SU641874A3 - Способ получени -лизина - Google Patents

Способ получени -лизина

Info

Publication number
SU641874A3
SU641874A3 SU762410957A SU2410957A SU641874A3 SU 641874 A3 SU641874 A3 SU 641874A3 SU 762410957 A SU762410957 A SU 762410957A SU 2410957 A SU2410957 A SU 2410957A SU 641874 A3 SU641874 A3 SU 641874A3
Authority
SU
USSR - Soviet Union
Prior art keywords
carbon
minutes
nutrient medium
carbon source
cultivation
Prior art date
Application number
SU762410957A
Other languages
English (en)
Inventor
Танака Тутому
Накамура Есио
Асахи Кодзи
Сираиси Тадаеси
Такахара Кендзи
Original Assignee
Канигафучи Кагаку Когио Кабусики Кайся (Фирма)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from JP12578975A external-priority patent/JPS5251091A/ja
Application filed by Канигафучи Кагаку Когио Кабусики Кайся (Фирма) filed Critical Канигафучи Кагаку Когио Кабусики Кайся (Фирма)
Application granted granted Critical
Publication of SU641874A3 publication Critical patent/SU641874A3/ru

Links

Landscapes

  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

1
Изобретение относитс  к технике получени  U -лизина путем культивировани  бактерий вида NocaP ia на питательной среде.
Известен способ получени  L -лизина культивировани  продуцирующих его микроорганизмов рода в услови х аэрации на питательной среде содержащей источник углерода, азота и необходимые питательные соли с поспёдующим выделением Ь -лизина ij.
Недостатком известного способа  вл етс  то, что он не обеспечивает достаточно высокого выхода L-лизина.
Целью изобретени   вл етс  повышени выхода L -лизина.
Это достигаетс  тем, что в предлагаемом способе получени  L,- лизина из рода Nocardia используют штаммы
Mocardia a 1 anoQfeutinousa №22359 (АТСС 31220) и (АТСС 31221), устойчивые к S -(2-аминоэтил ) L - иле тин у.
При этом в качестве источника угле-рода используют животное масло или жир или растительное масло.
Кроме того, в качестве источника углерода используют жирную кислоту.
Кроме того, в качестве источника yi лерода используют этиловый спирт.
Кроме того, в качес-те источника углерода используют глюкозу или фруктозу, или крахмал, или продукт гидролиза мелассы или крахмала.
Кроме того, в качестве источника углерода используют уксусную кислоту или лимонную кислоту.
А также, кроме того, в качестве источника углерода используют П -алкан,. содержащий от 14 до 19 атомов углерода или керосин, или сырую нефть, содержащую П -алкан.
При этом рН питательной среды после культивировани  микроорганизмов довод т до 1-3 и выдержаивают в течение 5-12О мин при 8О-1ОО°С. Кроме того, рН питательной среды после процесса культивировани  микроор. г-анизмов довод т до 7-9 и выдерживают от 5 минут до 5 суток при 8О- 100°С. Способ осуществл ют следующим образом . Продуцирующие L -лизин микроорганизмы из рода iocoiгdidкyльтивиpyют в услови х аэрации на питательной ереде , содержащей источник углерода, азота и необходимые питательные соли. Из рода Nocardio используют щтаммы Nocardios a 1 anog&utihousa № 223-59 (АТСС 31220) и № 22315 (АТСС 31221), устойчивые к S- 2-аминоэтил ) Ь-цистину (ЛЕС). Микробиологические свойства указанных штаммов аналогичны микробиологическим свойствам исходного штамма № 223, за исключением того, что первые два штамма обладшот стойкостью к ЛЕС, а последний нуждаетс  в помосе рине. Морфологи , Форма, Ранн   стади  выращивани : 0,8-1,0x4-15, пр мые или изогнутые палочки, о№1ечаетс  наличие ответвлений; стабильна  стади ; сферическа  или короачса  палочкообраз на , близка  к форме сферы, Грам-травление положительное, быстрое кислотное травление отрицательное, подвижность отсутствует. Эндогенные споры отсутствуют; клетки на стойкой стадии выращивани  выде живают при 80 С одночасового нагрева в физиологическом растворе. Услови  выращивани -. Колони  выращена на агаровой пластинке в течение 3 суток при 33 С, фор ма округла , рост хороший, окраска бледно-ро.