SU355807A1 - Способ получения биомассы - Google Patents

Description

Изобретение относитс  к микробиологической промышленности, a именно к способам получени  биомассы.

Известен способ получеии  биомассы путем выращивани  углеводородокисл ющих дрожжей на водной питательной среде, содержапгей в качестве источника углерода н-парафины и н-парафинсодерж щие углеводороды , минеральные соли, стимул торы роста, в присутствии пеногасител  и при аэрации среды воздухом. Однако выход биомассы при этом способе иедостаточно высокий .

Предлагаемый способ нозвол ет увеличить выход биомассы благодар  тому, что в качестве углеводородокисл ющнх дрожжей используют штамм Candi.d.a novellus.

Штамм Candida novellus имеет следующую характеристику. После трехдпевного выдерживани  в солодовом экстракте при 25°С форма клеток видоизмен лась от круглой до овальной, онн были размером 3-6X4-6 f.i. Воспроизводство осуществл лось с помощью многосторонней окулировки.

Псевдомицелми хоропю развиваютс  на косом картофельном агаре, хорошо образуютс  бластоспоры и бл стоконидин.

Оптимальные услови  роста при рН 5,0, температуре 30°С, при аэрации.

Услови  роста: рН 2,5-9,0, температура 2-39°С.

Нитраты не ассимилируют.

Реакци  на лакмусовое молоко: коагул Ц1Щ пет, цвет измен етс  до синего.

Желатину разжижает.

Потребл ет биотип.

Каротиноидных пигментов не образует.

Утнлизаци  этанола положнтельна .

Расщепл ет арбутин.

Сложные эфиры, крахмалоподобные вещества и кислоты не образует.

Потребл ет пептон, сульфат аммони , мочевину и аспарагин.

После выдерживани  в течент1е одного мес ца в солодовом экстракте прн 17°С образуете  кольцо.

Ферментирует глюкозу, сахарозу. Слабо ферментирует галактозу, мальтозу. Лактозу и рафинозу не ферментнрует.

Потребл ет глюкозу, маннозу, галактозу,

фруктозу, сахарозу, мальтозу, трагалозу,

Способ получени  биомассы с использованием штамма дрожжей Candida novellus заключаетс  в следующем.

Культивируют дрожжи Caridida novellus в аэробиых услови х иа водной питательной среде, содержаодей н-парафины и н-парафинсодержащие углеводороды в качестве главного источника углерода.

н-Парафины представл ют собой парафины , имеющие 9-30 атомов углерода в молекуле , которые получают с использованием молекул рных сит, метода аддукта мочевины .

н-Парафинами, например,  вл ютс  керосин , газойль или неочищенные парафины, которые перерабатываютс  в процессе получени  нефт ных фракций и содержат более 50% н-парафинов. Концентраци  «-иарафинов при непрерывном культивировании обычно составл ет 0,01 - 1%.

Темиература культивировани  колеблетс  от 25 до 40С, предпочтительно 27-35°С. рН культуральной среды составл ет 3,5-6,0, предпочтительно 4,0-5,0.

В культуральную среду добавл ют незначительные количества фактора роста, например биотин или гомолог, имеющий такую же физиологическую активность, как и биотин, например дестиобиотин, или 0,02-0,5% биотинсодержащего вещества, такого как меласса , дрожжевые экстракты или кукурузна  жидкость.

В качестве вспомогательных сырьевых веществ используют: источник кали , магни , цинка или железа, например хлористый калий , сульфат магни , сульфат цинка, сульфат железа; источник азота, например аммиак, сульфат аммони  или мочевину, и источник фосфора, например фосфорную кислоту, первичный кислый фосфат натри , вторичный кислый фосфат натри , первичный кислый фосфат кали  или вторичный фосфат кали .

В зависимости от условий культивировани  могут добавл ть противопен щий агент, папример соевое масло, селиконовые смолы или производные жирных кислот.

В процессе культивировани  в культуральную среду пропускают газ, содержащий свободный кислород.

Пример 1. 200 мл культуральной среды, состо щей из 2% н-парафинов (чистота 98%, Cio-2i), 0,2% фосфорной кислоты, 0,2% КС1, 0,06% сульфата аммони , 0,2% мочевины, 0,06% MgSO4-7H2O, 30 частей на млн. ZnSO.r7H2O, 50 частей на млн. FeSO4-7H20, 100 частей на млн. CaCl2-2H2O, 0,1% мелассы И водопроводной воды, нейтрализованной до рН 6,0 с помощью NaOH, выливают в двухлитровую встр хиваемую колбу, автоклавируют и довод т рЫ среды до 6,0. Культуральную среду шшкулируют штаммом Candida novellus.

20 л питательной жидкости, имеющей тОт же состав, что и культуральна  среда, но не содержащей мочевины, заливают в М-л фермеи-1ационныи сосуд и стерилизуют в течение It мин при . После того как рИ довод т до 0,0, Ьии мл посевной культуры иаок}лируюг в питательную жидкость, доиавл юг о/о-ныи водный аммиак дл  поддержани  пигачельнои среды при рН 4-5. чульгивирование провод т при jU-С и перемешивании /ии об/мин, после прекращени  иотреолеии  аммиака получсаные клетки огдел юг и промывают водой. Ьыход клеток в расчете на «-парафин сосгавл ет lUo.oVo, содержание неочищенного

протеина Ь/,Ь%, а скорость роста равна 0,2У.

Пример 2. Используют те же иосевпые

культуры, питательную жидкость дл  OCIIOBного культивировани  (за исключением того,

что вместо мелассы используют дрожжевой экстракт) и щтамм Caudid,a noveUus. посевную культуру перенос т в ферментатор, па ло1-арифмической фазе роста культивироьание провод т непрерывно.

В течение культивировани  к питательной жидкости того же состава, что и в примере 1, но не содержащей «-парафин, непрерывно добавл ют «-парафин (чистота , Cis-zs), при этом концентрацию клеток поддерживают при 1,7-1,9%, а концентрацию н-парафина при 0,1-0,3%.

Культивирование провод т при и перемешивании 1000 об/мин, при скорости аэрировани  30 м/мин и рН 4-5.

Гемпературу регулируют автоматически. Прекращают культивирование через 200 час. Выход клеток в расчете на н-парафин составл ет 106,5%, содержание неочищенного «-протеина 58,1%, продуктивность клеток

4,2 г/л-час.

Размножение прекращалость после 32 час непрерывного культивировани .

Пример 3. Посевное культивирование и непрерывное культивирование провод т в тех же услови х, что в примере 2. Однако в качестве основной жидкости дл  непрерывного культивировани  используют среду, как в примере 2, за исключением дрожжевого экстракта. К среде добавл ют биотин, кукуS6

рузную жидкость, дрожжевой экстракт иводной питательной среде, содержащей в камелассу соответственно.честве источника углерода н-парафин и

Культивирование провод т в течениеи-парафинсодержащие углеводороды, мппе120 час. Результаты культивировани  сведе-ральпые соли, стимул торы роста, в присутны в таблицу.5 ствии пеиогасител  и при аэрации среды возП род мет изобретени личенп  выхода биомассы, в качестве углеСпособ получени  биомассы путем выра-водородокисл ющйх дрожжей используют

щивани  углеводородокисл ющих дрожжей наштамм Candida novellus.

Ssa&o7 духом, отличающийс  тем, что, с целью уве