Claims (2)
Изобретение относитс к микробиологической промышпенности, а именно касае с состава питательных сред дп культивировани продуцентов ферментов о1-амилазы и нуклеазы, примен емых в спиртовом , космическом, химическом производстве , в медицине и в молекул рной биологии , дл расщеплени полисахаридов в биологическом материале (Л-амилаза) и дл изучени структур нуклеиновых кислот получени 5-нуклеотидов и лечени рака (нуклеаза S ). Известен способ получени оС-амилазы предусматривающий культивирование продушнта Asperq iKeus 5-9-15 в течение 72ч при на питательной среде, содержащей крахмал, как источник углерода, .биостимул тор - солодовый экс ракт, минеральные соли, микроэлемент и воду при следующем соотношении компонентов: крахмал 8,0; солодовый экстакт 1,0; фосфорнокислый однозамещенный калий 0,01%, магний азотнокислый 0,08; натрий азотнокислый 1,2 ; калий хлористый 0,05; магний фосфорнокислый 0,07; магний сернокислый 0,1; железо сернокислое О.ООЗ. Выход активности oL-амилазы в культурал1)ной жидкости 2Оед/мл фильтрата С 3 . Недостатками известного способа вл ютс высокий расход сырь и сложный состав питательной среды при возможности получени только одного фермента, сравнительно низка активность сС «милазы. Цель изобретени - повышение oL-амилазной активности продуцента и одновременно продуцирование нуклеазы S-, . Поставленна цель достигаетс тем, что известна среда дл кулычтировани продуцента dL-амилазы Asperi iEBus 3-9-15, содержаща источник углерода крахмал , биостимул тор - солодовый экстракт , минеральные соли: натрий азотнокислый , однозамещенный фосфорнокислый калий, сернокислый магний, микроэлемент и воду, в качестве микроэлемента соде1 жит индуктор нуклеазы S - цинк сернокислый , при следующем соотношении компонентов , вес. %: Крахмал5,5-6,0 Солодовый экстрактО,8-1,0 Калий фос форнокислый одноэа мешенный0,1«-0,2 Натрий азотнокислый0 ,8-1,0 Калий хлористый 0,04-0,06 Магний сернокислый 0,05-0,06 Цинк сернокислый 0.005-0,00 Вода Остальное Ионы шпсса играют существенную роль в активировании различных энзиматнчески процессов метаболизма клетки, стимулиру образование нуклеаз. Косвенно, через окс дативное фосфорирование обеспечиваетс полноценный обмен веществ, присутствие ионов цинка положительно вли ет также на образование oL-амилазы. Соотношение в среде источншсов углерода, азота и фосфора обеспечивает оптимальное развитие кулыуры и биосинтез ot-амилазы ш нук е аы Sxj. Максимум биосинтеза оС-амилазы и нуклеазы S-, достигаетс к 72ч культивированк при в аэробных услови х. Результаты культивировани : Активность, ед/мл фильтрата ot.-амилазы 25-30, нуклеазы S 80 -10О. Пример 1. Культура /IspertjiCeo ог-агсце 3-9-15 поддерживаетс на суспо-агаре, пересеваетс 1 раз за три мес ца. 1. Инокул ци пойевного материала. Дл подмолаживани культуры готов т ко с ки, которые выращивают в термостате при ЗО°С 7сут, после чего выдерживают при комнатной температуре 3 сут, затем став тс в холодильник при +4°С. Целесообразен возраст используемых культур 1О - 20 сут. Кухгьтуру с кос ка смывают стерильной деминерализованной водой и засевают по 1 мл в колбах с питательной средой и размножают на качапке при 24ч. Питательна среда содержит, вес. % Крахмал5,5 Солодовый экстракт1,0 Калий фосфорнокислый однозамешен- шли0,1 Натрий азотно- квелый0,8 Калий хлористый0 ,04 Магний сернокислый0 ,05 LUfflK сернокислыйО , О 5 2. Ферментаци культуры. Ферментаци культуры производитс после добавлени инокул та с расчетом 1 мл культуральнЬй суспензии на 200 мл питательной среды. Ферментацию производ т в 20 мл ферментера при в услови х принудительной