зовак, колони  непрозрачна , влажна , гладка . Культивирование на скошенном агаре в течение 3 суток при 33 С, колони  нитевид1-1а , рост хороший, окраска бледно-розова , колони  влажна , гладка , наличи  воздушного мицели  не отмечае с . Культивирование на питательном буль не.при 33 С. На поверхности образуеахз тонка  пленка, отмечаютс  осадки. Питательна  желатина не ожидаетс , выращивание на поверхности и в верхней части, Локмусовое молоко: щелочна  реакци  без коагул ции или пептазашп. Филиологические свойства. Крахмал не гидрализует, восстанавливает нитраты , индол образует, сероводород образует , уреазу не образует, проба V-P-отрицательна , испытание метилкрасным отрицательно , реакци  на каталазу положительна , целлюлозу не разлагает, потребность в питательной среде отсутствует, разложение дезоксирибонуклеиновой,кислоты (ДА) отсутствует, чувствительность к лизошшу имеетс , эскулин разлагает, к пенициллину (5 единиц/мл. метод диска) не чувствителен. Ассимилирует в качестве источника углерода фруктозу, глюкозу, маннитол, сорбитол, фенол, молочную кислоту, уксусную кислоту, лимонную кислоту, ацетамид , тирозин, этанол, маннозу, fi-алканы,: текстрин, масла и жиры, жирные кислоты. Образование кислот из Сахаров: кислоты образуют из глюкозы, фруктозы, сорбитола маннитола, глицерина и трехалозы, отсутствует образование кислот из ксилозы, галактозы, сахарозы, лактозы, мальтозы, инозитода, декстрина и крахмала. Оттимальна  температура выращивани  от ЗО до 37 С, рост наблюдаетс  в диапазоне 10-4О С, рН роста 8-9, аэробен относительно кислОрода. Состав клеток. Содер шт 1 11-диаменопималовую кислоту, галактозу, и арабинозу . В питательной среде в качестве источника углерода при выращивании- используют животное масло или жир, растительное масло, жирные кислоты, этиловый спирт, глюкозу,фруктозу или крахмал, или продукт гидролиза мелассы-или крахмала , уксусную или лимонную кислоту, Vi-алканы, содержащие 10-30 атомов углерода, а также углеводороды, такие как керосин -и неочищенна  нефть, В качестве источников азота используют . ацетат аммони , сульфат аммони , х/1бристый аммоний, нитрат аммони , водный раствор аммиака, аминокислоты, смесь аминокислот, экстракт дроио сей, пептон иэкстракт м са. При нeoбxoдимov сти ввод т также соли неорганических кислот, такие как фосфаты, соли кальци , магни , кали , натри , железа, марга иа , цинка и следы металлов. Эти компоненты питательной среды ввод т до стерилизации или отдельными порШ5ЯМ11 в :процессе ферментации. Выращивание осуществл ют со встр хиванием или при аэрации и перемещива-НИИ при рН 6-9, предпочтительно 6-8, температуре от 20 до 4О , предпочтительно от 27 до З7с, Питательный бульон после окончани  процесса культивировани  приобретает значительную в зкость, что преп тствует его фильтрации, вследствие чего в него добавл ют неорганическую кислоту с доведением рН до 1-3 или щелочь с доведением рН до 9 и