RU2236867C1 - Способ получения антигена возбудителя лихорадки ку - Google Patents
Способ получения антигена возбудителя лихорадки ку Download PDFInfo
- Publication number
- RU2236867C1 RU2236867C1 RU2003107476/15A RU2003107476A RU2236867C1 RU 2236867 C1 RU2236867 C1 RU 2236867C1 RU 2003107476/15 A RU2003107476/15 A RU 2003107476/15A RU 2003107476 A RU2003107476 A RU 2003107476A RU 2236867 C1 RU2236867 C1 RU 2236867C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- acidified
- antigen
- added
- centrifuged
- fever
- Prior art date
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, в частности к микробиологии, и касается получения высокоактивного антигена из коксиелл Бернета для последующего его использования в диагностике лихорадки Ку. Сущность способа заключается в том, что после гомогенизации желточных мешков куриных эмбрионов, инфицированных аттенуированным штаммом M-44 C.burnetii, их обрабатывают 1-2 раза эфиром. Эфирную фазу удаляют, а в оставшуюся добавляют подкисленный формамид. Через 16-18 ч добавляют охлажденный подкисленный этанол, центрифугируют. К надосадку добавляют охлажденный подкисленный ацетон, затем взвесь центрифугируют, осадок растворяют в физиологическом растворе, рН 7,2. Техническим результатом является получение высокоактивного антигена возбудителя лихорадки Ку с высоким процентом выхода конечного продукта. 1 табл.
Description
Изобретение относится к медицине, в частности к микробиологии и касается получения высокоактивного антигена из коксиелл Бернета для последующего его использования в диагностике лихорадки Ку.
Решающую роль в диагностике лихорадки Ку играют серологические методы исследования (Горбачев Е.Н., Токаревич Н.К.// Журн. микробиол. - 1995. - №3. - С.99-102). РСК, НМФА, ИФА и др. являются широкоприменяемыми в клинических лабораториях, простыми и чувствительными методами. Эффективность этих тестов зависит от качества получаемых антигенных комплексов возбудителя, на основе которых в конечном счете получают диагностические иммуноглобулины. Зависимость чувствительности метода от качества антигенного комплекса приведена в работе О.Ю. Сосниной с соавт. (Журн.микробиол. - 1995. - №3. - С.59-62), в которой описаны подходы к разработке технологии получения корпускулярного антигена C.bumetii, предназначенного для выявления антител против возбудителя лихорадки Ку.
Основными этапами получения антигенов риккетсий и, в частности, C.bumetii являются культивирование их в куриных эмбрионах, инактивация, гомогенизация и центрифугирование. С целью повышения степени очистки и выхода антигена полученный после высокоскоростного центрифугирования осадок подвергают фильтрации через стеклянные или нитроцеллюлозные фильтры, обработке хлоридом магния, тритоном Х-100, п-октил-бета-Д-глюкопиранозидом и другими реагентами. Однако трудоемкость, многоступенчатость способов, необходимость использования дорогостоящих реагентов ограничили применение этих методик (Пантюхина А.Н., Петров В.Ф., Александрова Л.В.// Журн. микробиол. - 1998. - №2. - С.51-54., Яблонская В.Я., Тарасевич И.В., Дюйсалиева Р.Г. и др.// Вопр. риккетсиологии. - М., 1984. - С.87-89).
Наиболее близким аналогом предлагаемому способу является способ получения антигена риккетсий, разработанный В.А. Яблонской, И.В. Тарасевич и В.А. Макаровой (Авт. свид. SU (1) 1392689, 1986 г.), который предусматривает последовательную обработку полученного после центрифугирования гомогената осадка 0,3-1%-ным раствором трипсина, 4-10%-ным раствором полиэтиленгликоля с м.м. 4000 или 6000 в присутствии 0,1-0,4% на объем суспензии натрия сульфат декстрана 500 и затем 5-15% хлороформа.
Целью изобретения является получение высокоактивного антигена возбудителя лихорадки Ку (C.burnetii, штамм М-44) более экономичным, быстрым и простым методом.
