SU1641887A1

SU1641887A1 - Штамм гриба ASpeRGILLUS oRYZae (АнLвURG) сонN - продуцент ксиланазы

Info

Publication number: SU1641887A1
Application number: SU884610007A
Authority: SU
Inventors: Михаил Андреевич Щербаков; Галина Александровна Брунь; Лилия Николаевна Налепина
Original assignee: Институт Ботаники Им.Н.Г.Холодного
Priority date: 1988-09-02
Filing date: 1988-09-02
Publication date: 1991-04-15

Abstract

Изобретение относитс к биотехнологии и представл ет собой высокоактивный штамм гриба, синтезирующий ксиланазу. Цель изобретени - выделение более активного штамма гриба Aspergillus oryzae ВКМ Г-46Д - продуцента ксиланаз. Штамм выделен из проб, вз тых с поверхности гниющих пней осины. Штамм может быть использован как активный продуцент дл получени мультиэнзимного ферментного препарата и использовани его в животноводстве дл расщеплени поли- сахидов одревесневших (лигнннфици- рующих материалов, при производстве пива и различных соков из плодов и год, при экстракции из растительного сырь крахмала, белков, жиров,, эфирных масел и других веществ. Активность ксиланаэы в зависимости от источника углерода в культуральной жидкости после 3-4 суточного культивировани составл ет 350-490 или 690-730 ед/мп. 1 табл. а $

Description

Изобретение относитс к биотехнологии и касаетс высокоактивного .штамма гриба, способного синтезировать ксиланазу и амилазу дл его использовани в различных отрасл х народного хоз йства.

Целью изобретени вл етс выделение более активного штамма гриба Aspergillus oryzae (Ahlburg) Cohn BKM Р- 46Д, продуцента ксиланаз.

Штамм мезофильного гриба А.огу- zae - 46Д ввделен из проб, вз тых с поверхности гниющих пней осины и

характеризуетс следующими признаками .

Морфологические признаки. Колонии гриба на сусло-агаре в начале белые, затем постепенно станов тс бледно- зеленоватыми, с возрастом желтовато- бурыми. Обратна сторона не окрашена. Запах слабый, неопределенный. Колонии растут быстро, достигают диамет-1- ра 45-50 мм через 7 сут при 2Ј°С с вегетативным мицелием, большей частью погруженным и поверхностным воздушным.

00 00

Культуральные признаки. Оптимальной средой дл данного микроскопического гриба вл етс сусло-агарова г среда (7° по Баллингу). Через 5- 6 сут роста при 28° С на сусло-агаровой среде:

конидиальные головки диаметром 150-330 мк с кстадиальными цепочками , расход щимис и рыхло прилегающими ,

конидиеносцы берут начало большей частью от глубинного мицели , неокрашены , длиной 2-2,5 мм, постепенно увеличивающиес в диаметре снизу

вверх от 4-6 до 12-25 мк со стенками относительно тонкими, шероховатыми,

конечные вздути овально шаровидные , реже флажковидной формы, со стеригмами, покрывающими всю поверх- ность или верхние три четверти, часто тонкостенные, легко спадающие, диаметром 40-50 мк,

стеригмы обычно однородные 12- 15X 4-5 мк или двур дные, тогда пер- вый р д 10-12 X 4,5 мк, второй р д 8-10 хЗ-3,5 мк. Оба варианта встречаютс у одного штамма и даже в одной головке,

конидии большей частью шаровидные гладкие, 4-7 мк в диаметре.

Очень молодые конидии грушевидные и эллипсоидные. Старые конидии обычно зеленовато-коричневых тонов:

на мальц-агаре колонии растут более быстро, чем на среде Чапека- Докса, более рыхлые, с поверхностным мицелием, спороношение обильное, в молодой культуре преобладают желтые оттенки с возрастом желтовато-бурые. Обратна сторона колонии слабо окрашена в желтовато-коричневый тон, . 1 на картофельно-глюкозной и карто- фельно-морковной агаризованной среде колонии растут быстрее, чем на среде Чапека-Докса, но менее плотные, паутинистые, почти прозрачные слабо- спорулирующие, бледно окрашенные.

