SU955861A3

SU955861A3 - Способ получени производных стрептоварицина с

Info

Publication number: SU955861A3
Application number: SU792730451A
Authority: SU
Inventors: Сасаки Катцуа; Митцуи Хироми; Онодера Кацукие
Original assignee: Какен Кемикал Ко., Лтд (Фирма)
Priority date: 1978-02-17
Filing date: 1979-02-16
Publication date: 1982-08-30
Also published as: EP0004270A1; DE2961622D1; US4212881A; AU518677B2; JPS54110000A; AU4346879A; EP0004270B1; JPS625158B2; CA1110235A

Description

Изобретение относитс к способу получени новых производных стрепто варицина С, обладак дих ценными антибиотическими рвойствами. Цель изобретени ,- получение новых полезных соединений, расшир ющих арсенал средств воздействи на живой организм. Поставленна цель достигаетс путем синтеза новых производных, основанного на известной реакции зтёрифйкации| 1 . Способ получени новых производных стрептоварицина С общей формулы где R - аллил, циклопентил, циклогексил , адамантил, метил, этил, пропил,бутил, пентил гексил, гептил, октил, нонил, децил, ундецил, тридецил, пентадецил, октадецил, бензил , формилметил,ацетонил, оксибутил, цианопропил, метоксиметил , нитробензил, фенетил, фенацил,формил-. этил, хлорфенацил, метоксифенидйл , фенилфенацил, фуроилметил , теноилметил или карбамоилметил - радикал, заключающийс в том, что соединение (дамаварицин Fc или его оптический изомер атропизодамаварицин ,Fc) ОН О -н СЫэ подвергают взаимодействию с окисью серебра или гидроокисью кали при перемешивании в инертном растворе при комнатной температуре в течение от 30 мин до 5 ч с последующим взаи действием полученной серебр ной или калиевой соли соединени формулы 1 с галогенидом общей формулы R-Hal III где R имеет указанные значени , На t галоген в инертной среде при комнатной температуре в течение от 30 мин до 24 Этерификацию провод т следутощи образом. Исходный продукт, отвечающий фор муле (П.), раствор ют или диспергируют в растворителе и в раствор или дисперсию добавл ют приблизительно 0,5-5 моль-экв. окиси серебра или гидроокиси кали , после чего смесь тщательно перемешивают при комнатно температуре в течение от 30 мин до 5 ч дл получени соли серебра или кали . Затем провод т реакцию соли сере ра или кали с галогенидом формулы R-Hal, где значени R определены, Hal - ггшоген, в приемлемом раствор теле . . Класс приемлемых галогенидов фор мулы (111) включает в себ хлориды, бромиды и иодида. В качестве растворител предпочт , тельно использовать инертный в реак щионных услов их растворитель, в частности метанол, этанол, ацетон, 1,2-да1метокоиэтан и тетрагидрофуран . Указанную реакцию обычно провод т при комнатной температуре, прич продолжительность реакции зависит от галогенида формулы (Л1) и составл ет приблизительно от 30 мин до 24 ч. Таким образом, новые производные стрептоварицина С формулы ()) .получают этерификацией фёиольной ги роксилъной группы в положении 19 . исходного продукта, которалй отвечает формуле (It). Выделение и очистку целевого сое динени формулы (1) можно прюводить обычными способами. Например, nr /:aie завершени реакции реакционную сгдас фильтруют через целит с отделением галогенида серебра, затем фильтрат концентрируют и сушат при. 35-45 С в , остаток раствор ют в органиуерком растворителе, а полученный йродукт очищают хроматографической обработкой и/или перекристал лизацией. Новые производные стрептоварицина С формулы (I) представл ют собой жел тые или желтовато-оранжевые кристаллические соединени , которые практически не раствор ютс в воде, но растворимы в органических растворител х , в частности в метаноле, этаноле , ацетоне, галоидированных углеводородах , сложных эфирах, диэтиловом эфире, тетрагидрофуране, диоксане , 1,2-диметоксиэтане, диметилсульфоксиде , диметилформамиде и бензоле . В том случае, когда соединени (1) обрабатывают восстановителем, в частности гидросульфитом, дитионитом , смесью цинка с уксусной кислотой или аскорбиновой кислотой, окраска измен етс на бледно-желтую , однако такие продукты можно легко превращать в целевые соединени (i) путем их введени в контакт с кислородом, воздухом или окислительным агентом, в результате чего окраска продуктов измен етс на первоначальную (желтую или желтоватооранжевую ) . Конверсию целевых соединений (I) в их соли щелочных металлов можно проводить без каких-либо затруднений , причем водные растворы таких солей обладают практически нейтральной реакцией. Используемые в качестве исходного материала соединени формулы (li) представл ют собой стрептоварициновые производные, называемые дамаварицинами . Новые производные стрептоварицина С формулы (I) обладают способностью ингибировать обратнотрагнскриптазную активность РНК опухолевого вируса, вл ющегос вирусом мышиной саркомы. Установлено, что обратнс транскриптазна активность РНК опухолевого вируса имеет непосредствен ное отношение к канцерогенному перерождению клеток животных, поскольку реверсивна транскриптаза вл етс ферментом, необходимым дл саморазмножени опухолевого вируса РНК. Производные стрептоварицина С формулы (11) также обладают способностью ингибировать процесс очагового образовани почечных клеток в рганизме .крысы, вызываемой вирусом мышиной саркомы. Остра токсичность новых производных стрептоварицина С формулы (I) характеризуетс зггметно низким уровнем. Напршу ер, дл л лшей 10 р19-0-метиового соединени формулы (1) превышает 1000 мг/кг при внутримышечном введении и свыше 3000 мг/кг при введении через рот. Новые производные стрептоварицина С формулы (I) могут быть использованы в сбчетании с любой добавкой, днако предпочтительно их использовать S виде композиции, приготовленной смешением с твердой или жидкой органической или неорганической добавкой . Класс приемлекых добавок включает в себ воду, желатин, лактозу, крахмал , целлюлозоглюконат кальци , микрокристаллическую целлюлозу, стеариновый спирт, стеарат магни , тальк, растительное масло, бензиловый спирт, пропиленгликоль, камель, полиалкиленгликоль , белое минеральное масло, 5 желатин и холестерин.

