TR201810207T4 - Enac aracılı hastalıkların tedavisine yönelik 3,4-diamino-6-kloropirazin-2-karboksamid bileşikleri. - Google Patents

Enac aracılı hastalıkların tedavisine yönelik 3,4-diamino-6-kloropirazin-2-karboksamid bileşikleri. Download PDF

Info

Publication number
TR201810207T4
TR201810207T4 TR2018/10207T TR201810207T TR201810207T4 TR 201810207 T4 TR201810207 T4 TR 201810207T4 TR 2018/10207 T TR2018/10207 T TR 2018/10207T TR 201810207 T TR201810207 T TR 201810207T TR 201810207 T4 TR201810207 T4 TR 201810207T4
Authority
TR
Turkey
Prior art keywords
amino
methylbenzyl
propyl
compound
carboxamide
Prior art date
Application number
TR2018/10207T
Other languages
English (en)
Inventor
Susanne Berglund Elisabeth
Connolly Stephen
Hemmerling Martin
Hossain Nafizal
Kristoffersson Anna
Rune Johan Lundkvist Michael
Nikitidis Grigorios
Lena Ripa Elisabeth
Shamovsky Igor
Original Assignee
Astrazeneca Ab
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Astrazeneca Ab filed Critical Astrazeneca Ab
Publication of TR201810207T4 publication Critical patent/TR201810207T4/tr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/4965—Non-condensed pyrazines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/4965—Non-condensed pyrazines
    • A61K31/497—Non-condensed pyrazines containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/12—Drugs for disorders of the metabolism for electrolyte homeostasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D241/00—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings
    • C07D241/02—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D241/10—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D241/14—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D241/24—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D241/26—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals with nitrogen atoms directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D241/00—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings
    • C07D241/02—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D241/10—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D241/14—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D241/24—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D241/26—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals with nitrogen atoms directly attached to ring carbon atoms
    • C07D241/28—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals with nitrogen atoms directly attached to ring carbon atoms in which said hetero-bound carbon atoms have double bonds to oxygen, sulfur or nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings

Abstract

Mevcut buluş, bir formüle (I) ait bir bileşik. veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu; bu tür bir bileşiğin hazırlanmasına yönelik bir proses; ve bir ENaC aracılı hastalık durumunun (astım, CF veya COPD gibi) tedavisinde bu tür bir bileşiğin kullanımı ile ilgilidir.