более, после чего бульон подвергают нагреву при 80 С и выше в течение 5 мин. L,-лизин вьщелшот из фильтрата, например путем адсорбции ионообменной смолой IR -120 или IR-84, промывают водой и элюируют аммиачным раст вором. Эпюат сгущают, нейтрализуют концентрированной сол ной кислотой и высушивают, получа  высокочистый гидрохлорид L-лизина. Количество полученного L-линиза оценивают биопробой с использованием мутантного штамма EsctiericllJCfCOti и с помощью аминокислотного анализато П р и м е р 1 о Выращенные по полной петле в бульоне на скошенном агаре клетки бактерий NocotrdlO aetono eut nousa № 223-59 (АТСС 3122О),. а также № 223-15 (АТСС 31221) выдерживают в чв.чение суток при 33 С в пробирке, содержащей 10 мл питательной среды следующего , г: П-алканы ( )- 50,0; сульфат аммони  - 4О,О; Са СО - ЗО,0; KgHPO 0,5; КН PC -0,5; .: NaC -1,О; Fe504-7H2«- -Ю мг; ЛЛп5Од4Н2О - 10 мг; вода водопроводна  - 940 мл, рН - 7,0, температура 120 С (парообразование в течение 15 мин). Культивирование провод т в течение одних суток при 33 С со встр хиванием 1 мл полученного бульона высевают в 500-миллиметровую колбу Сакагучи, содержащую ЗО мл той же питательной среды, и выдерживают 5 суток при 33 С со встр хиванием. При этом получают L-лизин (гидрохлорид ), г/л: Nocardia aC-kano Eutinousa № 223-59 (АТСС 31220)-19,5; Nocundia atkanoge.utinousa № 223-15. (АТСС- 31221)-2б,7П р и м е р2. Выращенные в бульоне на скошенном а га ре бактерии Nocar3ia а 1 аWg-euUnosa №223-59 (ЛТСС 3122О) и выдержанные b течение одних суток при 33 С петлей ввод т в 500-миллиметровую колбу Сакагучи, содержащую 50 мл питательной среды такого же состава , как описано в примере 1, за тем исключением, что вместо Ц-алкана используют кукурузное масло или рыбий жир. Культивирование провод т со встр хиванием . В результате п тисуточного выращивани  получают 5,8 г/л L-лизина (в виде гидрохлорида) в случае введени  в питательную среду кукурузного масла или 6,3 г/л в случае введени  в нее рыбьего жира. П р и м е р 3. Выращенные в бульоне на скошенном агаре в течение одних суток при 33 С бактерии NocotPdia oCtonogCuiinousa № 223-15( АТСС 31221) внос т петлей в 5ООмииллиметровую колбу Сакагучи, содержащую ЗО мл питательной среды такого же состава , как описано в примере 1, за тем исключением, что вместо П-алканов используют стеариновую или маргариновую кислоту. Выращивание провод т в течение 5 суток при 33 С со встр хиванием. Количество накопленного в виде гидрохлоридов Ь-лизина составл ет 15,3 г/л при введении в питательную среду стеариновой кислоты и 14,4 г/л - при введении в питательную среду маргариновой кислоты, П р и м е р 4. Выращенные на скощенном агаре бактерии Nocothclja aClcanogreutinou&a .. № 223-59 (АТСС 3122О) внос тпетпейв 5ОО-МИЛпиметровуюкопбуСакагучи , содержащую ЗО мл питательной среды, имеющей такой же состав, как в примере 1, за тем исключением, что вместо -И-алканов используют этиловый спирт, вводимый порци ми, не превышающими 1%. Выращивание осуществл ют со встр хиванием. В результате п тисуточного выращивани  получают 13 г/л t-лизина (в виде гидрохлоридов). П р и м е р 5. Выращенные в бульоне на скошенном агаре в течение одних суток при 33°С бактерии NOCOrdia CiClcanogeutinousaX )223-15 (АТСС 31221) петлей внос т в 500-миллиметровую колбу Сакагучи, содержащую ЗО мл питательной среды, как в примере 1, где выращивают при 33 С в теченйе;0 них суток со встр5гхиванием.
