SU888542A1 - Способ получени ферментного препарата липоксигеназы - Google Patents

Abstract

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРАТА ЛИПОКСИГЕНАЗЫ путем глубинного культивировани  ее продуцентов - плесневых грибов из рода Aspergillus на питательной среде, содержащей в качестве источника углерода соевую муку, минеральные соли азота, фосфора, кали  и магни , с последующим выделением ферментного препарата из культуральной жидкости , отличающийс  тем, .что, с целью повышени  активности липоксигеназы, культивирование продуцентов осуществл ют в присутствии индуктора липоксигеназы - соевого масла в количестве 2-5 мл на 100 мл культуральной жидкости. 2. Способ по п. 1, отличающийс  тем, что культивирование продуцентов липоксигеназы осуществл ют на питательной среде, со-. держащей индуктор - соевое масло, соевую муку в качестве источника углерода и минеральные соли - азотнокислый натрий, сернокислый магний, однозамещенный фосфорнокислый калий, (Л вз тые соответственно в количествах, вес.: Соевое масло 1-5 8-12 Соева  мука Азотнокислый 00 0,05-0,3 натрий 00 Сернокислый 00 Oi магний 0,005-0,015 Однозамещенный 4 фосфорнокислый 0,05-0,3 to калий Остальное Вода 3. Способ по пп. 1 и 2, отличающийс  тем, что из рода Aspergillus используют штаммы Aspergillus oryzae 3-9-15 или Aspergtllus awarory - 66,

Description

1 Изобретение относитс  к микробио логической промышленности , а именн к способам получени  ферментного препарата липоксигеназы, фермента, используемого в хлебопекарном проиэ водстве. Известны способы получени  ферме тного препарата липоксигеназы из ра личных продуктов растительного происхождени  (сои, гороха, картофел ) 1. Недостатком этих способов  вл етс  низка  активность полученного препарата, дефицит некоторых видов оастительного сырь , в частности сои, необходимость создани  специальных условий хранени  сырь  дл  сохранений активности фермента. Кро ме того, использование липоксигенавыделенной из растительного сырь , экономически нецелесообразно, так как получение такого фермента очень дорого. Наиболее близким по технической сущности и достигаемому положительному эффекту  вл етс  способ получе ни  ферментного препарата липоксигеназы путем глубинного культивиров ни  ее продуцентов - плесневых гриб на питательной среде, содержащей в качестве источника углерода осевую муку, минеральные соли азота,фосфо ра , кали  и магни , с последующим выделением ферментного препарата из культуральной жидкости, в котором в качестве продуцентов липоксигеназы используют микромицеты из родов Fusarium, Aspergillus, Rhozopus и Реп i ci 1 1 i urn 2 . Недостатком применени  указанных продуцентов липоксигеназы  вл етс  токсичность некоторых продуцентов, а также очень низка  активность фер мента, что не позволило осуществить его использование в промышленности дл  производства хлеба. Целью изобретени   вл етс  повышение активности липоксигеназы. Поставленна  цель достигаетс  тем, что в способе получени  фермен ного препарата липоксигеназы путем глубинного культивировани  ее проду центов - плесневых грибов из рода Aspergillus на питательной среде, содержащей в качестве источника yi- лерода соевую муку, минеральные соли азота, фосфора, кали  и магни , с последующим выделением ферментного препарата изкультуральной жидкости, культивирование продуцентов осуществл ют в присутствии индикатора липоксигеназы - соевого масла в количестве 2-5 мл на 100 мл культуральной жидкости. При этом культивирование продуцентов липоксигеназы осуществл ют на питательной среде, содержащей индуктор - соевое масло, муку в качестве источника углерода и минеральные соли азотнокислый натрий, сернокислый магний, однозамещенный фосфорнокислый калий, вз тые соответственно в количествах вес.%: Соевое масло 1-5 Соева  мука 8-12 Азотнокислый натрий0,05-0,3 Сернокислый магний0,005-0,015 Однозамещенный фосфорнокислый калий0,05-0,3 ВодаОстальное Способ отличаетс  тем, что в качестве продуцентов используют штаммы Aspergillus oryzae 3-9-15 или Aspergillus awamory 466, Штамм Aspergillus oryzae 3-9-15. Получен путем одноступенчатого воздействи  ультрафиолетовых лучей на штамм Aspergillus oryzae. Штамм хранитс  в коллекции ВНИИгенетика, коллекционный № ЦМПМ F 137. I Токсическими и патогенными свойствами штамм не обладает. Морфолого-физиологическа  характеристика штамма. Морфолого-культуральные свойства. Гигантска  колони , выращенна  на сусле-агаре, на 7 сутки роста имеет диаметр 20-25 мм. форма колонии кругла , размер 20-25 мм. Цвет колонии темно-зеленый, серозеленый . Край колонии ровный, плотный. Центр колонии сильно складчатый, плотный. Поверхность бархатиста , резко складчата . Пигмент отсутствует. Конидии образуютс  на 7-е сутки, серо-зеленые до темно-зеленых, форма конидий овальна  и кругла , но встремаютс  грушевидные и эллипсовидные. Зона гидролиза крахмала есть. Физиологические свойства. Потребл ет: крахмал, глюкозу, ма тозу, сахарозу. Ассимилируют нитраты. Отношение к кислороду: аэроб, . максимум роста при 28-30 С, рН 6-. Картофель: на ломтиках картофел  образует белый мицелий. Штамм Asperg Mlus awamory -Абб Получен путем рассева на сусло-агаре исходной культуры. Штамм хранитс в коллекции ВНИИгёнетика, коллекцио ный W ЦМПМ F 138, токсическими и патогенными свойствами не обладает. Штамм Asperg Mlus awanrory - Ц66 имеет следующую морфолого-физиологи ческую характеристику. Морфолого-культуральные свойства Гигантска  колони  на сусло-агар Форма колонии - кругла  на 12 су ки роста диаметр колонии мм. Цвет колоний белый, желтоватый. Край колоний неровный. Поверхность бархатиста , плоска  Пигмент слабо-желтый. Конидии образуютс  .на 7-е сутки роста, темно-коричневые. Зона гидролиза крахмала есть. физиологические свойства. Потребл ет: крахмал, глюкозу, сахарозу, мальтозу. Ассимилирует нитраты. Отношение к кислороду: аэроб, мак симум роста 37-+0®С, на сусло агаре. Способ осуществл ют следующим об разом. Выращивание продуцентов на данной среде ведут, глубинным методом при аэрации среды и температуре 28-30 0 в течение двух суток. В качестве посевного материала примен ют выращенную на среде того же состава односуточную культуру, высе нную с сусло-агара, или же споровую суспензию, полученную смывом с косого сусло-агара. Односуточный посевной материал внос т в количестве 3-5% от объема среды, а споровую суспензию в количестве 1 мл в ферментационную среду того же состава . Культивиррвание ведут при умеренной аэрации и перемешивании среды при 28-30°С в течение 2 суток Фермент накапливаетс  в мицелии и в культуральной жидкости максимально к «8 ч. Аактивность фермента определ ют каротиноксидазным методом, Активность липоксигеназы в среднем составл ет 20000-55000 усл.ед, на 1 мл культуральной жидкости. Внеклеточный фермент выдел ют из культуральной жидкости ( после удалени  мицели  и неиспользованных остатков осевой муки / этиловым спиртом на холоду, в соотношении вода:спирт 1:5. Фермент действует в широком диапазоне рН среды - от до 8. Оптимум действи  при рН 6-7. П р и м е р 1. Дл  получени  липоксигеназы используют культуру плесневого гриба Asperg IIus oryzae 3-9-15 Продуцент липоксигеназы выращивают на питательной среде, содержащей 100 мл водопроводной воды, 10 г соевой муки 0,1 г NaNOj, 0,01 г MgS047H20, 0,1 г- KHgPO и 2,3 мл соевого масла. В качестве посевного материала используетс  односуточна  глубинна  культура, выращенна  при 28-30 0, Дл  инокул ции питательной среды используют 3-5 посевного материала. Продуцент липоксигеназы культив 1руют при 28-30с в течение 48 ч. Активность фермента к концу роста достигает 20000 усл.ед. на 1 мл культуральной жидкости, 1 р и м е р 2. Глубинную культуру Asperg illus awamory выращивают на питательной среде, состо щей из 12 г соевой муки, 0,2 г NaNOj, 0,01 г MgSO -7Н20, 0,015 г КН2Р04 и 5 мл соевого масла. Максимум активности фермента 50000 усл.ед. синтезируетс  к +8 ч роста, при 30-32 С и при аэрации питательной среды. П р и м е р 3. Использовани  липоксигеназы при приготовлении теста из пшеничной муки. Липоксигеназу выдел ют из культуры Aspergillus oryzae 3-9-15; в процессе замешивани  теста ввод т в количестве 130000 усл.ед. окислилитёльно-восстановительног .о фермента липоксигеназы. При этом продолжительность брожени  теста сокращаетс  на 30 мин, продолжительность расстойки - на 10 мин. Предложенный способ позвол ет увеличить объем хлеба до 15-20%, пористость до -5, Хлеб, приготовленный с применением фермента липоксигеназы микробного происхождени , 55по сравнению с контрольным хлебом без препарата отличаетс  более нежным и осветленным м кишем, свежесть егр сохран етс  более длительное вреJ8885 426

