SU618053A3 - Способ получени антибактериального вещества - Google Patents

Description

Изобретение относитс  к способу получени  антибактериального вещества, образующегос  при выращивании культуры микроорганизма Vocar dl а 5р. № 5646.

Известны способы получени  антйбакте риальных веществ путем выращивани  продуцентов из различных культур микроорганизмов в питательной среде, содержащей ассимилируемые источники углерода, азота и неорганические соли, с последующим выделением целевого продукта общеизвестными приемами ll.

Целью изобретени   вл етс  получение нового эффективного антибактериального вещества, расшир ющего арсенал извест ных антибактериальных средств.

Поставленна  цель достигаетс  тем, что культуру микроорганизмаNoCQfd(О Sp. U № 5646 выращивают в водной питательной среде, содержащей ассимилируемые источники углерода, азота и неорганические соли, в аэробных услови х в течение 45-240 ч с последующим выделением целевого продукта с помощью

ионообменной колонки в виде смеси или отдельных фракций.

Целевой продукт выдел ют в виде альфа-, бета- или гамма- активных фракций .

Новые антибактериальные срюдства обозначены: ВМ 123об, ВМ 123у5 и ВМ 123, Штамм-продуцент нового антибиотика выделен из образца почвы в Оцеола (Айова) и хранитс  в коллекции культур Американ цианамид компан , Пирл Ривер, Нью-Йорк, под номером ВМ123. Жизнеспособна  культура нового микроорганизма хранитс  в CuEtute CoBEection Laboroilorv,NoflVtetn UiiSizaiiort Research attd DeveEopineHt Б visiorts ,United States De jariawent Q Agt.cu2iure,peoriq, :)EEitto/s, под номером 5646,

Культуральные признаки штамма приведены в табл. 1.

Физиологические признаки штамма приведены в табл. 2.

Данные об утилизации штаммом источников углерода приведены в табл.3.

Таблица

Продолжение табл. 1

Следы

Умеренный

Примечание: 1. Инкубаци  14 дней, 32 С

2, Рас-творимые пигменты не образует.

Желатина

14

Бульон с органическим нитратом7

14

Пептоновый агар

24-28(ч)

с железом

Пурпурное молоко7

Дрожжевой экстракт , агар + хлористый натрий (4,7.10 и 13%ный )

От бесцветного до желтоватого

Т а б л и ц а 2

Незначи- Не разжижает тельный

ХорошийТо же

В осе танавливае т нитраты в нитриты .

То же

М еланиновый

Хороший пигмент не образуетс 

Отсутствие пептонизации или створаживани 

Переносимость к хлористому Р1атрию 4%, но -i 7%

618О53

3 - хорошее использование, 2 - удовлетворительное, 1 - слабое, О - не используетс .

Химический состав. Микроорганизм относитс  к клеточной оболочке типа IY т.е. содержит меао-2,6-диаминовимелиновую кислоту и по относитс  к Типу А, т.е. содержит арабиноэу и галактозу . Метвлировавный экстракт клеток обнаруживает при газовой хроматографии картину жирных кислот, аналогичную

продуцируемой Wocahdiа ofsieTOitJes

AVtC № 3308.

Микроморфологи . Воздушный мицелий вырастает из мвиепиального субстрата в виде слаборазветвленных умеренно ддннвыхнзвилисплх элементов, обычно заканчивающихс  удлиненными примитив8 ТаблицаЗ

ными спирал ми. Извилистые элементы неравномерно сегментированы на короткие эллиптические - цилиндрические секции , легко расчлен ющиес . Спиральные конечные части сегмеитарованы менее заметно . Размер сегме тш обьино в интервале 0,8-1,7 X О,3-0,5 ммк, в среднем 0,4 ммк х 1,2 ммК.

