TH14895Y - ไพรเมอร์สำหรับตรวจเชื้อรามาลาสซีเซีย สล็อฟฟิอี้ (Malassezia slooffiae) - Google Patents

Abstract

------26/07/2561------(OCR) หน้า 1 ของจำนวน 1 หน้า บทสรุปการประดิษฐ์ ไพรเมอร์สำหรับตรวจเชื้อรามาลาสซีเซีย สล็อฟฟิอี้ (Malassezia slooffiae) ประกอบด้วย ไพร เมอร์ (primer) จำนวน 1 คู่ ที่ใช้ตรวจสอบหาสารพันธุกรรม (DNA) ในระดับสปีชีส์ (species) คือ มาลาสซี เซีย สล็อฟฟิอี้ (Malassezia slooffiae) ด้วยเทคนิคปฎิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส หรือ เทคนิคพีซีอาร์ (Polymerase chain reaction หรือ PCR) ที่มีลำดับเบสดังนี้ - ฟอร์เวิร์ดไพรเมอร์ (forward primer) มีลำดับเบสเป็น 5’- cac get aac aca aeg tgc -3’ -รีเวอร์สไพรเมอร์ (reverse primer) มีลำดับเบสเป็น 5’- geg gaa tac cac aga geg -3’ และสามารถประกอบเพิ่มเติมด้วยชุดน้ำยาสำหรับการทำปฏิกิริยาเพื่อการตรวจเชื้อรามาลาสซีเซีย สล็อฟฟิอี้ (Malassezia slooffiae) ------------

Claims (4)

------26/07/2561------(OCR) หน้า 1 ของจำนวน 1 หน้า ข้อถือสิทธิ

1. ไพรเมอร์สำหรับตรวจเชื้อรามาลาสซีเซีย สล็อฟฟิอี้ (Malassezia slooffiae) ประกอบด้วย คู่ไพรเมอร์ (primer) ที่ใช้เพิ่มปริมาณสารพันธุกรรม (DNA) ของเชื้อรามาลาสซีเซีย สล็อฟฟิอี้ (Malassezia slooffiae) มีลำดับเบสดังนี้ - ฟอร์เวิร์ดไพรเมอร์ (forward primer) มีลำดับเบสเป็น 5’- cac get aac aca aeg tgc -3’ - รีเวอร์สไพรเมอร์ (reverse primer) มีลำดับเบสเป็น 5'- geg gaa tac cac aga geg -3’

2. กรรมวิธีการเพิ่มปริมาณสารพันธุกรรมของเชื้อรามาลาสซีเซีย สล็อฟฟิอี้ (Malassezia slooffiae) โดยใช้ไพรเมอร์สำหรับตรวจเชื้อรามาลาลซีเซีย สล็อฟฟิอี้ (Malassezia slooffiae) ตามข้อถือ สิทธิที่ 1 ด้วยวิธีปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส หรือเทคนิคพีซีอาร์ (PCR) โดยใช้เครื่องเทอร์มอลไซเคลอร์ (Thermal cycler หรือ PCR machine) มีเงื่อนไขของโปรแกรมอุณหภูมิเพื่อเพิ่มปริมาณสารพันธุกรรม (DNA) ตามขั้นตอนดังนี้ ขั้นที่ 1 โปรแกรมพรี-ดีเนเจอร์ (Pre-denature) ใช้อุณหภูมิ 94 องศาเซลเซียส นาน 3 นาที ขั้นที่ 2 โปรแกรมแอมพลิฟิเคชั่น (Amplification) ประกอบด้วย 3 ขั้นตอน คือ ขั้นตอนดีแนทเจอ เรชั่น (Denaturation) ที่อุณหภูมิ 94 องศาเซลเซียส นาน 45 วินาที ขั้นตอนแอนเนียลลิง (Annealing) ที่ อุณหภูมิ 60 องศาเซลเซียส นาน 30 วินาที และขั้นตอนเอ็กเท็นชั่น (Extension) ที่อุณหภูมิ 72 องศา เซลเซียส นาน 30 วินาที ทำซ้ำทั้งหมด 30 รอบ (cycles) โดยอัตราการเปลี่ยนแปลงอุณหภูมิ (temperature transition rate) ของเครื่องเทอร์มอลไซเคลอร์ (Thermal cycler) เป็น 5 องศาเซลเซียสต่อวินาที ขั้นที่ 3 โปรแกรมไฟนอล เอ็กเท็นชั่น (Final extension) ใช้อุณหภูมิ 72 องศาเซลเซียส นาน 4 นาที ขั้นที่ 4 โปรแกรมคูลลิง (Cooling) ลดอุณหภูมิลงถึง 4 องศาเซลเซียส (ไม่จำกัดเวลา) ------------ ------28/12/2560------(OCR) หน้า 1 ของจำนวน 2 หน้า ข้อถือสิทธิ

