SU1109631A1

SU1109631A1 - Способ определени витамина @

Info

Publication number: SU1109631A1
Application number: SU823505815A
Authority: SU
Inventors: Александр Николаевич Стефанович; Марк Самойлович Жедек; Игорь Анатольевич Ионов; Петр Федорович Сурай
Original assignee: Украинский научно-исследовательский институт птицеводства
Priority date: 1982-08-23
Filing date: 1982-08-23
Publication date: 1984-08-23

Abstract

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИТАМИНА KY путем экстракции его из анализируемой пробы органическим растворителем, очисткой экстракта с последующим хроматографированием экстракта на пластинке со слоем силикагел в подвижной фазе, содержащей гексан, удалением целевого компонента с пластинки и фотометотличающийрированием , с тем, что, с целью повышени эффективности и точности способа, в качестве органического растворител используют бензол, содерстсащий 1-2 об.% н-бутанола, и в качестg ве подвижной фазы используют гексан - хлороформ при объемном соотно- (Л шении компонентов 46-52:54-48.

Description

со

О5

со Изобретение относитс .к аналити ческой химии, в частности к способам определени филлохинона (витамина К), и может использоватьс в различных аналитических лаборато ри х. Известен способ определени вит мина KJ, в экстрактах растительньпс материалов на пластинке, покрытой слоем окиси алюмини с использованием в качестве подвижной фазы гек сана и реактива обнаружени 1%-ного раствора 2,6-дихлорфенола или 70%-ной перхлоруксусной кислоты и индофенола lj. Недотатком данного способа вл етс недостаточно высока эффективность разделени витамина К 1 и сопутствующих компонентов (степень разделени не превышает 1,1). Наиболее близким по технической сущности и достигаемому эффекту к предлагаемому вл етс способ опре делени витамина К путем экстрагировани его из образца гексаном, очисткой экстракта с последующим хроматографированием экстракта на пластинке со слоем силикагел в подвижной фазе гексан - эфир, при соотношении компонентов 4:.f, удале нием целевого компонента с пластин ки и фотометрированием 2J. Недостатком известного способа вл етс недостаточно высока эффективность разделени целевого и сопутствующих компонентов (степень разделени не выше 1,27). и относительно мала точность определени содержани витамина К. Целью изобретени вл етс повы шение эффективности и точности спо соба . Поставленна цель достигаетс тем, что согласно способу определе ни витамина К путем экстракции его из анализируемой пробы органическим растворителем с последующим хроматографированием экстракта на пластинке со слоем силикагел , в подвижной фазе, содержащей гексан, удалением целевого компонента с пл тинки и фотометрированием, в качес ве органического растворител испо зуют бензол, содержащий 1-2 об.% н-бутанола и использование в качес ве подвижной фазы гексан - хлорофо при объемном соотношении компонентов 46-52:54-А8. 12 На чертеже представлен калибровочный график дл определени количества витамина К в экстракте из растительного материала. Определение витамина К провод т следующим образом. Навеску трав ной муки внос т в пробирку с притертой пробкой, заливают 10 МП экстрагирующей смеси бензол , содержащий 1-2 об.% н-бутанола , и став т в темное место на 3 ч. Далее содержимое пробирки пропускают через колонку диаметром 8-10 мм, заполненную силикагелем и безводным сульфатом натри , а пробирку ополаскивают п тью порци ми по 5 мл экстрагирующей смеси, которые также пропускают через колонку. Фильтрат выпаривают на роторном испарителе при 75-80°С и сухой остаток раствор ют в 0,2 мл бензола. Затем, с помощью микропипетки, перенос т количественно полученный раствор на пластинку Силуфол и по обе стороны от образца нано-; с т раствор - свидетель витамина К . Хроматографирование (восход щее) провод т в камере дл тонкослойной хроматографии, насьш5енной парами подвижной фазы гексан - хлороформ, вз тых в соотношении 46-52:5448 об.%. После того, как фронт растворител дойдет до верхнего кра пластинки, ее вынимают, просушивают и быстро определ ют положение витамина К по свидетелю под ультрафиолетовой лампой - обнаруживаетс в виде темной полосы. П тно силикагел с адсорбированным витамином соскабливают с пластинки , перенос т в пробирку с притертой пробкой, заливают 3 мл 96%-ного этилового спирта и став т в темное место на 30 мин дл элюировани витамина. Затем элюат отфильтровывают через бумажньш фильтр, смоченный этиловым спиртом, пробирку и фильтр ополаскивают 2 мл этанола. Далее фотометрируют элюат при длине волны 281 нм, переливают его в стекл нн5то центрифужную пробирку и облучают (сверху) лампой дневного света, расположенной на высоте 5 мм над пробиркой, в течение 7 ч. Затем повторно фотометрируют элюат при той же длине волны и по разнице показаний между первым и вторым измерени ми определ ют прирост экстинции.

Расчет содержани витамина К. в исследуемом образце провод т по формуле

(Е21 Ej) 000000 309100-А

где X - содержание витамина К в 1

трав ной муки, мкгi оптическа плотность исследуемой пробы до облучени ;

оптическа плотность исследуемой пробы после облучени ;

5 объем элюата витамина К после хроматографировани , мл, 1000000 - коэффициент пересчета г

в мкг;

309 - прирост Е, %; 100 - объем раствора, содержащего 1 г витамина К, мл, А - навеска исследуемого материала , г

Пример 1, Берут 500 мг. трав ной муки, внос т навеску в пробирку с притертой пробкой, заливают 10 МП экстрагирующей смеси бензол , содержащий 2 об,% н-бутанола (к 10 мл бензола добавл ют 0,2 мл н-бутанола) и хорошо перемешивают . Пробирку став т в томное место на 2 ч. Заполн ют колонку диаметром 10 мм слоем силикагел (2 см) и сверху него насыпают 1 см безводного сульфата натри . Содержимое пробирки пропускают через колонку, а пробирку ополаскивают п тью порци ми по 5 мл экстрагирующей смеси, которые также пропускают через колонку. Фильтрат выпаривают на роторном испарителе при 80°С и сухой остаток раствор ют в 0,2 мл бензола.

