SU1711897A1 - Способ изготовлени коллагеновых покрытий дл использовани в офтальмологии - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к медицине и может быть использовано дл  изготовлени  крллагеновых покрытий, используемых в офтальмологии. Цель изобретени  - повыше-, нйе выхода и чистоты целевого продукта. Дл  этого 4/13 склеры глаз выдел ют строму. Из нее получают раствор коллагена, который фильтруют через стекл нный фильтр. Затем провод т изозлектрическое осаждение коллагена. Полученную смесь диспергируют, а целевой продукт отдел ют от низкомолекул рных примесей ультрафильтрацией дисперсии. ,,

Description

Изобретение относитс  к офтальмологии , а именно к коллагенопластике, и может быть использовано дл  повышени  качества хирургического лечени  врожденной и приобретенной патологии зрени .

Цель изобретени  повышение выхода и чистоты целевого продукта.

Способ осуществл ют следующим образом .

Склеру Глаз сельскохоз йственных животных тщательно очищают от внутренних оболочек, остатков конъюнктивы, мышц и проч. и выдел ют строму, которую нарезают небольшими кусочками. Навеску ткани промывают дистиллированной водой до полного удадени  механических примесей и крови, перенос т в колбу и заливают 10%ным раствором едкого натра в насыщенном растворе сернокислого натри  (из расчета 500 мл раствор на 10 г ткани) на 48 ч при 18°С. Раствор сливают и провод т нейтрализацию ткани до рН 6,0-7,0, перемешива  ее в 2%-ном растворе борной кислоты и

неоднократно мен   раствор. Ткань промывают дистиллированной водой до полного удалени  иона сульфата в промывной жидкости и заливают 1 М раствором уксусной кислоты из такого расчета, чтобы конечна  концентраци  белка в растворе составл ла 1%. Массу перемешивают и оставл ют в )$олодильнике на 1-3 сут при 4°С, Массу гомогенизируют , центрифугируют 30 мин при

00 2000. об/мин и оставл ют на 1 сут при 4°С.

ю Полученный раствор фильтруют через стекXI л нный фильтр. Дл  изменени  конформации макрочастиц в полидисперсной системе и снижени  величин в зкости раствора колдагенд провод т изоэлектрическое осаждение коллагена в пределах рН 4,2-8,6, что значительно облегчает дальнейшую очистку койлагена от низкомолекул рных примесей. Дл  этого к раствору коллагена в 0,25 М уксусной кислоте добавл ют эквивалентное количество едкого натра в форме 1-10%-ного раствора едкого натра, С помощью диспергатора при скорости вращени  ротора

10000-20000 об/мин, в течение 6-3 мин получают гомогенную дисперсную систему с размером частиц коллагена в дисперсной фазе 5-25 мкм.

Данна  операци  необходима, так как улучшает услови  очистки и повышает степень очистки за счет того, что все частицЫ дисперсной фазы имеют одинаковую поверхность и равномерно распредел ютс  в объеме дисперсной среды,

Полученную дисперсию коллагена разбавл ют солевыми растворами или буферныгО|и смес ми с низкой ионной иглой (0,002 М) до концентрации/О,1-0,2 вес.%, снижа , таким образом, возможность ассоциации макрочастиц и повыша  эффективность очистки . Разбавленную дисперсию подают под давлением дл  циркул ции в замкнутую си .стему, включающую трубки диаметром 2-3 мм, стенки которых представл ют собой полупроницаемую мембрану. Все молекулы, мол. масса которых меньше 10000 дальтон, проход т через стенки и удал ютс  с потоком фильтрата.