Description

TARIFNAME ENAC ARACILI HASTALIKLARIN TEDAVISINE YÖNELIK 3,4-DIAMINO-6- KLOROPIRAZIN-2-KARBOKSAMID BILESIKLERI Mevcut bulus, farmasötik aktiviteye sahip pirazin deriveleri, bu tür derivelerin hazirlanmasina yönelik prosesler, bu tür deriveleri içeren farmasötik bilesimler ve aktif terapötik ajanlar olarak bu tür derivelerin kullanimi ile ilgilidir.
Akciger havayolu epitelyumunun hidrasyonu, etkili siliyer fonksiyonunu saglar ve mukosiliyer klirens (MCC), önemli bir birinci basamak dogustan savunma mekanizmasidir. Yeterli mukus klirensinin saglanamamasi. mukus dolasiminin yavaslamasi ve havayolu obstrüksiyonu riskini olusturur ve kronik bakteriyel enfeksiyona yatkindir. Mukus hipersekresyonu, mukus kalinlasmasi ve düsük mukosiliyer klirens oranlari, hem Kistik Fibroz (CF) hem de Kronik Obstrüktif Akciger Hastaligi (COPD) patofizyolojisinin iyi belirlenmis karakteristikleridir ve hastaliklarin morbiditesi ve mortalitesine önemli ölçüde katkida bulunur. Yetersiz MCC, statik mukus ile havayolunun tikanmasina yol açar, bu akciger fonksiyonunu bozar ve bakteriyel kolonizasyonu kolaylastiran ve hastalik alevlenmelerinin oranini ve siddetini arttiran enfeksiyon Için bir nidus görevi görür.
CF patofizyolojisi iyi karakterize edilir ve havayolu dehidrasyonuna yol açan kistik fibroz transmembran iletkenlik regülatör (CFTR) genindeki mutasyonlardan kaynaklanir ve dünya çapinda en yaygin ölümcül kalitsal bozukluklarin biri olmaya devam eder. CF kompleks bir çoklu organ hastaligi olmasina ragmen morbidite ve mortalite çogunlukla küçük havayollarinda erken baslangiçli mukus tikanmasi, kronik nötrofilik havayolu inflamasyonu ve bakteriyel enfeksiyonundan baslayan kronik Obstrüktif akciger hastaligi ile belirlenir.
COPD patofizyolojisi komplekstir ve yetersiz sekilde anlasilir. Mevcut klinik kilavuzlar, COPD'yi tam olarak geri çevrilemeyen hava akimi kisitliligi ile karakterize edilen bir hastalik durumu olarak açiklar. Hava akimi sinirlamasi genellikle ilerleyicidir ve akcigerlerin zararli partiküller ve gazlara anormal bir inflamatuvar yaniti ile iliskilidir. Bu tür partiküller ve gazlarin en önemli katki kaynagi türün dumanidir. COPD hastalari öksürük, nefes kisaligi ve asiri salya üretimi dahil çesitli semptomlara sahiptir; bu tür semptomlar nötrofiller, makrofajlar ve epitelyal hücreler dahil olmak üzere birkaç hücresel kompartimanin fonksiyon bozuklugundan kaynaklanir.
Yeterli havayolu hidrasyonu, mukusun MCC ve uygun su içeriginin muhafaza edilmesi için kilit öneme sahiptir. Havayolu hidrasyonunun regülasyonu güçlü sekilde epitelyal hücre katmani boyunca elektrolit ve su hareketine baglidir. Siliayi çevreleyen havayolu epitelyal yüzey üzerindeki perisiler sivi (PCL), viskoz mukus katmanini epitelyal yüzeyden ayirir ve siliyer atisini kolaylastirir. PCL hacmi/derinliginin MCC oraninin güçlü bir belirleyici olarak gösterilmistir.
ENaC (Epitelyal Sodyum Kanali), solunum, üriner, sindirim, genital sistemler ve cildin epitelyumunda yaygin sekilde ifade edilen amilorid duyarli, voltaja bagimli olmayan bir iyon kanalidir. Sistemik olarak ENaC, böbrek epitelyumu boyunca Na+ naklinin düzenlenmesi yoluyla elektrolit hemostaz ve sivi hacmi dengesinde önemli bir rol oynar. Sodyum naklinin kontrolü yoluyla ENaC, havayolu epitelyumu boyunca ozmotik gradyani kontrol eder ve böylelikle PCL hacmini regüle eder. ENaC aracili sodyum naklinin bloke edilmesi, epitelyum boyunca ozmotik gradyanini azaltir, havayolu yüzeyi üzerinde su tutulumuna (artan PCL hacmi) ve mukus hidrasyonu ve MCC oraninin yükselmesine yol açar.
Havayolu yüzey sivisi (ASL) hacminin ve mukosiliyer klirensin (MCC) in vivo önemli bir regülatörü olarak ENaC'ye yönelik bir rol literatürde belirlenir. Sirasiyla 0- [3- ve y-ENaC (-/-) fareleri üzerindeki çalismalar ENaC fonksiyonunun perinatal akciger sivi artmis havayolu Na* absorpsiyonu, ASL hacim deplesyonu, mukus dehidrasyonu ve gecikmeli MCC gösterir. Fareler, mukus obstrüksiyonu, goblet hücresi metaplazi, nötrofilik inflamasyon, defektif bakteriyel klirens ve amfizem dahil olmak üzere CF ve COPD'ye benzer klinik özelliklere sahip ciddi akciger hastaligi gelistirir (Mall et al., Yasamlarinin ilk 20 günü boyunca transgenikler arasindaki mortalite orani, asfeksi ile sonuçlanan havayollarinin yogun mukus birikimi nedeniyle yaklasik %SO'dir ancak mortalite, dogumdan önce 14 gün farelerin akcigerlerine amilorid uygulanmasi yoluyla önemli ölçüde azaltilir (Mall et al., ATS Poster abstract #G55, 2008).
Ek olarak 0- [3- ve y-ENaC kodlayan genlerdeki fonksiyon kaybi mutasyonlarindan kaynaklanan bir hastalik olan Psödohipoaldosteronizm 1'e (PHA1) sahip insanlar yüksek ASL hacmi ve bir MCC yukari regülasyonu gösterir (Kerem et al., N. Engl. tedavisi ASL hacmini ve MCC oranlarini arttirir (Sood et al., Am. J. Crit. Care Med., Amilorid ve benzamil, epitelyal sodyum kanalini bloke etmek üzere bilinen farmasötik olarak aktif pirazin deriveleridir.
Güçlü insan ENaC bloke edici aktiviteye sahip kuaterner amin bilesikleri ve d-dallanmis kuaterner amin bilesikleri bilinir (Hunt et al. Bioorg Med Chem Lett, 2012, 22(2) & 22(8)).
Kisaca bu spesifikasyon, kismen, bir formül (l) bilesigini veya farmasötik olarak kabul x-icw. -N\ izii R1 hidrojen veya C1.4 alkilden seçilir; m, 1 veya 2'dir; A fenil veya heterosiklilden seçilir; X, -C(=O)-, -C(=O)-NR4- veya -O-C(=O)-NR5-'ten seçilir; n, 2 veya 3'tür; R2 hidrojen veya 01.8 alkilden seçilir; R3 05-6 alkil-OH'dir, burada söz konusu 05-6 alkil grubu ayrica ek bir 3 veya 4 - OH grubu ile sübstitüe edilir; ve R4 ve R5 hidrojen veya CM alkilden seçilir.
Bu spesifikasyon ayrica kismen, bir formül (I) bilesigi veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunu ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir adjuvan, seyreltici veya tasiyici içeren farmasötik bilesimleri açiklar.
Bu spesifikasyon ayrica kismen, terapide kullanima yönelik bir formül (l) bilesigi veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunu açiklar.
Bu spesifikasyon ayrica kismen, bir ENaC aracili hastalik durumunun tedavisi veya önlenmesine yönelik bir formül (I) bilesigi veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunu açiklar.
Bu spesifikasyon ayrica kismen, bir ENaC aracili hastalik durumunun tedavisi veya önlenmesine yönelik bir ilacin üretiminde bir formül (I) bilesigi veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunu açiklar.
Bu spesifikasyon ayrica kismen, söz konusu hastaliktan muzdarip olan veya riski altindaki bir memelideki bir ENaC aracili hastalik durumunun tedavi edilmesi veya önlenmesine yönelik bir yöntemi açiklar, bu bir formül (l) bilesigi veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunun terapötik olarak etkili bir miktarinim bu tür tedaviye ihtiyaci olan bir memeliye uygulanmasini içerir.
Bulusun diger açilari bu spesifikasyonun okunmasi ile teknikte uzman kisi için görünür olacaktir.
Bulusa ait bilesikler, tuz formunda veya tuz disi formunda (diger bir ifadeyle bir serbest baz olarak) bulunabilir ve mevcut bulus, tuz formlari ve tuz disi formlarinin her ikisini de Bu spesifikasyonda açiklanan bilesikler asit ilave tuzlarini olusturabilir. Genellikle bir asit ilave tuzu çesitli inorganik veya organik tuzlari kullanilarak hazirlanabilir. Bu tür tuzlar tipik olarak örnegin teknikte bilinen çesitli yöntemler kullanilarak bilesigin bir asit (örnegin bir asidin bir stokiyometrik miktari) ile karistirilmasi ile olusturulabilir. Bu karistirma islemi su, bir organik solvent (örnegin eter, etil asetat, etanol, metanol, izopropanol veya asetonitril) veya bir aköz/organik karisim içinde meydana gelebilir.
Bulusun bir diger açisinda asit ilave tuzlari örnegin trifloroasetat, format, asetat veya hidrokloriktir.
Uzman kisi örnegin Berge et al., J. Pharm. Sci., 66. 1-19 (1977) içerisinde açiklananlar gibi farmasötik tuzlarin hazirlanmasina yönelik genel prensipler ve teknikleri bileceklerdir.
Bu spesifikasyonda açiklanan bilesikler ve tuzlar bir veya daha fazla kiral (diger bir ifadeyle asimetrik) merkez içerebilir. Bu spesifikasyondaki bir yapi veya kimyasal adin kiralite göstermedigi ölçüde, yapi veya adin stereoizomerlerin herhangi bir karisiminin (örnegin bir rasemat) yani sira bu yapi veya ada karsilik gelen herhangi bir tek stereoizomeri (diger bir ifadeyle herhangi bir tek kiral izomer) kapsamasi tasarlanir.
Bazi düzenlemelerde tek bir stereoizomer, örnegin kiral kromatografik ayirma islemi kullanilarak bunun bir izomer karisimindan (örnegin bir rasemat) izole edilmesi ile izole edilir. Diger düzenlemelerde tek bir stereoizomer, örnegin bir kiral baslangiç materyalinden dogrudan sentez yoluyla elde edilir.
Kati kristalin formda oldugunda bir formül (l) bilesigi, bir diger kimyasal varlik ile bir es- kristal formunda olabilir ve bulus, bu tür tüm es-kristalleri içerir.
Bulus bilesikleri çözünmemis formlarin yani sira bir solvat (bir hidrat gibi) olarak bulunabilir ve mevcut bulus bu tür tüm solvatlari içerir.
Bu spesifikasyonda açiklanan bilesikler ve tuzlar çesitli totomerik formlarda bulunabilir ve bulus, bu tür tüm totomerik formlari içerir. “Totomerler”, bir hidrojen atomundan ortaya çikan dengede mevcut olan yapisal izomerlerdir.
Bu spesifikasyonda açiklanan bilesikler ve tuzlar, Izotopikal olarak etiketlenmis (veya bulunan atomik kütle veya kütle numarasindan farkli bir atomik kütle veya kütle numarasina sahip bir atom ile degistirilir. Dahil edilebilen radyonüklidlerin örnekleri 2H (ayrica döteryum için "D" olarak bilinir), 3H (ayrica trityum için "T" olarak bilinir), ”C, derivenin spesifik uygulanmasina bagli olacaktir. Örnegin in vitro reseptör etiketleme ve rekabet analizleri için 3H veya 14C genellikle faydalidir. Radyo görüntüleme uygulamalarina yönelik olarak genellikle 11C faydalidir. Bazi düzenlemelerde radyonüklit 3H'dir. Bazi düzenlemelerde radyonüklit 14C'dir. Bazi düzenlemelerde radyonüklit 11C'dir.
Alkil gruplari ve kisimlar düz veya dallanmis zincirli, örnegin CH; alkil, 01-6 alkil, C1_4 alkil veya 05.6 alkildir. Alkil gruplarinin örnekleri metil, etil, n-propil, izo-propil, n-bütil, t- bütil, n-pentil, n-hekzil, n-heptil ve n-oktil, örnegin metil veya n-hekzildir.
Heterosiklil, nitrojen, oksijen veya sülfürden bagimsiz olarak seçilen bir veya iki heteroatom veya bir N-oksidi veya bir S-oksidi veya S-dioksidi içeren aromatik olmayan bir 5 veya 6 üyeli halkadir. Bir heterosiklil örnegi bir veya iki nitrojen atomlarini veya bir N-oksidini veya bir S-oksidini veya S-dioksidini, örnegin pirolidinil veya piperidinil, örnegin piperidin-4-il içeren aromatik olmayan bir 5 veya 6 üyeli halkadir. Süpheye yer vermemek adina heterosiklil halkasi üzerindeki sübstitüentler, bir karbon atomu veya bir heteroatom vasitasiyla baglanabilir. bir kismi (örnegin bir tuz, dozaj formu veya eksipiyan) karakterize etmek üzere kullanilir.
Belirli bir açida R1, formülün (I) geri kalanina baglanma noktasina göre 2 pozisyonunda fenil grubuna sübstitüe edilir.
Ilave bir açida R1, 01.4 alkildir.
Ilave bir açida R1, metildir.
Ilave bir açida m, 1'dir.
Yine ilave bir açida A, fenil veya piperidinilden seçilir.
Ilave bir açida A, fenildir.
Ilave bir açida A, piperidinildir.
Bir diger açida X, -C(=O)-NR4-'tür.
Ilave bir açida X, -C(=O)-NH-“dir.
X grubunun -C(=O)-NR4- oldugu bir açida daha sonra X'e ait karbonil A'ya ve X'e ait amino grubunun (CH2)n”ye baglanir. X grubunun -C(=O)-NR4- oldugu bir diger açida X'e ait amino grubu Alya ve X'e ait karbonil grubu (CH2)n'ye baglanir.
X grubunun -O-C(=O)-NR5- oldugu bir açida daha sonra X'e ait eter oksijen A'ya ve X'e ait amino grubu (CH2)n'ye baglanir. X grubunun -O-C(=O)-NR5- oldugu bir diger açida daha sonra X”e ait amino grubu Alya ve X`e ait eter oksijen (CH2)n”ye baglanir.
Bir diger açida X grubu, formül (I) bilesiginin geri kalanina baglanma noktasina göre 4 pozisyonunda A grubuna sübstitüe edilir.
Bir diger açida n, 2'dir.
Ilave bir açida R2, 01-8 alkildir.
Yine Ilave bir açida R2, n-hekzildir.
Bir diger açida R3, C5 alkil-OH'dir, burada söz konusu C5 alkil grubu ek bir 3 -OH grubu ile ayrica sübstitüe edilir.
Bir diger açida R3, Ce alkil-OH'dir, burada söz konusu Cs alkil grubu ek bir 4 -OH grubu ile ayrica sübstitüe edilir.
Ilave bir açida R3, asagidakilerden seçilir: Bir diger açida R3, asagidakilerden seçilir: Ilave bir açida R3, asagidakilerden seçilir: 2,3,4,5-tetrahidroksipentilden seçilir pentahidroksihekzil veya (2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksihekzilden seçilir.
Bir diger açida R5, hidrojendir.
Ilave bir açida R1, 01.4 alkildir; m, 1 veya 2`dir; A fenil veya piperidinildir; X, -C(=O)-, - C(=O)-NR4- veya -O-C(=O)-NR5-'ten seçilir; n, 2 veya 3'tür; R2, hidrojen veya CH; alkildir; R3, C5-6 alkil-OH'dir, burada söz konusu CM alkil grubu, ek bir 3 veya 4 -OH grubu ile ayrica sübstitüe edilir; ve R4 ve R5 her ikisi hidrojendir.
Ilave bir açida R1, CM alkildir; m, 1'dir; A fenil veya piperidinildir; X, -C(=O)-NH-'dir; ri 2'dir; R2' 01.8 alkildir; R3, asagidakilerden seçilir: Ilave bir açida R1, C1_4 alkildir; m, 1'dir; A fenildir; X -C(=O)-NH-'dir; n, 2'dir; R2' Ci-s alkildir; ve R3, asagidakilerden seçilir: Bulusun ilave bir açisinda bulusa ait bilesikler, asagidaki formülde (la) bir yildiz isareti (*) ile isaretlenen karbon merkezinde R stereokimyasini sergiler:0 X-ijCHî'i.i -N\ ijla) Bulusa ait bir bilesigin veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunun bir örnegi asagidakidir: tetrahidroksipentil)amino)pr0panoil)piperidin-4-il)metil)amin0)propil)pirazin-2- karboksamid; tetrahidroksipentil)amin0)etil)karbam0il)benzil)amino)-2-(2- metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid; pentahidroksihekzil)amin0)etilkarbamoil)piperidin-4-II)metilamin0)-2-(2- metilbenzil)pr0pil)pirazin-2-karboksamid; pentahidroksihekzil)amino)pr0pa noil)piperidin-4-il)metilamin0)-2-(2- metilbenzil)propil)pirazin-2-karb0ksamid; tetrahidroksipentil)amin0)pr0panoil)piperidin-4-il)metilamino)-2-(2- metilbenzil)pr0pil)pirazin-2-karboksamid; 3,5-diamino-ö-kloro-N-(S-((1-(4-(hekzil(2,3,4,5,6- pentahidroksihekzil)amin0)bütan0il)piperidin-4-il)metilamino)-2-(2- metilbenzil)pr0pil)pirazin-2-karboksamid ; pentahidroksihekzilamin0)propanoil)piperidin-4-il)metilamin0)propil)pirazin-2- karboksamid; pentahidroksihekzil)amino)propa noil)piperidIn-4-II)metilamin0)-2-(2- metilbenzil)pr0piI)pirazin-2-karboksamid; pentahidroksihekzil)amino)etil)karbam0il)benzil)amin0)-2-(2- metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid; pentahidroksihekzil)amino)etil)karbam0il)benzil)amin0)-2-(2- metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid; 4-((3-(3,5-diamino-ö-kloropirazin-2-karboksamido)-2-(2- metilbenzil)pr0pilamin0)metil)feniI 2-(hekzil(2,3,4,5,8- pentahidroksihekzil)amino)etilkarbamat; pentahidroksihekzil)amino)etil)karbamoil)fenetil)amin0)-2-(2- metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid; tetrahidroksipentil)amin0)etil)karbam0il)fenetil)amino)-2-(2- metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid; tetrahidroksipentil)amin0)etil)karbam0il)benzil)amin0)-2-(2- metilbenzil)pr0pil)pirazin-2-karboksamid; pentahidroksihekzil)amino)etilkarbamoil)fenetilamin0)-2-(2- metilbenzil)propil)pirazin-2-karb0ksamid.
Bulusa ait bir bilesigin veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunun ilave bir örnegi asagidakidir: tetrahidroksipentil)amin0)pr0pan0il)piperidin-4-il)metiI)amin0)pr0pil)pirazin-2- karboksamid; tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2- metilbenzil)pr0pil)pirazin-2-karboksamid; pentahidroksihekzil)amino)etilkarbamoil)piperidin-4-Il)metilamino)-2-(2- metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid; pentahidroksihekzil)amino)propan0il)piperidin-4-il)metilamino)-2-(2- metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid; tetrahidroksipentil)amin0)pr0panoil)piperidin-4-il)metilamin0)-2-(2- metilbenzil)pr0pil)pirazin-2-karboksamid; pentahidroksihekzil)amino)bütan0il)piperidin-4-il)metilamin0)-2-(2- metilbenzil)propil)pirazin-2-karb0ksamid; pentahidroksihekzilamin0)pr0panoil)piperidin-4-il)metilamin0)propil)pirazin-2- karboksamid; pentahidroksihekzil)amino)propa noil)piperidin-4-iI)metilamin0)-2-(2- metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid; pentahidroksihekzil)amin0)etil)karbam0il)benzil)amin0)-2-(2- metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid; pentahidroksihekzil)amino)etil)karbam0il)benzil)amin0)-2-(2- metilbenzil)propil)pirazin-2-karb0ksamid; pentahidroksihekzil)amino)etilkarbamat; pentahidroksihekzil)amin0)etil)karbam0iI)fenetil)amino)-2-(2- metilbenzil)pr0pil)pirazin-2-karboksamid ; tetrahidroksipentil)amino)etil)karbam0il)fenetil)amin0)-2-(2- metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid; tetrahidroksipentil)amin0)etil)karbam0il)benzil)amin0)-2-(2- metilbenzil)pr0piI)pirazin-2-karboksamid; pentahidroksihekzil)amino)etilkarbamoil)fenetilamin0)-2-(2- metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid.
Bulusa ait bir bilesigin veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunun ilave bir örnegi asagidakidir: tetrahidroksipentil)amino)pr0pan0il)piperidin-4-il)metiI)amin0)pr0pil)pirazin-2- karboksamid; tetrahidroksipentil)amin0)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2- metilbenzil)pr0pil)pirazin-2-karb0ksamid; pentahidroksihekzil)amino)etilkarbamoil)piperidin-4-iI)metilamino)-2-(2- metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid; pentahidroksihekzil)amin0)pr0pa noil)piperidin-4-II)metilamin0)-2-(2- metilbenzil)pr0pil)pirazin-2-karboksamid; tetrahidroksipentil)amin0)pr0pan0il)piperidin-4-il)metilamin0)-2-(2- metilbenzil)propil)pirazin-2-karb0ksamid; pentahidroksihekzil)amino)bütanoil)piperidin-4-iI)metilamin0)-2-(2- metilbenzil)pr0pil)pirazin-2-karboksamid; pentahidroksihekzilamin0)pr0panoil)piperidin-4-il)metilamino)propiI)pirazin-2- karboksamid; pentahidroksihekzil)amino)propa n0i|)piperidin-4-il)metilamin0)-2-(2- metilbenzil)propil)pirazin-Z-karboksamid; pentahidroksihekzil)amino)etil)karbam0il)benzil)amino)-2-(2- metilbenzil)pr0piI)pirazin-2-karboksamid; pentahidroksihekzil)amino)etil)karbam0il)benzil)amin0)-2-(2- metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid; 4-(((R)-3-(3,5-diamino-6-kl0ropirazin-2-karboksamido)-2-(2- pentahidroksihekzil)amino)etilkarbamat; pentahidroksihekzil)amino)etil)karbam0il)fenetil)amin0)-2-(2- metilbenzil)pr0pil)pirazin-2-karb0ksamid; tetrahidroksipentil)amino)etil)karbam0il)fenetil)amino)-2-(2- metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid; tetrahidroksipentil)amin0)etil)karbam0il)benzil)amin0)-2-(2- metilbenzil)pr0pil)pirazin-2-karboksamid; tetrahidroksipentil)amin0)etil)karbam0il)benzil)amin0)-2-(2- metilbenzil)pr0pil)pirazin-2-karboksamid; pentahidroksihekzil)amino)etilkarbamoil)fenetilamin0)-2-(2- metilbenzil)propil)pirazin-2-karb0ksamid.
Formül (l) bilesikleri, sema 1'e göre formül (II) bilesiklerinden hazirlanabilir, burada R1, R2, R3, A, X, m ve n formülde (I) tanimlanan sekildedir ve burada p = m-1. i r J_ .MF- " -1: "L" 'ZI'H ; 3; A t ::i , A4 fi:: I ..r a) NaH(OAC)3, ACOH, THF veya NaBH4, MeOH Alternatif olarak formül (I) bilesikleri, sema 2'de açiklanan sekilde hazirlanabilir burada R1, R2, R3, A, X, m ve n formülde (i) tanimlanan sekildedir ve burada Y, halojen, örnegin klorin, bromin veya iyodindir ve p = m-1. a) NaH veya K2C03 veya C52003 veya DIEA, DMF.
Alternatif olarak formül (I) bilesikleri, sema 3'te açiklandigi üzere hekzozlar veya pentozlar (R3-aldehit) gibi uygun polihidroksillenmis alkilaldehitlerin indirgeyici alkilasyonu ile nihai bir adimda R3 eklenmesi ile hazirlanabilir ve burada R1, R2, R3, A, X, m ve n formülde (l) tanimlanan sekildedir. Rs'te bulunan polihidroksialkil zincirleri, örnegin P. G. M. Wuts, Th. W. Greene, Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, Wiley-Interscience, New York, 2006 ile açiklandigi üzere uygun herhangi bir alkol koruma gruplari ile korunabilir. Ek olarak uzman kisinin bilecegi üzere ve buradaki Örneklerde açiklandigi üzere formül (II) bilesiklerinde bulunan ek amino gruplari örnegin Wuts ve Greene (yukarida) içerisinde açiklandigi üzere uygun amino koruma gruplari, örnegin di-tertbütil dikarbonat (Boc) veya fluorenilmetiloksikarbonil (FMoc) koruma gruplari ile korunabilir. a) NaBH(OAc)3 veya NaBHgCN, AcOH, THF veya NaBH4, MeOHFormül (Il) bilesikleri, sema 5`te açiklanan yöntemler ile enantiyo seçici olarak (J. C. D.
Müller-Hartwieg, L. La Vecchia, H. Meyer, A. K. Beck, D. Seebach, Org. Synth. 85 formülde (I) tanimlanan sekildedir.
H I Q_ "t/"Hi Q_ V` i/\ a) i) L-prolin, DMF, ii) NaBH4, MeOH; b) Ftalimid, PPhg, DEAD, THF; c) CH3NH2, EtOH, d) BOCzo, DCM, TEA; e) Pd(OH)2, Hz, MeOH, 70 psi; f) (3- DCM; h) NaOH, THF.
»I 4:] A "1 .i J` "J 'u .› 1' P?' 4 _ a) BuLi, THF; b) TiCI4, TEA, DCM; c) LiOH, Hzoz, THF, Hgo; d) (00002, NH4OH, DCM; e) BH3*THF; f) NMP; g) TFA, DCM; h) NaOH, THF. 1/1:: a) Diallilkarbonat, Lipaz PS-C Amano ii, MTBE; b) Asit (örnegin D-tartrat), rekristalizasyon; c) 1OM NaOH, MTBE; d) (BOC)20, MTBE; e) LiBH4, Pd(PPh NaOH, THF.
Semalar 4, 5 ve 6, formül (Il) bilesiklerine ait (R)-enantiy0mere erisimi açiklar. Bu semalarda açiklanan reaksiyonlar, farkli stereo spesifiklige sahip enzimler veya ters r' 4:: x ßâ/'ÄN'IN/ L i çevrilmis mutlak konfigürasyonun baslangiç materyalleri enantiyomerine ulasmak üzere esit sekilde uygulanabilir.
Alternatif olarak (8)-k0nfigürasyonu ile formül (ll) bilesikleri, sema 7`de gösterilen sekilde hazirlanabilir. l i 1, . . 1 5 S'ii-v-i .' kullanilarak a) CDI; iPrOAC; b) LiBH4, Pd(PPh3)4, THF.
Sema 6'ya ait adimda (a) açiklanan yöntem, diallilkarbonat. Kullanilarak diaminin (III) enzim aracili desimetrizasyonunu içerir.
NH2 (iii) Bu reaksiyona yönelik uygun enzimler lipazlari, özellikle Candida Antarctica veya Pseudomonas Cepacia'dan ortaya çikan lipazlari içerir. Uygun enzimler IMM CALB (Candida Antartica Lipazi B), IMM CALBY (Candida Antartica Lipazi B), Novozym , Amano Lipazi PS-IM (Pseudomonas Cepacia Lipazi) ve Amano Lipazi PS-D (Pseudomonas Cepacia Lipazi), örnegin Amano Lipazi PS-C1, Amano Lipazi PS-D ve Amano Lipazi PS-IM içerir. Reaksiyon, bir dizi polar ve polar olmayan solvent ve tert- bütil dimetil eter (TBME), tetrahidrofuran (THF), metiI-THF (MeTHF, örnegin 2-metil- THF), heptanlar, siklohekzan ve tolüen, örnegin MeTHF dahil karisimlarinda gerçeklestirilir. Reaksiyon örnegin 0°C ila 50°C, örnegin 15°C ila 35°C, örnegin yaklasik 30°C olan bir sicaklik araliginda gerçeklestirilebilir. Ortaya çikan ham ürünün enantiyomerik fazlaligi örnegin bir tartrat tuzundan kristalizasyon yoluyla teknikte uzman kisilerce bilinen çözünme prosesleri ile istege bagli olarak arttirilabilir. Burada ayrica bir formül (IV) bilesiginin hazirlanmasina yönelik bir proses açiklanir, burada R1 yukarida tanimlanan sekilde (örnegin bilesik (R)-aIIiI-(3-amino-2-(2- metilbenzil)propil)karbamat): dialilkarbonat varliginda diaminin (III) enzim aracili desimetrizasyonu ve istege bagli olarak bundan sonra enantiyomerik bir çözünmenin gerçeklestirilmesini içerir. Ilave bir açida enzim, Candida Antarctica veya Pseudomonas Cepacia, örnegin IMM CALB (Candida Antartica Lipazi B), lMM CALBY (Candida Antartica Lipazi B), Novozym , Amano Lipazi PS-IM (Pseudomonas Cepacia Lipazi) ve Amano Lipazi PS-D'den (Pseudomonas Cepacia Lipase) ortaya çikan birinden seçilir. Bir diger açida enzim, Amano Lipazi PS-Ci, Amano Lipazi PS-D ve Amano Lipazi PS-IM, örnegin Amino Lipazi PS-IM'den seçilir. Ayrica bilesik (R)-aIIiI-(3-amino-2-(2- metilbenzil)propil)karbamat açiklanir.
Ilave bir açida farmasötik bir ara ürün olarak bilesik (R)-alIiI-(3-amino-2-(2- metilbenzil)propil)karbamatin kullanimi açiklanir. Ilave bir açida bir formül (I) bilesiginin üretiminde bir ara ürün olarak bilesik (R)-allil-(3-amin0-2-(2- metilbenzil)pr0pil)karbamatin kullanimi açiklanir.
Bulus bilesiklerine yönelik detayli prosesler asagidaki Örneklerde ayrica açiklanir.
Bu spesifikasyonda açiklanan bilesikler ve tuzlar genellikle özellikle memeliler olmak üzere hayvanlardaki çesitli bozukluklari tedavi etmek üzere yöntemlerde kullanilabilir.
Memeliler örnegin insanlari içerir.
Bulusa ait bilesikler ve farmasötik olarak kabul edilebilir tuzlari, özellikle ENaC modülatörleri olmak üzere farmasötikler olarak aktiviteye sahiptir ve solunum yolu hastaligi, kemik ve eklem hastaliklari ve diger oto-immün ve alerjik bozukluklarin tedavisinde kullanilabilir.
Bulusa ait bir bilesik veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu ile tedavi eidlebilen hastalik durumlari bunlarla sinirli olmamak üzere hem aralikli hem de kalici ve tüm siddetteki bronsiyal, allerjik, intrinsik, ekstrinsik, egzersiz indüklü, ilaç indüklü (aspirin ve NSAID-indüklü dahil) ve toz indüklü astim dahil astim ve havayolu hiper yanit vermenin diger nedenleri; kronik obstrüktif pulmoner hastalik (COPD); enfeksiyonlar ve eozinofilik bronsit dahil bronsit; amfizem; bronsiektazi; kistik fibroz; sarkoidoz; çiftçi akcigeri ve iliskili hastaliklar; hipersensitivite pnömonisi; tüberküloz ve asperjiloz ve diger fungal enfeksiyonlari dahil kriptojenik fibrozis olusturan alveolit, idiyopatik interstisyel pnömoniler, idiyopatik pulmoner fibroz, fibroz zorlastirici antineoplastik terapi ve kronik enfeksiyon dahil akciger fibrozu; akciger transplantasyon komplikasyonlari; akciger vaskülatürün vaskülitik ve trombotik bozukluklari ve pulmoner hipertansiyon; havayollarinin inflamatuvar ve salgilayici durumlari ile iliskili kronik öksürük ve iyatrojenik öksürügün tedavisi dahil antitüssif aktivite; rinit medikamentoza ve vazomotor rinit dahil akut ve kronik rinit; rinit nervoza (saman nezlesi) dahil devamli ve mevsimsel alerjik rinit; nazal polipozis; soguk alginligi dahil akut viral enfeksiyon ve solunum sinsisyal virüsü, influenza, koronavirüs (SARS dahil) ve adenovirüs nedeniyle enfeksiyon; akut akciger hasari; veya yetiskinde solunum güçlügü sendromu (ARDS) dahil havayolu obstrüktif hastaliklari gibi solunum yolu hastaliklarini içerir.
Bulusun ilave bir açisinda bulusa ait bir bilesik veya farmasötik olarak bir tuzu ile tedavi edilebilen solunum yolu hastaliklari sunlari içerir: kronik obstrüktif pulmoner hastalik (COPD); enfeksiyöz ve eozinofilik bronsit dahil bronsit; bronsiektazi; kistik fibroz; havayollarinin inflamatuvar ve salgilayici durumlari ile iliskili kronik öksürük ve iyatrojenik öksürügün tedavisi dahil antitüssif aktivite; hem aralikli hem de kalici ve tüm siddetteki bronsiyal, allerjik, intrinsik, ekstrinsik, egzersiz indüklü, ilaç indüklü (aspirin ve NSAID-indüklü dahil) ve toz indüklü astim dahil astim ve havayolu hiper yanit vermenin diger nedenleri.
Bulusun yine ilave bir açisinda bulusa ait bir bilesik veya farmasötik olarak bir tuzu ile tedavi edilebilen hastalik durumlari kronik obstrüktif pulmoner hastalik (COPD), kistik fibroz, astim, kronik bronsit ve bronsiektazi içerir.
Bulusun yine ilave bir açisinda bulusa ait bir bilesik veya farmasötik olarak bir tuzu ile tedavi edilebilen hastalik durumu kronik obstrüktif pulmoner hastaliktir (COPD).
Bulusun bir açisinda COPD tedavisine yönelik bir formül (I) bilesigi veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu saglanir.
Bulusun ilave bir açisinda COPD tedavisine yönelik bir ilaç üretiminde bir formül (I) bilesigi veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu saglanir.
Bulusun yine ilave bir açisinda bulusa ait bir bilesik veya farmasötik olarak bir tuzu ile tedavi edilebilen hastalik durumu kistik fibrozdur (CF).
Bulusun bir açisinda CF tedavisine yönelik bir formül (I) bilesigi veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu saglanir.
Bulusun ilave bir açisinda CF tedavisine yönelik bir ilaç üretiminde bir formül (I) bilesigi veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu saglanir.
Bu spesifikasyonda açiklanan bir bilesik veya tuz, bir bozuklugu tedavi etmek üzere uygulandiginda “terapötik olarak etkili miktar”, bozuklugun semptomlari veya diger zararli etkilerini azaltmak veya tamamen hafifletmek; bozuklugu tedavi etmek; bozuklugun ilerleyisini ters çevirmek, tamamen durdurmak veya yavaslatmak veya bozuklugun daha kötüye gitme riskini azaltmak üzere yeterli bir miktardir.
Bir kombinasyon terapisinin kullanildigi bazi düzenlemelerde bu spesifikasyonda açiklanan bilesik veya tuz miktari ve diger farmasötik olarak aktif ajanlarin miktari, kombine edildiginde, hayvan hastadaki hedef alinan bir bozuklugu tedavi etmek üzere terapötik olarak etkilidir. Bu baglamda kombine miktarlar, kombine edildiginde bozuklugun semptomlari veya diger zararli etkilerini azaltmak veya tamamen hafifletmek; bozuklugu tedavi etmek; bozuklugun ilerleyisini ters çevirmek, tamamen durdurmak veya yavaslatmak veya bozuklugun daha kötüye gitme riskini azaltmak üzere yeterli olmalari halinde “terapötik olarak etkili miktarlardir”. Tipik olarak bu tür miktarlar, örnegin bilesik veya tuza yönelik bu spesifikasyonda açiklanan dozaj araligi ve diger farmasötik olarak aktif bilesiklerin onaylanmis veya diger sekilde yayinlanan dozaj araliklari ile baslanarak teknikte uzman bir kisi tarafindan belirlenebilir.
Bulusa ait bir bilesik veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunu insan gibi bir memelinin terapötik tedavisine yönelik kullanmak amaciyla söz konusu bilesen normal sekilde farmasötik bir bilesim olarak standart farmasötik uygulamaya göre formüle edilir. Bu nedenle bir diger açida mevcut bulus, bir formül (I) bilesigi veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu (aktif bilesen) ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir adjuvan, seyreltici veya tasiyici içeren farmasötik bir bilesim saglar.
Ilave bir açida mevcut spesifikasyon, farmasötik olarak kabul edilebilir bir adjuvan, seyreltici veya tasiyici ile aktif bilesenin karistirilmasini içeren söz konusu bilesimin hazirlanmasina yönelik bir prosesi açiklar. Uygulama moduna bagli olarak farmasötik toplam bilesime dayanir.
