SU1015831A3 - Способ получени биомассы - Google Patents
Способ получени биомассы Download PDFInfo
- Publication number
- SU1015831A3 SU1015831A3 SU802955225A SU2955225A SU1015831A3 SU 1015831 A3 SU1015831 A3 SU 1015831A3 SU 802955225 A SU802955225 A SU 802955225A SU 2955225 A SU2955225 A SU 2955225A SU 1015831 A3 SU1015831 A3 SU 1015831A3
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- culture
- growth
- methanol
- broth
- days
- Prior art date
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОМАССЫ путем культивировани продуктов ее бактерий на питательной среде, содержащей метанол в качестве основного источника углерода, источник азота и минеральные соли, в услови х аэрации среды с последукпцим отделением биомассы и ее сушкой, отличающийс тем, что, с целью повьлиени выхода биомассы, в качестве бактерий, продуцирующих биомассу, используют штамм Flavobacterium tosaensis DS-1 (FERM-P 4058) или Pseudomonas wakayamaensis DS-25 (FERM-P № 4100), или Flavobacterium methanolicola DS-16 (FERM-P 409 , или Pseudomonas kyotoensis DS-22 (FERM-P 4099).или Pseudomonas . ; aichiensis DS-26 4FERM-P I ДЮТ), или Corynebacterium yamanasiensis bs-31 (FERM-P 4106).
Description
СП
00
c Изобретение относитс к микробиологической промышленности, а именно к способу получени бактериальной биомассы, использующейс в Качестве корма, пищевых продуктов и т.д., путем культивировани бакт рий на питательной среде, содергжа дей метанол в качестве единствен ного источника углерода. Известен способ получени биома сы путем культивировани бактерий рода Corvnebacterium и Pseudomonas на питательЕюй среде, содержащей м танол в качестве источника углерода , источники азота, фосфора, необ ходимые минеральные соли, стимул торы роста, при аэрации среды с по ледующим отделением и сушкой полученной биомассы Cl. Выход бактериальной биомассы по метанолу составл ет 40 вес, %, содержание сырого протеина 70-80%. Цель изобретени - повьпаение вы хода биомассы с высоким содержанием сырого протеина. Поставленна цель достигаетс тем, что согласно способу получени биомассы, предусматривающему культивирование продуцирующих биомассу бактерий на питательной среде, содержащей метанол в качестве основ: ного нсточ}1ика. углерода/ источник азота и минеральныесоли, в услови , аэрации среды с последующим отделением и сушкой биомассы, в качестве бактерий, продуцирующих биомассу используют Flavobacterium tosaensis (FERjM-P № 4058) или Pseudomonas wakayamaensis DS-25 FERM-P № 4100), или Flai obacterium methanolicola DS-16 (РЕШ-Р № 4098) или Pseudomonas kyotoensi.s DS-22 (FERM-P W 4099), или Pseudomonas aichiensis DS-26 (FERM-P № 4107), или Corynebacterium yamanasiensls DS-31 (FERM-P № 4106), Используемые в предлагаемом спос бе штамг и депонированы в Науч:но-исслеловательском институте ферментации Агентсва прО1%1ышленно-научных разработок и технологических процес сов в Японии. Штамг.чы имеют следующие характерн тики. Штамм Flavobacteriuni tosaensis DS-1 (FERM-P № 4058). Морфологические признаки; Штамм культивировали на питатель ной среде и питательном агаре при в те-шние 3 дн. Форма и размер клеток - палочки от 0,5-0,75 до I, мк, Колонии клеток единичные й1Ш пар ные. И одв и жн ос ти к ет Спор нет, Окрг шиваемость по Граму - отрица тельна . Кислоустойчивость - отрицатель- : на . Рост (развитие), бактерий на различных культуральных средах: На чашках Петри с питательным агаром - интенсивный рост при в течение 3 дн, образовавшиес колонии клеток имеют круглую форму диаметром 2-3 мм, выпуклую с однородной структурой, гладкую, ровную поверхность с целыми (неповрежденными ) кра ми, желтовато-белые или молочно-белые (беловатые), блест щие , искр щиес , полупрозрачные (просвечивающие) и слизеподобные. На чашках Петри с метанолсодержащим агаром - интенсивный рост при 37С в течение 3 дн, колонии клетоккруглые диаметром 2,0-2,5 Мм, выпуклые с гладкой поверхностью и ровными цельными кра ми, белые или опалесцирующие , блест щие, полупрозрачные (просвечивающие) и слизеподобные . На скошенном питательном агаре нитевидный рост при 37С в течение 3 дн., колонии клеток имеют гладкую ровную поверхность, умеренно выступающую и окрашенную в желтоватобелый или молочно-бе.лый цвет с блест щим гл нцем, полупрозрачные и слизеподобные . На скошенном метанольном агаре нитевидный рост при З7с в течение 3 дн, колонии клеток имеют гладкую poвнyю поверхность, умеренно выступающую вперед и окрашенную в белый цвет с опалесцирующим оттенком и блест щим гл нцем, полупрозрачные (просвечивающие) и слизеподобные. На питательном бульоне - интенсивный рост при в течение 3 дн, культура становитс мутной, образуетс осадок (отстой), на поверхности образуетс бела кольцеобразна тонка пленка (пелликула). На водном пептонном бульоне - интенсивный рост при 37°С в течение 3 .ДН1, культура становитс мутной. Образуетс осадок (отстой), на поверхности образуетс кольцеобразна пелликула. На метанолсодержацем бульоне интенсивный рост при 37°С в течение 3 дн культура мутнеет, образуетс садок, на поверхности образуетс кольцеобразна пелликула. На питательном бульоне с палочкаи желатина - рост на поверхности тш протекающий до г лубины 2-3 мм ри 37 С в течение З дн. На питательном желатиновом бульоне (на палочках желатина) - поверхностный рост при 30 С в течение 5 дн с образованием осадка, при этом желатин разжижаетс .
На лакмусовом молоке - при 37°С образуетс кислота, культура приобретает красный цвет и коагулирует
Биохимические признаки:
Нитраты не восстанавливает.
Реакци денитрификации - положительна .
Ретикул рна реакци (MR-TecT) отрицательна .
VP-тест - отрицательна реакци .
Индол не продуцирует.
Сероводород не продуцирует.
Крахмал не гидролизует.
Цитраты (в среде Козера) не утилизирует .
, Утилизирует неорганический азот, 1ммонийные соли и нитраты.
Не продуцирует pf-пигмент (в средах А и В Кинга).
Уреазна реакци - положительна
Оксидазна реакци - положительна .
Каталазна реакци - положительна .
РОСТ на метанолсодержащем бульоне при рН 5-9 (оптимальный диапазон рН 6-8). При рН 4 и 10 .роста нет.
Хороший рост наблюдаетс в диапазоне температур 5 - (оптимальный диапазон 25 - 42с) ; при 45°С ро9та нет.
(Отношение к кислороду - аэробна культура.
0-F тест (по методу Хьюго Лейфсона ) - окислительно метаболизирует глюкозу (слабое образование кислоты
Продуцирование кислоты и газа из Сахаров (при использовании водного пептона, содержащего сахар в концентрации 1%, при 37С в течение 10 дн цзедставлено в табл. 1.
Таблица 1
Продолжение табл. 1
Д-Сорбит
+ .(слабое) Д-Маннит Инозит Глицерин
+ (слабое)
)
+ (слабое) Крахмал
Ассимил ци Сахаров (при использовании сахара вместо метанола в метанолсодержащем бульоне в концентрации 1% при ЗТС в течение 10 дн.) представлена в табл. 2.
Таблица 2
Ассимил ци
Сахар
25
30
35
40
+ (слабое)
Л-Арабизона Д-Ксилоза
+ (слабое) Д-Глюкоза
+ (слабое)
Д-Манноза + (слабое) Д-Фруктоза
+ (слабое)
Д-Галактоза + (слабое) Мальтоза + (слабое) Сахароза + (слабое) Лактоза + (слабое) Трегалоза
Штамм выделен из почвы.
