SU1334079A1 - Способ диагностики гемолитической болезни новорожденных - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к медицине, точнее к педиатрии и акушерству, предназначено дл  ранней доклинической диагностики гемолитической болезни новорожденных (ГЕН). Цель изобретени  - повьшение точности и сокращение времени диагностики. Дл  этого на обезжиренное предметное стекло нанос т тонкий мазок крови новорожденного , высушивают при 20-25 С, фикси- рзпот 15 мин в холодном ацетоне (4 С). Фиксированный препарат п)эомывают в фиксированном физрастворе (рН 7,4), на него нанос т комплемент, -разведенный физраствором 1:10. Инкубируют 20 мин при 37°С. Препарат отмывают проточной водой, ополаскивают в физрастворе . На влажный препарат нанос т антикомплементарную сыворотку, меченную флюорохромами. Инкубируют 40 мин. Отмлвают препарат в трех порци х физраствора по 10 мин в каждой. Мазок заключают под покровное стекло в 90%-ный глицерин, разведенный, физраствором . Препарат просматривают в люминесцентном микроскопе при иммерсионном , увеличении. При наличии специфического свечени  антикомплементарной сыворотки на оболочках эритроцитов диагностируют ГЕН. Метод позвол ет вы вит-ь ГБН в начальной стадии ее развити  на доклиническс уровне. Метод прост, требует мало времени и трудовых затрат, в нем используетс  отечественна  аппаратура и реактивы . & (Л с 00 DO 4 О со

Description

Изобретение относитс  к медицине и может быть использовано в педиатрии и акушерстве дл  ранней доклинической диагностики гемолитической болезни новорожденньпс (ГВН).

Цель изобретени  - повышение точности и сокращение времени диагносБыпа заподозрена ГБН. Дл  исследовани  на п ти предметных стеклах нанесены тонкие мазки крови новорожденного , высушены и зафиксированы в холодном ацетоне. Препарат 1 после смачивани  в физрастворе заключен под покровное стекло без обработки комплементом и антикомплементарной сытики .

Поставленна  цель достигаетс  тем, ю вороткой (дл  контрол  на аутофлюорес- что в мазках крови ребенка вы вл етс  ценцию). Препарат 2 антикомплементарной меченой сывороткой без предварительной инкубации с комплементом (дл  вы влени  эндогенного фиксированного 15 комплемента)„

Препарат 3. обработан люминесцирую- щей сывороткой против иммуноглобулинов кролика (контроль на неспецифификсаци  комплемента на эритроцитахs что указывает на ГБН. Способ основан на патогенетических процессах, отражающих суть ГБН, - при реакции анти Тел матери и эритроцитов плода происходит фиксаци  на эритроцитах комплемента и его активаци .

Способ осуществл ют следующим образом.

На предварительно обезжиренное предметное стекло нанос т тонкий мазок крови новорожденного (можно ис- пОльзовать пуповинную или периферическую кровь), высушивают при комнатной теьтературе и фиксируют в холодном (+4 С) ацетоне в течение 15 мин. Фиксированный препарат ополаскивают в забуференном физрастворе (0,01 М

20

ток). Препараты 4 и 5 обработаны раст вором комплемента, затем препарат 4 обработан. люминесцирующей сывороткой против иммуноглобулинов кролика (контроль неспецифического св зыва- 25 ни  комплементом люминесцирующих

антисьгоороток), а препарат 5 обработан меченой антикомплементарной сы- вороткой. Все препараты просмотрены под люминесцентным микроскопом. Вы- 30  влено специфическое свечение антифосфатньш буфер) рИ 7,4) и на. него на- , комплементарной сыворотки в препара- нос т комплемент, разведенный физраст- те 5 и более слабое ее свечение в вором 1:10. Инкубируют во влажной ка- препарате 2 (за счет эндогенного ком- мере при З7 с в течение 20 мин. Затем племента) . В других контрольных пре- препарат отмывают проточной водопро- 5 паратах свечени  нет с На этом основа- водной водой в течение 20-30 мин и нии была диагностирована ГБН. ополаскивают в физрастворе. На вла с- иый препарат нанос т антикомплементарную сыворотку, меченую флюорохромами, в рабочем разведении, указанном на ампуле. Инкубируют во влажной камере при комнатной температуре в течение 40 мин. Отмьшают препарат в трех порци х физраствора по 10 мин в каждой. Мазок заключают под покровное стекло в 90%-ный глицерин, разведенный физраствором .

Препарат просматривают в люмиПример 2. У новорожденного С,, родившегосй; 20.02,84, группа крови А (11), резус +. У матери группа

40 крови О (IJ), резус +. Роды преждевременные на сроке 32-34 недели. На вторые сутки по вилась желтуха. Была заподозрена ГБН. Однако на основе известного способа диагностики ГБН вра45 чами-акушерами: этот диагноз не подтвердилс  и бьша установлена физиологическа  жептуха новорожденных.

Дл  уточнери  диагноза проведены

несцентном микроскопе при иммерсионисследовани , аналогичные описанным ном увеличении. ГБН диагностируют при gg в примере 1. Б препарате, обработан- наличии специфического свечени  анти-- ном комплементом и меченой антикомпкомплементарной сыворотки на оболочках эритроцитов.