Bulusa ait farmasötik bilesimler, örnegin topikal (akciger ve/veya havayollari veya deriye gibi), inhalasyon, oral, rektal veya parenteral uygulama ile tedavi edilmesi istenen hastalik durumuna yönelik standart sekilde uygulanabilir. Bu amaçlara yönelik olarak bu bulusa ait bilesikler, teknikte bilinen yollar ile formüle edilebilir. Bu bulusun uygun farmasötik bir bilesim, örnegin 0.1 mg ile 1 9 arasinda aktif bilesen içeren örnegin bir tablet veya kapsül gibi birim dozaj formunda oral uygulama için uygundur.
Her bir hasta örnegin günde 1 ila 4 kez uygulanan aktif bilesenin örnegin 0.005 mgkg'1 Bulusun bir düzenlemesinde solunan uygulama (oral ve nazal inhalasyon dahil) için formüle edilen farmasötik olarak kabul edilebilir bir adjuvan, seyreltici veya tasiyici ile iliskili olarak bir formül (l) bilesigi içeren farmasötik bir bilesim saglanir.
Formül (I) bilesigi, örnegin kuru bir toz solunum cihazi, ölçülü bir doz solunum cihazi, bir nebülizör veya bir nazal dagitim Cihazindan uygun bir dagitim cihazi kullanilarak uygulanabilir. Bu tür cihazlar iyi bilinir.
Kuru toz solunum cihazlari, tek basina veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasiyici ile kombinasyon halinde formül (l) bilesigini uygulamak üzere, ikinci durumda ince sekilde bölünen bir toz olarak veya sirali bir karisim olarak kullanilabilir. Kuru toz solunum cihazi tekli doz veya çoklu doz olabilir ve kuru bir toz veya bir toz içeren kapsülü kullanabilir.
Buna uygun olarak bir düzenlemede formül (l) bilesigi veya bir formül (I) bilesigi içeren farmasötik bir bilesim, bir kuru toz solunum cihazi (DPI) yoluyla uygulanir.
DPI, “pasif” veya nefes ile harekete geçirilir veya toz, örnegin basinçli havanin bir iç kaynagi gibi hastanin solunumundan baska bir mekanizma ile dagitildiginda “aktiftir”.
Mevcut durumda üç tür pasif kuru toz solunum cihazlari temin edilebilir: tekli doz, çoklu birim dozu veya çoklu doz (rezervuar) solunum cihazlari. Tekli doz cihazlarinda ayri dozlar, genellikle jelatin kapsüller halinde saglanir ve kullanimdan önce solunum cihazina yüklenmesi gerekir, bunlarin örnekleri Spinhaler® (Aventis), Rotahaler® (GlaxoSmithKline), AeroliserTM (Novartis), Inhalator® (Boehringer) ve Eclipse (Aventis) cihazlarini içerir. Çoklu birim doz solunum cihazlari çoklu jelatin kapsülleri veya blisterler halinde ayri ayri paketlenmis birkaç doz içerir, bunlarin örnekleri Diskhaler® (GIaxoSmithKIine), Diskus® (GIaxoSmithKIine), Nexthaler® (Chiesi) ve Aerohaler® (Boehringer) cihazlarini içerir. Çoklu doz cihazlarinda ilaç, ayri dozlarin ölçüldügü bir yigin toz halinde saklanir, bunlarin örnekleri Genuair® (AstraZeneca), Turbuhaler® (AstraZeneca), Easyhaler® (Orion), Novolizer® (ASTA Medica), Clickhaler® (Innovata Biomed), Spiromax® (Teva) ve Pulvinal® (Chiesi) cihazlarini içerir.
Bir DPI'da kullanima yönelik solunabilir farmasötik bir bilesim, ince sekilde bölünen aktif bilesenin (genellikle 10 um'ye esit veya bundan daha az, örnegin 5 um'ye esit veya bundan daha az, örnegin 1 ila 5 pm aerodinamik bir çapa sahiptir) örnegin bir mon0-, di- veya polisakkarit, bir seker alkol veya bir diger poliol gibi tasiyici bir madde ile karistirilmasi ile hazirlanabilir. Uygun tasiyicilar sekerler, örnegin Iaktoz, glukoz, raffinoz, melezitoz, Iaktitol, maltitol, trehaloz, sukroz, mannitol ve nisastadir. Uygun sekilde aktif bilesen partikülleri, sirali (interaktif) bir toz karisimi olusturmak üzere tasiyici partiküllere yapisir. Tasiyici partiküller, 20 ile 1000 um, daha genel olarak 50 ila 500 um arasinda bir kütle medyan çapina sahip olabilir.
Alternatif olarak solunabilir farmasötik bir bilesim, ince sekilde bölünen tozun (örnegin ince sekilde bölünen aktif bilesen ve ince sekilde bölünen tasiyici partiküllerden olusan) inhalasyon prosedürü sirasinda dagilan küreler halinde islenmesi ile hazirlanabilir.
Toz karisimi daha sonra gerekli oldugu üzere sert jelatin kapsülleri halinde dagitilabilir. her biri aktif bilesenin istenen dozunu içerir. Alternatif olarak toz karisimi, örnegin Genuair® veya Turbuhaler® gibi çoklu doz solunum cihazi rezervuarina yüklenebilir.
Ilave bir düzenlemede formül (I) bilesigi, bir ölçülü doz solunum cihazi, özellikle basinçli ölçülü doz solunum cihazi (pMDl) yoluyla uygulanir. pMDl, basinçli bir konteyner içinde uygun bir solüsyon veya süspansiyon olarak aktif maddeyi içerir. Aktif madde, pMDI cihazinda bir valfin harekete geçirilmesi ile dagitilir. Harekete geçirme, manuel veya soluk ile harekete geçirilen olabilir. Manuel olarak harekete geçirilen pMDI'Iarda cihaz, örnegin pMDI cihazinda uygun bir salgilama mekanizmasinin preslenmesi ile solukla içeri aldiklarinda kullanici tarafindan harekete geçirilir. Nefes ile harekete geçirilen pMDI'Iar, hasta pMDI'nin agiz kismi yoluyla nefes aldiginda harekete geçirilir. Bu, cihazin harekete geçirilmesinin hastanin inhalasyon ile zamanlanmasi ve aktif maddenin daha tutarli dozlanmasi ile sonuçlanabilmesi nedeniyle avantajli olabilir. pMDI cihazlarinin örnekleri örnegin Rapihaler® (AstraZeneca) içerir.
Bir pMDI'da kullanima yönelik solunabilir farmasötik bir bilesim, solventler (örnegin etanol), sürfaktanlar, yaglayicilar veya stabilize edici ajanlar gibi ilave eksipiyanlar ile veya bunlar olmaksizin ve uygun bir itici gaz içinde formül (l) bilesiginin çözünmesi veya dagitilmasi ile hazirlanabilir. Uygun itici gazlar hidrokarbon, kloroflorokarbon ve hidrofloroalkan (örnegin heptafloroalkan) itici gazlari veya bu tür herhangi bir itici gazin karisimlarini içerir. Tercih edilen itici gazlar P134a ve P227'dir, bunlarin her biri tek basina veya diger itici gazlar ve/veya sürfaktan ve/veya diger eksipiyanlar ile kombinasyon halinde kullanilabilir.
Ilave bir düzenlemede formül (I) bilesigi, bir ayirici ile kombinasyon halinde ölçülü doz solunum cihazi yoluyla uygulanir. Uygun ayiricilar iyi bilinir ve Nebuchamber® (AstraZeneca) veya V0Iumatic® (GIaxoSmithKIine) içerir.
Ilave bir düzenlemede formül (I) bilesigi bir nebülizör yoluyla uygulanir. Uygun nebülizör iyi bilinir ve eFlow® (PARI GmbH) içerir.
Bir nebülizörde kullanima yönelik solunabilir farmasötik bir bilesim, formül (I) bilesiginin uygun aköz bir ortamda dagitilmasi veya tercihen çözünmesi ile hazirlanabilir. Bilesim ayrica örnegin uygun pH ve/veya tonisite ayari, sürfaktanlar ve koruyuculari içerebilir. Örnegin bir nebülizörden inhalasyona yönelik uygun bir bilesim sodyum klorid (9 mg/g); kurutulmus sitrik asit (0.0735 mg/g); sodyum sitrat (0.19 mg/9); benzalkonyum klorid içeren aköz bir ortamda (Mill-Q su içinde mg/g) içinde dagitilan bir formül (I) bilesigini Ilave bir düzenlemede formül (I) bilesigi, örnegin bir sprey pompasi veya bir MDI gibi uygun bir nazal dagitim cihazindan bir sprey olarak nazal yolla uygulanir. Alternatif olarak bilesik, uygun bir DPI cihazi, örnegin Rhinocort®, Turbuhaler® (AstraZeneca) kullanilarak bir toz olarak nazal yolla uygulanabilir.
Bir sprey pompasi veya MDI nazal dagitim cihazinda kullanima yönelik solunabilir farmasötik bir bilesim, uygun aköz bir ortamda formül (I) bilesiginin dagitilmasi veya tercihen çözünmesi yoluyla hazirlanabilir. Bilesim ayrica örnegin uygun pH ve/veya tonisite ayari, sürfaktanlar, koruyucular, yaglayicilar, lezzet vericiler veya viskozite modifiye edicileri içerebilir. Gerekli olmasi halinde bu tür bir uygun biyo yapiskan polimer gibi nazal bosluktan absorpsiyonu arttirmak üzere gerekli katki maddelerinin dahil edilebilir. Nazal dagitima yönelik uygun kuru toz bilesimleri, buradan önce DPI dagitimi ile iliskili açiklanan sekildedir. Ancak bilesigin akcigere penetrasyonunu sinirlandirmak ve bilesigi nazal boslukta tutmak istendiginde örnegin 10 um ila 50 um gibi yaklasik 10 um'den daha büyük ortalama bir partikül boyutuna sahip daha büyük partikül boyutlari bilesigin kullanilmasi gerekli olabilir.
Buna uygun olarak mevcut spesifikasyon ayrica bulusa ait solunabilir farmasötik bir bilesim içeren bir solunum cihazini (örnegin bir kuru toz solunum cihazi, özellikle bir çoklu birim doz kuru toz solunum cihazi veya bir pMDl solunum cihazi) açiklar.
Bulus ayrica bir kombinasyon terapisi ile ilgilidir burada bulusa ait bir bilesik veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu ve ikinci bir aktif bilesen, yukarida listelenen durumlarin bir veya daha fazlasinin tedavisi için es zamanli olarak, sirali olarak veya karisim halinde uygulanir. Bu tür bir kombinasyon bir veya daha fazla ilave aktif bilesenler ile kombinasyon halinde kullanilabilir.
Mevcut bulusun ilave bir açisinda bulusa ait bir bilesik veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunu ve asagidakilerden seçilen en az bir ek aktif bilesen içeren farmasötik bir bilesim (örnegin CF veya COPD gibi burada listelenen hastaliklar veya durumlarin birinin tedavisine yönelik bir ilaç olarak kullanima yönelik) saglanir: a) bir beta-adrenoseptör agonisti; b) bir muskarinik reseptör antagonisti; 0) bir eklem muskarinik reseptör antagonisti ve beta-adrenoseptör agonisti; d) bir toII-benzeri reseptör agonisti (bir TLR7 veya TLR9 agonisti gibi) e) bir adenozin antagonisti; f) bir glukokortikoid reseptör agonisti (steroidal veya steroidal olmayan); 9) bir p38 antagonist; li) birlKK2 antagonist; i) bir PDE4 antagonist; j) kemokin reseptör fonksiyonun bir modülatörü (bir CCR1, CCR2B. CCRS, CXCR2 veya CXCR3 reseptör antagonisti gibi); l) bir ozmolit, örnegin bir iyonik ozmolit, asagida açiklanan sekilde hipertonik salin gibi.
Mevcut bulus bir beta-adrenoseptör agonisti (beta reseptör alt türler 1-4 dahil) örnegin terbutalin (örnegin sülfat tuzu olarak), salmeterol (örnegin ksinafoat tuzu olarak), salbutamol (albuterol) (örnegin sülfat tuzu olarak). prokaterol (örnegin hidroklorid tuzu olarak), pirbuterol (örnegin asetat tuzu olarak), orsiprenalin (metaproterenol) (örnegin sülfat tuzu olarak), milveterol (örnegin hidroklorid tuzu olarak), Ievosalbutamol (Ievalbuterol) (örnegin hidroklorid tuzu olarak), abediterol, izoprenalin (izoproterenol) (Örnegin hidroklorid tuzu olarak), indakaterol (örnegin maleat tuzu olarak), vilanterol (örnegin trifenatat (trifenilasetik asit) tuzu olarak), formoterol (örnegin fumarat tuzu, örnegin fumarat dihidrat tuzu olarak), karmoterol, bitolterol (örnegin mesilat tuzu olarak), olodaterol, bedoradrin (örnegin sülfat tuzu olarak), bambuterol (örnegin hidroklorid tuzu olarak), arformoterol (örnegin tartrat tuzu olarak), PF-610355 (2-[3-[2- N-[[3-(4-hidroksifenil)fenil]metil]asetamid), N-(2-dietilamin0etil)-N-[2-[2-(4-hidroksi-2- okso-3H-1 ,3-benzotiyazoI-7-il)etilamin0]etiI]-3-[2-(1-naftil)et0ksi]propanamid,N- 7-il)etilamin0]etil]propanamid veya N-siklohekzil-N-[2-[2-(5-hidroksi-3-okso-4H-1,4- benzoksazin-B-il)etilamin0]etil]-3-[2-[3-(1-metilpirazol-4-il)fenil]etoksi]pr0panamid ile birlikte bulusa ait bir bilesik veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunun kombinasyonu ile ilgilidir.
Mevcut bulus ayrica bir muskarinik reseptör antagonisti (örnegin bir M1, M2 veya M3 antagonist, seçici M3 antagonisti gibi) örnegin tiotropiyum (örnegin bromid tuzu olarak), oksitropiyum (örnegin bromid tuzu olarak), ipratropiyum (örnegin bromid tuzu olarak), glikopironyum bromid (örnegin stereoizomerlerin rasemik bir karisimi olarak veya R,R-, R,S-, S,R- veya 8.8- stereoizomer olarak veya R,R-, R,S-, S,R- veya 8,8- stereoizomerlerin iki veya daha fazlasini içeren bir karisim olarak), aklidinyum (örnegin 3-(4-hidroksifenil)-pr0pi0nilamino]-1-(3 -hidroksi-benzil)-1-metil-piperidinyum), ester) (örnegin hidrobromid tuzu olarak). [(3R)-1-[2-okso-2-(2- piridilamino)etil]kinuklidin-1-yum-3-il] 1-fenilsikloheptankarboksilat (örnegin bromid tuzu olarak) veya 2-[(4-kl0r0fenil)met0ksi]etiI-[[2-[(R)-siklohekziI-hidroksi-feniI-metil]0ksazol- -iI]metil]-dimetil-amonyum (örnegin napadisilat tuzu olarak) ile birlikte bulusa ait bir bilesik veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunun kombinasyonu ile ilgilidir.
Mevcut bulus ayrica bir eklem muskarinik reseptör antagonisti (örnegin bir M1, M2 veya M3 antagonisti, seçici bir M3 antagonisti gibi) olan bir ajan ve bir beta- (metansülfonamido)fenil]etil]amin0]n0niI]-4-piperidil] N-[2-(3-kl0r0-4-hidr0ksi- diazaspiro[5.5]undekan-3-iI]metil]fenil]etoksi]-N-siklopentiI-N-[2-[2-(5-hidroksi-3-0kso- 4H-1,4-benzoksazin-8-il)etilamino]etil]propanamid, N-bütil-N-[2-[2-(5-hidroksi-3-okso- il]metiI]fenil]etilamin0]-1-hidroksietil]-4-hidroksi-3H-1,3-benzotiyazoI-2-0n ile birlikte bulusa ait bir bilesik veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunun kombinasyonu ile ilgilidir.
Mevcut bulus yine ayrica bir toII-benzeri reseptör agonisti (bir TLR7 veya TLR9 agonisti 8-okso-7H-purin-9-il)pr0pil-(3-morph0linopropil)amino]metil]fenil]asetat (örnegin hidrobromid, hidroklorid veya dimaleat tuzu olarak), 4-(dimetilamin0)bütil 2-[4-[[2- amin0-4-metiI-6-(pentilamino)pirimidin-5-il]metil]fenil]asetat (örnegin disakkarin, difumarik asit, di-1-hidr0ksi-2-naft0ik asit veya mono-benzoik asit tuzu) veya 5'-TCG birlikte bulusa ait bir bilesik veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunun kombinasyonu ile ilgilidir.
Mevcut bulus yine ayrica bir adenozin antagonisti örnegin regadenoson. ATL-313 tetrahidrofuran-2-il]purin-2-il]prop-2-inil]piperidin-1-karboksilat) veya apadenoson (metil il]purin-2-il]pr0p-2-iniI]siklohekzankarboksilat) ile birlikte bulusa ait bir bilesik veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunun kombinasyonu ile ilgilidir.
Mevcut bulus yine ayrica bir glukokortikoid reseptör agonisti (steroidal veya steroidal olmayan) örnegin triamsinolon, triamsinolon asetonid, prednizon, mometason furoat, deksametazon sipesilat, desizobütiril siklesonid, klobetasol propionat, siklesonid, bütiksokort propionat, budesonid, beklometason dipropionat, alklometazon dipropionat, tetradekahidrosiklopenta[5,6]nafto[1,2-f]indazoI-1-il 2-furoat, il)propoksi]indazoI-1-iI]-N-[(3R)-tetrahidrofuran-S-il]benzamid ile birlikte bulusa ait bir bilesik veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunun kombinasyonu ile ilgilidir. difloro-benziloksi)-6-metiI-2-okso-2H-piridin-1-iI]-4,N-dimetiI-benzamid), Iosmapimod, hIdroksietilsülfanil)fenil]-[1 ,2,4]triazol0[4,3-a]piridin-G-il]süIfanil]fenil]metil]ü re), N- siklopropiI-4-metiI-3-[6-(4-metiIpiperazin-1-iI)-4-0kso-kinazolin-3-il]benzamid veya N- siklopropiI-3-floro-4-metiI-5-[3-[[1-[2-[2-(metilamino)etoksi]feniI]sikIopropiI]amin0]-2- okso-pirazin-1-il]benzamid ile birlikte bulusa ait bir bilesik veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunun kombinasyonu ile ilgilidir.
Mevcut bulus yine ayrica teofilin ve aminofilin dahil bir metilksantanin gibi bir fosfodiesteraz (PDE) inhibitörü veya seçici bir PDE izoenzim inhibitörü (bir PDE4 inhibitörü veya bir izoform PDE4D inhibitörü dahil) örnegin tetomilast, roflumilast, dihidropirimid-1-(3,4- (dimetilkarbam0il)fenil]süIfonil-4-(3-met0ksianilino)-8-metil-kin0lin-3-karboksamid) ile birlikte bulusa ait bir bilesik veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunun kombinasyonu ile ilgilidir.
Mevcut bulus yine ayrica 5-(2-izopropilizoindolin-5-il)-3-[1-(2-met0ksietilsülfonil)-4- piperidiI]-1H-indol-7-karb0ksilik asit gibi bir IKK2 antagonist ile birlikte bulusa ait bir bilesik veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunun kombinasyonu ile ilgilidir.
Mevcut bulus yine ayrica CCR1, CCR2, CCR2A, CCRZB, CCR3, CCR4, CCR5, CCRG, CCR7, CCR8, CCR9, CCR10 veya CCR11 antagonisti (C-C familyasi için), örnegin bir CCR1, CCRZB veya CCR5 reseptör antagonisti; CXCR1, CXCR2, CXCRS, CXCR4 veya CXCR5 (C-X-C familyasi için), örnegin bir CXCR2 veya CXCR3 reseptör antagonisti; veya C'Xg'C familyasi için CX3CR1 gibi kemokin reseptör fonksiyonun bir modülatörü ile birlikte bulusa ait bir bilesik veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunun kombinasyonu ile ilgilidir. Örnegin mevcut bulus, PS-031291 (pirolidin-1,2- dikarboksilik asit 2-[(4-kl0r0-benzil)-metil-amid] 1-[(4-triflorometiI-feniI)-amid]), CCX-354 il]etanon), vicriviroc, maravirok, cenicriviroc, navariksin (2-hidr0ksi-N,N-dimetil-3-[[2- fenil)üre), N-[1-[(3R)-3-(3,5-diflorofenil)-3-(1-metilsülfoniI-4-piperidil)propil]-4-piperidil]- N-etIl-2-(4-metilsülfonilfenil)asetamid, N-[2-[(2S)-3-[[1-[(4-klorofenil)metiI]-4- piperidil]amino]-2-hidroksi-2-metil-pr0poksi]-4-hidroksi-fenil]asetamid, 2-[2-klor0-5- (metilkarbam0il)fen0ksi]-2-metil-propanoik asit, N-[2-[(2,3-diflorofenil)metilsülfaniI]-6- iI]azetidin-1-sülfonamid ile bulusa ait bir bilesigin kombinasyonu ile ilgilidir.
Mevcut bulus yine ayrica bir Iökotrien biyosentez inhibitörü, 5-Iipoksigenaz (5-LO) inhibitörü veya 5-lipoksigenaz aktive edici protein (FLAP) antagonist örnegin TA27O (4- 4-karboksamid, tetrahidr0-4-[3-[[4-(1-metiI-1H-pirazoI-5-il)fenil]tiyo]feniI]-), setileuton, üre), fiboflapon (3-[3-tert-bütilsüIfaniI-1-[[4-(6-etoksi-3-piridil)feniI]metiI]-5-[(5-metiI-2- propanoik asit, 3-[(1,1-dimetiletil)tiy0]-1-[[4-(6-met0ksi-3-piridinil)fenil]metil]-a,a-dimetil- -[(2-piridiniI)metoksi]-), Iikofelon, kiflapon (3-[3-tert-bütilsülfanil-1-[(4-kl0rofenil)metiI]-5- (2-kinoIiImetoksi)indoI-2-iI]-2,2-dimetiI-propan0ik asit), veliflapon ((2R)-2-siklopentiI-2- asit), zileuton, zafirlukast veya montelukast ile birlikte bulusa ait bir bilesik veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunun kombinasyonu ile ilgilidir.
Mevut bulus yine ayrica bir CRTh2 antagonist veya bir DP2 antagonist örnegin floro-fenoksi]propanoik asit ile birlikte bulusa ait bir bilesik veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunun kombinasyonu ile ilgilidir.
Mevcut bulus yine ayrica bir MK2 (MAPKAP kinaz 2) antagonist örnegin varesplabid, triptofiI-D-seriI-2,3,4,5,6-pentafloro-D-feniIalaniI-3-sikl0hekziI-D-alaniI-D-arginiI-D- arginiI-D-arginil-D-glutaminil-D-arginiI-D-arjinin ile birlikte bulusa ait bir bilesik veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunun kombinasyonu ile ilgilidir.
Mevcut bulus yine ayrica bir miyeloperoksidaz antagonist örnegin resveratrol, pikeatannol, 3-[[(2R)-tetrahidrofuran-2-il]metiI]-2-tiy0kso-7H-purin-ö-on veya 1-(2- izopropoksietil)-2-tiyokso-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on ile birlikte bulusa ait bir bilesik veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunun kombinasyonu ile ilgilidir.
Mevcut bulus yine ayrica bir ozmolit ile birlikte bulusa ait bir bilesik veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunun kombinasyonu ile ilgilidir. Burada kullanildigi üzere bir ozmolitleri içermesi tasarlanir. Bulusun ilave bir açisinda hipertonik salin gibi iyonik bir ozmolit ile birlikte bulusa ait bir bilesik veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunun bir kombinasyonu saglanir.
Mevcut bulusun yine ilave bir açisinda bulusa ait bir bilesigi veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu ve asagidakilerden seçilen en az bir ek aktif bileseni içeren farmasötik bir bilesim (örnegin CF veya COPD gibi burada listelenen hastaliklar veya durumlarin birinin tedavisine yönelik bir ilaç olarak kullanim için) saglanir: a) bir beta-adrenoseptör agonisti; b) bir muskarinik reseptör antagonisti; (3) bir eklem muskarinik reseptör antagonisti ve beta-adrenoseptör agonisti; d) bir glukokoitikoid reseptör agonisti (steroidal veya steroidal olmayan); veya e) yukarida açiklandigi üzere hipertonik salin gibi, bir ozmolit örnegin bir iyonik ozmolit.
Mevcut bulusun yine ilave bir açisinda en az bir ek aktif bilesen bir beta-adrenoseptör agonistidir. Bir diger açida en az bir ek aktif bilesen bir muskarinik reseptör antagonistidir. Ilave bir açida en az bir ek aktif bilesen bir glukokortikoid reseptör agonistidir (steroidal veya steroidal olmayan). Yine ilave bir açida en az bir ek aktif bilesen bir eklem muskarinik reseptör antagonisti ve beta-adrenoseptör agonistidir.
Yine ilave bir açida en az bir ek aktif bilesen bir ozmolittir.
Bu spesifikasyonda açiklanan bilesikler ayrica asagidaki Örneklerde gösterilir. Bu Örnekler sadece açiklama yoluyla verilir ve sinirlandirici degildir.
Kisaltmalar: FMOC/Fmoc Genel Yöntemler Di-tertbütil dikarbonat Kolon Hacmi Dietilamin Dietilazadikarboksilat Diizopropilamin Diizopropiletilamin Elektrosprey iyonizasyonu Formik Asit Fluorenilmetiloksikarbonil 1-[Bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinyum 3- oksid hekzaflorofosfat Hanks' Dengeli Tuz Solüsyonu 2-(1H-BenzotriazoI-1-iI)-1,1,3,3-tetrametilur0nyum hekzaflorofosfat 2-[4-(2-hidroksietil)piperazin-1-il]etansülfonik asit Yüksek Performansli Sivi Kromatografisi Izopropilamin Sivi Kromatografisi-Kütle Spektroskopisi MetiI-tetrahidrofuran tert-Bütil metil eter N-metilpirolidinon Retansiyon süresi Doymus Süperkritik sivi kromatografisi tert-Bütil metil eter Trietilamin Tetrahidrofuran agirlikça % NMR spektrumlari, 400, 500 veya 600 MHz olan bir proton frekansinda bir Bruker Avance, Avance II veya Avance III spektrometrede kaydedilmistir. 270 MHz olan bir proton frekansinin belirtilmesi halinde bir JEOL EX-270 spektrometre kullanilmistir.
Merkezi kIoroform-ö (H 7.26 ppm), aseton (H 2.04 ppm), dikIorometan-dz (H 5.32 ppm), CH30D (H pikleri iç referanslar olarak kullanilmistir. Teknikte iyi bilindigi üzere analit konsantrasyonu varyasyonlari ve katki maddelerinin (örnegin NMR analiz standartlari veya trifloroasetik asit) dahil edilmesi veya çikartilmasi gibi numune preparatindaki varyasyonlarin bir sonucu olarak az miktarda kimyasal kayma varyasyonu meydana gelebilir.
LC/MS deneyleri ESI modunda bir Waters Xevo Q-ToF Kütle Spektrometresi ile kombine edilen bir waters ACquity UPLC sistemi kullanilarak gerçeklestirilmistir. LC iki adimda gerçeklestirilir: 1) ”de aköz 46mM amonyum karbonat/amonyak tamponu gradyani (5 dakika %2-95 B) ile hizinda pH 3 (A) ve MeCN (B)'de aköz 10 mM FA/1 mM amonyum format tamponu gradyani (5 dakika %.
Enantiyomerik fazlalik (% ee) olarak gösterilen optik saflik, bir Agilent 1100 seri kromatografisi kullanilarak kiral HPLC ile belirlenmistir. Yöntem A: Chiralpak IC 250x4.6 mm; 5um ile donatilan sistem. Mobil faz olarak 1 mL/dakikalik bir akis hizina sahip heptan/iPrOH/etanolamin (60:40:01) kullanilmistir. Enjeksiyon hacmi 10 uL'dir ve bilesik tespiti, 268 nm'de UV yoluyla gerçeklestirilmistir. Yöntem B: Chiralpak IC (%05 DEA) (B), 4 mL/dakikalik bir akis hizi ile 80/20 olan bir oranda A/B kullanilmistir.
Enjeksiyon hacmi 5 uL'dir.
Preparatif HPLC, X-Bridge veya Sunfire'den Prep C18 OBD 5um 19 x 150 mm kolonlari ile donatilan ve entegre MS tespiti olan bir Waters FractionLynx sistemi ile ile donatilan, entegre UV tespiti ile Gilson GX-281 kullanilmistir. Eluent olarak su/MeCN/ACOH ( ve MeCN Preparatif SCF, Waters Viridis 2-EP veya Phenomenex Luna Hilic, 30 x 250 mm, 5um ile donatilan entegre MS tespiti olan bir Waters Prep100 SCF sistemi ile (20mM) veya MeOH (%5 FA) veya MeOH (B) gradyanlari uygulanmistir.
Aksi belirtilmedikçe baslangiç materyalleri ticari olarak temin edilebilir veya literatürde daha önce açiklanmistir. Tüm solventler ve ticari reaktifler, laboratuvar derecesindedir ve aksi belirtilmedikçe alindigi gibi kullanilmistir.
Asagidaki Örneklerde açiklanan kimyasal adlar, ChemDraw (Ultra 11) adlandirma paketi kullanilarak üretilmistir. Uzman kisi, farkli adlandirma paketlerinin ayni bilesik için farkli kimyasal adlar üretebildigini bilecektir. Sadece açiklama yoluyla ACD/Name 2012 adlandirma paketi kullanilarak Örnekler 1 ila 16 için üretilen kimyasal adlar sirasiyla su sekildedir: tetrahidroksipentil]amino}pr0pan0il)piperidin-4-il]metil}amin0)propil]pirazin-2- karboksamid; (2-metilbenzil)propil]amino}metil)benzoil]amino}etiI)(hekzil)amin0]-D-ksilit0l; (2-metiIbenzil)pr0pil]amino}metil)piperidin-1-il]karbonil}amino)etil](hekzil)amino}- D-glusitol; pentahidroksihekzil]amino}pr0panoil)piperidin-4-il]metil}amino)-2-(2- metilbenzil)propil]pirazin-2-karboksamid; tetrahidroksipentil]amin0}propanoil)piperidin-4-il]metil}amin0)-2-(2- metilbenzil)propil]pirazin-2-karboksamid; (2-metilbenzil)pr0pil]amino}metil)piperidin-1-iI]-4-oksobütil}(hekzil)amin0]-D- glusitol; 2,3,4,5,6-pentahidroksihekzil]amin0}propan0il)piperidin-4- il]metiI}amin0)pr0pil]pirazin-2-karboksa mid; pentahidroksihekzil]amin0}pr0panoil)piperidin-4-il]metil}amino)-2-(2- metilbenzil)pr0pil]pirazin-2-karboksamid; (2-metilbenzil)pr0pil]amin0}metil)benzoil]amin0}etiI)(hekzil)amin0]-D-mannitol; (2-metilbenzil)propil]amin0}metil)benzoil]amin0}etil)(hekzil)amin0]-D-glusitol; (2-metilbenzil)pr0pil]amin0}metil)fen0ksi]karboniI}amin0)etil](hekzil)amino}-D- glusitol; 2-(2-metilbenzil)propil]amin0}etil)benzoil]amino}etil)(hekzil)amino]-D-glusitol; 2-(2-metilbenzil)pr0pil]amin0}etil)benzoil]amino}etil)(hekzil)amin0]-D- ksilitol; (2-metilbenzil)pr0pil]amin0}metil)benzoiI]amino}etil)(hekzil)amin0]-D- ksilitol; (2-metilbenzil)propil]amin0}metil)benzoil]amin0}etiI)(hekzil)amin0]-D- ksilitol; 2-(2-metiIbenzil)pr0pil]amin0}etil)benzoil]amino}etil)(hekzil)amino]-D-gIusitol. tetrahidroksipentil)a_mino)pr_opanoingiperidin-4-il)metil)amino) ro iI irazin-2- karboksamid (R)-(9 H-fluoren-Q-iI)metil(3-(4-(((3-(3.5-digmino-6-klorogirazin-2-karboksamidoi-Z- (2-metilbenzil)pr_opil)amino)metil)p_iperidin-1-iI)-3-oksowil)karbamat Kuru THF (6 mL) içerisinde bir (R)-3,5-diamino-N-(3-amin0-2-(2-metiIbenzil)propil)-6- asetik asit (80 pL, 1.40 mmol) karisimi, ortam sicakliginda 30 dakika karistirilmistir.
Sodyum triasetoksiborohidrit (340 mg, 1.60 mmol) eklenmistir ve reaksiyon karisimi, ek bir 1.5 saat 40°C'de karistirilmistir. Su eklenmistir ve karisim, 5 dakika karistirilmistir ve solventler buharlastirilmistir. Kalinti materyal EtOAC ile su arasinda bölünmüstür.
Aköz faza, pH 8-9 olana kadar %10 NaH003 (aköz) eklenmistir. Fazlar ayrilmistir ve aköz faz, EtOAc ile geri özütlenmistir. Kombine sari organik faz, MgSO4 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve solventler buharlastirilmistir. Ham ürün, preparatif HPLC (Kromasil C8; HZO/MeCN/ACOH 95/5/0.2) yoluyla saflastirilmistir. Ilgili fraksiyonlar kombine edilmistir ve vakumda konsantre edilmistir. %10 NaHCOa (aköz) eklenmistir ve su fazi, EtOAc ile özütlenmistir. Organik faz, MgSO4 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve buharlastirilmistir. Kalinti yapiskan yag, buharlasma isleminden sonra bir kati 196 mg (%29, saflik %87) olarak basliktaki bilesigi vermek üzere DCM/Heptan içinde çözünmüstür.
LC/MS: m/z 739 [M+H]+ (R)-3,5-diamino-N-(3-(((1-(3-aminompanoil)giperidin-4-il)metil)amino)-2-(2- metilbenziI)propil)-6-kloropirazin-2-karboksamid (adim 1`den alinan), DCM (5 mL) içinde çözünmüstür ve piperidin ( ile isleme tabi tutulmustur. Solüsyon, ortam sicakliginda 3 saat karistirilmistir daha sonra sari bir kati vermek üzere buharlastirilmistir.
Ham materyal, THF (5 mL) ve DIPEA ( içerisinde çözünmüstür ve THF (1 mL) içindeki (BOC)20 ( ile isleme tabi tutulmustur.
Karisim, ortam sicakliginda karistirilmistir. 3 saat sonra LC/MS, mono-Boc ile korunan ürüne sadece az bir dönüsüm göstermistir, çogu hala reakte edilmemis amindir. Büyük bir DIPEA ve BOCz(O) fazlaligi eklenmistir ve karisim, ortam sicakliginda 1 saat karistirilmistir. MeCN (2-3 ml), çözünürlügü arttirmak üzere eklenmistir ve karisim, 50°C'de 2 saat daha sonra ortam sicakliginda hafta sonu boyunca isitilmistir.
Uçucular, vakumda buharlastirilmistir ve kalinti, EtOAc ile su arasinda bölünmüstür. Su fazi, 0.5 M sitrik asit ilavesi ile asidik hale getirilmistir. Fazlarin ayrilmasina yardim etmek üzere tuzlu su eklenmistir. Organik faz, su ve tuzlu su ile yikanmistir.
Solvent buharlastirilmistir ve kalinti, DCM içinde çözünmüstür ve flas kromatografisi (EtOAc/heptan, gradyan %30 - 100 EtOAc) yoluyla saflastirilmistir. Solventler, di-BOC ile korunan basliktaki bilesigi (96 mg) saglamak üzere buharlastirilmistir.
Elde edilen di-BOC ile korunan materyal (96 mg), DCM (2 mL) içinde çözünmüstür ve TFA ( ile isleme tabi tutulmustur, solüsyon ortam sicakliginda 2.5 saat karistirilmistir. Karisim buharlastirilmistir, kalinti su içinde çözünmüstür ve preparatif saflastirilmistir. Dondurarak kurutma islemi bir kati olarak basliktaki bilesigi (64 mg, LC/MS: m/z 517 [M+H]+ 1H NMR (, 2.29 - 2.39 (m, formik asit kalintisi). tetrahidroksipentil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metil)amino)propil)pirazin-2- karboksamid akabinde bes damla su eklenmistir. Sodyum siyanoborohidrit (328 mg, 5.22 mmol) daha sonra eklenmistir ve pH degeri, asetik asit ilavesi ile ~7.0'a ayarlanmistir. Ortaya çikan solüsyon oda sicakliginda 18 saat karistirilmistir. Uçucular uzaklastirilmistir ve ortaya çikan ham ürün, preparatif HPLC (20 dakika H20/MeCN/ACOH 95/5/0.2 ila 60/40/02) yoluyla saflastirilmistir. Ilgili fraksiyonlar toplanmistir ve dondurarak kurutulmustur. Basliktaki bilesik, 2M HCI (4ml) Içinde çözünmüstür ve dondurarak kurutulmustur, basliktaki bilesigin HCI tuzunu (144 mg, %11) veren bir prosedür üç kez tekrar edilmistir. 1H NMR (, tetrahidroksipentßLamino)etil)karbamoil)ben5il)amino)- -(2- metilbenzil ro iI irazin-2-karboksamid li_ MJ 'j` , ..1. A Yöntem A tert-bütiI((S)-3-(3,5-diamino-6-kloropirazin-2-karboksamido)-2-(2- tetrahidroksigentillamino)etil)karlgimoil)benzillkarbamat 1 ` I: J "J 1, .. “INF" `""E`/J\:_:i"i"- (1 "J ':_IH IH ((2-(hekzilamino)etil)karbamoil)benzil)karbamat (Ara ürün E, 1.23 9, 1.73 mmol), 1.73 mmol), MeOH (10 mL) içinde çözünmüstür ve oda sicakliginda 1 saat 1.73 mmol) eklenmistir ve karistirma islemi, 50°C'de 3 gün devam etmistir. Reaksiyon oda sicakligina sogutulmustur, %8 NaHCOS (aköz) ilavesi ile söndürülmüstür, 15 dakika karistirilmistir ve daha sonra vakumda konsantre edilmistir. Kalinti, EtOAC ( içinde çözünmüstür, çalkalanmistir ve fazlar ayrilmistir. Aköz faz EtOAC ( ile özütlenmistir. Kombine organik fazlar, Na2SO4 (s) ile kurutulmustur, filtrelenmistir ve vakumda buharlastirilmistir. Bilesik, 100 60 asetonitril gradyani kullanilarak bir Kromasil C8 kolonu (10 pm üzerinde preparatif HPLC ile saflastirilmistir. Bilesikler. 268 nm'de UV araciligiyla tespit edilmistir. Bilesik toplanmistir ve beyaz bir kati olarak tert-bütil ((S)-3-(3,5-diamin0-6- tetrahidroksipentil)amin0)etil)karbamoil)benzil)karbamat (1.21 9, %83) vermek üzere dondurarak kurutulmustur.
