SU1717156A1 - Штамм бактерий BacILLUS SUвFILIS дл получени препарата против возбудителей заболеваний хлопчатника - Google Patents

Штамм бактерий BacILLUS SUвFILIS дл получени препарата против возбудителей заболеваний хлопчатника Download PDF

Info

Publication number
SU1717156A1
SU1717156A1 SU904814336A SU4814336A SU1717156A1 SU 1717156 A1 SU1717156 A1 SU 1717156A1 SU 904814336 A SU904814336 A SU 904814336A SU 4814336 A SU4814336 A SU 4814336A SU 1717156 A1 SU1717156 A1 SU 1717156A1
Authority
SU
USSR - Soviet Union
Prior art keywords
strain
cotton
suspension
subtilis
cells
Prior art date
Application number
SU904814336A
Other languages
English (en)
Inventor
Валерий Вениаминович Смирнов
Магдан Янфаевич Менликиев
Семен Рафаилович Резник
Валентина Алексеевна Вьюницкая
Георгий Моисеевич Ваньянц
Мавжуда Хасановна Султанова
Абдураим Джумаев
Наджия Усмановна Шарипова
Original Assignee
Институт Микробиологии И Вирусологии Им.Д.К.Заболотного
Таджикский Сельскохозяйственный Институт
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Институт Микробиологии И Вирусологии Им.Д.К.Заболотного, Таджикский Сельскохозяйственный Институт filed Critical Институт Микробиологии И Вирусологии Им.Д.К.Заболотного
Priority to SU904814336A priority Critical patent/SU1717156A1/ru
Application granted granted Critical
Publication of SU1717156A1 publication Critical patent/SU1717156A1/ru

Links

Landscapes

  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

Использование: микробиологическа  промышленность, получение средств защиты растений, в частности хлопчатника, от возбудителей заболеваний. Штамм выращивают на сусло-агаре при рН 6.8-7,0 в течение 7-10 сут .при 28-32°С, смывают выросшие колонии физиологическим раствором и готов т суспензию с тиром (2-3)v «10 кл./мл. В суспензию внос т криолро- тектор (сахарозожелатиновую среду) и лио- филизируют. Дл  обработки сем н хлопчатника лифилизированную культуру разбавл ют водой до содержани  5,0«10 - 1, кл./м . Дл вбработки 1 т сем н хлопчатника используют 500-700 л рабочей суспензии. Препарат на основе штамма позвол ет защитить хлопчатник от возбудителей кормовой гнили на 93-94%, вертициллезного вилта на 85.2-86%. 7 табл.. со С