1. ไพรเมอร์สำหรับตรวจเชื้อรามาลาสซีเซีย สล็อฟฟิอี้ (Malassezia slooffiae) ประกอบด้วย คู่ไพรเมอร์ (primer) ที่ใช้เพิ่มปรมาณสารพันธุกรรม (DNA) ของเชื้อรามาลาสซีเซีย สล็อฟฟิอี้ (Malassezia slooffiae) มีลำดับเบสดังนี้ - ฟอร์เวิร์ดไพรเมอร์ (forward primer) มีลำดับเบสเป็น 5’- cac get aac aca aeg tgc -3' -รีเวอร์สไพรเมอร์ (reverse primer) มีลำดับเบสเป็น 5'- gcg gaa tac cac aga gcg -3’

2. ชุดนายาสำหรับตรวจเชื้อรามาลาสซีเซีย สล็อฟฟิอี้ (Malassezia slooffiae) ที่ซึ่งใช้ประกอบ ร่วมกับไพรเมอร์ตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่งชุดน้ำยาสำหรับตรวจเชื้อรามาลาสซีเซียสล็อฟฟิอี้ (Malassezia slooffiae) ประกอบด้วย - น้ำยาสิบเอ็กพีซีอาร์ บัฟเฟอร์ (10XPCR buffer) ประกอบด้วย 50 มิลลิโมลาร์ โพแทสเซียมคลอ ไรด์ (millimolar Potassium chloride; mM KCI), 10 มิลลิโมลาร์ ทริสไฮโดรคลอไรด์ (millimolar Tris- Hydrochloride; mM Tris-HCI (pH 8.3)) และ 1-1.5 มิลลิโมลาร์ แมกนีเซียมคลอไรด์ (millimolar Magnesium chloride; mM MgCI2) - น้ำยาดีเอ็นทีพี มิกซ์ (dNTPs mix) ประกอบด้วย ดีเอ็นทีพี มิกซ์ (dNTPs mix) 4 ชนิด คือ ดีเอทีพี (dATP), ดีซีทีพี (dCTP), ดีจีทีพี (dGTP) และดีทีทีพี (dTTP) ความเข้มข้น 10 มิลลิโมลาร์ - น้ำยาแมกนีเซียมคลอไรด์ (MgCI2) ความเข้มข้น 50 มิลลิโมลาร์ - น้ำยาแท็ก ดีเอ็นเอ โพลีเมอร์เรส (Taq DNA polymerase) ความเข้มข้น 5 ยูนิตต่อไมโครลิตร - น้ำกลั่นบริสุทธิ์ปราศจากอิออน (deionized distilled water) ที่มีความบริสุทธิ์ระดับพีซีอาร์ (PCR grad)

