TH6272C3 - กรรมวิธีการสกัดครบวงจรของสารรงควัตถุสีเหลือง โปรตีนเซอริซิน และโปรตีนไฟโบรอิน จากรังไหมเหลือง - Google Patents

Abstract

DC60 การประดิษฐ์นี้ เป็นการคิดค้นกรรมวิธีการสกัดรงควัตถุสีเหลือง โปรตีนเซอริซิน และ โปรตีนไฟโบรอินจากรังไหมอย่างคุ้มค่า โดยใช้วัตถุดิบในปริมาณน้อย แต่สามารถได้สารสกัดทั้ง 3 ชนิดตามความต้องการ เพื่อนำไปใช้ในการศึกษาและวิจัยคุณสมบัติทางด้านชีวเคมี ด้านเคมี ตลอดจนการประยุกต์ใด้ในด้านเครื่องสำอาง ทางการแพทย์ และการใช้บำบัดรักษาโรค ซึ่งกรรมวิธี การสกัดครบวงจรดังกล่าวจะทำให้เหลือกากวัตถุดิบน้อย ผลผลิต โปรตีนเซอริซิน และโปรตีน ไฟโบรอินมีความบริสุทธิ์สูง มีขนาดโมเลกุลที่สม่ำเสมอ ตลอดจนมีสีที่มีความขาว มีสารสี และ สารให้สีอื่น ๆ ปนเปื้อนน้อย ผลผลิตปราศจากเชื้อ และไม่มีการปนเปื้อนโลหะหนัก ผลผลิตโปรตีน จะละลายน้ำได้ดี ( ความเป็นกรดด่างที่ 7) และสารละลายโปรตีนที่ได้จะทนความร้อน (ในสภาวะ นึ่งเพื่อฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ 121 องศาเซลเซียส นาน 15 นาที) โดยไม่มีการเปลี่ยนแปลงคุณสมบัติ การประดิษฐ์นี้ เป็นการคิดค้นกรรมวิธีการสกัดรงควัตถุสีเหลือง โปรตีนเซอริซิน และโปรตีนไฟโบรอินจากรังไหมอย่างคุ้มค่า โดยใช้วัตถุดิบในปริมาณน้อย แต่สามารถได้สารสกัดทั้ง 3 ชนิดตามความต้องการ เพื่อนำไปใช้ในการศึกษาและวิจัยคุณสมบัติทางด้านชีวเคมี ด้านเคมีตลอดจนการประยุกต์ใด้ในด้านเครื่องสำอาง ทางการแพทย์ และการใช้บำบัดรักษาโรค ซึ่งกรรมวิธีการสกัดครบวงจรดังกล่าวจะทำให้เหลือกากวัตถุดิบน้อย ผลผลิต โปรตีนเซอริซิน และโปรตีนไฟโบรอินมีความบริสุทธิ์สูง มีขนาดโมเลกุลที่สม่ำเสมอ ตลอดจนมีสีที่มีความขาว มีสารสี และสารให้สีอื่น ๆ ปนเปื้อนน้อย ผลผลิตปราศจากเชื้อ และไม่มีการปนเปื้อนโลหะหนัก ผลผลิตโปรตีนจะละลายน้ำได้ดี ( ความเป็นกรดด่างที่ 7) และสารละลายโปรตีนที่ได้จะทนความร้อน (ในสภาวะนึ่งเพื่อฆ่าเชื้อที่อุณหภูมิ 121 องศาเซลเซียส นาน 15 นาที) โดยไม่มีการเปลี่ยนแปลงคุณสมบัติ

Claims (3)

