hücreleri içine PLM-43'ISS girisi üzerinde, L. paracasei', sus CBA L74 hücreleri ve L. paracasei, sus CBA L74 süpernatantinin etkisinin bir analizinin sonuçlarini gösteren bir grafiktir.
L.paracasei, sus CBA L74 süpernatantinin etkisinin bir analizidir. Sekil 20a, isleme tabi tutulmamis kontrol hücrelerini gösterir. Sekil 20b, 108 cfu/ml L. paracasei' CBA L74 ile isleme tabi tutulmus Caco2 hücrelerini gösterir. Sekil 200, 108 cfu/ml L. paracasei CBA L74'den toplanan süpernatant ile isleme tabi tutulmus Cac02 hücrelerini gösterir.
L74 hücreleri ve L. paracasei, sus CBA L74`ün etkisinin bir analizinin sonuçlarini gösteren bir grafiktir.
Sekiller 22a ve 22b, Caco2 hücreleri içine EGF-Alexa 488 girisi üzerinde, L.paracasei, sus CBA L74 süpernatantinin etkisinin bir analizidir. Sekil 20a, isleme tabi tutulmamis kontrol hücrelerini gösterir. Sekil 20b, 108 cfu/ml L. paracasei CBA L747ün esdegerinden toplanan süpernatant ile isleme tabi tutulmus CacoZ hücrelerini gösterir.
Sekil 23, CacoZ hücreleri içine EGF-Alexa 488 girisi üzerinde, L. paracasei', sus CBA L74 süpernatantinin etkisinin bir analizinin sonuçlarini gsteren bir grafiktir.
L.paracasei`, sus CBA L74 süpernatantinin uzaklastirilmasinin etkisinin bir analizidir. Sekil 20a, isleme tabi tutulmamis kontrol hücrelerini gösterir. Sekil 20b, L. paracasei CBA L74 süpernatanti ile isleme tabi tutulmus Cac02 hücrelerini gösterir. Sekil 20c, uzaklastirilmis olan L. paracasei CBA L74 süpernatanti ile isleme tabi tutulmus CacoZ hücrelerini gösterir.
Sekil 25, CaCo2 hücreleri içine P31-43'iss girisi üzerinde, L. paracasei', sus CBA L74 süpernatantinin isleme tabi tutulmasi ve akabinde uzaklastirilmasinin etkisinin bir analizinin sonuçlarini gösteren bir grafiktir.
L.paracasei, sus CBA L74 süpernatantinin isil islem etkisinin bir analizidir. Sekil 26a, isleme tabi tutulmamis kontrol hücrelerini gösterir. Sekil 26b, L. paracasei CBA L74 süpernatanti ile isleme tabi tutulmus Cac02 hücrelerini gösterir. Sekil 26c, kaynatilmis olan L. paracasei CBA L74 süpernatanti ile isleme tabi tutulmus Ca002 hücrelerini gösterir. Sekil 26d, 80°C`de isitilmis olan L. paracasei CBA L74 süpernatanti ile isleme tabi tutulmus Ca002 hücrelerini gösterir.
Sekil 27, CaCoZ hücreleri içine P31-43'i5s girisi üzerinde, L. paracasei, sus CBA L74 süpernatantinin isil islem etkisinin bir analizinin sonuçlarini gösteren bir grafiktir.
Tercih Edilen Düzenlemelerin Detayli Açiklamasi Bu açiklama, bu bulusun yazili açiklamasinin tümünün bir parçasi olarak kabul edilen, ekli sekiller ile iliskili olarak okunmaya yöneliktir. Çizilen sekiller, tam olarak ölçekli degildir ve bulusun belirli özellikleri ölçek açisindan abartili sekilde veya açiklik ve özlülük amaciyla sematik formda gösterilmis olabilir. Açiklamada, "yatay," "dikey," "üst," yönde," "yukari yönde," vb.) gibi nispi terimler, söz konusu seklin çiziminde açiklanacagi veya gösterilecegi üzere, yönelimi refere edecek sekilde yorumlanmalidir.
Bu nispi terimler, açiklamanin anlasilmasina yöneliktir ve normalde, belirli bir yönelim gerektirmeye yönelik degildir. "Içeri dogru" karsisinda "disari dogru," "boylamsal" karsisinda "yanal" ve benzeri, birbirine göre veya uygun oldugu sekilde, bir uzama eksenine veya bir rotasyon ekseni veya merkezine göre yorumlanmak üzeredir. "Bagli" ve "birbirine bagli" gibi, tutturma, esleme ve benzeri ile ilgili terimler, yapilarin, müdahil yapilar ve bunun yani sira hareket edebilir veya rijit baglantilar veya iliskiler içerisinden direkt olarak veya dolayli olarak birbirine sabitlenmis veya tutturulmus oldugu bir iliskiyi refere eder. "Operatif olarak bagli" terimi, ilgili terimlerin, bu iliski sayesinde amalandigi sekilde çalismasina olanak veren bir eklenti, kuplaj veya baglanti gibidir. Yalnizca tek bir makinanin gösterilmesi durumunda, "makina" terimi, burada bahsedilen metodolojilerden herhangi biri veya daha fazlasini uygulamak üzere bir talimat dizisini (veya birden fazla seti) ayri olarak veya birlikte uygulayan herhangi bir makina derlemesini içerecek sekilde kullanilmalidir. Istemlerde, kullanilmasi durumunda, araç- arti-fonksiyon cümleleri, bahsedilen fonksiyonun gerçeklestirilmesine yönelik, yalnizca yapisal esdegerler degil ayrica esdeger yapilar da dahil olmak üzere, açiklanan, önerilen veya yazili açiklama veya sekillerden ortaya çikan yapilari kapsamaya yöneliktir.
Mevcut bulus kismen, bulusçularin, probiyotik organizma Lactobacillus paracasei, sus CBA L74'ün kültürlerinin belirli gluten bilesenlerinin Insan intestinal hücrelerine girisini azaltabilecegini kesfetmesine dayanmaktadir. Daha spesifik olarak, bulusçular, izole L. paracasei' CBA L74 ve L. paracasei CBA L74'ten alinan kültür süpernatantlarinin, kültürlenmis insan intestinal epiteliyal hücreleri içine a-gliadin peptitlerinin girisini azaltttigini bulmustur. Ayrica, peptit girisindeki azalma ayrica, L. paracasei CBA L74 tarafindan fermente edilmis olan gidalara yönelik de gözlemlenmistir. Peptit girisi üzerindeki etki, kültür süpernatantlarinin isi ile isleme tabi tutulmasi durumunda dahi gözlemlenmistir. Dolayisiyla, bulus, gliadin peptitlerinin toksik etkilerini hafifletebilen bilesimler içerir.
Bilesimler, Lactobaci'llus paracasei, sus CBA L74 hücreleri veya Lactobacillus paracasei', sus CBA L74 hücrelerinin bir kombinasyonunu ve Lactobaci'llus paracasei, sus CBA L74 tarafindan üretilen metabolitleri içerebilir.
Lactobacillus paracasei, sus CBA L74, bulusçular tarafindan izole edilmistir ve Belçika Koordine Mikro-organizma Toplama (BCCM) Laboratorium voor Microbiologie (LMG), Ghent, Belçika'da 9 Eylül 2008 tarihinde, Patent Prosedürü Amacina yönelik Mikro- organizmalarin Depozit edilmesinin Uluslararasi Taninirligi Budapeste Anlasmasi altinda depozit edilmistir. Uluslararasi Depozitör Otoritesi tarafindan verilen Erisim Numarasi LMG P-24778'dir. Kolay okunmasi amaciyla, her firsatta "Erisim Numarasi LMG P-24778" cümlesi tekrar edilmeyecektir. L. paracasei, sus CBA L74'ün refere edildigi durumda, Erisim Numarasi LMG P-24778'e sahip olan depozit edilmis susun refere edildigi anlasilmaktadir.
L. paracasei CBA L74 içeren bilesimlerin verilisi sonrasinda meydana gelen belirli olaylarin anlasildigina inanilirken, mevcut bulusun bilesimleri, herhangi bir belirli hücresel mekanizmanin etkilenmesi ile meydana gelenler ile sinirli degildir. Geçici hipotez, L. paracasei' CBA L74, L. paracasei CBA L74 kültürlerinden alinan süpernatantlar veya fermenteler ve L. paracasei CBA L74 tarafindan üretilen metabolitleri içeren bilesimlerin, intestinal mukoza boyunca gluten ve gluten ile iliskili polipeptitlerin translokasyonuna daha yüksek bir bariyer saglayabilmesi ve dolayisiyla, gluten ile iliskili bir bozukluga, örnegin, çölyak hastaligi veya gluten duyarliligina sahip kisilerde gluten ve gluten ile iliskili peptitlerin etkilerini hafifletebilmesidir. Bulusçular, L. paracasei' CBA L74, süpernatantinin, hücrelere, örnegin, fagositoz, makropinositoz, klatrin aracili endositoz (reseptör-aracin endositoz olarak da refere edilir) ve kaveoleler gibi farkli endositotik yollar araciligiyla giren moleküllerin hücresel alimini azalttigini bulmuslardir. Örnegin, L. paracasei' CBA L74, süpernatanti,hücrelere makropinositoz araciligiyla girdigi bilinen dekstran ve hücrelere reseptör-aracili endositoz araciligiyla giren epidermal büyüme faktörünün (EGF) her ikisinin de hücresel girisini azaltmistir.
Burada açiklanan bilesimlerin yararli etkileri, örnegin, fermantasyon sirasinda üretilen metabolitler, örnegin, laktik asit, bütirik asit veya asetik asit gibi organik asitlerden derive edilebilir. Alternatif olarak veya ek olarak, bakteriyel hücre duvar fragmentleri ve proteinler, karbohidtratlar, nükleik asit fragmentleri ve lipitler gibi diger alt-hücresel bakteriyel bilesenler, gluten ve gluten ile iliskili polipeptitlere karsi hücresel tepki Dolayisiyla, bulus, hücrelerin, gluten ve gluten ile iliskili peptitlerin potansiyel olarak toksik etkilerinden korunmasina yönelik kullanilabilecek olan bilesimler içerir.
Bilesimler, L. paracasei CBA L74'ün büyümüs oldugu ortamlar veya L. paracasei CBA L74 tarafindan fermente edilmis olan gida ürünleri, örnegin, süt ürünleri veya tahil ürünleri içerebilir. Bazi düzenlemelerde, bilesimler, izole L. paracasei' CBA L74 ve bir fizyolojik tasiyici içerebilir. Tasiyici, bir gida ürünü olabilir, ancak, bulus, bu sekilde sinirlandirici degildir ve bazi düzenlemelerde, tasiyici, bir farmakolojik tasiyici olabilir.
Bilesimler L. paracasei CBA L74 Bulusun bilesimi, probiyotik organizma L. paracasei CBA L74'ü içerir. Dünya Saglik Örgütü, probiyotikleri, "Uygun bir miktarda verilmesi durumunda konaga bir saglik avantaji kazandiran canli mikroorganizmalar" olarak tanimlamistir. Bazi düzenlemelerde, L. paracaseiCBA L74, ömegin, isiya maruz birakilma, v-irradyasyonu veya uv-irradyasyonu gibi, bunlari yenilenmeyen hale getiren islemlere tabi tutulabilir.
Yenilenmeyen bir L. paracasei CBA L74, bir ölü hücre veya hücre bölünmesi yapamaz hale getirilmis bir canli hücre olabilir. Yenilenmeyen bir L. paracasei' CBA L74, bir intakt hücre veya kismi veya tam yikima maruz kalmis bir hücre olabilir. Bazi düzenlemelerde, yenilenmeyen hücreler, bir intak ve yikilmis hücreler karisimi içerebilir.
Bazi düzenlemelerde, bilesimler, L. paracasei CBA L74 fermentatlari içerebilir.
Bilesimler, bir veya daha fazla L. paracasei' CBA L74 metaboliti, yani, L. paracasei CBA L74 tarafindan üretilen herhangi bir maddeyi içerir. Metabolit, bir veya daha fazla gen tarafindan kodlanmis olabilir veya bir veya daha gen ürününün enzimatik aktivitesi ile olusturulabilir. Metabolitlere, örnegin, küçük moleküller, örnegin, amino asitler, nükleositler, nükleotitler, bunun yani sira, polipeptitler, karbohidratlar, nükleik asitler, proteoglikanlar ve Iipitler gibi daha genis polimerik yapilar dahildir. Metabolit, bir primer metabolit, örnegin, direkt olarak normal hücre fonksiyonunda yer alan bir metabolit veya bir sekonder metabolit, örnegin, temel hücresel fonksiyonlar için tipik olarak gerekli olmayan bir metabolit olabilir. Bir metabolit, bir primer veya sekonder metabolitin sentezi sirasinda olusturulan herhangi bir metabolik ara maddeyi içerebilir.
Ara maddeler, Embden-Meyerhof yolunun, pentoz fosfat (pentoz-P) yolunun, Entner- Doudoroff yolunun, sitrat döngüsünün ve amino asit biyosentezinin ara maddelerini içerebilir ancak bunlarla sinirli degildir. Örnek primer metabolitlere, bunlarla sinirli olmaksizin, alkoller, örnegin, etanol, metanol, bütanol; amino asitler, örnegin, Iizin, arjinin, ornitin, histidin, sitrülin, izolösin, alanin, valin, Iösin, glisin, treonin, serin, prolin, fenilamin, trosin, triptofan, sistein, sistin, metiyonin, glutamik asit, aspartik asit, glutamin ve asparajin; nükleotitler, örnegin, 5' guanilik asit; antioksidanlar, örnegin, izoasorbik asit; organik asitler, örnegin, asetik asit, laktik asit, sitrik asit, formik asit; vitaminler, örnegin, vitamin 812; sekerler, yag asitleri, örnegin, kisa zincirli yag asitleri; poliaminler; peptitler, örnegin, bir antibiyotik, örnegin, nisin veya bir antibiyotik-disi, örnegin, enterosin, plantarisin W, plantarisin 8 Bir metabolit, ayrica bir sekonder metabolit de olabilir. Sekonder metabolitler temel hücresel fonksiyonlar için tipik olarak gerekli olmayanlardir. Sekonder metabolitler oldukça degiskenlik gösterebilir; örnek sekonder metabolitlere, antibiyotikler, hormonlar, flavonoitler, terpenoitler, alkaloitler, fenilpropanoitler, fenil deriveleri, hekzanol deriveleri, kumarinler, stilbenler, siyanohidrinler, glukosinolatlar, steroller ve saponinler dahildir.
