SU1224335A1 - Способ получени фосфолипидов из микроорганизмов - Google Patents

Description

10

20

. f .1224335

Изобретение относитс  к биотехнологии и касаетс  способов получени  фосфолйпидов микробиологическим путем .

Целью изобретени   вл етс  повышение выхода, улучшение качества фосфолйпидов и сокращение времени процесса.Согласно данному способу обработ- ка едким кали создает оптимальные услови  вьщелени  скрытых фосфолйпидов , например, вход щих в состав полисахаридов, в которых они св заны с другими компонентами, в частности с сахаридными остатками, прочными ковалентными св з ми, не разрываемыми хлороформом и метанолом. В силу этого выдел етс  часть продукта, не вьщел емого известными способами. Така  обработка приводит к увеличению степени денатурации примесей, не затрагива  фосфолилиды, что позвол ет повысить качество продукта.

Способ осуществл етс  следующим образом.

Биомассу микроорганизмов обрабатывают /грихлоруксусной кислотой (ТХУ) до 5-8% конечной концентрации. К суспензии прибавл ют свежеприготовленную смесь хлороформа и метанола при соотношении (0,5:1)-(2:1), интенсивно перемешивают в течение 3-5 мин при комнатной температуре и в перемешиваемую смесь медлеи}ю в течение 1-2 мин добавл ют водньй раствор гид- 35 роокиси едкого кали до состо ни  нейтрализации смеси в объеме, соот- ветствующем 1/5 объема смеси, центри- фигируют дл  разделени  смеси на Зависимость.выхода продукта и его две фазы (4000 д, 10 мин), отбирают 40 ачества от соотношени  хлороформа ншший хлороформовьй слой, содержа- и .метанола представлена в табл. 2.

2

раствора гидроокиси кали  и продол жают перемешивание, в течение 3 мин. Затем центрифугируют, верхню 1 фазу декантируют и высушивают в токе азота 5 получа  неочищенную, форму препарата , а затем промывают водньм солевым раствором в течение 1 мин.

Продолжительность процесса 2,5 ч, выход 21,7 мг/г. Получен препарат чистьй, без белковых примесей.

Пример 2. Способ осуществл - етс , как в примере 1, но обработке подвергают биомассу бактерии Saccha«- romyces cerevisiae, а соотношение 15 хлороформа и метанола составл ет 0,5:1, продолжительность процесса 2,3 ч, выход 21,51 мг/г.

Получен препарат чистый, без бел-, ковых примесей, .

. Сравнительные данные представлены

в табл. 1.

Таблица 1

30

щий фосфолипиды, получа  неочищенную форму препарата, затем хлороформовьй слой промывают равным объемом водного солевого раствора в течение 45 1-2 мин и высушивают его в токе азота.

Ц р и м е р 1. Биомассу бактерий Esclierichia coli М-17 в количестве 8,9 г равномерно распредел ют в восьми центрифужных стаканах по 50 100 мл, В каждый стакан приливают по 0,2 мл 5%-ного раствора ТХУ. Переме- шившот в течение 2 мин и вливают в нее 30 мл свежеприготовленной смеси хлороформа II метанола 2:1 продолжают 55 перемешивать в течение 4 мин при комнатной температуре, после чего добавл ют в течение 1,5 мин 6 мл водного

Таблица 2

35

2

раствора гидроокиси кали  и продол жают перемешивание, в течение 3 мин. Затем центрифугируют, верхню 1 фазу декантируют и высушивают в токе азота, получа  неочищенную, форму препарата , а затем промывают водньм солевым раствором в течение 1 мин.

Продолжительность процесса 2,5 ч, выход 21,7 мг/г. Получен препарат чистьй, без белковых примесей.

Пример 2. Способ осуществл - етс , как в примере 1, но обработке подвергают биомассу бактерии Saccha«- romyces cerevisiae, а соотношение хлороформа и метанола составл ет 0,5:1, продолжительность процесса 2,3 ч, выход 21,51 мг/г.

Получен препарат чистый, без бел-, ковых примесей, .

. Сравнительные данные представлены

в табл. 1.

Таблица 1

Таблица 2

312243354

При использовании предлагаемого вьшаетс  выход в 14 раз, кроме того, способа сокращаетс  врем  процесса возможно получение фосфолипидов без по сравнению с известным в 20 раз, по- белковых примесей.

Claims (1)

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФОСФОЛИ-

   ПИДОВ ИЗ МИКРООРГАНИЗМОВ, включаю- ’ щий получение биомассы, предвари тельную обработку ее трихлоруксусной кислотой, экстракцию с использованием метанола и хлороформа в качестве экстрагента, отделение из полученного экстракта целевого продукта и промывку его водным раствором солей, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода,улучшения качества фосфолипидов и сокращения времени процесса, хлороформ и метанол берут в виде смеси при их соотношении (0,5:1)-(2:1), экстракцию ведут при комнатной температуре, а экстракт перед отделением целевого продукта нейтрализуют едким кали, о ю ю N) 4^ СО СО СП