SPÔSOB ZVÝŠENIA BIOLOGICKEJ DOSTUPNOSTI FEXOFENADÍNU A JEHO DERIVÁTOV
Oblasť techniky
Vynález sa týka spôsobu zvýšenia biologickej dostupnosti piperidínalkanolového antihistaminika, fexofenadínu, farmaceutického prostriedku obsahujúceho túto látku a použitia tohto prostriedku.
Doterajší stav techniky
Výraz „všeobecná odolnosť proti liečivám“ (MDR, multidrug resistence) popisuje jav, keď sa v určitých bunkách rakovinotvorných nádorov vyvinie odolnosť proti širokým skupinám cytotoxických činidiel, ak sú vystavené jednotlivému cytotoxickému činidlu. Inak povedané, po určitej dobe liečby cytotoxickým činidlom, ktoré na počiatku vykazuje účinnosť kontrolovania rastu nádoru, sa v nádore vyvinie odpor nielen voči špecifickému činidlu ktorému bol vystavený, ale rovnako voči širokým skupinám štrukturálne a funkčne nepríbuzných činidiel. V poslednej dobe bolo zistené, že MDR nádorové bunky vykazujú nadbytok zvláštneho glykoproteinu membrány, označovaného ako pglykoproteín („p znamená priepustnosť). Tento p-glykoproteín patrí do skupiny transportérov ATP-binding cassette (ABC). Zdá sa, že vystavenie MDR nádorových buniek cytotoxickému činidlu vyvolá privedenie tohto pglykoproteinu, ktorý sprostredkováva opačný transportný systém lokaliz''',.r,ý v membráne nádorovej bunky, ktorý čerpá cytotoxické činidlo, ako i širokú skupinu ďalších cytotoxických činidiel smerom von z nádorovej bunky, takže bunke dodáva všeobecnú odolnosť proti liečivám.
P-glykoproteín sa nenachádza iba v nádorových bunkách. Tento p-glykoproteín je rovnako exprimovaný v rade normálnych, nerakovinových buniek epitelu a endotelu, vrátane takých tkanív ako sú kôra nadobličiek, hranica
31408/H epitelu proximálnych renálnych tubulov, lumenálny povrch pečeňových hepatocytov, pankreatické duktuly a sliznice tenkého a hrubého čreva. Pre účely popisu predmetného vynálezu je zvlášť zaujímavá prítomnosť pglykoproteínu vienkom a hrubom čreve.
Po požití látok sa tieto zmiešajú stráviacimi látkami, vylučovanými telom, a nakoniec sa spoja do zmesi v lúmene čreva. Lúmen čreva je v styku s určitými špeciálnymi epiteliálnymi bunkami, ktoré vytvárajú sliznicu čreva, či stenu čreva. Živiny a ostatné látky, prítomné v lúmene čreva pasívne difundujú do týchto epiteliálnych buniek čreva a ďalej difundujú do žilového obehu, ktorý nesie pomocou krvného prúdu živiny do pečene. Živiny a ostatné látky sú teda absorbované do tela a stávajú sa biologicky dostupnými na použitie v iných tkanivách tela.
Bunky intestinálneho epitelu však nepracujú len ako prostriedok na pasívnu difúziu živín a ostatných požitých látok. Naviac sú tu rôzne transportné mechanizmy, umiestnené vo vonkajšej membráne epiteliálnych buniek, ktoré aktívne prepravujú rôzne živiny a ostatné látky do bunky. V súčasnej dobe sa predpokladá, že jedným z aktívnych transportných mechanizmov, prítomných v bunkách epitelu čreva, je transportný mechanizmus p-glykoproteínu, ktorý uľahčuje spätný transport látok, ktoré difundovali alebo boli transportované do bunky, späť do lúmenu čreva. Uvažovalo sa, že p-glykoproteín prítomný v bunkách črevného epitelu môže pôsobiť ako ochranné spätné čerpadlo, ktoré bráni toxickým látkam, ktoré boli použité a difundované, alebo transportované do buniek epitelu, aby boli absorbované do obehového systému a stali sa biologicky dostupnými. Jedným
I z nešťastných aspektov funkcie p-glykoproteínu v črevnej bunke je však to, že rovnako môže pôsobiť na zábranu biologickej dostupnosti látok, ktoré sú prospešné, ako sú určité látky, ktorým sa podarilo stať sa predmetom reverzného transportného systému p-glykoproteínu.
Podľa predmetného vynálezu bolo prekvapivo zistené, že antihistaminiká podľa tohto vynálezu sú zhodne rovnako cieľom reverzného transportnéno systému p-glykoproteínov v bunkách črevného epitelu a tak nie sú plne
31408/H biologicky dostupné. Predmetný vynález poskytuje efektívny spôsob zvýšenia biologickej dostupnosti týchto antihistaminík.