Такие компоненты могут быть приготовлены в различных формах, в частности в виде таблеток, гранул, покрытых слоем сахара, суппозиторий, 10 пилюль, капсул, растворов, суспензий, ампул, эмульсий и препаратов дл инъекций, путем введени соответствующей добавки, например консервантов , стабилизаторов, смачивающих аген-15 тов, эмульгаторов, ускорителей растворени , солей, регулирующих осмотическое давление, буферов., св зующих материалов; суспендирующих и диспергирующих добавок, а также смазочных 20 добч1вок при осуществлении обычных процессов. П р им е р 1. 19-0-метильное

соединение.

3 40 мл метанола раствор ют 25 350 мг атропизодамавариципа Fc (содержащего приблизительно 25% дамаварицина FC) ив раствор добавл ют 176 мг окиси серебра, после чего смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч дл получени серебр ной соли исходного продукта .

В полученную реакционную смесь

затем добавл ют 2 г йодистого метила и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин,

а образовавшийс осадок йодистого серебра отдел ют фильтрованием через целит с последующим концентрированием и сушкой при пониженном давлении с 40 получением красного маслоподобного продукта. Маслоподобный продукт пердкристаллиэовывают из смеси этанола с н-гексаном в соотношении 1:1 с получением 254 мг оранжевато-желтого кристал- 45 лического продукта, представл ющего собой 19-0-метилатрапизодамаварицин F.C (содержащий 19-0-метилдамаварин FC).

Температура плавлени 210-212с. 50 Данные элементного анализа.

Найдено, %: С 60,50, Н 6,42, N 1,72%.

СэтЧ 5 0 а-2Н2.0

Вычислено, %: С 60,72,- Н 6,74 N 1,91

ИК-спектрограмма (карбонильный диапазон), л КВг ( 1740; 1728 1670; 1650; 1625.

Масс-спектрографический- анализ: т/е 695 (молекул рный ион), 677 J 659; 643, 641; 625 623.

I . Ультрафиолетова спектрограмма, :AniaiCH,,OH нм; 218; 265; 417.

ЯМР-спектр:(ГС1 OH( (S) и 11,845 (S)i(fco -МН(ч//«лм)7,б71 (S) и 7,954 (5),сГ оС,р-ОСШ ч/мли)В,7б9 (S) и 3,862 (S).

П р и м е р 2. 19-0-бензильное соединение.