Непрерывна  циркул ци  дисперсии в системе обеспечивает посто нное перемешивание Дисперсии вдоль рабочей поверхности ультрафильтрационной мембрану. Очистка и концентрирование дисперсии коллагена идут за счет ультрафильтрации, через полупроницаемую мембрану (стенка трубы). Циркул цикЗ и перепад давлени  по разные стороны мембраны обеспечивает перистальтический насос. Давление на внутреннюю (рабочую) поверхность мембраны составл ет 0,7 кг/см в начале цикла и 1,8 кг/см в конце цикла. Скорость циркул ции 1,8 л/мин в начале и 0,3 л/мин в конце цикла. Очистку и концентрирование Завершают при концентрации коллагена в дисперсии 0,65-0,75 вес.%.

П р и м е р 1.20 г очищенной и нарезанной ctpoMM склеры заливают 1 л 10%-ного раствора едкого натра в насыщенном растворе сернокислого натра и оставл ют на 4В ч при 15-18°С. Раствор сливают и провод т нейтрализацию ткани до рН 6,0-7,0, непрерывно перемешива  на магнитной мешалке в 2%-ном растворе борной кислоты (врем  нейтрализации около 2 ч, общий объем 2%ного раствора борной кислоты около 4 л). Ткань тщательйо промывают дистиллированной водой при осторожном непрерывном перемешивании до полного удалени  сульфатиона из промывной жидкости (врем  промывки около 2 ч, общий объем дистиллированной , воды около 5 л), К полученному объему обводненной ткани добавл ют равный объем 0,5 М уксусной кислоть| , перемешивают и оставл ют на 1 сут

при 4°С. Массу гомогенизируют, центрифугируют 30 мин при 2000 об/мин, и оставл ют на 3 сут при 4°С. Готов т 1 %-ный раствор коллагена в 0,25 М уксусной кислоте. Полученный раствор фильтруют через стекл нный фильтр.

К200 мл полученного раствора добавл ют 1 г едкого натра в форме 1-10%-ного раствора едкого натра, интенсивно перемешива  раствор коллагена после добавлени  каждой порции раствора Щелочи. С помощью диспергатора при скорости вращени  ротора 20000 об/мин в течение 3 мин получают гомогенную дисперсную систему

рН 4,2 с размером частиц коллагена в дисперсной фазе 5 мкм. Полученную дисперсию разбавл ют 0,002 М буферной смесью рН 5.4-5,6 до О , 1-0,2 вес. % кол л areна , еще раз диспергируют 3 мин при 20000

об/мин и подают дл  циркул ции в систему, выключающую сосуд, перистальтический, насос, систему трубок диаметром 2-3 мм,, стенки которых  вл ютс  полупроницаемой мембрансэй. Перистальтический насос обеспечивает начальную скорость циркул ции дисперсии коллагена в системе 1,8 л/мин при начальном давлении на внутреннюю (рабочую) поверхность полупроницаемых трубок в 0,7 кг/см. По мере концентрировани  дисперсии скорость ее циркул ции сни жаетс  до 0,3 л/мин, а давление на рабочую поверхность полупроницаемых трубок возрастает до 1.8 кг/см .

Ультрафильтрацию заканчивают при

концентрации коллагена в дисперсии 0,75 вес.%.

Далее процесс идет в соответствии с прототипом: полученную дисперсию центрифугируют 15 мин при 1000 об/мин,

разливают на матрицы, повтор ющие,сферический контур переднего отрезка глаза, провод т воздушную сушку в пылезащитном шкафу 48 ч при 15°С и относительной влажности воздуха 40-50%. Готовые издеЛИЯ подвергают радиационнрй стерилизации в у-лучах при дозе 25 кГрей и мощности 5 кГрей/ч. Стерильность материала подтверждают контрольным бактериологическим исследованием готовых изделий,

Кислотно-щелочное срсто ние готовых изделий определ ют контрольной рН-метрией водной выт жки навески готовых изделий. Значение рН изделий из данного варианта 5,4. Количество иизкомолекул рных примеДМ

сей определ ют по формуле тос- ОО- где

Д М - изменение массы готовых изделий относительно их первоначальной массы Mi после промывки их в сверхчистой воде. Содержание низкомолекул рных примесей в готовом изделии дл  данного варианта составл ет 0,9%.

