SU753346A3 - Способ получени суспензии клеток - Google Patents

Description

осущестл ют суспензией с использованием Од5%-ной уксусной кислоты - солевой раствор . При этом улучшаетс  соотношение сигналов тромбоцито|В « шумам, четкое разделение , тромбоцитов и похожих красных клеток и лейкоцитов и хо,рошо -сохран ютс  исходные индивидуальные объемы тромбоцитов . Можно , а в некоторых случа х П1редпочтительно, частично разбавить образец, добавл   изотонический солевой 1раство,р перед стадией обработки детергентом .

Дл  определени  белых кров ных клеток образец разбавл ют путем добавлени  изотопического солевого раствора, цредлочтительню после стадии имкубадии. Образец может быть разбавлен и перед стадией обработки детергентом. Разбавленна  суснензи  белых кров ных 1клеток сохран ет морфологию белых клеток, позвол   разделить неокрашенные белые клетки с помощью светорассе ни  под малыми и большими углами, и дает возможность дифференцировать лимфоциты, моноциты, нейтрофилы и эозинофилы без окрашивани .

Пример 1. К антикоа1гулированному цельному образцу крови (0,1 мл) прибавл ют 0,32 л{л 1%-ного раствора полиоксиэтилен 20 сорбитан монолаурата (в изотогшческом Солевом растворе), полученную смесь оставл ют дл  инкуба/ции при комнатной температуре в течение 1 мин.

К смеси при перемешивании прибавл ют сбуферированный фосфатом раствор формальдегида (0,42 мл), содержащий 8 об. % фор.м альдегид а, и инкубируют полученную смесь 2 мин при 57° С. Определение белых кров ных «леток осуществл ют путем добавлени  к инкубированной смеси 1,2 мл изотонического солевого раствора, и с помощью светорассе ни  п|роБОд т .подсчет белых .кров ных клеток.

Дл  определени  тромбоцитов к инкуби;роваиной выше смеси прибавл ют 1,2 мл изотонического солевого раствора. Прибавл ют 0,1 мл полученной смеси к 4,0 мл 0,5%-ного раство.ра уксусной кислоты - изотонического солевого раствора. С помощью светорассе ни  провод т подсчет тромбоцитов и И31мерение их размеров.

Пример 2. Разбавл ют 0,0. мл антиКоагулирова-нной капилл рной цельной крови в соотношении l:lb изотоническим солевым раствором, и 0,1 жл полученной смеси прибавл ют к 0,32 Л1уг 0,125%-ного раствора полиоксиэтилен 20 сорб тан монолаурата (в изотоническом солевом растворе). Смесь инкубируют 1 мин при комнатной температуре, к ней при перемешивании прибавл ют 0,42 мл сбуферированного фосфатом раствора формальдегида, со.держащего 8 об. % формальдегида, и инкубируют при 57° С в течение 2 мин.

Диффе;ренцированный подсчет белых кров ных клеток в приведенной выше суспензии осуществл ют с помощью cBCTOipассе ни .

Оп,ределение трО|М1боц.итов осуществл ют прибавлением к инкуби рованной выше смеси 1,2 мл изотонического солевого раствора , 0,1 мл полученной смеси прибавл ют к 1,0 мл 0,5%-ного раствора уксусной кислоты - изотонический солевой раствор. С помощью светорассе ни  провод т подсчет тромбоцитов и измерение их раз.меров.

Предлагаемый способ позвол ет дифференцировать тромбоциты от лейкоцитов и эритроцитов.

Ф о .р м у л а изобретени 

Способ получени  суспензии .клеток путем обработки юрови формальдегидом, добавлени  гемолизируюшего агента, отличающийс  тем, что, С целью обеспечени  возможн01сти дифференциации тромбоцитов от лейкоцитов и эритроцитов, перед введением формальдегида кровь обрабатывают детергентом, таким как полиоксиэтилеи 20 сорбитаи монолаурат концентрации от 0,3 до 2,0% по отношению к смеси, при рН от 6 до 8 с последующим инкубированием смеси при температуре от 56° С до 62° С в течение 2 лы .

Источник информации,

прин тый во внимание цри экспертизе:

1. Патент США № 3741875,

кл. С 12 Р 1/04, опубл. 1973.

Claims (1)

1. Формула изобретения

   Способ получения суспензии клеток пу35 тем обработки крови формальдегидом, добавления гемолизирующего агента, отличающийся тем, что, с целью обеспечения возможности дифференциации тромбоцитов от лейкоцитов и эритроцитов, перед введе40 нием формальдегида кровь обрабатывают детергентом, таким как полиоксиэтилен 20 сорбитам монолаурат концентрации от 0,3 до 2,0% по отношению к смеси, при pH от 6 до 8 с последующим инкубированием 45 смеси при температуре от 55° С до 62° С в течение 2 мин.

   Источник информации, принятый во внимание при экспертизе:

   50 1. Патент США № 3741875, кл. С 12 Р

   1/04, опубл. 1973.