Podstata vynálezu
Predmetný vynález sa týka spôsobu zvýšenia biologickej dostupnosti piperidínalkanolového antihistaminika všeobecného vzorca I
ch3
--COOR
CH3 (I) v ktorom :
R je vodík alebo alkylová skupina obsahujúca 1 až 6 atómov uhlíka, alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli alebo jeho jednotlivého optického izoméru, pričom tento spôsob zahŕňa súčasné podávanie účinného antihistaminického množstva uvedeného piperidínalkanolu a účinné pglykoproteín blokujúce množstvo ihibítora p-glykoproteínu pacientovi. Predmetný vynález sa ďalej týka spôsobu liečenia alergických reakcií u pacienta, ktorý zahŕňa spolupodávanie antihistaminicky účinného množstva piperidínalkanolového antihistaminika a účinného p-glykoproteín ihibuiúceho množstva p-glykoproteínového inhibítora pacientovi. Predmetný vynález sa rovnako týka farmaceutického prostriedku obsahujúceho účinné antihistaminické množstvo piperidínalkanolového antihistaminika všeobecr,AbA vzorca I a účinné množstvo inhibítoru p-glykoproteínu na inhibovanie pglykoproteínu.
Predmetný vynález poskytuje spôsob zvýšenia biologickej dostupnosti
31408/H piperidínalkanolového antihistaminika všeobecného vzorca I:
R je vodík alebo alkylová skupina obsahujúca 1 až 6 atómov uhlíka, alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli alebo jeho jednotlivého optického izoméru.
Termín „alkylová skupina obsahujúca 1 až 6 atómov uhlíka“, použitý v tomto opise označuje nasýtený uhľovodíkový zvyšok s priamym alebo rozvetveným reťazcom obsahujúcim 1 až 6 atómov uhlíka. Do rozsahu tohto termínu „alkylová skupina obsahujúca 1 až 6 atómov uhlíka patria uhľovodíkové skupiny, ako sú napríklad metylová skupina, etylová skupina, propylová skupina, izopropylová skupina, butylová skupina, sekundárna butylová skupina, izobutylová skupina, terciárna butylová skupina, pentylová skupina, hexylová skupina a podobné. Pre každého odborníka pracujúceho v danom odbore je zrejmé, že zlúčeniny všeobecného vzorca I majú chirálny stred a ako také existujú v stereoizomérnych formách. Predmetný vynález používa racemickú zmes týchto izomérnych foriem ako i izolované jednotlivé stereoizoméry. Jednotlivé stereoizoméry sa môžu z racemickej zmesi izolovať spôsobmi delenia, ktoré sú dobre známe v tomto odbore z doterajšieho stavu techniky, vrátane chromatografických metód a technológii selektívnej kryštalizácie.
Zlúčeniny všeobecného vzorca I môžu byť vo svojej voľnej forme alebo vo forme farmaceutický prijateľných solí. Farmaceutický prijateľnými suiaíiu zlúčenín všeobecného vzorca I sú soli ľubovolnej vhodnej anorganickej alebo.
31408/H organickej kyseliny. Ako príklad vhodných anorganických kyselín je možné uviesť kyselinu chlorovodíkovú, kyselinu brómovodíkovú, kyselinu sírovú a kyselinu fosforečnú. Ako príklad vhodných organických kyselín je možné uviesť karboxylové kyseliny, ako je napríklad kyselina octová, kyselina propiónová, kyselina glykolová, kyselina mliečna, kyselina pyrohroznová, kyselina malónová, kyselina jantárová, kyselina fumarová, kyselina jablčná, kyeeiina vínna, kyselina citrónová, kyselina cyklámová, kyselina askorbová, kyselina maleínová, kyselina hydroxymaleínová, kyselina dihydroxymaleínová, kyselina benzoová, kyselina fenyloctová, kyselina 4-aminobenzoová, kyselina 4hydroxybenzoová, kyselina antranilová, kyselina škoricová, kyselina salicylová, kyselina 4-aminosalicylová, kyselina 2-fenoxybenzoová, kyselina 2acetoxybenzoová, kyselina mandľová a sulfónové kyseliny, ako sú napríklad kyselina metánsulfónová, kyselina etánsulfónová a kyselina βhydroxyetánsulfónová. Do rozsahu predmetného vynálezu rovnako patria nejedovaté soli zlúčenín všeobecného vzorca I vytvorené s anorganickými alebo organickými bázickými látkami, pričom ako príklad týchto látok je možné uviesť napríklad soli kovov alkalických zemín, napríklad vápnika a horčíka, soli ľahkých kovov zo skupiny IIIA, napríklad hliníka, soli organických amínov, ako sú primárne, sekundárne a terciárne amíny, napríklad cyklohexylamín, etyiamin pyridín, metylaminoetanol a piperazín. Soli zlúčenín všeobecného vzorca I sa môžu pripraviť bežnými spôsobmi, napríklad reakciou zlúčeniny všeobecného vzorca I s príslušnou kyselinou alebo bázickou látkou. Výhodnou farmaceutický prijateľnou soľou zlúčenín všeobecného vzorca I je soľ kyseliny chlorovodíkovej.
Zlúčeniny všeobecného vzorca I je možné pripraviť postupom popísaným v patente Spojených štátov amerických č. US 4 254 129, ktorý tu celým svojím obsahom predstavuje odkazový materiál.
Výhodnou zlúčeninou všeobecného vzorca I je (±)-4-[1-hydroxy-4-[4hydroxydifenylmetyl)-1-piperidinyl]-butyl]-a,a-dimetylbenzénoctová kyselina, rovnako známa ako fexofenadín, a jej jednotlivé stereoizoméry. Fexofenadín, ako soľ kyseliny chlorovodíkovej, bol nedávno schválený United States Food
31408/H and Drug Administration (FDA) na použitie ako aktívna zložka v antihistaminiku, známom ako Älegra(TM). Alegra je indikovaná na liečenie sezónnej alergickej rinitídy s doporučeným dávkovaním 60 mg B.l.D.