Приме р 2. Аналогичен примеру 1, за исключением того, что к 200 мл 1%-ного раствора коллагена в 0,25 М уксусной кислоте добавл ют 1,5 г едкого натра в форме 1-10%-ного раствора едкого натра. С помощью диспергатора при скорости вращени  ротора 10000 об/мин в течение 6 мин получают гомогенную дисперсную систему рН 5 с размером частиц коллагена в дисперсной фазе 25 мкм. Полученную дисперсию разбавл ют 0,002 М раствором ацетата натри  рН 7,2 до концентрации коллагена 0,10 ,2 вес.%, еще раз диспергируют при тех же услови х (б мин, 10000 об/мин) подвергают ультрафильтрации до концентрации коллагена в дисперсии не менее 0,65 вес.%, далее аналогично примеру 1.

Контрольна  рН-метри  водной выт жки навески готовых изделий показывает значение рН 6,8. Содержание низкомолекул рных примесей в готовых издели х составл ют 1-1,5%.

При М е р 3; Аналогичен примеру 1, за исключением того, что к 200 мл 1 %-ного раствора коллагена в 0,25 М уксусной кислоте добавл ют 2,5 г едкого натри  в форме 1-10%-ного раствора едкого натра. С помощью диспергатора при скорости вращени  ротора 20000 об/мин в течение 3 мин получают гомогенную дисперсную систему рН 8,6 с размером частиц в дисперсной фазе 5-10 мкм. Полученную дисперсию разбавл ют дистиллированной водой до концентрации коллагена 0,1-0,2 вес.%, ещё раз диспергируют при тех же услови х (3 мин, 20000 об/мИн), Ультрафильтрацию провод т аналогично примеру 1 до концентрации ко лагена-е дисперсии 0,65-0,75 вес.%. Далее к очищенной дисперсии коллагена до бавл ют дексазон из расчета 0,5 мг на каждое изделие При формовании и сушке примен ют вибрационное воздействие. Радиационную стерилизацию готовых изделий провод т при-19ё°С при дозе у-излучени  25 кГрей и мощности 5 кГр/ч. Сохранность / ексазона после стерилизации определ етс  на приборе изотахофор фирмы LKB и составл ет 98% от исходного количества . Контрольна  рН-метри  водной выт жки навески готовых изделий показывает значение рН 7,6.

Использование предлагаемого способа

изготовлени  коллагеновых покрытий дл  офтальмологии позвол ет существенно повысить как выход целевого продукта, так и степень очистки коллагена от низкомолекул рных примесей за счет последовательного использовани  в предлагаемом способе изоэлектрического осаждени  коллагена, диспергировани , 8-10 кратного разбавлени  дисперсии коллагена, циркул ции и концентрировани  дисперсии посредством

ультрафильтрации. Скорость очистки возрастает в 5-6 раз, а эффективность очистки в 5 раз по сравнению с прототипом.

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Способ изготовлени  коллагеновых покрытий дл  использовани  в офтальмологии , заключающийс  в том, что из склеры глаз животных выдел ют строму, промывают , обрабатывают щелочно-солевым раствором , нейтрализуют, промывают, обрабатывают уксусной кислотой, гомогенизируют , центрифугируют, полученный раствор коллагена фильтруют через стекл нный фильтр, удал ют низкомолекул рные примеси, повторно центрифугируют, раствор коллагена помещают в форму, высушивают , формуют и Стерилизуют, отличающийс  тем, что, с целью повышени  выхода и чистоты целевого продукта, после

   получани  фильтрации раствора коллагена и фильтрации через стекл нный фильтр производ т изоэлектрическое осаждение коллагена и диспергируют полученную смесь, а удаление низкомолекул рных примесей из дисперсии

   производ т путем ультрафильтрации.