3. ไพรเมอร์และชุดน้ำยาสำหรับตรวจเชื้อรามาลาสซีเชีย สล็อฟฟิอี้ (Malassezia slooffiae) ตาม ข้อถือสิทธิที่ 1 หรือ 2 ที่ซึ่ง คู่ไพรเมอร์ (primer) ที่ใช้เพิ่มปริมาณสารพันธุกรรม (DNA) ของเชื้อรามาลาสซี เซีย ลล็อฟฟิอี้ (Malassezia slooffiae) มีปริมาณส่วนประกอบของน้ำยาทดสอบ (Master mix) ที่เหมาะสม ที่สุด สำหรับการทดสอบใน 1 ปฏิกิริยา คือ - ไพรเมอร์ (primer) สำหรับเพิ่มปริมาณสารพันธุกรรม (DNA) ของเชื้อรามาลาสซีเซีย สล็อฟฟิอี้ (Malassezia slooffiae) 1 คู่ ประกอบด้วยฟอร์เวิร์ดไพรเมอร์ (forward primer) และรีเวอร์สไพรเมอร์ (reverse primer) ที่มีความเข้มข้น 10 ไมโครโมลาร์ ปริมาตรอย่างละ 0.6 ไมโครลิตร หน้า 2 ของจำนวน 2 หน้า - พีซีอาร์รีแอกลั่น มิกซ์ (PCR reaction mix) ประกอบด้วยพีซีอาร์บัฟเฟอร์ (PCR buffer) ความ เข้มข้น 10X ปริมาตร 3 ไมโครลิตร, ดีเอ็นทีพี (dNTPs) ทั้ง 4 ชนิด ได้แก่ ดีเอทีพี (dATP), ดีซีทีพี (dCTP), ดีจีทีพี (dGTP) และดีทีทีพี (dTTP) ที่มีความเข้มข้น 10 มิลลิโมลาร์ ปริมาตร 0.6 ไมโครลิตร, สารละลาย แมกนีเซียมคลอไรด์ (Magnesium chloride; MgCI2) ที่มีความเข้มข้น 50 มิลลิโมลาร์ ปริมาตร 0.9 ไมโครลิตร และเอนไซม์ (enzyme) แท็กดีเอ็นเอโพลิเมอเรส (Tag DNA polymerase) ความเข้มข้น 5ยู นิตต่อไมโครลิตร ปริมาตร 0.2 ไมโครลิตร - สารพันธุกรรมที่สกัดได้จากตัวอย่างความเข้มข้น 1-50 นาโนกรัม -ปรับด้วยน้ำกลั่นปริสุทธิ์ปราศจากอิออน (deionized distilled water) ที่มีความบริสุทธิ์ระดับพีซี อาร์ (PCR grad) ให้ได้ปริมาตรสุดท้ายเป็น 30 ไมโครลิตร

4. ไพรเมอร์และชุดน้ำยาสำหรับตรวจเชื้อรามาลาสซีเซียสล็อฟฟิอี้ (Walassezia slooffiae) ตาม ข้อถือสิทธิที่ 1 ถึง 3 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่งการเพิ่มปริมาณสารพันธุกรรม (DNA) ด้วยวิธีปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอ เรส หรือเทคนิคพีซีอาร์ (PCR) โดยใช้เครื่องเทอร์มอลไซเคลอร์ (Thermal cycler หรือ PCR machine) มี เงื่อนไขของโปรแกรมอุณหภูมิเพื่อเพิ่มปริมาณสารพันธุกรรม (DNA) ตามขั้นตอนดังนี้ ขั้นที่ 1 โปรแกรมพร-ดีเนเจอร์ (Pre-denature) ใช้อุณหภูมิ 94 องศาเซลเซียส นาน 3 นาที ขั้นที่ 2 โปรแกรมแอมพลิฟิเคชั่น (Amplification) ประกอบด้วย 3 ขั้นตอน คือ ขั้นตอนดีแนทเจอ เรชั่น (Denaturation) ที่อุณหภูมิ 94 องศาเซลเซียส นาน 45 วินาที ขั้นตอนแอนเนียลลิง (Annealing) ที่ อุณหภูมิ 60 องศาเซลเซียส นาน 30 วินาที และขั้นตอนเอ็กเท็นลั่น (Extension) ที่อุณหภูมิ 72 องศา เซลเซียส นาน 30 วินาที ทำซ้ำทั้งหมด 30 รอบ (cycles) โดยอัตราการเปลี่ยนแปลงอุณหภูมิ (temperature transition rate) ของเครื่องเทอร์มอลไซเคลอร์ (Thermal cycler) เป็น 5 องศาเซลเซียสต่อวินาที ขั้นที่ 3 โปรแกรมไฟนอล เอ็กเท็นลั่น (Final extension) ใช้อุณหภูมิ 72 องศาเซลเซียส นาน 4 นาที ขั้นที่ 4 โปรแกรมคูลลิง (Cooling) ลดอุณหภูมิลงถึง 4 องศาเซลเซียส (ไม่จำกัดเวลา) ------------