Поставленная цель достигается тем, что для упрощения и ускорения способа получения высокоактивного антигена гомогенизированную взвесь обрабатывают в равном объеме эфиром, в дальнейшем подвергают воздействию подкисленного формамида в течение 16-18 ч, затем добавляют подкисленный охлажденный до (-10)-(-20)°С этанол, центрифугируют при 3000-4000 об/мин в течение 30 минут, в последующем осаждают антиген из надосадка с помощью подкисленного охлажденного ацетона, центрифугируют взвесь при 3000-4000 об/мин, растворяют белый осадок в физиологическом растворе и стандартизируют его по содержанию белка.
Пример 1. Получение высокоактивного антигена возбудителя лихорадки Ку по предлагаемому методу.
Для культивирования C.burnetii использовали 6-суточные растущие куриные эмбрионы (РКЭ). В желточные мешки (ж.м.) РКЭ вводили по 0,25 мл суспензии C.burnetii, (штамм М-44), в разведении 1:150. Зараженные РКЭ инкубировали при t +36°С и влажности 45%. На 9-е сутки после гибели >50% эмбрионов все РКЭ вскрыли и выделили ж.м., содержащие C.burnetii. Накопление коксиелл в выделенных ж.м. подтвердили МФА. Гомогенизировали в стеклянном флаконе с бусами и приготовили суспензию на забуференном физиологическом растворе в соотношении 1:4. Взвесь отмыли в равном объеме эфира и добавили формамид в соотношении 1:10, рН 5,0. Оставили на ночь и затем добавили подкисленный охлажденный до -10°С этанол. Центрифугировали при 3500 об/мин в течение 30 мин. Осадок промыли 70° этанолом и снова центрифугировали. Надосадки объединили и добавили подкисленный охлажденный ацетон в соотношении 1:5, рН 4,0. Осадок отделили центрифугированием при 3500 об/мин в течение 30 минут, добавили физиологический раствор (рН 7,2) до первоначального объема. Выход продукта составил 300 мг влажного веса антигена риккетсий из 1 г овокультуры C.burnetii.
Пример 2. Получение антигена возбудителя лихорадки Ку по методу Яблонской В.А. и соавт. На 9-е сутки после заражения (пример 1) к желточным мешкам добавляли гипертонический раствор КСl и 0,5% формалина в конечной концентрации из расчета 3 мл на 1 г и выдерживали 15 суток. Гомогенизировали, обрабатывали трипсином и полученную взвесь подвергали высокоскоростному центрифугированию с целью осаждения C.burnetii. Осадок ресуспендировали в физиологическом растворе и проводили очистку ПЭГом по описанной в прототипе методике. Выход продукта составил 3,5 мг влажного веса чистых риккетсий из 1 г овокультуры C.burnetii.
Пример 3. Контрольный препарат готовили из неинфицированных желточных мешков аналогичным способом, описанным в примере 1.
Результаты сравнения активности полученных антигенов представлены в таблице.
Таким образом, стало возможным получение антигена в течение суток. Выход антигена по разработанному способу составил 30%. Титр антигена в РСК -1:256, в ТИФА - 1:1280.
Предлагаемый способ получения антигена C.burnetii прост, доступен, нетрудоемок, не требует высокоскоростного центрифугирования, многоэтапной очистки, длительного времени и позволяет получить высокий процент выхода конечного продукта.
Рекомендуется для диагностики лихорадки Ку.