Метанолсодержаща агарова среда использовавша с в° указанных опытах (тестах) по культивации бактерий данного штамма, имела следуювщй состав/ мг:.
55
60
65
20000
Агар
Дистиллированна вода
Культуральную среду стерилизовали при в течение 15 мин, после чего прибавили в асептических услови х 20 г метанола.
Дл приготовлени метанолсодержащего бульона использовали аналогиную среду, но без добавлени агара, а количество метанола снизили до 5 г
Штамм Pseudomonas wakayamaensi s
DS-25 CFERM-P № ,4100},
Морфологические признаки:
Штамм культивировали на питательном бульоне и питательной агаровой среде при 31°С в течение 3 дн.
Форма и размер клеток - палочки от 0,3-0,4 до 2,0-2,2 мк.
Колонии клеток единичные или парные .
Подвижные с пол рно расположен-i ными жгутиками.
Спор нет.
Окрашиваемость по Граму - отрицательна .
Кислотоустойчивость - отрицательна .
Рост бактерий на различных культуральных средах:
На чашках Петри с питательным агаром - интенсивный рост при 37с в течение 3 дн,, колонии клеток крулой формы диаметром 3-4 мм с шероховатой поверхностью, дольчатыми, разделенными на лопасти, кра ми (кромками) и молочно-желтовато-белой окраской, меловые, полупрозрачные (просвечивающие) и слизеподобные .
На чашках Петри с меАнолсодержащим агаром - интенсивный рост при 37°С в течение 5 дн., колонии клеток диаметром 3-4 мм, выпукло-выступающие с глубоким пупком (углублением в центре), груба , шероховата поверхность, цельные кра , опалесцирующий молочно-белый цвет и блест щий гл нец, полупрозрачные и слизеподобные.
На скошенном питател -ном агаре нитевидный рост при 37 С в течение З дн., колонии клеток имеют гладкую поверхность и умеренно выступающую (.выпуклую форму, волнообразные или дольчатые (разделенные на лопасти кра , молочный желтовато-белый цвет с тускловатым блеском, полупрозрачные и слизеподобные.
На скошенном метанолсодержащем агаре - нитевидный рост при в течение 5 дн., колонии клеток имеют ровную, гладкую поверхность и умеренно выступающую (выпуклую) форму, кра цельные, молочно-опалесцирующий цвет и блест щий гл нец, полупрозрачные и слизеподобные.
На питательном бульоне - умеренный рост при 37С в течение 3 дн. , не образуетс никакого осадка или отсто , на поверхности образуетс пелликула.
На встр хиваемом питательном бульоне - интенсивный рост при 37С в течение 3 дн., культура становитс мутной, образуетс осадок, полупрозрачна (просвечивающа ).
На пептонном водном бульоне (встр хиваемом) - интенсивный рост при в течение 3 дн,, культура становитс мутной, образуетс осадок .
На метанолсодержащем бульоне интенсивный рост при 37°С в течение 3 дн,, культура становитс мутной , образуетс осадок (отстой), на поверхности образуетс кольцеобразна пелликула , полупрозрачна .
На метанолсодержащем бульоне (встр хиваемом)- интенсивный рост при в течение 3 дн., культура становитс мутной, образуетс осадок (отстой), полупрозрачна .
На питательном бульоне (палочковом ) - рост на поверхности или пртекающий в глубину на 1-3 мм при в течение 3 дн. , поверхность имеет молочный желтовато-белый цвет
На питательном желатиновом бульоне (палочковом) - поверхностный рос при 30°С в течение 5 дн., с образованием осадка, желатин расжижаетс .
На лакмусовом молоке - при 37 С культура коагулирует.
Биохимические признаки:
Нитраты восстанавливает.
Реакци денитрификации - отрицательна .
Ретикул рна реакци (в мальпигивых тельцах) - отрицательна (MR-тес
Vl-тест - положительна реакци .
Индол не продуцирует.
Сероводород не продуцирует.
Крахмал гидролизует.
Утилизирует цитрат (среда Козера
Усваивает неорганический азот.
Ассимилирует аммонийные соли, нира ты.
fJe продуцирует пигмент (среды А jd В Кинга) .
Уреазна реакци - положительна
Каталазна реакци - - положительн а .
И1)терва/ Ь температуры и рН дл роста бактерий данного щтамма на ме1анолсодержащем бульоне ваоьируютс (рН регулируют путем добавлени водного раствора гидроокиси натри или сол ной кислоты). Наблюдаетс хороший рост при рН от 6 до 9. При рН 5 и 10 не наблюдаетс никакого pocid. Хоро:)ий рост в диапазонй
температур от 5 до . При 41 С никакого роста не происходит.
0-F тест (по методу Хьюго Лейфсо на ). - окислительно метаболйзирует глюкозу.
Отношение к кислороду - аэробна культура.
Продуцирование кислоты и газа из Сахаров (при использовании пелто иной воды, содержащей сахар в.|{он центрации 1%, при 37 С в течение 10 дв.) представлено в табл. 3 .
Т а б л и ц а 3 Л-Арабиноэ Д-Ксилоза Д-Глюкоза д-Манноза Д-Фруктоза д-Галактоэ Мальтоза Сахароза Лактоза . Трегалоза Д-Сорбит Д-Маннит Инозит Глицерин Крахмал АССИМИЛ вании саха танолсодер рации 0,5 10 дн.) по Л-Арабино Д-Ксил03а Д-Глюкоза Д-Манноза Д-Фруктоз Д-ГалакТо
Продолжение табл. 4 Штамм выделен-из почвы. Метанолсодержаща агарова среда использовавша с в тестах по культивации бактерий указанного штамма, имела следующий состав, мг: КН2РО . Na2KP04 (NH4),iS04 MgSO. - THzO CaCli- 2H20 FeS04- 7H20 ZnSQ,- 7HjO . 1,4 0,25 СиЗОд-SHjO 0,24 NaaMo04 CoCli- 0,24 1,2; MnSQd- SHj-O 20000 Arap Дистиллированна вода. Культуральную. среду стёрйлизрва ли при 120С в .течение 15 МЙй после чего добавили в асептических услови х 20 г,метанола. Дл получени мётанолсодержащего бульона приготовили аналогичную среду, но $ ее составе совсем не использовали агар и количество метанола сократили до 5 г. Штамм Flavobacterium methanolicola DS-16 (FERM-P №4098). . Морфологические признаки; Штамм культивировали на питательном бульоне или питательной агаровой среде при 37°С в течение 3 дн. форма.и размер клеток - палочки от 0,5-0,7 до 1,5-1,8 мк. Колонии клеток единичные или парные .. , Подвижности нет. Спор нет.. Окрашиваемость по Граму - отриательна . Кислотоустойчивость - отрицательа . РОСТ бактерий на различных куль-у уральных средах1 На чашках Петри с питательным агаром - интенсивный рост при З7с в течение 3 дн., колонии клеток имеют круглую форму диаметром 4-5 выпуклые, однородна , равномерна структура, гладка поверхность, кра целые, окраска желтовато-кори нева , блест ща , полупрозрачна (просвечивающа ) и слизеподобна На чашках Потри с метанолсодержаишм агаром - интенсивный рост при ЗТС в течение 5 дн., колонии клеток имеют круглую форму диаметром 2-3 мм, вып чивание носит хара тер выпуклости, гладка ровна поверхность , целые кра , молочный желтовато-белый цвет И блест щий г нец, полупрозрачна и слизеподобна . На скошенном питательном агаре нитевидный рост при в течение 3 дн., колонии клеток имеют умерен выступающую форму с шероховатой по верхностью и целой кромкой, желтовато-коричневые блест щие, полупро зрачные и слизеподобные. На скошенном метанолсодержащем агаре - нитевидный рост при в течение 5 дн. , колонии клеток ум ренно вып ченные (выступающие) с гладкой поверхностью и целой кромк молочно-желтовато-белые, блест щие полупрозрачные (просвечивающие) и слизеподобные. На питательном бульоне - умерен ный рост при в течение 3 дн. , образуетс осадок, на поверхности образуетс пелликула. На питательном бульоне (встр хиваемом ) - интенсивный рост при в течение 3 дн., культура ста новитс мутной, образуетс осадок, полупрозрачна . На пептонной воде (встр хиваемой ) - интенсивный рост при в течение 3 дн.