SU1692580A1 - Способ получени тул ремийного антигена - Google Patents
Способ получени тул ремийного антигена Download PDFInfo
- Publication number
- SU1692580A1 SU1692580A1 SU894676656A SU4676656A SU1692580A1 SU 1692580 A1 SU1692580 A1 SU 1692580A1 SU 894676656 A SU894676656 A SU 894676656A SU 4676656 A SU4676656 A SU 4676656A SU 1692580 A1 SU1692580 A1 SU 1692580A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- antigen
- preparation
- precipitate
- supernatant
- microbial
- Prior art date
Links
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Изобретение относитс к медицине, а именно к получению диагностических препаратов . Цель изобретени -повышение антигенной активности и специфичности препарата. Способ включает выращивание вирулентного штамма тул ремийного микроба на твердой питательной среде, экстрагирование антигена неионным детергентом Твин-80, отделение микробной массы центрифугированием и дополнительную очистку надосадочной жидкости ультрацентрифугированием с последующей гель-хроматографией раствора полученного осадка в 0,01 М аммоний-бикарбонатном буфере, содержащем додецилсульфат натри , на колонке с сефакрилом S-300, диализом антиген содержащих фракций, осаждением продукта этанолом и лиофилизацией. (Л С о. о ю ел 00 о
Description
Изобретение относитс к медицине, а именно к получению диагностических препаратов , и может быть использовано дл конструировани иммунохимических тест- систем дл обнаружени специфических противотул ремийных антител и дл постановки аллергической пробы.
Известны способы приготовлени антигенных препаратов из убитых формалином микробных клеток 1, из разрушенных ультразвуков микробных клеток 2 и из препаратов наружных мембран 3.
Известны способы получени разной степени очистки препаратов специфических антигенов водно-фенольной 4, водно- ацетоновой 5, и солевой 6 экстракции.
Недостатком указанных способов вл етс использование токсических дл человека веществ (фенола, эфира, ацетона), обработка которыми микробной массы может измен ть нативные свойства и экстра- гируемость бактериальных антигенов. Использование цельных микробных клеток или их фрагментов (наружные мембраны) или водно-солевых экстрактов в качестве специфического антигена нежелательно из-за возможности ложноположительных реакций, св занных с наличием неспецифических антигенов.
Известен способ получени тул ремий- ного антигена (тул ринлизата), включающий получение микробной массы, обработку ее детергентом в течение 2 ч при 37°С дл обеспечени лизиса и экстракции поверхностных антигенов тул ремийного микроба с последующим прогреванием в течение 10 мин при 90°С дл обеззараживани микробной массы и центрифугированием при ЮОООхд в течение 30 мин 7.
Недостатком способа вл етс низка степень очистки препарата специфического антигена от детергента, балластных бактериальных антигенов и нековалентно-св - занных липидов, не обеспечиваетс выход стандартизованного высокоактивного препарата .
Целью изобретени вл етс повышение антигенной активности и специфичности препарата.
В качестве исходного продукта дл получени специфического белково-липопо- лисахаридного антигена тул ремийного микроба используют взвесь вирулентных клеток возбудител тул ремии штамма Tr. tularensis 777. Культуру выращивают на желточном агаре Анциферова в течение 48 ч при 37°С. Затем после проверки на чистоту, путем микроскопировани , культуру смывают стерильным 0,9%-ным раствором хлорида натрир рН 7,2 и готов т микробную
взвесь в концентрации 20 млрд микробных клеток по ОСО мутности ГИСК имени Л.А,Тарасовича. К полученной взвеси стерильно добавл ют 1 % твина-80 до конечной
концентрации, выдерживают 2 ч при 37°С и прогревают 10 мин при 90°С на вод ной бане при периодическом перемешивании. Полученную микробную массу провер ют на стерильность и при отсутствии специфического роста провод т центрифугирование при ЮОООхд в течение 30 мин дл освобождени от неразрушенной микробной массы. Супернатант, содержащий экстрагированные антигены тул ремийного микроба,
