KR840001359B1 - 다당류 rbs물질의 제조방법 - Google Patents

Abstract

내용 없음.

Description

다당류 RBS물질의 제조방법

제1도는 항종양 활성을 가진 RBS물질의 자외선 흡수스펙트럼.

제2도는 항종양 활성을 가진 RBS물질의 적외선 흡수스펙트럼.

본 발명은 다당류 RBS물질의 제조방법에 관한 것이다.

당분야에 이미 공지된 것처럼 다당류 물질은 여러공급원 예컨데 담자균류(일본특허 공개공보 제94102/1978), 박테리아(일본특허 공개공보 제76896/1979), 곰팡이(일본특허 공보 제59097/1978), 조류(일본특허 공개공보 제28923/1977) 및 곡류(일본특허 공개공보 제13913/1978)로 부터 얻을 수 있다.

이들 다당물질은 항종양 활성을 갖는 것으로 알려져 있다. 그러나 여러문제 예컨데 낮은 수율, 복잡한 생성공정, 독성등의 문제가 항종양제로 다당물질을 사용하는데 문제점으로 제기되었다.

따라서 본 발명은 신규한 다당 RBS물질을 제조하는 방법을 제공하는 것이다.

다당 RBS물질은 쌀겨를 고온수로 추출하여 얻을 수 있다. 이 RBS물질은 항종양제로 사용된다.

본 발명의 다당류 RBS물질은 쌀겨를 추출 정제하여 얻는다. 이 쌀겨는 비정제된 쌀(현미)로 부터 정제된 쌀(백미)을 도정할때 부산물로 생성되며 현미의 종류, 생성지역, 도정 정도 등에 의해 제한을 받지 않는다. 쌀겨로 부터 다당 RBS물질을 추출 정제하기전에, 쌀가루나 기타 불순물의 함량을 줄이기 위하여 쌀겨를 깨끗이 씻는 것이 좋다. 다른 목적에 이미 사용되었던 쌀겨, 예컨데 미강유를 추출해낸후의 탈지 쌀겨도 본 발명에 사용할 수 있다.

본 발명의 다당류 RBS물질은 쌀겨를 고온수 처리하여 얻은 추출물에 유기용매나 염석제를 가함으로써 침전물을 생성시키고 바람직하게는 수득된 침전물을 용해시켜 정제하여 생성한다.

쌀겨는 예컨데 체로 걸러 불순물을 제거하고 분쇄후 필요한 경우 물로 세척한다. 초산에틸, 사염화탄소, 크로로포름, 에테르, n-헥산, 벤젠, 석유에테르, 아세톤과 같은 유기용매를 사용하여 지용성 부분을 제거하는 것이 바람직하다.

쌀겨와 쌀겨 양의 5-10배인 증류수 혹은 정제수를 용기나 가압용기 예컨데 스테인레스 스틸탱크, 에나멜탱크, 유리탱크, 유량계관추출장치내에서 교반하거나 하지 않으면서, 0-15kg/㎠바람직하게는 0-5.0kg/㎠의 압력, 70-200℃바람직하게는 100-150℃의 온도에서, 10분-24시간, 바람직하게는 0.5-5시간 동안 반응시켜 쌀겨를 고온수 처리한다. 실질적으로 고온수 처리는 0-3.0kg/㎠의 압력, 100-140℃의 온도에서 1-5시간동안 실시하는 것이 적당하다.

고온수 처리하여 얻은 추출물을 여과, 원심분리등과 같은 공정으로 고체를 분리하고 필요한 경우, 감압농축, 한외여과 등의 방법을 단독으로 혹은 동시에 실시하여 적당한 부피로 농축시킨다.

수용성 극성 유기용매나 염석제를 추출물에 가하여 형성된 침전물을 수집함으로써 조 다당 RBS물질을 얻는다.

이 공정에 사용될 수 있는 극성유기용매는 메탄올, 에탄올, 프로판올, 아세톤, 초산에틸 등이다. 사용된 극성 유기용매의 양은 추출물에 포함된 소요의 물질의 양을 고려하여 결정한다. 예를 들면, 에탄올의 경우에 에탄올 농도가 30-50%(V/V)가 되게 가한다. 형성된 침전물을 바람직하게는 상기한 바의 유기용매 예컨데 에탄올로 세척하는 것이 바람직하다.