1. ไพรเมอร์และชุดน้ำยาสำหรับตรวจเชื้อรามาลาสซีเซีย สล็อฟฟิอิ้ (Malassezia slooffiae) ประกอบด้วย คู่ไพรเมอร์ (primer) ที่ใช้เพิ่มปริมาณสารพันธุกรรม (DNA) ของเชื้อรามาลาสซีเซีย สล็อฟฟิอิ้ (Malassezia slooffiae) มีลำดับเบสดังนี้ - ฟอร์เวิร์ดไพรเมอร์ (forward primer) มีลำดับเบสเป็น 5'- cac gct aac aca acg tgc -3' - รีเวอร์สไพรเมอร์ (reverse primer) มีลำดับเบสเป็น 5'- gcg gaa tac cac aga gcg -3'

2. คู่ไพรเมอร์ (primer) ที่ใช้เพิ่มปริมาณสารพันธุกรรม (DNA) ในระดับสปีชีส์ (Species) ของเชื้อ รามาลาสซีเซีย สล็อฟฟิอิ้ (Malassezia slooffiae) ตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่งสามารถประกอบเพิ่มเติมด้วย ชุดน้ำยาสำหรับการทำปฏิกิริยาเพื่อการตรวจเชื้อรามาลาสซีเซีย สล็อฟฟิอิ้ (Malassezia siooffiae) ซึ่ง ประกอบด้วย - น้ำยาสิบเอ็กพีซีอาร์ บัฟเฟอร์ (10XPCR buffer) ประกอบด้วย 50 มิลลิโมลาร์ โพแทสเซียมคลอ ไรด์ (millimolar Potassium chloride; mM KCI), 10 มิลลิโมลาร์ ทริสไฮโดรคลอไรด์ (millimolar Tris- Hydrochloride; mM Tris-HCI (pH 8.3)) และ 1-1.5 มิลลิโมลาร์ แมกนีเซียมคลอไรด์ (millimolar Magnesium chloride; mM MgCl2) - น้ำยาดีเอ็นทีพี มิกซ์ (dNTPs mix) ประกอบด้วย ดีเอ็นทีพี มิกซ์ (dNTPs mix) 4 ชนิด คือ ดีเอทีพี (dATP), ดีซีทีพี (dCTP), ดีจีทีพี (dGTP) และดีทีทีพี (dTTP) ความเข้มข้น 10 มิลลิโมลาร์ - น้ำยาแม็กนีเซียมคลอไรด์ (MgCl2) ความเข้มข้น 50 มิลลิโมลาร์ - น้ำยาแท็ก ดีเอ็นเอ โพลีเมอร์เรส (Taq DNA polymerase) ความเข้มข้น 5 ยูนิตต่อไมโครลิตร - น้ำกลั่นบริสุทธิ์ปราศจากอิออน (deionized distilled water) ที่มีความบริสุทธิ์ระดับพีซีอาร์ (PCR grad)