Эксперименты с предварительным выделением тонкослойной и бумажной хроматографией показали что в процессе аэробной ферментации Нос CS(«cJi а Bp. № 5646 продуцируютс  по крайней мере три антибиотикаг БМ123 ct , ВМ123 А л ВМ123 у . Изучение питательных сред вы вило наличие двух типов питательных смесей: типа гамма, продуцирую щей, в основном, ВМ123 у с небольшими количествами ВМ123Й и ВМ123 Ol и типа альфа, продуцирующей в основном ВМ123 oi , Процесс ферментации идет главным образом, в нецфавлении избирательного продуцировани  ВМ123 альфа. ВыращиваниеMocardia Sp. 564 можно проводить в различных жидких культуральных средах. Среда, пригодна  дл  продуцировани  новых антибиогаков, включает; ассимилируемые источники углерода, такие как крахмал, сахар, меласса , глицерин и т,п; ассимилируемые источники азота, такие как протеин, гидролизаты протеина, полипептиды, аминокислоты , замочна  жидкость ржи (кукурузы ) и т.п.; и неорганические анионы и катионы, такие как калий, натрий, кал ций, сульфаты, фосфаты, хлориды и т.п. Микроэлементы-бор, молибден, медь и т, п. внос тс  в виде следов или примесей других компонентов смеси. Процесс ведут при аэрировании (в танках и баллонах) стерильным воздухом через массу или на поверхности ферментативно среды. Необходимо также механическое перемешивание в танках. При надобности можно внести противовспенивающее средство , например л рд. Дл  получени  ВМ123 od инокулум Uo Sp.MRRbW 5646 дл  колб-ка-. чалок получают инокул цией 100 мл стерильной жидкой среды следующего состава, г: М сной экстракт3 Бактотриптон5 Дрожжевой экстракт5 Крахмал.24 Декстроза1 Водадо 100О(м рН среды довод т едким натром до 7,0 Колбы или матрацы (емкостью 5ОО м инкубируют при 25- предпочтитель но , и энергично перемешивают на ротационной качалке 30-48 ч. Отбирают порции по 100 мл прививочного материа ла и инокулируют 1 л и 12 л той же ср в 2-х и 20-литровых стекл нных ферментерах . Инокулированную смесь аэрируют стерильным воздухом в процессе роста в течение 4О-55 ч. Эти партии инокулума используют дл  и)1окул ции танков-ферментеров. Дл  продуцировани  ВМ123 л в танке-ферментере используют среду следующего состава, г: Бактопептон1О,О Декстроза10,0 Меласса2 О, О Железо-аммоний лимонно-кислый0 ,1 Карбонат кальци 1 О ВодаДо 100О(мл) Танк инокулируют 3-10% вышеполученного инокулума. Аэрацию провод т из расчета 0,2-0,8 л стерильного воздуха на 1 л бульона в минуту, и ферментационную смесь перемешивают мешалкой при 50-200 об/мин. Температуру поддерживают 25-29 С,. предпочтительно 28°С. Ферментаци  длитс  180-24О ч. По окончании ферментации отфильтровывают ферментационную массу, содержащую BM123oi , предпочтительно при помощи диатомовой земли или других обычных фильтровальных вспомогательных средств. Обычно мицелиальный пирог промьшают водой и объедин ют фильтрат с промывной жидкостью. Объем фильтрата составл ет с среднем 30 л. Довод т рН до 6,5, добавл ют фтористый натрий, и смесь перемешивают около часа. Образовавшуюс  суспензию фильтруют , например через диатомовую землю. Фильтрат перколируют через колонку с - 5О (No) (50-100 меш) со слабокислой смолой (выпускаемой фирмой Ром и Хаас, Филадельфи , Пенсильвани ) с объемом сло  в 1 л. Колонку со смолой промывают 4 л воды.ВМ123 ой элюируют, пропуска  через 1 олонку О,3н. серную кислоту. Элюат собирают во фракции обшим объемом 5ОО мл. Фракции 1-7, содержащие действующее начало ВМ123л объедин ют и довод т едким барием до рН 7,2. Образовавшийс  сульфат бари  отфильтровывают, получают прозрачный фильтрат. Этот фильтрат пропускают через колонку с - 50 (Н ) с объемом сло  в 65О мл. Колонку промьшают водой и элюируют по вышеописанному методу 0,3 н. серной кислотой. Активные фракции (1-7) также довод т - при помощи едкого бари  - до рН 7,0 и от фильтровьшшот получают прозрачный фильтрат. Этот раствор упаривают под Вакуумом дл  последующей хроматографии на угле. Гранулированный Дарко С-60 (2О-40 меш) суспендируют в воде , перенос т в стекл нную колонку и отстаивают, сливают избыток воды и концентрат ВМ123а; медленно пропускают в колонку. Загруженную колонку промывают водой и про вл ют 5О%-ным водным метанолом, собира  фракции по 5О мл. Объедин ют активные фракции 116 ( 18-68), (водный слой) упаривают под вакуумом, лиофилизируют, получают белый твердый остаток . Дополнительное количество ВМ123 х можно извлечь дальнейшим про$тлением 1 блонки с углем 50%-ным пЬдкисленным водным метанолом (рН 1,8, серной кислотой ), получа  дополнительно 16 фракций . Кислые .