상기 공정에 사용될 수 있는 염석제는 염화나트륨, 황산암모늄, 염화칼륨, 수산화바륨과 탄산바륨 등이다. 염석제를 보통 포화도가 0.5-1이 될때까지 가하여 침전물을 형성시킨다.

다당 RBS물질물질의 정제는, 추출물에 유기용매나 염석제를 가하기 전에 또는 유기용매나 염출제를 가하여 침전물을 형성시킨 후에 침전물을 물에 용해하여 실행할 수 있다.

정제 처리하기 위하여 각종 공지된 공정을 사용할 수 있다. 예컨데 아밀로오스분해효소 및 단백질분해 효소를 다당 RBS물질을 포함하는 용액에 가하여, 존재하는 불순물 예컨데 전분, 단백질등을 저분자량의 화합물로 전환시킨다. 이들 저분자량 화합물을 후속 정제단계에서 제거한다.

시중에서 시판되고 있는 효소를 사용할 수도 있다. 예컨데, α-아밀라제, 이소-아밀라제, 플로타나제와 같은 아밀로오스 분해효소, 파파인, 펩신, 트립신, 프로나제 등과 같은 단백질 분해 효소, 및 필요할 경우 기타 효소도 사용할 수 있다. 그러나, 글루카나제, 헤미셀룰라제와 같은 효소는 다당물질을 분해하기 때문에 배제된다. 이 효소처리에서, 효소는 기질의 1/1000-1/5000비율로 부가되며 처리기간은 0-120시간, 바람직하게는 12-48시간이다.

그위에 다음의 정제방법을 이용할 수 있다:

빙초산, 황산, 염화수소산, 설포살리실산, 피크린산, 탄닌산, 트리크로로 초산과 같은 무기산이나 유기산을, 상기한 다당 RBS물질을 포함하는 수용액에 0.1-10중량%, 바람직하게는 3-5중량%의 비율로 가하고, 침전물이 형성되면 여과, 원심분리와 같은 공정으로 제거하고 잔여산, 무기산과 저분자 부분을 1-3일간 유수나 증류수로 셀로판막, 콜로디온막과 같은 반투과막을 사용하여 투석하는 방법 : 다우엑스, 앰버라이트, 두오라이트, 디에온등과 같은 양이온이나 음이온교환기를 사용하는 이온교환방법 : 1000-50,000의 부분분자량을 가진 막이 사용된 한외여과법 : 가역삼투 : 겔여과 : 막여과 : 원심분리활성탄으로의 처리 : 농축반응등.

이들 정제방법은 단독으로 또는 서로서로 결합하여 사용할 수 있으며 결합방법 및 순서는 제한이 없다.

상기 방법으로 정제된 고분자 다당 RBS물질을 함유한 수용액이나 현탁액을 동결 건조하거나 분무 건조하여, 분말형태의 연황갈색이나 회백색 혹은 흰색의 RBS물질을 수득할 수 있다.

수득된 다량 RBS물질은 다음 물리 및 화학적 특성을 갖는다 :

이 물질은 반투과막을 통과하지 못하며 유기산이나 유기용매 예컨데 빙초산, (메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올 등과 같은)알콜, 아세톤, 헥산, 벤젠, 초산에틸, 디메틸설폭사이드, 리그로인, 4염화탄소, 크로로포름과 디에틸에테르, 석유에테르 등에는 불용성이나 물에는 아주 잘 녹는다;

이 물질의 1%수용액이나 현탁액은 중성 내지 약한 산성이다;

이 물질은 융점이 없으며 220℃에서 갈색, 280℃에서 흑색으로 변한다(탄화);

원소분석결과 본 물질은 주로 탄소, 수소와 같은 산소로 되어 있고 1%나 그 이하의 질소와 8%나 그 이하의 회분으로 되어있다.(표 1참조);

이 물질의 1%수용액이나 현탁액은 다음 발색반응에 양성이다 : 페놀-황산반응, 안트론-황산반응, 카바졸-황산반응, 트립토판-황산반응, 시스테인-황산반응, 크로모트로프-황산반응과 몰리쉬반응. 다음 착색반응에는 음성이다. 엘슨-모르간 반응과 전분-요오드 반응 :

다음의 실시예 17에서 수득된 물질의 비선광도

=+142°에서 145°(H₂O)이다.