Description

Изобретение относитс  к сельскому хоз йству , а именно к защите растений хлопчатника от поражени  фито патогенными грибами.i
В качестве наиболее распространён-: ного метода предупреждени  грибных болезней хлопчатника используетс  протравливание сем н химическими препаратами (формалином, бропокотом, бропЬко- том с ксантаном, бропокотом с ГМТД). Известен способ предпосевной обработки сем н хлопчатника синтетическим препаратом с целью повышени  сем н.
Однако химические способы имеют р д существенных недостатков: высока  токсичность дл  человека и животных, накапливание в почве и растени х остаточных количеств  довитых веществ, сложна  технологи  протравливани , неэффективность против загнивани  сем н, гнили проростков и корневой гнили всходов; высока  сто- имостьидр.;
Известны биологические способы борьбы с различными болезн ми растений, в том числе вызываемыми грибами. Способ борьбы с черной ножкой, корневой гнилью, шей- ковой гнилью основан на использовании препарата из Irichoderma ha rzlanum T - 315 (АТСС № 20671).;
Однако они не эффективны дл  защиты растений хлопчатника от таких болезней, как вертициллеэный вилт, фузариозное ув дание и др.
Наиболее близким к изобретению  вл етс  способ применени  Bacillus polymyxa 9А дл  защиты растений от вертициллезноXI xl
сл о
го ув дани . В. polymyxa 9A, выделенна  из корней растений картофел , росших на участках , сильно зараженных Vertlclllium dahllae. обладает способностью подавл ть развитие вертициллезного ув дани  на таких культурах, как картофель и хлопчатник. В. polymyxa может быть использована в форме водных и неводных препаратов. Водные препараты содержат 105 - 109 кл/мл, а пасты Ю9 кл/мл. Неводные препараты включают дусты, смачивающие порошки , гранулы, эмульгоконцентраты. Рабочие составы могут примен тьс  в виде растворов , гранул, дуста. Чаще всего составы используют дл  непосредственной обработки семен и семенного материала, хот  не исключаетс  возможность обработки почЪы вокруг посадочного материала.
Однако данный способ не включает предупреждение таких болезней хлопчатника, как черна  корнева  гниль и фузариозное ув дание.
. Целью изобретени   вл етс  получение нового штамма бактерий, обладающего более широким спектром действи  к возбудител м заболеваний хлопчатника.
Поставленна  цель достигаетс  использованием дл  предпосевного увлажнени  сем н хлопчатника суспензии полученной новой живой культуры Bacillus subtilis 26D с содержанием 5 108 - 1«109 кл/мл, примен емой в количестве 0,5-0,7 л на 1 кг сем н при экспозиции 12-18 ч.
Штамм В.subtilis 26D получен из внутренних тканей стебл  здорового растени  хлопчатника в лабораторных услови х. После предварительной обработки и стерилизации поверхности стебл  стерильным скальпелем снимали кору, и небольшие кусочки стебл  помещали на поверхность питательного агара (картофельного агара) в чашку Петри. Чашки инкубировали при 28°С в течение 5-7 сут.
Штамм идентифицирован по определителю Берги (1984), на основании работ Gordon (1973), депонирован в коллекции- Всесоюзного научно-исследовательского института сельскохоз йственной микробиологии под NS 128. Штамм В. subtilis 26D имеет следующие основные культурально-морфологические и биохимические признаки. Грамположитель- ные подвижные аэробные спорообразую- щие палочки с закругленными концами, продуцирующие каталазу. Образуют эндоспоры , не раздувающие клетку. Размер клеток - 1.9x0,5 мкм; в мазках 18 ч культуры клетки расположены одиночно, попарно, реже в цепочки. Споры в клетке расположены центрально, размер спор 0,9x0,5 мкм.
При культивировании штамма на МПА в течение 24 ч при образуютс  складчатые колонии в зкой консистенции, телесного цвета, кра  колонии изрезаны, На среде
Громыко (сусло-агар + МПА 1:1), рН 6,8-7,0 после 24 ч термостатировани  при 37°С образует кремово-белые колонии, складчатые, с кратерообразным центром, консистенци  в зка , кра  колонии изрезанные. Культура
0 ферментирует глюкозу, арабинозу, ксилозу, мальтозу, галактозу, лактозу, маннит, сахарозу с образованием кислоты без газа; не разлагает дульцйт, рамнозу. Дает положительную реакцию Фогес-Проскауера, гидро5 лизует крахмал, желатину, не гидролизует мочевину; утилизирует цитрат, не использует пропионат. Не растет в анаэробных услови х , не образует включени  поли- / -оксимасл ной кислоты на среде МПА с
0 глюкозой.; не образует индол и сероводород . Не обладает лецитиназой, коагулазой, гиалуронидазой, Патогенными свойствами (токсическими, токсигенными, вирулентными ) при парентеральном и пероральном вве5 дении белым мышам не обладает.
Проверка безвредности осуществл лась следующим образом.
Лабораторным животным вводили фильтрат культуральной жидкости В.
0 subtilis 26D, выращенной в течение 10 сут на м со-пептонном бульоне при 28°С; суспензии клеток В. subtilis 26D, выращенной на м со-пептонном агаре при 28°С в течение 24 ч, суспензии инактивированных про5 греванием клеток В. subtilis 26D, выращенной в течение 24 ч на МПА при 28°С.
Проверку патогенности осуществл ли на белых мышах весом 18-20 г. Животным
0 вводили суспензии и фильтраты в желудок через зонд и в инъекци х.
В табл. f представлены результаты исследовани  токсичности фильтрата культуры В, subtilis 26D после роста на МПБ (токси5 генность культуры).
В табл. 2 приведены результаты введени  животным МПБ (контроль).
В табл. 3 приведены результаты исследовани  вирулентности культуры В. subtilis
0 26D, выращенной на МПА при 28°С в течение 24 ч.
В табл. 4 приведены результаты исследовани  токсичности инактивированных клеток культуры В. subtilis 26D.
5 Наблюдени  за животными проводили на прот жении 15 дней после окончани  курса инъекций или перорального введени . В период наблюдени  все животные были активны, хорошо поедали пищевые рационы , физиологические отправлени  у них не
нарушались, поведенческие реакции были обычными, изменений со стороны шерстного покрова не отмечалось. Динамика изменени  массы тела животных в опыте и контроле была сходной. Все подопытные и контрольные животные после окончани  срока наблюдени  были умерщвле ы, вскрыты, их органы подвергнуты макроскопическому изучению.
Результаты вскрыти  показали следую- щее.