фракции объедин ют, упаривают под вакуумом (до водной фазы), довод т рН едким бариемдо7,2, фильтруют и лиофилизируют. ( При ферментации дл  избирательного продухщровани  в основном ВМ123/Э и ВМ1231 приготовление инокулума производ т так же, как дл  . Дл  получени  ВМ123 jj в танке-фер ментере обычно используют среду следую щего состава, г: Декстроза1О,0 М сной экстракт4,0 Бактопептон4,0 Хлористый натрий2,5 Дрожжевой экстракт1,0 ВодаДо 1ООО(мл рН довод т едким натром до 7,О. . Танк инокулируют 3-10% полученног инокулума. Аэрируют из расчета 0,2-0, стерильного воздуха на 1 л бульона в минуту, ферментацишшую смесь перемешивают мешалкой (50-2ОО об/мин). Температуру поддерживают С, обычно около 28 С. Продолжитйльность ферментации 45-85 ч. Отфильтровывают ферментационную массу, содержащую ВМ123 5 и ВМ123 использу  в качестве фильтровального вспомогательного средства ,1% диатомов земли. Пирог промьшают водой. Фильрат объедин ют с промывной жидкостью и пропускают через 10- литровый слой 5О ( ) под действием т жести, со скоростью потока 330 мл/мин. Загруженную колонку промътают водой. Действующее начало элюируют из колонки , использу  0,3.н. серную кислоту. Элюат собирают в две порции. Перва  порци  содержит элюат с рН 7,0-5,0. Первую порцию отставл аот из-за высокого содержани  соли, втора  порци  имеет рН около 1,4. Эту кислую порцию довод т едким барием до рН 6,0. Образующийс  сульфат ба-. ри  отфильтровьтают через диатомовую землю. Пирог промьшают водой, объед н ют фильтрат с промы юй жидкостью и упаривают под вакуумом. Концентрат нагревают на паровой бане до 50 С и внос т в гор чий раств.ор соли Рейнеке {150 г на 1500 мл при 75°С). Гор чий раствор оставл иот на 48 ч, затем отфильтровывают, получают пурпурно-красное твердое вещество. Его промывают водой. Влажное твердое вещество перемешивают со смесью воды и бутанола-1 (2:5) и довод т рН до 1,5 при помощи 0,25 н. серной кислоты. Смесь отфильтровывают ,, и водную фазу фильтрата довод т до рН 6-8, вновь фильтруют и второй фильтрат упаривают под вакуумом. Концентрат пропускают через колонку со 1ОО мл Дауэкс 1-х4 (CR) и лиофилизируют . Порошкообразную целлюлозу смешивают с верхней фазой, полученной при смешении 90%-ного фенола, хлороформа, пиридина, уксусной кислоты (в со- i отношении 15ОО : 300 : 45 : 45 : 75О). Затем постепенно загружают в стекл нную колонку, через верхнюю часть, вышеописаннуЬ лиофилизированную смесь компонентов, растворенную щ верхней фазе, и смоченную порошкообразную целлюлозу (1:2 объем/вес). Колонку про вл ют под давлением воздуха из резервуара , присоединенного к верхней части стекл нной колонки. Всего собирают 75 фракций (по 25 мл кажда ), использу  автоматический коллектор фракций. Активность устанавливают биоавтографией бумажных кружков, высушенных на воздухе и промытых эфиром, до нанесени  на большие агаровые пластины , засе нные K.pueuttlOttios, штамм AD . Наблюдаютс  две отдельные активггые полосы. Одна из них состоит (BM123JJ) из фракций 3-18, а втора  (ВМ123/5 ) - из фракций 31-52. Объедин ют фралсции 3-18 и внос т в хлороформ , образуетс  двухфазна  система. Нижнюю фазу оставл ют, а верхнюю водную фазу (рН 4,5) дважды экстрагируют равным объемом эфира дл  удалени  оставшегос  фенола, довод т до рН 6,5 использу  ЗТ 45 (ОН ), лиофилизируют и получают BM123)J . Объедин ют фракции 31-52, обрабатывают их аналогичным образом и получают ВМ123 /5 . Три антибактериальных средства сравнивают Jit vH ho, использу  разнообразные грамположительные и грамотрицательньхе бактерии, а также M smefiwatis методом разведени  агара. Результаты в виде минимальной ингибирующей ; концентрации приведены в табл. 4. Дп.  сравнени  вз т 9Ульфат гентамицина. Антибактериальные вещества BM123aS, ЭМ123 |5 и ВМ123 JJ действуют in VAVO а различные микроорганизмы. Их можно использовать в качестве лечебных средств при печении бактериальных инфекций у млекопитающих путем парентерального вве дени . Эффективность новых антибактериаль ных средств доказана их способностью задерживать системные летальные инфекции у мышей. Новые вещества обнаруживают ш vivO высокую антибактериальную активность пpoтивP toietlЭ mirabiEis Атсс № 467i,K2ebsie2Ea рнеиH10«iasJttl ,E. N 311 при введении pa30Boi|i дозы подкожно группам мышей