히다찌 자등아미노산 분석기(히다찌 세이가꾸쇼사 판매)로 이 물질의 질소성분을 분석한 결과 다음의 아미노산 조성을 가지고 있음을 알 수 있다. 17.3%글루타민산, 10.4%알라닌, 10.3%글리산, 9.5%아스파린산, 9.4%라이신, 5.9%트레오닌, 5.8%세린, 5.6%아르기닌, 5.4%발린, 5.4%로이신, 4.5%포롤린, 3.1%히스티딘, 2.8%이소로이신, 2.2%페닐알라닌, 1.3%티로신, 1.2%메티오닌, 미량의 트립토판과 시스테인, 회분성분은 Si, P, K, Na, Ca, Mg등을 포함하며 RBS물질이 세팔로즈 6B를 사용한 겔 여과에서 공극유체내로 용출된다는 사실에 근거하여, 상기 원소는 RBS물질에서 원소나 화합물로서 독립적으로 존재하지는 않으나, RBS물질의 골격에 결합된 상태로 존재한다는 것이 확인되었다.

RBS물질을 1N황산으로 100℃에서 3시간 동안 가수분해한 후 탄산바륨을 가하여 중성화시키는 방법으로 수득된 상층액은, 다음 발색 반응에 양성이다 : 몰리쉬 반응, 엔트론반응, 트립토판-황산반응, 시스테인-황산반응, 크로모트로프-황산반응 등. 다음 착색반응에는 약하게 양성이다 : 뷰렛반응, 닌히드린반응, 로우리-폴린반응 등 :

상기 가수분해물에서 글루코즈는 항상 박층크로마토그라프 분석으로 검출된다. 포름산이나 황산으로 RBS물질을 완전히 가수분해하여 얻은 생성물을, 박층크로마토그라피 분석하는데 하기한 4종의 용매로 전개시켰을 때 글루코즈로 확인된 것을 제외하고는 어떠한 점(spot)도 검출되지 않았다.

(1) 초산에틸 : 메탄올 : 초산 : 물(65 : 15 : 10 : 10)

(2) 초산에틸 : 이소프로판올 : 물(65 : 23 : 12)

(3) 이소프로판올 : 피리딘 : 물 : 초산(8 : 8 : 4 : 1)

(4) n-부탄올 : 피리딘 : 물(6 : 4 : 3)

그러므로 본 RBS물질은 당성분으로서 주로 글루코스로 된 다당 물질이며, 더욱 주기적 산화반응, 스미스저하반응 및 메틸화 당질의 종이크로마토그라피 분석으로 수득된 자료를 근거로 해서, 본 발명의 RBS물질은 주쇄로서 1.6-글루코시드 결합을 가지고 분지된 구조를 가진 것으로 여겨진다.

본 RBS물질은 제1도와 같은 자외선 흡수 스펙트럼을 나타내고 제2도와 같은 적외선 흡수 스펙트럼을 나타낸다. 적외선 흡수스펙트럼과 비선광도로부터, RBS물질에는 α-결합이 존재한다고 여겨진다.

상기한 자료에 근거하여, 본 발명의 RBS물질은 당성분으로서 글루코즈로 된 다당물질이며, 주쇄로서 α-1,6-글루코시드 결합을 가진 분지된 구조이며, 단백질9또는 폴리펩타이드)과 상기원소가 α-글루칸 구조에 결합되어 있다.

본 발명의 다당류 RBS물질은 항종양 활성을 갖는다. 이것은 사르코마(Sarcoma) 180과 에르리히 아시트(Ehrlich ascites)종양을 사용한 다음 방법을 실행함으로서 확인되었다.

6마리의, 4주된 20g의 암놈 ICR-JCL쥐 그룹이 시료하나를 측정하는데 사용되었다. 사르코마 180아시트 종양이나 에를리히 아시트 종양을 접종한후 7일째에 복수를 주사기로 뽑아내서 쥐 복강내에 1마리당 0.05ml의 양으로 즉 10⁷세포를 주입하였다. 그후 5일째에 0.5M카르복시메틸셀룰로오즈를 무균균질액으로 가한 생리적 식염수에 현탁되거나 용해된 RBS물질 시료를 주어진 양으로 복강내에 투여하였다. 7일째에 체중을 측정한 후 복수를 채취하고 복수의 양과 종양세포함량을 측정하였다.