Súčasný vynález poskytuje spôsob zvýšenia biologickej dostupnosti zlúčenín všeobecného vzorca I. Súčasné podávanie účinného antihistaminického množstva zlúčeniny všeobecného vzorca I spolu s účinným p-glykoproteín blokujúcim množstvom p-glykoproteínového inhibítora poskytuje zvýšenú biologickú dostupnosť zlúčenín všeobecného vzorca I. Biologická dostupnosť liečiva je definovaná ako úroveň, v ktorej sa liečivo po podaní stane dostupným pre cieľové tkanivo a obvykle sa meria ako celkové množstvo liečiva dostupného systemicky. Obvykle sa táto biologická dostupnosť odhaduje meraním koncentrácie lieku v krvi v rôznych časových obdobiach po podaní liečiva a potom integráciou hodnôt získaných v určitom časovom intervale, čím sa zistí celkové množstvo liečiva obiehajúceho v krvi. Toto meranie, označované ako Area Under the Curve (AUC - plocha pod krivkou), predstavuje priame meranie biologickej dostupnosti liečiva. Alternatívne sa biologická dostupnosť môže pre fexofenadín odhadnúť meraním celkového vylučovania fexofenadínu v moči, pretože je známe, že fexofenadín sa po orálnom podaní nevýznamné metabolizuje.
Predmetný vynález poskytuje zvýšenie biologickej dostupnosti liečiva všeobecného vzorca I súčasným podávaním inhibítora p-glykoproteinu. Spoločným podaním zlúčeniny všeobecného vzorca I a inhibítora pglykoproteínu sa celkové množstvo zlúčeniny všeobecného vzorca I zvýši tak, že je väčšie než množstvo, ktoré by inak obiehalo v krvi v neprítomnosti inhibítora p-glykoproteínu. Toto spoločné podávanie teda podľa predmetného vynálezu spôsobí zvýšenie hodnoty AUC v prípade zlúčeniny všeobecného vzorca I nad hodnotu AUC zodpovedajúcu samotnému podávaniu zlúčeniny všeobecného vzorca I.
Termín „pacient“ používaný v opise predmetného vynálezu sa týka cicavcov, ako sú napríklad ľudia, myš, krysy, psy, mačky a podobné, ktorí potrebujú liečenie alergických reakcií. T u používaný výraz „alergická reakcia“ sa týka alergickej choroby vyvolanej histamínom, ako je napríklad sezónna
31408/H alergická rinitis, idiopatická žihľavka a podobné. Takéto choroby sa všeobecne líšia alergénom spúšťaným uvoľnením histamínu zo zásobných buniek v tkanivách. Uvoľnený histamín viaže určité H^histamínové receptory, čo vedie k dobre známym alergickým symptómom ako je kýchanie, svrbenie kože, pálenie očí, rhinorhea, atď. Antihistaminikum, ako je napríklad zlúčenina všeobecného vzorca I, blokuje prejavy alergických symptómov, vyvolaných uvoľnením histamínu tým, že blokuje Hrhistamínové receptory v rôznych tkanivách tela, ako je napríklad pokožka, pľúca alebo nosná sliznica. Antihistaminiká, ako sú napríklad zlúčeniny všeobecného vzorca I, sú — dobre známe a účinne liečia alergické reakcie pacientov.
Zvýšenie biologickej dostupnosti zlúčeniny všeobecného vzorca I poskytne účinnejšie a efektívnejšie liečenie pacienta, pretože pri danej dávke bude v miestach tkanív, kde antihistaminikum blokuje H^histamínové receptory, k dispozícii viac zlúčeniny, než v neprítomnosti tejto zvýšenej biologickej dostupnosti. Podávanie zlúčeniny všeobecného vzorca I sa týka orálneho podávania. Zlúčenina všeobecného vzorca I sa môže orálne podávať v akejkoľvek vhodnej dávkovej forme, zahrňujúcej napríklad kapsule, tablety, kvapalinu, suspenziu a podobne.
Účinným antihistaminickým množstvom zlúčeniny všeobecného vzorca I je také množstvo, ktoré je účinné na vyvolanie antihistamického efektu u pacienta. Účinné antihistaminické množstvo bude kolísať medzi asi 1 s miligramom a asi 600 miligramami zlúčeniny všeobecného vzorca I vo forme dennej dávky v závislosti od druhu choroby, ktorá sa má liečiť, stupňa vážnosti choroby, druhu liečeného pacienta, od dávkového režimu a od ďalších faktorov, ktoré skúsený lekár je schopný vyhodnotiť a odhadnúť. Výhodné množstvo však bude obvykle asi 10 miligramov až asi 240 miligramov, výhodnejšie množstvo bude obvykle asi 40 miligramov až asi 180 miligramov a najvýhodnejšie množstvo ďalej bude obvykle asi 20 miligramov až asi 180 miligramov. Vyššie uvedené množstvá zlúčeniny všeobecného vzorca I sa môžu podávať raz až viackrát za deň. Obvykle sa dávky budú podávať v režime vyžadujúcom jednu dávku, dve dávky, alebo tri dávky za deň , pričom výhodné i l^uo/rl sú jedna alebo dve dávky. Výhodnou dávkou a režimom bude 40 miligramov dvakrát za deň, 60 miligramov dvakrát za deň, 82 miligramov raz za deň, 120 miligramov raz za deň a 180 miligramov raz za deň, pričom výhodnejšie je 60 miligramov dvakrát za deň, alebo 120 miligramov raz za deň.