у, культура становитс мутной, образуетс осадок. На метаноЯ :одержащем бульоне интенсивный jjc ст при З7с в течени 3 дн., культура становитс мутной, образуетс осадок, на поверхности об разуетс кольцеобразна пелликул полупрозрачна , На метанолсодержащем е/льоне (встр хиваемом) - интенсивный рост при З7с в течение 3 дн. , культура становитс мутной,.образуетс осадок , полупрозрачна .На питательном бульоне (в виде столбиков) - рост на поверхности или протекающий до глубины 3-5 мм при 37°С в течение 3 дн. поверхп ность желтовато-коричнева . На питательном желатине (в виде столбиков; - при 3.0 С в течение 5 д не происходит никакого разжижени желатина. На лакмусовом молоке - при 37°С культура коагулирует. Биохимические признаки: Нитраты восстанавливает. Реакци денитрификации - положительна . Ретикул рна реакци (MR-тест) отрицательна . VP-тест - положительна реакци . . Продуцирует индол и сероводород. Крахмал гидролизует. Утилизирует цитраты (среда Козера ), аммонийные соли, нитраты, неорганический азот. Не продуцирует пигмент (среды А и В Кинга). Уреазна реакци - положительна Оксидазна реакци - положительна . Каталазна реакци - положительна . Температуру и рН дл роста бактерий на метанолсодержащем бульоне варьируют (рН регулируют путем прибавлени водного раствора гидроокиси натри или сол ной кислоты). Хороший рост наблюдаетс при рН от 5 до 9 (предпочтительный диапазон рН б - 8), причем при рН 4 и 10 роста не наблюдаетс , и температуре в диапазоне от 15 до 40°С (температурный интервал от 25 до 40°с вл етс предпочтительным), при 42°с роста не происходит. Отношение к кислороду - аэробна культура. 0-Р тест (по методу Хьюго Лейфсона ) - окислительно метаболизирует глюкозу. Продуцирование кислоты и газа из сахаров (при использовании пептонной воды с концентрацией сахара 1 вес. % при в течение 10 дн.) риведено в табл. 5. Таблица 5 -f (слабое) Л-/ рабиноза Д-Ксилоза + (слабое) Д-Глюкоза + I слабое) Д-Манноза -t- (слабое) Д Фруктоза Д-Галактоза Мальтоза + (слабое) Сахароза Лактоза + (слабое) Трегалоза Продолжение т Д-Сорбит Д-Маннит Инозит Глицерин Крахмал Ассимил ци Сахаров (при зовании сахара .вместо метан метанолсодержащем бульоне в рации 0,5 вес. % при в ние 10 дн.) показана в табл Табли Сахара Ассими + X сл Л-Ара би но за Д-Ксилоза + (сл + (сл Д-Глюкоза + (сл Д-Манвоза + (сл Д- pyктoзa + (сл Д-Галактоза + (сл Мальтоза + (сл Сахароза Лактоза Трегалоза Д-Сорбит + (сл Д-Мг.ннит t (сл Инозит Штамм выделен из почвы. Метанолсодержаща агаров использовавша с в тестах п тивации бактерий указанного имела следующий состав, мг: 1500 Na2.HP04 3200 (Nh4)2.S04 3000 MgSQj- THjO 500 CaCla- 2hj.D 100 10 1, FeS04.УНаО ZnS04.- 7НгО CuSC.- SHjO 0, Ма2.МоОф- 2H,.0 0, CoCli- 0, МпЗОд- 1, 20000 Агар Дистиллированна вода Культуральную среду стер ли при в течение 15 м ле чего прибавили в асептических услови х 20 г метанола. Метанолсодержащий бульон имел аналогичный состав, но не исполь- зовали агар, а количество метанола сократили до 5г. Штамм Pseudomonas kyotoensis DS-22 (FERM-P 4099) . Морфологические признаки: Штамм культивировали на питательном бульоне и питательной агаровой среде при 37°С в течение 3 ди. Форма и размер клеток - палочки от 0,5 до 1,7-1,8 мк. Колонии клеток единичные или парные . Подвижные с пол рно расположенными жгутиками. Спор нет. Окрашиваемость по Граму - отрицательна . Кислотоустойчивость - отрицательна . Рост бактерий на различных культуральных средах: На чашках Петри с питательным агаром - интенсивный рост при в течение 3 дн., колонии клеток .круглые диаметром 3-4 мм с ровной глакой поверхностью и цельными или волнообразными кра ми ( кромкой), молочножелтовато-белые , меловые, .полупрозрачные и слизеподобные. На чашках Петри С метанрлсодержащим агаром - интенсивный рост при 37 Св течение 5 дн. Колонии клеток круглые -диаметром 3-4,5 мм, выпуклой формы с шероховатой поверхностью и целыми кра ми, опалесцирующие меловые, полупрозрачные и слизеподобные . На скошенном питательном агаре нитевидный рост при З7с в течение 3 дн., колонии клеток умеренно вып ченные с гладков ровной поверхностью и целыми или волнообразными кра ми, молочно-желтовато-белые, меловые, полупрозрачные (просвечивающие ) и слизеподобные . На скошенном метанолсодержащем агаре - Нитевидный рост при 37С ,в течение 5 дн.., колонии клеток уме1енно вып ченные с шероховатой по- верхностью и волнообразными или дольчатыми разделенными на лопасти кра ми , опалесцирующие, наблюдаетс обраг зование бледно-розового пигмента, очень тусклый блеск (гл нец), полуг прозрачные и слизеподобные. На питательном бульоне - умеренный рост при З7с в течение 3 дн,, образование-осадка не наблюдаетс , на поверхности образуетс пелликула. Напитательном бульоне (встр хивание в процессе культивировани ) интенсивный рост при в течение 3 дн.,культура становитс мутной. наблюдаетс образование осадка, полупрозрачна . На пептонном водном бульоне (встр хивание в процессе культивиро вани ) - интенсивный рост при 37°С в течение 3 дн., культура становитс мутной, образуетс осадок (отстой ) . На метанолсодержащембульоне интенсивный рост при 37°С в течение 3 дн., культура становитс мутной, образуетс осадок, на поверхности образуетс тонка пелликула, культура полупрозрачна . На бульоне, содержащем метанол в сочетании с минеральными сол ми (встр хивание в процессе культивировани ) - интенсивный рост при 37°С в течение 3 дн. , культура становитс мутной, образуетс осадок, полупрозрачна . На питательном бульоне (в виде столбиков) - при 31°С в течение 3 д рост происходит лишь на поверхности столбиков, поверхность молочно-желт го цвета. На питательном желатиновом бульо не (в виде столбиковJ - поверхностный рост при 30°С в течение 5 дн. с образованием осадка, желатин разжижает . На лакмусовом молоке при культура коагулирует. Биохимические признаки: Восстанавливает нитраты. Реакци денитрификации - отрицательна . Ретикул рна реакци v(MR-тест) отрицательна . VP-тест - положительна реакци . Не .