аэрации. Во врем ферментации контролируетс однородность культуры, рН, температура, степень аэрации, сверх-, давление в аппарате и динамика накоплени ферментов. После ферментации на 72ч отфильтровывают мицелий. Активность dL -амилазы в филытрате составл ет 25 ед/ /мл, нуклеазы S-f 1ОО ед/мл. П р и м е р The invention relates to the microbiological industry, namely, the composition of nutrient media dp cultivation of the producers of o1-amylase and nuclease enzymes used in alcohol, space, chemical production, medicine and molecular biology, for the cleavage of polysaccharides in biological material (L- amylase) and for the study of the nucleic acid structures of the preparation of 5-nucleotides and the treatment of cancer (nuclease S). A known method for the production of oC-amylase involves the cultivation of Asperq iKeus 5-9-15 over 72 hours with a nutrient medium containing starch as a carbon source, a bio stimulator — malt extract, mineral salts, a trace element and water in the following ratio of components: starch 8.0; malt extract; 1.0; phosphate monosubstituted potassium 0.01%, magnesium nitrate 0.08; sodium nitrate 1,2; potassium chloride 0.05; magnesium phosphate 0.07; magnesium sulfate 0,1; iron sulfate OOOZ. The output of the activity of oL-amylase in a cultured liquid 2 U / c ml of filtrate C 3. The disadvantages of this method are the high consumption of raw materials and the complex composition of the nutrient medium with the possibility of obtaining only one enzyme, the relatively low activity of the CC "mylase. The purpose of the invention is to increase the producer's oL-amylase activity and simultaneously produce S-nuclease. This aim is achieved in that the known medium for producing kulychtirovani dL-amylase Asperi iEBus 3-9-15, comprising a carbon source starch, biostimul Torr - malt extract, mineral salts: sodium nitrate, potassium dihydrogen phosphate, magnesium sulfate, trace elements and water, as a trace element contains the nuclease inducer S - zinc sulfate, with the following ratio of components, weight. %: Starch5.5-6.0 Malt extract, 8-1.0 Potassium phosphate single mixture, 0.1% -0.2 Sodium nitrate0, 8-1.0 Potassium chloride 0.04-0.06 Magnesium sulfate 0, 05-0.06 Zinc sulphate 0.005-0.00 Water Else Shpss ions play a significant role in activating various enzymatic processes of cell metabolism, stimulating the formation of nucleases. Indirectly, through oxidative phosphorus, a complete metabolism is provided, the presence of zinc ions also has a positive effect on the formation of oL-amylase. The ratio in the medium of carbon, nitrogen and phosphorus sources ensures the optimal development of kuryury and the biosynthesis of ot-amylase sh Noe Sxj. The maximum biosynthesis of oC-amylase and S-nuclease is reached by 72 h of cultivation under aerobic conditions. Results of cultivation: Activity, units / ml of ot.-amylase filtrate 25-30, nucleases S 80-10O. EXAMPLE 1 Culture / IspertjiCeo og-agse 3-9-15 is maintained on suspo-agar, seeded once every three months. 