Claims (1)
- Способ получения антигена возбудителя лихорадки Ку, включающий культивирование C.burnetii (штамм М-44) в куриных эмбрионах, гомогенизацию полученной биомассы, центрифугирование и выделение антигена, отличающийся тем, что гомогенизированную взвесь обрабатывают в равном объеме эфиром, в дальнейшем подвергают воздействию подкисленного формамида в течение 16-18 ч, затем добавляют подкисленный охлажденный до (-10)-(-20)°С этанол, центрифугируют при 3000-4000 об/мин в течение 30 мин, в последующем осаждают антиген из надосадка с помощью подкисленного охлажденного ацетона, центрифугируют взвесь при 3000-4000 об/мин, растворяют белый осадок в физиологическом растворе и стандартизируют его по содержанию белка.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2003107476/15A RU2236867C1 (ru) | 2003-03-18 | 2003-03-18 | Способ получения антигена возбудителя лихорадки ку |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2003107476/15A RU2236867C1 (ru) | 2003-03-18 | 2003-03-18 | Способ получения антигена возбудителя лихорадки ку |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2003107476A RU2003107476A (ru) | 2004-09-10 |
RU2236867C1 true RU2236867C1 (ru) | 2004-09-27 |
Family
ID=33433646
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2003107476/15A RU2236867C1 (ru) | 2003-03-18 | 2003-03-18 | Способ получения антигена возбудителя лихорадки ку |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2236867C1 (ru) |
-
2003
- 2003-03-18 RU RU2003107476/15A patent/RU2236867C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
SPICER D.S. et al. Preparation of phase 1 Q fever antigen suitable for vaccine use, Appl. Environ. Microbiol., 1976, Jul. 32(1), р.85-88. * |
СОСНИНА О.Ю. Разработка технологии производства антигена Coxiella Burnetii для реакции связывания комплемента, метода флуоресцирующих антител и иммунофлуориметрического анализа. Автореф. канд дисс. - Пермь, 1999. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
York et al. | A new member of the psittacosis-lymphogranuloma group of viruses that causes infection in calves | |
Wiebe et al. | Isolation and characterization of two cell types of Coxiella burneti phase I | |
JPH0450531B2 (ru) | ||
McLaughlin et al. | Studies in marine biology. II. In vitro culture of zooxanthellae. | |
Cravitz et al. | Immunologic studies with Malleomyces mallei and Malleomyces pseudomallei. I. Serological relationships between M. mallei and M. pseudomallei | |
Whang et al. | Immunogenicity of the common enterobacterial antigen produced by smooth and rough strains | |
RU2236867C1 (ru) | Способ получения антигена возбудителя лихорадки ку | |
CA1050423A (en) | Gonococcal pili, processes for the preparation thereof | |
Pinheiro et al. | Haemorrhagic syndrome of Altamira | |
US4696896A (en) | Gonococcal Pili processes for the preparation thereof and the use thereof for the detection of and prevention of infections caused by Neisseria gonorrhoeae | |
NL8104979A (nl) | Werkwijze voor de bereiding van immunobiologische preparaten, toe te passen bij de diagnose , het voorkomen en/of het behandelen van candida guilliermondii infecties. | |
Bengtson | Immunological relationships between the rickettsiae of Australian and American" Q" fever | |
Theodoridis | Fluorescent antibody studies on ephemeral fever virus | |
SU1692580A1 (ru) | Способ получени тул ремийного антигена | |
Dutta et al. | The effect of gastrointestinal enzymes on cholera toxin | |
JPS6384484A (ja) | 特殊なマイコプラズマ膜抗原および抗体とその臨床的応用 | |
SU1673973A1 (ru) | Способ диагностики заболеваний растений, вызванных РSеUDомоNаS SYRINGae 1у серогруппы | |
RU2802251C1 (ru) | Вакцинная композиция для профилактики энзоотического аборта у овец | |
RU2798283C1 (ru) | Штамм Chlamydia abortus "Chlamydia VNITIBP-21" для производства иммунобиологических лекарственных препаратов | |
RU2175558C1 (ru) | Способ получения сухого флуоресцирующего сальмонеллезного диагностикума | |
SU889003A1 (ru) | Способ получени диагностической псевдотуберкулезной сыворотки | |
RU2281501C1 (ru) | СПОСОБ ЭКСПРЕСС-ОБНАРУЖЕНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ ВНУТРИБОЛЬНИЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ Burkholderia cepacia И ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ЕГО ОТ ДРУГИХ ВИДОВ БУРКХОЛЬДЕРИЙ И ПСЕВДОМОНАД | |
Yager et al. | Domestic Fowl—Source of High Titer P. tularensis Serum for the Fluorescent Antibody Technic | |
RU2188036C1 (ru) | Способ получения диагностикума эритроцитарного антигенного сапного | |
Ionesco-Mihaiesti | Studies on the Twort-d'Herelle Phenomenon |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20050319 |