Сердце обычной формы и величины, у подопытных животных такое же, как и у контрольных . Легкие по объему, строению долей у опытных и контрольных животных одинаковые; поверхности легких гладкие, доли легко отдел ютс  друг от друга, спа ек не отмечено. Желудок, петли тонкого и толстого кишечника внешне обычные, признаков воспалительных изменений не отмечено. При вскрытии просвета виден неизмененный (такой же. как и у контрольных животных) рисунок слизистых. Печень темно-красного цвета, среднего кровенаполнени , не увеличена. Доли отделены друг от друга, поверхности гладкие. Почки по размерам и форме, не отличаютс  у контрольных и опытных животных, поверхности гладкие, на разрезе виден четкий рисунок коркового и мозгового вещества. Селезенка не увеличена, обычной консистенции. На разрезе пульпа умеренно полнокровна, темно-красного цвета.
Введение суспензии живых, а также инактивированных клеток 24-часовой куль- туры В. subtilis 26D перорально в дозах 0,5- 1,0 млрд. микробных - клеток и внурибрюшинно в дозах 0,5-1,0 млрд. микробных клеток на мышь не вызвало у животных каких-либо признаков заболевани . Изучение внутренних органов животных не. вы вило у них признаков патологического процесса и изменений, регистрируемых макроскопически.
Введение мышам фильтрата среды рос- та (после культивировани  штамма В. subtilis 26D на м со-пептонном бульоне) не вы вило у животных патологического процесса , регистрируемого клинически или при макроскопическом изучении внутренних ор- ганов животных.
Таким образом, полученные данные дают основание отнести изученный штамм к 4-му классу по классификации, приведенной в Методических указани х МЗ СССР, Главного санэпидуправлени  Постановка исследований дл  обосновани  предельно допустимых концентраций производственных штаммов и на их основе готовых форм препаратов..., т.е. к микроорганизмам,
практически не обладающим аллергенным и общетоксическим действием.
Культура В. subtilis 26D пересеваетс  на среде Громыко (сусло-агар + МПА 1:1), сусло-агаре, среде Гаузе № 2; рН 6,8-7,0. Растет при 10-50°С, температурный оптимум 37°С.
Хранитс  культура на среде Громыко, либо среде Гаузе М 2, либо картофельном агаре в течение 2-3 мес при комнатной температуре , а под слоем стерильного минерального масла на указанных выше средах -неменее 1-2лёт. В лиофильновысушенном состо нии культура хранитс  до 3 лет и более . Дл  этого штамм В. subtilis 26D выращивают на среде Громыко или среде Гаузе № 2, или сусло-агаре в течение 5-7 сут при 28 или 37°С. С агаризованной среды биомасса снимаетс  физиологическим раствором . В качестве защитной среды используетс  сахарозо-желатиновый наполнитель . Температура замораживани  не выше -25°С, режим высушивани  от -25°С до 32°С в течение 32 ч.
После хранени  под минеральным маслом или в лиофилизированном состо нии культура образует однотипные колонии: на МПА - складчатые, в зкой консистенции, телесного цвета, кра  колонии изрезанные.
Антагонистические свойства. Антагонистическую активность В. subtilis 26D по отношению к фитопатогенным грибам определ ли методом отсроченного антагонизма , а именно радиальных штрихов. Штамм-антагонист засевали в центре чашки Петри на среду Гаузе №2. инкубировали при 28°С в течение 72 ч, затем радиальными штрихами подсевали тест-культуры, суспензии которых готовили в физиологическом растворе с содержанием 0,5 млрд. спор в 1 мл. Учет результатов проводили по величине зоны задержки роста тест-штамма в миллиметрах .
В табл. 5 приведены данные по антагонистической активности В. subtilis 26D по отношению к некоторым фитопатогенным грибам.
Как видно из приведенных в табл. 5 данных , штамм В. subtilis 26D обладает выраженной антифунгальной активностью в отношении грибов - возбудителей корневых гнилей, фузариозного ув дани , вертицил- лезного вилта.
Культуру В. subtilis 26D использовали дл  получени  препарата.
Препарат на основе В. subtilis 26D представл ет собой лиофилизированную взвесь культуры в физиологическом раство- ое NaCI с добавлением защитной среды, В
качестве защитной среды использовали 1% желатины и 1%сахарозы. Культуру В. subtilis 26D выращивали на среде сусло- агар (рН 6,8-7,0) в течение 7-10 сут при 28- 32°С. С агаризованной среды биомассу смывали физиологическим раствором Nad и готовили суспензию, содержащую 2-3-1011 клеток в 1 мл, Суспензию соедин ли с наполнителем (сахарозо-желатиновой средой ). Полученную взвесь разливали в емкости из нержавеющей стали по 300 мл и замораживали при -(25-30)°С в течение не менее 24 ч. Проводили лиофилизацию в камере в режиме от (-30) до 32°С в течение 32 ч. Высушенную биомассу помещали в полиэтиленовые пакеты и укупоривали гор чим способом.
Дл  обработки сем н хлопчатника бактериальную лиофилизированную культуру за 1-2 ч до начала обработки раствор ли в небольшом количестве водопроводной воды с целью оживлени  бактериальных спор и клеток. Затем из маточного раствора готовили рабочую суспензию, довод  титр до 5, - 1,0«109 кл/мл. Дл  обработки 1 т сем н необходимое приготовление 500-700 л рабочей суспензии. Обработку сем н производили либо в имеющейс  емкости, либо в специально приготовленной зацементированной  ме. Обработку начинали за 12-18 ч до начала сева. В емкость засыпали до 1 т сем н и поливали вручную из лейки. Необходимое количество рабочей суспензии использовали в 2-3 приема с интервалом в 4-6 ч, чтобы семена хорошо впитали раствор. Вслед за каждым увлажнением сем н их
тщательно перелопачивали и накрывали брезентом. Последнее увлажнение проводили перед посевом. Если посев задерживалс , семена подсушивали, рассыпав их слоем в 5-10 см, а непосредственно перед
внесением в грунт их увлажн ли водой.
Результаты предпосевной обработки сем н хлопчатника с целью предупреждени  поражени  растений грибными болезн ми , повышени  всхожести представлены
в табл. 6.
Вли ние В. subtilis 26D на прорастание сем н и пораженность корневыми гнил ми. В табл. 7 приведены результаты предпосевной обработки сем н хлопчатника с
целью предупреждени  поражени  растений корневыми гнил ми, вертициллезным вилтом, повышени  урожайности.
Таким образом, приведенные данные свидетельствуют о высокой эффективности
предлагаемого способа дл  предпосевной обработки сем н хлопчатника.