전체 침적세포용적(이후 “TPCV”로 칭함)를 다음 공식으로 계산하였다.

TPCV(ml)=복수의 부피(ml)세포비(%/100)항종양 활성은 종양 성장비(T/C%)에 따라 측정하였다 : 즉, (실험그룹의 TPCV/대조그룹의 TPCV)x100, 활성은 다음 처럼 나타난다.

이 방법은 호시와 토루야가 개발한 항종양 물질의 차폐방법을 근거로 하였다. (파루마시아, 9,464(1973)참조).

kg당 15g의 신체투여한계로 숫놈 쥐에 구강 투여하였을때 RBS물질의 급성독성에 관하여, 죽은 경우는 없었고 체중의 증가도 나타나지 않았다. 더욱, 외형관찰과 해부결과 기형도 없었다. 그러므로 LD₅₀은 kg당 15g보다 크며 이 RBS물질은 독성이 없는 것으로 결론지을 수 있다.

이 결과를 표 2에 기록하였다.

구강투여에 의한 항종양 효과를 검사하기 위하여, 사르코마 180 S세포 10⁶을 ICR-JCL쥐의 대퇴부 근육에 접종하고, RBS물질을 접종을 행한날로 10일동안 10번을 경구 투여하고 4주후에 종양무게를 측정하고 대조그룹과 비교하였다.

kg당 10mg의 투여량에서 억제비율은 50%나 그 이상이며 항 종양 효과가 관찰되었다.

더욱, 시험관내에서, 직접 세포독성을 측정한 결과, 본 RBS물질은 몇몇 r/ml농도의 낮은 농도로 종양세포(SV40-C3H-2K)에 대한 세포독성효과를 가졌음이 밝혀졌으며, 정상세포(C3H-2K)와 비교하여 볼때 높은 민감성을 나타낸다.

상기한 대로 본 발명의 다당 RBS물질은 복강내 투여함으로써 사르코마 180아시트 종양과 에르리히 아시트 종양을 억제하는데 훌륭한 효과를 나타내고, 경구투여에 의해서 사르코마 180고정형을 억제하는데 효과가 있으며, 더우기 종양세포에 대해 시함관에서 직접 세포독성을 갖는다. 본 물질을 부작용이 관찰되지 않았다.

본 발명에 따라 우수한 항종양 활성을 갖는 다당류 RBS물질은 비교적 간단한 공정을 결합시킴으로써 대량으로 얻을 수 있다. 그러므로 본 발명은 쌀겨로부터 수익성이 있게 항종양 물질을 생산한다는 점에서 아주 중요하다.

본 다당류 RBS물질이나 그의 약학적으로 허용되는 산염(예컨데, 염화수소산염, 황산염, 초산염, 푸말산염, 숙신산염 등)을 물, 생리적식염수, 폴리에틸렌글리콜, 글리세로젤라틴, 전분, 덱스트린, 락토오즈 등과 같은 부형제와 혼합하여 액체약, 펠릿, 정제, 분말, 좌제와 같은 항종양제를 생성한다.

다음 실시예는 본 발명은 좀더 상세히 설명하기 위한 것이다.

[실시예 1]

20kg의 쌀겨에 80 1의 증류수를 가하고 혼합물을 125℃에서 30분간 그후 100℃에서 1시간동안 교반하며 가열하여 쌀겨를 추출하였다.

수득된 추출물을 여과하고 감압하에 25 1로 농축하였다. 농축추출물에 3부피의 아세톤을 가하여 침전물을 형성하였다. 이를 침전물을 분리하고, 물에 용해하여 불순물을 제거하고, 다우엑스50(H형)에 통과시키고 동결건조하여 378g의 회백색 비흡습성분말을 수득하였다.

수득된 다당물질의 분석치와 항종양 활성의 결과를 각각 표 1과 2에 기록하였다.