V popise predmetného vynálezu používaný výraz „p-glykoproteínový inhibítor“ sa týka organických zlúčenín, ktoré inhibujú činnosť aktívneho transportného systému sprostredkovaného p-glykoproteínom prítomného v čreve. Tento transportný systém aktívne dopravuje lieky, ktoré boli absorbované z lúmenu čreva a do epitela čreva späť do lúmenu. Inhibícia tohto aktívneho transportného systému, sprostredkovaného p-glykoproteínom, spôsobí, že bude späť do lúmena čreva dopravovať menej liečiva a teda sa zvýši čistý transport liečiva cez epitel čreva a zvýši sa množstvo liečiva, ktoré je nakoniec k dispozícii v krvi.
V tomto odbore sú dobre známe a oceňované rôzne inhibítory p-glykoproteínu. K nim patria vo vode rozpustný vitamín E; polyetylénglykol; poloxaméry, včítane Pluronic F-68; polyetylénoxid; deriváty ricínového oleja s polyoxyetylénom, vrátane Cremophor EL a Cremophor RH 40 ; Chrysín, (+)Taxifolín; Naringenín; Diosmín; Quercetín a podobné.
Polyetylénglykoly (PEG) sú kvapalné a pevné polyméry so všeobecným vzorcom H(OCH2CH2)nOH, kde n je väčšie alebo rovné 4, ktoré majú rôzne molekulové hmotnosti v rozmedzí od asi 200 do asi 20000. PEG sú rovnako známe ako a-hydro-omega-hydroxypoly-(oxy-1,2-etándiyl)-polyetylénglykoly. Napríklad PEG 200 je polyetylénglykol, ktorý má priemernú hodnotu n rovnú 4 a priemerná molekulová hmotnosť tejto látky je od asi 190 do asi 210. PEG 400 je polyetylénglykol, ktorý má priemernú hodnotu n v rozmedzí od 8,2 do 9,1 a priemernú molekulovú hmotnosť od asi 380 do asi 420. Podobne PEG 600, PEG 1500 a PEG 4000 majú priemerné hodnoty n od 12,5 do 13,9, respektíve od 29 do 36 a od 68 do 84, a priemernú molekulovú hmotnosť 570 až 630, respektíve v rozmedzí od 1300 do 1600 a v rozmedzí od 300 do 3700, a PEG 100, PEG 600 a PEG 8000 majú priemernú molekulovú hmotnosť v rozmedzí od 950 do 1050, prípadne v rozmedzí od 5400 do 6600 a v rozmedzí od 7000
31408/H do 9000. Polyetylénglykoly s rôznou molekulovou hmotnosťou od 200 do 20000 sú v odbore farmácie dobre známe a výhodne používané, pričom tieto látky sú ľahko dostupné.
Výhodnými polyetylénglykolmi na použitie v predmetnom vynáleze sú polyetylénglykoly s priemernou molekulovou hmotnosťou v rozmedzí od asi 200 do asi 20 000. Výhodnejšie polyetylénglykoly majú priemernú molekulovú hmotnosť v rozmedzí od asi 200 do asi 8000. Konkrétne je možné uviesť, že výhodnejšie polyetylénglykoly na použitie v predmetnom vynáleze sú PEG 200, PEG 400, PEG 600, PEG 1000, PEG 1450, PEG 1500, PEG 4000, PEG 4600 a PEG 8000. Najvýhodnejšími polyetylénglykolmi na použitie v predmetnom vynáleze sú PEG 400, PEG 1000, PEG 1450, PEG 4600 a PEG 8000.
Polysorbát 80 je ester kyseliny olejovej so sorbolom a jeho anhyd':'JT:, kopolymerizovaný s približne 20 molmi etylénoxidu na každý mol sorbitolu a anhydridov sorbitolu. Polysorbát 80 sa vyrobí z derivátov mono-9oktadekanoát-poly(oxy-1,2-etándiyl)sorbitolu. Polysorbát 80, rovnako známy pod označením Tween 80, je vo farmácii dobre známy a výhodne používaný, pričom sa jedná o ľahko dostupnú látku.
Vo vode rozpustný vitamín E, rovnako známy ako jantaran d-atokoferylpolyetylénglykolu 1000 (TPGS), je vo vode rozpustný derivát vitamínu E z prírodných zdrojov. Tento TPGS je možné pripraviť esterifikáciou kyslej skupiny kryštalického d-a-tokoferyljantaranu polyetylénglykolom 1000. Tento výrobok je vo farmácii dobre známy a výhodne používaný, pričom sa jedná o ľahko dostupnú látku. Napríklad vo vode rozpustný vitamín E je dostupný od firmy Eastman Corporation ako Vitamín E TPGS.
!
Naringenín predstavuje bioflavonoidnú zlúčeninu, 2,3-dihydro-5,7dihydroxy-2-(4-hydroxyfenyl)-4H-1 benzopyran-4-on, pričom táto zlúčenina je rovnako známa ako 4', 5,7-trihydroxyflavanon. Naringenín je aglukón naringénu, čo je prírodný produkt, ktorý sa nachádza v dužine a kôre grapefruitov. Naringenín je všeobecne ľahko dostupný z obchodných zdrojov.