Laktik asit bakterileri, süt ürünlerinin fermantasyonu sirasinda tipik olarak siradaki metabolitleri üretir: süt ürünlerinin fermantasyonu sirasinda, Iaktik asit/laktat, asetat, etanol, format, asetaldehit, d-asetolaktat, asetoin, diasetil ve 2,3 bütilen glikol (bütandiol). Fermantasyon, bir mikrobun, kompleks bir organik maddenin daha basit maddelere yikilmasina neden oldugu veya katki sagladigi herhangi bir proses olabilir.
L. paracasei CBA L74 metaboliti, ortam, fermantatlar veya kültür süpernatantlari içerisinde yer alabilir. Bazi düzenlemelerde, metabolit, kismen veya büyük ölçüde, ortamdan, fermantatlardan veya kültür süpernatantlarindan izole edilebilir. Dolayisiyla, fonksiyonel metabolit, yani, bir gliadin peptitinin hücre girisini düsüren bir metabolit, yukarida açiklanan metabolitlerin herhangi birini içerebilir veya içermeyebilir.
Metabolitlerin izolasyon yöntemleri, belirli metabolitin yapisi ve kimyasina göre degisecektir. Kismen veya büyük ölçüde izole edilmis bir metabolit, fonksiyonel aktiviteyi, yani, gliadin peptitleri, ortam, fermentatlar veya kültür süpernatantlarinin hücre girislerini düsürme yetenegini koruyacaktir. Dolayisiyla, bir L. paracasei CBA L74 kültür süpernatantinin hücreler içine gliadin peptiti girisini düsürebilmesi durumunda, L. paracasei CBA L74 kültür süpernatantindan kismen veya büyük Ölçüde izole edilmis olan bir metabolitin de hücreler içine gliadin peptiti girisini azaltmasi beklenir. Teknikte bilinen standart yöntemler, L. paracasei CBA L74 metabolitlerinin izolasyonu ve karakterizasyonuna yönelik kullanilabilir. Örnek yöntemlere, örnegin, stabilite analizleri, örnegin, isi, pH ve/veya enzimatik aktiviteye karsi stabilite; kormatografik analiz, örnegin, büyüklük dislanimli kromatografi, yüksek performansli sivi kromatografisi (HPLC), gaz kromatografisi, ince tabaka kromatografisi, iyon degisimi kromatografisi, afinite kromatografisi, ters faz kromatografisi; kütle spektrometresi dahildir. Bazi düzenlemelerde, metabolit, isiya karsi stabildir, bu, fonksiyonel aktivitesini, yani, veya 100°C'ye maruz birakildiktan sonra, gliadin peptitlerinin hücre girisini önleme yetenegini korudugu anlamina gelir.
Gluten ve gluten ile iliskili polipeptitler Belirli formdan bagimsiz olarak, burada açiklanan bilesimler, gluten ve gluten ile iliskili polipeptitlerin hücresel alimini azaltir. Gluten ve gluten ile iliskili polipeptitler, besinsel tahil taneciklerinin baslica depo proteinleridir. Gluten bugdayda bulunur. Yakindan iliskili olan proteinler, hordeinler ve sekalinler, sirasiysa arpa ve çavdarda bulunur.
Gluten ve gluten ile iliskili proteinleri kodlayan birkaç yüz gen açiklanmistir. Besleyici özelliklerine ek olarak, gluten, hamura su absorpsiyon kapasitesi, yapiskanlik, viskozite ve elastisite kazandirarak, bugdayin özgün pisme kalitesinin belirlenmesinde anahtar rol oynar. Gluten aslinda, aköz alkollerdeki çözünebilirliklerine bagli olarak siniflandirilmis olan iki polipeptit fraksiyonunun bir kompleksidir: çözünebilir gliadinler ve çözünemeyen gluteninler. Her iki fraksiyon, yüksek bir glutamin ve prolin içerigi ile karakterize edilen çok sayida ilgili protein bilesenlerinden olusur. degerindeki izoelektrik noktalara sahip monomerik proteinlerdir. Dört gliadin polipeptit sinifi mevcuttur: oi-gliadin, ß-gliadin, y-gliadin ve w-gliadin. d-gliadine yönelik örnek SEO ID NO: 7); GI:; Glz; GI:282721198'te Gluten, yaklasik 3,000,000 ortalama MW degerine sahip olmak üzere, MW olarak multimerik bir proteindir. Glutenine yönelik izoelektrik noktalar yaklasik 65-70 arasinda degisir. Disülfür baglarinin indirgenmesi sonrasinda, ortaya çikan glutenin alt birimleri, aköz alkollerde gliadinlere benzer bir çözünebilirlik gösterir. Primer yapiya bagli olarak, Gliadinler, gluteninler, hordeinler ve sekalinler, yüksek bir proline ve glutamin içerigine sahiptir. Yüksek prolin içerigi, bu proteinleri, insan bagirsaklarindaki gastrik, pankreatik ve firçamsi yüzey enzimleri ile, bu enzimlerin prolil endopeptidaz aktivitesi açisindan zayif olmasi nedeniyle, proteolitik sindirimi tamamlamasina yönelik dayanikli hale getirir. Bu, ince bagirsakta yüksek bir prolin ve glutamin içerigi ile birlikte nispeten genis bir peptit fragmenti birikimi (uzunluk olarak 50 amino asit kadar çok) ile sonuçlanabilir.
Gliadine yönelik spesifik amino asit dizileri degiskenlik gösterebilir, ancak, tümü, çölyak hastaligi patojenezindeki immün tepkilerini tetikleyen T-hücresi epitoplarini içerir. Ince bagirsak içindeki bu gluten spesifik T hücresi tepkileri, nihayetinde intestinal viIIi ve kript hiperplazinin kendine özgü atrofisi ile sonuçlanan enflamatuar tepkinin olusturulmasinda önemli bir rol oynar. Spesifik natif gluten peptitler, HLA-DQ2/8'e baglanabilir, HLA tipleri, çölyak hastaligi ile en güçlü sekilde iliskili olanlardir. Bu HLA bagi, karsilik olarak ince bagirsagin mukozasina hasar veren, Iamina propriya CD4 T hücresi tepkilerini baslatir. Doku hasari, yara iyilestiren enzim doku transglutaminaz (tTG) sekresyonunu baslatir. Ancak, tTG ayrica, gluten peptitlerini deamine eder.
Deaminasyon, nötral glutamin kalintilarini, negatif yüklü glutamik asit kalintilarina dönüstürür. Bu deamine edilmis peptitler, deamine edilmemis olan peptitlere göre, HLA-DQZ/8'e yönelik büyük ölçüde daha yüksek baglanma afinitesine sahiptir. Bu proses, gliadinin gelismis bir antijenik gösterimine yol açar. Deamine edilmis peptitlerin baglanmasi ayrica, karsilik olarak intraepitelyal Ienfositoz, kript hiperlazi, vilöz atrofiye yol açan sitokinlerin üretimi ve gliadin ve tTG”ye karsi antikor üreten B hücrelerinin yayilmasini artiran, Iamina propriadaki gluten-spesifik CD4+ T-yardimci 1 (Th1) hücrelerini aktiflestirir. Çoklu T hücresi epitop motifleri, (1- ve y-gliadinlerin yani sira gluteninlerde de belirlenmistir. Bunlarin büyük çogunlugu, deamidasyon sonrasinda gelismis T hücresi tanima göstermistir. Ayrica çölyak hastalari genellikle birden fazla gluten peptidine karsi duyarlidir. DQ2/8 etkilesiminin simdiye kadar çölyak hastaligi ile en belirgin iliskiyi göstermis olmasina ragmen, immünojen olmayan gluten peptitleri, kalitsal immün sistem üzerinde de bir etkiye sahip olabilir.
Gliadin peptitleri P31-43 ve P31-49 genel olarak T hücreleri tarafindan taninmaz. Bu peptitler, çölyak mukoza içinde kalitsal bir immün tepki baslatir. Peptit P31-43, endositik vesikül matürasyonunu geciktirir ve buna bagli olarak epidermal büyüme faktörü reseptörü (EGFR) degradasyonunu azaltir ve EGFR aktivasyonunu uzatir.
Uzatilmis EGFR aktivasyonu, çölyak kript enterositler ve kültürlenmis hücre hatlarinin her ikisinde yüksek hücre proliferasyonu ve aktin modifikasyonu baslatir. Intestinal enterositler veya insan Intestinal hücre hatti için giris sonrasinda, CaCo2, P31-43, erken endositik vesiküllerle etkilesime girer, motilitesini azaltir ve geç endozomlara matürasyonunu geciktirir.
Farkli gluten peptitleri, çölyak hastaligi prosesi içinde yer alir. d-gliadinden derive edilen iki grup biyolojik olarak aktif peptit grubu vardir. Peptitlerin serin-içeren grubunun esas olarak sitotoksik oldugu görülürken, tirosin içeren grup, çölyak hastaligina sahip hastalarda immünolojik reaksiyonari tetikleme kapasitesine sahiptir. Serin-içeren peptitlerin aktivitesi, PSQQ ve QQQP motiflerinin varligina baglidir. Tirosin-içeren peptitler, örnegin, QQPY ve/veya QPYP, immünolojik aktivite ile iliskilidir.
Gliadin peptitleri, dizi olarak oldukça degiskenlik gösterebilir. Bir gliadin dizisinin bir kismi ile özdes bir diziye sahip olan ve islev gösteren (örnegin, burada açiklanan bir veya daha fazla amaca yönelik) bir polipeptit, bir gliadin peptitidir. Tam uzunluklu bir gliadin, bir gliadin peptiti dizisi içerir ve burada açiklanan peptitlerin biri veya daha fazlasi, gliadin dizisi içerisinde kismen veya tam olarak yer alabilir. Dogal olarak ortaya çikan bir gliadinde bulunan bir diziye göre belirli bir sinirda farklilik gösteren ve islev gösterme (örnegin, gliadin peptitine toksisite kazandirmak üzere yeterli aktiviteyi korur) yetenegini koruyan bir diziye sahip olan bir peptit, bir gliadin peptitinin biyolojik olarak aktif bir varyantidir. Tam uzunluklu, dogal olarak ortaya çikan gliadin proteinlerini refere etmek üzere "gliadin" terimi kullanilma egilimindedir ve bunun fragmentlerinin (yani gliadin fragmentleri) ve bunun biyolojik olarak aktif varyantlarinin refere edilmesi durumunda, "polipeptit" ve "peptit" terimleri kullanilma egilimindedir. Polipeptit veya peptitlerin, gliadinde bulunan bir dizi ile özdes olan bir diziye sahip olabilmesi nedeniyle, polipeptitler veya peptitler, gliadinin fragmentlerinden derive edilir.
Mevcut polipeptitlerin dizileri degiskenlik gösterebilirken, kullanisli polipeptitler, SEQ ID NO: 7-10'un fragmentlerini içerebilir. Polipeptitler, bir bitki hücresinde dogal olarak ifade edilen bir gliadinin amino asit dizisini içerebilir veya bundan olusabilir. Biyolojik olarak aktif bir varyant, örnegin, bir veya daha fazla amino asit sübstitüsyonu içermesi nedeniyle bir gliadinin bir dogal sus fragmentinden farklilik gösteren bir amino asit dizisi içerebilir. Bazi düzenlemelerde, varyantin amino asit kalintilarinin en az %50'si, bir gliadinin ilgili dogal sus fragmentindeki kalintilar ile özdestir. Biyolojik olarak aktif varyantlar ayrica, konservatif olmayan amino asit sübstitüsyonlari, eklemeleri ve/veya delesyonlari nedeniyle bir gliadinin bir dogal sus fragmentine göre farklilik gösteren amino asit dizileri içerebilir.
Amino asit kalntilarinin lineer polimerleri olduklarini ifade etmek üzere ve bunlarin tam uzunluklu proteinlerden ayirt edilmesine yardimci olmak üzere, belirli amino asit dizileri, biyolojik olarak aktif bir varyanti) yalnizca bir fragmentini içerebilecegi, ancak, bunun yani sira ek kalintilar içerebilecegi anlasilacaktir. Bulusun polipeptitleri uzunluk olarak amino asit uzunlugunda veya daha uzun (örnegin, yaklasik 40 kalintiya kadar) olabilir.
Bir gliadinin biyolojik olarak aktif olan polipeptitleri, dizilerinin, gliadinin ilgili fragmentine hangi kapsamda benzer veya özedes oldugu ile karakterize edilebilir. Örnegin, biyolojik olarak aktif varyantin dizisi, dogal sus bir gliadindeki ilgili kalintilar ile en az veya yaklasik %60 özdes olabilir. Örnegin, bir gliadin polipeptitinin biyolojik olarak aktif bir varyanti, bir gliadin (örnegin, SEQ ID NO: 7-10`da gösterilen amino asit dizisi veya burada açiklandigi üzere diger bir polipeptit (örnegin, SEQ ID NO:1-6 ile ifade edilen bir polipeptit) ve bunun bir homologu veya ortologu) ile en az veya yaklasik %60 diizlim Bir gliadin polipeptitinin biyolojik olarak aktif bir varyanti, gluten ile iliskili bir bozukluga sahip bir denege toksisite kazandirmak üzere yeterli biyolojik aktiviteyi koruyacaktir.
Biyolojik aktivite, teknikte uzman kisi tarafindan bilinen yollar ile saglanabilir ve bunlarla sinirli olmaksizin, hücresel alim tahlilleri, gen ifadesi tahlilleri veya in vivo hayvan modelleri dahildir. Biyolojik olarak aktif varyantlar, örnegin, varyant polipeptitin ilgili aktivitelerinin, bir gliadin peptitinin aktif bir fragmentininki ile karsilastirilmasi ile belirlenebilir. Tahliller, ilgisiz bir kontrol polipeptiti içerebilir (örnegin, kisi herhangi bir tahlilde, ayni amino asit içerigine rastgele düzenlenmis sekilde sahip olan bir peptiti, bunun yani sira bir yalnizca araci kontrolü dahil edebilir). Bazi biyolojik olarak aktif varyantlar, soydas, dogal olarak ortaya çikan fragment veya bir tam uzunluklu gliadine göre daha da yüksek bir biyolojik aktiviteye sahip olabilir. Daha spesifik olarak, biyolojik olarak aktif bir varyant, natif formdaki polipeptitin biyolojik aktivitesinin en az veya Çölyak hastaliginda rol oynayan örnek a-gliadin peptitleri, P31-43, LGQQQPFPPQQPY, (SEQ ID NO.: 1); P31-49 LGQQQPFPPQQPYPQPQPF (SEO ID Gida ürünleri Bulusun bilesimleri, fizyolojik olarak kabul edilebilir bir tasiyici içerebilir. Fizyolojik tasiyici, bir gida ürünü veya bir farmasötik tasiyici olabilir. "Fizyolojik olarak kabul edilebilir" (veya "farmakolojik olarak kabul edilebilir") terimi, uygun oldugu sekilde bir hayvan veya bir insana verilmesi durumunda ters, alerjik veya diger bir istenmeyen reaksiyon olusturmayan moleküler entitiler ve bilesimleri refere etmek üzere kullanilir.
