SU833211A1 - Способ диагностики дизентерии - Google Patents

Description

- (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ДИЗЕНТЕРИИ

Изобретение относитс  к медицине, а именно клинической иммунологии.

Известен способ диагностики дизентерии путем проведени  реакции между исследуемой сывороткой крови и эритроцитарным диагностикумом с последующим определением титров антител 1 и 2.

Однако известный способ не обеспечивает высокой точности.

Цель изобретени  - повышение точности способа.

Указанна  цель достигаетс , тем, что способ диагностики дизентерии осуществл ют путем проведени  реакции между исследуемой сывороткой крови и эритроцитарным диагностикумом с последующим определением титров антител, в качестве эритроцитарного диагностикума используют эритроциты , сенсибилизированные К-антигеном шигелл Зонне и при титре К-антител выше 1:160 диагносцируют дизентерию.

Поверхностный К-антиген Зонне получают путем препаративного ультрацентрифугировани  из антигена Баувена указанных бактерий таким образом.

Убитые, и высушенные ацетоном бактерии Зонне (80-90/о R-форм бактерий в попул ции ) экстрагируют 1 н. трихлоруксуской кислотой по прин той методике. Антиген Баувена, разведенный в физиологическом растворе, подвергают ультрацентри .фугированию при 300000 в течение 4 ч. Надосадочную жидкость лиофильно высушивают . Выход К-антигена составл ет около . 10%. При иммуноэлектрофоретическом изучении К-антигена он образует одну линию преципитации с сывороткой против живых бактерий Зонне и не реагирует с О-антисывороткой (120°С, 2 ч) этих бактерий. Препарат представл ет собой полисахарид (более 80%) с небольшим содержанием (в виде следов) липидов и протеина. Этим антигеном сенсибилизируют формалинизированные эритроциты и таким образом получают эритроцитарный диагностикум Зонне. Дл  получени  эритроцитарного диагностикума 1 мл 5%-ной взвеси формалинизи-. рованных обычным способом бараньих эрит- роцитов прибавл ют к 9 мл забуференного физиологического раствора (ЗФР) с рН 6,4 и I мл раствора (0,1 мг/мл) К-антигена в 0,9%-ном растворе NaCl. Смесь инкубируют 30 мин при 37°С в термостате, затем эритроциты трижды отмывают ЗФР с рН 7,2

при. центрифугировании. Осадок нагруженных эритроцитов ресуепендируют в 5 мл ЗФР с рН 7,2, и эту смесь используют дл  постановки РИГА.

Пример. Больной А находитс  в стационаре с предположительным диагнозом дизентери . Реакцию провод т следующим образом.

На полистироловые пластины с углублени ми (или плашки из аппарата Токачи) нанос т 2 р да по 1-2 капли серийных двукратных разведений с,ыворотки крови больного (титрование можно производить петл ми в аппарате Токачи). Затем к каждому разведению сыворотки первого р да добавл ют по I-2 капли эритроцитарного К-Диагностикума Зонне, второго р да - эритроцитарного (коммерческого) диагностикума Флекснера. Пластины осторожно встр хивают и помещают в термостат при 37°С на 1 ч, перемещива  через 30 мин. Учет результатов, провод т через ч после инкубации и через 18 ч выдержки пластин во влажной камере. Реакцию оценивают по 4-крестовой системе (+4--f+, -t- + +, +-f, +, -). За титр антител принимают максимальное разведение испытуемой сыворртки, дающее чёткую агглютинацию эритрйагдтов на -f +.

Контрол ми .служат несенсибилизированные формалинизированные эритроциты с ЗФР рН 7,2; несенсибилизированные формалинизированные .эритроциты с Сывороткой крови больного в первых 3-4 разведени х; сенсибилизированные К-антигеном Зонне формалинизированные эритроциты с ЗФР рН 7,2 и эритроциты, сенсибилизированные о-антигеном Флекснера 2а, с ЗФР рН 7,2.

Испытание сыворотки крови больного А при использовании эритроцитарного К-Диагностикума Зонне позволило в течение 3 ч вы вить антитела к поверхностному К-антигену шигелл Зонне в титре 1:1280. При использовании коммерческого диагностикума Зонне антитела в сыворотке крови данного

больного вы влены в титре 1:80, к эритроцитарному диагностикуму Флекснера - в титре 1:40.

Предлагаемый, способ определени  Кантител позвол ет показать их высокий уровень в сыворотке крови больного при от-Сутствии специфических антител к шигеллам Флекснера.;

Предлагаемый способ позвол ет быстро и точно в течение 3 ч индентифицировать дизентерийную инфекцию и определить вид

возбудител , вызвашего данное заболевание . Метод высокочувствителен, специфичен , информативен.

Claims (2)

1.Методические указани  по клинике, диагностике и лечению взрослых больных дизентерией. М., 1978.

2.Сумароков А. А. и др. Оценка диагностической эффективности антигенных препаратов из шигелл Зонне. ЖМЭИ, 1977, № 11, с. 79-86.