SU1464087A1

SU1464087A1 - Способ диагностики алкогольной миокардиодистрофии

Info

Publication number: SU1464087A1
Application number: SU864033002A
Authority: SU
Inventors: Екатерина Петровна Москаленко; Агнесса Георгиевна Можайцева; Ирина Анатольевна Кленова; Олег Николаевич Кобзарь
Original assignee: Ростовский медицинский институт
Priority date: 1986-03-14
Filing date: 1986-03-14
Publication date: 1989-03-07

Abstract

Изобретение относитс к иммунологии и может быть использовано в кардиологии. Цель изобретени - повышение точности диагностики алко гольной миркардиодистрофии. Способ диагностики алкогольной миокардиоди™ атрофии заключаетс в том, что из исследуемой сьшоротки крови путем ад- сорбиии удал ют антитела к здоровому сердцу и сердцу, пораженному атеросклерозом . Затем с помощью реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) определ ют антитела к миокарду, пораженному алкогольной миокардиодист- рофией, специфичность которой подт тверждают реакцией торможени пассивной гемагглютинащш (РТПГА), и при уменьшении титров антител в РТПГА по сравнению с РПГА в четыре и более раз результат анализа считают положительным , что позвол ет диагностировать алкогольную миокардиодистро- фию. Предлагаемый способ обеспечивает с высокую точность диагностики алко- гольной миокардиодистрофии (89,2%). (Л

Description

1

Изобретение относитс к медицине, а именно к нескольким смежным дисциплинам - кардиологии, иммунологии, и может быть применено дл диагностики алкогольного поражени сердечной мышцы (алкогольной миокардиодистрофии).

Цель изобретени - повышение точности способа диагностики алкогольной миокардиодистрофии.

Способ осуществл ют следующим об- разом.

Сыворотки больных с подозрением на на диагноз алкогольной кардиомиопатии (миокардиодистрофии) прогревают при 56°С 30 мин. После отстаивани добавл ют взвесь 50%-ных формалиннзирован- ных эритроцитов дл адсорбции в :ко- личестве мл на 1,0 ,мл сыворотки. Смесь встр хивают и оставл ют на 18 ч

2

при . Дл вы влени антител к сердцу, пораженному алкогольной мио- кардиодистрофией, сыворотки больных, предварительно инактивированные и адсорбированные формалинизированными эритроцитами барана, последовательно истощали зритроцитарИым диагностику- мом, содержащим антиген нормального сердца, и эритроцитарным .диагности- кумом, содержащим антиген сердца, пораженного атеросклерозом. Количественное соотношение сьшоротки и диаг- ностикума 1:3, длительность истощени 60 мин, температура истощени 37°С, Полноту истощени сыворотки больного провер ли в РПГА с эритроцитами, сенсибилизированными антигенами здорового сердца и эритроцитами, сенсибилизированными антигенами сердца, пора1

О 00

женного атеросклерозом. Адсорбированные таким образом сыворотки исследуют в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) и реакции торможени пассивной геь агглютинации (РТПГА) с препаратом формашинизированных эритроцитов барана , сенсибилизированных антигенами, выделенныкл из сердца, пораженного

ра переноситс в следующую лунку. Таким способом производ тс титрование - разведением кратностью, равной двум, и получение р да разведений испытуемой сьиюротки от 1:2 до 1: :256, последн лунка служит-контролем опытного диагностикума. Доведенный до рабочего разведени (1 мл

алкогольной миокардиодистрофией. Пре--|о диагностикума и 3 мл стандартно-соле- парат представл ет собой 0,6%-ную вой смеси) опытный диагностикум ка- взвеоь танзированных эритроцитов формалинизированных по модифицированному методу Чизмеса в модификации

