SU514576A3 - Способ получени полисахарида - Google Patents

Description

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИСАХАРИДА

Таблица 1

5,0 ммоль фосфора содержитс  в среде Берка , обычно примен ющейс  дл  культивировани .

Пример 2. Этот прн.мер иллюстрирует вли ние рН среды на выход полисахарида.

Azotobacter vinelandii NCIB 9068 выращивают в 4 л питательной среды, состав которой приведен в табл. 3, в ферментере, оборудованном мешалкой.

Состав среды дл  культивировани  приведен в табл. 3.

Таблица 3

Копцсптрацию фосфора н среде варьируют в пределах от 0,005 до 5,0 ммоль путем соответствующего изменени  количеств вводимых К2НРб4 ii КН2РО4. После засева среды посевной культурой, выращенной в течение 48 ч на агаровых кос ках, колбы инкубируют в течение 96 ч при 30°С на качалке со скоростью 200 об/мин. Во врем  культивировани  рН среды поддерживают на уровне 7,5 при номощи трис (оксиметил)-аминометанового буферного раствора . В конце процесса выход полисахарида определ ют путем его осаждени  нзопропанолом из фильтрата культуральной жидкости, высушивани  и взвешивани . Полученные результаты представлс iiu в табл. 2 и на фиг. 1. Т а б ,п и ц а 2 Вли ние концентрации фосфора в среде на выход полисахарида На осповании результатов, приведенных в табл. 2 и на фиг. 2, можно сделать вывод, что оптимальна  концентраци  фосфора в среде дл  образованн  но.чисахарида находитс  в диапазоне 0,1-0,8 ммоль. Выращивание культуры при концентрации 5,0 ммоль фосфора в среде приводит к резкому попижению выхода полисахарида. Ферме 1тер оборудован также устройством дл  автоматического контролировани  рП и поддержани  его на заданном уровне путем автоматической нодтитровки при номощи 1М раствора NaOH. Ферментер стерилизуют обычным способом до введени  и него нитателыюй среды. К питательной среде, наход щейс  в ферменгере , добавл;1ют 10 об. % посевного материала , выращенного в течепие 24 ч в колбах па качалке. Ферментацию ведут в течение 60 ч при , среду непрерывно перемешивают со скоростью 400 об/мин и через нее пропускают воздух со скоростью 4 л/мин, рН среды поддерживают посто нным в течеиие всего процесса путем автоматического добавлени  .необходимого количества 1 М раствора МаОН. Отдельные опыты по ферме1ггацин проведены при поддержании посто нного pli lia уровне 6,0; 6,5; 7,0; 7,3; 7,5; 7,75 и 8,0. По окончании каждого опыта выход полисахарида определ ют путем осаждени  его изопропанолом с последующим взвешиванием высушенного продукта. Получепные результаты представлены в табл. 4 и на фнг. 2. Из табл. 4 и фиг. 2 видно, что оптимальный рН дл  образова1П1  полисахарида лежит в области 7,3 и выше. Пример 3. Этот пример показывает, что при проведенпп процесса в соответствии с изобретением , получают лучшие выходы полисахарида по сравиепию с теми, которые получают при ведении процесса в услови х, примен вшихс  ранее при культивировании Azotobacter vinelandii. Таблица4 Вли ние рН среды на выход полисахарида рН среды полисахарид, мг/мл О (нет роста) Провод т три опыта, при которых используют ту же аппаратуру, микроорганизм, питательную среду и способ культивировани , как

Результаты показывают, что при низкой концентрации фосфата и контролировании рН среды получают значительно более высокие выходы полисахарида, чем в услови х, примен вшихс  ранее дл  выращивани  Azotobacter vinelandii.

Claims (5)

1. Способ получени  полисахарида путем выращивани  бактерий Azotobacter vinelandii в услови х аэрации в питательной среде, содержащей моно- или дисахара в качестве источников углерода, источника азота, фосфор, кальций и другие необходимые минеральные соли, с последующим выделением полисахарида известным способом, отличающийс  5 10 15

тем, что, с целью повышени  выхода продукта, фосфор ввод т в среду в концентрации 0,1- 0,8 ммоль, преимущественно 0,2-0,6 ммоль, а рН в процессе выращивани  поддерживают в интервале 7,0-8,2, преимущественно 7,3-7,9.

2.Способ по п. 1, отличающийс  тем, что из вида Azotobacter vinelandii используют

штаммы NCIB 8660. NCIB 8789 или NCIB 9068.

3.Способ по п. 1. 2, от л и ч а ю щи йс;  тем, что. кальций ввод т в питательную среду

в концентрации 0.02-0,6 ммоль.

4.Способ по пп. 1-3, отличающийс  тем, что из группы моно- н дисахаров используют сахарозу, глюкозу, инвертный сахар или Meviaccv. в примере 2, за исключением следующего: опыт А провод т в среде, в которой концентраци  фосфора 0,25 ммоль, а величину рН поддерживают посто нно на уровне 7,4; опыт В, который провод т дл  сравнени , ведут в среде, в которой концентраци  фосфора равна 5,0 ммоль, а рН поддерживают посто нно на уровне 7,4; опыт С, который провод т также дл  сравнени , осуществл ют в среде с концентрацией фосфора 5,0 ммоль, но величину рН среды во врем  процесса выращивани  не контролируют, и она снижаетс  с 7,4 до 6,4 к 24 ч и до 6,05 к 48 ч выращивани . В каждом опыте выход полисахарида измер ют через 24 и 48 ч тем же методом, который описан в примере 2. Полученные результаты представлены в табл.

5. Таблица 5

-1- 4

5 /Концентраци  1(росфатпа,

9иг.1