продуцирует индол и сероводород . Гидролизирует крахмал. Утилизирует цитраты (среда Козера ), неорганический азот, аммонийны соли, нитраты. Не продуцирует пи-гмент (среды А и В Кинга). Не продуцирует пи Уреазна реакци - положительна Оксидазна реакци - положительна . Каталазна реакци - положительна . Температуру и рН дл роста бактерий на метанолсодержащем ,е варьируют (рН регулируют путем добавлени водного раствора гидроокиси натри или сол ной кислоты) . Хор ший рост наблюдаетс при рН от 5 до 9 (предпочтительный диапазон рН б - 8). При рН 4 и 10 роста не прои ходит. Хороший рост наблюдаетс при температуре в диапазоне от 5 до 45Су (предпочтительный диапазон 25 - 42С). При 48С роста нет. Отношение к кислороду - аэробна культура. 0-F тест (по методу Хьюго Лейфсона ) - окислительно метаболизирует глюкозу. Продуцирование кислоты и газа из Сахаров (при использовании пептонной воды с концентрацией сахара 1 вес. I при в течение 10 дн.) представлено в табл. 7. Таблица 7 Л-Арабиноэа Д-Ксилоза Д-Глюкоза-f Д-Манноза4Д-Фруктоза+ Д-Галактоза Мальтоза+ Сахароза . + ЛактозаТрегалоза+ +(слабое) Д-Сорбит Д- Маннит+ Инозит Глицерин+ Крахмал+ Ассимил ци Сахаров (при использовании сахара вместо метанола в метанолсодержащем бульоне в концент рации 0,5 вес.% при 37°С в течение Р дн.) показана в табл. 8. Таблица 8 -Ксилоза -Глюкоза -Ианноза + (слаба ) -Фруктоза -Галактоза альтоза Продолжение Штамм вьщелен из почвы Метанолсодержаща агар использовавша с при пров тов по культивации, имела состав, мг: КНй.РО 1500 Na2HP04 3200 CNH4,)2 504 3000 MgS04- 7 Из О 500 2Н,0 100 10 1, FeS04 ZnS04- 7HZО CuS04-SHaO 0, Na2Mo04- 2112.0 0, CoCl. 0, 1, MuS04. SHiO 20000 « Агар Дистиллиро ванна вода Культуральную среду сте ли при в течение 15 ле чего прибавили в асепт услови х 20 г метанола. Метанолсодержащий буль аналогичный состав, однак дени агара, а количество сократили до 5 г. Штамм Pseudomonas aich DS-26 (FERM-P 4107). Морфологические призна Штамм культивировали н ном бульоне и питательной среде при 37С в течение Форма и размер клеток ют 0,3-0,4 до 0,75-1,0 мк Колонии клеток единичн ные. Подвижные с пол рно ра ми жгутиками. Спор нет. Окрашиваемость по Грам тальна . Кислотоустойчивость на . Рост бактерий на различных культуральных средах: На чашках Петри с питательным агаром - интенсивный рост при 37 С в течение 3 дн., колонии клеток круглой формы диаметром 4-6 мм с выпуклым вып чиванием горбообразной Формы , гладкой поверхностью и целыми или дольчатыми разделенными на лопасти кра ми, молочные, желтоватобелые , блест щие, полупрозрачные и слизеподобные. На чаинках Петри с метанолсодержащим агаром - интенсивный рост при , 37°С в течение 5 дн., колонии клеток круглые диаметром 2-3 мм с глад- кой поверхностью и целыми кра ми, опалесцирующие, блест щие, полупрозрачные и слизеподобные. На скошенном питательном агаре нитевидный рост при ЗТС в течение 3 дн., колонии клеток умеренно вып ченные с гладкой поверхностью и целыми или волнообразными кра ми, молочные, желтовато-белые, блест щие , полупрозрачные (просвечивающие и масл нистые. На скошенном метанолсодержащем агаре - нитевидный рост при в течение 5 дн., колонии клеток умеренно вып ченные (выпуклые) с гладкой поверхностью и целыми кра ми, опалесцирующие , блест щие, полупрозрачные и масл нистые. На питательном бульоне - интенсивный рост при 37°С н течение 3 дн. наблюдаетс образование осадка,культура полупрозрачна , на поверхности образуетс пелликула. На питательном бульоне (встр хивание в процессе культивировани ) - ин тенсивный рост при 37°С в течение 3 дн,, культура становитс мутной, образуетс осадок, полупрозрачна . На пептонном водном бульоне (встр хивание в процессе культивировани ) - интенсивный рост при в течение 3 дн., культура становитс мутной, образуетс осадок (отстой). На метанолсодержащем бульоне - интенсивный рост при З7с в течение 3 дн., культура становитс мутной, образуетс осадок, -на поверхности образуетс тонка кольцеобразна пелликула, полупрозрачна . На метанолсодержащем бульоне (встр хивание в процессе культивировани ) - интенсивный рост при 37 С в течение 3 дн., культура становитс мутной, образуетс осадок, полупрозрачна . На питательном бульоне (в виде столбиков) - рост на поверхности или протекагоьщй до глубины 2-3 мм при 37С в течение 3 дн. , поверхность молочно-белого цвета. На питательном желатиновом бульоне (в виде столбиков) - поверхно стный рост при в течение 5 дн., с образованием осадка, желатин раз .жижает,- На лакмусовом молоке при ЗУ С культура коагулирует (свертываетс ) .. Бкохимические признаки: Нитраты не восстанавливает. Реакци денитрификации - отрицательна . Ретикул рна реакци (MR-тест) отрицательна . VP-тест - положительна реакци . Не продуцирует индол, сероводород Крахмал гидролизует. Не утилизирует цитраты (среда Козера). Утилизирует неорганический азот, аммонийные соли. Азотнокислые соли (нитраты) не. утилизирует. Пигмент не продуцирует (среды А и В Кинга). Уреазна реакци - положительна . Оксидазна реакци - положительна . Каталазна реакци - положительна . Температуру и рН дл роста бактерий на метанолсодержащем бульоне варьируют (рН регулируют путем добавлени водного раствора гидрооки- ,„ си натри или сол ной кислоты). Рост хороший при рН от 5 до 9. При рН 4 и 10 роста не происходит. Рост .хо- . роший при температуре в диапазоне от 5 до 45С (предпочтительный диа-цазон 25 - ). При роста не 35 наблюдаетс ... Отношение к кислороду - аэробна культура. 0-F тест (по. методу Хьюго.Лейфсона ) - глюкоза- не метаболизируетс ни в аэробных, ни в анаэробных усл ви х (не отмечаетс никаких призна ков образовани кислоты и газа). Продуцирование кислоты и газа и Сахаров (при использовании пептонной воды с концентрацией сахара 1 вес.% при 37С в течение ;10 дн.) показаны в табл. 9. Таблица 9 + (слабое) Л-Арабиноза Д-Ксилоза + (слабое) Д-Глюкоза + (слабое) Д-Манноза f 15 20 25 Продолжение табл. 9 + (слабое) Д-Фруктоза Д-Галактоэа мальтоза + (слабое) Сахароза Лактоза 4- (слабое) Трегалоза д-Сорбит Д-Маннит Инозит Глицерин Крахмал Ассимил ци Сахаров (при использовании сахара вместо метанола в метанолсодержащем бульоне в концентрации о 5 вес. % при 37°С в течение 10 дн.) представлена в табл. .10. Таблица 10 -:- Ассимил ци +(очень слаба ) Л-Арабиноза +(очень -слаба ) Д-Ксилоза 4-(очень слаба ) Д-Глюкоза +(очень слаба ) Д-Манноза +(очень слаба ) Д-Фруктоза +(очень слаба ) Д-Галактоза +(очень слаба ) Мальтоза +(очень слаба ) Сахароза Лактоза + (очень слаба ) Трегалоза Д-Сорбит + (очень слаба ) Д-Маннит + (слаба ) Инозит + (очень слаба ) Глицерин Крахмал Штамм Выделен из почвы
Метанолсодержаща агарова среда
использовавша с вопытах { тестах) по культивации, имела следующий состав , мг:
КН2Р04.1500
NaahP043200 5
(NH4)2S043000
MgSOx THgO500
CaCl2-2H2 0100
FeS047H2010
2п504-7Н,0 .1,4 10
СиЗОд.ЗНдО0,25
Na Mo04- 2Н,,00,24
CoCl.- ,24
MnS04- 5H2.01,2
Агар20000 s
Дистиллированна вода1л
Культуральную среду стерилизовали при в течение 15 мин, после чего прибавили в асептических уело- 20 ВИЯХ 20 г метанола.