м , т.е. до ч (до 2 ч в кон-на замена менее активного и более дотроле ).рогого фермента растительного происхо

Таким образом, впервые в мире раз-дени . Ожидаемый экономический эфработан способ получени  высокоактив-факт от применени  иаобретени  сосной липоксигеназы микробного происхож-5тавл ет 180 руб. на 100 т перерабадени , в результате чего ,стала возмож-тываемоймуки.

Claims (2)

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРАТА ЛИПОКСИГЕНАЗЫ путем глубинного культивирования ее продуцентов - плесневых грибов из рода Aspergillus на питательной среде, ¹ Содержащей в качестве источника углерода соевую муку, минеральные соли азота, фосфора, калия и магния, с последующим выделением ферментно го препарата из культуральной жидкости, отличающийся тем, что, с целью повышения активности липоксигеназы, культивирование продуцентов осуществляют в присутствии индуктора липоксигеназы - соевого масла в количестве 2-5 мл на 100 мл культуральной жидкости.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что культивирование продуцентов липоксигеназы осуществляют на питательной среде, со-, держащей индуктор - соевое масло, соевую муку в качестве источника углерода и минеральные соли - азотнокислый натрий, сернокислый магний, однозамещенный фосфорнокислый калий, взятые соответственно в количествах, вес.%:

Соевое масло 1-5 Соевая мука 8-12 А зотнокислый натрий 0,05-0,3 Сернокислый магний 0 ,005-0,015 Однозамещенный фосфорнокислый калий 0,05-0,3 Бода Остальное 3. Способ по пп. 1 и 2, о т л и- чающийся тем, что из рода

Aspergillus используют штаммы Aspergillus oryzae 3“915 или Aspergillus awarory - 466.

SU „888542

1 8885^2