Dolayisiyla, bulusun bilesimleri, probiyotik organizme L. paracasei CBA L74 tarafindan fermente edilen gida ürünlerini içerir. Gida ürünleri, L. paracasei CBA L74 hücrelerini canli veya yenilenmeyen sekilde içerir. L. paracasei CBA L74 tarafindan fermantasyona uygun olan herhangi bir gida ürünü kullanilabilir. Gida ürünü, bir süt ürünü, örnegin, süt veya süt bazli bir ürün olabilir. Örnek süt kaynaklarina, bunlarla sinirli olmaksizin, sigir, koyun, keçi, öküz, manda, at, esek, ren geyigi ve deve dahildir.
Kaynaktan bagimsiz olarak, süt veya süt ürünleri, L. paracasei' CBA L74 tarafindan fermantasyona uygun herhangi bir formda olabilir. Örnegin, süt, tam süt veya tereyaginin bir kismi veya tümünün uzaklastirilmasina yönelik islem görmüs süt, örnegin, %2 süt, %1 süt veya yagsiz süt olabilir. Alternatif olarak veya ek olarak, süt, önceden pastörize edilmis veya homojenize edilmis, kurutulmus ve rekonstitüe edilmis, yogunlastirilmis veya buharlastirilmis olabilir. Kasein, peynir alti suyu proteini veya yaklasik %1 ila yaklasik %30 arasinda rekonstitüe edilmis yagsiz süt tozundan, örnegin, yaklasik %2, yaklasik %5, yaklasik %7, yaklasik %9, yaklasik %10, yaklasik tozundan olusabilir. Fermantasyon öncesinde, süt ürünü, siadakilerden biri veya daha fazlasi ile kombine edilebilir: a) bir karbohidrat (örnegin, dekstroz gibi bir disakkarit veya bir nisasta); b) bir Iipit; o) bir vitamin ve d) bir mineral. Örnegin, yagsiz süt tozu, yaklasik %15 veya yaklasik %2.0 dekstroz ile kombine edilebilir.
Süt ürünü, bir tahil ürünü, örnegin, pirinç, yulaf, misir, sorgum veya dari olabilir. Bazi düzenlemelerde, tahil ürünleri, bugday, arpa, çavdar veya tritikale olabilir. Tahil ürünü, tam tanecikli olabilir veya una ögütülmüs olabilir. Gida ürünü, tek bir tahil çesidi veya iki veya daha fazla tahil çesidi, örnegin, yulaf unu arti pirinç unu karisimi olabilir. Tahil ürünleri, insan tüketimine uygun cinste ve tipte olabilir veya evcil hayvanlar tarafindan tüketime uygun ürünler olabilir. Genel olarak, tahil ürünü, fermantasyondan önce hidrate edilir. Tahil konsantrasyonu degiskenlik gösterebilir, ancak, kullanisli araliklara yaklasik %5 ila yaklasik %50 agirlik/hacim, örnegin, yaklasik %8 agirlik/hacim, yaklasik Örnek konsantrasyonlara, %15 agirlik/hacim pirinç veya %185 agirlik/hacim yulaf unu arti %5 agirlik/hacim maltli arpa unu karisimi dahildir. Hidratlanmis tahillarin pH degeri, tüketime uygun herhangi bir asit kullanilarak ayarlanabilir. Asit, örnegin, bir organik asit olabilir. Kullanisli organik asitlere, asetik asit, sitrik asit, Iaktik asit, adipik asit, malik asit ve tartarik asit dahildir. Iki veya daha fazla asitin herhangi bir kombinasyonu kullanilabilir. Bazi düzenlemelerde, pH, sitrik asit kullanilarak yaklasik 4.0'a ayarlanabilir.
Gida ürünü ayrica, bir sebze veya meyve ürünü, örnegin, bir özsu, bir püre, bir konsantre, bir macun, bir sos, bir tursu veya bir ketçap olabilir. Örnek sebze veya meyvelere, bunlarla sinirli olmaksizin, kabaklar, örnegin, Girit kabagi, sari kabak, sakiz kabagi, balkabagi; patatesler, kuskonmaz, brokoli, Brüksel filizi, fasülyeler, örnegin, yesil fasülye, yer fasülyesi, Iima fasülyesi, fava fasülyesi, soya fasülyesi, lahana, havuçlar, karnabahar, salataliklar, yer Iahanasi, pirasa, yesil sogan, sogan, seker fasülyesi, Ingiliz fasülyesi, biberler, turplar, salgamlar, domatesler, elmalar, armutlar, seftaliler, incirler, çilekler, ahududu, dikendutu, yaban mersini, kirmizi yaban mersini, bögürtlen, bektasi üzümü, üzümler, kus üzümleri, portakallar, Iimonlar, greyfurt, muz, mangolar, kivi meyvesi ve karambola dahildir.
Gida ürünü ayrica, agaç yemisi veya baklagillerden yapilan bir "süt", örnegin, soya sütü veya badem sütü olabilir.
Ayrica, hayvan proteinleri, örnegin, et, örnegin, sosis, kuru et, balik ve kurutulmus balik ürünleri içeren gida ürünleri de kullanilir.
Kullanilan gida ürünü tipinden bagimsiz olarak, ürün, L. paracasei CBA L74 ile kombine edilir ve fermantasyonun meydana gelmesine yönelik yeterli bir sicaklikta ve bir süre boyunca inkübe edilir. Teknikte bilinen herhangi bir standart fermantasyon yöntemi kullanilabilir. Spesifik fermantasyon kosullari, örnegin, gida ürünü tipi, gida ürününün konsantrasyonu, kullanilan enstrümantasyon, numune hacmi, L. paracasei CBA L74 inokulumun baslangiç konsantrasyonu, var ise bir ko-inokulumun varligi, fermente edilen gidanin organoleptik özellikleri ve fermente edilen gidanin amaçlanan kullanimi dahil birçok faktöre göre degiskenlik gösterecektir.
Enstrümantasyon ve substratin (yani, fermente edilecek olan gida ürünü) her ikisi, canli bakteri ve/veya fungi ve/veya bulasici virüslerin miktarini azaltmak veya bunlari elimine etmek üzere, L. paracasei CBA L74 ile inokülasyon öncesinde sterilize edilir.
Enstrümantasyon, standart yöntemler kullanilarak veya üreticinin talimatlarina göre sterilize edilebilir. Substratin sterilizasyonuna yönelik belirli bir yöntemin seçimi, kismen, substratin sterilizasyon yöntemine karsi stabilitesine bagli olacaktir. Örnegin, substrat, buhar ve basinç ile, örnegin, otoklavlama, tekrar eden isitma ve sogutma döngüleri (örnegin, tindelizasyon), yüksek basinca maruz birakma (Örnegin, paskalizasyon), ultrafiltrasyon veya radyasyon (örnegin, gama-, x-, e-isinina ve/veya birakma) ile sterilize edilebilir. Substratin alikuotlari, tedavi sonrasinda uzaklastirilabilir ve bakteriyel ve/veya fungal kontaminantlarin yoklugunun dogrulanmasina yönelik uygun ortam üzerine kaplanabilir. Substratin yüksek sicak sicakliklara maruz birakilarak sterilize edilmis olmasi durumunda, L. paracasei CBA L74 ile inokulasyon öncesinde en az 37°C'ye sogutulmalidir.
Substrat, standart yöntemlere göre, örnegin, inokülasyon öncesinde kisa bir süre boyunca aköz ortam içinde tekrar askiya alinmis olan taze sivi kültürü veya dondurularak kurutulmus kültür ile, L. paracasei' CBA L74 ile inoküle edilebilir. Genelde, konsantrasyonlarinda, örnegin, yaklasik 1 x 106 cfu/ml, yaklasik 2 x 106 cfu/ml, yaklasik bakteri ve substrat dagilimi olusturmak üzere yeterli derecede çalkalanmalidir, ancak L. paracasei CBA L74'ün bir anaerobik bakteri olmasi nedeniyle çok fazla çalkalanmamalidir. Örnegin, bir bes litrelik kültür, yaklasik 150 rpm'de çalkalanabilir.
Fermantasyon sicakligi genelde 37°C'dir. Çesitli parametreler, örnegin, pH degeri, Oz'nin kismi basinci, karistirici hizi, sicaklik, gaz karisimi, köpük seviyesi ve substrat konsantrasyonu, fermantasyon sirasinda izlenebilir ve uygun sekilde ayarlanabilir. L. paracasei CBA L74'ün büyümesi, standart mikrobiyolojik yöntemler kullanilarak izlenebilir. Fermantasyon, L. paracasei' CBA L74 konsantrasyonu yaklasik 108/ml ve yaklasik 109/ml arasinda olana kadar gerçeklestirilir. Substrat ve diger kosullara bagli olarak, bu konsantrasyona, inokülasyon sonrasinda yaklasik 10 ila yaklasik 30 saat içinde, örnegin, yaklasik 12 saat, yaklasik 15 saat, yaklasik 18 saat, yaklasik 24 saat, yaklasik 30 saat içinde ulasilabilir.
Substrat numuneleri, standart mikrobiyolojik yöntemler kullanilarak kalite güvence amaciyla fermantasyondan önce, bunun sirasinda veya bundan sonra tahlil edilebilir. Örnek yöntemlere, bunlarla sinirli olmaksizin, L. paracasei CBA L74'e yönelik Rogosa agar üzerinde büyüme, toplam aeroblara yönelik plak sayimi agari (PCA) üzerinde büyüme, koliformlara yönelik McConkay agar üzerinde büyüme, Klostridyaya yönelik güçlendirilmis klostridyal agar (RCM) üzerinde büyüme dahildir. Koloni sayimlarina ek olarak, koloni morfolojileri gözlemlenebilir ve referans numuneler ile karsilastirilabilir.
Bazi düzenlemelerde, fermantasyonun baslamasina yardimci olmak üzere, bir ko- inoklum, L. paracasei CBA L74 ile birlikte eklenebilir. Süt ürünlerinin fermantasyonuna yönelik kullanisli ko-inokulaya, bunlarla sinirli olmaksizin, örnegin, Streptococcus thermophilus, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus salivari'ous, Lactobaci'l/us rhamnosus, Lactobaci/Ius casei, Lactobacil/us Iactis, Lactobaci//us delbruecki'i', alt tür Bulgaricus, Lactobacillus acidophi'lus, Lactobaci/Ius brevis veya Leuconostoc mesenteroi'des dahildir. Genelde, ko-inokulumun konsantrasyonu, L. paracasei CBA L74,ünkinden daha düsük, örnegin, yaklasik 1 X 104/ml x105/ml olacaktir. Nihai S. degisebilir.
Uygun L. paracasei CBA L74 konsantrasyonlarina ulasilmasi sonrasinda, fermente edilmis gida, kullanima yönelik daha çok islenebilir. Bazi düzenlemelerde, fermente edilmis gidanin pH degeri, NaOH veya KOH eklenmesi ile, yaklasik 3.0 degerinden nötre yakin, örnegin, 6.5'e ayarlanabilir. Bazi düzenlemelerde, fermente edilmis gida kurutulabilir. Fermente edilmis gida ürünü, fermente edilmis gidanin immünomodülatör özelliklerinin tutulmasi ile sonuçlanacak olan, teknikte bilinen herhangi bir yöntem ile kurutulabilir. Örnek kurutma yöntemlerine, sprey kurutma, dondurarak kurutma, örnegin, liyofilizasyon veya tambur kurutma dahildir. Fermente edilmis gida ürününün nihai su içerigi degiskenlik gösterebilir ancak yaklasik %1 ve yaklasik %10 arasinda veya daha fazla olabilir. Bazi düzenlemelerde, kurutma prosesi, L. paracasei CBA L74,ü yenilenemez kilar.
Kurutulmus fermente edilmis gidalar, kullanim öncesinde hidrate edilebilir. Hidrasyonda kullanilan sivi miktarina bagli olarak, fermente edilmis gida ürünleri, yaklasik 102, esdegeri içerebilir. Kurutulmus L. paracasei' CBA L74, koloni olusturmaz, dolayisiyla bu miktarin, kurutma adimindan önce fermente edilmis gidalarda mevcut olan canli bakteri sayisina bagli olarak hesaplandigi anlasilir. Bazi düzenlemelerde, fermente edilmis gida ürünleri, yaklasik 107 ila yaklasik 1012 cfu/g esdegeri, örnegin kuru agirligin cfu/g, yaklasik 5 X1 O11 cfu/g kadarini içerebilir.
Bulusun yöntemleri ile hazirlanan iki veya daha fazla fermente edilmis gida ürünü, verilis öncesinde kombine edilebilir. Örnegin, fermente edilmis süt ürünleri, fermente edilmis tahil ürünleri ile kombine edilebilir. Alternatif olarak, fermente edilmis gida ürünü, diger gida ürünleri ile, örnegin, fermente edilmemis gida ürünleri veya baska bakteriyel suslar kullanilarak fermente edilmis gida ürünleri ile kombine edilebilir.
Fermente edilmis gidanin gliadin peptitleri üzerindeki etkilerin korunmasi sartiyla herhani kombinasyon kullanilabilir. Örnek gida ürünlerine, bunlarla sinirli olmaksizin, süt ürünleri, örnegin, süt, yogurt, kaymak, peynir ve peynir bazli ürünler, fermente sütler, süt bazli fermente ürünler, süt bazli tozlar, bebek mamalari, süt bazli süzme bebek gidalari, dondurma, gelato, pudingler, çorbalar, soslar, püreler veya kaplamalar, yaslilar için besleyici formüller; tahil ürünleri, örnegin, pablum, tahil bazli süzme bebek gidasi, yulaf ezmesi, nisasta, irmik, misir irmigi, makarna, bisküvi, krakerler, enerji barlari; sebze ürünleri, örnegin, püreler, sebze bazli süzme bebek gidalari, salatalik, lahana, havuç, fasülye, biber veya çesni dahil tursu sebzeler; meyve ürünleri, örnegin, meyve bazli süzme bebek gidalari, domates ürünleri, püreleri, soslari, macunlari, ketçaplari, meyve püreleri; veya protein bazli ürünler, örnegin, baklagiller, sosisler, yemek etleri, sosisli sandviçler veya püre etler dahildir. Bazi düzenlemelerde, fermente edilmis gida, hayvan yemekleri veya hayvan yemleri ile kombine edilmis olabilir.