Mycobacterium smetftttoiiis °Ь01

StaphyPococcua aureus А7СС L41H

etapH Eococcus oiureus Smith АТСС 15709

SiaphyEococcue aufeus W 54050 Ъ 122-3

Baci22us cereus ATCC 634

BaciEEus gEobigii

BaciEEus sublJEis W2irstatrs2jfl -T8

BaciEEus suЫiE sЫ i8 startsFj

Coryttebacterium xenosis }}1 1БЧЪ97

Eiiiet ococcus QK

SGivciifa Euiecx ATCO 9341

Ewiejoboicier Ц275

ЕесЬе1 1сНш coEi U 311

Hscherlckia coEi №29

KEebsieEEoi piteumoniaa TypeAjStf ain

Pholeus m roibi2j6 ATCC 46Ti

Pi oteus ATCC 8019

Pt oteue vuldatis ATCC 94B4

Таблица4 Conwovlh PQrmsCFl весом по 20 г, инфицированных внутрибрюшинно летальной дозой указанных бактерий в 1О , Ю и 10 разведени х соевым бульоном {обработанным триатиказой) п тичасовой культуры крови Т&Р. Данные об антибактериальном действии irf vivoBM 123 оС ,jb и у приведены ,в табл. 5. В контроле - инфицированные , но необработанные антибактериальными средствами животные.

Claims (2)