[실시예 2]

쌀겨를 300메쉬체를 통과시켜 부셔진 쌀가루등을 제거하였다. 수득된 미세분말 20kg을 200ℓ의 증류수로 세척한 후에, 30ℓ의 증류수를 가하고 생성된 혼합물을 120℃에서 1시간동안 가열하고, 100℃에서 5시간동안 교반하며 가열하여 쌀겨를 추출하였다.

수득된 추출물을 여과하고 여액을 감압하에 농축하였다. 그후 에탄올을 농축액에 가하여 에탄올의 농도가 40용량%로 되게하고, 생성된 혼합물을 원심분리하여 침전물을 얻었다. 이들 침전물을 물에 용해하고 동결 건조하여 1.310g의 회백색 분말을 얻었다.

상기 수득된 다당물질의 분석치와 항종양 활성의 결과를 표 1과 2에 표시하였다.

[실시예 3]

실시예 2에서 사용된 동일출발물질을 실시예 2와 동일한 조건하에 추출하여 얻은 여액을 감압농축 하였다. 그후 에탄올을 농축액에 가하여 에탄올의 농도가 30용량%로 되게 하였다. 혼합물을 원심분리하여 침전물을 수득한 후 물에 용해하였다.

이 수용액에 600mg의 아밀라제를 가하고(결정성 α-아밀라제, 나가세 산교사 제조) 75℃에서 18시간동안 반응시켰다. 반응생성물을 100℃에서 1시간동안 유지하고 여과하였다. 에탄올을 여액에 가하여 에탄올의 농도가 50용량%로 되게 하고 침전물을 수득하였다. 이 침전물을 다시 물에 용해하고, 유수로 3일간 투석하여 저분자물질을 제거하고 여과 동결건조하여 394g의 회백색분말을 수득하였다.

상기 수득된 다당물질의 분석치와 항종양 활성의 결과를 각각 표 1과 2에 기록하였다.

[실시예 4]

실시예 3과 동일한 방법으로 얻은, 30용량%에탄올 농도를 가진 혼합물로 부터 수득한 침전물을 물에 용해하고 47℃로 유지하였다. 이 수용액에 600mg의 단백질 분해 효소(프로나제 E. 가겐 가가꾸사 제조)를 가하고 24시간 반응시켰다. 반응혼합물을 100℃에서 1시간 동안 가열한 후, 에탄올을 가하여 에탄올 농도가 50용량%로 되게 하고 침전물을 수득하였다. 이들 침전물을 다시 물에 용해하고, 30배양의 증류수를 사용하여 하루 동안 2번 투석하여 저분자량 물질을 제거하고, 여과하고 동결건조하여 374g의 회백색 분말을 수득하였다.

상기한 다당물질의 분석치와 항종양 활성의 결과는 각각 표 1과 2에 표시하였다.

[실시예 5]

실시예 4와 같은 방법으로 수득한 반응생성물을, 유수로 하루 투석하고, 농도가 4%(W/V)가 될때까지 트리크로로 초산염을 가한후 냉장고에 하루 저장하였다. 침전물을 제거한 후 에탄올을 농도가 80%가 될때까지 가하여 침전물을 얻었다. 이 공정을 두번 반복하였다. 그후 침전물을 100배량의 증류수로 2시간 투석하고 동결 건조하여 164g의 회백색 해면질성 물질을 수득하였다.

상기 다당 물질의 분석치와 항종양 활성의 결과를 각각 표 1과 2에 기록하였다.

[실시예 6]

20kg의 쌀겨에 80ℓ의 증류수를 가하고 생성된 혼합물을 2시간 동안 110℃로 가열하고, 그후 3시간동안 100℃에서 교반하며 가열하여 쌀겨를 추출하였다.

추출물을 여과하고 감압하에 농축하였다. 에탄올을 가하여 에탄올 농도가 30%(V/V)로 되게 하며 침전물을 얻었다. 이 침전물을 수집하고 증류수에 다시 현탁하였다. 이 현탁액에, 침전물의 양에 대해 1/1000양으로 결정성 α-아밀라제를 가하고 75-80℃에서 24시간 반응시켰다. 그후 프로나제 E를 침전물의 양에 대해 1/1000의 양으로 가하고 45℃에서 24시간 반응시켰다.

반응을 종결한 후 반응용액을 100℃에서 1시간 동안 유지한 후 실온으로 냉각하였다.