Farmasötik bilesim/er Burada açiklanan bilesimler, farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasiyici ile kombine edilebilir. Burada kullanildigi üzere "farmasötik olarak kabul edilebilir tasiyici" terimine, farmasötik olarak kabul edilebilir bir maddeye yönelik ortam olarak kullanilabilecek olan, herhangi veya tüm solventler, dispersiyon ortami, kaplamalar, antibakteriyel, izotonik ve absorpsiyon geciktirici ajanlar, tamponlar, eksipiyanlar, baglayicilar, yaglayicilar, jeller, sürfaktanlar ve benzeri dahildir.
Dolayisiyla, bulus, aktif malzeme olarak, bir veya daha fazla farmasötik olarak kabul edilebilir tasiyici ile kombinasyon halinde L. paracasei CBA L74 içeren farmasötik bilesimler de içerir. Bazi düzenlemelerde, L. paracasei CBA L74, farmasötik olarak kabul edilebilir tasiyici ile kombine edilmeden önce veya sonra klasik sterilizasyon teknikleri kullanilarak sterilize edilebilir. Bulusun bilesimlerinin yapilmasinda, L. paracasei CBA L74 tipik olarak, bir eksipiyan ile karistirilir, bir eksipiyan ile seyreltilir veya örnegin, bir kapsül, tablet, sase, kagit veya baska bir konteyner seklindeki bu tür bir tasiyici içinde muhafaza edilir. Eksipiyanin bir seyreltici olarak hareket etmesi durumunda, aktif malzemeye yönelik bir araç, tasiyici veya ortam olarak davranan bir kati, yari kati veya sivi materyal (örnegin, normal salin) olabilir. Dolayisiyla bilesimler, tablet, hap, toz, pastil, sase, kase, iksir, süspansiyon, emülsiyon, solüsyon, surup, aerosol (bir kati olarak veya bir sivi ortam içinde), merhem, yumusak ve sert jelatin kapsül, supozituar, steril enjeksiyon solüsyonlari ve steril paketli tozlar seklinde olabilir.
Teknikte bilindigi üzere, seyreltici tipi, amaçlanan verilis yoluna bagli olarak degiskenlik gösterilebilir. Ortaya çikan bilesimler, koruyucular gibi ek ajanlari Içerebilir. Eksipiyan veya tasiyici, verilis modu ve yoluna bagli olarak seçilir. Uygun farmasötik tasiyicilar, bunun yani sira farmasötik formülasyonlarda kullanima yönelik farmasötik zorunluluklar, bu alanda iyi bilinen bir referans metin olan Remington's Pharmaceutical Sciences (E. W. Martin) ve USP/NF'de (United States Pharmacopeia ve National Formulary) açiklanir. Uygun eksipiyanlarin bazi örneklerine, Iaktoz, dekstroz, sükroz, sorbitol, manitol, nisastalar, akasya sakizi, kalsiyum fosfat, aljinatlar, agaç sakizi, jelatin, kalsiyum silikat, mikrokristal selüloz, polivinilpirrolidon, selüloz, su, surup ve metil selüloz dahildir. Formülasyonlara ek olarak: talk, magnezyum stearat ve mineral yagi gibi yaglayici ajanlar; islatici ajanlar; emülsifiye edici ajan ve askida tutma ajani; metil- ve propilhidroksi-benzoatlar gibi koruma ajanlari; tatlandirici ajanlar ve kullanilarak hastaya verilmesi sonrasinda aktif malzemenin hizli, sürekli veya geciktirilmis salimini saglayacak sekilde formüle edilebilir.
Mevcut bulusa göre kullanima yönelik farmasötik olarak kabul edilebilir bilesimler, L. paracasei' CBA L74'ün oral verilise yönelik bir kolloit içinde hapsedilmis oldugu bilesimleri içerir, standart tekniklere göre hazirlanabilir. L. paracasei CBA L74, kurutulabilir ve ögütme veya pülverizasyon ile sikistirilabilir ve oral verilise yönelik bir kapsül içerisinde yerlestirilebilir. Bazi düzenlemelerde, L. paracasei' CBA L74, bir veya daha fazla eksipiyan, örnegin, bir dagitici, bir dolgu, bir glidan veya bir koruyucu ile kombine edilebilir. Uygun kapsüllere, sert kabuklu kapsüller ve yumusak kabuklu kapsüllerin her ikisi de dahildir. Herhangi bir lipit bazli veya polimer bazli kolloit, kapsülün olusturulmasina yönelik kullanilabilir. Kolloit preparasyonlara yönelik kullanisli olan örnek polimerler, jelatin, bitki polisakkaritleri veya karajenan gibi bunlarin derivelerini ve nisasta ve selülozun modifiye edilmis formlarini, örnegin, hipromellozu içerir. Opsiyonel olarak, jellestirici ajan solüsyonuna, örnegin, kapsülün sertliginin azaltilmasina yönelik gliserin ve/veya sorbitol gibi plastiklestiriciler, renklendirici ajanlar, koruyucular, dagiticilar, yaglayicilar ve yüzey islemi gibi baska malzemeler eklenebilir.
Bazi düzenlemelerde, kapsül, jelatin içermez. Diger düzenlemelerde, kapsül, bitki polisakkaritleri veya bunlarin derivelerini içermez.
Orijinal kökenleri veya elde edildikleri yoldan bagimsiz olarak, L. paracasei CBA L74, kullanimlarina göre formüle edilebilir. Bu bilesimler, farmasötik teknikte iyi bilinen bir yolla hazirlanabilir ve lokal veya sistemik tedavinin istenmesine ve tedavi edilecke olan bölgeye bagli olarak çesitli yollardan verilebilir. Verilis, oral veya topikal (oftalmik ve mukoz membranlara yönelik olmak üzere intranazal, vajinal ve rektal verilis dahil) olabilir. Bazi düzenlemelerde, verilis, pulmoner (örnegin, toz veya aerosollerin inhalasyonu veya insuflasyonu ile, nebülizör ile dahil; intratrakeal, intranazal, epidermal ve transdermal) veya oküler olabilir. Oküler verilise yönelik yöntemler, topikal verilis (göz damlalari), konjonktiva altina, perioküler veya intravitreal enjeksiyon veya balon kateter ile verilis veya konjonktival kese içine ameliyat ile yerlestirilen oftalmik eklemeleri içerir. Parenteral verilis, intravenöz, intraarteriyal, subkutanöz, intraperitoneal veya intramüsküler enjeksiyon veya infüzyon; veya intrakraniyal veya intraventriküler verilisi içerir.Parenteral verilis, tek bir bolus doz seklinde olabilir veya örnegin, sürekli bir perfüzyon pompasi ile yapilabilir. Topikal verilise yönelik farmasötik bilesimler ve formülasyonlara, transdermal yamalar, merhemler, losyonlar, kremler, jeller, damlalar, supozituarlar, spreyler, sivilar, tozlar ve benzeri dahil olabilir. Klasik farmasötik tasiyicilar, aköz, toz veya yagli bazlar, kalinlastiricilar ve benzeri, gerekli olabilir veya istenebilir.
Bilesimler, bir birim dozaj formunda formüle edilebilir, her bir dozaj, örnegin, günlük doz yaklasik 1012 cfu/ml L. paracasei CBA L74 esdegerini içerebilir. "Birim dozaj formlari" terimi, insan denekleri ve diger memelilere yönelik üniter dozajlar olarak uyun olan fiziksel olarak ayrik birimleri refere eder, her bir birim, uygun bir farmasötik eksipiyan ile iliskili olarak istenen terapötik etkinin üretilmesine yönelik hesaplanan, önceden belirlenmis miktarda aktif malzeme içerir. Tabletler gibi kati bilesimlerin hazirlanmasina yönelik, ana aktif malzeme, mevcut bulusun bir bilesiginin homojen bir karisimini içeren bir kati preformülasyon bilesimini olusturmak üzere bir farmasötik eksipiyan ile karistirilir. Bu preformülasyon bilesimlerinin homojen olarak refere edilmesi durumunda, aktif malzeme, bilesimin tablet, hap ve kapsül gibi esit olarak etkili birim dozaj formlarina kolay sekilde bölünebilecegi sekilde, bilesim içinde tipik olarak esit sekilde dagilir. Bu kati preformülasyon akabinde, L. paracasei' CBA L74'ün örnegin 0.005 mg ile yaklasik 1000 mg'ini içeren yukarida açiklanan tipteki birim dozaj formlarina bölünür.
Bilesimler, bir birim dozaj formunda formüle edilebilir, her bir dozaj, örnegin, yaklasik mg ila yaklasik 10 mg, yaklasik 1 mg ile yaklasik 5 mg; yaklasik 5 mg ila yaklasik 50 mg, yaklasik 5 mg ile yaklasik 20 mg, yaklasik 5 mg ile yaklasik 10 mg; yaklasik 10 mg malzeme içerir.
Bazi düzenlemelerde, mevcut bulusun tabletleri veya haplari kaplanmis olabilir veya aksi halde, uzatilmis aksiyon avantajini saglayan bir dozaj formu saglamak üzere katkilandirilmis olabilir. Örnegin, tablet veya hap, bir iç dozaj veya bir dis dozaj bileseni içerebilir, sonuncusu, ilkinin üzerinde bir zarf seklindedir. Iki bilesen, midede dagilima karsi direnmeye yarayan ve iç bilesenin dudodenum içerisine temassiz sekilde geçmesine veya saliminin geciktirilmesine olanak veren bir enterik katman ile ayrilabilir. Bu tür enterik katmanlar veya kaplamalara yönelik çesitli malzemeler kullanilabilir, bu tür malzemelere, birtakim polimerik asit ve polimerik asitlerin sellak, setil alkol ve selüloz asetat gibi bu tür malzemelerde karisimlari dahildir.
Mevcut bulusun bilesimlerinin oral olarak veya enjeksiyon ile verilmeye yönelik yer alabilecegi sivi formlara, aköz solüsyonlar, uygun sekilde Iezzetlendirilmis suruplar, aköz veya yag süspansiyonlari ve pamuk yagi, susam yagi, hindistan cevizi yagi veya yerfistigi yagi gibi yenebilir yaglar ile Iezzetlendirilmis emülsiyonlar, bunun yani sira iksirler ve benzer farmasötik araçlar dahildir.
Bulusun bilesiminin bir farmasötik bilesimdeki proporsiyonu ve konsantrasyonu, dozaj, kimyasal karakteristikler (örnegin, hidrofobisite) ve verilis yolu dahil birtakim faktöre bagli olarak degiskenlik gösterebilir. Örnegin, bulusa göre kullanima yönelik L. içeren bir kapsül içinde saglanabilir.
Kullanim yöntemleri Gluten ile iliskili bozukluklar Burada açiklanan bilesimler genel olarak ve farkli olarak, gluten ile iliskili bozukluklarin tedavisine yönelik kullanislidir. Bu tür bir tedavinin yararli oldugu deneklere, gluten veya gluten ile iliskili polipeptitleri sindirdikten sonra toksik etki tecrübe eden veya buna karsi riske sahip olanlar dahildir. Bu tür toksik etkiler, bunlarla sinirli olmaksizin, enflemasyon, otoimmün reaksiyonlar, ishalgibi gastrointestinal semptomlar, steatore, karinda sislik, kilo kaybi, anemi, osteoporoz, artrit, kisirlik, periferal nöropati, karaciger yetmezligi ve depresyon dahil genis bir semptom spektrumunu kapsayabilir. Gliadin peptiti toksisitesi, sitotoksik veya immünolojik mekanizmalardan veya bir sitotoksik veya immünolojik mekanizma kombinasyonundan ortaya çikabilir. Gliadin peptiti toksisitesinin bir semptomuna, enflamasyon, otoimmün reaksiyonlar, ishal gastrointestinal semptomlar, steatore, karinda sislik, kilo kaybi, anemi, osteoporoz, artrit, kisirlik, periferal nöropati, karaciger yetmezligi ve depresyon dahil olabilir. Gluten ile iliskili bozukluklara, klasik çölyak hastaligi, atipik çölyak hastaligi, gizli çölyak hastaligi ve sessiz çölyak hastaligi gibi çesitli alt tipleri dahil çölyak hastaligi, dermatitis herpetiformis, gluten ataksisi ve gluten duyarliligi dahildir. Çölyak hastaliginin alt tiplerine, klasik çölyak hastaligi, atipik çölyak hastaligi, gizli çölyak hastaligi ve sessiz çölyak hastaligi dahildir. Çölyak hastaligi ile iliskili klasik semptomlar, ishal, karinda sislik ve büyüme aksakligidir. Bu semptomlar en yaygin olarak, 6 ve 24 aylik yasta olan çocuklarda görülür. Atipik çölyak hastaligi, daha hafif gastrointestinal semptomlar ile karakterize edilir. Demir eksiligi anemisi, osteoporoz, kisa boyluluk, artrit, kisirlik, periferal nöropati, hipertransaminazemi ve bazi durumlarda teshis sirasinda karaciger yetmezligi gibi ekstra intestinal belirtilerle iliskilidir. Gizli çölyak hastaligi, pozitif seroloji ile birlikte veya degil, HLA-DQ2 ve/veya HLA-DQ8 tasiyan ve henüz villöz atrofi olusturmamis ancak hafif enflamasyon veya immün aktivasyona sahip olabilecek olan hastalarda bulunur. Bu altkümedeki hastalar, asemptomatik olabilir veya ekstra intestinal belirtilere sahip olabilir. Sessiz çölyak hastaligi, pozitif seroloji ile ve aksi durumda asemptomatik bir hastada villöz atrofi ile karakterize edilir. Glutensiz bir diyeti takip ettikten sonra bazi asemptomatik hastalar, artan istah, azalan yorgunluk veya daha az davranissal anormallik gibi, hayatlarinin farkli fiziksel ve psikolojik açilarinda gelisme oldugunu farkedecektir. Altkümeden bagimsiz olarak, birçok çölyak hastaligi vakasi teshissiz kalir, bu, hastalari, örnegin kisirlik ve kanserler, örnegin, Ienfoma ve intestinal karsinom gibi uzun vadeli komplikasyon riskine maruz birakir. Çölyak hastaliginin görünümü büyük ölçüde degiskenlik gösterebilir. Çölyak hastaligi, örnegin, eksenel boy gelisimi bozuklugu ve kizlarda gecikmis menars gibi diger ekstra intestinal semptomlarin da mevcut olabilmesine ragmen, büyük bir çogunlukla kilo kaybi, steatore ve birden fazla eksiklik gibi klasik emilim bozuklugu semptomlari ile iliskili büyüme aksakligi hastaligi olarak, tipik olarak çocuklarda mevcuttur. Çölyak hastaligi yayginligi, çölyak hastaligi soy geçmisi, otoimmün hastaliklar, lgA eksikligi, bazi genetik sendromlar (Down sendromu, Turner sendromu ve William sendromu) ve özellikle tip 1 diyabet ve tiroit gibi risk kosullarinda artar.