3. ไพรเมอร์และชุดน้ำยาสำหรับตรวจเชื้อรามาลาสซีเซีย สล็อฟฟิอิ้ (Malassezia slooffiae) ตาม ข้อถือสิทธิที่ 1 หรือ 2 ที่ซึ่ง คู่ไพรเมอร์ (primer) ที่ใช้เพิ่มปริมาณสารพันธุกรรม (DNA) ของเชื้อรามาลาสซี เซีย สล็อฟฟิอี้ (Malassezia slooffiae) มีปริมาณส่วนประกอบของน้ำยาทดสอบ (Master mix) ที่เหมาะสม ที่สุด สำหรับการทดสอบใน 1 ปฏิกิริยา คือ - ไพรเมอร์ (primer) สำหรับเพิ่มปริมาณสารพันธุกรรม (DNA) ของเชื้อรามาลาสซีเซีย สล็อฟฟิอี (Malassezia slooffiae) 1 คู่ ประกอบด้วยฟอร์เวิร์ดไพรเมอร์ (forward primer) และ รีเวอร์สไพรเมอร์ (reverse primer) ที่มีความเข้มข้น 10 ไมโครโมลาร์ ปริมาตรอย่างละ 0.6 ไมโครลิตร - พีซีอาร์แอกชั่น มิกซ์ (PCR reaction mix) ประกอบด้วยพีซีอาร์บัฟเฟอร์ (PCR buffer) ความ เข้มข้น 10X ปริมาตร 3 ไมโครลิตร, ดีเอ็นทีพี (dNTPs) ทั้ง 4 ชนิด ได้แก่ ดีเอทีพี (dATP), ดีซีทีพี (dCTP), ดีจีทีพี (dGTP) และดีทีทีพี (dTTP) ที่มีความเข้มข้น 10 มิลลิโมลาร์ ปริมาตร 0.6 ไมโครลิตร, สารละลาย แมกนีเซียมคลอไรด์ (Magnesium chloride; MgCl2) ที่มีความเข้มข้น 50 มิลลิโมลาร์ ปริมาตร 0.9 ไมโครลิตร และเอนไซม์ (enzyme) แท็กดีเอ็นเอโพลิเมอเรส (Taq DNA polymerase) ความเข้มข้น 5 ยู นิตต่อไมโครลิตร ปริมาตร 0.2 ไมโครลิตร - สารพันธุกรรมที่สกัดได้จากตัวอย่างความเข้มข้น 1-50 นาโนกรัม - ปรับด้วยน้ำกลั่นบริสุทธ์ปราศจากอิออน (deionized distilled water) ที่มีความบริสุทธิ์ระดับพีซี อาร์ (PCR grad) ให้ได้ปริมาตรสุดท้ายเป็น 30 ไมโครลิตร

4. ไพรเมอร์และชุดน้ำยาสำหรับตรวจเชื้อรามาลาสซีเซีย สล็อฟฟิอิ้ (Malassezia slooffiae) ตาม ข้อถือสิทธิที่ 1 ถึง 3 ข้อใดข้อหนึ่ง ที่ซึ่งการเพิ่มปริมาณสารพันธุกรรม (DNA) ด้วยวิธีปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอ เรส หรือเทคนิคพีซีอาร์ (PCR) โดยใช้เครื่องเทอร์มอลไซเคลอร์ (Thermal cycler หรือ PCR machine) มี เงื่อนไขของโปรแกรมอุณหภูมิเพื่อเพิ่มปริมาณสารพันธุกรรม (DNA) ตามขั้นตอนดังนี้ ขั้นที่ 1 โปรแกรมพรี-ดีเนเจอร์ (Pre-denature) ใช้อุณหภูมิ 94 องศาเซลเซียส นาน 3 นาที ขั้นที่ 2 โปรแกรมแอมพลิฟิเคชั่น (Amplification) ประกอบด้วย 3 ขั้นตอน คือ ขั้นตอนดีแนทเจอ เรชั่น (Denaturation) ที่อุณหภูมิ 94 องศาเซลเซียส นาน 45 วินาที ขั้นตอนแอนเนียลลิง (Annealing) ที่ อุณหภูมิ 60 องศาเซลเซียส นาน 30 วินาที และขั้นตอนเอ็กเท็นชั่น (Extension) ที่อุณหภูมิ 72 องศา เซลเซียส นาน 30 วินาที ทำซ้ำทั้งหมด 30 รอบ (cycles) โดยอัตราการเปลี่ยนแปลงอุณหภูมิ (temperature transition rate) ของเครื่องเทอร์มอลไซคลอร์ (Thermal cyclar) เป็น 5 องศาเซลเซียสต่อวินาที ขั้นที่ 3 โปรแกรมไฟนอล เอ็กเท็นชั่น (Final extension) ใช้อุณหภูมิ 72 องศาเซลเซียส นาน 4 นาที ขั้นที่ 4 โปรแกรมคูลลิง (Cooling) ลดอุณหภูมิลงถึง 4 องศาเซลเซียส (ไม่จำกัดเวลา)