Quercetín predstavuje bioflavonoidnú zlúčeninu, 2-(3,4-dihydroxyfenyl)-
3,5,7-trihydroxy-4H-1-benzopyran-4-on, pričom táto zlúčenina je rovnako
31408/H známa pod označením 3,3', 4', 5,7-pentahydroxyflavon. Quercetin je C^IUIXVI I quercitrínu, rutinu a ďalších glykosidov. Quercetin je ľahko všeobecne ľahko k dispozícii z obchodných zdrojov .
Diosmín je prirodzene sa vyskytujúca flavonická glykozidová zlúčenina , 7-[[6-O-deoxy-alfa-L-mannopyranozyl)-p-D-glukopyranozyl]oxy]-5-hydroxy-2-(3hydroxy-4-metoxyfenyl)-4H-1-benzopyran-4-on. Tento diozmín sa môže izolovať z rôznych rastlinných zdrojov, vrátane citrusových plodov. Diosmín je všeobecne ľahko dostupný z obchodných zdrojov.
Chrysín je prirodzene sa vyskytujúca zlúčenina, 5,6-dihydroxy-2-fenyl4H-1-benzopyran-4-on, ktorá sa môže izolovať z rôznych rastlinných zdrojov. Chrysín je všeobecne ľahko dostupný z obchodných zdrojov.
Poloxaméry sú blokové kopolyméry a-hydro-omegahydroxypoly(oxyetylén)poly(oxypropylén)-poly(oxyetylén)u. Poloxaméry predstavujú skupinu blízko príbuzných blokových kopolymérov etylénoxidu a propylénoxidu zodpovedajúce všeobecnému vzorcu HO(C2H4O) a(C3H6O)b (C2H4O)aH. Napríklad poloxamér 124 je kvapalina s hodnotou „a rovnou 12, s hodnotou „b“ rovnou 20 a s priemernou molekulovou hmotnosťou v rozmedzí od asi 2090 do asi 2360; poloxamér 188 je pevná látka s hodnotou „a rovnou 64, s hodnotou „b“ rovnou 37 a s priemernou molekulovou hmotnosťou v rozmedzí od asi 7680 do asi 9510; poloxamér 237 je pevná látka s hodnotou „a“ rovnou 64, s hodnotou „b“ rovnou 37 a s priemernou molekulovou hmotnosťou v rozmedzí od asi 6840 do asi 8830; poloxamér 338 je pevná látka s hodnotou „a“ rovnou 141, s hodnotou „b“ rovnou 44 a s priemernou molekulovou hmotnosťou v rozmedzí od asi 12700 do asi 17400; a poloxamér 407 je pevná látka s hodnotou „a“ rovnou 101, s hodnotou „b“ rovnou 56 a s priemernou molekulovou hmotnosťou v rozmedzí od asi 9840 do asi Poloxaméry sú vo farmácii dobre známe a výhodne používané, pričom sa jedná o látky, ktoré sú obchodne ľahko dostupné. Napríklad Pluronic F-68 je obchodne dostupný poloxamér od firmy BASF Corp. Výhodnými poloxamérmi na požitie v predmetnom vynáleze sú napríklad poloxamér 168, Pluronic F-68 a podobné ďalšie látky.
31408/H
Deriváty ricínového oleja s polyoxyetylénom predstavujú skupinu látok, získaných reakciou rôzneho množstva etylénoxidu buď s ricínovým olAinm alebo s hydrogénovaným ricínovým olejom. Tieto deriváty ricínového oleja s polyoxyetylénom sú vo farmácii dobre známe a výhodne používané, pričom rad ich rôznych typov je bežne v komerčnej mierke k dispozícii, vrátane prípravkov Cremophor od BASF Corporation. Deriváty ricínového oleja s polyoxyetylénom predstavujú komplexnú zmes rôznych hydrofóbnych a hydrofilných zložiek. Napríklad v ricínovom oleji polyoxyl 35 (rovnako označovanom ako Cremophor EL) tvoria hydrofóbne zložky asi 83 % z celkovej zmesi, kde hlavnou zložkou je glycerolpolyetylénglykolricínoleát. K ostatným hydrofóbnym zložkám patria estery mastných kyselín s polyetylénglykolom spolu s podielom nezmeneného ricínového oleja. Hydrofilný podiel ricínového oleja polyoxyl 35 (17 %) je tvorený polyetylénglykolmi a glyceryletoxylátmi.
V hydrogénovanom ricínovom oleji polyoxyl 40 (Cremophor RH 40) je približne 75 % zložiek tejto zmesi hydrofóbnych. Hlavne sem patria e&iéiy mastných kyselín s glycerolpolyetylénglykolom a estery mastných kyselín s polyetylénglykolom. Hydrofilná časť je tvorená polyetylénglykoimi a glyceroletoxylátmí. Výhodnými derivátmi ricínového oleja s polyoxyetylénom na použitie v predmetnom vynáleze sú ricínový olej polyoxyl 35, ako je napríklad Cremophor EĽ a hydrogénovaný ricínový olej polyoxyl 40, ako je napríklad Cremophor RH 40. Cremophor EL a Cremophor RH 40 sú dostupné od BASF Corporation.