пельницей с мерной насадкой вноситс в каждую лунку. Контрольный диагностикум провер ют с исходным разведепельницей с мерной насадкой вноситс в каждую лунку. Контрольный диагностикум провер ют с исходным разведеЛеви и сенсибилизированных соответст-15 нием сыворотки. Осторожным покачивара переноситс в следующую лунку. Таким способом производ тс титрование - разведением кратностью, равной двум, и получение р да разведений испытуемой сьиюротки от 1:2 до 1: :256, последн лунка служит-контролем опытного диагностикума. Доведенный до рабочего разведени (1 мл

диагностикума и 3 мл стандартно-соле- вой смеси) опытный диагностикум ка-

пельницей с мерной насадкой вноситс в каждую лунку. Контрольный диагностикум провер ют с исходным разведением сыворотки. Осторожным покачива

вующими антигенньми комплексами, выделенными из сердца (50%-ные формали- низнрованные эритроциты обрабатывают 0,3% раствора танина при 37°С в течение 40 мин. Танизированные бараньи jn эритроциты отмывают дважды стандарт г; ным солевым, раствором (0,9%. NaCl -i- + 0,45 в 1 л) . Сенсибилизаци эритроцитов антигенными комплексами проводитс при 37 С в..течениег5 жат на самом дне лунки;

- .перех

ные формы, частична агглютинаци широкое колечко, иногда по краю

40 мин. Рекомендуема доза антигена 20 мкг/мл по белку) позвол ет полу-;. чать диагностикумы с наибольшей чув- заметна агглютинаци . ствительностБю. После окончани сен- Дл подтверждени специфичности сибилизации эритроциты два раза отмы-зо каждого положительного результата вают смесью ССР. Третий раз отмьгоают РПГА примен ют РТПГА. смесью ССР с бычьим сывороточным альбумином в соотношении (100 мл ССР - 28 мг БСА). Осадок эритроцитов суспендируют в 10 мл смеси ССР и БСА и добавл ют 0,37% -/раствора формалина . Кажда сери препарата содержит

35

К серии двукратных разведений испытуемой сыворотки, аналогичных дл РПГА, добавл ют 0,025 мл рабоч го разведени антигена (1:10 при н личии 1500 мкг/мл белка по Лоури в исходном антигене). К смеси сыворо ки и антигена через 30 мин инкубаци при -37 С добавл ют диагностикум по

опытный и контрольный диагностикумы, приготовленные из одной серии формалинизированных эритроцитов. Контроль-.,, 0,025 мл:. Шкала учета не отличаетс

45

ньм препарат отличаетс от опытного тем, что не проходит обработки антигеном .

Вы вл емые антитела в титре 1:8 и выше свидетельствуют о наличии у больного поражени миокарда, св занг-с ного с алкогольной интоксикацией.

Техника постановки реакции состоит в разливе раствора дл реакдаи (стандартно-солевого раствора) капельницей с мерной на 0,025 мл насадкой во все лунки пластины микро- титратора Такачи. Прокгшенными и остуженными приспособлени ми дл разбавлени исследуема сьшоротка вно- gg ситс в раствор первой лунки. Вращением приспособлени дл разбавлени достигаетс перемешивание и обеспечиваетс захват 0.025 мл смеси,

от прин той дл РПГА. В качестве об зательного контрол входит постанов ка РПГА и РТПГА с сывороткой больны с заведомо известным диагнозом.

Антиген дл постановки РПГА получали -6 -нафтоловым методом. Дл выделени антигенов использовали ткань нормального сердца, вз того от трупа человека, погибшего от травмы, а также патологически измененного серд ца, вз того от трупа пациента, страдавшего атеросклерозом, а также от трупа больного, длительное врем страдавшего хроническим алкоголизмом с поражением сердца.

Ткань брали не подднее 12 ч после смерти, очищали от жира и кровеносны сосудов, гомогенизировали, проводили экстракв дю /5-нафтолом и этиловым

нием довод т смесь до/гомогенного .состо ни в кгикдой лунке и оставл ют пластину на неподвижной поверхности.