Claims (2)

  1. Формула изобретени  Штамм бактерий Bacillus subtilis ВНИ- ИСХМ 128 дл  получени  препарата против возбудителей заб -еваний хлопчатника .
    Т а б л и ц а 1
    35
    Таблица 2
    При. ме-чание.1. В качестве тест-культур использовали штаммы фитопатогенных грибов, изолированные из пораженных растений хлопчатника, выращенных в различных районах Таджикской ССР. Штамм Fusarium oxysporum 6365 получен из коллекции Института микробиологии и вирусологии АН УССР.
  2. 2. Врем  наблюдени  зон лизиса фитопатогенных грибов 3-10 сут.
    Та блица 6 Вли ние В. subtills 26D на прорастание сем н и пораженность корневыми гнил ми
    Таблица 3
    Таблиц а 4
    Таблица 5
    Та б л и ц а 7
    Вли ние В. subtllls 26D на пораженность растений хлопчатника . корневыми гнил ми, вертициллезным вилтом, повышение урожайности
SU904814336A 1990-02-22 1990-02-22 Штамм бактерий BacILLUS SUвFILIS дл получени препарата против возбудителей заболеваний хлопчатника SU1717156A1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SU904814336A SU1717156A1 (ru) 1990-02-22 1990-02-22 Штамм бактерий BacILLUS SUвFILIS дл получени препарата против возбудителей заболеваний хлопчатника