Свет не имеет особого значени . Развитие идет одинаково как в тем- ноте, так и на рассе ном свету. Температура дл развити на плотной питательной среде,°С: оптимальна 30- 35, максимальна 40, минимальна 10.

Физиолого-биохимические признаки. Преимущес/гпенно аэроб, мезофил. Оптимальна температура роста на агази рованной среде 30-35°С. Оптимум

Q

5

Q

5

-5

0

5

0

рН 4,5-5,0. Желатину разжижает при обильном росте мицели со .спорообразованием . Молоко сварачивает и пепто- низирует.

Усвоение источников углерода. Использует арабинозу, глюкозу, мано- зу, фруктозу, мальтозу, глицерин. Слабо развиваетс на лактозе и рамно- зе. Не использует маннит, сорбит, инозит, рафинозу, инсулин, дульцит.

Образование органических кислот. При выращивании гриба на средах, в состав которых входит салицин, араби- ноза, глицерин, глюкоза и фруктоза, образуютс органические кислоты.

Пример 1. Дл вы влени активной ксиланазы А.огуаде -46Д культуру выращивают в колбах Эрленмейера (250-750 мл) на следующей питательной среде, мас.%: NaNOj 0,3, KHZP04 0,2, MgS04 0,05, кукурузный экстракт 1,5, кукурузные кочерыжки 2, водопроводна вода до 1 л. Начальное рН среды 4,5-5,0. Оптимальна температура роста при глубинном культивировании на качалке (200- 220 об/мин) 28-30°С.

Инокул цию провод т 3-суточной культурой конидий гриба, предварительно выращенного на сусло-агаре, и культивируют в глубинных услови х 2 сут. Полученную культуру используют как расплодку дл массового засева из расчета 5% посевного материала на объем среды.

Продолжительность культивировани представлена в таблице и зависит от примен емого источника углерода (2-4 сут).

Лучшим источником углерода дл биосинтеза ксиланазы вл ютс пшеничные отруби. Активность ксиланазы в фильтрате культуральной жидкости на данном субстрате равна 350-490 ед/мл после 3-4 сут выращивани . При-фрак- ционировании культурального фильтрата этанолом активность препарата по ксиланазе составл ет 60-70 тыс. ед/г, а по амилазе - 900 ед/г. Оптимальна температура гидролиза фермента с субстратом при определении активности 45°С. Оптимальное рН фильтрата культуральной жидкости при осаждении этанолом 4-5, а его концентраци (оптимальна ) 65-70%.

Пример 2. Выращивание A. oryzae (Ahlburg.) Cohn-46 проведено на известной питательной среде

следующего состава, мас.%: NaN030,3, КН4Р04 0,2, MgS04 7Hj,0 0,5, солодовые ростки 1,5, вода до 100 мл.

Услови культивировани те же, что описаны в примере 1. Активность ксиланазы определ ли по той же методике и в тех же услови х как у известного штамма. При этом ксиланаз- на активность фильтрата культуральной жидкости на 72 ч культивировани составила 690 ед/мл, а на 96 ч - 730 ед/мл.

10

Claims

Формула изобретени

Штамм гриба Aspergillus oryzae Р-46Д - продуцент ксиланазы.

Продолжительность культивировани ,ч

Активность культурального фильтрата ксилианазы гриба А.огугае-4бД на различных источниках углерода (2%), ед. мл

Пшенич ные отруби

Кукурузна кочерыжка

Подсолнечна лузга

Древесные опилки

Пшенична солома

Виноградные выжимки

Фильтровальна бумага

250 340 350 490

134 171 230 233

Пшенична солома

Виноградные выжимки

Фильтровальна бумага

76

80

137

115

О 54 55 60

О

46

55 51

О 18 23 26