1. Продолжение табл. 4 Вещества можно вводить в различны фармацевтические формы, например, в инъекционные растворы, таблетки, капсулы; пилюли и т.п. дл  непосредственн го или поддерживающего действи  в сочетании с соответствующими носител ми или наполнител ми. Пример 1, Приготовление иноку лума. Типичную среду дл  выращивани  пер вичного инокулума приго -авливают по сл дующей рецептуре, г: М сной экстракт3 Бактотриптон5 Дрожжевой экстракт5 Крахмал.24 Декстроза1 Водадо 100 (мл Довод т рН едким натром до 7,0,Промытые или сн тые споры с косого агара оС01Рс5ш вр. 5646 используют дл  инокул ции двух матрацев емкостью 5ОО которьсс находитс  по 100 мл вышеуказанной стерильной среды. Маараць помещают на ротацион ную качалку и энергично взбалтывают 48 ч при 28 С. Образовавшийс  инокулум перенос т в 5-тигалонный фермен тер (стекл нный) с 12 л стерильной среды. Аэрируют стерильным воздухом 48 ч, после чего содержимое использую дл  засева ЗОО-литрового танка-фермен тера со 15О л стерильной среды. Массу инокулума аэрирую стерильным воздухом из расчета 1 л воздуха на 1.л массы в минуту, -подаваемым в нижнюю часть ферментера, без механического дополнительного перемешивани . Массу выдерживают при 28 С, В качестве противовспениваюшего средства испс ьзуют л рд. После 53 ч выращивани  массу инокулума используют дл  засева 2000-ли трового ферментера со 135О л стерильней ферментационной среды. П р и м е р 2. Ферментаци  WoC(Sti(|i ep. № 5646 на среде, благопри тствующей продуцированию ВМ 123 об. Приготавливают ферментационную срэду следующего состава,г: Бактопептон, 1О,О Яекстроэа1ОО,О Меласса2 О,О Железо-амм иний ЛЕ1 0НЧОКИСЛЫЙО,1 Карбонат кальни  .l|fO ВодаДо 10ОО{ Ферментационную среду стерилизуют 6О мин при 1200С паром при давлений 8 кг/м. рН среды после стерилизации 6,7. 1350 л стерильной среды в 2000-лнтровом танке-ферментере инокулируют 150 л инокулума, полученного описанным в примере 1 способом. Ферментацию ведут при 28 С, использ г  в качестве пеногасител  л рд. Аэрацию ведут из расчета 0,6гО,7 л стерильного воздуха на 1 л массы в минуту. Массу перемешивают при 50 об/мин. Ферментацию ведутА ЗО ч. П р и м е р 3. Выделение ВМ 123ai. Ферментацию ведут как описано 30 л ферментационной массы с рН 7,7 отфильтровывают, использу  в качестве фильтрующего вспомогательного средства 300 г диатомовой земли, пирог промывают водой, объедин ют фильтрат с : промывной жидкостью {31 л) и сол ной кислотой довод т рН до 6,5, внос т 62 г фтористого натра, и смесь перемешивают в течение часа. Образовавшуюс  суспензию фильтруют, использу  диатомовую землю в качестве фильтрующего средства , и получают 31 л фильтрата. Фильтрат пропускают через колонку с (No) (50-100 меш) с объемом сло  1 л. ВМ элюируют, пропуска  О,3 н. серную кислоту через колонку и собира  фракции объемом по 500 мл. Фракции 1-7, содержащие активный компонент , объединзшт и едким барием довод т рН до ,7,
2. 2. Сульфат бари  отфильтровывают и получают прозрачный фильтрат. Его пропускают в течение ночи через колонку с it С 50 (Н ) с объемом сло  в 650 мл. Колонку промьшают 4 л воды и элюируют действующее начало 0,3 н. серной кислотой. Активные фракции {1-7) обрабатывают едким барием дл  доведени  рН до 7,0, фильтру1бт,получают 2,9 л прозрачного фильтрата, паривают под вакуумом до 75 мл дл  последующей хроматографии на угле. 1 л гранулированной Дарко С-60 {2О-40 меш) суспендируют в воде, перенос т в стекл нную колонку и оставл ют отсто тьс . Удал ют избыток воды и в колонку медленно пропускают 75 мл концентрата . Загруженную ролонку промьшают 4 л воды и про вл ют 3,5 л 50%-ного водного метанола, собира  фракции по 5О мл, фракции 18-68 упаривают до водной фазы под вакуумом, лиофилизируют, получают 6,4 г белого твердого вещест ва ВМ ,. Колонку с углем про вл ют подкисленным водньш метанолом (рН 1,8, при помощи серной КИСЛОТЬЕ) и получают дополнительно 16 фракций. Объедин ют подкисленные фракции, упаривают под вакуумом до водной фазы, довод т рН ед1сим барием до 7,2, фильтруют, лиофилизируют, получаю еще 1,5 г ВМ 123а;. Обе порции твердого .