1. กรรมวิธีการสกัดครบวงจรของสารรงควัตถุสีเหลือง โปรตีนเซอริซิน และโปรตีนไฟโบรอินจากรับไหมเหลือง ประกอบด้วย 1.1 ขั้นตอนการสกัดสารรงควัตถุสีเหลืองจากรังไหลเหลือง โดยล้างรังไหมในน้ำกลั่นประมาณ 5-10 นาที และแช่รังไหมนานประมาณ 24 ชั่วโมง กรองแยกรับไหมแล้วผึ่งให้แห้งที่อุณหภูมิห้อง ทำการชั่งรังไหมแห้ง 5-10 กรัม ตัดเป็นชิ้นเล็ก ๆ เติม 60-80 % เอทานอล ปริมาณ 100-200 มิลลิลิตร ทำการเขย่าที่ความเร็ว 200-250 รองต่อนาที นาน 24 ชั่วโมง จึงกรองแยกสารละลายรงควัตถุสีเหลืองด้วยกระดาษกรองจากนกั้นระเหยสารละลายรงควัตถุสีเหลืองโดยใช้ความร้อนจากไอน้ำจนแห้ง แล้วจึงเติม 60-80 % เอทานอล(500-1000) ไมโครลิตร) และเอทิลอะซีเตต (500-1000 ไมโครลิตร) ผสมให้เข้ากันตั้งทิ้งไว้ประมาณ 5-10 นาที ทำการแยกชั้นของรงควัตถุสีเหลือส้มออกมาใส่ในภาชนะใหม่แล้วนำไประเหยด้วยกล่องให้ความร้อนที่อุณหภูมิ 40-60 องศาเซลเซียส จนแห้ง 1.2 ขั้นตอนการสกัดโปรตีนเซอริซิน บรรจุรังไหมจากขั้นตอนข้อ 1.1 ลงในภาชนะที่มีสารละลายเอทานอล 60-80 % นำไปเขย่าที่ความเร็ว 200-250 รอยต่อนาที นาน 4-7 วัน ทำการแยกสารละลายทิ้งและล้างรังไหมด้วยน้ำกลั่น จำนวน 3-5 ครั้ง จากนั้นจึงผึ่งรังไหมให้แห้งที่อุณหภูมิห้อง จากนั้นชั่งรังใหมแห้ง จำนวน 2-5 กรัม ใส่ลงในภาชนะขนาด 250 มิลลิลิตร เติมสารละลายผสมบัฟเฟอร์สำหรับการสกัดโปรตีนเซอริซิน (100-200 มิลลิลิตร ) และเขย่าให้เข้ากัน วางภาชนะบนน้ำเดือดเป็นเวลา 10-30 นาที และเข้าเป็นระยะจากนั้นนำไปเขย่าต่อที่ความเร็ว 200-250 รองต่อนาที อุณหภูมิ 30-40 องศาเซลเซียส นาน 24 ชั่วโมง ทำการกรองแยกสารสกัดโปรตีนเซอริซินออกจารังใหมโดยผ่านกระดาษกรอง นำสารสกัดโปรตีนเซอริซินที่ได้มาทำให้บริสุทธ์โดยวิธีการไดอะไลซีสด้วยน้ำกลั่นที่อุณหภูมิห้อง นาน 2-5 วัน จากนั้นนำสารสกัดโปรตีนเซอริซินที่บริสุทธิ์ไปปั่นเหวี่ยงที่ความเร็ว 3000-6000 รอบต่อนาที นาน 10-20 นาที จากนั้นดูดสารสกัดปริมาตร 10-12 มิลลิลิตร บรรจุลงในภาชนะสำหรับเก็บขนาด 15 มิลลิลิตรก่อนไปทำให้แห้งโดยวิธีระเหยแห้งเยือกแข็งภายใต้สภาวะสูญญากาศ และจัดเก็บในอุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียส 1.3 ขั้นตอนการสกัดโปรตีนไฟโบรอิน นำเส้นใยใหมที่ได้จากขั้นตอนข้อ 1.2 มาต้มให้เดือดในสารละลายผสมระหว่าง โซเดียมคาร์บอเนต (0.2-0.5 % น้ำหนักต่อปริมาตร ) กับไตรตอนเอ็กซ์ -100 (2-4 %) ปริมาตร 200-500 มิลลิลิตร นาน 30-60 นาที จากนั้นกรองแยกและล้างเส้นใหม่ในน้ำกลั่น 2-3 ครั้ง ผึ่งเส้นใหมให้แห้งที่อุณหภูมิห้อง จากนั้นสำเส้นใหม่จำนวน 5-10 กรัม ใส่ในภาชนะขนาด 250 มิลลิลิตร เติมสารละลายลิเทียมโบร์ไมด์ (ความเข้มข้น 8.0-11 โมลาร์ ) ปริมาตร 100-200 มิลลิลิตร เขย่าและทำการบ่มที่อุณหภูมิ 50-70 องศาเซลเซียส นาน 2-5 ชั่วโมง ก่อนนำไปกรองด้วยกระดาษกรอง เก็บเฉพาะส่วนใส่ซึ่งเป็นสารละลายของโปรตีนไฟโบรอินและไปทำให้บริสุทธิ์โดยวิธีการไดอะไลซีสในน้ำกลั่นนาน 2-5 วัน แล้วจึงนำสารสกัดไปปั่นเหวี่ยงที่ความเร็ว 3000-6000 รอบต่อนาที นาน 10-20 นาที จากนั้นดูดส่วนสารละลายใสด้านบนปริมาณ 10-12 มิลลิลิตร บรรจุลงในภาชนะสำหรับเก็บขนาด 15 มิลลิลิตร ก่อนไปทำให้แห้งโดยวิธีระเหยแห้งเยือกแข็งภายใต้สภาวะสูญญากาศ แล้วจัดเก็บอุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียส

2. กรรมวิธีการสกัดครบวงจรตามข้อถือสิทธิ 1 ที่ซึ่งข้นตอนการสกัดสารรงควัตถุสีเหลืองนั้นทำการเก็บรงควัตถุสีเหลืองไว้ในภาชนะที่ป้องกันแสง ที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส

3.กรรมวิธีการสกัดครบวงจรตามข้อถือสิทธิ 1 ที่ซึ่งข้นตอนการสกัดโปรตีนเซอริซิน 1.2 นั้น สารละลายผสมบัฟเฟอร์ประกอบด้วย ทริส-เบส (ความเข้มข้น 50-100 มิลลิโมล่าร์), ยูเรีย (ควมเข้มข้น 7-10 โมล่าร์), บีต้าเมอแคบโตเอทานอล (ความเข้มข้น 0.4-06 มิลลิโมล่าร์ ), โซเดียมคลอไรด์ ( ความเข้มข้น 500-80 มิลลิโมล่าร์ ) และ ทวีน -20 (ความเข้มข้น 0.1-0.4 % โดยปริมาตร )