В 20 МП метанола раствор ют 200 мг атропизодамаварицина Fc (содержащего приблизительно 25% дамаварицина. Fc) и добавл ют в раствор 100 мг окиси серебра, после чего смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 5 ч. Полученную суспензию сер бр ной соли концентрируют и сушат прц пониженном давлении, после чего остаток суспензируют в 20 мл тетрагидрофурана , добавл ют 800 мг бромистого бензила и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 20 ч. Образовавшийс осгщок бромистого серебра отдел ют фильтрованием через целит, а фильтрат концентрируют и сушат при пониженном давлении. Осадок раствор ют в небольшом количестве хлороформа и добавл ют большое количество н-гексана, в результате чего получают желтовато-коричневый осадок сырого целевого соединени . Сырой продукт пропускают через хроматографическук колонку с силикагелем и элюируют с нее 5%-ным раствором метанола в хлороформе,

Соответствующие фракции собирают и концентрируют припониженном давлении , а остаток перекристашлизовывают из смеси хлороформа с н-гексаном в соотношении 1:1 с получением 90 мг желтого кристаллического продукта, представл ющего собой 19-0-бензилатропизодамаварицин FC (содержащий 19-0-бензилдамаварицин FC).

Температура плавлени 149-151 0.

Данные элементного анализа.

Найдено, %: С 66,80; Н 6,59 N 1,60

C4jH49NOii

Вычислено, %: С 66,91, Н 6,40, N 1,81 .

ИК-спектрограмма (карбонильный ;диапазон).

кВг, 1740; 1725; 1680; 1675; 1645; 1625.

Масс-спектрографй , т/е 771 (молекул рный ион) 753, 735, 719; 701; 681,- 663; 645; 629,- бЮ.

55

Ультрафиолетова спектрограмма: A CHjOH), им,211; 263; 410. П р и м е р 3. В 50 мл метанола раствор ют 34.0 мг атропизодамаварицина FC (содержащего приблизительно 60 25% дамаварицина FC),B раствор добавл ют 36 мг карбоната кали и смесь перемешивают при комнатной тем ;пературе в течение 1 ч с получением

калиевой соли. Реакционную смесь 65 концентрируют и сушат при пониженном давлении, а остаток высушивают в вакууме в течение 20 ч, после чего высушенный продукт суспендируют в 50 мл ацетона и добавл ют в суспензию 600 мг иодацетальдегида. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 5 ч и -KQHцентрируют , затем высушивают при пониженном давлении. Остаток раствор ют в этилацетате, после чего раствор последовательно промывают 0,5 н. раствором сол ной кислоты, водой и насыщенным водным раствором хлористого натри , а затем высушивают над безводным сульфатом натри в течение ночи. Далее раствор концентрируют и сушат при пониженном давлении. Оставшийс красный масл нистый продукт элюируют из хроматографической кблонки с силикагелем после пропускани через нее 10%-ного раствора метанола в хлороформе.

Соответствующие фракции собираю и концентрируют при пониженном давлении, а оставшийс оранжеватокрасный масл нистый продукт перекристалл из овывают из смеси этанола с н-гексаном в соотношении 1:1, в результате чего получают 153 мл оржевато-желтого кристаллического прдукта , представл ющего собой 19-0-формилметилатропизодамаварицин FC (сйдержащий 19-0-формилметилдамаварицин Fc).

Температура плавлени 211-213с

Данные элементного анализа..

Найдено, %: С 59,71; Н 6,37,tv/ 1,75/.

CjgH,NO,

Вычислено, %; С 60,70; Н 6,50; f4 1,84.

ИК-спектрограмма (карбонильный диапазон), л КЗг (см) ,4738; 1725 1680; 1673/ 1647; 1625.

Протонна HMP-cneKTporpaMr/ia . (100 мгГц, CDCU ) -ЗГСНоСч./млн,) д,,.60 (5)и 9,80 TS) . . Ультрафиолетова спектрограмма: , нм: 218, 265; 420.

В соответствии с вариантами осуществлени предлагаемого способа, которые описаны в примерах 1-3, получают другие производные стрептварицйна С, отвечающие общей формуле XI), которые перечислены в та

П р и м е р 35. Соединение 19-6-н-децил .

В 40 мл метанола раствор ют 400 мг антропизодамаварицина Fc (содержащего примерно 25% дамаварицина FC) и добавл ют 240 мл окиси серебра , смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч с получением соли серебра исходного материала.

К реакционной смеси добавл ют 2 г н-децилйодида и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч, осадок в виде йодида серебра отдел ют фильтрованием через целит, а фильтр упаривают досуха при пониженном давлении с получением масл ного продукта красного цвета. Масл ный продукт очищают хроматографией на силикагеле, злюиру 5%-ным метанолом в хлороформе.

Нужные фракции собирают, концентрируют под вакуумом и остаток перекристаллизовывают из смеси хлороформ- н-гексан с получением 180 мл желтого «кристаллического продукта, представл ющего собой 19-0-н-децилатропизодамаварицин Fc (содержащий 19-0-н-дециламаварицин Fc).