1. Inoculation of drinking material. To rejuvenate the culture, they prepare kos, which are grown in a thermostat at 30 ° C for 7 days, then kept at room temperature for 3 days, then placed in a refrigerator at + 4 ° C. The age of the used cultures 1O is reasonable - 20 days. The cucumber is washed off with sterile demineralized water and seeded in 1 ml in flasks with a nutrient medium and propagated on a pitcher at 24 hours. Nutrient medium contains weight. % Starch5.5 Malt extract1.0 Potassium phosphate mono-mixtures0.1 Sodium nitrate 0.8 Potassium chloride0.04 Magnesium sulphate0.05 LUfflK sulfateO About 5 2. Fermentation of the culture. Fermentation of the culture is carried out after adding the inoculum with the calculation of 1 ml of culture suspension per 200 ml of nutrient medium. Fermentation is carried out in a 20 ml fermenter under forced aeration conditions. During fermentation, the culture uniformity, pH, temperature, degree of aeration, over-pressure, pressure in the apparatus, and the dynamics of enzyme accumulation are controlled. After fermentation for 72 hours, the mycelium is filtered. The activity of dL-amylase in the phyllate is 25 units / ml, nuclease S-f 1OO units / ml. PRI me R
2. Питательна среда содержит , вес,%: Крахмал 6,0 Солодовый экстракт0,8 Калий фосфорнокислый однозамешенный0 ,2 Натрий азот нокислый1,О Калий хлористыйО ,Об Магний сернокислый О, Об Шик сернокислый0 ,О07 Инокул цию посевного материала и ферментацию культуры производ т аналогично примеру 1. Активность (А-амилазы в фють трате ЗО ед/мл и нуклеазы 3 8О ед/мл. Таким образом, реализаци предложенного изобретени позвол ет повысить ct -амилазную активность продуцента на ЗО% и добитьс одновременного синтеза нуклеазы S-j . Формула изобретени Среда дл культивировани продуцента о1-амилазы AsjaertjiCPus. огэ701е 3-9-15, содержаща источник углерода - крахмал, биостимутт тор - солодовый экстракт, минеральные соли: натрий азотнокислый, калий фосфорнакж;лый однозамещенный, магний сернокислый, микроэлемент и воду , о тличаюша с тем, что, с целью повышени оС- милазной актив-2. Nutrient medium contains, in weight,%: Starch 6.0 Malt extract, 0.8 Potassium phosphate mono-mixed 0, 2 Sodium nitrate acid, O Potassium chloride, O Magnesium sulfate O, O Chic sulphate, O07 Inoculation of seed and production culture fermentation analogously to example 1. Activity (A-amylase in FU waste ZU units / ml and nucleases 3 8O units / ml. Thus, the implementation of the proposed invention allows increasing producer ct-amylase activity by ZO% and achieving simultaneous synthesis of Sj nuclease. Formula of invention Wednesday for lithiation of AsjaertjiCPus o1-amylase producer oge701e 3-9-15, containing a carbon source — calyx, biostimuttor — malt extract, mineral salts: sodium nitrate, potassium phosphoric acid; that in order to increase the oC-mylase active
5 94899965 9489996
ности продуцента и одновременного про-Натрий азотнодущфовани нукелазы 6 , питательна кислый 0,8 - 1,Оof the producer and simultaneous pro-Sodium nitride of nukelase 6, nutritious acid 0.8 - 1, O
среда в качестве микроэлемента содержитКалий хлорнсиндуктор нуклеаэы 5, - шшк сернокис-тый 0,04-0,06medium as a trace element contains Calium chlorine inducer of nucleaea 5, - pulmonous sulfate 0.04-0.06
лый н дополнительно включает калий хлорис-.- 5Магний сёрнотый , при следующем соотношении компо-кислый 0,О5-0 6In addition, the potassium chlorine additionally includes .- 5 Magnetic stern, with the following ratio: 0, О5-0 6
нентов, вес.%:Цинк сернокисКрахмал 5,5-6,0лый О,ОО5-О,ОО7nantov, wt.%: Zinc sulfate Starch 5.5-6,0ly O, OO5-O, OO7
Солодовый ,Вода Остальное Malt, Water Else
экстракт 0,8-1,0 ЮИсточники информашш.extract 0.8-1.0 Yu Sources information.
Калий фос- прин тые во внимание при экспертизеPotassium phosphate taken into account in the examination
форнокислый1. Авторское свидетельство ССХЗРformate soda1. Copyright certificate of SSHZR
однозамещен-№ 328746, кл. С 12 N 9/28, 1970odnozameshchen- No. 328746, class. C 12 N 9/28, 1970
ный 0,1-0,2(прототип).ny 0.1-0.2 (prototype).