вещества пред™ ставл ют, по данным тонкослойной хроматографии , смесь ой 1 и об 2, Этот ВМ 123 ct сушат 16 ч в сушилке дергальдена над кип щим этанолом, тем производ т микроанализ, ВМ 123 о; не .имеет четкой точки плавлени , постепенное разложение начинаетс  около 200°с. Микроанализ,%: С 33,89; Н 5,71; N 11,88 (непосредс венно 35,40), зольность О. ВМ 123 Л пропускает свет в области 22О-34О нм в 90%-ном метаноле при концентрации 200 мкг/мл. +52 (с 1,00 в ). ВМ123 oi обнаруживает характерную абсорбцию в инфракрасной области спектра при длине волны, : 780, 815, 950, 1050, 1110, 1250, 134О, 1395 1560, 1670, 1705, 2950, ЗЗЗО. Пример 4. Ферментаци  с приме нением Nocafdifl Sp. № 5646 и среды обеспечивающей продуцирование ВМ123(У и BM123jf . Приготазливают ферментационную среду следующего состава, г: Декстроза10,0 М сной экстракт4,0 Бйктопептон4,0 XnopJtCTbitt натрий2,5 Дрожжевой экстракт1,0 ВодаДо 1ООО(мл) Едким натром довод т рН до 7,0. Ферментационную среду стерилизуют 60 мин при 12О С паром под давлением 8 кг/м , рН стерилизованной среды 6,7. 1350 л стерильной среды в 2000-литровом танке-ферментере инокулируют 15О л инокулума. Ферментацию ведут при 28 С, использу  л рд в качестве противовспенивающего средства. Аэрацию ведут из расчета 0,4 л воздуха на 1 л среды в минуту. Массу перемешивают при 50 об/мин. Ферментацию ведут 85 ч. П р и м е р 5. Выделение ВМ123|3 и ВМ123 . 1350 л ферментационной массы, полу ченной описанным в примере 4 способом, фильтруют, использу  1% диатомовой земли в качестве фильтрующего средства пирог промывают 50 л воды и отстаивают . Объединенные фильтрат и промыв ную жидкость пропускают через 1О-литровый слой 50 (Поп под дейст вием собственной т жести со скоростью потока 330 мл/мин. Колонку промьшают затем 30 л воды. Активные компоненты элюируют из колонки, испситьзу  дл  этого 170 л 0,3 н. серной кислоты. Элюат собирают в две порции. Перва  порци  содержит элюат с рН от 7,0 до 5,0. Первые 45 л отстаивают из-за высокого содержани  соли. Втора  порци  (120 л) имеет рН 1,4. Эту кислую порцию довод т едким барием до рН 6,0, отфильтровывают образовавшийс  сульфат бари , использу  при этом 1 кг диатомсжой земли в качестве фильтрующего средства пирог промьшают 5 л воды, фильтрат вместе с промывной жидкостью упаривают под вакуумом до объема 2 л. Концентрат нагревают на паровой бане до 50 С и внос т в гор чий раствор соли Рейнеке (150 г в 1500 мл воды при 75°С). Гор чий раствор оставл ют на 48 ч при комнатной температуре, затем фильтруют и получают твердое вещество краснолилового цвета, которое промывают бООмл воды Влажное твердое вещество перемешивают с 2 л воды и 5 л бутанола-1, довод т рН до 1,5 при помоши 0,25 н. серной кислоты.Смесь отфильтровьшают и водную фазу фильтрата обрабатьшают твердым едким барием, довод  рН до 6,5.Смесь отфильтровьшают и упарив.ают под ваKyyMQMf довод  объем до 350 мл. Концентрат пропускают через колонку (объемом 100 мл) с Дауэкс 1-х4 (С1 ), лио нышзируют и получают 50 г продукта. - . 25О г порошкообразной целлюлозы смешивают с 200 мл верхней фазы, полученной при смешении 9О%-ного фенола, хлороформа , пиридина, уксусной кислоты, воды (1500:300:45:45:750 по объему). Затем через верхнюю часть колонки загружают смесь 10 г лиофилизированнсьго про укта в 16 мл верхней фазы и 2О г уБлажненной порошкообразной целлюлозы, Колонку про вл ют, использу  воздух под давлением 0,2 кг/м из резервуара, присоединенного к верхней части стекл нной колонки. Собирают 75 фракций по 25 мл.. Активность устанавливают биоавтогра- фией смоченных бумажных кружков, вы- . сушеи1и.1Х на воздухе и промытых эфиром , до нанесени  на большую агаровую пластину, , засе нную K.pMSutKOttficiS штамм AD . Наблюдаютс  две отделыпзхе активные полосы. Одна из них (BM123J) состоит из фракций 3-18, а втора  (ВМ123 /2) ) - из фракций 31-52, Объед}ш ют фракции 3-18, добавл ют 140Омл хлор01форма, получают двухфазную систему . После разделени  верхнюю водную фазу (рН 4,5) дважды экстрагируют ра ным объемом эфира дл  удалени  остаточного фенола. рН водной фазы довод т до 6;5 при помощи П 45 (ОН), лиофилизируют и получают 1,62 г ВМ123 Объедин ют фракции 31-52, обрабаты вают аналогично и получают 1,05 г ВМ123|15. 