Температура плавлени 138-141 С. Элементный .анализ.:

Найдено, %: С 67,60; Н 7,91;

1,65.

N

г

Вычислено, %: С 67,2i; Н 7,73;

1,73.

N

ИК-спектр, -V КВг(см ):1740 1726; 1675; 1645; 1625.

УФ-спектр;Лу«с1хСН ОН ,(нм 218; .

. Йасс-спектр: т/е 822 (молекул рный ион); 804; 786, 770,- 768-, 752, 750.

Спектр протонного ЯМР (100 МН2, СОС13 ) , i CL ОН (чЛшн) П,59 (S) И 11,76 (S).

П р и м е р 36. Соединение 19-0-ацетонил.

К раствору 1,36 г атропизодамаварицина FC (содержащего примерно 25% дамаварицина Fc) в 100 мл метанола добавл ют 2,32 г окиси серебра и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 5 ч с получением соли серебра исходного материала.

К реакционной смеси добавл ют 3 г бромацетона и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 24 ч осадок бромистого серебра отдел ют фильтрацией через целит и фильтрат упаривают досуха при пониженном давлении с получением масл ного продукта красного цвета. Масл ный продукт перакристаллизовывают из ацетона -н-гексана с получением 474 мг желтого кристаллического продукта, представл ющего собой 19-0-ацетонилатропизодамаварицин . Fc (содержащий 19-0-ацетонилдамаварицин Fc).

Температура плавлени 193-195,С.

Элементный ансшиз.

Найдено, %: С 61,30, Н 6 ,24 ; N 1,62

S9 47NOi -H20

Вычислено, %: С 61,81; Н 6 , 78, N1,84.

НК-спектр, -af KBrcM : 1737, 1680 1670; 1640; 1625. УФ-спектрЛ vCH,OH нм: 217; 2б5 418.. Масс-спектр: т/е 737 (молекул рный ион); 719; 701,- 685; 683; 667; 665, Протонный ЯМР-спектр (100 MHZ, COCij . -ЗГ Ci-, ОН (ч./млн.) 11,85 (S) и 11,60 (S) П р и м е р 37. 19-0-Фенациловое соединение. К раствору 200 мл атрапизодамава рицина FC (содержащего примерно 25% дамаварицина Fc) в 20 мл метанола добавл ют 100 мг окиси серебра |И смесь перемешивают при комнатной температуре в течение одного часа с получением соли серебра исходного iматериала. Затем к смеси добавл ют 750 мг фенацилбромида и перемеигавают при комнатной температуре в течение 6 ч осадок бромистого серебра удал ют путем фильтрации через целит, и -фильтрат упаривают под вакуумом с .полученим красного масл нистого продукта. Масл нистый продукт очищают при помощи силикагелевой хроматографии с элюированием 5%-ным метанолом в хлороформе. Нужные фракции собирают и упаривают при пониженном давлении, остаток перекристаллизовывают из системы этилацетат-н-гексан с получением 168 мг оранжевого кристалличес кого продукта,представл ющего собой 19-0-фенацилатропизодамаварицин FC (содержащий 19-0-фенацилдама варицик FC). Температура плавлени 189-191 С. Элементный анализ. , Найдено, %: С 64,49; Н 6,05; N 1,76. V г Вычислено, %: С 64,61 Н 6,28/ N 1,71. ИК-спектр KB г см : 1720, 1680; 16 1642, 1620; 1600, 1580. УФ-спектр,Л. СН.ОН, нм: 248; 263 (плечо); 418. Масс-спектр: т/е (молекул рный ион); 781; 763; 747; 745; 729; 727. П р и м е р 38. 19-0-(2-Теноил)м тиловое производное. К раствору 200 мг атропизодамава рицина FC (содержащего примерно 25% дамаварицина Рс) в 20 мл метанола добавл ют 120 мг окиси серебра и смесь перемешивают при комнатной тем пературе в течение 2 ч. Затем к сме си добавл ют 750 мг 2-теноилметилбромида и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в т ечение 6 ч, осадок бромистого сере ра отдел ют фильтрацией через целит и фильтрат упаривают досуха при пониженном давлении с получением оранжево-красного масла. Масло очищают при помощи хроматографии на силикагеле , злюиру 5%-ным метанолом в хлороформе. Соответствующие фракции собирают и упаривают при пониженном давлении досуха, остаток перекристсшлизрвывают из этанола, н-гексана с получением 181 мг оранжевого кристаллического продукта/представл ющего собой 19-0-(2-теноил/метилатропизо-, дамаварицина Рс (содержащий 19-0-(2-теноил/метилдамаварицин Рс). Температура плавлени 191-193 С, Элементный анализ. Найдено, %s С 61,.00, Н 5,73, N 1 .ijS. C.-H. Вычислено, С 61,23, Н 5,99/ N 1 .70. ИК-спектр, v КВг см: 1720, 1680, 1670) 1645) 1627/ 1570. УФ-спектр,Л CHjOH, нм: 211/ 264; 417. п,ох . 5 масс-спектр: т/е 805 Ыопекул рный ион); 787/ 769; 751; 735, 733. Протонный ЯМР-спектр (100 MHZ, соси), (ч,/млн-) 11,85 (S) и 11,63 (S). Способность ингибировать реверсивную транскриптазу у вируса мышиной саркомы определ ют следующим обра- . зом. а) Раствор пробы. Метанольный раствор, содержащий каждый активнодействующий компонент в концентрации 6 мг/мп. в) Раствор фермента Раствор, включающий в себ 240 мкг вирусного белка (MLV-melony в 1 мл буферного раствора/ 20 мМ трис-сол ной кислоты (величина рН 7,8) 0,1 М хлорида натри и 1 мМ дитиотерзита (ДТТ), е) Реакционна среда Реакционна среда, содержаща 46 мМ трис-сол ной кислоты (величина рН 8,1); 92 мМ хлористого кали , 15,4 мМ хлорида марганца; .0,77 NM .dGTP/ 0,77 MM dGTP, 0,23 мкМ ЗН-ТТР (50 ci мМ); 7,7 мМ DTT и 0,038% NP-40. Реакционную смесь приготовл ют путем последовательного смешени (а) 5 мкл с (в) 30 мкл и (с) 65 мкл, после чего смесь подвергают тщательному перемешиванию с выдержкой при в течение 5 мин. Далее реакционную смесь выдерживают при в течение. 60 мин и дл прекращени реакции в реакционную смесь добавл ют 1 Nir холодного 10%-ного раствора трихлоруксусной кислоты. Затем смесь выдерживают при в течение 20 мин и нерастворимые компоненты собирают на каждую из ватманских бумаг сорта GP (с)