Затем с помощью микропипетки перенос т полученный раствор (0,2 мп) на пластинку Силуфол, размером 15x15 см, и по обе стороны образовавшейс полосы нанос т свидетельраствор - 5 мкг филлохинона в 0,1 МП хлороформа.

Развитие хроматограммы провод т в камере (180-70-170 мм), насьпценной в течение 30 мин парами смеси растворителей гексан - хлороформ, вз тых в объемном соотношении 50:50. После того, как фронт подвижной фазы подниметс на высоту

15 см, пластину вынимают из камеры, просушивают и быстро определ ют положение витамина К по свидетелю под ультрафиолетовой лампой (про вл етс в виде темной полосы).

П тно силикагел с адсорбированным на нем витамином К соскабливают с пластинки, перенос т в пробирку с притертой пробкой, заливают 3 мп

96%-ного этилового спирта и став т в темное место на 30 мин. Затем отфильтровывают раствор через бумажный фильтр (красна полоса), смоченный этиловым спиртом, пробирку ополаскивают 2 мл этанола, который перенос т на тот же фильтр. Далее фотометрируют фильтрат при длине волны 281 нм, переливают его в стекл нную центрифужную пробирку и облучают (сверху) лампой дневного света, расположенной на высоте 5 мм над пробиркой в течение 7 ч. Затем провод т повторное фотометрирование и по разнице показаний между первым и вторым измерени ми определ ют прирост экстинции и определ ют количество витамина К, процент его извлечени и величины Кг сопутствующих компонентов. При этом количество витамина К, определ емое по калибровочному графику (чертеж), заключено в диапазоне 5-30 мкг (2-6 мкг/мл).

В предлагаемом способе определено содержание витамина К на уровне 16,8 мкг/г (при 100% извлечении ) и величины Rr - дл витамина К , равной 41, дл /5 -каротина 87, 6 -токоферола 26, в то врем как в

известном способе величины Rr равны 62, 79 и 38 соответственно. Степень разделени витамина К и сопутствующих ему компонентов составл ет в предлагаемом способе 1,62 ,12, а в известном - 1,27-1,6.

Пример 2. Осуществл ют определение витамина К, аналогично примеру 1, но в качестве подвижной фазы используют смесь гексанхлороформ , имеющую состав 46:54 об.% Результаты предоставлены в табл. 2.

Пример 3. Осуществл ют определение витамина К, аналогично примеру 1, но подвижна фаза

гексан - хлороформ имеет состав 52-48 об.%. Результаты представлены в табл. 2.

Пример 4. Осуществл ют определение витамина К, аналогично ipHwepy 1, с подвижной фаэой гекрйн - хлороформ, имеющей различный объемный состав. Результаты представлены в табл. 2. П р и м -е р 5. Осуществл ют определение витамина К, аналогичн примеру 1, анализиру усредненный образец люцерновой муки, содержащи 19 мкг/г основного компонента. Параллельно провод тс анализы этого же образца по известному способу. Результаты экспериментов представлены в табл. 3. Данные табл. 1-3 свидетельствую о том, что оптимальньм соотношение гексана и хлороформа в подвижной фазе вл етс интервал 45-52: :54-48 об.%. В этих пределах достигаетс наиболее точное определение витамина К в исследуемом обра це трав ной муки и наилучша эффек тивность разделени . В качестве экстрагентов витамина К из растиКомпоненты

Состав подвижной фазы, об. % тельного материала используетс бензол в смеси с н-бутанолом. Сравнительный анализ выхода и определ емого количества витамина К из одного и того же образца при различном составе экстрагирующей смеси описываетс следующим примером. Пример 6. Определение витамина К провод т, аналогично примеру 1, но в бензол добавл ют 1,5 об.% н-бутанола. Результаты представлены в табл. 4. Таким образом, предлагаемый способ характеризуетс повьшшнной эффективностью разделени витамина К и сопутствующих ему компонентов (степени разделени увеличиваетс на 25-32%), кроме того повьшаетс точность определени количества витамина К в образце (величина стандартного отклонени уменьшаетс от 3,8 до 0,05). Таблица 1

Определено витамина К«7 97,9 97,6 99,7 99,8 ,. t А

Т а

лица 100 101 99,0 98,2 97,1 96 100 99,599,0 Бензол О 0,51,0 н-Бутанол Количество витамина 16,80 16,8617,43 % извлечени 94,6 96,6100,0

Таблиц-а 3 98,598,097,096,0 1,52,03,0 4,0 17,4117,4317,0816,92 99,9100,098,097,1

8 с, mijwi

Claims

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИТАМИНА Ку путем экстракции его из анализируемой пробы органическим растворителем, очисткой экстракта с последующим хроматографированием экстракта на пластинке со слоем силикагеля в подвижной фазе, содержащей гексан, удалением целевого компонента с пластинки и фотометрированием, отличающий с я тем, что, с целью повышения эффективности и точности способа, в качестве органического раствори теля используют бензол, содержащий

1-2 обЛ н-бутанола, и в качестве подвижной фазы используют гексан - хлороформ при объемном соотношении компонентов 46-52:54-48.