Учет результатов РПГА провод т через 1), ч по следукщей схеме: + - положительна РПГА, эритроциты .равномерно устилают всю сферу лунки; - - отрицательна РПГА, эритроциты равным (колечком или пуговкой .переходифичности зультата

заметна агглютинаци . Дл подтверждени специфичности каждого положительного результата РПГА примен ют РТПГА.

К серии двукратных разведений испытуемой сыворотки, аналогичных дл РПГА, добавл ют 0,025 мл рабочего разведени антигена (1:10 при наличии 1500 мкг/мл белка по Лоури в исходном антигене). К смеси сыворотки и антигена через 30 мин инкубации при -37 С добавл ют диагностикум по

5

g

0

от прин той дл РПГА. В качестве об зательного контрол входит постанов- . ка РПГА и РТПГА с сывороткой больных с заведомо известным диагнозом.

Антиген дл постановки РПГА получали -6 -нафтоловым методом. Дл выделени антигенов использовали ткань нормального сердца, вз того от трупа человека, погибшего от травмы, а также патологически измененного сердца , вз того от трупа пациента, страдавшего атеросклерозом, а также от трупа больного, длительное врем страдавшего хроническим алкоголизмом с поражением сердца.

Ткань брали не подднее 12 ч после смерти, очищали от жира и кровеносных сосудов, гомогенизировали, проводили экстракв дю /5-нафтолом и этиловым

спиртом при в течение 30 мин и центрифугировали при 27000 об/мин. Супернатант многократно осаждали ацетоном и этиловым спиртом. Полученный антиген подвергали дальнейшей очистке методом колоночной гель-хроматографии на сефадексе Ж-200. Антиген , выделенный из пораженного алкоголем сердца, представл ет собой ли- пополисахаридопептидньй комплекс без свободного липида, полученный /ь-наф- толовым методом. Содержание белка в нем, .определ емого по Лоури, составл ет 450± 38 мкг на 1 мл, В диск- электрофорезе в 7,5% ПААГ он содержит 11 белковых зон. Значение белковых зон следующее: 0, 0,02-, 0,1-, 0,12; 0,-26; 0,44,40,52, 0,7; 0,82; 0,9; 0,99,

Пример. .Больной П,, госпитализирован в кардиологическое отделение областной больницы с диагнозом: ИБС, атеросклеротический кардиосклероз . Врач по косвенным признакам (тремор конечностей, гипереми лица, гипергидролиз) заподозрил алкогольную миокардиодистрофию. Венозна кровь больного в количестве 10 мл была направлена на иммунологическое исследование . Из крови общеприн тым методом готовили сыворотку, которую прогревали при 56°С в течение 30 мин, а затем

адсорбировали 50%-ным формалинизиро- ванными эритроцитами из расчета

сенсибилизированных антигенныьм комплексами , выделенными из ткани сердца, пораженного атеросклерозом. Титр этой реакции оказалс равным 1:64, Затем сыворотку адсорбировали антигеном атеросклероза аналогично yкaзaннo y. Сыворотку больного ; провер ли на пол ноту адсорбции. Дл этого сыворотку, адсорбированную антигенами, полученными от больного с кардиосклерозом и здорового, погибшего от травмы, исследовали последовательно в РИГА с соответствующими диагностикумами. Если титр в РИГА равен или менее 4, то приступали к следующему этапу исследовани . После этого сыворотку исследовали в РИГА с препаратом фор- малинизированных эритроцитов, сен- сибилизированньк антигенами, выделенными из сердца, пораженного алкогольной миокардиодистрофией. Титр РПГА оказалс равен 1:t28. Специфичность этой реакции подтверждали в РТПГА с использованием антигена алкогольной миокардиодистрофии. Реакции ставили в двух параллельных р дах полистироловой пластины. Сыворотку титровали в обоих р дах, после чего, в лунки первого р да добавл ли по одной капле цитрата, в лунки второго р да по одной капле антигена (из расчета 3 мкг по белку в 0,025 мл антигена), Пластину оставл ли на 130 мин при ,. а затем в каждую

0,025 мл, 50% бараньих эритроцитов на 35 дунку обоих р дов добавл ли .диагностикум алкогольной миокардиодистрофии

Сыворотку с эритг о.