Метанолсодержащий бульон имел аналогичный состав, но не использовали агар, а количество метанола сократили до 5 г.25
Штамм Corynebacterium yamanasiensis DS-31 (FERM-P № 4106).
Морфологические признаки:
Штамм культивировали на питательном бульоне и питательной агаровой зО среде при течении 3 дн.
Форма и размер клеток - короткие палочки от 0,5-0,6 до 0,6-0,9 мк
Колонии клеток единичные или парные , а.также плеоморфные или изогну- тые и V-образные отдельные (разделенные ) клетки.
Подвижности нет.
Споры отсутствуют.
Окрашиваемость по Гриму - поло- i жительна .40
Кислотоустойчивость - отрицательна .
Рост бактерий на различных культуральных средах:
На чашках Петри с питательным ага-45 ром - интенсивный рост при 37°С в течение 3 дн. Колонии клеток круглые диаметром 2-2,5 мм с выпуклостью или горбом, с гладкой ровной поверхностью и целыми кра ми, желтые, блес-,Q т щие, полупрозрачные и масл нистые .
На чашках Петри с метанолсодержащим агаром - интенсивный рост при 31°С в течение 5 дн., колонии клеток 5 круглые диаметром 2-3 мм с гладкой поверхностью и целыми кра ми, опалесцирующие , блест щие, полупрозрачные и масл нистые.
На скошенном питательном агаре - 60 нитевидный рост при 37°С в течение 3 дн., колонии клеток умеренно вып ченные (выпуклые) с гладкой поверхностью и целыми кра ми, желтые, блест щие , полупрозрачные и масл нистые. 5
На скошенном метанолсодержащем агаре - нитевидный рост при 37С в течение 5 дн., колонии клеток умере но вып ченные с гладкой поверхностью и целыми кра ми, опалесцирующие, блест щие (гл нцевитые), полупрозрачные и масл нистые.
На питательном бульоне - роЙг умеренный при 31°С в течение 3 дн., образуетс осадок, культура слегка полупрозрачна , на поверхности не образуетс пелликул.
На питательном бульоне (встр хивание в процессе культивировани ) интенсивный рост при 37С в течение 3 дн., культура становитс мутной, образуетс осадок, полупрозрачна .
На пептонном водном бульоне - интенсивный рост при З7с в течение 3 дн,, культура становитс мутной, образуетс осадок.Культура на метанолсодержащем бульоне - интенсивный рост при 37°С в течение 3 дн., культура станвитс мутной, образуетс осадок, на поверхности образуетс тонка кольцеобразна пелликула, культура полупрозрачна (просвечивающа ).
На метанолсодержащем бульоне (встр хивание в процессе культивировани ) - интенсивный рост при 37°С в течение 3 дн., культура становитс мутной, образуетс осадок, культура полупрозрачна .
На питательном бульоне (на столбиках или палочках) - рост на поверности или протекающий до глубины пор дка 2-3 мм при 37°С в течение 3 дн., поверхность опалесцирующа .
На питательном желатиновом бульоне (на столбиках желатины) - поверхностный рост при 30°С в течение 5 дн. с образованием осадка, разжи||Жени желатины не происходит.
На лакмусовом молоке - при 37С культура коагулирует.
Биохимические признаки :
Восстанавливает нитраты.
Реакци денитрификации - положительна .
Ретикул рна реакци (MR-тест) положительна .
VP-тест - положительна реакци .
Не продуцирует индол, сероводоро
Крахмал гидролизует.
Утилизирует цитраты (среда Козера ), аммонийные соли, азотнокислые соли (нитраты).
Не продуцирует пигмент (среды А и В Кинга).
Уреазна реакци - отрицательна
Оксидазна реакци - отрицательна .
Каталазна реакци - положительна .
Температуру и рН дл роста бактерий на метанолсодержащем бульоне варьируют (рН регулируют путем добалени водного раствора сол ной кис ты или гидроокиси натри ). Хороший рост- наблюдаетс в диапазоне рН от до 9, при рН 5 и 10 рост отсутству Хороший рост наблюдаетс при темпе туре в диапазоне от 5 до 41° С (пре почтительно в интервале 25 - ) При 42°С роста не происходит. Отношение к кислороду - аэробна культура. 0-F тест (по методу Хьюга Лейфсона ) - глюкоза не метаболизируетс ни в аэробных, ни в анаэробных услови х (не наблюдаетс никаких при наков образовани кислоты и газа). Продуцированиекислоты игаза и Сахаров (при использовании пептонной воды, содержащей сахар в конце рации 1 вес. %, при в течение 10 дн.) показано в табл. 11.. т а б л и ц а 1 Л-Арабиноза- ; Д-Ксилоза- . fl-rjaoKO3a+ Д-Манноза+ Д-Фруктоза+ Д-Галактоза. + Мальто.за . ., + Сахароза+ Лактоза+ - Трегалоза+ (слабое) Д Сорбит Д-Маннит - Инозит Глицерин +. : - j..--.-... Ассимил ци Сахаров (при исполь зовании сахара вместо метанола в метанолсо ержащем бульоне в концен рации 0,5 вес,% при З7с в течение 10 дн.) приведена в табл. 12. г а б л и ц а 1-2 Ассимил ци Л-Арабиноза + (слаба ) -Ксилоза Продолжение табл. 12 Ассимил ци + (слаба ) Д-Глюкоза + (слаба ) Д-Манноза + (слаба ) Д-Фруктоза + (слаба ) Д-Галактоза + (слаба ) Мальтоза + (слаба ) Сахароза + (слаба ) Лактоза Трегалоза + Д-Сорбит Ч- (слаба ) Д-Маннит Инозит + (слаба ) Глицерин . Крахмал Штамм выделен из почвы. Метанолсодержаща агарова среда , использовавша с в опытах (тестах ) по культивации бактерий данного штамма, имела следующий состав, мг: 1500 NaaHP04 3200 (NH4)iS04 3000 MgS04 500 . СаС1г ZHjO 100 10 1,4 FeS04. HjO ZnS04-7HzO CuS04-SHzO 0,25 NaiMo04- ZHjO 0,24 CoCl.j.- СНбО 0,24 MnS04 1,2 20000 Агар Дисти1й1рованна вода Культуральную среду стерилизовали при в течение 15 мин,после чего прибавили в асептических услови х 20 г метанола. Метанолсодержащий бульон имел аналогичный состав, но не содержал агара, а количество метанола составл ло 5г. ЭксЬерименты проводили в соответствии с Руководством Бержи по определительной бактериологии (Вегвеу Manual of Determinative Bacteriology ) (8-е изд., 1974 г.), Руководством по практической бактериологии (.издано Ассоциацией Выпускников Института Медицинской Науки, исправленное и дополненное издание Руко водства опублик. в 1975 г, изд-вом ,Марузен Компани Лтд.) и монографие Систематика и определение микроорганизмов (Taxonomy and Determina on of Microorganisms) Такейи Хасе гава (1975 г., Изд-во Токио Универ сити Пресс). Процесс культивировани вели в жидкой среде в аэробных услови х при 5 - (предпочтительно 25 43С ), рН 5 - 9 (предпочтительно 6-8) периодическим или непрерывным способом. Метанол используют в качестве ос новного источника углерода в культуральной среде, при этом предпочти тельное количество его.составл ет н более 50 г/л. . В качестве источников азота используют неорганические вещества, такие как аммонийные соли и нитраты и органические вещества, такие как мочевина, казеин, жидкий кукурузный экстракт, пептон, дрожжевой и м сной экстракты. Источниками фосфора вл ютс соли фосфорной кислоты (фосфаты), а в качестве полезных источников серн используют различные соли серной кислоты -(сульфаты) В качестве источников металлов, не .обходимых дл культивировани микро организмов, таких как магний, калий кальций, натрий, железо, марганец, медь, цинк, молибден, кобальт и бор в культуральную среду ввод т соответствующее количество солей указанных металлов. в случае необходимости в культуральную среду добавл ют также и другие вещества, требук циес . дл роста микробных клеток, такие как витамины или аминокислоты, а также вещества, стимулирующие рост микроорганизмов . Величину рН культуральной среды регулируют путем введени фосфата и аммиака. Выделение (извлечение)микробных клеток из культуральной среда осуществл ют обычным образом, например путем фильтрации, центрифугировани и т.д. с последующей промывкой и су кой биомассы микроорганизмов. Согласно предлагаемому способу .метанол, выпускаемый химическойjnpo мыишенностью, может 6ыть утилизйр6- ван как основной источник углерода микробными клетками р да штаммов, принадлежащими к Flavobacterium tasaensis , Pseudomonas wakayamaensis, Flavobacterium methanolicola, Pseud monas kyotoensis, Pseudomonas aichi ensis, Corynebacterium yamanasiensi которые можно получать в больших ко личествах и с хорошим выходом. Поскольку получаенгые микробные клетки содержат значительное количество белковых веществ { протеинов ), их можно использовать не только в качестве кормовых или пищевых веществ, но также в качестве веществ медицинского назначени и технических материалов . Пример. Состав (рецептура ) культуральной среды, мг; 1500 КН4Р04 3200 3000 (NH4.)eS04500 MgS04.