SU1747075A1 - Способ изготовлени коллагенового покрыти дл использовани в офтальмохирургии - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к созданию новых материалов на основе природных биополимеров, которые могут примен тьс  дл  создани  долговечных аллотрансплантатов, например лечебных линз различных конфигураций, пломб, шовных материалов дл  оф- тальмохирургии. Целью изобретени   вл етс  повышение механической, термической и ферментативной устойчивости. Дл  этого склеру глаз животных очищают, нарезают небольшими кусочками. Навеску ткани заливают 10%-ным раствором едкого натра на 48 ч при 18-20°С. Раствор сливают и провод т нейтрализацию ткани до рН=6.0-7,0 перемешива  e^j в 2%-ном растворе борной кислоты. Тк нь промывают дистиллированной водой, заливают 1М раствором уксусной кислоты из такого расчета, чтобы конечна  концентраци  белка в растворе составила 1 мас.%. Массу оставл ют в холодильнике на 1-3 сут при 4°С и гомогенизируют, центрифугируют 30 мин при 2000 об/мин и оставл ют на сутки при 4°С. раствор фильтруют через стекл нный фильтр. Дл  нейтрализации и десольвации 1%-ный уксуснокислый раствор коллагена разбавл ют 0,5 М уксусной кислоты до концентрации белка 0,7-0,8% и диализируют против 0.2 М фосфатного и цитратного буфера при 18-20°С до рН 4.5-7.5. Раствор вакуумируют. центрифугируют 30 мин при 2000 об/мин и насыщают химически чистую закись азота. Полученный раствор подвергают лиофилизацип. Раствор центрифугируют при 3^40 тыс. об/мин в течение 10-30 мин. полученный раствор перенос т в форму и облучают ионизирующим излучением дозой 1-15 кГр при комнатной температуре. Попученное изделие извлекаюг из формы, перенос т в дистиллированную воду. Вымачивание издели  осуществл ют в течение 1-3 сут. до того момента пока вс  уксусна  кислота не будет удалена из издели , т.е. рН промывной воды не должна быть меньше чем 6.3. Изделие помещают в дистиллированную воду, герметизируют, стерилизуют. Способ изготовлени  пластического материала из коллчгена дл  использовани  в офтальмохирургии позвол ет увеличить механическую прочность пластического материала, а также повысить его термическую и ферментативную устойчивость.СОЬ^^ о ^!СЛ!>&

Description

Цель иообретени  - повышение механической , термической и ферментзтивкой устойчивости.

Способ осуществл ют следующим способом .

Склеру глаз с/х животных тщательно очищают от внутренних оболочек глаза, остатков конъюнктивы, мышц и проч.. выдел ют строму. которую нарезают небольшими кусочками. Навеску ткани промывают в дистиллированной воде до полного удалени  механических примесей и крови, перенос т в колбу и заливают 10%-ным раствором едкого натра (из расчета 500 мл раствора на 10 г ткани) на 48 ч при 18-20°С. Раствор сливают и провод т нейтрализацию ткани до ,0-7,0. перемешива  ее в 2%-ном растворе борной кислоты, неоднократно мен   раствор. Ткань промывают дистиллированной водой до полного удалени  иона сульфата в промывной жидкости и заливают 1 М раствором уксусной кислоты из такого расчета, чтобы конечна  концентраци  белка в .растворе составила 1 мас.%. Массу перемешивают и оставл ют в холодильнике на 1-3 сут при 4°С. Массу гомогенизируют , центрифугируют 30 мин при 2000 об/мин и оставл ют на сутки при 4°С. Полученный раствор фильтруют через стекл нный фильтр. Дл  нейтрализации и десольвации 1%-ный уксуснокислый раствор коллагена разбавл ют 0.5 М уксусной кислоты до концентрации белка 0.7-0.8% и диализируют против 0,2 М фосфатного и цитратного буфера при 18-20°С до рН 4.57 .5.

Раствор перенос т в химический стакан и помещают в вакуумную камеру. Раствор вакуумируют до тех пор. пока не начнетс  интенсивног выделение газа из обьема раствора Раствор центрифуг ируют 30 мин при 2000 об/мин. Через полученный раствор насыщают химически чистую закись азота при посто нном перемешивании. Эту операцию осуществл ют до полного насыщени  раствора закисью азота. Закись азота  вл етс  нетоксичным сенсебилизатором сшивки коллагена. Полученный раствор подвергают концентрированию {лиофилизации или добавл ют в раствор известную навеску сухого коллагена до его полного набухани  в растворе) от 1 до 80 мас.%.

Раствор центрифугируют при 3-40 тыс. об/мин в течение 10-30 мин, полученный . раствор перенос т в форму и облучают ионизирующим излучением дозой 1-15 кГр при комнатной температуре. Полученное изделие извлекают из формы, перенос т в дистиллированную воду. Вымачивание издели  осуществл ют в течение 1-3 сут. до

того момента пока вс  уксусна  кислота не будет удалена из издели , т.е. рН промывной воды не должна быть меньше чем 6.3. Изделие помещают в дистиллированную воду, герметизируют, стерилизуют.