Пример 1. У новоро оденной К, родившейс  16.02.84, группа крови А (II), резус Ч. У матери группа крови О (I), резус -. К концу первых суток жизни у ребенка развилась желтуха.

Быпа заподозрена ГБН. Дл  исследовани  на п ти предметных стеклах нанесены тонкие мазки крови новорожденного , высушены и зафиксированы в холодном ацетоне. Препарат 1 после смачивани  в физрастворе заключен под покровное стекло без обработки комплементом и антикомплементарной сыческую фиксацию меченых антисыворокомплементарной сыворотки в препара- те 5 и более слабое ее свечение в препарате 2 (за счет эндогенного ком- племента) . В других контрольных пре- паратах свечени  нет с На этом основа- нии была диагностирована ГБН.

Пример 2. У новорожденного С,, родившегосй; 20.02,84, группа крови А (11), резус +. У матери группа

крови О (IJ), резус +. Роды преждевременные на сроке 32-34 недели. На вторые сутки по вилась желтуха. Была заподозрена ГБН. Однако на основе известного способа диагностики ГБН врачами-акушерами: этот диагноз не подтвердилс  и бьша установлена физиологическа  жептуха новорожденных.

Дл  уточнери  диагноза проведены

лементарной сьшороткой, обнаружено специфическое свечение оболочек эрит- , роцитов. Более слабое свечение анти- (g комплементарной сыворотки имелось в препарате, не обработанном предварительно комплементом. В трех других контрольных препаратах свечени  нет. В данном случае предлагаемым способом диагностирована ГВН по системе АВО. Таким образом, предлагаемый способ позвол ет более достоверно диагностировать ГБН.

Пример З.У новорожденного В., родившегос  22.02.84, группа крови В (III), резус +. У матери группа крови А (II), резус +. К концу вторых суток у ребенка по вилась жел туха и бьша заподозрена ГВН.

Дп  установлени  диагноза проведены исследовани , аналогичные описанным в примере 1. При просмотре препаратов в люминесцентном микроско пе ни в одном из них свечени  не.обнаружено . Таким образом, ГБН как причина желтухи отвергнута. Последую щим клиническим обследованием установлено , что причиной желтухи  ви- лась кефалогематома (желтуха вследствие рассасывани  кровоизли ни ),

Дл  проведени  диагностического исследовани  от момента.приготовлени мазка крови до просмотра препаратов в люминесцентном микроскопе требуетс  около 2ч.

Таким образом, ГБН может быть точ но диагностирована без использовани  комплекса из 7 методик в более корот кий срок. Кроме того, предлагаемый способ диагностики позвол ет вы вить ГВН в тех случа х, когда известный комплекс методик не показывает наличи  изоиммунологического конфликта (пример 2).

Выло проведено исследование 73 новорожденных и их матерей известным и предлагаемым способами.

У 40 детей клинически был запо- дозрен изоиммунологический конфликт на основании наличи  желтухи, s у 27, кроме того, имелась несовместимость крови матери и плода по резус-фактору или системе АВО. Известным спосо- бом ГВН была определена у 17 детей (42,5%). Предлагаемьм способом ГВН была диагностирована у 25 детей (62,5%).

Кроме того, у двух детей, у которых известным способом определ лась ГВН, предлагаемый способ позволил отвергнуть установленный диагноз.

Дальнейшие клинические наблюде- ни  и лабораторное обследование во

ВНШШИ Заказ 3958/42

Произв.-полигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. ПроектнаЯ; 4

5 0

5

о

5

всех указанных случа х подтвердили точность предлагаемого способа.

У остальных 13 детей, у которых имелась желтуха в периоде новорож- денности, наличи  ГВН как известным, так и предлагаемым способами не вы влено , у них имелась конъюгационна  желтуха или желтуха вследствие рас- . сасывани  кровоизли ний.

Исследовани  крови 23 здоровых новорожденных как известным так и предлагаемым способами дали отрицательные результаты.

Предлагаемый способ позвол ет вы вить изоиммунологический конфликт не только по системе антигенов резус и АВО, но и по другим; в том числе редким и малоизученным антигенам крови , диагностические сыворотки к которым отсутствуют или труднодоступны. Способ обнаруживает само возникновение реакции антиген - антитело - комплемент. Это обеспечивает его высокую специфичность и точность при диагностике изоиммунологического конфликта у новорожденных. Кроме того , способ позвол ет вы вить ГВН в начальной стадии ее развити , на доклиническом уровне, сразу после рождени  ребенка

Предлагаемый способ прост, доступен широкому кругу специалистов, реализуетс  он при использовании отечественных аппаратуры и реактивов. Способ требует малых временных (около 2 ч) и трудовых затрат.

Таким образом, изобретение обеспечивает точность и надежность способа диагностики ГВН.

и

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Способ диагностики гемолитической болезни новорожденных путем исследовани  крови, отличающийс  тем, что, с целью повьнпени  точности и сокращени  времени диагностики, мазок исследуемой крови, вз тый в течение 1-3 суток жизни новорожденного, обрабатьшают комплементом с последую- щим добавлением антикомплементарной люминесцирующей сыворотки и при вы в лении специфического свечени  на поверхности эритроцитов диагностируют гемолитическую болезрь.

   Тираж 776

   Подписное