- 100 20 2,8 CaCli FeS04 ZnSQ40 ,5 CuS04- 0,48 Na2.Mo04 2H2.0 2,4 MnS04.- Дистиллированна вода Культуральную среду поместили в скл нку емкостью 1 л и стерилизовали при 120°С 15 мин. Затем добавили в асептических услови х 5 г метанола . Полученную культуральную среду инокулировали (засевали 2 об.% предварительно полученной культуры, содержащей клетки Flavobacterium tosaensis DS-1 (FERM-P № 4058) , выращенной на среде, имевшей аналогичный основной культуральной среде состав, при З7с в течение 24 ч. Процесс культивировани проводили при 37°С в течение 20 ч в услови х аэрации и перемешивани культуральной среды, рН которой поддерживали на уровне 7,0 путем прибавлени 13 вес.% раствора аммиака. Полученный культуральный бульон центрифугировали с целью отделени (выделени ) микробных клеток. Клетки промыли водой и сушили при 24 ч. Получили высушенную биомассу в количестве .4,5 г/л культурального бульона. Врем генерации (размножени ) данной культуры в логарифмическом периоде роста составило 1,4 ч. Анализ полученной биомассы показал, что клетки содержат 80 вес. % скорого ( неочищенного) белка. Пример 2. Культургшьную среду 1,2 л), имеющую состав, аналоК чный примеру 1f поместили в сосуд-ферментер емкостью 2,5 л и стерилизовали при 120°С 20 мин. Затем добавили в асептических услови х 12 г мета ,нола. В полученную культуральную ередау внесли в качестве посевного материала { инокул та; 5 об.% предварительно приготовленной культуры, содержащей клетки Flavobacterium tosaensis DS-1 (FERM-P № 4058), полученной путем культивировани при в течение 20 ч на культуральной среде, имевшей состав, аналогичный примеру 1. Процесс культивировани проводили при З7с в услови х аьрации и перемешивани , поддержива рй кул туральной среды на уровне 7,0 путем добавлени 13 вес,% раствора миака. По-истечении 20 ч с начала процесса концентраци клеток в ку туральном бульоне составл ла 4,5 К культуральному бульону добавл л водные растворы следующих солей м таллов, мл/л культурального бульо 10%-ный водный раствор дигидрофосфата кали (KHiPD4) 18 5%-ный водный раствор моногидрофосфата натри ( )77 10%-ный водный раствор сульфата магни (MgS04- 7Н2.0) . 18 10%-ный водный раствор хлористого кальци (CaCla.- ) 3,5 1%-ный водный .раствор сульфата двухвалентного железа (FeS047H O)5 1%-ный водный раствор сульфата цинка tZnS04- 7Н20)4 1%-ный водный раствор сульфата меди CUS04- )0,7 1%-ный водный раствор сульфата марганца ( ) 1,1 0,1%-ныйводный раствор борной кисло .ты (НзВОз ).2 О,1%-ный водный раствор хлористого кобальта ( 6Н 0) 0,5 По истечении 20 ч с начала кул тивировани в систему стали добав л ть метанол таким образом, чтобы концентраци метанола в культурал ном бульоне поддерживалась на уро от 1 до 5 г/л. Количество метанол через 29 ч с начала процесса дост ло 96 г/л культурального бульона. По истечении 29 ч с начала культи ровани культуральный бульон цент рифугировали с целью отделени микробных клеток. Полученную биомассу клеток промыли водой и суши ли при 25 ч. Получили 32 г высушенной биомассы клеток на 1 л культуральнрго бульона.,Анализ по казал, что эти клетки содержат 77 вес.% сырого белка (протеинов) Пример 3. Состав культуральной среды, мг: KHjPO 1500 Na 2HP043200 ( NN4)5043000 MgS04 7Н20500 CaCliZH O100 FeS04. 7H-j,020 ZnS04- 7H.iO CuS04.- Na,2.Mo04 CoClz бНзО MnS04. SHjO Дистиллиров.анна вода 100 мл культуральной среды поместили в колбу Сакагучи емкостью 0,5 л и стерилизовали при 15 мин. Затем добавили в асептических услови х 0,2 г метанола. В полученную культуральную среду внесли в качестве посевного материала (инокул та) 0,5 об.% прекультуры, содержащей клетки Pseudomonas wakayamaensis DS-25 (FERM-P № 4100), котора была получена культивированием при 35С в течение 24 ч на культуральной среде, имевшей состав , аналогичный описанному, но количество метанола составл ло 0,5 вес.%. Процесс проводили при 24 ч при встр хивании на качалке. Полученный культуральный бульон центрифугировали с целью отделени микробных клеток. Выделенную биомассу клеток промыли водой и сушили при 100°С 24 ч..Получили 0,9 г высушенных клеток на 1 л культурального бульона. Врем генерации (размнот жени ) в логарифмическом периоде роста составило 1,5 ч. Анализ показал , что полученна биомасса клеток содержала-78 вес.% сырого белка (суммарных белковых веществ). Пример 4. 500 мл культуральной среды, имевшей состав, аналогичный примеру 3, поместили в стекл нный ферментер емкостью 1 л и стерилизовали при 120С 15 мин. Затем добавили в асептических услови х 5 г метанола. В культуральную среду внесли в качестве посевного материала (инокул та) 2 об.% культуры , содержащей клетки Pseudomonas wakayamaensis DS-25 (FERM-P № 4100), полученной путем предварительного культивировани при в течение 24 ч на культуральной среде, имевшей аналогичный состав. Основной процесс культивировани проводили при 37С в течение 20 ч, поддержива рН культуральной среды на уровне 7,0 путем прибавлени 13 вес.% водного раствора аммиака. Полученный культуральный бульон центрифугировали с целью выделени микробных клеток. Клетки (биомассу) промыли водой и сушили при 100°С 24 ч. Получили 4,2 г высушенной клеточной биомассы на 1 .л кJ|Льтy- , рального бульона. Врем генерации (размножени ) указанной культк ры в логарифмическом периоде роста составило 1,6 ч. По данным анализа полученна клеточна биомас са содер100-мл культуральной среды помес . тили в колбу Сакагучи емкостью 0/5 и стерилизовали при 15 мин. Затем добавили в асептических услови х 5 г метанола. В полученную кул туральную среду внесли вкачестве посевного материала 0,5 об.% культуры/ содержащей клетки Flayobacterium raethanolicola DS-16 (FERM-P 4098), которую приготовили путем культивировани При 35 G в течение 24 ч на культуральной среде, имевше аналогичный состав, но количество м танола составл ло 0,5 об.%. Оснбв .ной процесс культивировани проводи ли при 24 ч. при встр хивании н качалке - - ; ч . , ; Полученный культуральный бульон центрифугировали с целью выделени микробных клеток Клетки промыли : водой и сушили при 24 ч. Полу чили 0,85 г высушенной клеточной би массы на. 1 л культуральй1ого бульона : Врем генерации .(размножени ) культуры в период логарифмического роста составило 1/5 ч. По данным анализа содержание суммарных белков (сырное протеинов) в полученной сухой биомассе составило .75 вес.,%. П р и мер 6. 500 мл культурал ной бреды,имевшей состав, аналогичный примеру 5, поместили в.стекл нный ферментер емкостью 1 л и стерил зовали при 120с 15 мин. -Затем доба вили в асептических услови х 5 г метаиола. S культуральную среду вне ли в качестве посевного материала (инокул та) 2 об.% культуры, содержащей клетки Flavobacterium methano .licola DS-16(FERM-P № 4098), полу ченной в результате культивации при в течение 24 ч на культуральной среде имевшей аналогичный состав . Основной процесс культивировани проводили при 37 С 20 ч в услови х аэрации и перемешивани , поддержива рН культуральной сре ды на уровне 7,О путем добавлени ..13 вес. % водного раствора аммиака. Полученный культуральный бульон цен
рифугировали с целью отделени микробных клеток. Клетки промыли водоЯ и сушили при 24 ч. Получили 4,2 г высушенной клеточной биомассы на 1 л культурального бульона. Врем генерации (размножени ) данной культуры в период логарифмического роста составило 1,6 ч. Содержа|А1е суммарных белков (протеинов) составило около 78 вес.%.