5 мл полученного бульона ввод т в 2- питровую колбу Сакагучи, содержацую 2ОО МП такой же питательной среоы , как в примере 1. Выращивание осуиествлают Д в течение одних суток при 33 С со встр хиванием. 600 мл полученного бульона перенос т в-30 - питро рый сосуд, содержащий 10 мл производ щей L-лизин среды указанного ниже состава. Культивирование провод т при 33 С с перемешиванием при 400 об/мин и с пропуском 9 л воэдуха в минуту, В процессе культивировани  среду нейт рализ5 ют водным раствором аммиака до рН 7,0. Спуст  96 часов культивировани  получаю 52,5 г/л L-лизина ( в виде гидрохлоридов). К 1 п полученного бульона добавл ют концентрированную серную кислоту, до достижени  рН 1.5. Затем осуществл ют нагрев при 100 С в течение 20 мин и фильтрацию. Фильтрат пропускают через 1шнообменн5Г о смолу типа . IR-120, NH , адсорбирующую Ij-лизин. Затем промывают водой и эшоируют аммиаком, Элюирован . ные фракции подвергают сгущению, иейт рализации ,концентрированной сол ной кис лотой и сушке. Получают 45 г гидррхлорида L-лизина со степенью чистоты выше 98%.
L ЛИЗИН среды
Состав производ щий
)
И алкан (С - С
100 г„
19
Сульфат аммони 
35,0 г 1,0 г
СаСе,
Масе 1,0 г 1,0 г к 2 HP о. 1,0 г
KHg Р04 0,5 г Mg ЗОд
71-1 О
1ОО мг 711 2 О ре 50
Ми SO,. 20 мг ZnSO.-ТНоО 20 мг
870 мл
Вода из водопровода 7,0
Р
Температура 120 С (парообразование в течение 15 мин)
Примере. К 1 л пол.3ч:еиного в примере 5 питательного раствора добавл ют необходимое дл  доведени  рН до 11 количество гидроокиси калыш . Раствор нагревают 30 мин при 100 С, а затем в течение двух часов через него пропускают воздух. рН раствора довод т добавкой концентрированной серной кислоты до 5,0. Затем раствор фильтруют. Фильтрат пропускают чере. ионообменнук смолу типа 1R 120, NH, котора  адсорбирует «чпизин. Далее промьтают водой и элюируют аммиаком.
Элюированные фракции подвергают сгущению , нейтрализуют концентрированной сол ной кислотой и сушат. Получают46г
L-лизина (в виде гидрохлррида) с чистотой , превыщающей 98%.
Пример7, Выращенные в течение одних суток при 33 С в бульоне на скошенном агаре бактерии atkano Eutinouscs N9 223.15 (АТСС 31221) петлей высевают в 500--миллиметровую колбу Сакагучи, содержащую 30 мл питательной среды, аналогичной по составу среде, упом н, той в примере 1, за тем исключением, что вместо п-алкана используют глюкозу. Культивирование ведут в течение четырех суток при 33 С.,
Количество накопленного в среде U -лизина составл ет 0,5 г/л ( в виде гидрохлорида).
П р и м е р 8. Выращенные па скошенном агаре бактерии NoccStUics qe,1ca (logtut-inoubo , .№223-15 (АТСС 31221), культивирование велось в течение 1 суток при температуре 33 С петлей ввод т в 500-миллиметровую колбу Сакагучи, содержащую 30 мл среды, аналогичной по составу среде, использованной в примере 1, за-тем исключением что вместо И-алкана ввод т уксусную кислоту порци ми, не превышающими О, §% Далее выращивают в течение четыреху, и уток при 33 С, со встр хиванием. Количество полученного в виде гидрохлоида
L -лизина составл ет 22 г/л,
П р и м е р 9. Штамм. Nocardia с kanog-eutinousa № 223-59 (АТСС 31270), продуцирующий Ц-лизшг выращивают в питательной среде, содержащей Н-парафин, включающий 14-19 атомов углерода, в качестве основного источника углерода. Питательный жидкий бульон раздел ют на порции по 20 мл кажда . Величину рН разделенного питательного бульона регулируют, довод  до 1,5; 2,0; и 3,0, и