подвергают ультрацентрифугированию при 105000хд в течение 2 ч при 4°С дл осаждени белково-липополисахаридного комплекса тул ремийного микроба, освобождени от детергента и низкомолекул рных соединений, Образовавшийс осадок ресуспендируют в небольшом количестве дистиллированной воды. Затем провод т окончательную очистку препарата, предварительно растворенного в 0,01 М аммоний-бикарбонатном буфере рН 8,5 с добавлением 2% додецилсульфата натри , дл полного растворени антигенного осадка , гельфильтрацией на колонке с севакри- лом S-300, уравновешенной 0,01 М
аммоний-ацетатным буфером в присутствии 0,1% додецилсульфата натри . Препарат элюируетс этим же буфером под контролем проточного спектрофотометра и самописца и собираетс в пробирки по 2 мл. Объедин ют фракции, содержащие целевой продукт, диализуют в течение суток против проточной воды и осаждают антиген добавлением к раствору дес ти объемов охлажденного до 4°С этанола, Выдерживают смесь в холодильнике в течение суток и центрифугируют в течение 40 мин при бОООхд. Осадок раствор ют в небольшом количестве дистиллированной воды и лиофильно высушивают. Полученный препарат вл етс комплексным белково-липополисахаридным антигеном . В его состав входит около 7% белка, 20% эквивалентов глюкозы (реакци с фенолом и концентрированной серной кислотой). Препарат дает положительную
качественную реакцию с Суданом черным на наличие липидов, практически свободен от примесей нуклеиновых кислот, Препарат вызывает сдвиг максимума поглощени карбоцианинового красител Stains all
5 (Serva, ФРГ) (метахроматический эффект) в коротковолновую часть спектра (472 нм), что характерно дл липополисзхаридов грамот- рицательных бактерий. Препарат иммуно- химически идентичен ЛПС, выделенному
водно-фенольной экстракцией, что следует
из сли ний полос преципитации антигена, полученного предлагаемым способом и известным 4.
По своей специфической активности в иммуноферментном анализе полученный очищенный препарат превосходит препарат , полученный по известному способу 7 в 16-32 раза.
Эритроцитарный диагностикум, приго- товленный сенсибилизацией предлагаемого антигена, также пригоден дл иммунохимических исследований.
При изучении биологических свойств отмечено, что полученный белково-липопо- лисахаридный антиген нетоксичен дл белых мышей, стимулирует выработку антител у кроликов до титра 1:1000000 - 1:8000000, при иммунизации неочищенным тул рин- лизатом 1:6400 - 1:512000, при иммунизации водно-фенольным ЛПС - до титра 1:6400 в иммуноферментном анализе. Кроме того, препарат при изучении In vivo обладает аллергенными свойствами (накожна аллергическа реакци до 15 мм по сравнению с реакцией на введение эквивалентной дозы коммерческого тул рин-ли- зата - 7 мм).
Claims (1)
- Формула изобретени Способ получени тул ремийного антигена , включающий культивирование тул ремийного микроба, отделение бактериальных клеток, обработку детергентом, стерилизацию прогреванием с последующим низкоскоростным центрифугированием и выделением надосадочной жидкости, содержащей целевой продукт, отличающийс тем, что, с целью повышени антигенной активности и специфичности препарата, провод т дополнительную очистку надосадочной жидкости ультрацентрифугированием при 105000хд в течение 2 ч, полученный осадок раствор ют в 0,01 М ам- моний-бикарбонатном буфере, содержащем додецилсульфат натри , затем очищают гельхроматографией на колонке с сефакрилом S-300, собирают фракции, содержащие античен, диализуют их, далее осаждают целевой продукт этанолом, отдел ют осадок центрифугированием, раствор ют его в дистиллированной воде и лиофилизуют.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU894676656A SU1692580A1 (ru) | 1989-04-11 | 1989-04-11 | Способ получени тул ремийного антигена |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU894676656A SU1692580A1 (ru) | 1989-04-11 | 1989-04-11 | Способ получени тул ремийного антигена |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU1692580A1 true SU1692580A1 (ru) | 1991-11-23 |
Family
ID=21440748
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU894676656A SU1692580A1 (ru) | 1989-04-11 | 1989-04-11 | Способ получени тул ремийного антигена |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SU (1) | SU1692580A1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2680598C1 (ru) * | 2018-01-10 | 2019-02-25 | Федеральное казённое учреждение здравоохранения "Иркутский ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ получения препаратов субклеточных фракций туляремийного микроба |