Polyetylénoxid je neiónový homopolymér etylénoxidu, zodpovedajúci všeobecnému vzorcu (OCH2CH2)n, kde n predstavuje priemerné číslo oxyetylénových skupín. Polyetylénoxidy sú k dispozícii v rôznych formách, ktoré sú všeobecne dobre známe a výhodne využívané odborníkmi pracujúcimi v odbore farmácie, pričom rad rôznych typov týchto látok je bežne dostať v obchode. Výhodným druhom polyetylenoxidu je NF a podobné, ktoré sú v obchode dostupné.
(+)-Taxifolín je (2R-trans)-2-(3,4-dihydroxyfenyl)-2,3-dihydro-3,5-7trihydroxy-4H-1-benzopyran-4-on. Ďalšími všeobecnými názvami pre (+)
31408/H taxifolín sú (+)-dihydroquercetín; 3,3’, 4', 5,7-pentahydroxyflanon; diquertin; taxifoliol; a distylín. (+)-Taxifolín je vo farmácii všeobecne dobre známy a výhodne používaný, pričom sa jedná o obchodne ľahko dostupnú látku.
r
Výhodnými inhibítormi p-glykoproteínu na použitie v predmetnom vynáleze sú vo vode rozpustný vitamín E, napríklad vitamín E TPGS, a polyetylénglykoly. Z polyetylénglykolov šú najvýhodnejšími inhibítormi pglykoproteínu PEG 400, PEG 1000, PEG 1450, PEG 4600 a PEG 8000.
Podávanie inhibítora p-glykoproteínu sa môže uskutočniť ľubovoľným vhodným spôsobom, ktorým bude inhibítor p-glykoproteínu biologicky dostupný v účinnom množstve, vrátane ciest orálnych a parenterálnych. I keď sa dáva prednosť orálnemu podávaniu, môžu sa inhibitory p-glykoproteínu rovnako podávať intravenózne, topicky, subkutánne, intranazálne, rektálne, intramuskulárne, alebo inými parenterálnymi cestami. Pri orálnom podávaní sa inhibítor p-glykoproteínu môže podávať v akejkoľvek dávkovej forme, zahrňujúcej napríklad kapsule, tablety, kvapalinu, suspenziu a podobné.
Účinným množstvom p-glykoproteínového inhibítora, inhibujúcim p 3'7 koproteín je také množstvo, ktoré je účinné na inhibíciu činnosti aktívneho transportného systému sprostredkovaného p-glykoproteínom prítomného v čreve. Účinné množstvo na inhibovanie p-glykoproteínu sa bude pohybovať v rozsahu od asi 5 miligramov do asi 1000 miligramov p-glykoproteínového inhibítora vo forme dennej dávky, čo závisí od zvoleného určitého pglykoproteínového inhibítora, od stavu liečeného pacienta, dávkového režimu a od ďalších faktorov, čo sú všeobecne dobre známe faktory bežnej lekárskej praxe, ktoré je potrebné použiť a vyhodnotiť. Výhodné množstvo sa však bežne pohybuje v rozmedzí od asi 50 miligramov do asi 500 miligramov a ešte výhodnejšie množstvo sa pohybuje bežne v rozmedzí od asi 100 miligramov do asi 500 miligramov. Vyššie uvedené množstvá inhibítora p-glykoproteínu sa môžu podávať raz až niekoľkokrát denne. V prípade orálneho dávkovania sa bežne dávky budú podávať v režime vyžadujúcom jednu, dve, alebo tri uav<\y denne, výhodnejšie jednu a dve dávky.
V opise predmetného vynálezu používaný výraz „spolupodávanie“ sa
31408/H týka podávania zlúčeniny všeobecného vzorca I a inhibítora p-glykoproteínu pacientovi spoločne, takže farmakologicky vplyv p-glykoproteínového inhibítora na inhibíciu transportu sprostredkovaného p-glykoproteínom v čreve sa prejaví v dobe, keď je zlúčenina všeobecného vzorca I absorbovaná črevom. Samozrejme, zlúčenina všeobecného vzorca I a inhibitor p-glykoprotcí,,^ môžu podávať v rôznych dobách alebo súčasne. Napríklad je možné pglykoproteínový inhibitor podávať pacientovi v dobe pred podaním zlúčeniny všeobecného vzorca I, pričom účelom je predbežne pacienta ošetriť na podávanie zlúčeniny všeobecného vzorca I. Ďalej môže byť vhodné vopred ošetriť pacienta p-glykoproteínovým inhibitorom z toho dôvodu, aby sa docielili ustálené hladiny p-glykoproteínového inhibítora pred podaním prvej dávky zlúčeniny všeobecného vzorca I. Tiež sa uvažuje o tom, že zlúčeniny všeobecného vzorca I a inhibitor p-glykoproteínu sa môžu podávať v zásade súčasne buď v oddelených dávkových formách alebo v tej istej dávkovej forme pre orálne podanie.
Podľa predmetného vynálezu sa rovnako predpokladá, že zlúčenina všeobecného vzorca I a p-glykoproteínový inhibitor sa môžu podávať r
v oddelených dávkových formách alebo v rovnakej kombinovanej dávkovej forme pre orálne podávanie. Spoločné podávanie zlúčeniny všeobecného vzorca I a p-glykoproteínového inhibítora sa môže vhodne uskutočniť orálnym podaním kombinovanej dávkovej formy obsahujúcej zlúčeninu všeobecného vzorca I a p-glykoproteínový inhibitor.