Пример 7. Состав культуральной среды, мг: / КНгР04 NazHPQt (NH4) MgS04. CaClx-2HiO FeS04.7H20 InSO -lHiO CuS04 . 0,5 Na Md04 0,48 CoCla 0,48 MnS04. 5H2.0 2,4 Дистиллирс ванна вода 500 мл культуральной среды помес тили в стекл нный ферментер емкостью 1 л и стерилизовали, при 15 мин. Затем добавили в асептических услови х 5 г метанола.. Полученную культуральную среду .инокулировали 2 об..%,культуры, содержащей клетки Pseudomonas kyotoensis DS-22(FERM-P № 4099), полученной в результате культивации при 37С в течение 23 ч на культургшьной среде, имевшей аналогичный состав. Основной процесс культивировани проводили при 37°с в течение 20 ч в услови х аэрации и перемешивани культуральной среды, рН которой поддерживали на уровне добавлени 13 вес.% водного раств:ора аммиака. Полученный культуральный бульон центрифугировали с целью отделени (выделени ) микробных клеток. Клетки промыли водой и сушили при 24 ч. Получили высушенную клеточную биомассу в количестве 4,3 г на 1 л культурального бульона. Врем генерации (размножени } данной культуры в период логарифмического роста составило 1,5 ч. Полученна кле очна биомасса содержгьла 79 вес.% суммарных неочищенных белков . Пример 8.1,2л культуральной среды, имевшей состав, аналогичный примеру 7, поместили в стекл нный ферментер емкостью 2,5 л и -стерилизовали при 120С 20 мин, после чего добавили в асептических услови х 12 г метанола. Полученную культуральную среду инокулировали путем внесени в качестве посевного материала 5 об.% культуры, содержащей микробные клетки Pseudomonas kyotoensis DS-22 (FERM-P 4099) приготовленной путем культивирова ни при в течение 24 ч на ку туральной среде, имевшей аналогич ный состав. Основной процесс куль вировани проводили при ЗТ С в ус ви х аэрации и перемешивани куль ральной среды, рН которой поддерж вали на уровне 7,О-путем использо ни 13 вес. % водного раствора ам ака. По истечении 20 ч с начала п цесса концентраци клеток в. культуральном бульоне составл ла 4,3 К культуральному бульону добав ли следующие водные растворы соле металлов, мл/л бульона: 10%-ный водный раст- . вор дигидрофосфата кали (KHgPO )18 5%-ный водный раствор динатрийгИДрофосфата (Na,j,HPQ,j ) -77 10%-ный водный раствор сернокислого магни (MgS04. ) 18 10%-ный водный раствор хлористого кальци (CaCli ) 3,5 1%-ный водный раствор сернокислого железа (;ре504- ) 5 1%-ный водный раствор сернокислого цинка (2nS047H20) 3 1%-ный водный раст .. вор. сернокислой . меди ( ) 0,6 1%-ный водный раствор сернокислого марганца ( MnS04- )0,7 О,1%-ный водный раствор борной кислоты (HjBO)2 Спуст 20 ч после начала культ вировани в культуральную систему бавили метанол таким образом, что его концентраци в культуральном бульоне сохран ласБ на уровне 1 г 5 г/л. Общее количество метанола, введенного в культуральную систем к концу 32 ч после начала гроцесс культивировани достигло 92 г/л кул турального бульона. По истечении с начала процесса культивировани культуральный бульон центрифугиро вали с целью отделени микробных клеток. Клетки промыли водой и су шили при 24 ч. Получили 31 высушенной клеточной биомассы на 1 л бульона. Анализ показал, что полученна клеточна биомасса сод жит 78 вес.% неочищенных суммарны белков (протеинов). . Пример 9. Состав культур ной среды, мг: КНаРОд 1500 NazHPQi 3200 (NH4)z ЗОд 3000 MgS04УН О 500 CaCla,- 2Н2.0 100 20 2,8 РеЗОд 7Н20 ZnS04- 7Н20 7Н20 0,5 NazMo04 0,48 CoCli- 0,48 2,4 MnS04. 5H,j,0 Дистиллированна вода 100 мл культуральной среды поместили в колбу Сакагучи емкостью 0,5л и .стерилизовали при 120°С 15 мин. Затем добавили в асептических услови х 0,2 г метанола. В полученную культуральную среду ввели в качестве посевного материала 0,5 об..% культуры, солеожащей микробные клетки Pseudomonas aichiensis DS-26 (FERMrP № 4107) , приготовленной путем культивировани при 37°С в течение 24 ч на культуральной среде, имевшей аналогичный состав, но количество метанола в системе изменили до 0,5 вес.%. Основной процесс Культивировани проводили при 37С в течение 24 ч при встр хивании ферментационной колбы на качалке. Полученный культуральный бульон и,ентрифугировали с целью отделени мик- робных клеток от культуральной жидкости . Полученную клеточную биомассу промыли водой и сушили при 100°С 24 ч. Получили 0,88 г высушенной клеточной биомассы на 1 л культурального бульона. Врем генерации (размножени ) данной культуры-в период логарифмического роста составило 1,5 ч. Анализ полученной клеточной биомассы показал, что она содержит 79 вес.% суммарных неочищенных белков .. . Пример 10. 500 мл культуральной среды, имевшей состав, аналогичный примеру 9, поместили в стекл нный ферментер емкостью 1 л и стерилизовали при 120°С 15 мин. Затем в культуральную систему ввели в асептических услови х 5 г метанола. Полученную культуральную среду инокулировали С засевали ) путем введени в нее в качестве посевного материала 2 об.% культуры, содержащей клетки Pseudomonas aichiensis DS-26 (FERM-P № 4107) , приготовленной путем культивировани при в течение 24 ч на аналогичной примеру 9 культуральной среде. Основной процесс культивировани проводили при З7с в течение 20 ч в услови х аэрации и перемешивани культуральной среды, рН которой поддерживали на уровне 7,0 путем введени 13 вес.% jpacTBopa аммиака. Полученный культуральный бульон центрифугировали с целью отделени .микробных клеток от культуральной; жидкости. Полученную клеточную биомассу промыли водой и сушили при 24 ч. Выход высушенной клеточ ной биомассы составил 4,1 г на 1 л культурального бульона. Врем генер ции данной культуры в период логари мического роста составило 1,6 ч. Ан лиз показал, что полученна клеточнал биомасса содержит 7 вес.% неочи щенных суммарных белков (протеинов) Пример 11. Состав культуральной среды, мг: 1500 NaaHP04 3200 CNH4.)2.S04 3000 500 MgS04-- 711-20 CaCli-2HiO 100 20 2,8 FeS047H20 ZnS04- 7H20 CuS04- SHjO 0,5 Na2.MoC4 ZHjO 0,48 CaClj.- 0,48 MnSO.