Claims (3)
1. กรรมวิธีการสกัดครบวงจรของสารรงควัตถุสีเหลือง โปรตีนเซอริซิน และโปรตีนไฟโบรอินจากรับไหมเหลือง ประกอบด้วย 1.1 ขั้นตอนการสกัดสารรงควัตถุสีเหลืองจากรังไหลเหลือง โดยล้างรังไหมในน้ำกลั่นประมาณ 5-10 นาที และแช่รังไหมนานประมาณ 24 ชั่วโมง กรองแยกรับไหมแล้วผึ่งให้แห้งที่อุณหภูมิห้อง ทำการชั่งรังไหมแห้ง 5-10 กรัม ตัดเป็นชิ้นเล็ก ๆ เติม 60-80 % เอทานอล ปริมาณ 100-200 มิลลิลิตร ทำการเขย่าที่ความเร็ว 200-250 รองต่อนาที นาน 24 ชั่วโมง จึงกรองแยกสารละลายรงควัตถุสีเหลืองด้วยกระดาษกรองจากนกั้นระเหยสารละลายรงควัตถุสีเหลืองโดยใช้ความร้อนจากไอน้ำจนแห้ง แล้วจึงเติม 60-80 % เอทานอล(500-1000) ไมโครลิตร) และเอทิลอะซีเตต (500-1000 ไมโครลิตร) ผสมให้เข้ากันตั้งทิ้งไว้ประมาณ 5-10 นาที ทำการแยกชั้นของรงควัตถุสีเหลือส้มออกมาใส่ในภาชนะใหม่แล้วนำไประเหยด้วยกล่องให้ความร้อนที่อุณหภูมิ 40-60 องศาเซลเซียส จนแห้ง 1.2 ขั้นตอนการสกัดโปรตีนเซอริซิน บรรจุรังไหมจากขั้นตอนข้อ 1.1 ลงในภาชนะที่มีสารละลายเอทานอล 60-80 % นำไปเขย่าที่ความเร็ว 200-250 รอยต่อนาที นาน 4-7 วัน ทำการแยกสารละลายทิ้งและล้างรังไหมด้วยน้ำกลั่น จำนวน 3-5 ครั้ง จากนั้นจึงผึ่งรังไหมให้แห้งที่อุณหภูมิห้อง จากนั้นชั่งรังใหมแห้ง จำนวน 2-5 กรัม ใส่ลงในภาชนะขนาด 250 มิลลิลิตร เติมสารละลายผสมบัฟเฟอร์สำหรับการสกัดโปรตีนเซอริซิน (100-200 มิลลิลิตร ) และเขย่าให้เข้ากัน วางภาชนะบนน้ำเดือดเป็นเวลา 10-30 นาที และเข้าเป็นระยะจากนั้นนำไปเขย่าต่อที่ความเร็ว 200-250 รองต่อนาที อุณหภูมิ 30-40 องศาเซลเซียส นาน 24 ชั่วโมง ทำการกรองแยกสารสกัดโปรตีนเซอริซินออกจารังใหมโดยผ่านกระดาษกรอง นำสารสกัดโปรตีนเซอริซินที่ได้มาทำให้บริสุทธ์โดยวิธีการไดอะไลซีสด้วยน้ำกลั่นที่อุณหภูมิห้อง นาน 2-5 วัน จากนั้นนำสารสกัดโปรตีนเซอริซินที่บริสุทธิ์ไปปั่นเหวี่ยงที่ความเร็ว 3000-6000 รอบต่อนาที นาน 10-20 นาที จากนั้นดูดสารสกัดปริมาตร 10-12 มิลลิลิตร บรรจุลงในภาชนะสำหรับเก็บขนาด 15 มิลลิลิตรก่อนไปทำให้แห้งโดยวิธีระเหยแห้งเยือกแข็งภายใต้สภาวะสูญญากาศ และจัดเก็บในอุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียส 1.3 ขั้นตอนการสกัดโปรตีนไฟโบรอิน นำเส้นใยใหมที่ได้จากขั้นตอนข้อ 1.2 มาต้มให้เดือดในสารละลายผสมระหว่าง โซเดียมคาร์บอเนต (0.2-0.5 % น้ำหนักต่อปริมาตร ) กับไตรตอนเอ็กซ์ -100 (2-4 %) ปริมาตร 200-500 มิลลิลิตร นาน 30-60 นาที จากนั้นกรองแยกและล้างเส้นใหม่ในน้ำกลั่น 2-3 ครั้ง ผึ่งเส้นใหมให้แห้งที่อุณหภูมิห้อง จากนั้นสำเส้นใหม่จำนวน 5-10 กรัม ใส่ในภาชนะขนาด 250 มิลลิลิตร เติมสารละลายลิเทียมโบร์ไมด์ (ความเข้มข้น 8.0-11 โมลาร์ ) ปริมาตร 100-200 มิลลิลิตร เขย่าและทำการบ่มที่อุณหภูมิ 50-70 องศาเซลเซียส นาน 2-5 ชั่วโมง ก่อนนำไปกรองด้วยกระดาษกรอง เก็บเฉพาะส่วนใส่ซึ่งเป็นสารละลายของโปรตีนไฟโบรอินและไปทำให้บริสุทธิ์โดยวิธีการไดอะไลซีสในน้ำกลั่นนาน 2-5 วัน แล้วจึงนำสารสกัดไปปั่นเหวี่ยงที่ความเร็ว 3000-6000 รอบต่อนาที นาน 10-20 นาที จากนั้นดูดส่วนสารละลายใสด้านบนปริมาณ 10-12 มิลลิลิตร บรรจุลงในภาชนะสำหรับเก็บขนาด 15 มิลลิลิตร ก่อนไปทำให้แห้งโดยวิธีระเหยแห้งเยือกแข็งภายใต้สภาวะสูญญากาศ แล้วจัดเก็บอุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียส1. Complete extraction process of yellow pigment. Sericin protein And fibroblast protein from yellow silk receptor contains 1.1 steps to extract yellow pigment from yellow flux. By washing the cocoons in distilled water for 5-10 minutes and soaking the cocoons for about 24 hours, filter them separately and then dry them at room temperature. Weigh 5-10 grams of dry silk cocoons, cut into small pieces, add 60-80% of 100-200 ml of ethanol, shake at speed 200-250 per minute for 24 hours, then filter the yellow pigment solution with paper. Filtered from the barrier to evaporate the yellow pigment solution using steam heat until dry, then add 60-80% ethanol (500-1000 μl) and ethyl acetate (500-1000 μl) mixed to Set aside for 5-10 minutes. Separate layers of orange remaining pigment into a new container and then evaporate by heating box at 40-60 degrees Celsius to dry. Sin The cocoons from step 1.1 are packed into a container with 60-80% ethanol solution, shaken at a speed of 200-250 stitches per minute for 4-7 working days, separating the solution and washing the cocoons with distilled water. 