1 г ВМ123 перемешивают 15 мин с 20 мл абсолютного метанола, суспензшо отфильтровывают, получают ЗО5мг: твердого вещества, фильтруют, к фильтр ту приливают 6О мл эфира, получают суспензию белого хлопьевидного матери ла в эфире-метаноле, отфильтровьюают, получают белое твердое вещество и беловатый фильтрат. Твердое вещество промьтают на воронке Бюхнера эфиром и сушат на воздухе, получают 6О2 мг ВМ123 5 , сушат под вакуумом в сушильном аппарате Абдергальдена над кип щим этанолом 16 ч. ВМ123 не имеет четкой точки плавлени , постепенное разложение начинаетс  около 200 С. Микроанализ, С 46,13; Н 6,65; W 17,0 (непосред. - 24,96); зола 0,90. Соединение обнаруживает в 90%-ном метаноле максимум абсорбции в УФ-об ласти при .286 нм (), 53,8 (,004 в ). ВМ123 обнаруживает характерную абсорбцию в инфракрасной области спек тра при длине волны, см : 765, 870 98О, 1О45, 1112, 1175, 1230, 134 14ОО, 1465, 1510, 1570, 1610, 16 219О, 3333, 670 мг ВМ12313 перемешивают с 12 мл метанола в течение 15 мин, отфильтр (жьтают, в фильтрат приливают 36 мл эфира, получают белый осадок, Его собирают на фильтре, промывают эфир(Ж1, сушат на воздухе, получают 466 мг BM123jb, который сушат под вакуумом над кип щим этанолом в течение 4 ч (до микроанализа). ВМ1231Ь не имеет четкой точки пла лени , но начинает постепенно разлагатьс  около . Микроанализ,%: С 47,53; Н 7,39; У1 16,54; зольность 1,04. В 98%-ном метаноле он обнаруживает максимум УФ-абсорбции при 286 нм при Положение максимума не измен етс  в зависимости от рН. (yiJ3)+53,2 {С 1,250 в ), ВМ123р обнаруживает характерную абсорбцию в инфракрасной области спект ра при длине волны, см : 826, 870, 922, 980, 1035, 1105, 1170, 1220, 1340, 1390, 151О, 1560, . Ч60О , 167О, 295О, 308О, 3350. П р и м е р 6. Распределение на бумаге и тонкослойна  хроматографи  активных компонентов. Антибактериальные средства можно различить методом хроматографии на бумаге. Дл  этой дели на полоски ватманской бумаги №1 нанос т водный или метанольный раствор веществ и уравновешивают 1-2 ч в присутствии верхней и нижней фаз. Полосы про вл ют с нижней (органической) фазы, полученной при смешении 90%-ного фенола; м-крезола; уксусной кислоты, пиридина, воды (100: :25:4j-4:75 по объему). Полоски удал ют из камеры, сушат на воздухе 1-2 ч, промьшают эфиром дл  удалени  остаточного фенола и подвергают биоавтографии на больших пластинах агара, засе нных K.ptteumottias. К.С дл  ВМ123 Х -0,20, 0,47; BM123fb -0,62, 0,71; BM123jf-О,88. об и -компоненты представл ют собой смесь двух антибиотиков. |J компонент состоит из главного антибиотика (1-0,62), названного ВМ123|2)и меньшего компонента ВМ123 2 ( 0,71). Наиболее пол рный компонент ВМ123 oi (Т 0,20) назван ВМ123й , а менее пол рный ( 0,47) назван ВМ . ВМ123с раздел етс  на два компонента методом, основанным на тонкослойной хроматографии, на Полиграм Цел ITV 254 с тонкослойной целлюлозой, выпускаемой фирмой Бринкманн Инструменте лимитед, Нью-Йорк. Тонкослойные пластины с п тнами раствора вещества про вл ют водой, содержащей 1% тринатрийцитрата . Зоны про вл ют автографически на агаровых пластинах, как описано выше, в результате две зоны: ВМ123 (Л. с Rr 0,90 и ВМ123о 2 с Щ 0,65. Формула изобретени  1. Способ получени  антибактериального вещества, от.личающийс  тем, что культуру микроорганизма МоС01 СdiO sp. NWb № 5646 выращивают в водной питательной среде, содержащей ассимилируемые источники углерода, азота и неорганические соли, в аэробных услови х в течение 42-240 ч с последующим выделением целевого продукта с помощью ионообменной колонки в виде смеси или отдельных фракций. 2, Способ по п. 1, о т л и ч а ющ и и с   тем, что, целевой продукт выделшот в виде альфа, бета или гамма-активных фракций. Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе: 1. Патент США № 3597325, кл, 195-96, 1971.