Предлагаемый способ изготовлени  пластического материала из коллагена дл  использовани  в офтальмохирургии позвол ет увеличить механическую прочность

пластического материала, а также повысить его термическую и ферментативную устойчивость .

Способ иллюстрируетс  следующими примерами.

Пример. 20 г очищенной и нарезанной стромы склеры заливают 1 л 10%-ного едкого натра в насыщенном растворе сернокислого натри  и оставл ют при 18-20°С на 48 ч. Затем раствор сливают, ткань промывают небольшим количеством дистиллированной воды, заливают 1 л 2%-ного раствора борной кислоты и перемешивают на магнитной мешалке в течение 2 ч. дважды мен   раствор борной кислоты. Ткань при

непрерывном перемешивании тщательно промывают дистиллированной водой (обьем воды 5 л) до полного удалени  сульфата иона из промывной жидкости. К 250 мл полученной обводненной ткани добавл ют

350 мл 0.5 М уксусной кислоты, перемешива  и оставл   на сутки при . Затем массу гомогенизируют при помощи микроизмельчител  тка..ей. центрифугируют 30 мин при 2000 об/мин и оставл ют на 3 сут при

4°С. Полученный раствор фильтруют через стекл нный фильтр. Полученный 1%-ный раствор коллагена развод т 0.5 М уксусной кислоты до концентрации 0,8%. полученный раствор диализуют против 0,2 М цитратного

буфера.

Раствор коллагена вакуумируют при комнатной температуре до образовани  пузырей газа, после чего раствор центрифугируют 30 мин при 2000 об/мин. Полученный

раствор :.йсыщают химически чистой закисью азота до полного насыщени  (барЬотируют газ через раствор, дл  объема раствора 20 мл врем  при расходе газа 5 мл/с закиси азота это составл ет 20 мин).

Затем раствор центрифугируют дл  удалени  избь4тка нерастворенного газа при 3000 об/мин 10 мин. Эти две последние операции повтор ют два раза. Раствор лиофилизируют в бюксе до концентрации коллагена

водой. Изделие вымачивают 1 сут пока рН в стакане после трех замен воды не будет 6,4. Получилс  прочный и ферментативно устойчивый пластический материал. Бактериологический контроль показал стерильность материала.

П р и м е р 2. Пример 2 аналогичен примеру 1 за исключением того, что после двухкратного насыщени  закисью азота и центрифугировани , концентрирование провод т добавлением сухого коллагена, т.е. к полученному уксусно-кислому 0,8%ному раствору коллагена на 20 мл прибавл ют б г сухих коллагеновых пленок, раствор гомогенизируют при помощи микроизмельчител  тканей в атмосфере закиси азота до получени  30%-ного раствора коллагена . Полученный раствор центрифугируют при 20000 об/мин в течение 20 мин. Раствор перенос т в полусферическую форму с мм. Форму с раствором облучают при комнатной температуре у-излучением дозой 10 кГр. Полученное изделие извлекают из формы и перенос т в 500 мл стакан с 10%-ным водным раствором формалина на 2 ч (дубление готового издели  осуществл етс  дл  увеличени  гидрофобности поверхности трансплантата). Затем изделие перенос т в 500 мл стерильной дистиллированной воды на 2 сут, три раза мен ют воду пока рН воды не стала 6.7. В стерильном боксе материал помещают во флакон с дистиллированной водой и герметизируют его. Изделие получилось стерильным прочным ферментативно устойчивым прозрачным.

Примерз. Пример 3 аналогичен примеру 1 за исключением того, что после двухкратного насыщени  закисью азота и центрифугировани , концентрирование провод т высушиванием раствора коллагена в диализном мешке, опущенном о

Sefadex-G 10, находитс  в атмофере закиси азота. Контроль за высушиванием осуществл ли по изменению веса раствора с одной половинкой формы с таким расчетом , чтобы при уменьшении веса раствора в 100 раз, добавл ли последующую порцию раствора. Эту операцию повтор ли пока вс  форма не была заполнена 80%-ным раствором коллагена. Форму с раствором переносили в специальную кювету ультрацентрифуги и центрифугировали при 40 тыс. об/мин. Затем форму закрывали второй половинкой и облучали дозой у-излучени  15 кГр. Полученное изделие извлекают из формы и перенос т на 3 сут в 500 мл стакан с дистил лированной водой и промывают трансплантат 3 раза по 50 мл, пока рН промывной воды не стало 6,8.

Пластический материал оказалс  стерильным прозрачным ферментативно устойчивым .

Claims (1)

1. Формула изобретени  Способ изготовлени  коллагенового покрыти  дл  использовани  в офтальмохирургии путем обработки ткани склеры глаз животных последовательно щелочью, кислотой , инкубации а присутствии уксусной кислоты, гомогенизации, центрифугировани , фильтрации, диализа с последующей герметизацией и стерилизацией, отличающийс  тем, Ч1О, с целью повышени  механической, термической и ферментативной устойчивости, раствор коллагена насыщают химически чистой закисью азота до полного насыщени , высушивают до концентрации 1-80%, центрифугируют, облучают ионизирующим излучением дозой 1-15 кг/рей и вымачивают в дистиллированной воде.