3-5 times, then dry the cocoons at room temperature. Then weigh 2-5 g of dry nests into a 250 ml container, add a buffer solution for sericin protein extraction (100-200 ml) and shake well. Place the container on boiling water for 10-30 minutes and enter periodically, then continue to shake at 200-250 speed, negotiable per minute, temperature 30-40 degrees Celsius for 24 hours, filtered to separate the sericin from protein extract. New nest through filter paper The extracted sericin protein was purified by dialysis method with distilled water at room temperature for 2-5 days, then the purified sericin protein extract was centrifuged at The speed is 3000-6000 rpm for 10-20 minutes. Then, 10-12 ml of extracts are extracted into 15 ml storage containers before drying by evaporation, freeze-drying under vacuum condition. And stored in temperature -20 degrees Celsius. 1.3 Protein extraction process Fibroin. Bring the new fibers obtained from step 1.2 to boil in a solution mixed between Sodium carbonate (0.2-0.5% wt.) With Triton X-100 (2-4%), volume 200-500 ml for 30-60 minutes, then filtered, separated and rinsed 2-3 times in distilled water. Dry at room temperature Then 5-10 g of new strands are put in 250 ml container, add 100-200 ml of lithium bormide solution (concentration 8.0-11 molar), shake and incubate at 50-70 ° C for long time. 2-5 hours before being filtered with filter paper. Only the infused portion, which is a fibrous solution of protein, was purified by dialysis method in distilled water for 2-5 days, then the extract was centrifuged at a speed of 3000-6000 rpm for a long time. 10-20 minutes, then vacuum the top 10-12 ml of clear solution into 15 ml storage container before drying by evaporation, freeze, under vacuum condition. And store temperature -20 degrees Celsius
2. กรรมวิธีการสกัดครบวงจรตามข้อถือสิทธิ 1 ที่ซึ่งข้นตอนการสกัดสารรงควัตถุสีเหลืองนั้นทำการเก็บรงควัตถุสีเหลืองไว้ในภาชนะที่ป้องกันแสง ที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส2. Comprehensive extraction process according to claim 1, where the yellow pigment extraction process was done, the yellow pigment was stored in a light-proof container at a temperature of 4 ° C.
3.กรรมวิธีการสกัดครบวงจรตามข้อถือสิทธิ 1 ที่ซึ่งข้นตอนการสกัดโปรตีนเซอริซิน 1.2 นั้น สารละลายผสมบัฟเฟอร์ประกอบด้วย ทริส-เบส (ความเข้มข้น 50-100 มิลลิโมล่าร์), ยูเรีย (ควมเข้มข้น 7-10 โมล่าร์), บีต้าเมอแคบโตเอทานอล (ความเข้มข้น 0.4-06 มิลลิโมล่าร์ ), โซเดียมคลอไรด์ ( ความเข้มข้น 500-80 มิลลิโมล่าร์ ) และ ทวีน -20 (ความเข้มข้น 0.1-0.4 % โดยปริมาตร )3. Comprehensive extraction process according to claim 1, where concentrated at extraction of sericin 1.2 protein, buffer solution contains tris-base (concentration 50-100 mmolar), urea ( Concentration 7-10 molar), beta-metabolite ethanol (concentration 0.4-06mm), sodium chloride (concentration 500-80mm) and Tween-20 (0.1-0.4% concentration by volume)