Ďalším aspektom predmetného vynálezu je teda kombinovaný farmaceutický prostriedok na orálne podávanie obsahujúce účinné antihistaminické množstvo zlúčeniny všeobecného vzorca I (antihistaminika) a inhibične účinné množstvo p-glykoproteínového inhibítora na inhibovanie pglykoproteínu (inhibitor). Táto kombinovaná forma pre orálne podávanie poskytuje okamžité uvoľnenie zlúčeniny všeobecného vzorca I a pglykoproteínového inhibítora alebo môže poskytovať oneskorené uvoľňovanie jednej zlúčeniny alebo oboch zlúčenín ako všeobecného vzorca I tak i pglykoproteínového inhibítora. Každý odborník pracujúci v danom odbore je schopný ľahko stanoviť príslušné vlastnosti kombinovanej dávkovej formy tak,
31408/H aby sa docielil požadovaný účinok spoločného podávania zlúčeniny všeobecného vzorca I a inhibítora p-glykoproteínu.
Antihistaminikum a inhibítor sa môžu podávať samotné alebo vo forme farmaceutického zmesného prostriedku, alebo inak spolu s jedným farmaceutický prijateľným nosičom alebo s jednou pomocnou látkou alebo s viacerými takýmito látkami, ktorých podiel a povaha sú dané rozpustnosťou a chemickými vlastnosťami zvoleného antihistaminika a inhibítora, požadovaným režimom dávkovania a bežnou farmaceutickou praxou. Antihistaminiká, samotne účinné, sa môžu formulovať a podávať vo forme ich farmaceutický prijateľných adičných solí s kyselinami, ako sú napríklad chloridy, za účelom dosiahnutia stability, vhodnej kryštalickej formy, zvýšenej rozpustnosti a podobne. Jedna z foriem farmaceutického prostriedku podľa predmetného vynálezu je kombinovaný farmaceutický prostriedok, v ktorom sú antihistaminikum a inhibítor prítomné v rovnakej dávkovej forme. Tento farmaceutický prostriedok je možné pripraviť spôsobom, ktorý je vo farmácii všeobecne dobre známy a výhodne využívaný. Nosičová látka alebo pomocná látka (excipient) sú farmakologicky inertnými látkami, pričom sa môže jednať o pevné, polotuhé alebo kvapalné látky, ktoré môžu slúžiť ako nosičový materiál alebo prostredie pre antihistaminikum a inhibítor. Vhodné nosiče a pcrľ'? látky sú v tomto odbore všeobecne dobre známe. Farmaceutický prostriedok môže byť prispôsobený na orálne podávanie vo forme tabliet, kapsulí, kvapalín, sirupov, oplátok, žuvacej gumy, suspenzie a podobne. Tieto prípravky môžu obsahovať aspoň 4 % aktívnej zložky, to znamená hmotnostné percentá antihistaminika a inhibítora, podľa danej formy však množstvo môže kolísať tak, aby aktívne zložky predstavovali podiel od asi 4 % do asi 70 % hmotnostných
I jednotkovej dávkovej formy.
Tablety, pilulky, kapsule a podobné ďalšie formy môžu obsahovať jeden z nasledujúcich nosičov, alebo jednu z pomocných látok, alebo viac takých látok: spojivá, ako je napríklad mikrokryštalická celulóza, tragantová guma alebo želatína; pomocné látky, ako je napríklad škrob, alebo laktóza; povrchovo aktívne činidlá, ako je napríklad polysorbát 80 a podobne : dezintegračné látky,
31408/H ako je napríklad kyselina algínová, Primogel<TM), kukuričný škrob, hydrogénuhličitan sodný, a podobné látky; mazivá, ako je napríklad stearát horečnatý, alebo Sterotex(TM); klzné látky, ako je koloidný oxid kremičitý; sladidlá, ako je sacharóza alebo sacharín; aromatizujúce látky (vonné prísady), ako je napríklad mentol (mäta), metylsalicylát alebo pomarančová esencia. Kapsule môžu naviac k vyššie uvedeným zložkám u tabliet obsahovať kvapalný nosič, ako je napríklad polyetylénglykol, alebo mastný olej. Tablety a kapsule môžu obsahovať ďalšie rôzne nosiče a pomocné látky, ktoré upravujú fyziKaii >u formu tejto dávkovej jednotky, ako napríklad povlak. Tablety teda môžu byť povlečené cukrom, šelakom alebo inými poťahovými činidlami. Sirup môže naviac vedľa aktívnych zložiek obsahovať sterilnú vodu, sacharózu ako sladidlo, konzervačné látky, farbivá, farbiace činidlá a príchute. Materiály, používané pri príprave týchto rôznych kompozícií musia byť farmaceutický čisté a v používaných množstvách nejedovaté.
Pre účely parenterálneho podávania sa inhibítor môže vpraviť do roztoku alebo do suspenzie. Takéto prípravky musia obsahovať aspoň 0,1 % aktívnej zložky, pričom ale toto množstvo sa môže pohybovať v rozmedzí od asi 0,1 % do asi 50 % hmotnostných. Množstvo inhibítora sa môže v takýchto prostriedkoch upraviť tak, aby sa pri podaní dosiahla vhodná dávka.
