SU1428206A3

SU1428206A3 - Способ получени производных неокарзиностатина

Info

Publication number: SU1428206A3
Application number: SU843783009A
Authority: SU
Inventors: Маеда Хироси; Канамару Риуносуке; Исида Накао; Еситаке Тосихико; Уеда Минору
Original assignee: Курарей Ко.,Лтд (Фирма); Яманоути Фармасьютикал Ко.,Лтд (Фирма); Каяку Антибиотикс Рисерч Ко.,Лтд (Фирма); Хироси Маеда (Фирма)
Priority date: 1983-08-08
Filing date: 1984-08-07
Publication date: 1988-09-30
Also published as: KR860001965B1; EP0136791A3; ATE41163T1; JPS6075432A; ES534941A0; US4782113A; KR850004396A; JPH0133119B2; EP0136791B1; ES8606410A1; EP0136791A2; DE3477005D1; CA1240315A

Abstract

Изобретение относитс к способу получени производных неокарзиноста- тина формулы БуСМА-НКС-БуСМА, где ИКС - остаток неокарзиностатина (2+), в котором один атом И:удален из каждой первичной аминогруппы в остатке аланина в N-конце НКС и в остатке лизина в 20-й позиции от 1 -конца НКС. БуСМА(1+) частично этерифицирован- ный бутанолом сополимерный остаток стирола и малеиновой кислоты со средней мол. массой 1480-1660 и отношением мол. массы к среднечисловой мол. массе 1,10-1,18x10 , состо щий из структурных фрагментов: а)стирола.

Description

Изобретение относитс к способу получени производных неокарзиноста- тина - новых биологически активных соединений, которые могут найти при менение в медицине,

Цель изобретени - получение новых производных, неокарзиностатина, менее токсичных, обладающих высокой противоопухолевой активностью при внутриартериальном применении, повышенной жирорастворимостью.

На фиг. l-e приведены кривые, по сн ющие предлагаемый способ.

Пример 1. А, Полимеризаци сополимера стирола и малеинового ангидрида . 30 л кумола загружают в аппарат высокого давлени с внутренним объемом 150 л, в который также подают однородный раствор, содержащий 3,5 кг малеинового ангидри5з;а, 20 л кумола, 3,7 кг стирола и 200 г перекиси бензоила-, подачу осуществл ют непрерывно в течение 65 мин, одновременно смесь нагревают до 150 С. После загрузки осуществл ют переме- щивание в течение 60 мин при 150°С, реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, затем в нее добавл ют 30 л н-гексана, чтобы обра- зованный полимер выпал в осадок, жидкую фазу сливают, получа таким образом осажденньй полимер. После измельчени полимера его промывают н-гексаном,а затем сушат. Выход полу ченного полимера составил 7,3 кг. Среднечисловой молекул рный вес (Мч) полимера, измеренный при помощи ос- мометрии давление пара (РДП), составил 1680. Он согласуетс с измере- ни ми ЯМР-спектроскопии, которые также показывают, что полученный таким образом полимер вл етс сополимером стирола и малеинового ангидрида в мол рном отношении 1:1 (фиг.1).

Б. Фракционирование сополимера стирола и малеинового ангидрида.

40 г сополимера стирола и малеинового ангидрида (СМА), полученного на стадии А, раствор ют в 1,4 л ацетона , в раствор добавл ют 3,8 кг стекл нных шариков (средний размер частиц О,1 мм), поверхность которых предварительно обрабатывают с использованием соединительного агента си- лана. Затем ацетон выпаривают, чтобы осадить СМА на поверхност х стекл нных шариков.

Стекл нные шарики с осажденным СШ и 1,4 л смешанного растворител ацетона и н-гексана (объемное отношение составл ет 8:92 при 25 с) загружают в колонну, имеющую внутренний диамет 80 мм и длину 80 см, при этом температуру системы поддерживают на уровне 25 С, а затем последовательно подают три типа смешанных рителей ацетона и н-гексана (такими смешанными растворител ми при 25°С вл ютс О,6 л смеси в отношении 8:92; 3,0 л смеси в отношении 22:78 и 3,0 л смеси в отношении 34:66, растворители подаютс в указанном пор дке), при этом жидкость вытекает из нижнего выпускного отверсти колонны . Элюат, полученный при применении смешанного растворител ацетона и н-гексана с объемным отношением 34:66, концентрируют и сушат при пониженном давлении, в результате чего получают пробу в 6,3 г. Эту пробу ,. подвергают гельпроникающей хроматографии (ГПХ) средневесов ой молекул рный вес (Мв) составил 1350, а сред- нечисловой молекул рный вес (Мч) - 1170 (Мв/Мч 1,16). Согл&сно методу ОДП Мч составл ет 1170.