LC/MS: m/z 843.5 [M+H]+ 1H NMR (, 1.27 - 1.45 tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2- metilbenziI)propil)pirazin-2-karboksamid dihidroklorid i_.I &Tüh _H l Asetil klorid ( balonuna damlatilarak eklenmistir. Karisim 5 dakika karistirilmistir ve tert-bütil ((S)-3- (hekzil((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)benzil)karbamat (1.21 9, 1.43 mmol) eklenmistir. Reaksiyon, oda sicakliginda 1.5 saat karistirilmistir ve daha sonra vakumda buharlastirilmistir. Kalinti, su içinde çözünmüstür ve soluk bir kati tetrahidroksipentil)amin0)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2-metiIbenzil)pr0pil)pirazin-2- karboksamid dihidroklorid (1.17 9, %100) vermek üzere dondurarak kurutulmustur.
LC/MS: m/z 743.4 [M+H]+ 1H NMR (, 1.62 - 1.74 (m, tetrahidroksi entiI amino etil karbamoil benzil amino metilbenzil ro iI irazin-2-karboksamid tetrahidroksipentil)amin0)etil)karbamoil)benzil)amin0)-2-(2-metiIbenzil)pr0pil)pirazin-2- NaZCO3 (aköz) ilavesi ile pH ~11'e kadar bazik hale getirilmistir. Ürün, EtOAc ( ile kurutulmustur ve yari kati/yag vermek üzere vakumda buharlastirilmistir. Kalinti, asetonitriI/su içinde çözünmüstür ve soluk bir kati olarak 3,5-diamino-6-kl0r0-N-((R)-3-((4-((2- metilbenzil)pr0pil)pirazin-2-karb0ksamid (1.02 9, %96) vermek üzere dondurarak kurutulmustur.
LC/MS: m/z 743.5 [I\/1+H]+ 1H NMR (, 1.31 - 1.43 Yöntem B tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2- metilbenziI)propil)pirazin-2-karboksamid /I` NVANYî/“oi L'Iik bir flans balonuna EtOH (-3,5-diamino-N-(3-amino-2-(2- mol) solüsyonu yüklenmistir. Karisim, 1 saat 40°C'ye isitilmistir. Berrak solüsyonuna yayilmasi not edilmistir. Karisim, bir gece 40°C'de karistirilmistir. Reaksiyon oda sicakligina sogutulmustur, doymus aköz NaHC03 ( ile dikkatli bir sekilde söndürülmüstür ve oda sicakliginda 1 saat karistirilmistir. Karisim, %10 MeOH/EtOAc (2 x ile özütlenmistir. Organik fazlar kombine edilmistir ve 271 g ham materyal saglamak üzere vakumda konsantre edilmistir. NMR analizi, mevcut NaCNBH3 sinyalleri ile yaklasik %80 saflik göstermistir. Kalinti, DCM (12 L) ve IPA (770 ml) içinde çözünmüstür. Karisim, bir doymus aköz NaHCOs (2700 Organikler kombine edilmistir ve sari bir kati olarak 298 g (191 9 aktif, %97) saglamak üzere vakumda konsantre edilmistir. HPLC-MS, %88.0 saflik göstermistir. 1H NMR, agirlikça yaklasik %27 IPA ve agirlikça yaklasik %8 ara ürün A ile yaklasik %60 saflik göstermistir.
Bu sekilde elde edilen ham ürün (290 g, 235 mmol), ilik MeOH ( içerisinde seyreltilmistir ve karisimdan bir azeotrop buharlastirilirken sürekli olarak asetonitril (15 L) eklenmistir. Yaklasik olarak 10 L solvent buharlastirildiktan sonra çökelti gibi bir zamk içeren geri kalan karisim, oda sicakliginda ek 4 gün karistirilmistir.
Sivi faz, zamk benzeri kalintidan aktarilmistir. Kalintiya 2.5 L asetonitril eklenmistir ve 1 saat karistirildiktan sonra ve asetonitril aktarilmistir. Bu sekilde elde edilen ham ürün faz: MeOH/MeCN/TEA = 95:5:0.1; enjekte edilen miktar: 1.0 g/döngü; döngü süresi: 3.5 dakika] yoluyla nihai bir saflastirma islemine tabi tutulmustur. Basliktaki bilesigin verimi: 148 g (%77).
LC/MS: m/z 743.5 [M+H]+ 1H NMR (600 MHz, DMSO; atropizomerik pikleri durumda sadece ana atropizomer 18.63 dakika (8). pentahidroksihekzil)amino)etilkarbamoiI)piperidin-4-iI)metilamino)-2-(2- metilbenziI)propil)pirazin-2-karboksamid dioksan-4-iI)propil)(hekzil)amino)etiIkarbamat karbamat mL) yerlestirilmistir. Yukaridaki karisim 30 dakika karistirildiktan sonra NaBH3CN (590 Ortaya çikan solüsyon, oda sicakliginda bir gece karistirilmistir. Daha sonra hekzanal mmol, 2.00 esdeger) eklenmistir. Ortaya çikan solüsyon oda sicakliginda 5 saat karistirilmistir. Daha sonra vakum altinda konsantre edilmistir. Ortaya çikan karisim su ile yikanmistir, etil asetat ile özütlenmistir ve organik katmanlar kombine edilmistir ve Na2804 üzerinde kurutulmustur. Katilar filtrelenmistir. Bu, açik sari yag olarak 1.6 9 (%73) basliktaki bilesigi ortaya çikarir.
LC/MS: m/z 619 [M+H]+ 1H NMR (, 1.41 - 1.72 (m, 7.83 (d, 2H). dioksan-4-il]propan-1,2-diol 9, 2.59 mmol, 1.0 esdeger), metanol (10 mL), dietilamin (5 mL) yerlestirilmistir. Ortaya çikan solüsyon oda sicakliginda bir gece karistirilmistir. Kalinti, silika jel kolon üzerinde uygulanmistir ve amonyak/MeOH (1:100) ile ayristirilmistir. Bu, sari kati olarak 600 mg (%59) basliktaki bilesigi ortaya çikarir.
LC/MS: m/z 397 [M+H]+ metilbenzil)propil((1- --( 5- hidroksi- 2-fenil- 1,3-dioksan-4-illpropiI)hekziI)amino)etilkarbamoil)giperidin-4-il)metil)karbamat 50 mL'Iik yuvarlak tabanli bir balona DCM (5 mL) içerisinde (S)-(9H-flu0ren-9-il)metil - Ortaya çikan solüsyon oda sicakliginda 0.5 saat karistirilmistir. Ortaya çikan karisim, içerisinde bir trietilamin esdeger) solüsyonuna damlatilarak eklenen (DMC içinde çözünen) ara ürün kloroformamidi vermek üzere vakum altinda konsantre edilmistir, oda sicakliginda 2 saat karistirilmistir. Ortaya çikan karisim, vakumda konsantre edilmistir. Kalinti, DCM/MeOH (1021) ile preparatif TLC yoluyla saflastirilmistir. Bu, sari bir kati olarak 145 mg (%22) basliktaki bilesigi ortaya çikarmistir.
LC/MS: m/z 1090 [M+H]+ (9H-fluoren-9-iI)metiI(S)-3-(3,5-diamino-B-kloroQirazin-2-karboksamido)-2-(2- pentahidroksihekgilhmino)etilkarbamoiI)piperidin-4-iI)metil)karbamat 8 mLilik bir siseye (9H-fluoren-9-il)metil (S)-3-(3,5-diamino-6-kloropirazin-2- hidroksi-2-feniI-1,3-di0ksan-4-il)pr0pil)(hekzil)amino)etilkarbamoil)piperidin-4- il)metil)karbamat (144 mg, 0.13 mmol, 1.0 esdeger), etanol ( yerlestirilmistir. Ortaya çikan solüsyon, oda sicakliginda bir gece karistirilmistir. Ortaya çikan karisim vakum altinda konsantre edilmistir. Bu, sari yag olarak 120 mg (ham) basliktaki bilesigi ortaya çikarmistir.
LC/MS: m/z 1002 [M+H]+ pentahidroksihekzil)amino)etilkarbamoiI)piperidin-4-iI)metilamino)-2-(2- metilbenziI)propil)pirazin-2-karboksamid 50 mLilik yuvarlak tabanli bir balona N,N-dimetilf0rmamid (4 mL) içerisinde 9H-fluoren- il)metil)karbamat (120 mg, 0.12 mmol, 1.0 esdeger), dietilamin (2 mL) yerlestirilmistir.
Ortaya çikan solüsyon, oda sicakliginda bir gece karistirilmistir. Ortaya çikan karisim vakum altinda konsantre edilmistir. Ham ürün (100 mg), asagidaki kosullar (2#- AnalyseHPLC-SHlMADZU(HPLC-10)) altinda Prep-HPLC yoluyla saflastirilmistir: (15 dakikada % ILE SU; Detektör, MS,UV 254 nm. Bu, sari bir kati olarak 8 mg (%7) basliktaki bilesigi ortaya çikarmistir.
LC/MS: m/z 780 [M+H]+ 1H NMR (, 1.81 -1.97 (m, pentahilroksihekzillamino)i:_›roganoil)piperidin-4-il)metiIgmino)-2-(2- metilbenzil ro iI irazin-2-karboksamid iI ro ilamino ro anoat 100 mL'Iik yuvarlak tabanli bir balona 4-metilbenzen-1-sülfonik asit benzil 3- esdeger), AcOH (680 mg, 11.32 mmol, 2.0 esdeger) eklenmistir. Ortaya çikan solüsyon, oda sicakliginda bir gece karistirilmistir. Ortaya çikan karisim konsantre edilmistir, etil asetat ile seyreltilmistir ve su ile yikanmistir. Organik katmanlar anhidröz sodyum sülfat üzerinde kurutulmustur. Katilar filtrelenmistir. Solventlerin vakumda uzaklastirilmasi, sonraki adimda direkt olarak kullanilan renksiz yag olarak 1.9 9 (%77) basliktaki bilesigi ortaya çikarmistir.
LC/MS: m/z 967 [M+H]+ O HOIJ/'jio/WNPh Bno/kßixi HO o mg, 6.59 mmol, 1.5 esdeger), metanol (30 mL) eklenmistir. 30 dakika sonra, NaBchN eklenmistir. Ortaya çikan solüsyon, oda sicakliginda bir gece karistirilmistir. Ortaya çikan karisim konsantre edilmistir, etil asetat ile seyreltilmistir ve su ile yikanmistir, organik katmanlar anhidröz sodyum sülfat üzerinde kurutulmustur. Katilar filtrelenmistir.
Kalinti, silika jel kolonu üzerine uygulanmistir ve etil asetat/petrol eter (12) ile çikarmistir.
LC/MS: m/z 516 [M+H]+ il)propil)(hekzil)amino)propanoik asit esdeger), Pd/C (agirlikça %5, 700 mg), etanol (20 mL) yerlestirilmistir. Yukarida karisima Hz (9) eklenmistir. Yukarida solüsyon, oda sicakliginda bir gece Hz-atmosferi altinda karistirilmistir. Katilar filtrelenmistir. Filtreleme ürünü, vakum altinda konsantre ortaya çikarmistir.
LC/MS: m/z 426 [IVI+H]+ (9H-fluoren-9-il)metiI(S)-3-(3,5-diamino-6-kloropirazin-2-karboksamido)-2-(2- 1,3-dioksan-4-il)propiI)(hekzil)amino)propanoiI)piperidin-4-il)metil)karbamat mmol, 3.00 esdeger), (8)-(9H-quoren-9-il)metil 3-(3,5-diamino-ö-kloropirazin-Z- karboksamido)-2-(2-metilbenzil)pr0pil(piperidin-4-ilmetil)karbamat (Ara ürün B, 200.0 mg, , DIEA (57.9 mg, 0.45 mmol, 1.5 esdeger), N,N-dimetilformamid (5 mL) yerlestirilmistir. Ortaya çikan solüsyon, oda sicakliginda 2 saat karistirilmistir. Yukaridaki karisima su eklenmistir ve süspansiyon, etil asetat ile özütlenmistir. Organik katmanlar kombine edilmistir ve tuzlu su ile yikanmistir. Karisim, anhidröz sodyum sülfat üzerinde kurutulmustur. Katilar filtrelenmistir ve filtreleme ürünü vakumda buharlastirilmistir. Kalinti, preparatif TLC (DCM:MeOH=10:1) yoluyla saflastirilmistir. Ilgili fraksiyonlar toplanmistir ve uçucularin uzaklastirilmasindan sonra sari bir kati olarak 200 mg (%62) basliktaki bilesigi ortaya çikartilmistir.
LC/MS: m/z 1076 [M+H]+ (9H-fluoren-9-iI)metiI(S)-3-(3,5-cßmino-6-klorogirazin-Z-karboksamido)-2-(2- pentahidroksihekzil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metil)karbamat NH2 0 ”On, I H 5 OH H,N \NFmoc 50-mL7Iik yuvarlak tabanli bir balona (9H-fluoren-9-il)metil (S)-3-(3,5-diamino-6- içerisinde 4M) solüsyonu yerlestirilmistir. Ortaya çikan solüsyon. oda sicakliginda bir gece karistirilmistir. Uçucularin buharlastirilmasi, sari bir kati olarak 200 mg basliktaki bilesigi ortaya çikarmistir.
LC/MS: m/z 987 [M+H]+ pentahidroksihekzil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metilamino)-2-(2- metilbenziI)propil)pirazin-2-karboksamid mg, 0.20 mmol, 1.00 esdeger), metanol (6 mL), dietilamin (3 mL) yerlestirilmistir.
Ortaya çikan solüsyon, oda sicakliginda bir gece karistirilmistir. Ortaya çikan karisim vakum altinda konsantre edilmistir. Ham ürün (100 mg), asagidaki kosullar (Prep- HPLC-019) ile Prep-HPLC yoluyla saflastirilmistir: Kolon, XSeIect CSH Prep C18 OBD pentahidroksihekzil]amin0]pr0panoil)piperidin-4-iI]metiI]amino)-2-[(2- metilfeniI)metil]propil]pirazin-2-karboksamid; trifloroasetik asit ortaya çikarmistir. 1H NMR (, 1.70 - 2.10 (m, 1H), 7.14 - 7.22 (m, 4H).
LC/MS: m/z 765 [M+H]+ tetrahidroksigentillamino)pr_opanoingiperidin-4-il)met_ilamino)-2-(2- metilbenzil ro il irazin-2-karboksamid (8)-(9H-fluoren-9-il)metil (1 -(3-tert-bütoksikarbonilaminopropanoil)piperidin-4- il)met_iI(3-(3,5-c_liamino-G-klorogirazin-Z-karboksamidoi-Z-(Z- metilbenzil ro iI karbamat Bir balon (25 mL), (8)-(9H-flu0ren-9-il)metil 3-(3,5-diamino-G-kloropirazin-Z- karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil(piperidin-4-ilmetil)karbamat (Ara ürün B, 300 mg, eklenmistir. Reaksiyon, oda sicakliginda 6 saat karistirilmistir. Karisim, 25 mL etil asetat ile seyreltilmistir ve su (3 x 25 mL) ile yikanmistir. Organik katman anhidröz Na2SO4 üzerinde kurutulmustur. Çökelti filtrelenmistir ve filtreleme ürünü, vakum altinda konsantre edilmistir. Elde edilen ham ürün, açik sari kati olarak basliktaki bilesigi (280 mg, %67) saglamak üzere diklorometan/metanol (20:1, v/v) ile bir silika jel kolonu yoluyla saflastirilmistir.
LC/MS: m/z 839 [M+H]+ (S)-(9H-fluoren-9-il)metil(1-(3-aminopropanoiIlgiperidin-4-il)metil(3-(3,5-diamino- 6-kIoropirazin-2-karb0ksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)karbamat 50-mL'Iik yuvarlak tabanli bir balona (8)-(9H-fluoren-9-il)metil (1-(3-tert- bütoksikarbonilaminopropanoil)piperidin-4-il)metil(3-(3,5-diamin0-6-kloropirazin-2- esdeger) ve hidrojen klorid (4M in metanol, 5 mL) yerlestirilmistir. Ortaya çikan solüsyon oda sicakliginda 1 saat karistirilmistir. Uçucularin buharlastirilmasi, sari bir kati olarak 190 mg ham basliktaki bilesigi ortaya çikarmistir.
LC/MS: m/z 739 [M+H]+ metilbenzil ro H 1- 3- hekzil 28 ?R 4R -2 3 4 5- tetrahidroksi entil amino ro anoil i eridin-4-il metil karbamat NH2 0 OH HAN \ NFMOC OH 50-mL”Iik yuvarlak tabanli bir balona (S)-(9H-fluoren-9-il)metil (1-(3- aminopropanoil)piperidin-4-il)metil(3-(3,5-diamino-6-kloropirazin-2-karb0ksamido)-2-(2- eklenmistir. Ortaya çikan solüsyon, oda sicakliginda bir gece karistirilmistir. Daha mg, 1.05 mmol, 4.0 esdeger) eklenmistir. Ortaya çikan solüsyon oda sicakliginda 5 saat karistirilmistir. Solvent, ilave saflastirma olmaksizin sonraki adimda direkt olarak kullanilan ham ürünü vermek üzere uzaklastirilmistir.
LC/MS: m/z 957 [M+H]+ grahidroksigentil)amino)pr_opanoingiperidin-4-il)met_ilamino)-2-{2- 50-mLylik yuvarlak tabanli bir balona (9H-fluoren-9-il)metil (S)-3-(3,5-diamin0-6- tetrahidroksipentil)amin0)propanoil)piperidin-4-il)metil)karbamat (adim 3, 230 mg, 0.24 mmol, 1.00 esdeger), metanol (5 mL), dietilamin ( yerlestirilmistir. Ortaya çikan solüsyon oda sicakliginda 3 saat karistirilmistir. Ham ürün, asagidaki kosullar (Prep- HPLC-019) ile Prep-HPLC yoluyla saflastirilmistir: Kolon, XSelect CSH Prep C18 OBD basliktaki bilesigi ortaya çikarmistir.
LC/MS: m/z 735 [M+H]+ 1H NMR (, 2.37 pentahidroksihekzil)amino)bütanoil)piperidin-4-iI)metilamino)-2-(2- metilbenziI)propil)pirazin-2-karboksamid (SHQH-fluoren-Q-iI)metil ((1-(4-((tert-bütoksikarbonil)amino)bütanoil)piperidin-4- il)met_iI)(3-(3.5-diamino-6-kloro irazin-2-karboksamido -2- 2- metilbenzil ro iI karbamat 50 mL'Iik yuvarlak tabanli bir balona (8)-(9H-fluoren-9-il)metil (3-(3,5-diamino-6- kloropirazin-Z-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(piperidin-4-ilmetil)karbamat (Ara mmol), HATU ( içerisinde DIEA (1.06 mL, 6.06 mmol) sari bir solüsyon vermek üzere yerlestirilmistir. Ortaya çikan solüsyon, 25°C'de 16 saat karistirilmistir. Reaksiyon karisimi, EtOAc (50 mL) ile seyreltilmistir ve su (50 mL) ile sirali olarak yikanmistir. Organik katman, Na2804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve ham ürünü saglamak üzere vakumda buharlastirilmistir. Ham ürün, silika jel üzerinde flas kromatografisi yoluyla saflastirilmistir, petrol eter içerisinde %20 ila 70 EtOAC gradyani ile ayristirilmistir. Saf fraksiyonlar, sari bir kati olarak (834 mg, LC/MS: m/z 853 [ivi+H]* (Sl-(9H-fluoren-9-il)metil (1-(4-aminobütanoil)giperidin-4-il)metiI(3-(3,5-diamino-6- klorogirazin-2-karboksgmido)-2_-(g-metiIbenzillgrogillkarbamat (S)-(9H-flu0ren-9-il)metil ((1-(4-((tert-büt0ksikarboniI)amino)bütan0il)piperidin-4- il)metil)(3-(3,5-diamino-B-kloropirazin-2-karb0ksamido)-2-(2-metilbenzil)propiI)karbamat (adim 1, solüsyonu içinde çözünmüstür ve oda sicakliginda 1 saat karistirilmistir. Solvent, sari bir kati olarak basliktaki bilesigi saglamak üzere vakumda buharlastirilmistir.
LC/MS: m/z 753 [M+H]" (9H-fluoren-9-il)metil (S)-3-(3.5-diamino-G-kloro irazin-2-karboksamido -2- 2- metilbenzil)gropil((1-(4-((gS,3R)-g.3-dihidroksi-3-((gR.4R,5R)-5-hidroksi-g-fenil- 1,3-dioksan-4-illpropilamino)bütanoiIlgiperidin-4-il)metil)karbamat H2N \ `NFmoc OH CI HO/,i .koîûph -mL7Iik yuvarlak tabanli bir balona (8)-(9H-flu0ren-9-il)metil (1-(4- aminobütanoiI)piperidin-4-il)metil(3-(3,5-diamino-ß-kloropirazin-2-karboksamido)-2-(2- metilbenzil)propil)karbamat (adim 2, 250 mg, 0.33 mmol, 1.0 esdeger), asetal ile esdeger) ve AcOH (40 mg, 0.67 mmol, 2.00 esdeger) eklenmistir. Ortaya çikan solüsyon, oda sicakliginda bir gece karistirilmistir. Solvent, sari bir kati olarak 210 mg di0ksan-4-il)propilamino)bütan0il)piperidin-4-il)metil)karbamat saglamak üzere düsük basinç altinda uzaklastirilmistir.
LC/MS: m/z 1005 [M+H]+ (9H-fluoren-9-il)metil (S)-3-(3.5-c_liamino-G-kloro irazin-2-karboksamido -2- 2- 1,3-dioksan-4-il)propi1)(hekzil)amino)bütanoil)giperidin-4-il)metil)karbamat dioksan-4-il)propilamino)bütanoil)piperidin-4-il)metil)karbamat (210 mg, ham), MeOH (5 mL) içerisinde çözünmüstür, hekzanal (42 mg, 0.42 mmol, 2.00 esdeger), akabinde esdeger) eklenmistir. Ortaya çikan karisim, oda sicakliginda 2 saat karistirilmistir ve daha sonra vakum altinda konsantre edilmistir. Kalinti, su ile yapilmaya baslanmistir ve 3x20 mL etil asetat ile özütlenmistir. Kombine organik katmanlar ve vakum altinda konsantre edilmistir ve ham sari bir yag olarak 152 mg (%67) basliktaki bilesigi ortaya çikarmistir.
LC/MS: m/z 1089 [M+H]+ (9H-fluoren-9-illmetil (S)-3-(3.5-diamino-G-kloro irazin-2-karboksamido -2- 2- pentahidroksihekzillamino)b'L'it_anoiI)p_iperidin-4-il)metil)karbamat etanol (1 mL) yerlestirilmistir. Ortaya çikan solüsyon, oda sicakliginda bir gece karistirilmistir. Uçucularin buharlastirilmasi, sari bir yag olarak 138 mg ham basliktaki bilesigi ortaya çikarmistir.
LC/MS: m/z 1002 [M+H]+ pentahidroksihekzil)amino)bütanoil)piperidin-4-iI)metilamino)-2-(2- metilbenzil ro il irazin-Z-karboksamid -mL'Iik yuvarlak tabanli bir balona (9H-fluoren-9-il)metil (S)-3-(3,5-diamino-6- mg, 0.14 mmol, 1.0 esdeger), dietilamin (2 mL), N,N-dimetilformamid (2 mL) yerlestirilmistir. Ortaya çikan solüsyon, oda sicakliginda bir gece karistirilmistir. Ortaya çikan karisim, vakum altinda konsantre edilmistir. Ham ürün (110 mg), asagidaki kosullar ile preparatif HPLC yoluyla saflastirilmistir: Kolon, XSeIect CSH Prep C18 sari bir kati olarak elde edilmistir.
LC/MS: m/z 779.5 [M+H]+ 1H NMR (, 1.78 -2.03 (m, 713-720 (m, 4H). pentahidroksihekzilamino)propanoiI)piperidin-4-il)metilamino)propil)pirazin-2- karboksamid NH2 o HO“ H2N OH (9H-fluoren-9-iI)metiI(S)-3-(3,5-diamino-6-kloro irazin-2-karboksamido -2- 2- 1,3-dioksan-4-il)propilamino)propanoil)piperidin-4-il)metil)karbamat HINJY NFm-rx: 1) NO "0 -mL'Iik yuvarlak tabanli bir balona 3,5-diamin0-6-klorO-N-((R)-3-((1-(3- il)metilamino)-2-(2-metilbenzil)pr0pil)pirazin-2-karboksamid (Örnek 5/adim 2. 20 mg, metanol (5 mL) yerlestirilmistir. Ortaya çikan solüsyon, oda sicakliginda 0.5 saat 2.0 esdeger) eklenmistir. Ortaya çikan karisim, oda sicakliginda bir gece karistirilmistir. Su ve ile söndürme islemi ve özütleme çalismasi, solventlerin uzaklastirilmasindan sonra sari bir kati olarak 220 mg ham basliktaki bilesigi ortaya çikarmistir.
LC/MS: m/z 992 [M+H]+ (9H-flgoren-9-illmetjl (S)-3-(3.5-c_liamino-6-kloro irazin-2-karboksamido -2- 2- pentahidroksihekgilaminolmpanoiIlgiperidin-4-illmetillkarbamat -mL,lik yuvarlak tabanli bir balona (9H-fluoren-9-il)metil (S)-3-(3,5-diamino-6- il)metil)karbamat (adim 1, 200 mg, 0.20 mmol, 1.0 esdeger), etanol ( ve HCI (etanol, 5 mL içinde 4M) yerlestirilmistir. Ortaya çikan solüsyon, oda sicakliginda bir gece karistirilmistir ve daha sonra vakum altinda konsantre edilmistir. 180 mg ham basliktaki bilesik sari bir kati olarak elde edilmistir.
LC/MS: m/z 904 [M+H]+ pentahidroksihekzilamino)mpanoiI)p_iperidin-4-il)metilaminomrogilmirazin-Z- karboksamid kloro-3,4-dihidropirazin-2-il)formamido]-2-[(2-metilfeniI)metiI]pr0piI]-N-[[1-(3- N,N-dimetilformamid (4 mL) yerlestirilmistir. Ortaya çikan solüsyon, oda sicakliginda 4 saat karistirilmistir ve daha sonra vakum altinda konsantre edilmistir. Ham ürün (150 mg), asagidaki kosullar kullanilarak preparatif HPLC yoluyla saflastirilmistir: Kolon, dakika % su ile; Detektör, MS,UV 254/220 nm. Bu, sari bir kati olarak 15.5 mg (%10) trifloroasetat basliktaki bilesigi ortaya çikarmistir.
LC/MS: m/z 681.4 [M+H]+ 1H NMR (,2.62- pentaeroksihekzillamino)mpanoil) i eridin-4-il metilamino -2- 2- metilbenzil ro iI irazin-2-karboksamid (9H-fluoren-9-iI)metiI(S)-3-(3.5-diamino-6-kIorogirazin-2-karboksamido)-2-(2- 1,3-dioksan-4-il)propiI)(hekzil)amino)propanoiI)piperidin-4-iI)metil)karbamat HENJY NFmoc mi? Sodyum siyanoborohidrit (57.0 mg, 0.91 mmol), MeOH (20 mL) içerisinde bir hekzanal hidroksi-2-feniI-1,3-dioksan-4-il)propil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metil)karbamat 6,7,8-triolden baslanarak hazirlanmistir] (300 mg, 0.30 mmol) karisimina parçalar halinde eklenmistir. Ortaya çikan solüsyon, 25°C'de 4 saat karistirilmistir. Solvent, düsük basinç altinda uzaklastirilmistir. Kalinti, sari bir zamk olarak (9H-fluoren-9- il)metil ((8)-3-(3,5-diamino-G-kloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)((1- il)propil)(hekzil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metil)karbamat (270 mg, %83) saglamak üzere preparatif TLC (DCM: MeOH = 25: 1) yoluyla saflastirilmistir.
LC/MS: m/z 1076 [M+H]+ 1H NMR (, 1.59 - 1.65 (9H-flgoren-9-il)met_il (S)-3-(3.5-c_liamino-G-kloro irazin-2-karboksamido -2- 2- pentahidroksihekgilhminmmanoillgiperidin-4-il)metil)karbamat mmol), etanol (5 mL) içerisinde HCI'ye (4M, aköz, 15 mL)ekIenmistir. 25°C'de 2 saat karistirildiktan sonra karisim, düsük basinç altinda konsantre edilmistir ve sari bir yag olarak basliktaki bilesigi (200 mg, %81) saglamistir.
LC/MS: m/z 987 [M+H]+ pentahidroksihekzil)aminmmanoilmiperidin-4-il)metiIamino)-2-(2- metilbenziI)propil)pirazin-2-karboksamid NH2 O ' Dietilamin (3 mL), DMF (6 mL) içerisinde (9H-fluoren-9-il)metil ((S)-3-(3,5-diamino-6- kloropirazin-Z-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)pr0pil)((1-(3-(hekzil((2R,3R.4R.5R)- 2,3,4,5,6-pentahidroksihekzil)amin0)propanoil)piperidin-4-il)metil)karbamata (adim 2, 200 mg, 0.20 mmol) eklenmistir. Ortaya çikana karisim, 25°C'de 2 saat karistirilmistir.
Solvent, düsük basinç altinda uzaklastirilmistir. Ham ürün, eluentler olarak preparatif saflastirilmistir. Istenen bilesigi içeren fraksiyonlar, sari bir zamk olarak 3,5-diamino-6- pentahidroksihekzil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metil)amino)-2-(2- metilbenzil)pr0pil)pirazin-2-karboksamid (23.5 mg) saglamak üzere kuruyana kadar buharlastirilmistir.
LC/MS: m/z 765.4 [M+H]+ 1H NMR (, 7.20 (m, 1H). pentahidroksihekzil!amino)etil)ka_rbamoil)benzil)amino)-2-(2- metilbenziI)propil)pirazin-2-karboksamid dihidroklorid 9' \/'^~.~ _ _ Tert-bütil ((S)-3-(3.5-diamino-6-kloropirazin-2-karboksamido)-2-(2- pentahidroksihekzil)amino)etil)karbamoil)benzil)karbamat ((2-(hekzilamin0)etil)karbamoil)benzil)karbamat (Ara ürün E, 500 mg, 0.70 mmol), ve DIPEA ( içerisinde çözünmüstür ve oda sicakliginda 1 saat karistirilmistir. Sodyum siyanoborohidrit (133 mg, 2.11 mmol) ve asetik asit ( eklenmistir ve karistirma 18 saat ve daha sonra 50°C'de 30 saat devam etmistir. Reaksiyon, oda sicakligina sogutulmustur, 3 M HCI (aköz) ilavesi ile söndürülmüstür, 15 dakika karistirilmistir ve daha sonra vakumda konsantre edilmistir. Kalinti, EtOAc (50 mL) ve %8 NaH003 (aköz) (50 mL) içerisinde çözünmüstür, çalkalanmistir ve fazlar ayrilmistir. Aköz faz, EtOAc ( ile özütlenmistir. Kombine organik fazlar, Na2804 (s) ile kurutulmustur, filtrelenmistir ve vakumda buharlastirilmistir. Bilesik, 100 mL/dakikalik bir akis ile 20 dakika HZO/MeCN/ACOH 95/5/02 tamponu içinde %20 - 60 asetonitril gradyani kullanilarak bir Kromasil C8 kolonu (10 um üzerinde preparatif HPLC yoluyla saflastirilmistir. Bilesikler, 268 nmyde UV yoluyla tespit edilmistir. Bilesik toplanmistir ve renksiz bir kati olarak basliktaki bilesigi (195 mg, %32) saglamak üzere dondurarak kurutulmustur.
LC/MS: m/z 873.6 [M+H]+ 1H NMR (, 1.3 - 1.44 pentahidroksihekzil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2- metilbenziI)propil)pirazin-2-karboksamid dihidroklorid vwlilvx`/ ' C' MeOH'nin (5 mL, 124 mmol) bir buz banyosu ile sogutulmus sisesine damlatilarak asetil klorid ( eklenmistir. Karisim 5 dakika karistirilmistir ve tert-bütil pentahidroksihekzil)amino)etil)karbamoil)benzil)karbamat (190 mg, 0.22 mmol) daha sonra eklenmistir. Reaksiyon oda sicakliginda 1.5 saat karistirilmistir ve daha sonra vakumda buharlastirilmistir. Kalinti, su Içinde çözünmüstür ve soluk bir kati olarak basliktaki bilesigi (184 mg, %100) vermek üzere dondurarak kurutulmustur.
LC/MS: m/z 773.4 [M+H]+ 1H NMR (, 1.62 - 1.77 pentahidroksihekzil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2- metilbenzil ro il irazin-2-karboksamid N (1* `NA w” tert-litil ((S)-3-(3.5-giamino-6-kloropirazin-2-karboksamido1-2-(2- pentahidroksihekzil)amino)etil)karbamoil)benzil)karbamat ((2-(hekzilamino)etil)karbamoil)benzil)karbamat (Ara ürün E. 1.25 9, 1.76 mmol), ve DIPEA ( içerisinde çözünmüstür ve oda sicakliginda 1 saat karistirilmistir. Sodyum siyanoborohidrit (0.332 9, 5.29 mmol) ve asetik asit ( eklenmistir ve karistirma, 50°C`de 40 saat devam etmistir. Reaksiyon, oda sicakligina sogutulmustur, %8 NaHCOB (aköz) ilavesi ile söndürülmüstür, 30 dakika karistirilmistir ve vakumda konsantre edilmistir. Kalinti, EtOAc ( içerisinde çözünmüstür, çalkalanmistir ve fazlar ayrilmistir. Aköz faz EtOAc ( ile özütlenmistir.
Kombine organik fazlar Na2804 (s) ile kurutulmustur, filtrelenmistir ve vakumda buharlastirilmistir. Bilesik, 100 mL/dakikalik bir akis ile 20 dakika H20/MeCN/ACOH kolonu (10 pm üzerinde preparatif HPLC ile saflastirilmistir. Bilesikler, 268 nm'de UV yoluyla tespit edilmistir. Bilesik toplanmistir ve beyaz bir kati olarak tert- pentahidroksihekzil)amin0)etil)karbamoil)benzil)karbamat (1.26 9, 82%) vermek üzere dondurarak kurutulmustur.
LC/MS: m/z 873.6 [M+H]+ 1H NMR (, 1.27 - 1.46 8.37 (m, 1H). pentahidroksihekzil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2- metilbenziI)propil)pirazin-2-karboksamid dihidroklorid rii/Lüi/ r-i^ / ”Hb .4 `.ari \ Cl "W/:bi U** i'v- Asetil klorid ( bir buz banyosu ile sogutulan balona damlatilarak eklenmistir. Karisim, 5 dakika karistirilmistir ve tert-bütil ((S)-3- pentahidroksihekzil)amin0)etil)karbam0il)benzil)karbamat (1.26 9, 1.44 mmol) daha sonra eklenmistir. Reaksiyon, oda sicakliginda 1.5 saat karistirilmistir ve daha sonra vakumda buharlastirilmistir. Kalinti, su içinde çözünmüstür ve soluk bir kati olarak 3,5- pentahidroksihekzil)amino)etil)karbam0il)benzil)amin0)-2-(2-metilbenziI)propil)pirazin-2- karboksamid dihidroklorid (1.29 9, %106) vermek üzere dondurarak kurutulmustur.
LC/MS: m/z 773.4 [M+H]+ 1H NMR (, 1.62 - 1.76 pentahilroksihekzillaminoletillkaibamoillbenzil!aminoi-Z-(Z- metilbenzil ro iI irazin-2-karboksamid pentahidroksihekzil)amin0)etil)karbamoil)benzil)amin0)-2-(2-metilbenziI)pr0pil)pirazin-2- karboksamid dihidroklorid (1.23 9, 1.45 mmol), su (15 ml) içerisinde çözünmüstür ve ve yari kati/yag vermek üzere vakumda buharlastirilmistir. Kalinti, asetonitrIl/su içinde çözünmüstür ve soluk bir kati olarak 3,5-diamino-6-kloro-N-((R)-3-((4-((2- pentahidroksihekzil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2-metilbenziI)pr0pil)pirazin-2- karboksamid (1.08 9, %96) vermek üzere dondurarak kurutulmustur.
LC/MS: m/z 773.4 [M+H]+ 1H NMR (, 1.32 - 1.42 4-(((R)-3-(3,5-diamino-6-kloropirazin-2-karboksamido)-2-(2- pentahidroksihekzil)amino)etilkarbamat (R)-4-((3-(3.5-diamino-6-kloro irazin-2-karboksamido -2- 2- metilbenziI)propilamino)metiI)fenil asetat 50 mL'lik armut biçimli bir sise içerisinde (R)-3,5-diamino-N-(3-amino-2-(2- formilfenil asetat ( eklenmistir. 1 saat karistirildiktan sonra sodyum triasetoksiborohidrit (3.89 9, 18.4 mmol) eklenmistir ve karistirma bir gece devam etmistir. Karisim, DCM ile seyreltilmistir ve su ve tuzlu su ile yikanmistir. Organik katman Na2804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve sari bir kati olarak ham (R)-4-(((3-(3,5-diamin0-6- kloropirazin-Z-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)amino)metil)fenil asetat (1.709, sonraki adimda direkt olarak kullanilmistir.
LC/MS: m/z 467 [M+H]+ (S)-4-((tert-bütoksikarbonil(3-(3,5-diamino-6-kloropirazin-2-karboksamido)-2-(2- metilbenziI)propil)amino)metil)fenil asetat içerisinde bir (R)-4-(((3-(3,5-diamino-6-kl0ropirazin-2-karboksamido)-2-(2- mmol) karisimina eklenmistir. Karisimin oda sicakligina ulasmasina olanak taninmistir ve bir gece karistirilmistir. Reaksiyon karisimi EtOAc ile seyreltilmistir ve doymus tuzlu su ile yikanmistir. Organik katman, Na2804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve vakumda buharlastirilmistir. Kalinti, petrol eter içerisinde %10 ila 40 EtOAc gradyani kullanilarak silika jel üzerinde flas kromatografisi yoluyla saflastirilmistir. Saf fraksiyonlar, sari bir kati olarak basliktaki bilesigi (1.30 9, %57) saglamak üzere kuruyana kadar buharlastirilmistir.
LC/MS: m/z 597 [M+H]+ 1H NMR (, 7.10 (m, 6H).
(S)-tert-bütil 3-(3,5-diamino-6-kloropirazin-2-karboksamido)-2-(2- metilbenzil)propil(4-hidroksibenzil)karbamat bir (S)-4-(((tert-büt0ksikarboniI)(3-(3,5-diamino-ß-kloropirazin-2-karboksamid0)-2-(2- metilbenzil)propiI)amino)metil)fenil asetat (1.3 9, 2.18 mmol) solüsyonuna damlatilarak eklenmistir. Reaksiyon solüsyonu, oda sicakliginda 3 saat karistirilmistir. Reaksiyon karisimi, 2M aköz HCI ile asitlestirilmistir. Reaksiyon karisimi, EtOAc ile özütlenmistir ve organik faz, su ve tuzlu su ile yikanmistir, Na2804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve sari bir kati olarak ham basliktaki bilesigi (1.20 9, %99) saglamak üzere buharlastirilmistir.
LC/MS: m/z 555 [M+H]+ (S)-4-((tert-bütoksikarbonil(3-(3,5-diamino-6-klor0pirazin-2-karboksamido)-2-(2- metilbenziI)propil)amino)metil)fenil karbonokloridat 50 mL'Iik yuvarlak tabanli bir balonda sari bir solüsyon vermek üzere THF'ye (10 mL) (S)-tert-bütil (3-(3,5-diamino-G-kloropirazin-2-karb0ksamid0)-2-(2-metilbenzil)propil)(4- hidroksibenzil)karbamat ( eklenmistir.
Karisim, bir buz banyosu ile sogutulmustur ve trifosgen (200 mg, 0.68 mmol) eklenmistir. 1 saat karistirildiktan sonra reaksiyon karisimi su içine bosaltilmistir ve EtOAc (3 x 20 mL) ile özütlenmistir. Organik katman, NazsO4 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve sari bir yag olarak basliktaki bilesigi (250 mg, %90) saglamak üzere buharlastirilmistir.
LC/MS: m/z 617 [M+H]+ tert-bü_til ((S)-3-(3.5-qiamino-6-klorogirazin-2-karboksamido1-2-(2- 1,3-dioksan-4-il)propiI)(hekzil)amino)etiI)karbamoil)oksi)benzil)karbamat HZNJ`KN `hBoc 50 mL`Iik yuvarlak tabanli bir balonda renksiz bir solüsyon ile sonuçlanarak THF (10 kloropirazin-Z-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)pr0pil)amin0)metil)fenil karbonokloridat (adim 4, 150 mg, 0.24 mmol) eklenmistir. Ortaya çikan solüsyon, oda sicakliginda 3 saat karistirilmistir. Reaksiyon karisimi, su (20 mL) içine bosaltilmistir ve EtOAc (3 x mL) ile özütlenmistir. Organik fazlar, Na2804 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve vakumda buharlastirilmistir. Kalinti, sari bir kati olarak basliktaki bilesigi (200 mg, LC/MS: m/z 977 [M+H]+ 4-(((R)-3-(3,5-diamino-6-kloropirazin-2-karboksamido)-2-(2- pentahidroksihekzil)amino)etilkarbamat mL'Iik yuvarlak tabanli bir balonda sari bir solüsyon vermek üzere EtOH'ye (1 mL) tert-bütil ((S)-3-(3,5-diamino-G-kloropirazin-2-karb0ksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(4- il)propil)(hekzil)amino)etil)karbam0il)0ksi)benzil)karbamat (adim 5, 200 mg, 0.20 mmol) eklenmistir. Aköz HCI (4M, 3 mL) eklenmistir ve ortaya çikan solüsyon, oda sicakliginda 12 saat karistirilmistir. Ham ürün, eluent olarak azalan polariteli su (% ve MeCN gradyani kullanilarak preparatif HPLC (Waters XBridge Prep C18 OBD kolon, Su silika, 50 mm çap, 150 mm uzunluk) yoluyla saflastirilmistir. Istenen bilesigi içeren fraksiyonlar, sari bir kati olarak basliktaki bilesigi (28.0 mg, %13) saglamak üzere kuruyana kadar buharlastirilmistir.