Genetik yatkinlik, çölyak hastaliginda önemli bir rol oynamaktadir. Çölyak hastaligi, kromozom sinif II genleri (HLA- DQ2 ve HLA-DQS) ile güçlü sekilde baglantilidir. Çogu çölyak hastaligi hastasi (yaklasik olarak %95) baslica histokompatibilite kompleksi (MHC) sinif II proteini HLA- DQ2iyi kodlayan genleri ifade eder. Geriye kalan hastalar, çogunlukla HLA-DQ8- pozitiftir. HLA-DQ2 haplotipi yaygindir ve yaklasik olarak %30 Kafkas bireyler ile tasinir, bu, HLA-DQ2 ve/veya HLA-DQ8 varliginin hastalik gelisimi için zorunlu oldugunu ancak tahmin edilen risk etkisinin yalnizca %36 ila %53 olmasi nedeniyle tek basina yeterli olmadigini gösterir. HLA-olmayan genler ayrica, çölyak hastaligi yatkinligina katkida bulunur. Çölyak hastaliginin teshisi tipik olarak, siradakiler dahil birden fazla kritere baglidir: 1) tipik çölyak hastaligi semptomlari ile görünüm; 2) örnegin, tTG'ye karsi (anti-tTG) yüksek titre lgA antikorlari, deamide a-gliadin peptitlerine karsi yüksek titre antikorlari dahil, serolojik testlerin pozitifligi; 3) HLA-DQ2 ve/veya HLA-DQ8 genotipleri; 4) ince bagirsak biyopsisinde bulunan çölyak enteropatisi; ve 5) glutensiz diyete karsi tepki verme. Çölyak hastaligi görünümünün genis degiskenligi, bazi klinisyenlerin 'bes kuraldan dördü' olarak tanimlanan bir sayisal yaklasimi benimsemeye yöneltmistir.
Yani, çölyak hastaligi teshisi, bes kriterden en az dördünün gerçeklesmesi durumunda dogrulanir.
Dermatit herpetiformis, kabartili kizariklik ve patognomonik kutanöz lgA depozitleri ile ortaya çikan, çölyak hastaliginin bir deri belirtisidir. Predominant semptomlar, yogun kasinti ve yanmadir. Kizariklik, karakteristik bir simetrik dagilima sahiptir. Dirsekler ve üst ön kollar, hastalarin %90'indan çogunda etkilenir. Yaygin olarak etkilenne diger bölgeler, kalçalar, dizler, omuzlar, sakrum, yüz, kafa derisi, boyun ve gövdedir. Üst ince bagirsak mukozasi içinde çölyak tipi villöz atrofi, dermatit herpetiformis hastalarinin yüksek sayida intraepiteliyal Ienfositler gibi mukozadaki güç algilanan degisiklikler, gluten duyarlilasmasini isaret eder. Dermatit herpetiformis hastalari, çölyak hastaligina sahip hastalardaki gibi, ayni belirti serisini, iliskili bozukluklari ve komplikasyonlari gösterebilir (otoimmün hastaliklar, demir eksikligi anemisi, osteoporoz ve malignite).
Dermatit herpetiformis hastalari, dermatit herpetiformis kizarikliginin glutene duyarli olmasi nedeniyle, genel olarak glutensiz bir diyete alinir.
Gluten ataksisi, gluten duyarliligina yönelik pozitif serolojik isaretleyicilere sahip idiyopatik sporadik ataksi olarak tanimlanir. Çölyak hastaligi gibi, ataksi ile sonuçlanan beyincik hasari ile karakterize edilen bir otoimmün hastaliktir. Gluten ataksisi hastalari tipik olarak yüksek titre anti-gliadin antikorlarina sahiptir. Transglutaminaz antikorlarinin yaygin depozisyonu, gluten ataksisine sahip hastalarin beyin damarlari etrafinda bulunmustur. Gluten ataksisi çogunlukla, saf beyinci ataksisi veya nadir olarak, miyoklonus, palatal titreme veya opsoklonus-miyoklonus ile kombinasyon içinde ataksi ie ortaya çikar. Gluten ataksisi çogunlukla, 53 yas baslangiç yasi ortalamasi ile, çogunlukla sinsi baslangiçlidir. Çogu hasta, intestinal biyopside enteropati kanitina sahip olacaktir. Ataksileri için alternatif bir nedeni olmayan, anti-gliadin antikorlari veya anti-tTG antikorlarina yönelik pozitif olan hastalar, tipik olarak düzenli takip ile siki bir glutensiz diyete alinir. Çölyak olmayan gluten duyarliligi veya gluten intoleransi olarak da refere edilen gluten duyarliligi genel olarak, çölyak hastaliginin tüm özelliklerinin eksik oldugu, ancak gluten dislanimina tepki veren fonksiyonel, morfolojik ve immünolojik bir bozukluk olarak karakterize edilir. Gluten duyarliligi, çölyak hastaligindan ayirt edilir ve herhangi bir anti-tTG otoantikoru veya diger otoimmün ek hastaliklar tarafindan takip edilmez.
Gluten duyarliligi hastalarinin ince bagirsagi tipik olarak normaldir. Gluten duyarliligi semptomlari, çölyak hastaligi ile iliskili olanlara benzeyebilir ancak, davranissal degisiklikler, kemik veya eklem agrisi, kas kramplari, bacakta hissizlik, kilo kaybi ve kronik yorgunluk gibi ekstra intestinal semptom yayginligi ile benzer. Gluten duyarliligina yönelik laboratuvar biyoisaretleyicisi yoktur. Genellikle teshis dislanim kriterine baglidir; bir gluten içeren gida eliminasyonu diyeti sonrasinda bir açik yükleme, sagligin hastanin diyetinden glutenin eliminasyonu ile mi yoksa azaltilmasi ile mi iyilestiginin degerlendirilmesine yönelik büyük siklikla kullanilir.
Tedavi yöntemleri Bir denek, klinik olarak yararli bir sonucun ortaya çiktigu her durumda etkili olarak tedavi edilir. Bu, örnegin, gluten ile iliskili bir bozukluk ile ilgili semptomlarin tamamen çözülmesi, gluten ile iliskili bir bozukluk ile ilgili semptomlarin siddetinin azalmasi veya gluten ile iliskili bir bozukluk ile ilgili semptomlarin ilerlemesinin yavaslamasi anlamina gelebilir. Bu yöntemler ayrica a) gluten ile iliskili bir bozukluga sahip bir denegin (örnegin, bir hasta ve daha spesifik olarak bir insan hasta) belirlenmesi; ve b) denege, fizyolojik olarak kabul edilebilir bir tasiyici içerisinde L. paracasei CBA L74 içeren herhangi bir fermente edilmis gida ürünü veya bilesim gibi, burada açiklanan L. paracasei CBA L74'ü içeren bir bilesimin saglanmasi adimlarini içerebilir. Denege saglanan bu tür bir bilesimin, gluten ile iliskili bozukluk ile ilgili semptomlarin tamamen çözülmesi, gluten ile iliskili bozukluk ile ilgili semptomlarin siddetinin azalmasi veya gluten ile iliskili bozukluk ile ilgili semptomlarin ilerlemesinin yavaslamasi ile sonuçlanan miktari, terapötik olarak etkili bir miktar olarak kabul edilir. Mevcut yöntemler ayrica, dozlama ve takvimlendirmenin optimize edilmesi, bunun yani sira çiktinin öngörülmesine yardimci olmak üzere bir izleme adimi içerebilir.
Burada açiklanan yöntemler, genis bir araliktaki türlere, örnegin, insanlar, insan olmayan primatlar (örnegin, maymunlar), atlara, domuzlar, inekler veya diger besi hayvanlari, köpekler, kediler veya evcil hayvan olarak tutulan diger memeliler, siçanlar, fareler veya diger laboratuvar hayvanlarina uygulanabilir. Burada açiklanan bilesimler, terapötik blesimlerde veya rejimlerde veya burada açiklandigi üzere kosullarin (örnegin, gluten ile iliskili bir bozukluk) tedavisinde kullanima yönelik bir ilacin üretimine yönelik kullanislidir.
Burada açiklanan bilesimler, bir denegin siradan günlük diyetinin bir parçasi olarak oral yolla verilebilir. Gida bilesimleri, hem çocuklara hem yetiskinlere yönelik besleyici destek olarak verilebilir. Farmasötik olarak formüle edilmesi durumunda, bilesimler, akabinde bir hedef hücreye verilmeye yönelik konagin vücudunun herhangi bir parçasina verilebilir. Bir bilesim, kisitlama olmadan, beyin, omurilik sivisi, eklemler, nazal mukoza, kari, akcigerler, bagirsaklar, kas dokulari, deri veya bir memelinin periton bosluguna verilebilir. Verilis yollari olarak, bir bilesim, intravenöz, intrakraniyal, intraperitoneal, intramüsküler, subkutanöz, intramüsküler, intrarektal, intravajinal, intratekal, intratrakeal, intradermal veya transdermal enjeksiyon, oral veya nazal verilis veya zaman içinde asamali perfüzyon ile verilebilir. Diger bir örnekte, bir bilesimin bir aerosol preparasyonu, inhalasyon ile bir konaga verilebilir.
Bilesimlerin gida ürünü veya farmasötik olarak formüle edilmesinden bagimsiz olarak, gerekli dozaj, verilis yoluna, formülasyonun yapisina, denegin durumunun yapisina, örnegin, immün sistemin immatüritesi veya bir gastrointestinal bozukluk, denegin boyutuna, agirligina, yüzey alanina, yasina ve cinsiyetine, verilen diger ilaçlar ve uzman klinisyenlerin kararina bagli olacaktir. Uygun dozajlar, 0.01-1,000 mg/kg araligindadir. Bazi tipik doz araliklari, günde yaklasik 1 ug/kg ila yaklasik 1 g/kg vücut agirligidir. Bazi düzenlemelerde, doz araligi, günde yaklasik 0.01 mg/kg ila yaklasik 100 mg/kg vücut agirligidir. Bazi düzenlemelerde, doz, örnegin, 1 mg/kg, 2 mg/kg, 5 mg/kg, 10 mg/kg, 20 mg/kg, 50 mg/kg veya 100 mg/kg olabilir. Dozaj, hastalik veya bozuklugun tipi ve ilerleme boyutu, belirli hastanin bütün saglik durumu, seçilen bilesigin nispi biyolojik etkinligi, eksipiyanin formülasyonu ve verilis yolu gibi degiskenlere bagli olma egilimindedir.
Etkili dozlar, in vitro veya hayvan modeli test sistemlerinden türetilen doz-tepki egrilerinden ekstrapole edilebilir. Örnegin, hücre bazli tahlillerde gliadin peptitlerinin hücre girisi üzerindeki etkilerinin analizi, kullanisli olabilir. Bilesimler ayrica, antikor tepkileri, sitokin üretimleri ve T-hücresi tepkileri üzerindeki etkilere yönelik tahlil edilebilir.
Gluten ile iliskili bozukluklar ile ilgili semptom spektrumu, hücresel hedeflerin çesitliligi ve çesitli verilis yollarinin farklilik gösteren etkinlikleri dolayisiyla, ihtiyaç duyulan dozaj içindeki genis varyasyonlarin olmasi beklenmektedir. Bu dozaj seviyelerindeki varyasyonlar, teknikte iyi anlasildigi üzere, optimizasyona yönelik standart empirik rutinler kullanilark ayarlanabilir. Verilis, tek veya birden fazla olabilir (örnegin, 2- veya 3- aracina enkapsüle edilmesi (örnegin, polimerik mikropartiküller veya implante edilebilen cihazlar), dagitimin etkinligini artirabilir.
Burada saglanan herhangi bir bilesim ile tedavinin süresi, bir gün kadar kisa bir süreden konagin ömrü kadar uzun bir süre (örnegin, birçok sene) arasindaki herhangi bir zaman süresi olabilir. Örnegin, bir bilesim, haftada bir kez (örnegin, 4 hafta ila birçok ay veya sene); ayda bir kez (örnegin, üç ila oniki ay veya birçok sene boyunca) veya 5 yil, on yil veya daha uzun bir periyot boyunca yilda bir kez verilebilir. Ayrica, tedavinin frekansinin da degisken olabilecegi dikkate alinir. Örnegin, mevcut bilesimler, bir kez (veya iki kez, üç kez, vb.), günlük olarak haftalik olarak, aylik olarak veya yillik olarak verilebilir.
Teknikte uzman kisi tarafindan bilinen herhangi bir yöntem, belirli bir tepkinin basladiginin belirlenmesine yönelik kullanilabilir. Belirli bir hastalik durumunun derecesini degerlendirebilecek olan klinik yöntemler, bir tepkinin baslayip baslamadiginin belirlenmesine yönelik kullanilabilir. Örnegin, bir denek, semptomlarin giderilmesi, örnegin, ishal, karin agrisi, kramp, karin sisliginin giderilmesi ve bir gluten yüklemesini tolere etme yetenegine yönelik izlenebilir. Alternatif olarak veya ek olarak, serum isaretleyicileri, görüntüleme teknikleri, örnegin, ultrason, x-isinlari ve endoskopik yöntemler kullanilabilir.
Bilesimler ayrica, baska terapötik yaklasimlar ile birlikte verilebilir. Bu terapötik yaklasimlar, belirli bozukluga göre degiskenlik gösterecektir, ancak, örnegin, bir glutensiz diyet gibi diyet tedavilerini içerebilir. Bazi düzenlemelerde, diyet tedavilerine, düsük sayida toksik T hücresi epitopuna sahip gliadin sekillerinin ifade edilmesine yönelik seçici yetistirme veya rekombinant teknolojiler ile gelistirilmis olan suslardan bugday ürünlerinin verilmesini içerebilir. Bazi düzenlemelerde, bir diyet tedavisi, bir prebiyotigin, yani, konaga saglik yardimi saglayan intestinal floranin bir veya daha fazla türünün büyümesini veya aktivitesini stimüle eden bir ajanin verilmesini içerebilir. Örnek prebiyotiklere, trans-galaktooligosakkarit, inülin, fruktooligosakkarit ve Iaktüloz dahildir.