В. Частична полу-н-бутил-зтёри- фикаци фракционированного СМА.

6,0 г СМА, полученного на стадии Б. 1,95 г н-бутилового спирта, 15 мл диоксана и 0,06 г ацетата лити помещают в стекл нную пробирку, затем пробирку закрывают и с целью получени однородного раствора встр хивают в течение 24 ч при комнатной температуре . Затем этот раствор выдерживают при 90 С в течение 17 ч и охлаждают до-комнатной температуры. Далее реакционную жидкость сливают. Слитую реакционную жидкость разбавл ют двукратным объемом диоксана и подвергают лиофилизации, затем полученный продукт сушат под вакуумом с целью получени материала в виде светло- желтоватых хлопьев, которые растирают и получают 7,8 г порошка. Инфракрасный спектр поглощени получен методом порошкообразного.), КВг. Он подтвердил через оптические плотности с волновым числом 1780 и 700 , что полученным порошком вл етс частично полу-н-бутил-этерифицирован- ный сополимер стирола и мллеинового ангидрида (БуСМА), в котором содер- жание оставшихс колец малеинового

31428206

нгидрида составл ет 30,5 мол.% (кос 10 /м а м н вв пр ще щи

лец малеинового ангидрида в одной молекуле 1,7).Согласно ГПХ Мв составл ет 1480, Мч - 1290, а Мв/Мч равно 1.15.

Г. Реакци ИКС с БуСМА. 0,20 г неокарзиностатина (ИКС) раствор ют в 5,0 мл 0,8 М водного раствора бикарбоната натри при охлаждении льдом в темноте. В раствор порци ми добавл ют порошкообразный БуСМА в количестве 1,02 г. Далее реакцию осуществл ют в течение 97 ч при этом рН раствора поддерживают на уровне примерно 8,5, чтобы получить степень превращени первичных аминогрупп ИКС 97,5 мол.%. Степень превращени таких первичных аминогрупп может быть определена методом ТНБС в соответствии с которым небольшое количество пробы, вз той из реакционной жидкости, разбавл ют, а затем осуществл ют взаимодействие зтой пробы с тринитробензол(моно)сульфо- кислотой с целью получени производного нитробензола, который определ етс на основе количества первичных аминогрупп спектрофотометрически с использованием спектрометра поглощени в диапазоне 420 нм.

Полученную реакционную смесь перенос т в трубку дл диализа (фирма Юнион Карбайд Ко, Лтд, США), котора отсекает молекул рные веса 8000, при этом диализ осуществл ют в течение трех дней против водного 5 |мМ раствора бикарбоната аммони при охлаждении льдом в темноте, одновременно иногда замен ют внешний слой жидкости.

Часть частично очищенного раствора разбавл ют при помощи 10 мМ водного раствора бикарбоната аммони ,, чтобы обеспечить рН 7,9, Сн тые ПК- кривые получены с использованием колонны 1-3000 СУ, производтаюй фирмой Тойо. Сода Уо, Отд. Пики (фиг.2а,б) при времени удерживани 16 мин при длинах волн 254 и 280 нм имеют максимумы , примерно равные друг другу и .св заны с производными формулы (I), в то врем как поглощение при време- ни удерживани 19 мин в .диапазоне 254 нм св зано только с гидролизован ным и с paзopвaнны кольцом продуктом БуСМА.

Д. Очистки НКС-производных формулы (I).