LC/MS: m/z 789.4 [M+H]+ 1H NMR (, 1.69 - 1.91 (m, 7.453 (cl, 2H). pentahidroksihekzil)amino)etil)karbamoil)fenetil)amino)-2-(2- metilbenzil ro il irazin-Z-karboksamid dihidroklorid l .\ /J\:`4 &î "Mx/N tert-Bütil ((S)-3-(3,5-diamino-ö-kloropirazin-2-karboksamido)-2-(2- pentahidroksihekzil)amino)etil)karbamoil)fenetil)karbamat (S)-ten'-bütil (3-(3,5-diamino-G-kloropirazin-2-karb0ksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(4- ((2-(hekzilamin0)etil)karbamoil)fenetil)karbamat (Ara ürün D, 500 mg, 0.69 mmol), ve DIPEA ( içerisinde çözünmüstür ve sodyum siyanoborohidrit (130 mg, 2.07 mmol) ve asetik asit ( ilavesinden önce 40 dakika 50°C'de karistirilmistir. Karistirma, 50°C'de 21 saat devam etmistir ve reaksiyon karisiminin daha sonra oda sicakligina sogumasina olanak taninmistir.
Reaksiyon, %8 NaHCO3 (aköz) ilavesi ile söndürülmüstür. Karisim, EtOAc (50 mL) ve Aköz faz EtOAc ( ile kurutulmustur, filtrelenmistir ve vakumda buharlastirilmistir. Bilesik, 100 mL/dakikalik gradyani kullanilarak bir Kromasil C8 kolonu (10 pm üzerinde preparatif HPLC ile saflastirilmistir. Bilesikler 265 nm'de UV ile tespit edilmistir. Bilesik toplanmistir ve soluk bir kati olarak basliktaki bilesigi (385 mg, %63) vermek üzere dondurarak kurutulmustur.
LC/MS: m/z 887.6 [M+H]+ 1H NMR (, pentahidroksihekzillamino)etil)ka_rbamoil)feneti)gmino)-2-(2- metilbenzil ro il irazin-2-karboksamid dihidroklorid 2 X "' C' . u" A1 7' VAC ._ lvl 4, C› "V `~ «5) /`ûi~ Asetil klorid (, buz banyosu ile sogutulmus bir MeOH (5 mL, 124 mmol) solüsyonuna damlatilarak eklenmistir. Solüsyon, 5 dakika karistirilmistir ve daha pentahidroksihekzil)amino)etil)karbamoil)fenetil)karbamata (adim 1, 385 mg, 0.43 mmol) eklenmistir. Reaksiyon oda sicakliginda 2.5 saat karistirilmistir ve daha sonra vakumda konsantre edilmistir. Kalinti, su içinde çözünmüstür ve sari bir kati olarak basliktaki bilesigi (369 mg, %99) vermek üzere dondurarak kurutulmustur.
LC/MS: m/z 787.4 [M+H]+ 1H NMR (, 1.6 - 1.74 metilbenzil ro il irazin-2-karboksamid dihidroklorid 3 ?:iHl: l Fit-IDI" Tert-bütil ((S)-3-(3, 5-diamino-6-kloropirazin-2-karboksamido)-2-(2- metilbenzil)gropil)(4-( (2- -(hekzil((2S 3R. 4R)-2 3 4. 5- tetrahidroksigentiliamino)etil)kaibamoil)fenetil )karbamat ((2-(hekzilamin0)etil)karbamoil)fenetil)karbamat (Ara ürün D, 500 mg, 0.69 mmol), 0.69 mmol), MeOH (5 mL) içerisinde çözünmüstür ve sodyum siyanoborohidrit (130 mg, 2.07 mmol) ve asetik asit ( ilavesinden önce 40 dakika 50°C`de karistirilmistir. Karistirma, 21 saat 50°C'de devam etmistir ve daha sonra oda sicakligina sogumasina olanak taninmistir. Reaksiyon, %8 NaHC03 (aköz) ilavesi ile söndürülmüstür. Karisim, EtOAc (50 mL) ve %8 NaHC03 (aköz) (50 mL) içerisinde seyreltilmistir, çalkalanmistir ve fazlar ayrilmistir. Aköz faz EtOAc ( ile özütlenmistir. Kombine organik fazlar Na2SO4 (s) ile kurutulmustur. filtrelenmistir ve vakumda buharlastirilmistir. Bilesik, 100 mL/dakikalik bir akis ile 20 dakika kullanilarak bir Kromasil 08 kolonu (10 pm üzerinde preparatif HPLC ile saflastirilmistir. Bilesikler, 265 nm'de UV yoluyla tespit edilmistir. Bilesik toplanmistir ve soluk bir kati olarak Iert-bütil ((S)-3-(3,5-diamin0-6-kl0ropirazin-2-karb0ksamido)-2- tetrahidroksipentil)amin0)etil)karbam0il)fenetil)karbamat (374 mg, %63) vermek üzere dondurarak kurutulmustur.
LC/MS: m/z 857.6 [M+H]+ 1H NMR (, 1.28 - 1.44 tetrahidroksipentillamino)etil)karbamoil)fenetil)amino)-2-(2- metilbenziI)propil)pirazin-2-karboksamid dihidroklorid Asetil klorid (, buz banyosu ile sogutulmus bir MeOH (5 mL, 123.59 mmol) solüsyonuna damlatilarak eklenmistir. Solüsyon, 5 dakika karistirilmistir ve daha sonra tert-bütil ((S)-3-(3,5-diamino-6-kloropirazin-2-karboksamido)-2-(2- tetrahidroksipentil)amin0)etil)karbamoil)fenetil)karbamata (374 mg, 0.44 mmol) eklenmistir. Reaksiyon, oda sicakliginda 2.5 saat karistirilmistir ve daha sonra vakumda konsantre edilmistir. Kalinti, su içinde çözünmüstür ve sari bir kati olarak 3,5- tetrahidroksipentil)amin0)etil)karbamoil)fenetil)amino)-2-(2-metilbenzil)propiI)pirazin-2- karboksamid dihidroklorid (361 mg, %100) vermek üzere dondurarak kurutulmustur.
LC/MS: m/z 757.4 [M+H]+ 1H NMR (, 1.84 - 1.95 (m, tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2- irazin-2-karboksamid asetik asit metilbenzil ro iI tert-bü_til ((R)-3-(3.5-diamino-6-kloro irazin-2-karboksamido -2- 2- metilbenziImropil)(4-((g-(hekzil((25.3R.4R)-g,3.4.5- tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)benzil)karbamat (R)-tei1-bütil (3-(3,5-diamino-G-kloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(4- ((2-(hekzilamino)etil)karbam0il)benzil)karbamat. (Ara ürün H) (163 mg, 0.23 mmol), 0.23 mmol), MeOH (4 mL) içerisinde çözünmüstür ve oda sicakliginda 1 saat oda sicakligina sogumasina olanak taninmistir. Reaksiyon, %8 NaHC03 (aköz) ilavesi ile söndürülmüstür ve 30 dakika karistirilmistir. Solvent vakumda konsantre edilmistir.
Kalinti, EtOAC (25 mL) ve %8 NaHC03 (aköz) (25 mL) içerisinde çözünmüstür çalkalanmistir ve fazlar ayrilmistir. Aköz faz, EtOAc ( ile özütlenmistir.
Kombine organik fazlar, Na2804 (5) ile kurutulmustur, filtrelenmistir ve vakumda buharlastirilmistir. Bilesik, 19 mL/dakikalik bir akis ile 20 dakika HQO/ACN/ACOH kolon (10 um üzerinde preparatif HPLC yoluyla saflastirilmistir.
Bilesikler, 265 nm`de UV yoluyla tespit edilmistir. Ürün fraksiyonlari toplanmistir ve bir kati olarak tert-bütil ((R)-3-(3,5-diamino-6-kloropirazin-2-karboksamido)-2-(2- tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)benzi|)karbamat (127 mg, %655) vermek üzere dondurarak kurutulmustur. 1H NMR (, 1.29 - 1.42 MS ES+: m/z 843.4 [M+H]+ tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2- metilbenziI)propil)pirazin-2-karboksamid asetik asit Asetil klorid (, bir buz banyosu ile sogutulmus MeOH (2.5 mL, 61.79 mmol) sisesine damlatilarak eklenmistir ve tert-bütil ((R)-3-(3,5-diamino-6- tetrahidroksipentil)amin0)etil)karbam0il)benzil)karbamat (127 mg, 0.15 mmol) ilavesinden önce 5 dakika karistirilmistir. Reaksiyon, oda sicakliginda 1 saat karistirilmistir ve daha sonra vakumda konsantre edilmistir. Kalinti, EtOAc (25 mL) ve Aköz faz, EtOAC ( ile kurutulmustur, filtrelenmistir ve vakumda buharlastirilmistir. Bilesik, 19 mL/dakikalik bir gradyani kullanilarak bir Kromasil C8 kolonu (10 pm üzerinde preparatif HPLC yoluyla saflastirilmistir. Bilesikler 268 nm'de UV ile tespit edilmistir. Ürün, soluk bir kati olarak - 2,3,4,5-tetrahidroksipentiI)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2- metilbenzil)propil)pirazin-2-karb0ksamid (100 mg, %82) vermek üzere dondurarak kurutulmustur. 1H NMR (, 1.32 - 1.41 8.28 (t, 1H), 8.33 (t, 1H).
MS ES+: m/z 743.5 [M+H]+ tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2- metilbenzil ro il irazin-2-karpoksamid asetjk asit tert-bütil ((R)-3-(3,5-diamino-G-kloropirazin-2-karboksamido)-2-(2- metilbenziI)propil)(4-((2-(hekzil((2R,3S.4S)-2,3,4,5- tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)benzil)karbamat (R)-tert-bütil (3-(3,5-diamino-G-kloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(4- ((2-(hekzilamin0)etil)karbamoil)benzil)karbamat, (Ara ürün G) (163 mg, 0.23 mmol), mmol), MeOH içerisinde çözünmüstür ve oda sicakliginda 1 saat karistirilmistir. eklenmistir ve reaksiyon, 20 saat 50°C'ye isitilmistir ve daha sonra oda sicakligina sogumasina olanak taninmistir. Reaksiyon, %8 NaHCOs (aköz) ilavesi ile söndürülmüstür ve 30 dakika karistirilmistir. Solvent vakumda konsantre edilmistir.
Kalinti, EtOAc (25 mL) ve %8 NaHC03 (aköz) (25 mL) içerisinde çözünmüstür, çalkalanmistir ve fazlar ayrilmistir. Aköz faz, EtOAc ( ile özütlenmistir.
Kombine organik fazlar, Na2804 (s) ile kurutulmustur, filtrelenmistir ve vakumda buharlastirilmistir. Bilesik, 19 mL/dakikalik bir akis ile 20 dakika HZO/ACN/ACOH kolonu (10 um üzerinde preparatif HPLC yoluyla saflastirilmistir.
Bilesikler, 265 nm'de UV yoluyla tespit edilmistir. Ürün fraksiyonlari toplanmistir ve bir kati olarak tert-bütil ((R)-3-(3,5-diamin0-6-kloropirazin-2-karboksamid0)-2-(2- tetrahidroksipentil)amin0)etil)karbam0il)benzil)karbamat (135 mg, %697) vermek üzere dondurarak kurutulmustur. 1H NMR (, 1H), 8.25 - 8.32 (m, 1H).
MS ES+: m/z 843.5 [M+H]+ tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)benzil)amirio)- -(2- metilbenzil ro iI irazin-2-karboksamid asetik asit Hiîx " h ,1 OH Asetil klorid (, bir buz banyosu ile sogutulan MeOH (2.5 mL, 61.79 mmol) siseye damlatilarak eklenmistir ve teri-bütil ((R)-3-(3,5-diamino-6-kloropirazin-2- tetrahidroksipentil)amin0)etil)karbam0il)benzil)karbamat (135 mg, 0.16 mmol) ilavesinden önce 5 dakika karistirilmistir. Reaksiyon, oda sicakliginda 1 saat karistirilmistir ve daha sonra vakumda buharlastirilmistir. Kalinti, EtOAc (25 mL) ve %5 Na2C03 (aköz) (25 mL) içerisinde çözünmüstür, çalkalanmistir ve fazlar ayrilmistir.
Aköz faz, EtOAc ( ile kurutulmustur, filtrelenmistir ve vakumda buharlastirilmistir. Bilesik, 19 mL/dakikalik bir gradyani kullanilarak bir Kromasil C8 kolonu (10 um üzerinde preparatif HPLC yoluyla saflastirilmistir. Bilesikler, 268 nm'de UV yoluyla tespit edilmistir. Ürün, soluk bir kati olarak 3.5-diamino-6-kl0ro-N-((S)-3-((4-((2- metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid (93 mg, %702) saglamak üzere dondurarak kurutulmustur. 1H NMR (, 1.31 - 1.42 MS ES+: m/z 743.4 [M+H]+ pentahidroksihekzil)amino)etilkarbamoiI)fenetilamino)-2-(2- metilbenzil ro iI irazin-2-karboksamid ~1f.\ \ L'ii-i OH tert-bütil (S)-3-(3,5-diamino-6-kloropirazin-2-karboksamido)-2-(2- pentahidroksihekzil)amino)etilkarbamoiI)fenetil)karbamat 50 mL'lik yuvarlak tabanli bir balona sari bir solüsyon vermek üzere MeOH (15 mL) içerisinde (S)-tert-bütil (3-(3,5-diamino-G-kloropirazin-2-karboksamido)-2-(2- metilbenzil)propil)(3-((2-(hekzilamino)etil)karbamoil)fenetil) karbamat (ara ürün D, 370 (138 mg, 0.77 mmol) yerlestirilmistir. Yukaridaki karisim 30 dakika karistirildiktan sonra karistirilmistir. Solvent, sari kati olarak ham ürün tert-bütil ((S)-3-(3,5-diamin0-6- kloropirazin-Z-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(3-((2-(hekzil((28,3R,4R,5R)- vermek üzere düsük basinç altinda uzaklastirilmistir. Ürün, sonraki adimda ilave saflastirma olmaksizin direkt olarak kullanilmistir.
LC/MS: m/z 887 [M+H]+ pentahidroksihekzilhmino)etilkarbamoiI)fenetilamino)-2-(2- metilbenziI)propil)pirazin-2-karboksamid 50 mL'Iik yuvarlak tabanli bir balona sari bir solüsyon vermek üzere HCl/MeOH (20 mL, pentahidroksihekzil)amino)etil)karbam0il)fenetil)karbamat (500 mg, 0.56 mmol) yerlestirilmistir. Ortaya çikan solüsyon 2 saat oda sicakliginda karistirilmistir. Solvent, düsük basinç altinda uzaklastirilmistir. Ham ürün, eluentler olarak artan sekilde polar su (%01 NH4HC03 içeren) ve MeCN karisimlari kullanilarak preparatif HPLC (Waters XBridge Prep C18 OBD kolon, 5u silika, 50 mm çap, 150 mm uzunluk), yoluyla saflastirilmistir. Istenen bilesigi içeren fraksiyonlar, sari bir kati olarak 3,5-diamino-6- pentahidroksihekzil)amino)etil)karbam0il)fenetil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin- 2-karboksamid (87 mg, %20) saglamak üzere kuruyana kadar buharlastirilir.
LC/MS: m/z 788 [M+H]+ 1H NMR (, 1.39 - 7.73 (m, 2H).
Ara Ürünlerin Sentezi (R)-3.5-diamino-N-(3-amino-2_-('_2-met_ilbenziIlgrogill-6-klorogirazin-2-karboksamid Dimetil 2-(2-metilbenzil)malonat Bir reaktör, dimetil malonat (6.00 kg, 45.4 mol) ve metanol (21.3 L) ile yüklenmistir. eklenmistir. Doymus NH4CI (53.1 L), pH 8.5 ile reaksiyona eklenmistir. Ürün, izopropil asetat (3 x 25 L) ile özütlenmistir ve kombine organik katmanlar, %10 tuzlu su (10 L) ile yikanmistir ve bir yag (8.63 kg, agirlikça %68, %83) olarak basliktaki bilesigi saglamak üzere düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Bu sekilde elde edilen basliktaki bilesik dialkillenmis malonat içerir. HPLC ile saflik: %86.
LC/MS: m/z 237 [M+H]+ 1H-NMR (DMSO-ds, , 3.12 (2H, gg-Metilbenzil)malonamid ve metanol (14.8 L) ile yüklenmistir. %34 Amonyum hidroksit (24 L, 36 esdeger) eklenmistir ve reaksiyon, HPLC analizi yoluyla tam oldugu düsünülüne kadar 25°C'de karistirilmistir. Katilar filtrelenmistir ve daha sonra MTBE (15.3 L) eklenmistir. 30 dakika sonra katilar filtrelenmistir, MTBE (2 x 15.3 L) ile yikanmistir ve beyaz bir kati (3.2 kg, %91) olarak basliktaki bilesigi saglamak üzere 60°C'de düsük basinç altinda kurutulmustur.
LC/MS: m/z 206.9 [M+H]* 1H-NMR (DMSO-ds, , 2- 2-Metilbenzil ro an-1 3-diamin HZN/ÜAÖ Bir reaktör, 2-(2-metilbenzil)malonamid ( ile yüklenmistir. Viskoz karisim 0°C'ye sogutulmustur ve bir reaksiyon sicakligi 2°C altinda muhafaza edilerek 2 saat boyunca 1M boran-THF (25.6 L, 25.6 mol) eklenmistir.
Reaksiyon 15°C'ye ilitilmistir ve daha sonra gece boyunca 50°C'de karistirilmistir.
HPLC analizi, geri kalan baslangiç materyalinin %8'den daha azini gösterdiginde reaksiyon karisimi, 30°C'nin altindaki bir sicaklik muhafaza edilerek 4M KOH (8 L) içinde söndürülmüstür. Organik katman düsük basinç altinda konsantre edilmistir ve aköz katman MTBE (2 x 10 L) ile iki kez özütlenmistir. Kombine MTBE ekstraktlari, konsantre organik katmana eklenmistir ve kombine organik katmanlar daha sonra °C'nin altindaki bir sicaklik muhafaza edilerek bir GM HCI (10 L) solüsyonuna yüklenmistir. Aköz faz, MTBE (10 L) ile yikanmistir ve daha sonra 6M KOH (12 L) ile baziklestirilmistir. Aköz faz, THF (10 L ve daha sonra 5 L) ile iki kez özütlenmistir ve kombine organik faz, düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Tolüen (5 L) eklenmistir ve daha sonra azeotroplanmistir, herhangi bir kalinti suyu uzaklastirmak üzere damitilmistir. Karisim, tolüen (5 L) ile tritüre edilmistir ve katilar filtrelenmistir ve tolüen (3 L) ile yikanmistir. Filtreleme ürünü, serbest amin (1.13 kg, %70 verim) olarak basliktaki bilesigi saglayarak düsük basinç altinda konsantre edilmistir. HPLC yoluyla saflik: %91.
LC/MS: m/z 179.0 [M+H]+ 1H-NMR (CDCIa, , 2.27 2- 2-Metilbenzil ro an-1 3-diamin L-tartrat 2 HOMOH Ham diamine (adim 3'ten alinan) (1.62 kg, 9.1 mol) etanol (4 L) eklenmistir. Etanol (11 L) içerisinde çözünen bir L-tartarik asit (1.62 kg, 10.8 mol) solüsyonu sicaklik 40°C altinda tutularak eklenmistir. Karisim, 3 gün 25°C'de karistirilmistir ve daha sonra katilar filtrelenmistir, etanol (2 x 2 L) ile yikanmistir ve mono- L-tartrat tuzu (3.21 kg, kantitatif verim) olarak basliktaki bilesigi saglamak üzere 50°C”de düsük basinç altinda kurutulmustur. HPLC yoluyla saflik: %922.
LC/MS: m/z 179.0 [M+H]+ 1H-NMR (D20, , 3.04- (R)-A_llil (3-amino-2-_Q-metilbenzil)grogil)karbamat (1-(R)) sicakligi muhafaza edilerek eklenmistir. Karisim, 3 gün 25°C'de 30 dakika karistirilmistir ve daha sonra 2-MeTHF (14 L) eklenmistir. Katmanlar ayrilmistir ve aköz faz 2-MeTHF (14 L) ile özütlenmistir. Kombine organik faz kurutulmustur (sodyum sülfat), filtrelenmistir ve serbest diamini saglayarak düsük basinç altinda konsantre edilmistir. Bir reaktör serbest diamin, 2-MeTHF (37.4 L) ve diallil karbonat (1.80 kg, 12.6 mol) ile yüklenmistir. Immobilize Iipaz Amano PS IM (5.61 kg, agirlikça 3 esdeger), 30 dakika parçalar halinde eklenmistir ve sicaklik, 30°C”de ayarlanmistir. 4 gün sonra 1H NMR, geri kalan %5`ten daha az baslangiç materyali göstermistir ve reaksiyon karisimi, Selit yoluyla filtrelenmistir ve basliktaki bilesigi (2.68 kg,%82 ee, saflik: %847.
LC/MS: m/z 263.1 [M+H]+ 1H-NMR (CDCIS, , 580-560 (1H, br 6 156.6, 138.1, (R)-A_llil (3-gmino-2_-('_2-metilbenzil)gropil)karbamt (1-(R)) %rtrat tuzu.
Ham (R)-allil (3-amino-2-(2-metiIbenzil)propil)karbamat (2.68 kg, 10.2 mol) EtOH'ye (7.1 L) eklenmistir. EtOH (8 L) içerisinde bir D-tartarik asit (1.53 kg, 10.2 mol) solüsyonu, sicaklik 25°C'nin altinda tutularak eklenmistir. Yaklasik olarak 1 saat sonra bir çökelti olusmaya baslamistir ve karisimin, gece boyunca karismasina olanak taninmistir. MeCN (5 L) 25°C'de eklenmistir ve katilar filtrelenmistir, MeCN (2 x 5 L) ile yikanmistir ve stokiyometrik bir oran tabani/di-asit = 2:1'de 2.94 kg basliktaki bilsigi ((R) D-tartrat tuzu, %100 verim) saglamak üzere 40°C'de düsük basinç altinda kurutulmustur. HPLC yoluyla saflik: %916.
LC/MS: m/z 263.1 [M+H]+ 6 174.6, 32.7,19.1, 18.9.
(R)-allil (3-amino-_-(g-metilbenziligrogilikarbamat Nitrojen altinda 50 L'Iik bir kaba su (-Allil izlemistir. Karisima 1OM NaOH (14.7 L) eklenmistir ve sicaklik, 30°C'nin altinda korunmustur. Karisim, 30 dakika karistirilmistir, organikler ayrilmistir ve aköz MTBE verim saglamak üzere vakumda (1 L) konsantre edilmistir.
LC/MS: m/z 263.1 [M+H]+ 1H NMR (CDCI3, , (S)-allil tert-bütil (2-(2-metiIbenzil)propan-1,3-diil)dikarbamat Nitrojen altinda 50 L`lik bir kaba MTBE (29.4 L) içerisinde çözünen (R)-AIIII (3-amin0-2- (2-metilbenzil)pr0pil) karbamat (1740 9) eklenmistir. Bunu, trietilamin ( ilavesi izlemistir. Karisim, O°C'ye sogutulmustur ve MTBE (3.48 L) içerisinde çözünen BOC- anhidrit ( ile islem görmüstür. Reaksiyon, 20°C'ye ilitilmistir ve 2 saat karistirilmistir. 1H NMR araciligiyla reaksiyonun tamamlandigi belirlenmistir. Reaksiyon su (8.7 L) ile yüklenmistir ve 15 dakika karistirilmistir. Organikler ayrilmistir ve magnezyum sülfat üzerinde kurutulmadan, filtrelenmeden ve basliktaki bilesigi (2320 9, tuzlu su (8.7 L) ile yikanmistir. 1H NMR, >%90 olan bir saflik göstermistir. 1H NMR (CDCI3, , 5.32- (S)-tert-bütil (3-amino-2-(2-metilbenzil)propil)karbamat Nitrojen altinda 50 L`Iik bir kaba DCM (12.9 L) ve MeOH (10.3 L) içerisinde çözünen (S)-allil tert-bütil (2-(2-metilbenzil)propan-1,3-diil)dikarbamat (2330 9) eklenmistir, bunu Pd(PPh3)4 (148.4 g) ilavesi izlemistir. Reaksiyon karisimi, 5°C'ye sogutulmustur ve 2 saatlik bir periyotta parçalar halinde NaBH4 (729 9) ile yüklenmistir. Reaksiyon 20°C'ye ilitilmistir ve 2 saat karistirilmistir, Reaksiyon karisimi su (46.6 L) içinde dikkatli bir sekilde söndürülmüstür ve daha sonra 20 dakika karistirilmistir. Organikler ayrilmistir ve aköz, DCM (23.6 L) ile yeniden özütlenmistir. Kombine organikler, magnezyum sülfat üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve basliktaki bilesigi (1679 9, %100 verim (1H NMR araciligiyla ~%80 saf) vermek üzere vakumda konsantre edilmistir. 1H NMR (CDCI3, . s, 2H).
(S)-tert-bütil (3-(3,5-diamino-G-kloropirazin-2-karboksamido)-2-(2- metilbenzil)propil) karbamat Nitrojen altinda 5 L'Iik bir kaba 3,5-diamino-6-kloropirazin-2-karboksilik asit (100 g), HBTU ( eklenmistir. Reaksiyonun oda sicakliginda 24 saat karistirilmasina olanak taninmistir. Reaksiyona, THF (1.49 L) içerisinde çözünen (8)-tert-bütil (3-amino-2-(2-metilbenzil)pr0pil)karbamat (adim 9, 148.6 g) eklenmistir. Reaksiyonun, ekleme sirasinda 10°C kadar ekzoterm haline getirildigi not edilmelidir. Reaksiyonun, oda sicakliginda 24 saat karistirilmasina olanak taninmistir, LCMS geri kalan %5 eklenme ürününü göstermistir. Karisim, 4 saat °C'ye isitilmistir. LC/MS geri kalan %2 eklenme ürününü göstermistir. Reaksiyon, oda sicakligina sogutulmadan önce ilave 1 saat karistirilmistir ve vakumda konsantre edilmistir. Kalinti, etil asetat ( içine alinmistir ve doymus NaHC03 (1 L), %5 sitrik asit ( ile yikanmistir. Organikler, magnezyum sülfat üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve vakumda konsantre edilmistir. Kalinti, MTBE (1L) içerisine alinmistir ve MTBE ( ve dietil eter ( içine alinmadan önce yeniden konsantre edilmistir ve DIPEA tuzlarini uzaklastirmak üzere filtrelenmistir. Filtreleme ürünü konsantre edilmistir ve analiz, geri kalan bir miktar DIPEA tuzlarini göstermistir. Kalinti, MTBE ( ve dietil eter ( ile yeniden tritüre edilmistir ve yeniden filtrelenmistir. Filtreleme ürünü, basliktaki bilesigi ( vermek üzere konsantre edilmistir.
LC/MS: m/z 349.2 [M+H]+ 1H NMR (CDCI3, , 1H), 1.42 (5, 9H). 3,5-Diamino-N-[(2R)-3-amino-2-_(g-metilbenzil)Qrogil]-6-klorogirazin-2- karboksamid Nitrojen altinda 20 L'Iik bir flans balonuna dioksan (6 L) içerisinde (8)-tert-bütil (3-(3,5- diamino-ö-kloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil) karbamat (adim 10, 2215 9) eklenmistir. Karisim, tam çözünene kadar 20 dakika karistirilmistir.
Reaksiyona daha sonra dioksan (10 L) içerisinde 4M HCI eklenmistir. Reaksiyon, önemli miktarda bir gaz üretmistir ve sicaklik, sogutma islemi uygulanmadan önce °C'ye yükselmistir. Reaksiyonda viskoz yagli bir çökelti gözlenmistir. 1 saat sonra reaksiyon karisimina ait LC/MS tam reaksiyon göstermistir. Üst faz çözeltisi aktarilmistir ve vakumda konsantre edilmistir. Yagli viskoz kati, su (6 L) içinde çözünmüstür ve su (2 L) içinde çözünen konsantre üst faz ile kombine edilmistir. Aköz, MTBE (5 L) ile yikanmistir. Aköz daha sonra 10 M NaOH (2 L) ile bazik hale getirilmistir ve 2-Me-THF (4 x 10 L) ile özütlenmistir. Organikler kurutulmustur, filtrelenmistir ve vakumda konsantre edilmistir. Kalinti daha sonra kalinti 2-MeTHF'yi uzaklastirmak üzere MTBE'den (2 x 4 L) konsantre edilmistir. Kati, MTBEzheptan (9 L:1.8 L) ile tritüre edilmistir ve hafta sonu boyunca karismasina olanak taninmistir. Kati filtrelenmistir ve basliktaki bilesigi (1657 9, %96) saglayarak 40°C'de firinda kurutulmustur. 1H NMR (CDCIg, , 5.12 (b s, (R)-3,5-diamino-N-(3-amino-2_-('_2-met_ilbenziI ro iI -6-kloro irazin-2-karboksamid (2R,3S)-2-benzoil-3-(benzoiIoksi)süksinat 05)( 0 Nitrojen altinda 5 L`Iik bir kaba 3,5-Diamino-N-[(2R)-3-amino-2-(2-metilbenziI)propiI]-6- kloropirazin-2-karboksamid (127.4 g) ve metanol ( eklenmistir. Karisim, tüm kati çözünen kadar 30°C'ye hafif sekilde isitilmistir. Reaksiyon, oda sicakligina sogutulmustur ve metanol ( eklenmistir. Reaksiyonun karistirilmasina olanak taninmistir. ~2 saat sonra kati çökelmeye baslamistir. Reaksiyonun hafta sonu boyunca karismasina olanak taninmistir. Karisima izopropil asetat (1.5 L) eklenmistir ve karistirma islemi 4 saat devam etmistir. Çökelti daha sonra filtrelenmistir ve izopropil asetat (2 x 1L) ile yikanmistir. Kati daha sonra 40°C'de 3 gün firinda kurutulmustur. Toplamda 147.5 g (%74) stokiyometrik bir oran tabani/di-asit = 2:1'de elde edilmistir. 1H NMR (CDCI3, , 5.12 (b 3, (Rl-3.5-cßimino-N-(3-amino-2_-(g-metilbenziI ro il -6-kloro irazin-2-karboksamid (R)-3,5-diamino-N-(3-amino-2-(2-metilbenzil)propiI)-6-klor0pirazin-2-karboksamid (2R, 38)-2-benzoiI-3-(benzoiloksi)süksinat ( ve su ( içinde süspanse dilmistir ve bir buz banyosu ile sogutulmustur. Sodyum hidroksit, 1 M ( yavas bir sekilde eklenmistir ve karisim daha sonra tüm materyal çözünen kadar 40°C'de karistirilmistir. Karisim oda sicakligina sogutulmustur ve fazlar ayrilmistir. Aköz faz, 2-metil-THF ( ile özütlenmistir.
Kombine organik fazlar, tuzlu su ( ile yikanmistir, bir faz ayirici ile kurutulmustur ve soluk bir kati olarak (R)-3,5-diamino-N-(3-amino-2-(2- metilbenzil)propiI)-6-klor0pirazin-2-karboksamid (13.3 9, %99) vermek üzere vakumda buharlastirilmistir.
LC/MS: m/z: 349.3 [M+H]+. 1H NMR (, 2.4 - 4H), 8.14 (t, 1H). +11.8 (01.0, MeCN).
Ara ürün B (8)-(9H-flgoren-Q-il)metil 3-(3,5-diamino-6-kloro irazin-2-karboksamido -2- 2- metilbenzil ro il iperidin-4-ilmetil)karbamat (R)-tert-bütil 4-((3-(3,5-diamino-6-kloropirazin-2-karboksamido)-2-(2- metilbenziI)propilamino)metiI)piperidin-1-karboksilat 50-mL,Iik yuvarlak tabanli bir balona diklorometan (5 mL) içerisinde bir tert-bütil 4- 200 mg, 0.57 mmol, 1.0 esdeger) karisimi yerlestirilmistir, karisim 1 saat karistirilmistir.
Daha sonra sodyum triasetoksiborohidrit (486 mg, 2.29 mmol, 4.00 esdeger) eklenmistir. Ortaya çikan solüsyon, oda sicakliginda bir gece karistirilmistir. Ortaya çikan karisim, 3x10 mL su ile yikanmistir, anhidröz sodyum sülfat üzerinde kurutulmustur ve vakum altinda konsantre edilmistir. Bu, sari bir kati olarak 250 mg (%80) basliktaki bilesigi ortaya çikarmistir.
LC/MS: m/z: 546 [M+H]+. (8)-tert-bütil 4-(((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)(3-(3,5-diamino-6-klorogirazin- 2-karboksamido)-2-(2-metilbenzi“minaminmmetiI)p_iperidin-1-karboksilat Dioksan (, su/dioksan karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propilamino)metiI)piperidin-1-karboksilat (adim 1, 40 damlatilarak eklenmistir. Ortaya çikan solüsyon, oda sicakliginda 2 saat karistirilmistir, 3x5 mL etil asetat ile özütlenmistir. Kombine organik fazlar anhidröz sodyum sülfat üzerinde kurutulmustur. Vakumda solventlerin uzaklastirilmasindan sonra 42 mg (%75) basliktaki bilesik, sari bir kati olarak elde edilmistir.
LC/MS: m/z: 768 [M+H]+ metilbenziligrogil(piperidin-4-ilmetil)karbamat -mL'Iik yuvarlak tabanli bir balona HCI/MeOH (4M, 3 mL) içerisinde bir (S)-tert-bütil 1.0 esdeger) solüsyonu yerlestirilmistir. Ortaya çikan solüsyon, oda sicakliginda 1 saat karistirilmistir. Ortaya çikan karisim vakum altinda konsantre edilmistir. Bu, sari bir kati il)f0rmamid0]-2-[(2-metiIfenil)metil]propiI]-N-(piperidin-4-ilmetil)karbamati ortaya çikarmistir.
LC/MS: m/z: 668 [M+H]+ Ara ürün C (9H-fluoren-9-il)metil (2-aminoetiI)(hekzil)karbamat hidroklorid ClH HzN/VNTO .o tert-bütil (2-(benzil(hekzil)amino)etil)karbamat içerisinde çözünmüstür ve oda sicakliginda 45 dakika karistirilmistir. Sodyum siyanoborohidrit (1.77 9, 28.1 mmol) ve asetik asit ( eklenmistir ve karistirma islemi 18 saat devam etmistir. Reaksiyon, %8 NaHCO3 (aköz) ilavesi ile söndürülmüstür ve oda sicakliginda 1 saat karistirilmistir. Solvent, vakumda konsantre edilmistir. Kalinti su ile seyreltilmistir ve EtOAc ( ile özütlenmistir. Kombine organik fazlar, Na2804 (s) ile kurutulmustur, filtrelenmistir ve vakumda buharlastirilmistir. Kalinti, iki Biotage® KP-SIL 1009 kolonu üzerinde otomatik flas kromatografisi yoluyla saflastirilmistir. 12 kolon hacminde heptan içinde %5 - 50 EtOAc'den alinan bir gradyan, mobil faz olarak kullanilmistir. Ürün toplanmistir ve renksiz bir yag olarak tert-bütil (2- (benzil(hekzil)amino)etil)karbamat (3.19 9, %68) saglamak üzere vakumda konsantre edilmistir.
LC/MS: m/z: 335.6 [M+H]+ 1H NMR (, 1.38 - 1.66 (m, 7.22 - 7.37 (m, 5H). tert-bütil (2-(hekzilamino)etil)karbamat barda ve 18 saat oda sicakliginda bir Buchi hidrojenatör içinde hidrojenlenmistir.
Reaksiyon durdurulmustur. Daha fazla %20 Pd(OH)2/C (200 mg, 0.28 mmol) eklenmistir ve hidrojenasyon 6 saat devam etmistir, hidrojenasyon durdurulmustur.
Katalizör filtrelenmistir, MeOH ile yikanmistir ve filtreleme ürünü vakumda konsantre mmol) eklenmistir ve hidrojenasyon 4 barda ve 16 saat oda sicakliginda devam etmistir. Katalizör filtrelenmistir, MeOH ile yikanmistir ve filtreleme ürünü vakumda konsantre edilmistir. Reaksiyon MeOH içerisinde yeniden bir kez çözünmüstür, %20 Pd(OH)2/C (250 mg, 0.36) eklenmistir ve hidrojenasyon 3 gün devam etmistir. Katalizör filtrelenmistir, MeOH ile yikanmistir ve filtreleme ürünü, renksiz bir yag olarak tert-bütil (2-(hekzilamino)etil)karbamat (2.38 9, %102) saglamak üzere vakumda buharlastirilmistir. 1H NMR (, (9H-flu0ren-9-il)metiI(2-((tert-bütoksikarbonil)amino)etil)(hekzil)karbamat DCM (40 mL) içerisinde bir buz banyosu ile sogutulan tert-bütil (2- Reaksiyon, 10 dakika sogutma islemi ile ve daha sonra oda sicakliginda 1 saat karistirilmistir. Su (20 mL) eklenmistir, çalkalanmistir ve fazlar ayrilmistir. Aköz faz, DCM ( ile özütlenmistir. Kombine organik fazlar, bir faz ayirici ile kurutulmustur ve vakumda buharlastirilmistir. Kalinti, bir Biotage® KP-SIL 100 g kolon üzerinde otomatik flas kromatografisi yoluyla saflastirilmistir. 3 kolon hacminde heptan içinde %30 EtOAc`yi takiben 9 kolon hacminde heptan içinde %5 - 30 EtOAc'den alinan bir gradyan mobil faz olarak kullanilmistir. Ürün, 264 nm dalga boyu kullanilarak toplanmistir. Toplanan fraksiyonlar, renksiz bir yag olarak (9H-fluoren-9-il)metil (2- ((teit-bütoksikarbonil)amino)etil)(hekziI)karbamat (3.70 9, %81) saglamak üzere vakumda konsantre edilmistir.
LC/MS: m/z: 467.4 [M+H]+ 1H NMR (, 2.78 - 2.87 (9H-fluoren-9-il)metil (2-aminoetiI)(hekzil)karbamat hidroklorid ClH HZNNNYO .O Asetil klorid (, buz banyosu ile sogutulan bir MeOH (10 mL, 247 mmol) sisesine damlatilarak eklenmistir ve 5 dakika karistirilmistir. Bu solüsyon daha sonra (9H-fluoren-9-il)metil (2-((tert-büt0ksikarboniI)amino)etil)(hekzil)karbamata (3.7 9, 7.93 mmol) eklenmistir ve reaksiyon, oda sicakliginda 2.5 saat karistirilmistir. Solvent, beyaz bir kati olarak (9H-fluoren-9-il)metil (2-aminoetil)(hekzil)karbamat hidroklorid (2.92 9, %91) vermek üzere vakumda konsantre edilmistir.