(куски диаметром 2,5 см) с последующей промывкой 5 мл холодной 5%-ной трихлоруксусной кислотой. Остаток высушивают в печи при 80 С и помещаиот в вирусную скл нку, содержащую 10 мл толуольного раствора , который содержит сцинтилл тор РРО-РОРОР, радиоактивность измер ют

с помощью сцинтилл ционного спектрометра .

Способность производных стрёптоварицина С, отвечающих формуле (1 ) (300 мкг/мл),ингибировать реверсивную транскриптазу у вируса мышиной саркомы представлена в табл.2.

Таблица 1

Продолжение табл. 1

Плечо.

Метил

Этил

н-Пропил

н-Бутил

н-Пентил

н-Гексил

н-Октил

н-Ундецил

Циклогекс

Аллил

Бензил

Фенаци

Ацетонил

JT а б л и ц а

Ингибнрующа способность, %

41 60 52 78 52 60 41 78 45 65 67 50 58 15 95 подвергают взаимодействию с окисью серебра или гидроокисью кали при перемешивании в инертном растворителе при комнатной температуре в течение от 30 мин до 5 ч с Последующим взаимодействием полученной серебр ной или калиевой соли соединени формулы II с галогенидом общей формулы ill R - Hal, 586116 где R имеет указанные зиачени , Hat галоген, в инертной среде при комнатной температуре в течение от 30 мин до 24 ч, 5 Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе 1, каррер П, Курс органической химии. Л., Госхимиздат , I960, г, 97-98.

Claims

Формула изобретения

Способ получения производных стрептоварицина С общей формулы (Д ) децил, ундецил, тридецил, пентадецил, октадецил, бензил, формилметил, ацетонил, оксибутил, цианопропил, метоксиметил, нитробензил, фенетил, фенацил,формилэтил, хлорфенацил, метоксифенацйл, фенилфенацил, фуроилметил, теноилметил или карбамоилметилрадикал, где R - аллил, циклопентил, циклогексил, адамантил, метил, этил, пропил, бутил, пентил, гексил, гептил, октил, нонил, 65 подвергают взаимодействию с окисью серебра или гидроокисью калия при перемешивании в инертном растворите ле при комнатной температуре в течение от 30 мин до 5 ч с Последующим взаимодействием полученной серебряной или калиевой соли соединения формулы 11с галогенидом общей формулы JU

R - На! , где R имеет указанные значения, Hat галоген, в инертной среде при комнатной температуре в течение от 30 мин до 24 ч.