5

Половину количества диализирован- ной реакционной жидкости сливают в колонну, имеющую внутренний диаметр 50 мм, длину 60 см (К 50/60, фирма Фармациа Фанн Кеминэлз АБ, Уппсала, Швеци ) и заполненную субстратом Сефадекс G-75, а злюирование осуще ствл ют с объемной скоростью 6,0 мл/ 0 /мин при в темноте при помощи 5 мМ водного раствора бикарбоната аммони . Непрерывно осуществл ют измерение поглощени элюата в диапазо- , не с длиной волны 254 нм (фиг. 3). Фракцию элюата с 60 по 100 мин после введени пробы прдвергают -затем лио- филизации. Эту процедуру повтор ют при тех же услови х. Полученные очищенные НКС-производные, (I) имеют общий вес 186 мг.:

При проведении электрофореза с использованием полиакрил амид ного гел , содержащего додецилсульфат натри , полученное ИКС-производное дает одно п тно. Как показано на фиг, 4а, ГПХ получен при рН 7,9 с использованием колонны 1-3000 СУ, производимой фирмой Тойо Сода Ко., Лтд, и подвижной фазой - 10 мМ водньм раствором бикарбоната аммони , имеет острый пик, .

Элементарный анализ, вес.%: N 11,43; С 51,99; Н 6,32.

Средний молекул рный вес НКС-про- изводного в пересчете на содержание азота составил 13300. Средний молекул рный вес рассчитьгоалс по следующей формуле:

0

5

0

5

Md Мц-NN/Noi,

40

MN NN где Md - средний молекул рный вес НКС-производиого , молекул рный вес ИКС, равный 10700;

содержание азота в соответствии с элементарным анализом ИКС, 14,24 вес,%; Nd - содержание азота (вес,%) в соответствии с элементарным анализом НКС-производного, Средний молекул рный вес НКС-производного , имеющего формулу (I),составл ет . 10700 + 1480 X 2 13660 в пересчете на средневесовой молекул р- нь1й вес Е-СМА (1480), полученный при помощи ГПХ. Так как указанный средний молекул рный вес в пересчете на содержание азота согласуетс с этим значением, можно представить,что л полученном НКС-производном два остатка частично полуэтерифициро- ванных остатков сополимера стирола и малеиновой кислоты св заны с одним остатком ИКС, как показано в формуле (I). Средний молекул рный вес (Мч) частично полуэтерифицированного остатка сополимера стирола и малеино- вой кислоты, содержащегос в НКС-про иэводном, определ етс из среднего молекул рного веса НКС-прризводных, «определенных по следующей формуле:

Mr

где Mr

(Moi.- Мм)/2,

средний молекул рный вес частично полуэтерифицированного остатка сополимера стирола и малеиновой кислоты в ВКС-производном; Mfti - средний молекул рный вес

НКС-производного; MN -. молекул рный вес ИКС

(10700).

Согласно этой формулы Mr равен 1300, Это значение не очень отличаетс от средневесового молекул рного веса исходного материала Е-СМА, который равен 1480 и получен при помощи П1Х.

Соединение не имеет вно вьфажён- ных точек плавлени , оС1 - 34,3 .

- Ж и УФ-спектры подтверждают структуру НКС-производного формулы (I), вл ющегос предметом изобрете- ни (фиг. 5а и 6а).

Пример 2. Фракционированный СМА с MB 1480 и Мч 1230 (Мв/Мч 1,20) получают при помощи процедуры , аналогичной в примере 1, за тем исключением, что смешанный растворитель ацетона и н-гексана в отношении 3862 используют в качестве третьей смешанной жидкости ацетона и н-гексана при фракционировании СМА, полученного в примере 1А. 4,0 г фракционированного СМА подвергают этерифи- кации при тех же услови х, что в примере 1В, за исключением того, что при этом используют 0,80 г этанола, 12 мл диоксана и 40 мг ацетата лити В результате было получено 4,9 г частично полу-этил-этерифицированно- го сополимера стирола и малеинового ангидрида (сокращенно именуемого ЭтСМА), содержание колец ангидрида в котором составл ет 24,0 мол.% (в среднем 1.,6 колец ангидрида на одну

молекулу). MB 1580 и Мч 1340 (Мв/Мч 1,18)-.

По аналогии с примером 1Г 0,2 г ИКС раствор ют в 5,0 мл 0,8 И водного раствора бикарбоната натри , 1,2 г

ЭтСМА добавл ют порци ми в получен- ный раствор. Б течение .этой реакции рН раствора поддерживают на уровне примерно 8,5. Спуст 27 ч после начала добавлени степень Превращени первичных аминогрупп составила 97,5 мол.%. Сразу после этого реакционную жидкость подвергают диализу, а 38 МП диализата подвергают гелевой

фильтрации. Затем фильтрат подвергают .лиофилизации, в результате чего получают 148 мг очищенного НКС-производного формулы (I).