LC/MS: m/z: 367.3 [M+H]+ 1H NMR (, 2.68 - 2.88 Ara ürün D (S)-tert-bütil (3-(3,5-diamino-6-kloropirazin-2-karboksamido)-2-(2- metilbenziI)gropil)(4-((g-(hek5ilamino)etil)karbamoiIifenetil)karbamat Metil 4-(2-hidroksietillbenzoat H2804 ( eklenmistir. Reaksiyon, 1 saat 120°C'de bir mikro dalgada isitilmistir ve daha sonra vakumda buharlastirilmistir. Kalinti, EtOAc ( içinde çözünmüstür, %8 NaHCO3 (aköz) ( ile yikanmistir, bir faz ayirici ile kurutulmustur ve soluk bir yag olarak metil 4-(2-hidroksietil)benzoat (2.41 9, LC/MS: m/z: 181.0 [M+H]+ 1H NMR (, 7.97 - 8.02 Metil 4-(2-oksoetillbenzoat wE310/ Metil 4-(2-hidroksietil)benzoat ( içinde çözünmüstür ve Dess-Martin Periodinan (6.24 9, 14.7 mmol) eklenmistir. Reaksiyon oda sicakliginda ile söndürülmüstür ve 30 dakika iyice karistirilmistir. Fazlar ayrilmistir ve aköz faz, DCM ( ile özütlenmistir. Kombine organik fazlar, bir faz ayirici ile kurutulmustur ve vakumda buharlastirilmistir. Kalinti, bir Biotage® KP-SIL 1009 kolonu üzerinde otomatik flas kromatografisi ile saflastirilmistir. 3 kolon hacminde heptan içinde %50 EtOAc`yi takiben 9 kolon hacminde heptan içinde %5 - 40 EtOAC'den alinan bir gradyan mobil faz olarak kullanilmistir. Ürün, 245 nm dalga boyu kullanilarak toplanmistir. Ürün toplanmistir ve sari bir kati olarak metil 4-(2-0ksoetil)benzoat (0.880 9, %369) saglamak üzere vakumda buharlastirilmistir. 1H NMR (, 8.03 - 8.09 (Sl-Metil 4-(2-((tert-bütoksikarponil)(3-(3.5-gliamino-G-klorogirazin-Z- karboksamido -2- 2-metilbenzil ro iI amino etil benzoat (R)-3,5-Diamino-N-(3-amino-2-(2-metilbenzil)propiI)-6-kloropirazin-2-karboksamid (Ara ( içerisinde çözünmüstür ve oda sicakliginda 30 dakika karistirilmistir. Sodyum siyanoborohidrit (1.05 9, 16.7 mmol) ve asetik asit ( daha sonra eklenmistir ve reaksiyon, oda sicakliginda 3 saat karistirilmistir. Reaksiyon, %8 NaHC03 (aköz) ilavesi ile söndürülmüstür. Reaksiyon EtOAc ( ile seyreltilmistir, 30 dakika karistirilmistir ve fazlar ayrilmistir. Aköz faz, EtOAc ( ile yikanmistir, bir faz ayirici ile kurutulmustur ve vakumda buharlastirilmistir. Kalinti, DCM (20 mL) içinde çözünmüstür ve BOCZO ( eklenmistir.
Karisim, oda sicakliginda 5.5 saat karistirilmistir ve daha sonra vakumda konsantre edilmistir. Kalinti, bir Biotage® KP-SIL 1009 kolonu üzerinde otomatik flas kromatografisi yoluyla saflastirilmistir. 10 kolon hacminde heptan içinde %10 - 80 EtOAc'den alinan bir gradyan mobil faz olarak kullanilmistir. Ürün, 270 nm dalga boyu kullanilarak toplanmistir. Ürün piki toplanmistir ve soluk bir kati olarak (8)-metil 4-(2- ((tert-bütoksikarbonil)(3-(3,5-diamino-6-kloropirazIn-2-karb0ksamido)-2-(2- metilbenzil)propiI)amino)etil)benzoat (1.84 9, %54) vermek üzere vakumda buharlastirilmistir.
LC/MS: m/z: 611.4 [M+H]+ 1H NMR (, (S)-4-(g-((tert-bgtoksikarbonil)(3-(3,5-digmino-6-klorogirazin-2-karboksamidoi-2- (2-metilbenzil)gropil)amino)et_il)ben50ik asit (3 04)? çözünmüstür ve sodyum hidroksit ( eklenmistir. Reaksiyon oda sicakliginda 3 gün karistirilmistir. Solvent (MeOH) daha sonra vakumda konsantre edilmistir. Su (50 mL) ve MeTHF (50 mL) eklenmistir ve pH degeri, 3 M HCI (aköz) ile ~2,ye ayarlanmistir. Fazlar ayrilmistir ve aköz faz, L-MeTHF (50 mL) ile özütlenmistir.
Kombine organik fazlar, Na2SO4 (s) ile kurutulmustur, filtrelenmistir ve soluk bir kati buharlastirilmistir.
LC/MS: m/z: 597.4 [M+H]+ 1H NMR (, 2.73 (t, (Sl-tert-Sütil 4-((2-((((9H-fluoren-9- il)metoksi)karbonil)(hekzil)amino)etil)karbamoil)fenetil(3-(3.5-diamino-6- kloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)karbamat (S)-4-(2-((tert-Bütoksikarbonil)(3-(3,5-diamino-6-kloropirazin-2-karboksamido)-2-(2- metilbenzil)propil)amino)etiI)benzoik asit (1.24 9, 1.77 mmol), 2-(1H- mmol) ve DIPEA ( içerisinde çözünmüstür ve (9H- fluoren-9-il)metil (2-aminoetil)(hekzil)karbamat hidroklorid (Ara ürün C, 0.95 9, 2.12 mmol) ilavesinden önce 5 dakika oda sicakliginda karistirilmistir. Reaksiyon 2.5 saat karistirilmistir. Reaksiyon, %8 NaHCO3 (aköz) ( ile yikanmistir. Aköz faz DCM ( ile özütlenmistir. Kombine organik fazlar, bir faz ayirici ile kurutulmustur ve vakumda buharlastirilmistir. Kalinti, bir Biotage® KP-SIL 1009 kolonu üzerinde otomatik flas kromatografisi yoluyla saflastirilmistir. 3 kolon hacminde heptan içinde gradyan mobil faz olarak kullanilmistir. Ürün toplanmistir ve soluk bir kati olarak (8)- tert-bütil 4-((2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)(hekzil)amino)etil)karbamoil)fenetil(3- LC/MS: m/z: 945.6 [M+H]+ 1H NMR (, 1.33 (Sl-tert-bütil (3-(3,5-diamino-G-kloropirazin-2-karboksamido)-2-(2- metilbenziI)gropil)(4-((2-(hekzilamino)etil)karbamoiI)fenetil)karbamat (S)-ten`-bütil 4-((2-((((9H-flu0ren-9- il)metoksi)karbonil)(hekzil)amin0)etil)karbamoil)fenetil(3-(3,5-diamino-6-kloropirazin-2- karboksamid0)-2-(2-metilbenzil)pr0pil)karbamat ( içerisinde çözünmüstür ve piperidin ( eklenmistir. Reaksiyon, oda sicakliginda 3 saat karistirilmistir ve daha sonra vakumda konsantre edilmistir. Kalinti, bir Biotage® KP-SIL 100 g kolonu üzerinde otomatik flas kromatografisi yoluyla saflastirilmistir. 10 kolon hacminde DCM içerisinde %8 (MeOH içinde 2 M amonyak) ardindan 5 kolon hacminde DCM içerisinde %4 - 8 (MeOH içinde 2 M amonyak)'dan alinan gradyan mobil faz olarak kullanilmistir. Ürün toplanmistir ve soluk bir kati olarak (8)-terI-bütil (3-(3,5-diamino-G-kloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenziI)pr0pil)(4- ((2-(hekzilamino)etil)karbamoil)fenetil)karbamat (1.03 9, %85) vermek üzere vakumda buharlastirilmistir.
LC/MS: m/z: 723.6 [M+H]+ 1H NMR (, 7.97 (m, 1H), 8.32 (t, 1H).
Ara ürün E (Sl-tert-bütil (3-(3,5-diamino-6-kloro irazin-2-karboksamido -2- 2- metiIbenziligropillm-(Q-(hekgilamino)etil)kaLbamoiI)ben;il)karbamat (S)-metil 4-(((tert-bütoksikarbonil)(3-(3,5-diamino-6-kloropirazin-2-karboksamido)- 2- 2-metilbenzil ro il amino metil benzoat H2N / N karistirilmistir. Daha sonra sodyum siyanoborohidrit (0.782 9, 12.4 mmol) ve asetik asit ( eklenmistir ve reaksiyon, oda sicakliginda 3 saat karistirilmistir.
LCMS analizi ile izleme tamamlanmamis dönüsümü gösterdiginde metil 4- formilbenzoat (200 mg, 1.22 mmol) eklenmistir ve karistirma. 3 saat devam etmistir.
Daha sonra yeniden metil 4-formilbenzoat (200 mg, 1.22 mmol) ve sodyum siyanoborohidrit (200 mg, 3.18 mmol) eklenmistir ve karistirma, 18 saat devam etmistir.
Reaksiyon, %8 NaHCO3 (aköz) ilavesi ile söndürülmüstür. Solvent, vakumda konsantre edilmistir. Kalinti, EtOAc ( içinde çözünmüstür, çalkalanmistir ve fazlar ayrilmistir. Aköz faz, EtOAc ( ile özütlenmistir. Kombine organik fazlar, Na2804 (s) ile kurutulmustur. filtrelenmistir ve vakumda buharlastirilmistir. Kalinti, DCM (50 mL) içinde çözünmüstür, BOC20 (1.63 9, 7.46 mmol) eklenmistir ve reaksiyon, oda sicakliginda 2 saat karistirilmistir. Karisim vakumda konsantre edilmistir ve daha sonra bir Biotage® KP-SIL 1009 kolonu üzerinde otomatik flas kromatografisi yoluyla saflastirilmistir. 12 klon hacminde heptan içinde dalga boyu kullanilarak toplanmistir. Ürün piki, bir kati olarak (8)-metil 4-(((tei1- bütoksikarboniI)(3-(3,5-diamin0-6-kloropirazin-2-karboksamid0)-2-(2- metilbenzil)propiI)amin0)metil)benzoat (2.85 9, %77) vermek üzere vakumda buharlastirilmistir.
LC/MS: m/z: 597.5 [M+H]* 1H NMR (, 2.45 - (S)-4-(((tert-bütoksikarbonil)(3-(3.5-diamino-6-kIoropirazin-Z-karboksamido)-2-(2- metilbenzi“mil)amino)metil)benzoik as_it metilbenzil)propil)amino)metil)benzoat (2.85 9, 4.77 mmol), MeOH (40 mL) içinde çözünmüstür ve sodyum hidroksit, 3.8 M ( eklenmistir. Reaksiyon oda sicakliginda 24 saat karistirilmistir ve solvent (MeOH) daha sonra vakumda konsantre edilmistir. Su (75 mL) ve MeTHF (75 mL) eklenmistir ve pH degeri, 3 M HCI (aköz) ile ~21ye ayarlanmistir. Fazlar ayrilmistir ve aköz faz, MeTHF (75 mL) ile özütlenmistir. Kombine organik fazlar, bir faz ayirici ile kurutulmustur ve bir kati olarak (S)-4-(((tert-bütoksikarbonil)(3-(3,5-diamino-6-kloropirazin-2-karb0ksamido)-2-(2- metilbenzil)pr0pil)amino)metil)benzoik asit (2.75 9, %99) saglamak üzere vakumda buharlastirilmistir.
LC/MS: m/z: 583.4 [M+H]* 1H NMR (, (8)-tert-bütil 4-((2-((((9H-fluoren-9- il)metoksi)karbonil)(hekzil)amino)etil)karbamoil)benzil(3-(3,5-diaminc-6- kloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)karbamat (S)-4-(((tert-bütoksikarboniI)(3-(3,5-diamin0-6-kloropirazin-2-karboksamido)-2-(2- mmol) ve DIPEA ( içerisinde çözünmüstür ve (9H- fluoren-9-il)metil (2-aminoetil)(hekzil)karbamat hidroklorid (Ara ürün C, 1.48 9, 3.31 mmol) ilavesinden önce 5 dakika oda sicakliginda karistirilmistir. Reaksiyon 1.5 saat karistirilmistir. Reaksiyon, %8 NaHC03 (aköz) ( ile yikanmistir. Aköz faz, DCM ( ile özütlenmistir. Kombine organik fazlar, bir faz ayirici ile kurutulmustur ve vakumda buharlastirilmistir. Kalinti, bir Biotage® KP-SIL 1009 kolonu üzerinde otomatik flas kromatografisi yoluyla saflastirilmistir. 3 kolon hacminde heptan içinde gradyan mobil faz olarak kullanilmistir. Ürün toplanmistir ve soluk bir kati olarak (8)- terI-bütil 4-((2-((((9H-fluoren-9-iI)metoksi)karb0nil)(hekzil)amin0)etil)karbam0il)benzil(3- LC/MS: m/z: 931.5 [M+H]+ 1H NMR (, (Sl-tert-bütil (3-(3.5-diamino-6-kloropirazin-2-karboksamido)-2-(2- metilbenziI)propil)(4-((2-(hekzilamino)etil)karbamoiI)benzil)karbamat 2 li ` l (S)-terI-bütil 4-((2-((((9H-flu0ren-9- il)met0ksi)karb0nil)(hekzil)amino)etil)karbamoil)benzil(3-(3,5-diamino-B-kloropirazin-Z- karboksamid0)-2-(2-metilbenzil)propil)karbamat ( içerisinde çözünmüstür ve piperidin ( eklenmistir. Reaksiyon, 20 saat oda sicakliginda karistirilmistir. Solvent, vakumda buharlastirilmistir. Kalinti, bir Biotage® KP-SIL 100 g kolonu üzerinde otomatik flas kromatografisi yoluyla saflastirilmistir. 3 kolon hacminde DCM içinde %8 (MeOH içinde 2 M amonyak) ardindan 9 kolon hacminde DCM içinde %2.5 - 8 (MeOH içinde 2 M amonyak)'dan alinan bir gradyan mobil faz olarak kullanilmistir. Ürün toplanmistir ve soluk bir kati olarak (S)-tert-bütil (3-(3,5-diamino-6-kl0ropirazin-2-karboksamido)-2-(2- saglamak üzere vakumda buharlastirilmistir.
LC/MS: m/z: 709.5 [M+H]+ 1H NMR (, 6H), .
Ara ürün F 9H-fluoren-9-il)metil (3-(4-formilgiperidin-1-il)-3-oksompil)kzm)ama_t Adim 1: (9H-fluoren-9-il)metil 3-(4-(hidroksimetiI)p_iperidin-1-iI)-3-oksopropilkarbamat Kuru DMF (5 mL) içerisinde karistirilmis bir piperidin-4-ilmetan0l (200 mg, 1.74 mmol), HATU ( eklenmistir.
Sari karisim gece boyunca ortam sicakliginda karistirilmistir. Reaksiyon karisimi, NaCI solüsyonu (50 mL) ile yikanmistir. Solventler buharlastirilmistir ve kalinti, preparatif HPLC yoluyla saflastirilmistir. Dondurarak kurutulduktan sonra kalinti, DCM içinde yeniden çözünmüstür ve Heptan eklenmistir. Buharlastirma islemi, renksiz bir kati (378 mg, %53) olarak basliktaki bilesigi saglamistir.
LC/MS: m/z: 409 [M+H]+ 1H NMR (, 2H), 7.89 (0, 2H). (9H-fluoren-9-il)metil (3-(4-formilgiperidin-1-iI)-3-oksompil)karbamat DCM (5 mL) içerisinde bir (9H-fluoren-9-il)metil 3-(4-(hidroksimetil)piperidin-1-iI)-3- oksopropilkarbamat (362 mg, 0.89 mmol) solüsyonuna kati Dess-Martin Periodinan (413 mg, 0.97 mmol) eklenmistir. Ortaya çikan süspansiyon ortam sicakliginda 2.5 saat DCM (2 mL) eklenmistir, karisim 10 dakika iyice karistirilmistir ve dibe çökmesine olanak taninmistir. Katmanlar ayrilmistir ve çözünmez tuzlari içeren su fazi, DCM ile tekrar tekrar özütlenmistir. Kombine organik fazlar MgSO4 üzerinde kurutulmustur, filtrelenmistir ve solventler, ilave saflastirma olmaksizin kullanilan ham ürünü (440 mg) ortaya çikarmak üzere buharlastirilmistir.
LC/MS: m/z: 407 [M+H]+ Ara ürün G (R)-tert-bütil (3-(3.5-giamino-6-kloropirazin-2-karboksamido)-2-(2- metilbenziI)mpil)(4-((2-(hekzilamino)etil)karbamoiI)benzil)karbamat HÂNJY k H (R)-alIiI (3-(3,5-diamino-6-kloropirazin-2-karboksamido)-2-(2- metilbenziI)propil)karbamat HzNJNý NJLOV mmol), NMP (15 mL) içerisinde süspanse edilmistir ve 4 saat 100°C`ye isitilmistir.
Reaksiyon karisiminin oda sicakligina sogumasina olanak taninmistir. EtOAc (50 mL) ve su (50 mL) eklenmistir, çalkalanmistir ve fazlar ayrilmistir. Aköz faz, EtOAc (, tuzlu su (50 mL) ile yikanmistir, bir faz ayirici ile kurutulmustur ve vakumda buharlastirilmistir. Kalinti, bir Biotage® KP-SIL 1009 kolonu üzerinde otomatik flas kromatografisi yoluyla saflastirilmistir. 9 kolon hacminde heptan içinde %20 - 80 EtOAclden alinan bir gradyan mobil faz olarak kullanilmistir. Ürün, 270 nm dalga boyu kullanilarak toplanmistir. Toplanan fraksiyonlar havuzlanmistir ve soluk bir kati olarak (R)-aIIiI (3-(3,5-diamino-6-klor0pirazin-2-karboksamido)-2-(2- metilbenzil)pr0pil)karbamat (714 mg, %459) vermek üzere vakumda buharlastirilmistir. 1H NMR (, 8.00 (t, 1H).
LC/MS: m/z 433.3 [M+H]+ (S)-3.5-diamino-N-(3-amino-2_-(g-metiIbenzil"grogil)-6-kloroigirazin-2-karboksamid (R)-allil (3-(3,5-diamin0-6-kloropirazin-2-karboksamid0)-2-(2- ( içerisinde çözünmüstür ve 1.5 saat 35°C'ye isitilmistir. Bir süspansiyon olusturulmustur. DCM (50 mL) ve %5 Na2C03 (aköz) (50 ml) eklenmistir ve karisim, 15 dakika karistirilmistir. Fazlar ayrilmistir ve aköz faz, DCM (50 mL) ile özütlenmistir. Kombine organik fazlar, bir faz ayirici ile kurutulmustur ve vakumda buharlastirilmistir. Bilesik, 1OO mL/dakikalik bir akis ile 20 dakika bir Kromasil C8 kolonu (10 um üzerinde preparatif HPLC ile saflastirilmistir. Bilesikler, 270 nm'de UV yoluyla tespit edilmistir. Ürün fraksiyonlari toplanmistir ve 586 mg asetik asit tuzu saglamak üzere dondurarak kurutulmustur. Tuz, dakika EtOAc (50 mL) ve %5 Na2C03 (aköz) içerisinde karistirilmistir ve daha sonra fazla ayrilmistir. Aköz faz, EtOAc ( ile özütlenmistir. Kombine organik fazlar Na2804 (s) ile kurutulmustur, filtrelenmistir ve açik sari bir kati olarak (S)-3,5-diamino- vermek üzere vakumda buharlastirilmistir. Kiral saflik: %60 ee, kiral SFC kolonu ile belirlenmistir: ChiraIPak IC (150x4.6 mm), 3um partikül boyutu, mobil faz: C02 içinde 1H NMR (, 2.64 - 8.39 (t, 1H).
LC/MS: m/z 349.2 [M+H]+ (R)-tert-bütil (3-(3,5-diamino-G-kloropirazin-2-karboksamido)-2-(2- metilbenzil ro il karbamat 9, , DCM ( içerisinde çözünmüstür ve oda sicakliginda 18 saat karistirilmistir. Reaksiyon karisimi, ile yikanmistir, bir faz ayirici ile kurutulmustur ve vakumda buharlastirilmistir. Kalinti, bir Biotage® KP-SIL 1009 kolonu üzerinde otomatik flas kromatografisi yoluyla saflastirilmistir. 3 kolon hacminde heptan Içinde %70 EtOAc'yi takiben 9 kolon hacminde heptan içinde %30 - 70 EtOAdden alinan bir gradyan mobil faz olarak kullanilmistir. Ürün, 268 nm dalga boyu kullanilarak toplanmistir. Ürün, soluk bir kati olarak (1.150 9, %75) saglamak üzere vakumda buharlastirilmistir.
Enantiyomer, kiral preparatif HPLC (Kolon: ChiraIPak AY (250x20 mm), 20pm partikül boyutu, mobil faz: heptan/EtOH/TEA 20/80:0.1, akis hizi 120 m/dakika) kullanilarak saflastirilmistir. Birinci ayristirma bilesigi, 866 mg saglamak üzere toplanmistir, kiral saflik: %986 ee. Optik dönüs MI? : -6 (asetonitril, c=1). 1H NMR (, 2.39 - 2.49 LC/MS: m/z 449.2 [M+H]+ (Sl-3,5-diamino-N-(3-amino-2-(2-metiIbenzil)propiI)-6-kloropirazin-2-karboksamid H2N)\FN NH2 Asetil klorid (, buz banyosu ile sogutulmus bir MeOH (5 mL, 123.59 mmol) balonuna damlatilarak eklenmistir. Karisim 5 dakika karistirilmistir ve daha sonra bir (R)-tert-bütil (3-(3,5-diamin0-6-kloropirazin-2-karboksamid0)-2-(2- metilbenzil)propil)karbamat (866 mg, 1.93 mmol) balonuna eklenmistir. Reaksiyon, oda sicakliginda 45 dakika karistirilmistir ve daha sonra vakumda buharlastirilmistir.
Kalinti, 15 dakika EtOAc ( içinde karistirilmistir. Fazlar ayrilmistir ve aköz faz, EtOAc ( ile özütlenmistir.
Kombine organik fazlar, Na2804 (8) ile kurutulmustur, filtrelenmistir ve soluk bir kati olarak (8)-3,5-diamino-N-(3-amino-2-(2-metilbenziI)pr0piI)-6-kloropirazin-2- karboksamid (459 mg, %682) vermek üzere vakumda buharlastirilmistir. Kiral saflik: dönüs MD : . 1H NMR (, 2.39 - 4H), 8.14 (t, 1H).
LC/MS: m/z 349.2 [M+H]+ (R)-(9 H-flgoren-Q-il)met_il (g-(4-(1 ( tert-b_ütoksikaLbonil)(3-(3.5-c_iiamino-6- kloropirazin-2-karboksamido)-2-(2- metilbenziIlgropiI)amino)metiI)beanido)etiI)(hekz.il)karbama_t l`N C. OÄIGINVANÄO O mg, 0.62 mmol), (9H-flu0ren-9-il)metil (2-(4-formilbenzamid0)etil)(hekziI)karbamat (Ara içerisinde çözünmüstür ve oda sicakliginda 1.5 saat karistirilmistir. Daha sonra sodyum siyanoborohidrit (38.8 mg, 0.62 mmol) ve asetik asit ( eklenmistir ve karistirma, 3 saat devam etmistir. Reaksiyon, %8 NaHC03 (aköz) ilavesi ile söndürülmüstür. DCM (25 mL) ve %8 NaHCOs (aköz) (25 mL) eklenmistir, çalkalanmistir ve fazlar ayrilmistir. Aköz faz, DCM (25 mL) ile özütlenmistir. Kombine organik fazlar bir faz ayirici ile kurutulmustur ve vakumda buharlastirilmistir.
Kalinti ve BOCZO ( içerisinde çözünmüstür ve oda sicakliginda 18 saat karistirilmistir. Reaksiyon karisimi, vakumda konsantre edilmistir. Ürün, bir Biotage® KP-SIL 509 kolonu üzerinde otomatik flas kromatografisi yoluyla saflastirilmistir. 9 kolon hacminde heptan içinde %50 - 100 EtOAc'den alinan bir gradyan mobil faz olarak kullanilmistir. Ürün, 265 nm dalga boyu kullanilarak toplanmistir. Ürün fraksiyonlari, renksiz bir film olarak (R)-(9H-fluoren-9-il)metil (2-(4- (((tert-bütoksikarbonil)(3-(3,5-diamino-6-kl0ropirazin-2-karboksamid0)-2-(2- metilbenzil)propiI)amino)metil)benzamido)etil)(hekzil)karbamat (511 mg, %93) vermek üzere vakumda buharlastirilmistir. 1H NMR (, LC/MS: m/z 931.4 [M+H]+ (R)-tert-bütil (3-(3,5-diamino-6-kloropirazin-2-karboksamido)-2-(2- metilbenziI)propil)(4-((2-(hekzilamino)etil)karbamoiI)benzil)karbamat H2N N H ci 7.60 N\/\NH karboksamidO)-2-(2-metilbenzil)propil)amino)metil)benzamid0)etil) (hekzil)karbamat ( içerisinde çözünmüstür ve piperidin (0.543 mL, 5.49 mmol) eklenmistir. Reaksiyon, oda sicakliginda 18 saat karistirilmistir. Solvent vakumda buharlastirilmistir. Kalinti, bir Biotage® KP-SIL 50 g kolonu üzerinde otomatik flas kromatografisi yoluyla saflastirilmistir. 3 kolon hacminde DCM içinde %8 (MeOH içinde 2 M amonyak) ardindan 9 kolon hacminde DCM içinde %25 - 8 (MeOH içinde 2 M amonyak),tan alinan bir gradyan mobil faz olarak kullanilmistir. Ürün toplanmistir ve soluk bir kati olarak (R)-terI-bütil (3-(3,5-diamino-6-kl0r0pirazin-2-karboksamido)-2-(2- vermek üzere vakumda buharlastirilmistir. 1H NMR (, 2.24 - LC/MS: m/z 709.4 [M+H]+ Ara ürün H (9H-fluoren-9-il)metil (2-(4-formilbenzamido)etil)(hekzil)karbamat 4-formilbenzoik asit (0.81 9, 5.40 mmol) ve 4-metilmorfolin (, THF (10 mL) içerisinde çözünmüstür ve bir buz banyosu ile sogutulmustur. Izobütil karbonokloridat ( damlatilarak eklenmistir, karisim 30 dakika karistirilmistir ve (9H-fluoren-9-il)metil (2-aminoetil)(hekzil)karbamat hidroklorid (Ara karistirilmistir. Ortaya çikan süspansiyon EtOAC (50 mL) ile su (50 mL) arasinda özütlenmistir. Organik faz, %5 sitrik asit (, tuzlu su (50 mL) ile yikanmistir, Na2804 (s) ile kurutulmustur, filtrelenmistir ve vakumda buharlastirilmistir. Kalinti, bir Biotage® KP-SlL 1009 kolonu üzerinde otomatik flas kromatografisi yoluyla saflastirilmistir. 3 kolon hacminde heptan içinde %80 EtOAc akabinde 9 kolon hacminde heptan içinde %20 - 80 EtOAc'den alinan bir gradyan mobil faz olarak kullanilmistir. Ürün, 260 nm dalga boyu kullanilarak toplanmistir. Ürün pikleri, beyaz bir kati olarak (9H-fluoren-9-il)metil (2-(4- formiIbenzamido)etil)(hekzil)karbamat (1.690 9, %79) vermek üzere vakumda buharlastirilmistir. 1H NMR (. 3.02 - 3.21 (m, LC/MS: m/z 499.5 [M+H]+ Ara ürün l tert-bütil 2-(hekzilamino)etilkarbamat Lylik bir flans balonuna hekzilamin ( 289.6 9 aktif, 1.29 mol) solüsyonu yavas bir sekilde yüklenmistir. Reaksiyon, bir gece 70°C`de karistirilmistir. Reaksiyon, 50°C'ye sogutulmustur ve vakumda konsantre edilmistir. Karistirilan kalintiya su ( yüklenmistir.
Katmanlar ayrilmistir ve organik fazlar su (3 x 2100 ml) ile yikanmistir. Organik fazlar aktif, kantitatif verim) saglamak üzere su (3 x 870 mi) ve EtOH (3 x 870 ml) ile sirali olarak azeotroplanmistir. 1H-NMR (, 2.58 (t, LC/MS: m/z 245 [M+H]+ tert-bütil 2-(hekzil((28,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etilkarbamat isitilmistir. Solüsyona ACOH ( yüklenmistir ve ortaya çikan karisim. dakika 35°Ctde karistirilmistir. Buna 35°C'de 5 dakika parçalar halinde NaCNBH3 (56.1 9, 0.89 mol) yüklenmistir. Herhangi bir ekzoterm veya gaz üretimi not edilmemistir. Reaksiyon, bir gece 35°C'de karistirilmistir. Buna NaCNBH3 (8.0 9, 0.13 mol) yüklenmistir ve 3 saat 35°C'de karistirilmistir. Reaksiyonun bir gece oda sicakligina sogumasina olanak taninmistir. Karisima 10 dakika doymus aköz NaH003 ( yüklenmistir, bir parça ekzotermik bir reaksiyon gözlenmistir. Karisim hafta sonu boyunca oda sicakliginda karistirilmistir. EtOH vakumda uzaklastirilmistir ve çalisma için ayni ölçekte ikinci bir yigin (181.8 g asama 1) ile kombine edilmistir.
Karisima NaCI ( ile özütlenmistir ve kombine organik fazlar vakumda konsantre edilmistir. Ortaya çikan kalinti, kromatografi (SIOz, 7 kg) vasitasiyla saflastirilmistir, paketlenmistir, yüklenmistir MeOH/DCM + %02 7 N NH3 ile ayristirilmistir, daha sonra MeOH (20 L) içerisinde edilmistir, vakumda buharlastirilmistir ve sari bir zamk olarak 387 g (366 9 aktif, %76) alt basliktaki bilesigi saglamak üzere MeOH (2 X ile azeotroplanmistir. 1H-NMR (, 4.22 - 4.05 LC/MS: m/z 401 [M+H]+ solüsyonuna < 31°C olan bir sicaklik muhafaza edilerek 30 dakika dioksan (1710 ml, 6.84 mol) içerisinde 4 M HCI yüklenmistir. Reaksiyon oda sicakliginda 1.5 saat karistirilmistir. Reaksiyon karisimi, mor siyah bir katran olarak 485.1 g (306 9 aktif, 1H-NMR (, 1.77 - 1.62 MS ES: m/z 279 [M+H]+ 4-formil-N-(2-(hekzil((2$,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipenlil)amino)etil)benzamid Karisim, 5 dakika -15°C'ye sogutulmustur. < -10°C olan bir reaksiyon sicakligi muhafaza edilerek buna 15 dakika izobütil kloroformat (93.4 ml, 0.71 mol) yüklenmistir. çözünmüstür. Karistirilan anhidrit karisima, < -5°C olan bir reaksiyon sicakligi muhafaza edilerek 15 dakika boyunca adim 3`ü içeren karisim yüklenmistir. Ortaya çikan karisimin bir gece oda sicakligina ilimasina olanak taninmistir. Reaksiyon karisimina 30 dakika yavas bir sekilde doymus aköz NaHC03 (2500 ml) yüklenmistir.
Ortaya çikan karisim vakumda konsantre edilmistir. Kalintiya doymus aköz NaHC03 ( ile karistirilmistir.
Katman ayrilmistir ve aköz, %13 MeOH/DCM (2870 ml) ile özütlenmistir. Kombine organik fazlar, doymus aköz NaHCO3 (1200 ml) ile yikanmistir ve 395.3 g saglamak üzere vakumda konsantre edilmistir. Kalinti, bir ara ürün ölçek reaksiyonundan geri kazanilan 10 g ham materyal ile kombine edilmistir ve kromatografi vasitasiyla saflastirilmistir [SiOz, 3 kg; %5 MeOH/DCM ile yüklenmistir ve paketlenmistir; %5 basliktaki bilesigi saglamak üzere vakumda konsantre edilmistir. 1H NMR, yaklasik HPLC-MS analizi, %97.4 saflik göstermistir. Karistirilmis fraksiyonlar (20 L) kombine edilmistir ve HPLC araciligiyla %745 olan bir saflik ile 46 g materyal saglamak üzere vakumda konsantre edilmistir. Bu, %10-%30 MeOH/DCM (18 L) ile ayristirilarak kromatografi (SiOz, 600 g) vasitasiyla yeniden saflastirilmistir. Ürün fraksiyonlari vakumda konsantre edilmistir. 1H-NMR (, LC/MS: m/z 411 [M+H]+ 2-(2-metilbenzil)propan-1,3-diaminin enzimatik desimetrizasvonu. 2-(2-metilbenzil)propan-1,3-diaminin enzimatik desimetrizasyonu, diallilkarbonat ve bir dizi immobilize Iipaz kullanilarak arastirilmistir.
Immobilize Iipaz ekrani: 1,4-di0ksan (30 mL) içerisinde bir 2-(2-metilbenzil)pr0pan- 1,3-diamin (0.60 9, 3.37 mmol) solüsyonuna diallilkarbonat ( eklenmistir. Bu solüsyonun 1.0 mL'Iik alikuotlari, Tablo 1'de açiklanan enzimleri (0.02 9) içeren 10 mLilik vida kapakli test tüplerin eklenmistir. Tüpler, 3 gün 500 rpm/30°C'de çalkalanmistir. Her bir tüp numunelendirilmistir ve Revers Faz HPLC (4.6 x 50 mm Thermoquest Hypercarb, 260 nm'de UV tespiti) ve Kiral HPLC (4.6 x 250 mm Chiralpak lC3, 260 nm'de UV tespiti) araciligiyla analiz edilmistir.
Taranan Iipazlarin altisi, 3 günden sonra %20`den daha fazla dönüsüm göstermistir Enzim Dönüsüm1 R/S orani2 Novozym 75.8 1.76 Amano Lipazi PS-C1 (Pseudomonas Cepaci'a Lipazi) 31.4 9.8 Amano Lipazi PS-IM (Pseudomonas Cepacia Lipazi) 21.2 5.0 Amano Lipazi PS-D (Pseudomonas Cepaci'a Lipazi) 33.4 12.3 Sifir enzim (Kontrol) - _ 1Mono-allil karbamata dönüsüm, HPLC'den % alan olarak gösterilir. 2R/S oranlari, kiral HPLC`den % alan 8 enantiyomeri ile bölünen % alan R enantiyomer olarak gösterilir.
Amano Lipaz PS-lM'ye sahip solvent ekrani: Amano Lipaz PS-lM”ye sahip bir solvent ekrani, 1.1 esdeger diallilkarbonat, 1 kütle esdeger Amano PS-IM ve 0.1 9 2-(2- metilbenzil)propan-1,3-diamin ile solventlerin 20 göreli hacminde gerçeklestirilmistir.
°C'de 6 gün sonra deneyler, Iipaz ekrani için açiklandigi üzere ayni yöntemler kullanilarak numunelendirilmistir (Tablo 2). 2-(2-Metilbenzil)pr0pan-1,3-diamin, metil t- bütil eter, heptan ve siklohekzan gibi polar olmayan solventler içerisinde çok çözünmezdir. Bununla birlikte THF'nin her bir solvente eklenmesi diaminin çözünmesine olanak taninmistir ve yukaridaki 1:1 solvent karisimlari test edilmistir.
Sonuçlar, 2-MeTHF'nin bazi arka plan reaksiyonuna ragmen en iyi enantiyo seçiciligi verdigini belirtmistir. 2-MeTHF içinde arka plan karboksilasyonunu en aza indirmek üzere bir gram ölçekli deney, Amano Iipaz PS-IM (3 kütle esdeger immobilize Iipaz. 1.2 esdeger diallilkarbonat, 20 hacim 2-MeTHF) fazlasi ile 30°C'de gerçeklestirilmistir.
Reaksiyon, 3 gün içerisinde tamamlanmaya baslamistir ve çalismadan sonra ham (R)- monoallilkarbamat 1-(R), %85 ee ile izole edilmistir. Ham ürünün etanol Içerisinde karsilik gelen D-tartarat tuzuna dönüstürülmesi, enantiyomerik fazlaligi %91.0'a (diaminden toplam %58 verim) arttirmistir.
Solvent Dönüsüm1 R/S orani2 Solvent Dönüsüm1 R/S orani2 TBMEzTHF (1 :1) 72.8 6.25 Heptan: THF (1 :1) 88.4 5.45 SiklohekzanzTHF (1 :1) 89.8 6.81 Tolüen 52.5 6.63 MeTHF (Sifir enzim) 24.8 - 1Mono-allil karbamata dönüsüm, HPLC”den % alan olarak gösterilir. 2R/S oranlari, kiral HPLCiden % alan 8 enantiyomeri ile bölünen % alan R enantiyomer olarak gösterilir.
Sodyum kanali ENaC Ussing haznesi testi Snapwell geçirgen destek ekleri (MatTek Corporation, MA, ABD, kat. no AIR- üzerinde hava-sivi arayüzünde (ALI) farklilasan insan primer bronsiyal epitelyal hücreler, 37°C ve %5 COz'de nemlendirilmis bir inkübatörde ALI kültüründe muhafaza edilmistir. Bazolateral ortami (MatTek Corporation, MA, ABD kat. no AlR- her iki günde degistirilmistir. Apikal tarafta olusturulan mukus veya sivi, hücrelerin yasayabilirligini ve performansini muhafaza etmek üzere her iki günde hafif sekilde havalandirilmistir.
LuminaI/apikal ve bazolateral membran arasindaki transepitelyal voltaj, dikey, dahili üretilen ussing hazneleri, ön kuwetlendiricilere sahip DVC-1000 V/C kelepçeleri preamplifikatörü (World Precision Instruments), elektrot kitleri (EK1, World Precision olan su banyosu ve regülasyon sisteminden olusan ussing haznesinde ölçülmüstür.
Ayarlamada kullanilan elektrotlar, üreticinin talimatina göre %0.9 steril NaCl içerisinde Ussing hazneleri, %95 oksijen ve %5 karbon dioksit varliginda 37°C'de bir saat Kreb tamponunda (SIGMA-ALDRICH kat. no K3753) bulunan elektrotlar ve bos bir snapwell membrani (Costar 3407) ile düzenlenmistir. Bu dengeleme adimdan sonra sistem, sivi direnci ve girdi dengesi için kompanse edilmistir.
Deneyden önce ALI kültürleri, EndOhm cihazi (World Precision Instruments) ile Trans Epitelyal Elektrik Direnci (TEER) için degerlendirilmistir, 400-600 Ohms arasinda bir direnç sergileyen hücreler kullanilmistir.
Dengelenen hazneler, ALI hücrelerini içeren bir snapwell ile yeniden düzenlenmistir ve dakikalik stabilizasyondan sonra kümülatif bilesik dozlari, membranin apikal tarafina eklenmistir. Nihai dozdan sonra 10 uM Benzamil, maksimuma ulasmak üzere eklenmistir.
Referans bilesik dahil olmak üzere tüm test bilesikleri, %100 DMSO içerisinde 10mM stoklardan seyreltilmistir ve opak 96 gözlü plakalara (Greiner, Kat. No. 651201) eklenmistir. 12 dozluk dilüsyon serileri, 10 kez dilüsyon adimini takiben 3uM ile baslayarak DMSO içinde hazirlanmistir.
Windows yazilimi için Chart5, her bir bilesigin ilavesinden sonra kisa devre akiminin degerini ölçmek üzere kullanilmistir. Veriler, Excel'e aktarilmistir ve IDBS XLfit® 5.2 (ID Business Solutions Ltd) kullanilarak analiz edilmistir. %50 inhibisyon (egri ICSO) üreten test veya referans bilesiginin molar konsantrasyonu, verilerin formun 4 parametreli bir lojistik fonksiyonuna uydurulmasi ile türetilmistir: A Egrinin alt platosu, diger bir ifadeyle nihai minimum y degeri B Egrinin üst platosu, diger bir ifadeyle nihai maksimum y degeri 0 %50 olan bir y degerinde logwx degeri.
D Hill egim faktörü. x Bilinen x degerleri.
Tablo 1, Örnekler 1 ila 14 için pleo degerlerini gösterir. 1 9.5 8 9.5 2 8.6 9 8.6 3 10.1 10 8.6 4 9.2 11 8.8 9.0 12 9.6 6 9.5 13 10.1 7 8.9 14 7.5 Caco-2 Hücre Monokatmani kullanilarak Ön Görülen Bagirsak Mukozal Permeasyon Caco-2 hücreleri, konflüans ve farklilasmaya ulasana kadar 15 gün 96 gözlü transwell polikarbonat membran ekleri üzerinde Dulbecco Modifiye Eagle ortaminda (DMEM) büyütülür. Monokatman boyunca elektrik direncinin ölçümü ile entegre degerlendirmesinden sonra hücreler, HBSS (25 mM HEPES, pH 7.4) ile iki kez yikanir ve 30 dakika 37°C'de inkübe edilir.
DMSO içerisinde test bilesiklerinin stok solüsyonlari. 10 pM'Iik nihai konsantrasyonuna ulasmak üzere HBSS ( ile seyreltilir; tüm inkübasyonlar çift kopya halinde gerçeklestirilir. Apikal ila bazolateral yönde (A ila B) ilaç nakli hizini belirlemek üzere 100 uL test bilesigi solüsyonu, Transwell ekinin apikal kompartimanina eklenir. Bazolateral kompartimani 300 uL HBSS ile doldurulur.
Bazolateral ila apikal naklin (B ila A) belirlenmesi için bazolateral kompartimani, 300 uL test bilesigi solüsyonu ile doldurulur ve 100 uL HBSS, apikal kompartimana eklenmistir. 37°C'de 2 saat plaka inkübasyonundan sonra her bir kompartimandan 50 uL uzaklastirilir ve monokatman bütünlügünü izlemek üzere 485 nm eksitasyon ve 530 nm emisyonda uygun bir plaka okuyucuda floresan ölçümü için 96 gözlü plakalara transfer edilir. Test bilesigi geçirgenlik analizi için 3 hacimlik soguk metanol, her bir tampon numunesine eklenir ve numuneler, 15 dakika 4 C`de santrifüjlenir. 5 uL'lik bir üst faz alikuotu, LC/MS/MS analizi için kullanilir.
Görünür geçirgenlik (Papp, cm/s birimleri cinsinden) asagidaki denklem kullanilarak hesaplanabilir VA [ilaç ]axseprür Atan X Sure [Ilaç ].besiangiç,dono'r burada VA, akseptör gözdeki (apikal ila bazolaterale yönelik hacimdir (mL cinsinden), Alan, membranin yüzey alanidir (HTS Transwell-96 Gözlü Geçirgen Destek Eklerine yönelik 0.143 cm2) ve süre, 3 cinsinden toplam nakil süresidir.
Apikal ila bazolateral yönde (Medyen A ila B Papp, 1E-6.cm/s) görünür geçirgenlik, Örnekler 1 ila 16'nin her biri için ölçülmüstür. Apikal ila bazolateral yönde Örneklerin herhangi biri için herhangi bir görünür geçirgenlik tespit edilmemistir. Düsük geçirgenlik sergileyen bilesikler, solunan uygulama vasitasiyla ENaC inhibitörlerinin dagitimi için daha çok istenir olabilir.