Diger terapötik yaklasimlar, bir terapötik ajanin verilmesini içerir. Bir terapötik ajan, bir enzim, örnegin, aksi durumda vücudun dogal proteazina direnç gösteren ve yüksek derecede immünojenik peptit içeren, prolin açisindan zengin peptitleri hedefleyerek gluteni degrade eden bir endopeptidaz (ayrica, glutenaz olarak da refere edilir) olabilir. Örnek endopeptidazlarina, prolil endopeptidazlari ve filizlenen arpa tohumlarindan derive edilen bir sistein endoproteazi ve Sphingomonas kapsülünden bir prolil endopeptidazin bir kombinasyonu olan ALV003 dahildir.
Diger terapötik ajanlara, çölyak hastaligina özgü yüksek intestinal geçirgenligin inhibitörleri, örnegin, intestinal epitelyal hücrelerin gliadin kaynakli sitoskelet yeniden düzenlenmesini, siki bag ayrilmasini ve pik F-aktin inkrementini inhibe eden paraselüler geçirgenligin bir oktapeptit inhibitörü olan AT- dahildir. Diger terapötik ajanlara, tTG inhibitörleri, immün sistem modülatörleri ve peptite dayali asilar (Nevvax2) ile duyarsizlastirma terapisi dahildir.
Iki veya daha fazla terapötik ajanin es zamanli verilisi, ajanlarin terapötik etkilerini uyguladiklari zaman araliginda bir çakisma oldugu sürece, verilecek olan ajanlarin ayni zamanda veya ayni yol ile verilmesini gerektirmez. Farkli günler veya haftalarda verilisin oldugu gibi, es zamanli veya asamali verilis tasarlanir.
Uretim parçalari Burada açiklanan bilesim ayrica, kullanima yönelik talimatlar ile birlikte, kitler ile montajlanabilir. Örnegin, kitler, L. paracasei CBA L74 ile fermente edilmis bir veya daha fazla gida ürünü içeren bir bilesimin ölçülmüs miktarlarini içerebilir. Kullanima yönelik talimatlar, uygun herhangi bir ortam ile gerçeklestirilebilir. Örnegin, bir veya daha fazla dilde bir kullanma talimati üzerine basilabilir veya duyulabilecek sekilde ve görülebilecek sekilde (örnegin, bir kompakt diskte) saglanabilir. Paketleme malzemeleri, paketleme malzemeleri, örnegin, viyaller, paketler, konteynerler içerebilir.
Bazi düzenlemelerde, kitler, paketleme malzemeleri ve herhangi bir veya yukari açiklanan formatta kullanima yönelik talimatlar ile birlikte, fizyolojik olarak kabul edilebilir bir tasiyici içinde L. paracasei CBA L74 içeren bir bilesimin ölçülmüs miktarlarini içerebilir. Bazi düzenlemelerde, kitler, bir veya daha fazla L. paracasei CBA L74 metaboliti içeren bir bilesimin ölçülmüs miktarlarini içerebilir. Kitin bilesenleri, hemen kullanima yönelik uygun olabilir. Bulus, kitleri, ancak, kullanimdan önce seyreltme gerektirebilecek olan konsantre formülasyonlar ve/veya materyaller içeren kitleri kapsar. Örnekler Örnek 1: Malzemeler ve Yöntemler Peptitler: a-gliadin P31-P43 (SEQ ID NO.: 1) ve P, in vitro sentezlenir ve Inbios, Naples, Italya'dan florokrom, lisamine baglanir. Kromatografik analizler, peptitlerin %99 saf oldugunu belirtmistir.
Cac02 peptit qirisi tahlili: Kültürlenmis CacoZ hücreleri, bir insan epiteliyal kolon karsinom hücre hatti, 15 dakika boyunca etiketli peptitler ile birlikte inkübe edilir. Etiketli peptitler, tekrarlanan yikamalar ile uzaklastirilir ve hücreler, bir es odakli mikroskop altinda incelenir. Morfolojik analiz, 15 dakika inkübasyon sonrasinda, etiketli peptitlerin hücrelere girdigini ve endositik vesikülere lokalize oldugunu gösterir, bu, küçük renkli noktalar seklinde gözükür. Kantitatif analiz, birden fazla mikroskopik alanin fluoresan yogunlugunu degerlendiren dedike bir yazilim paketi kullanilarak gerçeklestirilmistir.
CacoZ hücre kültürü: CaCo-2 hücreleri, Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) (GIBCO, San Giuliano Milanese, Italya), %10 fetal bovin serumu (FBS) (GIBCO, San Giuliano Milanese, Italya) ve 1 mM glutamin (GIBCO, San Giuliano Milanese, Italya) içinde, %5 C02 konsantrasyonunda 37°C sicakliktaki bir inkübatörde büyütülür.
L. paracasei' CBA L74 kültürü: L. Paracasei CBA L74 (Uluslararasi depozitör erisim FBS ve Glu takviye edilmis 50 ml DMEM içinde, bir gece boyunca 37°C'de dakikada 160 osilasyon ile büyütülür. Bakteriyel konsantrasyon, 600 nm dalgaboyunda, bir Beckman DU-7 spektrofotometrede spektrofotometrik olarak ölçülür. Optik Yogunluk (OD), bakteriyel konsantrasyonun siradaki gibi hesaplanmasina yönelik kullanilir: 0D 2 = 1.5 x 109 cfu/ ml. Deneyler için kullanilan farkli bakteriyel konsantrasyonlar, bakteriyel kültürün, antibiyotiksiz taze ortam içinde seyreltilmesi ile elde edilir. Yalnizca süpernatantin kullanildigi deneylere yönelik, bakteriyel kültür, oda sicakliginda 10 dakika boyunca 3000 rpm'de santrifüjlenir. Süpernatant uzaklastirilir ve bir 0.2 mikron por boyutlu filtre içerisinden filtrelenir.
Gliadin peptitleri ve EGF-Alexa-488: Sentetik peptitler (beklenildigi sekilde, Inbios, %95 saflik, MALDl-toff analizi), UItrasart-D20 (Sartorius AG, Goettingen, Almanya) filtrasyonu ile elde edilir. P amino asit dizisine sahiptir. P amino asit dizisine sahiptir. Peptitler, 610 nm uzunluktaki bant emisyonu ile HeNe1 Iazeri (543 nm) ile tahrik edilen bir kirmizi florokrom olan lisamin ile konjüge edilir. EGF-AIexa-488, Molecular Probes, San Giuliano Milanese, Italya`dan elde edilir.
Floresans tahlili: L. paracasei' CBA L74'ün gliadin peptitleri üzerindeki veya Caco-2 hücrelerine EGF-Alexa girisi üzerindeki etkisi test edilir. Caco2 hücreleri, steril cam araliginda iki farkli L. paracasei CBA L74 konsantrasyonu ile isleme tabi tutulur.
Hücresiz süpernatantin kullanildigi deneylere yönelik, Caco2 hücreleri, 108 cfu/ml yogunluga ulaSmis olan L. paracasei CBA L74 kültürlerinden toplanan L. paracasei CBA L74, supernatanti ile isleme tabi tutulur. Süpernatant, taze sekilde veya isiya maruz birakildiktan sonra kullanilir. Bazi deneylerde, süpernatant, 15 dakika boyunca 80°C'de isitilir. Diger deneylerde, süpernatant, 5 dakika boyunca kaynatilir. Cac02 hücreleri, 30 dakika boyunca 37°C`de %5 002 atmosferde farkli bakteriyel preparasyonlar ile isleme tabi tutulur ve akabinde, gliadin peptitleri P31-43-lisamin (Iiss) veya P57-68'i55 ile veya EGF-AIexa-488 ile inkübe edilir. Peptit konsantrasyonlari mikrogram/ml degerinde kullanilir; EGF-AIexa-488 10 mikrogram/ml'de kullanilir.
Peptitlerin eklenmesi sonrasinda, hücreler, 30 dakika boyunca 37°C'de %5 CO2 atmosferinde inkübe edilir. Ortam, akabinde PBS 1X (Gibco) ile üç yikama ile uzaklastirilir. Lameller, oda sicakliginda paraformaldehit %3 (Sigma-Aldrich) ile kisaca sabitlenir (5 dakika), akabinde, monte edilir ve esodakli mikroskop (LSM 510 Zeiss) ile gözlemlenir. Görüntüler olusturulur ve incelenmekte olan mikroskopik alanin floresans yogunlugunu degerlendirmek üzere AIS Zeiss yazilimi ile analiz edilir. Mikrograflarin büyültmeleri, gösterilen tüm sekilleri için aynidir (63x objektif). Etiketli peptitler ve EGF- Alexa, kirmizi (peptitler) veya yesil (EGF) ile renklenen küçük noktalar halinde ortaya çikan endositoz vesikülleri içinde ortaya çikar.
Istatistiksel analiz: Istatistiksel analiz ve grafikler, GraphPad Prism ile elde edilir.
Ortalama ve standart sapmalar hesaplanir. Bunlar, Student's t testi ile degerlendirilir. p <0.05 degerlerine sahip sonuçlar, belirgin kabul edilir. Örnek 2: (Jr-gliadin peptit girisi üzerinde canli L. paracasei CBA L74 etkisi azaltir. Esodakli floresans görüntüleri Sekil 1'de gösterilir. L. paracasei CBA L74 yoklugunda lisamin etiketli P31-43 ile inkübe edilen kontrol hücreleri (sol paneller), P31-43 içeren endositik vesiküllere (beyaz oklar) karsilik gelen belirgin floresans paternlerini gösterir. Aksine, floresans L. paracasei CBA L74 varliginda lisamin etiketli P31-43 ile inkübe edilen hücrelerde (sag paneller) azalir Kantitatif analiz, L. paracasei CBA L74'ün P31-43 girisi üzerindeki etkisinin doza bagli ve istatistiksel olarak belirgin oldugunu gösterir. Sekil 2, ortak numuneler örnekler üzerindeki bes farkli deneyin sonuçlarini gösterir. Floresans yogunlugu, her bir numunedeki 30 rastgele alana yönelik hesaplanir. Sekil 2'de gösterildigi üzere, CaC02 girisinde istatistiksel olarak belirgin, doza bagli bir azalma ile sonuçlanir.
P57-68 peptitine yönelik benzer bir etki gözlemlenir. Sekil 3'te gösterilen deney, P57- 68'in P31-43 yerine kullanilmasi disinda, Sekil 2'deki deney ile tamamen ayni sekilde paracasei' CBA L74 ile isleme tabi tutulmasi, P57-68 girisinde istatistiksel olarak belirgin, doza bagli bir azalma ile sonuçlanir. Örnek 3: a-gliadin peptiti girisi üzerinde L. paracasei CBA L74 izole DNAinin L. paracasei CBA L74'ten DNA özütlenir ve standart yöntemler ile saflastirilir. Sekil 4'te gösterildigi üzere, CaCO2 hücrelerinin, 108 hücreye esdeger miktarda L. paracasei CBA L74 DNA varliginda P31-43 ile isleme tabi tutulmasi, peptit girisini bloke etmez. Örnek 4: a-gliadin peptiti girisi üzerinde L. paracasei CBA L74 kültür süpernatantinin etkisi (referans örnek) L. paracasei CBA L74 kültür süpernatanti santrifüj ile toplanir ve kültür süpernatanti, can bakteriler ve hücre debrilerinin uzaklastirilmasina yönelik filtre edilir. 108 hücre esdegerinde süpernatant, peptit P31-43 varliginda CaCoZ hücrelerine uygulanir.
Kontrol CaCO2 hücreleri, 108 canli L. paracasei CBA L74 hücresi ile isleme tabi tutulur.
Sekil 5, ortak numuneler üzerinde dört bagimsiz deneyin sonularini gösterir. Floresans yogunlugu, her bir numunedeki 30 rastgele alan için hesaplanir.
Sekil Saldaki çubuk grafiginde açiklandigi üzere, CaCO2 hücrelerinin canli L. paracasei CBA L74 hücreleri ile isleme tabi tutulmasi tekrardan peptit P31-43 girisinde istatistiksel olarak belirgin bir artis ile sonuçlanir. CaCO2 hücrelerinin L. paracasei' CBA L74 kültür süpernatanti ile isleme tabi tutulmasi, benzer büyüklükteki bir azalma ile sonuçlanir. Bu deneye yönelik esodakli görüntüler Sekil 5b'de gösterilmektedir. Bu görüntüler açik sekilde L. paracasei CBA L74 kültür süpernatantinin peptit P31-43 girisini azalttigini göstermektedir.
P57-68”in P31-43'e yönelik sübstitüe edildigi benzer bir deneyin sonuçlari, Sekil 6'de gösterilmektedir. CaCoZ hücrelerinin canli L. paracasei' CBA L74 hücreleri ile isleme tabi tutulmasi tekrardan peptit P57-68 girisinde istatistiksel olarak belirgin bir azalma ile sonuçlanir (Sekil 6a). CaCoZ hücrelerinin canli L. paracasei' CBA L74 kültür süpernatanti ile isleme tabi tutulmasi benzer büyüklükteki bir azalma ile sonuçlanir. Bu deneye yönelik esodakli görüntüler Sekil öb'de gösterilmektedir. Bu görüntüler açik sekilde L. paracasei CBA L74 kültür süpernatantinin peptit P57-68 girisini azalttigini göstermektedir. Örnek 5: a-gliadin peptit girisi üzerinde isil islem görmüs L. paracasei CBA L74 kültür süpernatantinin etkisi (referans örnek) L. paracasei' CBA L74 kültür süpernatanti, Örnek 4'teki yönteme göre toplanir ve akabinde 3a dakika boyunca 37°'de veya 3a dakika boyunca 80°C'de isitilir. lsitilan süpernatantlar akabinde sogutulur ve P31-43 varliginda CacoZ hücrelerine uygulanir.