용액을 200,000의 분별분자량을 가진 한외여과막(UK-200, 도쿄가가꾸 산교사제조)을 사용하여 한외여과하고 잔여용액을 동결건조하여 205g의 회백색분말을 수득하였다.

상기 다당물질의 분석치와 항종양활성의 결과를 각각 표 1과 2에 기록하였다.

[실시예 7]

실시예 6에서 한외여과하여 얻은 여액을 50,000의 분별분자량을 가진 한외 여과막(UK-50, 도쿄 가가꾸 산교사제조)을 사용하여 한외 여과하고 동결 건조하며 101g의 회백색분말을 수득하였다.

상기 다당물질의 분석치와 항종양활성의 결과를 각각 표 1과 2에 기록하였다.

[실시예 8]

실시예 1과 동일한 방법으로 얻은 75%아세톤 침전몰을 분리하고 물에 용해하였다. 원심 분리하여 불용성 물질을 제거한 후 (18,000GX30분)상층액을 기공직경 1.0μ의 여과막을 통과시켜 여과하고 여액을 직경 0.45μ의 여과막을 통과시켜 추가여과 하였다. 잔여용액을 동결건조하여 8.3g의 회백색분말을 수득하였다.

상기 다당물질의 분석치와 항종양활성 결과를 각각 표 1과 2에 기록하였다.

[실시예 9]

실시예 8에서 얻은 여액을 0.1μ의 기공직경을 가진 여과막으로 여과하고 수득한 여액을 200,000분별 분자량을 가진 한외여과막으로 여과하였다. 그후 잔여용액을 동결 건조하여 368.4g의 회백색분말을 수득하였다.

수득된 다당물질의 분석치와 항종양활성의 결과를 각각 표 1과 2에 도시하였다.

[실시예 10]

농도 35%(W/W)의 황산암모늄을 에탄올 대신에 사용한 것을 제외하고는 실시예 6에서와 동일한 방법으로 190g의 회백색 분말을 수득하였다.

수득된 다당물질의 분석치와 항종양활성의 결과를 각각 표 1과 2에 기록하였다.

[실시예 11]

10kg의 쌀겨에 50ℓ의 증류수를 가하였다. 수득된 혼합물을 100℃에서 5시간동안 교반하며 가열하여 추출하고 추출물을 원심분리하여 46ℓ의 상층액을 얻으며 감압하에 농축하여 20ℓ로 하였다. 농축상측액에 200mg의 결정성 α-아밀라제를 가하고 생성된 혼합물을 70℃에서 20시간 유지한 후, 1000℃로 가열하였다. 그후 혼합물을 원심 분리하여 18.5ℓ의 상층액을 얻었다. 이 상층액에 에탄올을 가하여, 에탄올 농도가 35%로 되게하고, 형성된 침전물을 분리하고 동결건조하여 238g의 황백색분말을 얻었다.

상기 수득된 다당물질의 분석치와 항종양활성의 결과를 각각 표 1과 2에 기록하였다.

[실시예12]

10kg의 쌀겨를 50ℓ의 헥산으로 환류처리하여 탈지한 후 건조하였다. 수득된 쌀겨를 실시예 11에서와 같은 방법으로 처리하여 245g의 황백색분말을 얻었다. 이 분말을 1ℓ의 물에 용해하고 원심분리하였다. 수득된 상층액을 동결 건조하여 165g의 황백색 분말을 얻었다.

수득된 다당물질의 분석치와 항종양활성의 결과를 각각 표 1과 2에 기록하였다.

[실시예 13]

3kg의 쌀겨에 20ℓ의 물을 가하고, 생성된 혼합물을 120℃에서 2시간 동안 교반하며 가열하여 쌀겨를 추출하였다.

추출물을 감압에서 농축하였다. 5ℓ의 농축액에 0.3g의 결정성 α-아밀라제(나가세 산교사 제조)를 가하였다. 생성된 혼합물을 60℃에서 5시간 유지한후 100℃로 가열하였다. 계속하여 혼합물을 원심 분리하여 4.9ℓ의 상층액을 얻고, 에탄올을 가하여 에탄올의 농도가 40%로 되게하였다. 침전물을 분리하고 수집하였다. 그후 이들 침전물을 동결 건조하여 연황갈색분말 88g을 얻었다.