Claims (5)

  1. ISTEMLER 1. Birformül (I) bilesigi veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu olup: H,N N NHL; PIJH (AXX_ICHJI -Nî ilii R1, hidrojen veya 01-4 alkilden seçilir; özelligi asagidaki unsurlardir: m, 1 veya 2'dir; A, fenil veya heterosiklilden seçilir; X, -C(=O)-, -C(=O)-NR4- veya -O-C(=O)-NR5-'ten seçilir; N, 2 veya 3'tür; R2, hidrojen veya C1.g alkilden seçilir; R3, 05.6 alkil-OH'dir, burada söz konusu 05.5 alkil grubu ek bir 3 veya 4 - OH grubu ile ayrica sübstitüe edilir; ve R4 ve R5 bagimsiz olarak hidrojen veya 01-4 alkilden seçilir.
  2. 2. Istem 1'e göre bir bilesik veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu olup, özelligi R“in 01.4 alkil olmasi ve R4 ve Rs'in her ikisinin hidrojen olmasidir.
  3. 3. Istem 1 veya istem ?ye göre bir bilesik veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu olup, özelligi A'nin fenil olmasidir.
  4. 4. Önceki istemlerden herhangi birine göre bir bilesik veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu olup, özelligi X'in -C(=O)-NR4- olmasidir.
  5. 5. Önceki istemlerden herhangi birine göre bir bilesik veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu olup, özelligi asagidaki unsurlardir: R1. 01-4 alkildir; m, 1'dir; A, fenildir; X, -C(=O)-NH-'dir; n, 2'dir; R2, 01.8 alkildir; . Önceki istemlerden herhangi birine göre bir bilesik veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu olup, özelligi Rz'nin n-hekzil olmasidir. . istem 1'e göre bir bilesik veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu olup, özelligi asagidakilerden seçilmesidir: tetrahidroksipentil)amin0)propan0il)piperidin-4-il)metil)amino)pr0pil)pirazin- 2-karb0ksamid; tetrahidroksipentil)amin0)etil)karbam0il)benzil)amino)-2-(2- metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksa mid; pentahidroksihekzil)amin0)etiIkarbam0il)piperidin-4-il)metiIamin0)-2-(2- metiIbenzil)pr0pil)pirazin-2-karboksa mid; pentahidroksihekzil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metilamin0)-2-(2- metiIbenzil)pr0pil)pirazin-2-karboksa mid; tetrahidroksipentil)amino)propanoiI)piperidin-4-iI)metilamin0)-2-(2- metiIbenzil)pr0pil)pirazin-2-karb0ksa mid; pentahidroksihekzil)amino)bütanoil)piperidin-4-iI)metilamino)-2-(2- metilbenzil)propil)pirazin-2-karb0ksa mid; 2,3,4,5,6-pentahidroksihekzilamin0)pr0panoil)piperidin-4- iI)metilamino)propil)pirazin-2-karboksamid; pentahidroksihekzil)amino)pr0pan0il)piperidin-4-il)metilamin0)-2-(2- metilbenzil)propil)pirazin-2-karb0ksa mid; pentahidroksihekzil)amino)etil)karbamoiI)benzil)amino)-2-(2- metiIbenzil)pr0pil)pirazin-2-karboksa mid; pentahidroksihekzil)amino)etiI)karbamoiI)benzil)amin0)-2-(2- metiIbenzil)propil)pirazin-2-karb0ksa mid; 4-(((R)-3-(3,5-diamino-6-kloropirazin-2-karboksamido)-2-(2- pentahidroksihekzil)amino)etiIkarbamat; pentahidroksihekzil)amino)etiI)karbam0il)fenetil)amin0)-2-(2- metilbenzil)propil)pirazin-2-karb0ksa mid; tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoiI)fenetil)amino)-2-(2- metilbenzil)pr0pil)pirazin-2-karboksamid. 8. istem 1'e göre bir bilesik veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu olup, özelligi asagidaki gibi olmasidir: tetrahidroksipentiI)amino)etil)karbam0il)benzil)amino)-2-(2- metilbenziI)propil)pirazin-2-karboksamid ve asagidaki formüle (la) sahip olmasidir: Farmasötik bir bilesim olup, özelligi istemler 1 ila 8'den herhangi birine göre formüle (l) ait bir bilesik veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir adjuvan, seyreltici veya tasiyici içermesidir. istemler 1 ila 7'den herhangi birine göre bir formül (l) bilesigi veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu olup, özelligi terapide kullanima yönelik olmasidir. istemler 1 ila 8'den herhangi birine göre bir formül (I) bilesigi veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu olup, özelligi bir ENaC aracili hastalik durumunun tedavisine yönelik olmasidir. istemler 1 ila 8'den herhangi birine göre bir formül (I) bilesigi veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu olup, özelligi bir ENaC aracili hastalik durumunun tedavisinde kullanimi için bir ilacin üretimine yönelik olmasidir. Istem 11 veya 12'ye göre bir bilesik veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu olup, özelligi ENaC aracili hastalik durumunun kronik obstrüktif pulmoner hastalik (COPD), kistik fibroz, astim, kronik bronsit ve bronsiektazi içermesidir. Istem 11 veya 12'ye göre bir bilesik veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu olup, özelligi ENaC aracili hastalik durumun kronik obstrüktif pulmoner hastalik (COPD) veya kistik fibroz olmasidir. Bir kombinasyon olup, özelligi istemler1 ila 8'den herhangi birine göre bir formül (I) bilesigi veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzunu ve asagidakileri içeren listeden seçilen bir veya daha fazla ajan içermesidir: . bir beta-adrenoseptör agonisti; . bir muskarinik reseptör antagonisti; . bir eklem muskarinik reseptör antagonisti ve beta-adrenoseptör agonisti; - bir toII-benzeri reseptör agonisti (bir TLR7 veya TLR9 agonisti gibi); . bir adenozin antagonisti; . bir p38 antagonisti; ° bir IKK2 antagonisti; . bir PDE4 antagonisti; 0 kemokin reseptör fonksiyonunun bir modülatörü (bir CCR1, CCRZB, CCR5, CXCR2 veya CXCR3 reseptör antagonisti gibi); - bir CRTh2 antagonisti; veya ~ bir ozmolit, hipertonik salin gibi.
TR2018/10207T 2014-03-18 2015-03-17 Enac aracılı hastalıkların tedavisine yönelik 3,4-diamino-6-kloropirazin-2-karboksamid bileşikleri. TR201810207T4 (tr)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201461954674P 2014-03-18 2014-03-18