Sekil 7, isleme tabi tutulmamis süpernatant olan kontrol hücrelerine yönelik ortak numuneler üzerindeki bes bagimsiz deney, isitilmamis süpernatant ("37°C") ile isleme tabi tutulmus kontrol hücrelerine yönelik ortak numuneler üzerindeki bes bagimsiz deney ve isitilmis süpernatant ("80°C") ile isleme tabi tutulmus hücrelere yönelik ortak numuneler üzerindeki iki bagimsiz deneyin sonuçlarini gösterir. Floresans yogunlugu, her bir numunedeki 30 rastegele alana yönelik hesaplanir. Sekil 7'de gösterildigi üzere, 80°C'ye isitilmis süpernatant, isitilmamis süpernatantin CaC02 hücreleri içine peptit P31-43 girisini bloke etme yetenegini korumustur. Bu deneye yönelik esodakli görüntüler, Sekil 7'deki sag panelde gösterilmektedir. Bu görüntüler açik olarak, isil islem görmüs L. paracasei CBA L74 kültür süpernatantinin, peptit P31-43 girisini, isil islem görmemis L. paracasei CBA L74 kültür süpernatanti ile ayni kapsamda azalttigini gösterir. Birlikte ele alindiginda, bu veriler, L. paracasei CBA L74 kültür süpernatanti etkisinin, enzimatik aktivite dolayisiyla ortaya çikmadigini öne sürer. Örnek 6: ci-gliadin peptit girisi üzerinde L. paracasei CBA L74 fermente edilmis pirinç ve fermente edilmis yulaf etkisi L. paracasei CBA L74 fermente edilmis pirinç hazirlanir. Fermente edilmis pirinçten fermente edilmis pirinç süpernatanti veya fermente edilmis pirinçten isil islem görmüs süpernatant, peptit P31-43 varliginda CaC02 hücrelerine uygulanir ve peptit girisi, Örnek 2'deki yönteme göre izlenir. Sekil 8'de gösterildigi üzere, islemlerin üçü - fermente edilmis pirinç, fermente edilmis pirinçten alinan süpernatant veya fermente edilmis pirinçten alinan isil islem görmüs süpernatant - isleme tabi tutulmamis CaCoZ hücrelerine göre peptit girisini azaltir. Sekil 9'da gösterildigi üzere, fermente edilmis pirinç varliginda peptit P31-43 girisinin azaltilmasi, istatistiksel olarak belirgindir (sag koldaki çubuklar). Benzer, istatistiksel olarak belirgin bir etki, fermente edilmis yulaf varliginda gözlemlenir (sol koldaki çubuklar). Örnek 7: Cac02 hücreleri içine Dextran-Texas Kirmizisi girisi üzerinde L. paracasei CBA L74 fermente edilmis pirinç ve fermente edilmis yulafin etkisi L. paracasei CBA L74 fermente edilmis pirinç ve fermente edilmis yulaf hazirlanir. Sekil 'da gösterildigi üzere, CaCoZ hücrelerinin fermente edilmis pirinç veya fermente edilmis yulaf ile inkübasyonu, sirasiyla fermente edilmemis pirinç veya yulaf ile isleme tabi tutulan hücrelere göre, Dextran-Texas Kirmizisi hücre girisinde istatistiksel olarak belirgin bir azalma ile sonuçlanir. Dextran'in hücreler tarafindan genel olarak makropinositoz ile alinmasi nedeniyle, bu veriler, L. paracasei' CBA L74 metabolitlerinin makropinositik yolu bloke edebilecegini öne sürer. Örnek 8: Cac02 hücreleri içine epidermal büyüme faktörü (EGF) girisi üzerinde L. paracasei CBA L74 kültür süpernatantinin etkisi (referans örnek) L. paracasei CBA L74 kültür süpernatanti, Örnek 4'teki yönteme göre toplanir ve Alexa Fluor®- konjüge EGF (Invitrogen) varliginda Cac02 hücrelerine uygulanir. Sekil 11'deki çubuk grafiginde gösterildigi Üzere, CaCo2 hücrelerinin L. paracasei CBA L74 kültür süpernatanti ile isleme tabi tutulmasi, EGF hücre girisinde istatistiksel olarak belirgin bir azalma ile sonuçlanir. Bu deneye yönelik esodakli görüntüler, Sekil 12'de gösterilir.
EGF aliminin örnegin, bir EGF reseptörüne spesifik reseptör baglanmasi gerektirmesi nedeniyle, bu veriler, L. paracasei' CBA L74 metabolitlerinin, klatrin-aracili endositik yolu bloke edebilecegini öne sürer.
L74'ün konsantrasyona bagli etkisi Cac02 hücreleri, L. Paracasei CBA L74tün artan konsantrasyonlari ile isleme tabi tutulur ve akabinde, Örnek 1`de açiklandigi üzere gliadin peptitleri P31-43'iss veya P57- dakika maruz birakilma sonrasinda bir sitosolik dagilim ile birlikte kirmizi noktalar seklinde ortaya çikar. L. paracasei CBA L74 ile isleme tabi tutma, Caco-2 hücreleri içine P31-43 ve P57-68 girisinin her ikisinde doza bagli azalma ile sonuçlanir. Sekiller paracasei CBA L74 ile isleme tabi tutma, isleme tabi tutulmamis kontrol hücrelerinde görülene göre floresans yogunlugunda azalma ile sonuçlanir (Sekil 13a). Beyaz oklar, P31-431iss içeren vesikülleri belirtir. Bu sonuçlar, Sekil 14'te kantitatif olarak ifade edilir. Floresans yogunlugu, her bir numune için 30 rastgele alana yönelik hesaplanir.
Sekil 14'teki veriler, bes bagimsiz deneyi ifade eder. Sekil 14'teki çubuk grafigi, isleme tabi tutulmamis kontrol hücrelerine ("UN") yönelik floresans yogunlugunu, 104, 106 veya 108 cfu/ml L. paracasei CBA L74 hücresi varliginda P31-43'Iss'e maruz birakilan hücrelerinki ile karsilastirir. L. paracasei CBA L74 ile isleme tabi tutma, sirasiyla 104, yönelik floresans yogunlugunda %50, %70 ve %75 oraninda Istatistiksel olarak belirgin bir azalma ile sonuçlanir. cfu/ml L. paracasei CBA L74 ile isleme tabi tutma, isleme tabi tutulmamis kontrol hücrelerinde görülene göre floresans yogunlugunda bir azalma ile sonuçlanir (Sekil 15a). Beyaz oklar, P57-68'iss içeren vesikülleri belirtir. Bu sonuçlar, Sekil 16'da kantitatif olarak ifade edilir. Floresans yogunlugu, her bir numune için 30 rastgele alana yönelik hesaplanir. Sekil 16,daki veriler, bes bagimsiz deneyi ifade eder. Sekil 16'daki çubuk grafigi, isleme tabi tutulmamis kontrol hücrelerine ("UN") yönelik floresans 68'i55'e maruz birakilan hücrelerinki ile karsilastirir. L. paracasei CBA L74 ile isleme tabi tutma, sirasiyla yönelik floresans yogunlugunda %25, %25 ve %50 oraninda istatistiksel olarak belirgin oraninda floresans yogunlugunda azalma ile sonuçlanir.
Sekil 17'de gösterildigi üzere, 108 cfu/ml L. paracasei' CBA L74 ile isleme tabi tutma, azaltmistir. Bu veriler, olasi olarak farkli endositik yollari yansitmasi nedeniyle, L. daha etkili olabilecegini öne sürer.
CBA l74 süpernatantinin kosantrasyona bagli etkisi CacoZ hücreleri, Örnek 1'de açiklandigi gibi L. paracase/ CBA L74 süpernatanti veya L. paracasei CBA L74 DNA ile isleme tabi tutulur. CacoZ hücreleri, 30 dakika boyunca 108 cfu/ml esdegerindeki süpernatant veya DNA içinde inkübe edilir. Sekiller 18b ve 18c'de gösterildigi üzere, sirasiyla L. paracasei CBA L74 hücreleri veya L. paracasei' CBA L74 süpernatanti ile isleme tabi tutma, isleme tabi tutulmamis kontrol hücrelerinde görülene göre, P31-431iss'e maruz birakilan hücrelerde floresans yogunlugunun azalmasi ile sonuçlanir (Sekil 18a). Bu sonuçlar, Sekil 19'da kantitatif olarak ifade edilir.
Floresans yogunlugu, her bir numuneye yönelik 30 rastgele alan için hesaplanir. Sekil 19,daki veriler, bes bagimsiz deneyi ifade eder. Sekil 19'daki çubuk grafigi, isleme tabi tutulmamis kontrol hücrelerine ("UN") yönelik floresans yogunlugunu, 108 cfu/ml L. kültüründen alinan L. paracasei' CBA L74 süpernatanti ("Sup LP 108") varliginda P31- 43-"55'e maruz birakilan hücrelerinki ile karsilastirir. Sekil 19'da gösterildigi üzere. L. paracasei CBA L74 süpernatanti, Ca002 hücreleri içine P31-43 girisini, isleme tabi tutulmamis kontrol hücrelerine göre, floresans yogunlugunun azalmasi olarak ölçülmüs üzere, belirgin sekilde yaklasik olarak %25 azaltir (***=p<0.001).
Sekiller 20b ve 200'de gösterildigi üzere, sirasiyla L. paracasei' CBA L74 hücreleri veya L. paracasei' CBA L74 süpernatanti ile isleme tabi tutulma, isleme tabi tutulmamis kontrol hücrelerinde görülene göre, P57-68'iss'e maruz kalmis hücrelerde floresans yogunlugu azalmasi ile sonuçlanir (Sekil 20). Bu sonuçlar, Sekil 21'de kantitatif olarak ifade edilir. Sekil 21'deki çubuk grafigi, isleme tabi tutulmamis kontrol hücrelerine ("UN") yönelik floresans yogunlugunu, 108 cfu/ml L. paracasei CBA L74 hücresi ("LP süpernatanti ("Sup LP 108") varliginda P57-68'i33'e maruz birakilan hücrelerinki ile karsilastirir. Sekil 21'de gösterildigi üzere, L. paracasei' CBA L74 süpernatanti, Cac02 hücreleri içine P31-43 girisini, isleme tabi tutulmamis kontrol hücrelerine göre, floresans yogunlugunun azalmasi olarak ölçülmüs üzere, belirgin sekilde yaklasik Aksine, L. paracasei CBA L74'den alinan saflastirilmis DNA ile isleme tabi tutma, ele alindiginda, bu veriler, peptit girisini azaltilmasindan sorumlu metabolitin, bakteriyel kültür süpernatanti içine salgilanmis olabilecegini öne sürer. Örnek 11: CacoZ hücreleri içine EGF-Aiexa 488 girisi üzerinde L. paracasei CBA L74 süpernatantinin etkisi (referans örnek) Cac02 hücreleri, 1as cfu/ml L. paracasei CBA L74 kültüründen alinan L. paracasei CBA L74 süpernatanti ile isleme tabi tutulur, akabinde Örnek 1'de açiklandigi üzere 30 dakika boyunca EGF-Aiexa 488 ile inkübe edilir. Sekil 22b'de gösterildigi üzere, L. paracasei CBA L74 süpernatanti ile isleme tabi tutma, isleme tabi tutulmamis kontrol hücrelerinde görülene göre, EGF-Aiexa 488'e maruz birakilmis hücrelerde floresans yogunlugunda azalma ile sonuçlanir (Sekil 22a). Bu sonuçlar, Sekil 23`te kantitatif olarak ifade edilir. Floresans yogunlugu, her bir numune için 30 rastgele alana yönelik hesaplanir. Sekil 23'teki veriler, bes bagimsiz deneyi ifade eder. Sekil 23'teki çubuk grafigi, Isleme tabi tutulmamis kontrol hücrelerine (“UN") yönelik floresans yogunlugunu, L. paracasei' CBA L74 süpernatanti ("Sup LP 103") varliginda EGF-Aiexa 488'e maruz birakilan hücrelerinki ile karsilastirir. Sekil 23'te gösterildigi üzere, L. paracasei' CBA L74 süpernatanti, Cac02 hücreleri içine EGF-Aiexa 488 girisini, isleme tabi tutulmamis kontrol hücrelerine göre, floresans yogunlugunda azalma olarak hesaplanmis olmak üzere, yaklasik olarak %50 oraninda belirgin sekilde azaltir. EGF- Alexa 488 girisi, hücre membraninda (***=p<0,001) bloke edilmis gibi gözükür. Örnek 12: Süpernatant uzaklastirilmasi sonrasinda Cac02 hücreleri içine P31-43 girisi üzerinde L. paracasei CBA L74 süpernatantinin etkisi (referans örnek) Ca002 hücreleri, Örnek 1'de açiklandigi üzere 30 dakika boyunca bir 1as cfu/ml L. paracasei' CBA L74 kültüründen alinan L. paracasei CBA L74 süpernatanti ile inkübe edilir. L. paracasei CBA L74 süpernatanti akabinde uzaklastirilir ve DMEM ile degistirilir, P31-43'iSS eklenir ve peptit girisi, Örnek 1'de açiklandigi sekilde izlenir. Sekil 24c'de gösterildigi üzere, P31-43-Iiss girisi, the L. paracasei' CBA L74 süpernatantinin uzaklastirilmasi ve DMEM ile degistirilmesi sonrasinda dahi, isleme tabi tutulmamis kontrol hücrelerine göre (Sekil 24a) belirgin sekilde azalir. Sekil 24b, uzaklastirilmamis olan L. paracasei CBA L74 süpernatanti ile isleme tabi tutulmus olan Cac02 hücresini gösterir. Sekil 25'teki çubuk grafigi, floresans yogunlugunu Isleme tabi tutulmamis kontrol hücrelerine ("UN") yönelik karsilastirir; L. paracasei CBA L74 süpernatanti ("Sup LP 108") varliginda P31-43-"38'e maruz birakilmis hücreler ve L. paracasei CBA maruz birakilmis hücreler. Örnek 13: Cac02 hücreleri içine P31-43 girisi üzerinde isil islem görmüs L. paracasei CBA L74 süpernatantinin etkisi (referans örnek) CacoZ hücreleri, 5 dakika boyunca kaynatilarak veya 15 dakika boyunca 80°C'de inkübasyon ile isil isleme tabi tutulmus L. paracasei CBA L74 süpernatanti (108 cfu/ml L. paracasei CBA L74 kültüründen) ile inkübe edilir. P31-43-'iss girisi, Örnek 1'de açiklandigi sekilde tahlil edilir. Sekil 26d'de gösterildigi üzere, P31-4'3›-“ss girisi, L. paracasei CBA L74 süpernatantinin 80°C'ye isitilmasi sonrasinda dahi, isleme tabi tutulmamis kontrol hücrelerine (Sekil 24a) göre azalir. Aksine, P31-43-Iiss girisi, L. paracasei CBA L74 süpernatantinin 95 °C -100°C'ye isitilmasi durumunda, isleme tabi tutulmamis kontrol hücrelerine (Sekil 24a) göre belirgin sekilde azalmaz (Sekil 260).