수득된 다당물질의 분석치와 항종양활성의 결과를 각각 표 1과 2에 기록하였다.

[실시예 14]

20kg의 쌀겨를 30메쉬체를 통과시켜 분쇄된 쌀과 같은 불순물을 제거하고, 이온 교환수지로 처리한 물 100ℓ로 세척하였다. 세척된 쌀겨에 50ℓ의 증류수를 가하고 생성된 혼합물을 110℃에서 3시간동안 감압하에 가열하여 쌀겨를 추출하고 여과하였다.

수득된 여액을 감압농축하고 원심분리하여 10ℓ의 상층액을 얻었다. 이 상층액에 250mg의 결정성 α-아밀라제를 가하고, 혼합물을 65℃에서 24시간 반응시키고 100℃로 가열하였다. 그후 에탄올을 가하여 에탄올의 농도가 30%로 되게하고 형성된 침전물을 원심분리하여 분리하고 수집하였다.

이들 침전물을 3ℓ의 물에 용해하고 원심분리하여 상층액을 얻었다. 이 액을 감압 농축하여 1ℓ로 하고 계속 원심분리하여 상층액을 얻었다. 수득된 액체를 동결 건조하여 411g의 황갈색분말을 얻었다.

[실시예 15]

실시예 14에서 얻은 20g의 분말을 500ml의 물에 용해하고 용액을 원심분리하여 상층액을 얻었다. 480ml의 상층액을 계속 양이온 교환겔, CM세파로즈(파마시아 파인 케미칼사 제조)와 음이온 교환수지DEAE세파로즈(파마시아 파인 케미칼사 제조)로 처리하였다. 흡착되지 않은 부분을 동결 건조하여 14g의 백색분말을 수득하였다.

수득된 다당물질의 분석치와 항종양활성의 결과를 각각 표 1과 2에 기록하였다.

[실시예 16]

실시예 14에서 생성한 분말 20g의 500ml와 물에 용해하고 5g의 활성탄을 가하였다. 30분후에 혼합물을 원심분리하여 상층액을 얻었다. 이 액을 동결건조하여 18g의 백색분말을 얻었다.

수득된 다당물질의 분석치와 항종양활성의 결과를 각각 표 1과 2에 기록하였다.

[실시예 17]

실시예 14에서 생성된 분말 50g을 1ℓ의 물에 용해하고, 원심분리하여 상층액을 얻었다. 이 액을 세파로즈 6B(파마시아 파인케미칼사 제조)를 사용하여 겔 여과하였다.

공극유체 부분을 동결건조하여 48g의 백색분말을 수득하였다.

상기 다당물질의 분석치와 항종양활성의 결과를 각각 표 1과 2에 기록하였다.

[표 1]

다당류 RBS물질의 분석

* 페놀-황산법에 따름

**미크로 뷰렛법에 따름

*** 크로로포름-메탄올추출법에 따름

[표 2]

다당류 RBS물질의 항종양활성

Claims (1)

1. 쌀겨를 고온수 처리하여 추출물을 얻고, 추출물에 극성유기용매나 염석제를 가하여 침전물을 형성하며, 이를 분리 및 수집 정제하는 것을 특징으로 하는 : 반투과막을 통과하지 못하고 : 알콜, 아세톤, 헥산, 벤젠, 초산에틸, 디메틸설폭사이드, 리그로인, 사염화탄소, 크로로포름과 에테르에 불용성이며 물에 용해되고 : 중성 내지 약한 산성이며(1%수용액이나 현탁액) : 모리쉬반응, 안트론-황산반응, 트립토핀-황산반응, 시스테인-황산반응, 크로모트로프-황산반응, 페놀-황산반응, 카르바졸-황산반응, 뷰렛반응, 닌히드린 반응과 로우리-폴린반응에 양성이며, 엘슨-모르간반응과 전분-요오드반응에 음성이며 : 제2도에서와 같은 자외선 흡수스펙트럼을 나타내고, 제2도에서와 같은 적외선 흡수 스펙트럼을 나타내며 : 당성분으로서 글루코즈로 구성되고 주쇄로서 α-1, 6-글루코시드 결합을 가진 분지구조를 이루는 특성을 가진 다당류 RBS물질을 제조하는 방법.

Images