-
1989
- 1989-04-11 SU SU894676656A patent/SU1692580A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
1. Олсуфьев Н.Г. Таксономи , микробиологи и лабораторна диагностика возбудител тул ремии. - М.: Медицина, 1975. 2.Viljanen M.K., Nurml Т., Salmlnen A. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) with bacterial conjugat-antlgen from IgM, IgA and IgG antibodies to Fr. tularensls: comparison with bacterial agglutination test and ELISA with lipopollsaccharide antigen. - J.lnfect. DIs. 1983. v. 48, N 4, p. 715-720. 3.Bevanger L, Maeland J.A., Naess A.J. Agglutlnlns and antibodies to Franclsella tularensls outer membrane antigens in the early diagnosis of dlsense during an aetbreak of tularemla. - J. Clin. Microbiol. 1988, v. 26, N 3. p. 433-437. 4.Carlson H.E., Llndberg A.A., Llndberg G., Hedersteadt В., Karlsson K.A., Agell B.O. Enzyme-linked Immunosorbent assay for Immunologlcal diagnosis of human tularemla. - J. Clln. Microbiol, 1979, v. 10, N 5, p. 615-621. 5.Сухарь В.В. Выделение А-антигена тул ремийного микроба. - ЖМЭИ. 1973, Мг 1,0.41. 6.Сухарь В.В. Изучение антигенного состава некотор * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2680598C1 (ru) * | 2018-01-10 | 2019-02-25 | Федеральное казённое учреждение здравоохранения "Иркутский ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ получения препаратов субклеточных фракций туляремийного микроба |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Avery et al. | Studies on the chemical nature of the substance inducing transformation of pneumococcal types: induction of transformation by a desoxyribonucleic acid fraction isolated from pneumococcus type III | |
Avery et al. | Studies on the chemical nature of the substance inducing transformation of pneumococcal types. Inductions of transformation by a desoxyribonucleic acid fraction isolated from pneumococcus type III. | |
US4197290A (en) | Vaccine | |
Avery et al. | Studies on the Chemical Nature of the Substance Inducing Transformation of Pneumococcal Types: Induction of Transformation by a Desoxyribonucleic Acid Fraction Isolated from Pneumococcus Type III | |
CN104945527A (zh) | 一种半乳甘露聚糖抗原及其制备方法 | |
US6172220B1 (en) | Isolated algal lipopolysaccharides and use of same to inhibit endotoxin-initiated sepsis | |
CA1180291A (en) | Process for the production of immunobiological preparations applicable in the diagnosis, prevention and/or treatment of candida guilliermondii infections | |
SU1692580A1 (ru) | Способ получени тул ремийного антигена | |
FI74475C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av nya, ur klebsiella pneumoniae extraherade glykoproteiner. | |
US4666851A (en) | Specific mycoplasma membrane antigen and antibody and their clinical applications | |
Lind | Serological studies of mycobacteria by means of diffusion-in-gel techniques | |
RU2338375C2 (ru) | Способ хранения плазмы или сыворотки крови для получения иммуноглобулиновых и альбуминовых биопрепаратов | |
Vogle | The polysaccharides of Candida albicans. | |
RU2175558C1 (ru) | Способ получения сухого флуоресцирующего сальмонеллезного диагностикума | |
RU2105310C1 (ru) | Способ лечения синдрома приобретенного иммунного дефицита (спид) | |
US3627874A (en) | Vaccine preparation | |
Fairbrother | Handbook of filterable viruses | |
CN108396042B (zh) | 一种小分子可溶性肽聚糖的制备方法 | |
RU2135208C1 (ru) | Способ получения ви-антигена | |
RU2145353C1 (ru) | Штамм бактерий moraxella bovis "г97-вниви", используемый для изготовления диагностикумов и вакцин против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота | |
SU1750689A1 (ru) | Способ получени полисахаридно-белковой вакцины против NeISSeRIa меNINGIтIDIS серогруппы В | |
RU2236867C1 (ru) | Способ получения антигена возбудителя лихорадки ку | |
RU2199340C1 (ru) | Способ получения протективного внеклеточного антигена бруцелл, обладающего способностью провоцировать хронические формы бруцеллеза | |
SU889003A1 (ru) | Способ получени диагностической псевдотуберкулезной сыворотки | |
Corbel et al. | Isolation and properties of an RNA fraction present in Brucella culture supernatants |