- 5H.O 2,4 Дистиллированна вода 100 мл культуральной среды поместили в ферментационную колбу Сакагучи емкостью 0,5 л и стерилиз вали при 120С 15 мин. Затем ввели в асептических услови х 0,2 г метанола . Полученную культуральную среду инокулировали введением 0,5 об.% прекультуры, содержащей клетки Corynebacterium yamanasiensis DS-31 (FERM-P № 4106), котора была получена культивированием ука занного щтамма при 35°С в течение 24 ч на культуральной среде, имевш .ей аналогичный указанному состав, но количество введенного в систему метанола изменили до 0,5 вес.%. Ку тивирование проводили при встр хивании ферментационной колбы на качалке при 35°С в течение 24 ч. Полученный культуральный бульон цент рифугировали с целью отделени мик робных клеток от культуральной жид кости. Вьщеленную клеточную биомас су промыли водой и сушили при 10О 24 ч. Выход продукта составил 0,84 высушенной клеточной биомассы на 1 л культурального бульона. Врем генерации (размножени } данной культуры в период логарифмического роста составило 1,5 ч. Анализ показал, что полученна биомасса микробных клеток содержит 76 вес.% не.очищенных суммарных белков (.протеинов). Пример 12. 500 мл культуг-. ральной среды, имевшей состав, аналогичный примеру 11, поместили в стекл нный ферментер емкостью 1 л и стерилизовали при 120°С 15 мин. Затем ввели в асептических услови х 5 г метанола. Полученную культуральную среду инокулировали путем введени в качестве посевного материал 2 об.% культуры, содержащей клетки Corynebacterium yamanasiensis DS-31 (FHRM-P № 4106), которую получили путем культивировани указанного штамма при в течение 24 ч на культуральной среде, имевшей состав, аналогичный указанному выше. Основное культивирование проводили в услови х аэрации и перемешивани культурального бульона при в течение 20 ч, поддержива рН культурального бульона на уровне 7,0 путем использовани 13 вес.% водного аммиака. Полученный культуральный бульон центрифугировали с целью отделени микробных клеток от культуральной жидкости. Выделенную клеточную биомассу промыли водой и сушили при 100°С 24 ч. Получили 4,0 г высушенных клеток на 1 л культурального бульона. Врем генерации культуры в период логарифмического роста составило 1,6 ч. Анализ показал, что полученна клеточна биомасса содержит 77 вес.% неочищенных суммарных белков. Предлагаемый способ позвол ет получить биомассу (содержание сырого протеина до 80% ) в количестве до 42,2% по метанолу в отличие от известного способа, в котором выход биомассы составл ет до 40% (содержание сыроЛ протеина 70-80%). Результаты культивировани с использованием данных штаммов приведены в . табл. 13.
Результаты культивировани
Flavobacterium tosaensis DS-1 0,50939,0
Flavobacterium methanolf.cola
DS-160,59038,9
Pseudomonas wakayamaensis DS-25 0,4939,1
To же «
Pseudomonas kyotdensis Pseudomonas aichiensis
Corynebacterium yamana DS-31
Таблица 13
17,60,451
16,40,422
17,00,435
32,80,437
32,5.0,448
17,10,435
16,90,438
16,70,425
Claims (1)
- СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОМАССЫ путем культивирования продуктов ее бактерий на питательной среде, содержащей метанол в качестве основного источника углерода, источник азота и минеральные соли, в условиях аэрации среды с последующим отделением биомассы и ее сушкой, отличающийся тем, что, с Целью повышения выхода биомассы, в качестве бактерий, продуцирующих биомассу, используют штамм Flavobacterium tosaensis DS-1 (FERM-P № 4058) или Pseudomonas wakayamaensis DS-25 (FERM-P №4100), или Flavobacterium methanolicola DS-16 (FERM-P № 409¾) , или Pseudomonas kyotoensis DS-22 (FERM-P № 4099) /или Pseudomonas ·; aichiensis DS-26 (FERM-P № 410^, ‘или Corynebacterium yamanasiensis DS-31 (FERM-P № 4106). g
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU802955225A SU1015831A3 (ru) | 1980-08-07 | 1980-08-07 | Способ получени биомассы |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU802955225A SU1015831A3 (ru) | 1980-08-07 | 1980-08-07 | Способ получени биомассы |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU1015831A3 true SU1015831A3 (ru) | 1983-04-30 |
Family
ID=20907822
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU802955225A SU1015831A3 (ru) | 1980-08-07 | 1980-08-07 | Способ получени биомассы |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SU (1) | SU1015831A3 (ru) |
-
1980
- 1980-08-07 SU SU802955225A patent/SU1015831A3/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
1. Патент GB I 1326582, кл. С 6 F, опублик. 1973. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CA1156573A (en) | Strain uk 788 and process for producing a useful enzyme | |
SU1015831A3 (ru) | Способ получени биомассы | |
US4011135A (en) | Production of L(+)-tartaric acid | |
JPS626697A (ja) | 光学活性なエピクロルヒドリンの製法 | |
US4357425A (en) | Process for producing L-amino acid oxidase | |
SU671738A3 (ru) | Способ получени биомассы микроорганизмов | |
US4048013A (en) | Process for producing single-cell protein from methanol using methylomonas sp. DSM 580 | |
US4707449A (en) | Pichia pastoris yeast strains of enhanced tryptophan content | |
JPH01148192A (ja) | カルニチンの製造法 | |
JP2570313B2 (ja) | 新規微生物 | |
JPS6022913B2 (ja) | 微生物菌体の製造方法 | |
JPS5944036B2 (ja) | 微生物培養方法 | |
US4317884A (en) | Method for the production of yeast on ethanol and means therefor | |
US4368271A (en) | Production of microbial cells from methanol | |
JPS6291177A (ja) | セレン含有微生物菌体 | |
JP2800005B2 (ja) | デオキシリボ核酸の製造法 | |
Cremieux et al. | Mixed culture of bacteria utilizing methanol for growth: I. Isolation and identification | |
GB2051053A (en) | Process for the preparation of D- alpha -Aminoacids | |
JPS6016229B2 (ja) | 微生物菌体の製造方法 | |
US4795708A (en) | Novel backteria and single cell protein production therewith | |
JPS6123991B2 (ru) | ||
SU759055A3 (ru) | Способ получени биомассы | |
SU553283A1 (ru) | Способ получени алкогольдегидрогеназы | |
JPS6022912B2 (ja) | 微生物菌体の製造方法 | |
SU1191464A1 (ru) | Штамм @ @ @ -тест-объект дл определени продукции @ -триптофана |