Claims (9)

  1. осуществл ют на80°С грев при 8О С 5 мин, при 10 мин, при 10О С - 2 часа. Фильтрацию осуществл ют с использованием стекл нного фильтра ЗО-2 испи.ратора, результаты представлены в таблице. 9 Продолжение табли Формула изобретен и 1.Способ получени  L-лиаина путем культивировани  продуцирующих его мик роорганизмов рода Nocardia в услови х аэрации на питательной среде, с держащей источник углерода, азота и необходимые питательные соли с последующим выделением L-лизина, отличающийс  тем, что, с целью повышени  выхода, из рода NO используют штаммы Nocardia abkano e.uti поиьа № 223-59 ( АТСС 31220) и №223-15 (АТСС 31221), устойчивые к S -(2-аминоэтил ) U -цистину., .
  2. 2.Способ по п. 1, о т л и ч а ю щ и и с   тем, что в качестве источни углерода используют животное масло ил жир, или рж;тительное масло. 4
  3. 3.Способ по п. 1, отличающийс  тем, что в качестве источника углерода используют жирную кислоту .
  4. 4.Способ по п. 1, о т л и ч а ющ и и с   тем, что в качестве источника углерода используют этиловый спирт.
  5. 5.Способ по п. 1, о т л и ч а ющ и и с   тем, что в качестве источника углерода используют глюкозу или фруктозу, или крахмал, или продукт гидролиза мелассы или крахмала.
  6. 6.Способ по п. 1, отлича ю- щ и и с   тем, что в качестве источника углерода используют уксусную кислоту или лимонную кислоту.
  7. 7.Способ йо п. 1, отличающий с   тем, что в качестве источника углерода используют Ц-алкан, содержащий от 14 до 19 атомов углерода или керосин, или сырую нефть, содержащую п -алкай.
  8. 8.Способ поп. 1,отличающ и и с   тем, что рН питательной среды после культивировани  микроорга-i низмов довод т до 1-3 и выдерживают в течение 5-120 мин при 80-1ОО С. 9.Способ по п. 1, отличающ и и с   тем, что рН питательной среды после процесса культивировани  микроорганизмов довод т до 7-9 и выдерживают от 5 минут до 5 суток при 80-120 С. Приоритет по пунктам 17а0.75 по п. 1; 22.10.75 по пп.2-
  9. 9. Источники информации, прин 1ые во внимание при экспертизе: 1. Акц. за вка Японии № 47-43О73, кл. С 12 Б 13/О6, 1972.
SU762410957A 1975-10-17 1976-10-15 Способ получени -лизина SU641874A3 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP12578975A JPS5251091A (en) 1975-10-17 1975-10-17 Method of producing l-lysine by fermentation
JP12781775 1975-10-22

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SU641874A3 true SU641874A3 (ru) 1979-01-05

Family

ID=26462113

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SU762410957A SU641874A3 (ru) 1975-10-17 1976-10-15 Способ получени -лизина

Country Status (2)

Country Link
IT (1) IT1076495B (ru)
SU (1) SU641874A3 (ru)

Also Published As

Publication number Publication date
IT1076495B (it) 1985-04-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4226941A (en) Process for the optical resolution of d,l-2-amino-4-methylphosphinobutyric acid
US5098835A (en) Process for producing l-threonine by fermentation
SU641874A3 (ru) Способ получени -лизина
US2978384A (en) Method for the production of 1-glutamic acid
JPH01187090A (ja) ε−ポリリシンの製造方法およびε−ポリリシン生産菌
US3957579A (en) Method for preparing d-tartaric acid
US3173848A (en) Production of 5-amino-4-imidazole-carboxamide riboside and related compounds
KR900005771B1 (ko) L-글루탐산의 제조방법
US3592846A (en) Hydroxy-phenyl-alpha-ketobutyric acids
JPS5829078B2 (ja) 補酵素q↓1↓0の製造法
US4123329A (en) Process for producing L-lysine by fermentation
US2947666A (en) Amino acids and process
JP3006907B2 (ja) 発酵法によるl−アラニンの製造法
JPH0355116B2 (ru)
JPH0158957B2 (ru)
JPS5926276B2 (ja) D−リボ−スの製造法
JPS5928493A (ja) アスパルチルフエニルアラニンアルキルエステルの製造法
JPH027635B2 (ru)
SU939550A1 (ru) Способ получени глутаминовой кислоты
JPS5857155B2 (ja) 発酵法によるコエンチ−ムq↓1↓0の製造法
SU575037A3 (ru) Способ получени зеаксантина
JPS63141594A (ja) ヒアルロン酸の製造方法
JPS6316119B2 (ru)
JPH0525476B2 (ru)
JPS6156088A (ja) L−フエニルアラニンの製造法