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SU904814336A SU1717156A1 (ru) 1990-02-22 1990-02-22 Штамм бактерий BacILLUS SUвFILIS дл получени препарата против возбудителей заболеваний хлопчатника

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SU1717156A1 true SU1717156A1 (ru) 1992-03-07

Family

ID=21508343

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SU904814336A SU1717156A1 (ru) 1990-02-22 1990-02-22 Штамм бактерий BacILLUS SUвFILIS дл получени препарата против возбудителей заболеваний хлопчатника

Country Status (1)

Country Link
SU (1) SU1717156A1 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104026153A (zh) * 2014-06-12 2014-09-10 河海大学 抑制芦蒿土传病原菌的芦蒿秸秆分解菌剂及其制备方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Патент US № 4663162. кл. А 01 N 63/00, 1986. *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104026153A (zh) * 2014-06-12 2014-09-10 河海大学 抑制芦蒿土传病原菌的芦蒿秸秆分解菌剂及其制备方法
CN104026153B (zh) * 2014-06-12 2016-01-06 河海大学 抑制芦蒿土传病原菌的芦蒿秸秆分解菌剂及其制备方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2942934B2 (ja) 殺線虫菌剤
JP3428658B2 (ja) 抗菌性微生物製剤、その製造方法及び処理方法
CN102311925B (zh) 一种植物内生真菌球毛壳菌株、微生物菌剂及其应用
CN106399159B (zh) 一种坚强芽孢杆菌菌剂及其制备方法与应用
CN103074271B (zh) 枯草芽孢杆菌yb-05、其微生物制剂及其应用
CN108277177B (zh) 细黄链霉菌固体发酵培养基、制备方法及其发酵方法、发酵产物、生防产品和应用
JPS59501695A (ja) ゲユマノミセス グラミニスによって引き起こされる病気の畑地防除の為にバクテリアをスクリ−ニングする方法及び該バクテリアの適用
BG67257B1 (bg) Бактериален щам bacillus amyloliquefaciens subsp. plantarum bs89 като средство за повишаване на продуктивността на растенията и тяхната защита срещу болести
HU220582B1 (hu) Készítmény és eljárás növénybetegségek elleni védelemhez
CN109182176A (zh) 一株暹罗芽孢杆菌及其在防治番茄根结线虫病上的应用
CN105439723A (zh) 一种用于农场现场发酵的解淀粉芽孢杆菌药肥及其应用
CN106701623B (zh) 一株拮抗枸杞根腐病的萎缩芽孢杆菌及其应用
CN106244490A (zh) 一种防治小麦全蚀病的复合微生物菌肥及其制备方法
CN111778173B (zh) 枯草芽孢杆菌Pro1A2、其菌剂和制备方法及在甜瓜栽培中的应用
RU2337955C1 (ru) Штамм бактерий bacillus subtilis, используемый для защиты растений от фитопатогенных грибов и бактерий
CN102604842B (zh) 产芥子酶的深绿木霉菌株及其应用
CN102154193A (zh) 一种诱导辣椒疫霉菌产生大量孢子囊的方法
CN109042742A (zh) 复合制剂用于防治土传害病的用途
RU2307158C2 (ru) ШТАММ БАКТЕРИЙ Bacillus subtilis М1, ОБЛАДАЮЩИЙ ФУНГИЦИДНОЙ И ФУНГИСТАТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ ПО ОТНОШЕНИЮ К ВОЗБУДИТЕЛЯМ БОЛЕЗНЕЙ КУЛЬТУРНЫХ РАСТЕНИЙ
JPH10276579A (ja) バチルス属微生物を用いた植物の生長促進剤および生長促進方法
SU1717156A1 (ru) Штамм бактерий BacILLUS SUвFILIS дл получени препарата против возбудителей заболеваний хлопчатника
CN105505825A (zh) 一种产抗生素的链霉菌txaf2及其应用
RU2099947C1 (ru) Биопрепарат фитоспорин для защиты растений от болезней
CA2055424A1 (en) Production of enhanced biocontrol agents
KR100616408B1 (ko) 라이조푸스 올리고스포러스을 포함하는 잔디생장촉진제 및이를 이용한 잔디 생장 촉진 방법