При электрофорезе полученное НКСпроизводное дает одно п тно. ГПХ приведена на фиг. 4б. Элементарный анализ , вес. %: N 10,74; С 52,90; Н 6,18. Средний молекул рный вес в пересчете на эти данные составл ет

14200, а средний молекул рный вес частично полу-этил-этерифицированно- го остатка сополимера стирола и малеиновой кислоты составл ет 1750. Сн ты УФ- и ИК-спектры (фиг. 56 и

6б). Эти данные подтверждают структуру НКС-производного, вл ющегос предметом изобретени , котора описы -. ваетс формулой (I).

Пример 3. СМА, полученный в

примере 1А, подвергают фракционированию с использованием метода, описанного в примере 1Б, за исключением того, что объемна фракци ацетона во второй и третьей смешанных жидкост х ацетона и н-гексана составл ет 23 и 37% соответственно, в результате чего получают 9,1 г фракционированного СМА с MB 1480, Мч 1250 (Мч 123iO при определении методом

ОДП), а Мв/Мч 1,18. 4,0 г полученного фракционированного СМА взаимодействует , как в примере 1В с использованием 1,60 г моноалкилового эфира этиленгликол в качестве спирта

и 0,04 г ацетата лити . В результате получают 4,9 г частично полу-2-эток- сиэтил-этерифицированного сополимера стирола и малеинового ангидрида (сокращенно именуемого Эт-Селл-СМА),

содержание колец ангидрида в котором составл ет 25,4 мол. % (в среднем 1,6 колец ангидрида на одну лу). MB 1700 и Мч 1440 (Мв/Мч 1,19).

По аналогии с примером 1Г Эт- Селл-СМА добавл ют и раствор ют порци ми с общим количеством 1,3 г в 5,0 мл 0,8 М водного раствора бикар- боната натри , в котором было предварительно растворено 0,2 г ИКС. Поддержива рН раствора на уровне примерно 8,5, осуществл ют взаимодействие . Спуст 98 ч после начала добав- лени Эт-Селл-СМА степень превр ащени аминогрупп составила 97,6 мол.%. Полученную таким образом реакционную смесь подвергают диализу, гелевой фильтрации и лиофилизации. В резуль- тате получают 189 мг очищенного НКС- производного (I).

При электрофорезе полученного НКС производного наблюдают одно п тно. ГПХ приведена на фиг. 4в. Данные эле ментарного анализа, вес. %; N 10,72, С 53,49; Н 6,38. Средний молекул р- ньй вес в пересчете на эти данные составл ют 14200, а средний молекул рный вес частично полу-2-этокси- этил-этерифицированного остатка сополимера стирола и малеиновой кислоты 1750. Сн ты УФ- и ИК-спектры (фиг.5в 6в). Эти данные подтверждают структуру НКС-процзводного формулы (I), вл ющегос предметом изобретени (фиг. 4г, 5г, 6г).

Пример 4. Фракционированный СМАсМв 1480 и Мч 1230 (Мв/Мч 1,2) приготовлен по методике примера 1, за, исключением того, что в качестве третьей смешанной жидкости ацетона и н-гексана в фракционирзтощем СМ, полученном в примере 1, используют смешанный раствор ацетона и н-гексана в соотношении 38:62.

6,0 г фракционированного СМА под- в ергают частичкой полуэтерификации с использованием 1,60 г н-.бутилового спирта, 16 мл диоксана и 0,06 г ацетата лити . В результате получают 6,3 БуСМА, содержание колец ангидрида в котором составл ет 44,4 мол.% (в среднем 2,8 кольца ангрщрида на одну молекулу). Мв составл ет 1660, а 1Ш - 1390 (Мв/Мч 1,18). Полученный таким образом БуСМА взаимодействует в течение ч, как в примере 1Г,.в результате чего получают степень превращени первичного амина в ИКС 99,3 мол.%. Продукт подвергают диализу, гелевой фильтрации и лиофилизации . В результате получают 182 мг очищенного ИКС-производного

5

Q 5

о

0

5

0

5

0

5

формулы (I). Данные элементарного анализа, вес. %: N 10,67; С 52,06; Н 6,22. Средний молекул рный вес равен 14300, а средний молекул рный вес частично полу-н-бутил-этерйфици- рованного остатка сополимера стирола и малеиновой кислоты равен 1800,