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TR201810207T4 true TR201810207T4 (tr) 2018-08-27

Family

ID=52780553

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TR2018/10207T TR201810207T4 (tr) 2014-03-18 2015-03-17 Enac aracılı hastalıkların tedavisine yönelik 3,4-diamino-6-kloropirazin-2-karboksamid bileşikleri.

Country Status (38)

Country Link
US (3) US9873678B2 (tr)
EP (1) EP3119752B1 (tr)
JP (1) JP6502469B2 (tr)
KR (1) KR102296041B1 (tr)
CN (1) CN106103423B (tr)
AP (1) AP2016009447A0 (tr)
AR (1) AR099790A1 (tr)
AU (1) AU2015233195B2 (tr)
CA (1) CA2941807C (tr)
CL (1) CL2016002303A1 (tr)
CR (1) CR20160479A (tr)
CY (1) CY1120509T1 (tr)
DK (1) DK3119752T3 (tr)
DO (1) DOP2016000232A (tr)
EA (1) EA029952B1 (tr)
ES (1) ES2679618T3 (tr)
GT (1) GT201600190A (tr)
HR (1) HRP20181123T1 (tr)
HU (1) HUE039425T2 (tr)
IL (1) IL247610B (tr)
LT (1) LT3119752T (tr)
ME (1) ME03056B (tr)
MX (1) MX368577B (tr)
NI (1) NI201600134A (tr)
NZ (1) NZ724063A (tr)
PE (1) PE20170205A1 (tr)
PH (1) PH12016501808A1 (tr)
PL (1) PL3119752T3 (tr)
PT (1) PT3119752T (tr)
RS (1) RS57487B1 (tr)
SG (1) SG11201607751SA (tr)
SI (1) SI3119752T1 (tr)
SV (1) SV2016005278A (tr)
TR (1) TR201810207T4 (tr)
TW (1) TWI687410B (tr)
UY (1) UY36034A (tr)
WO (1) WO2015140527A1 (tr)
ZA (1) ZA201607136B (tr)

Family Cites Families (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3577418A (en) 1969-02-12 1971-05-04 Merck & Co Inc Pyrazinamide derivatives and processes for their preparation
US3573306A (en) 1969-03-05 1971-03-30 Merck & Co Inc Process for preparation of n-substituted 3,5-diamino-6-halopyrazinamides
FI820266L (fi) 1981-02-02 1982-08-03 Ici Plc Alkanolaminderivater
DE3361244D1 (de) 1982-01-29 1986-01-02 Ici Plc Alkanolamine derivatives
GB8810934D0 (en) 1987-05-26 1988-06-15 Ici America Inc Amides
GB8810933D0 (en) 1987-05-26 1988-06-15 Ici America Inc Heterocyclic compounds
US4803206A (en) 1988-03-07 1989-02-07 Schering Corporation Antihypertensive acylpyrazines
GB8812343D0 (en) 1988-05-25 1988-06-29 Ici America Inc Amino compounds
GB8812342D0 (en) 1988-05-25 1988-06-29 Ici America Inc Bicyclic compounds
TR199902056T2 (tr) 1997-02-26 2000-01-21 Pfizer Inc. Heteroaril-Heksanoik asit amid türevleri.
GB9930557D0 (en) 1999-12-23 2000-02-16 Rolic Ag Optically active materials
CA2408408C (en) 2000-05-12 2013-07-09 Genzyme Corporation Modulators of tnf- alpha signaling
JP2005520791A (ja) 2001-11-08 2005-07-14 イーラン ファーマスーティカルズ、インコーポレイテッド Ｎ，ｎ’−置換−１，３−ジアミノ−２−ヒドロキシプロパン誘導体
US6858615B2 (en) 2002-02-19 2005-02-22 Parion Sciences, Inc. Phenyl guanidine sodium channel blockers
US7154002B1 (en) 2002-10-08 2006-12-26 Takeda San Diego, Inc. Histone deacetylase inhibitors
US20040087571A1 (en) 2002-10-30 2004-05-06 Pfizer Inc Methods of using CCR1 antagonists as immunomodulatory agents
BR0317426A (pt) 2002-12-20 2005-11-16 Pfizer Prod Inc Inibidores de proteìna de transferência de triglicéridos microssomais
US6903105B2 (en) 2003-02-19 2005-06-07 Parion Sciences, Inc. Sodium channel blockers
CA2583606A1 (en) 2004-10-13 2006-04-27 University Of Connecticut Cannabinergic lipid ligands
GB0511065D0 (en) 2005-05-31 2005-07-06 Novartis Ag Organic compounds
GB0526240D0 (en) 2005-12-22 2006-02-01 Novartis Ag Organic compounds
GB0526244D0 (en) 2005-12-22 2006-02-01 Novartis Ag Organic compounds
MX2009009304A (es) 2007-03-01 2009-11-18 Novartis Ag Inhibidores de cinasa pim y metodos para su uso.
PL2155721T3 (pl) 2007-05-07 2011-07-29 Novartis Ag Związki organiczne
CL2008003651A1 (es) 2007-12-10 2009-06-19 Novartis Ag Compuestos derivados de 3,5-diamino-6-cloropirazinamida sustituida; composicion farmaceutica; combinacion farmaceutica; y uso en el tratamiento de una condición inflamatoria o alergica, en particular una enfermedad inflamatoria u obstructiva de las vias respiratorias.
EP2219646A4 (en) 2007-12-21 2010-12-22 Univ Rochester METHOD FOR MODIFYING THE LIFETIME OF EUKARYOTIC ORGANISMS
KR20110011621A (ko) 2008-05-13 2011-02-08 노파르티스 아게 ３，５―디아미노―６―클로로―피라진―２―카르복실산 유도체 및 기도 질환의 치료를 위한 상피 나트륨 채널 차단제로서의 이들의 용도
US9315449B2 (en) 2008-05-15 2016-04-19 Duke University Substituted pyrazoles as heat shock transcription factor activators
BRPI0915018A2 (pt) * 2008-06-10 2015-10-27 Novartis Ag compostos orgânicos
WO2011028740A1 (en) 2009-09-03 2011-03-10 Glaxo Group Limited ENaC BLOCKERS
WO2011079087A1 (en) 2009-12-23 2011-06-30 Glaxo Group Limited Enac blockers
US8372845B2 (en) 2010-09-17 2013-02-12 Novartis Ag Pyrazine derivatives as enac blockers
AR086745A1 (es) 2011-06-27 2014-01-22 Parion Sciences Inc 3,5-diamino-6-cloro-n-(n-(4-(4-(2-(hexil(2,3,4,5,6-pentahidroxihexil)amino)etoxi)fenil)butil)carbamimidoil)pirazina-2-carboxamida
WO2013192517A2 (en) 2012-06-21 2013-12-27 Whitehead Institute For Biomedical Research Compounds for treating infectious diseases
HUE032891T2 (hu) 2012-12-17 2017-11-28 Parion Sciences Inc Klórpirazin-karboxamid-származékok nem kielégítõ nyálkahártya-hidratáció által elõsegített megbetegedések kezelésére
ES2674665T3 (es) 2012-12-17 2018-07-03 Parion Sciences, Inc. Compuestos de 3,5-diamino-6-cloro-N-(N-(4-fenilbutilo)carbamimidoilo)-pirazina-2-carboxamida
US9029382B2 (en) 2012-12-17 2015-05-12 Parion Sciences, Inc. 3,5-diamino-6-chloro-N-(N-(4-phenylbutyl)carbamimidoyl) pyrazine-2-carboxamide compounds

Also Published As

Publication number Publication date
PH12016501808B1 (en) 2017-01-09
NI201600134A (es) 2017-03-13
CN106103423A (zh) 2016-11-09
GT201600190A (es) 2019-07-29
ES2679618T3 (es) 2018-08-29
CA2941807A1 (en) 2015-09-24
KR20160127135A (ko) 2016-11-02
US9873678B2 (en) 2018-01-23
EA201691641A1 (ru) 2017-02-28
US20170107195A1 (en) 2017-04-20
CY1120509T1 (el) 2019-07-10
RS57487B1 (sr) 2018-10-31
PE20170205A1 (es) 2017-04-06
EP3119752B1 (en) 2018-05-16
US10954211B2 (en) 2021-03-23
PT3119752T (pt) 2018-07-24
US10336725B2 (en) 2019-07-02
UY36034A (es) 2015-09-30
MX368577B (es) 2019-10-08
CN106103423B (zh) 2019-12-06
DK3119752T3 (en) 2018-07-30
US20180162838A1 (en) 2018-06-14
IL247610B (en) 2019-05-30
TWI687410B (zh) 2020-03-11
TW201620880A (zh) 2016-06-16
PH12016501808A1 (en) 2017-01-09
CL2016002303A1 (es) 2017-01-13
US20190330187A1 (en) 2019-10-31
PL3119752T3 (pl) 2018-09-28
CR20160479A (es) 2017-02-24
DOP2016000232A (es) 2016-10-16
SG11201607751SA (en) 2016-10-28
ZA201607136B (en) 2018-04-25
SV2016005278A (es) 2016-11-30
JP2017512830A (ja) 2017-05-25
WO2015140527A1 (en) 2015-09-24
CA2941807C (en) 2023-03-07
EA029952B1 (ru) 2018-06-29
AR099790A1 (es) 2016-08-17
JP6502469B2 (ja) 2019-04-17
ME03056B (me) 2018-10-20
HRP20181123T1 (hr) 2018-09-21
NZ724063A (en) 2018-02-23
AU2015233195A1 (en) 2016-09-22
MX2016011681A (es) 2016-10-28
SI3119752T1 (en) 2018-08-31
LT3119752T (lt) 2018-08-10
AP2016009447A0 (en) 2016-09-30
IL247610A0 (en) 2016-11-30
KR102296041B1 (ko) 2021-08-30
EP3119752A1 (en) 2017-01-25
AU2015233195B2 (en) 2017-04-20
HUE039425T2 (hu) 2018-12-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11325890B2 (en) Substituted diaminocarboxamide and diaminocarbonitrile pyrimidines, compositions thereof, and methods of treatment therewith
JP2021120408A (ja) ３，５−ジアミノ−６−クロロ−ｎ−（ｎ−（４−（４−（２−（ヘキシル（２，３，４，５，６−ペンタヒドロキシヘキシル）アミノ）エトキシ）フェニル）ブチル）カルバミミドイル）ピラジン−２−カルボキサミド
DK2616447T3 (en) Pyrazine derivatives such as ENaC blockers
AU2017364308B2 (en) Benzodiazolium compounds as ENaC inhibitors
TW200927129A (en) Organic compounds
US20200002318A1 (en) Azetidinyloxyphenylpyrrolidine compounds
CA3036304A1 (en) 5-[2-(pyridin-2-ylamino)-1,3-thiazol-5-yl]-2,3-dihydro-1 h-isoindol-1 -one derivatives and their use as dual inhibitors of phosphatidylinositol 3-kinase delta &amp; gamma
TR201810207T4 (tr) Enac aracılı hastalıkların tedavisine yönelik 3,4-diamino-6-kloropirazin-2-karboksamid bileşikleri.
BR112016021187B1 (pt) Compostos químicos e combinação compreendendo os mesmos