на 1 мл сыворотки

роцитами оставл ли на 24 ч при +4 С, .затем эритроциты удал ли центрифугиг рованием. Обработанную сыворотку исследовали в РПГА на наличие антител к антигенам нормального сердца. Дл этого использовали препарат фармали- низированных эритроцитов барана, которые сенсибилизировали антигенными субстанци ми, вьщеленными из сердца здорового человека, погибшего от травмы. Результат этой реакции оказалс положительным. Титр РИГА равн лс 1:32. Затем сыворотку этого больного адсорбировали антигенами нормального сердца. Дл этого 3 мл диагностикума нормального сердца ; центрифугировали 5 мин при 6000 об/ /мин, надосадок сливали, а к осадцсу добавл ли 1 мл сыворотки больного П. взбалтывали и оставл ли в холодильнике на сутки. Затем сыворотку отсасывали и исследовали в РПГА с препаратом формалинизированных эритроцитов.

10

15

640876

сенсибилизированных антигенныьм комплексами , выделенными из ткани сердца, пораженного атеросклерозом. Титр этой реакции оказалс равным 1:64, Затем сыворотку адсорбировали антигеном атеросклероза аналогично yкaзaннo y. Сыворотку больного ; провер ли на пол . ноту адсорбции. Дл этого сыворотку, адсорбированную антигенами, полученными от больного с кардиосклерозом и здорового, погибшего от травмы, исследовали последовательно в РИГА с соответствующими диагностикумами. Если титр в РИГА равен или менее 4, то приступали к следующему этапу исследовани . После этого сыворотку исследовали в РИГА с препаратом фор- малинизированных эритроцитов, сен- сибилизированньк антигенами, выделенными из сердца, пораженного алкогольной миокардиодистрофией. Титр РПГА оказалс равен 1:t28. Специфичность этой реакции подтверждали в РТПГА с использованием антигена алкогольной миокардиодистрофии. Реакции ставили в двух параллельных р дах полистироловой пластины. Сыворотку титровали в обоих р дах, после чего, в лунки первого р да добавл ли по одной капле цитрата, в лунки второго р да по одной капле антигена (из расчета 3 мкг по белку в 0,025 мл антигена), Пластину оставл ли на 130 мин при ,. а затем в каждую

20

25

30

дунку обоих р дов добавл ли .диагнос

тикум алкогольной миокардиодистрофии.

Учет реакции вели через 3 ч. Титр в РПГА оказалс равен 1:128, титр в РТПГА 1:32. Уменьшение титра РТПГА по сравнению с титром РПГА более чем в 4 раза считаетс признаком специфичности . В результате такого исследовани сыворотки крови больному П, поставили диагноз алкогольной миокар- диодистрофии.

Предлагаемый способ обладает высокой чувствительностью и специфичностью , позвол ющей с выоской степенью достоверности (89,2%) диагностировать у больных поражение сердца алкогольной этиологии.

Claims

Формула изобретени

Способ диагностики алкогольной миокардиодистрофии путем исследовани организма больного, отличающийс тем, что, с целью повышени точности способа, исследуют

7 14640878

сыворотку 1фови путем адсорбции еереакции пассивной гемагглютйкации антиге ами сердечной ткани, получен-и в реакции торможени пассивной ге- ной -от здорового лица и больного агглютинации, сравнивают титры антиатеросклерозом , далее определ ют аи-g тел и при наличии различий показате- титела миокарда, полученноголей в 4 и более раз диагностируют от больных миокардиодистро ей валкогольную миокардиодистрофию.