SU1242521A1 - Способ получени целлюлолитического ферментного комплекса из фильтрата культуральной жидкости гриба @ @ @ @ 2220 - Google Patents

Description

1

Изобретение относитс  к биотехнологии , а именно к способу получени  целлюлолитического комплекса ферментов гриба Aspergillus terreus ВКМ F 2220..

Цель изобретени  - повьшение выхода и удешевление процесса.

Сущность способа заключаетс  в том, что в качестве сорбента дл  извлечени  целлюлолитического комп- лекса гриба А.terreus ВКМ F 2220, состо щего из п ти ферментов (двух целлобйаз и трех экдоглюканаз) используетс  карбоксильньй катионит типа КМТ или КРК, или Биокарб, или КМ 2п, в то врем  как в известном способе - сульфопропильньш катионит sp-сефадекс (фирма Pharmacia; карбоксиметильный катионит фирмы Pharmacia можно использовать только дл  извлечени  деллобваз, остальные компоненты комплекса на нем не сорбируютс ). Сорбцию ведут при рН 4,0- 4,5.

Пример 1. Гриб. А.terreus ВКМ F 2220 выращивают, мицелий отфильтровывают и отбрасывают. Целлю- лолитический комплекс ферментов из фильтрата культуральной жидкости гриба сорбируют на колонке с карбо- ксильным катионитом КМТ 24 в 0,01 М ацетатном буфере при рН 4,0 со скоростью 150 МП/см Ч. Промывают исходным буфером (2,5 л/л сорбента) и затем элюируют 1М раствором ацетата натри . Комплекс элюируетс  в интервале рН 4,6-5,6 с выходом 100%.

Пример 2. Целлюлолитический комплекс ферментов из фильтрата культуральной жидкости сорбируют на катионите КРК 1-8п в 0,05 М ацетатном буфере при рН 4,5 со скоростью 100 мп/см ч. Промывают 0,05 М ацетатным буфером рН 4,5 (2,5 л/.гт COD-, бента). Затем комплекс элюируют 2М ацетатом натри  со скоростью 51 мл/см г ч. Комплекс ферментов элюируетс  в интервале концентрации элюирующего раствора 0,4-1М с выходом 100%,- при этом удал етс  99% балластного белка.

ВНИИПИ Заказ 3668/26 Тираж 490 Подписное Пронзв.-полигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектна , 4

I

Удельна  активность препарата, ед./г:;

Эндоглюканаза Экзоглюкозидаза Целлобйаза

Пример 3. Полученный, как описано в примере 2, комплекс подвергают дополнительной очистке, как описано в примере 1. Выход 100%.

Удельна  активность препарата, ед./г;:

Эндоглюканаза 21000 Экзоглюкозидаза 274 Целлобиаза 220

Пример 4. Целлюлолитический комплекс гриба Asp. terreus ВКМ 2220 -получают, как описано в примере 1, на колонке с карбоксильным катионитом Биокарб Г-15. Выход целлюлолитического комплекса 100%.

Пример 5. Целлюлолитический комплекс гриба Asp. terreus ВКМ 2220 получгаот, как описано в примере 2, на колонке с катионитом КМ 2п. Выход целлюлолитического комплекса 100%.

Результаты аналогичные приведенным в примерах 1 ,2,, 4 и 5 - выход целлюлолитического комплекса 100%, получены при использовании различных марок катионитов типа КМТ, типа КРК, типа Биокарб, а именно: типа КМТ - КМТ, КМТ-24; типа КРК - КРК-1-1п, КРК-1-2П, КРК-1-5П, КРК-1-8П, КРК-1- -12п, КРК-1-16п,КРК-Г-20п, КРК-1-24п, КРК-1-20т-100; типа Биокарб - Биокар- бы Г-5, Г-:8, Г-10, Г-15, Г-20, Г-40, Э-5, Э-8, Э-10, Э-15, Э-20, Э-40, Биокарб Д.

Использование предлагаемого способа позволит увеличить выход с 82 до 100% и снизить затраты на сорбенты .дл  хроматографии, вследствие чего снизитс t стоимость сорбента дл  получени  комплекса ферментов. Кроме того использование сорбентов на твердой основе позвол ет увеличить скорость протока через колонку с 1,5-5,1 до 100-150 мл/см ; ч и, таким образом, сократить врем  очистки препарата ферментов.

Claims (2)

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЦЕЛЛЮЛОЛИТИЧЕСКОГО ФЕРМЕНТНОГО КОМПЛЕКСА ИЗ ФИЛЬТРАТА КУЛЬТУРАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ ГРИБА ASPERGILLUS TERREUS ВКМ: F 2220 путем ионообменной хроматографии, отлич ающийс.я тем, что, с целью повышения выхода и удешевления процесса, хроматографию проводят на карбоксильном катионите на неполисахаридной основе типа КМТ или КРК, или Биокарб, или КМ 2п и комплекс элюируют в интервале pH

4,6-5,6.

2. Способ по п.1, о т л и чающий с я тем. что сорбцию осуществляют при pH 4,0-4,5.¹ ю

ю сл ю >

Удельная активность ед./г:

^Эндоглюканаза ^L. Экзоглюкозйдаза Целлобиаза препарата, * 1242521