г ,,7.0 „ „о

jc«lj о - J л , 8 ,

Пример 5. Фракционированный СМ подвергают частичной полу-метил- этерификации с метанолом, в результате чего получают частично полу-ме тил-этерифицированный сополимер стирола и малеинового ангилрвда (сокра- именно Ш енуемый МеСМ), содержание колец ангидрида в котором составл ет 25,0 мол.% (в среднем это содержание составл ет 1,7 колец ангидртвда на одну молекулу), fв 1510 и Мч 1280 (Мв/Мч 1,18). Полученнтлй таким образом МеСМ взаимодействует с ИКС, затем осуществл ют очистку по аналогии с примером 2 и выдел ют соответствующее НКС-производное формулы (I) . Получают следующие да1-. ые элементарного анализа, вес. %: N 10,87; С 52,81; Н 6,11. Средний моле- кул рньй вес составл ет 14000, а средний молекул рный вес частично полу-меткл-этеркфицированного остатка сополимера стирод.а и малеиновой кислотьг - 1650

П р и м е р 6. (1 ракционированный СМА подвергают частичной этерифика- ции с использоканием 1,3-диэтокеи- -2-пропанола, в результате чего получают частично полу-1-(этоксиметкл)-2- -зтоксиэтил-этерифицированный сополимер стирола и малеиновогоангидрида,содержание колец ангидрида в котором составл ет 25,3 мол.% (в средней колец- ангидрида на одну молекулу)j MB 1960, Мч 1650 (Йв/Мч 1,19). Полученный таким образом сополимер взаимодействует с ИКС. Затем полу- ченньй продукт очищают по примеру 3, чтобы вьщелить соответствукщее производное НКС формулы (I). Данные элементарного анализа, вес.%: N 10,2; С 53,58; Н 6,5К Средний молекул рный вес равен 14900, а анало- гичньй показатель длл частично полу- -1-(этоксиметил)-2-этоксиэтил-атери- фицированного остатка сополимера стирола и малеиноЕой кислоты - 2100. J

Пример 7. НКС-прокэводное формулы (I) получают в соответствии с описанной процедзфой использу

БуСМА (MB 1620, Мв/Мч t,10), который был получен предварительно при услсзви х, аналогичных в примере 1А- 1ВJ за исключением того, что перекис дикуменилй используют в качестве катализатора полимеризации вместо пе рекиси бензоила.

После того, как 0,67 г ИКС раствор ют в 20 мл i ; 0,8 М водного раст вора бикарбоната натри при охлаждении льдом и без доступа света, в полученный раствор добавл ют порци ми всего 8,00 г БуСМА при перемешивании затем реакцию осуществл ют в течение 50 ч, при этом рН реакции поддерживают на уровне более 8,,3. Степень превращени первичных аминогрупп ИКС составл ет 97,8 мол..% (обща концентраци ИКС и, БуСМА 30%) .

Полученную реакционную смесь разбавл ют водой до объема 90 мл, а затем сливают в колонну, имеющую внутренний диаметр 50 мм и длину 90 см, заполненную субстратом Сефадекс G-75 (фирма Фармаци Фаин Кемикэлз АБ, Уппсала, Швеци ). Элюирование осуществл ют с объемной скоростью 4,0 мл/мин в темноте при 5 С с использованием 5 мМ водного раствора бикарбоната аммони в качестве несущего растворител . По аналогии с примером 1 одновременно с получением сп ектра поглощени элюата в диапазоне с длиной волны 254 нм собирают фрак- цию элюата с 1 2/3 ч по 6 2/3 ч после введени пробы. Объем этой фракции составл ет 1050 мл. Ее концентрируют до объема 60 мл с использованием мембранного ультрафильтра 6М 14539 (фирма Сарториус БмгХ, Западна Германи : отсекаетс молекул рный вес 10000) (фиг. 7).