Sekil 26b, isil islem görmemis olan L. paracasei' CBA L74 süpernatanti ile isleme tabi tutulan Ca002 hücrelerini gösterir. Sekil 27'deki çubuk grafigi, isleme tabi tutulmamis kontrol hücrelerine ("UN") yönelik floresans yogunlugunu karsilastirir; isil islem görmemis olan L. paracasei CBA L74 süpernatanti (“Sup LP 103) varliginda P31-43- isitilmis L. paracasei' CBA L74 süpernatanti varliginda P31-43-”55'e maruz birakilmis hücreler. Birlikte ele alindiginda, bu veriler, L. paracasei' CBA L74 süpernatanti içindeki biyolojik efektörün, enzimatik aktivitenin 80°C sicakliklarinda tipik olarak ortadan kalkmasi nedeniyle, bir enzim olmayabilecegini öne sürer (***=p<0.001).

Claims (1)

  1. ISTEMLER . Lactobaci'llus paracasei CBA L74, Uluslararasi Depozitör Erisim Numarasi LMG P-24778 içeren bir bilesim olup, özelligi söz konusu denegin intestinal mukozasi boyunca söz konusu gliadin peptitinin translokasyonuna yüksek bir bariyer saglayarak, gluten ile iliskili bir bozukluga sahip bir denekteki bir gliadin peptiti toksisitesi semptomunun azaltilmasinda kullanima yönelik olmasidir. . Istem 1'e göre kullanima yönelik bilesim olup, özelligi söz konusu bilesimin, Lactobacillus paracasei' CBA L74, Uluslararasi Depozitör Erisim Numarasi LMG P-24778'in bir kültürü olmasidir. . Istem 1'e göre kullanima yönelik bilesim olup, özelligi söz konusu bilesimin, canli veya yenilenmeyen Lactobaci/Ius paracasei CBA L74, Uluslararasi Depozitör Erisim Numarasi LMG P-24778 hücrelerinin bir kültürü olmasidir. . Istem 3'e göre kullanima yönelik bilesim olup, özelligi Lactobacillus paracasei CBA L74, Uluslararasi Depozitör Erisim Numarasi LMG P-24778'in yenilenmeyen kültürünün hücrelerinin ölü olmasidir. . Istem 1'e göre kullanima yönelik bilesim olup, özelligi söz konusu bilesimin, bir gliadin peptitinin hücresel girisini azaltmasidir. . Istem 1'e göre kullanima yönelik bilesim olup, özelligi gliadin peptitinin bir alfa- gliadin peptiti olmasidir. . Istem 6'ya göre kullanima yönelik bilesim olup, özelligi alfa-gliadin peptitinin, LGQQQPFPPQQPY (SEQ ID NO: 1); QLQPFPQPQLPY (SEO ID NO: 2); LGQQQPFPPQQPYPQPQPF (SEQ ID NO: 3); ve LQLQPFPQPQLPYPQPQLPYPQPQLPYPQPQPF'den (SEQ ID NO: 4) olusan grup içerisinden seçilen bir amino asit dizisine sahip olmasidir. . Istem 1'e göre kullanima yönelik bilesim olup, özelligi ayrica fizyolojik olarak kabul edilebilir bir tasiyici içermesidir. Istem 8'e göre kullanima yönelik bilesim olup, özelligi fizyolojik olarak kabul edilebilir tasiyicinin bir gida ürünü veya bir farmasötik tasiyici olmasidir. Istem 1'e göre kullanima yönelik bilesim olup. özelligi gluten ile iliskili bozuklugun, çölyak hastaligi veya gluten duyarliligi olmasidir. Istem 1'e göre kullanima yönelik bilesim olup, özelligi bilesimin bir gida ürünü veya bir farmasötik tasiyici içermesidir. Istem 1'e göre kullanima yönelik bilesim olup, özelligi gliadin peptiti toksisitesinin semptomunun, enflamasyon, bir otoimmün reaksiyon, bir gastrointestinal semptom, kilo kaybi, anemi, osteoporoz, artrit, kisirlik, periferal nöropati veya karaciger yetmezligi içermesidir. Istemler 1 ila 12'den herhangi birine göre bilesimin ölçülmüs bir miktarini içeren bir kit olup, özelligi gluten ile iliskili bir bozukluga sahip bir denekte gliadin peptiti toksisitesinin bir semptomunun azaltilmasinda kullanima yönelik olmasidir ve burada, söz konusu kit, paketleme malzemesi, kullanima yönelik talimatlar içeren bir kullanma talimati, bir steril sivi, bir siringa ve bir steril konteynerden olusan bir gruptan seçilen bir veya daha fazla nesne içerir. Istem 13'teki kit olup, özelligi bilesimin ayrica bir gida ürünü veya bir farmasötik tasiyici içermesidir.
TR2018/14973T 2012-06-18 2013-06-18 Gluten ile ilgili bozukluklar. TR201814973T4 (tr)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261661105P 2012-06-18 2012-06-18
US201261725693P 2012-11-13 2012-11-13

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TR201814973T4 true TR201814973T4 (tr) 2018-11-21

Family

ID=49769279

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TR2018/14973T TR201814973T4 (tr) 2012-06-18 2013-06-18 Gluten ile ilgili bozukluklar.

Country Status (16)

Country Link
US (1) US10245300B2 (tr)
EP (3) EP3351554B1 (tr)
CN (1) CN104661671B (tr)
AU (2) AU2013277316B2 (tr)
BR (1) BR112014031666B1 (tr)
CA (1) CA2876963C (tr)
DK (2) DK2861242T3 (tr)
ES (2) ES2883552T3 (tr)
IN (1) IN2014DN10798A (tr)
MX (1) MX363899B (tr)
NZ (1) NZ702936A (tr)
PL (2) PL2861242T3 (tr)
PT (2) PT2861242T (tr)
RU (1) RU2654705C2 (tr)
TR (1) TR201814973T4 (tr)
WO (1) WO2013192163A1 (tr)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3366143A1 (en) 2011-06-20 2018-08-29 H.J. Heinz Company Brands LLC Probiotic compositions and methods
DK2994150T3 (da) 2013-05-10 2019-06-11 Heinz Co Brands H J Llc Probiotika og fremgangsmåde til anvendelse
RU2763311C2 (ru) * 2017-01-12 2021-12-28 Проби Аб Пробиотические композиции и их применение
CN108567800A (zh) * 2017-03-07 2018-09-25 景岳生物科技股份有限公司 副干酪乳杆菌菌株gmnl-653用于制备抗骨质流失的组合物的用途
KR102244007B1 (ko) * 2019-02-14 2021-04-23 주식회사 메디뉴트롤 글루텐 분해능을 가지는 락토바실러스 파라카제이 glu70 균주를 유효성분으로 함유하는 글리아딘으로 야기된 염증성 장 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물

Family Cites Families (31)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US1003929A (en) 1911-04-04 1911-09-19 Jacob T Lutz Trace-carrier.
EP0130228A1 (en) 1983-07-01 1985-01-09 Microlife Technics, Inc. Fermentation method using a selected lactobacillus
RU2134583C1 (ru) 1996-02-29 1999-08-20 Санкт-Петербургская государственная педиатрическая медицинская академия Способ санации женщин с массивной микробной обсемененностью грудного молока
WO1997049303A1 (en) 1996-06-21 1997-12-31 Quest International B.V. Fermentation of fruit products
SE510813C2 (sv) 1997-12-08 1999-06-28 Arla Ekonomisk Foerening Bakteriestam av arten Lactobacillus Paracasei subsp. paracasei, sammansättning därav för användning i livsmedel, samt produkt innehållande stammen
EP1034787A1 (en) 1999-03-11 2000-09-13 Société des Produits Nestlé S.A. Lactobacillus strains preventing diarrhea caused by pathogenic bacteria
FI110668B (fi) 2000-06-20 2003-03-14 Aboatech Ab Oy Probioottien käyttö atooppisten sairauksien primaariseen ehkäisyyn
SE0003100D0 (sv) 2000-09-01 2000-09-01 Probi Ab New strains
KR100419132B1 (ko) 2000-12-29 2004-02-18 조성근 위·장 점막 부착성과 증식성, 내산성, 내담즙성 및헬리코박터 파일로리, 대장균 0157:ｈ7에 대한 항균성이우수한 락토바실러스 파라카제이 서브스패시즈 파라카제이ｃｓｋ 01
ATE505201T1 (de) 2002-02-14 2011-04-15 Univ Leland Stanford Junior Enzymbehandlung von nahrungsmitteln für zöliakie- sprue
EP1364586A1 (en) 2002-05-24 2003-11-26 Nestec S.A. Probiotics and oral tolerance
DE60322570D1 (de) 2002-06-28 2008-09-11 Puleva Biotech Sa Probiotische stämme, verfahren zur ihren selektion, diese enthaltende zusammensetzungen und ihre verwendung
US7955834B2 (en) 2004-06-03 2011-06-07 Biogaia Ab Method for improved breast milk feeding to reduce the risk of allergy
AU2006323689B2 (en) 2005-12-08 2012-11-08 Kirin Holdings Kabushiki Kaisha Isohumulone compound clathrate and composition containing the same
CA2690058A1 (en) 2006-06-09 2007-12-13 9205-5961 Quebec Inc. Fermented probiotic beverages and uses thereof
DK1893033T3 (da) 2006-07-07 2009-01-05 Alpro Nv Fremgangsmåde til fremstilling af en mælkeproduktanalog
CN101451158A (zh) 2007-12-04 2009-06-10 黑龙江大学 副干酪乳杆菌产生的抗菌肽的分离纯化方法
EP2110027A1 (en) 2008-04-01 2009-10-21 Nestec S.A. Long-chain polyunsaturated fatty acids (LC-PUFA) in maternal nutrition during pregnancy and lactation
CA2725051A1 (en) 2008-05-27 2009-12-03 Nestec S.A. Probiotics to improve gut microbiota
EP2138187A1 (en) 2008-06-24 2009-12-30 Nestec S.A. Probiotics, secretory IgA and infection
US20100196341A1 (en) 2009-02-05 2010-08-05 Syngen Biotech Co., Ltd. Novel Lactobacillus paracasei subsp. paracasei SG96, a Bacteriostatic Composition Containing the same and Use Thereof
EP2308498A1 (en) 2009-09-30 2011-04-13 Nestec S.A. Administration of Bifidobacterium breve during infancy to prevent inflammation later in life
US20130121976A1 (en) * 2010-03-12 2013-05-16 Agusti Montserrat Carreras Lactic Acid Bacteria for Coeliac Disease
CN102021127B (zh) 2010-07-28 2012-05-30 江南大学 一株副干酪乳杆菌及其应用
EP2449891A1 (en) 2010-11-05 2012-05-09 Nestec S.A. Drinking yoghurt preparations containing non-replicating probiotic micro-organisms
EP2449890A1 (en) 2010-11-05 2012-05-09 Nestec S.A. Powdered cereal compositions comprising non-replicating probiotic microorganisms
EP2455094A1 (en) 2010-11-11 2012-05-23 Nestec S.A. Non-replicating probiotic micro-organisms protect children against gastrointestinal infections
EP2510932A1 (en) 2011-04-15 2012-10-17 Nestec S.A. Lactobacillus paracasei NCC2461 (ST11) for use by perinatal maternal administration in the reduction and prevention of allergies in progeny
EP3366143A1 (en) 2011-06-20 2018-08-29 H.J. Heinz Company Brands LLC Probiotic compositions and methods
WO2013048654A1 (en) 2011-09-28 2013-04-04 Phillips 66 Company Composite solid oxide fuel cell electrolyte
DK2994150T3 (da) 2013-05-10 2019-06-11 Heinz Co Brands H J Llc Probiotika og fremgangsmåde til anvendelse

Also Published As

Publication number Publication date
EP2861242B1 (en) 2018-08-08
RU2654705C2 (ru) 2018-05-22
EP3351554B1 (en) 2021-06-09
ES2883552T3 (es) 2021-12-09
BR112014031666A2 (pt) 2017-10-31
BR112014031666B1 (pt) 2022-10-04
IN2014DN10798A (tr) 2015-09-04
AU2013277316A1 (en) 2015-01-22
WO2013192163A1 (en) 2013-12-27
EP3901164A1 (en) 2021-10-27
NZ702936A (en) 2017-06-30
DK3351554T3 (da) 2021-08-30
PT2861242T (pt) 2018-11-07
CN104661671B (zh) 2020-10-23
US10245300B2 (en) 2019-04-02
CA2876963C (en) 2021-07-06
CN104661671A (zh) 2015-05-27
EP2861242A4 (en) 2016-01-20
MX363899B (es) 2019-04-05
EP3351554A1 (en) 2018-07-25
AU2013277316B2 (en) 2018-03-01
EP2861242A1 (en) 2015-04-22
MX2014015314A (es) 2015-10-29
DK2861242T3 (en) 2018-10-29
PT3351554T (pt) 2021-08-06
AU2018203543A1 (en) 2018-06-07
ES2691087T3 (es) 2018-11-23
CA2876963A1 (en) 2013-12-27
US20150174199A1 (en) 2015-06-25
PL3351554T3 (pl) 2021-11-15
RU2014150934A (ru) 2016-08-10
PL2861242T3 (pl) 2019-04-30
AU2018203543B2 (en) 2020-02-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2018203543B2 (en) Gluten-related disorders
DK2734049T3 (en) PROBIOTIC COMPOSITIONS AND PROCEDURES
JP5791009B2 (ja) 乳酸菌およびそれらを用いた飲食物又は化粧品
KR101778734B1 (ko) 비피도박테리움 롱검 kacc 91563으로부터 분리된 esbp 및 이를 이용한 항알레르기 조성물
Jiang et al. Neuroprotective effects of fermented yak milk-derived peptide LYLKPR on H 2 O 2-injured HT-22 cells
US11312754B2 (en) Sunflower seed protein-derived peptides
JP6846376B2 (ja) 皮膚状態改善用組成物
JP2018083764A (ja) ハマアザミ抽出物を含有する免疫調節用組成物
WO2007034958A1 (ja) 穀類由来の成分を有効成分とする血管新生阻害の作用を有する組成物
AU2017235999B2 (en) Probiotic compositions and methods
JP2010158216A (ja) 免疫調節作用を有する乳酸菌
Abdou et al. Lysozyme under holder pasteurized denaturation enhance the antioxidant's stability and quality attributes of functional yogurt
TWI374747B (en) Modulation of immune response by oral consumption of flammulina velutipes products
NZ619099B2 (en) Probiotic compositions and methods