Одну половину концентрированной жидкой фракции, а именно 30 мл,нано- с т на колонну диаметром 50 и длиной 6Х) см, заполненнзто субстратом Биогель Р-60 (фирма Био-Рэд Лаборато- риз США), элюирование осуществл ют с. объемной скоростью 1,2 мл/мин в темноте с исцользованием 5 мМ водного раствора бикарбоната аммони . Собирают фракцию элюата с 12 3/4 по 16 1/12 ч после введени пробы, а концентрацию осуществл ют с исполъ- зованием мембранной ультрафильтрации, затем провод т лиофилизацию. Выход очищенного продукта, НКС-производно- го формулы (I), составл ет 266,5 мг.

j

ю 15 0

5 0 о

j

5

В результате элементарного анализа были получены следующие данные дл производного, вес.%: N 11,31; С 52,97; Н 6,40. Средний молекул рньй вес составил 13,470, а средний молекул рный вес частично полу-бутил-этерифици- рованного сополимера стирола и малеи- новой кислоты - 1,385 W -34,3.

Проведены биологические испытани производных неокарзиностатина.

Биологическа активность была измерена дл каз8дого из НКС-производ- ных, полученных в примере 1. Порции в двадцать мл НКС-производного, име- н цие различные концентрации, помещают на бумажный диск диаметром 8 мм, который помещают на агаровую пластинку с культуральной средой (Мюлер-Хин- тон), на которую предварительно прививают штамм Sarcina lutea PCI 1001. Спуст некоторое врем , необходимое дл диффузии (5 ч) при 4 С культивирование возобновл ют при 37°С в течение 12° ч. При этом определ ют концентрацию разбавленного раствора, необходимую дл получени диаметра ингибировани в 13 мм. Такую эффективную концентрацию ИКС обозначают через 1, а определенные концентрации НКС-производных привод тс н виде относительных значений в пересчете на значение 1 ИКС. Полученные относительные значени используют в качестве показател биологической активности.

Что касаетс острой токсичности относительно мышей, то разбавленный раствор примен ют один раз внутривенно путем введени раствора в хвост самца мьши 1СЯ.(одна группа - 6 мы- ; шей) в возрасте 5-6 недель, затем за упом нутыми мьшами наблюдают в течение 14 дней дл определени величины .

Данные относительно биологического анализа с использованием штамма lutea и острой токсичности приведены в табл. 1. Из полученных результатов видно, что НКС-производные, получаемые в услови х предлагаемого способа , обладают биологической активностью , сравнимой с биологической активностью ИКС, но остра токсичность первого гораздо ниже. На фиг, 8 приведена крива инактивации, получен- ; на при помощи изменени остаточной биологической активности против lutea НКС-прсизводного.

При инкубировании НКС-проиэводно- го формулы (I) против lutea в концентрации 100 мг/мл в свежей крови человека при температуре 37°С обнаружено , что врем потери половины активности в цельной крови составл ет 32 мин и 8 мин дл НКС-производных, полученных в приведенных примерах. Аналогичный показатель дл ИКС, кото- JQ рый используют в качестве контрольного соединени , состайил 2-3 мин. Следовательно, НКС-производные, полученные в услови х предлагаемого способа , вл ютс намного более стабиль-.j5 ными в том, что касаетс их биологической активности в цельной крови или сыворотке по сравнению с исходным НКС.

20

Кроме того, определ ют с использованием НКС-производного из примера 1 противоопухолевую активность против карциномы Эрлиха (твердого типа). Полученные результаты приведены в 25 табл. 2. НКС-производное, полученное по предлагаемому способу, обладает ротивоопухолевой активностью, равной ктивности НКС,

30

Таблица. 1

Контрольный НКС

Т,33

Примечание. 1. Используют штамм Sarcina lutea PCI-1001.

2. Концентраци , при которой зона ингибировани имеет диаметр 13 мм на агаровой пластинке, указана в ввде относительного значени , при этом соответствующую концентрацию НКС принимают в качестве стандарта.

Та б л и ц а 2

Опухоль; Карцинома Эрлиха (тверды fHn) .

Привитое количество клеток: 5 х X 10 /мьшь (подкожным способом).

Мыши: ddY , возраст - п ть недель

Применение препарата: внутрибрю- шинным способом один раз в день (всего 5 раз): в 1,2, 4, 5 и 6-й день после трансплантации опухоли, Оценка действи препарата: скорость ингибировани опухоли (%) равна /C-T/xlOQ/C, где С - средний размер опухоли (мм) в контрольной группе, Т средний размер опухоли (мм ) в обработанной группе.

Оценка скорости ингибировани опухоли была получена в конце второй недели после трансплантации опухоли ; Долю Выживших мьшей подсчитывают через 4 недели после трансплантации опухоли.

Производные неокарзиностатина общей формулы (I) обладают высокой жи- рорастворимостью (в липйдоле), в то врем как неокарзиностатин и его известные производные раствор ютс только в воде.

Таким образом, получаемые предла- гаемым способом производные неокарзиностатина менее токсичны, чем неокарзиностатин , сравнимой бнологической активностью, в 4 раза дольше сохран ют свою биологическую активность, чем неокарзиностатин, при этом обладают способностью раствор тьс в воде.

Claims

Формула изобретени

Способ получени производных неокарзиностатина общей формулы (I)

БуСМА - ИКС - By СМ,

50

де ИКС - двухвалентный остаток неокарзиностатина , в котором один атом водорода удален из каждой первичной аминогруппы в остатке аланина в N-конце неокарзиностатина и в остатке лизина в 20-й позиции от N-конца неокарзиностатина;

БуСМА одновалентный частично эте- 55 рифицированньй бутанолом сополимерный остаток стирола и малеиновой кислоты.

имеющий средний молекул рный вес Мн 1480-1660 и отношение MB к среднечислово- му молекул рному весу Мч 1,10-1,18 MB и состо щий из следующих структурных блоков: остаток стирола

-012 - СНчастично этерифицированный бутанолом остаток малеиновой кислоты

- сн

-сн

COOCt g СООН

остаток малеиновой кислоты

-сн-сн

1 I

СООН СООН

остаток формулы

-СН- сн - I I

О С СООН

I

где гидроксильна группа одной карбоксильной группы остатка малеиновой кислоты удалена и этот карбоксил соединен с неокарэиностатином, отличающийс тем, что провод т реакцию неокарзиностатина в водной среде с порошкообразным частично этерифицированным бутаноЛом сополимером стиролаи малеинового ангидрида , состо щего из структурных блоков остатка стирола

50

ОН -

- СИ

частично этерифицированного бутанолом остатка малеиновой кислоты

-СИ

I

СИ

COOCiJIg СООН

и остатка малеинового ангидрида

- сн - сн-5

вз тым в массовом соотношении 1:5- ю 12 при суммарной концентрации неокарзиностатина и частично этерифицн- рованного бутанолом сополимера, стирола и малеиновой кислоты 19-30%, затем ренкционную массу подвергают диализу, остаток фильтруют через сефадекс G-75 или биогель Р-60, продукт элюируют 5 мМ водным раствором бикарбоната аммони в темноте при со скоростью 4-6 мл/мин rt лио филизуют.

U9ij XufiuvfCKau fdSue {Оолей на миллион)

«cs

I

/( /2 Г« 1Ъ 1Ь W 22 2Ц 2В 2В W Г2 /4 16 18 20 22 24 Врем (/depmt/SoHuff(MUff) Врем удер)ниЬани (мин.}

О

50100150

Врем удерживани (мин ) Фие.З

Фив. 2

уде01ки6ани . (мин) .

„juLJi. /1Ж;

ii it 16 IB20 гz2 Ч°ЖУ Врем ydepmuOoHUR минi д Фик.

Виемй удер кидани (fiuH.)

Jfy IS 18 20 22 lit 26 28

- - J HT

П J6 18 20 22 г 2S 28

Врем дЬертиЬани/1(нин)

9

хао. 2SOO 2000 то поо т SOD дш гш

BoflHOioe число (

то то т soo Ваанобое число (fH-ij

t

2800 гооо isoo rzoo soo SBO

3200 uoa - ,, ,,

BoffHoSoe число (

i

|i

I gi

w

mo 2800 mo rsoo izm soo т

3200 2WOSojimioe wcnofcfi- l

Фив. 5

zftQ 280 т Длина долны(нм)

ь

5

т ztfO 2ВО т т too

Длина Волны (HMJ

200 280 320 ЗВО ifOO

Длима Волны (Hff)

«

10 i

Сл

I о 1о

0,7

lfl,ff

1.5

I.

gv

I о/

л Y

S . M 2 itQ 280320 360 00

ut.6

Длина Волны-(нп

S

г

12 Ify Г6 f8 20 22 2ft 26

BpCMff удертибони (MUff)

икс-производное (Лр.7)

15 фил,8

Редактор М.Петрова

1(5 60 7590

Врен инактидоции {fiUH)

Составитель В.Волкова

Техред А.Кравчук Корректор С.Черни

f м

2BQHH