Roztoky alebo suspenzie môžu obsahovať rovnako jedno z nasledujúcich plnidiel alebo viac z týchto látok : sterilné riedidlá, ako je voda, slaná voda, oleje, polyetylénglykoly, glycerín, propylénglykoly alebo iné syntetické rozpúšťadlá; antibakteriálne činidlá ako je napríklad benzylalkohol alebo metylparabén; antioxidanty ako je napríklad kyselina askorbová, alebo hydrogénsiričitan sodný; chelatačné činidlá, ako je napríklad kyselina diamíntetraoctová; pufry, ako sú napríklad octany, citrany, alebo fosforečnany; činidlá na úpravu tonicity, ako je napríklad chlorid sodný alebo glukóza. Parenterálne prípravky môžu byť uzavreté v ampulkách, jednorázových injekčných striekačkách, alebo v nádobkách zo skla alebo plastu na viac dávok.
Kombinované farmaceutické prostriedky môžu byť najmä vo forme tabliet, kapsulí, kvapalín, suspenzie, sirupu a podobne. Kombinované
31408/H farmaceutické prostriedky, vrátane formy tabliet, môžu byť jednoduchou zmesou antihistaminika, inhibítora a niektorých vhodných a nevyhnutných nosičov a pomocných látok. Alternatívne môže byť kompozícia vo forme zmesí rôznych heterogénnych peliet, perličiek, alebo iných heterogénnych častíc, ktoré dávajú požadovanú zmes. Okrem toho môže byť farmaceutický prostriedok vo forme násobne lisovaných tabliet, ako sú napríklad viacvrstvové tablety, alebo vo forme tabliet lisovaných a poťahovaných.
Kombinované farmaceutické prostriedky vytvorené z heterogénnych peliet, perličiek alebo častíc (ďalej označované ako „heterogénne pelety“), alebo vytvorené ako viacnásobne lisované tablety, sú vhodné na podávanie takýchto farmaceutických prostriedkov, ktoré poskytujú rozdielne charakteristiky uvoľňovania antihistaminika a inhibítora. Takéto kompozície napríklad môžu poskytovať okamžité uvoľňovanie inhibítora a oneskorené uvoľňovanie antihistaminika, alebo naopak. Tieto kompozície sa pripravujú bežnými spôsobmi, ktoré sú v tomto odbore dobre známe a výhodne používané, ako sú napríklad metódy popísané v patente Spojených štátov amerických US 4 996 061, ktorý je tu uvedený ako odkazový materiál.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Nasledujúce príklady bližšie popisujú zvlášť výhodné uskutočnenie podľa predmetného vynálezu. Tieto príklady sú iba ilustratívne a žiadnym spôsobom teda nijako neobmedzujú rozsah predmetného vynálezu.
Príklad 1 l
Účinok PEG 400 na biologickú dostupnosť fexofenadínu u psa
Účinok polyetylénglykolu 400 (PEG 400) na biologickú dostupnosť fexofenadínu sa stanovil u dvoch postených psích samcov beagle. Ošetrenie A spočívalo v orálnom podaní jednej tablety s oneskoreným uvoľňovaním (SR) 120 miligramov fexofenadínhydrochloridu a ošetrenie B spočívalo v orálnom podaní jednej tablety SR spolu s kapsulou obsahujúcou 0,5 mililitrov PEG 400,
31408/H podávané v -1, 0, 2, 4, 6 a 8 hodinách pred a po tablete SR. Ošetrenie A bolo uskutočnené 10 alebo 17 dní pred ošetrením B. Analyzovala sa koncentrácia fexofenadínu v plazme, aby sa stanovila relatívna biologická dostupnosť fexofenadínu so súbežným ošetrením PEG 400 a bez neho.
Priemerné dvojnásobné zvýšenie koncentrácie v plazme (tabuľka I) nastalo v prípadoch, keď sa PEG 400 spoločne podával s fexofenadínom. Toto zdvojnásobenie biologickej dostupnosti fexofenadínu je rovnako znázornené na obrázku 1, ktorý ukazuje zvýšenie strednej koncentrácie v plazme, vyvolané spoločným podaním.
TABUĽKA 1
Koncentrácia fexofenadínu v plazme u psov po podaní tablety SR s dávkou 120 mg fexofenadínu samotného, alebo kapsule obsahujúce dávku 0,5 mililitrov PEG-400
Podmienky dávkovania |
Doba (hodiny) |
Koncentrácia fexofenadínu (ng/ml) |
pes (číslo) |
7845 |
3181 |
priemer |
Samotný fexofenadín |
0 |
0 |
0 |
0 |
0,5 |
192,93 |
221,88 |
207,41 |
1 |
523,96 |
1196,64 |
860,30 |
1.5 |
748,57 |
1537,07 |
1142,82 |
2 |
1617,8 |
2088,09 |
1852,95 |
|
3 |
2316,21 |
1865,81 |
2091,01 ’ |
5 |
2364,18 |
793,03 |
1578,61 |
7 |
1170,93 |
276,88 |
723,91 |
9 |
880,07 |
184,32 |
532,20 |
12 |
350,02 |
91,25 |
220,64 |
14 |
274,33 |
69,49 |
171,91 |
22 |
110,33 |
28,95 |
69,64 |
24
1 |
97,87 |
34,68 |
66,28 |
31408/H
TABUĽKA I (pokračovanie)
Podmienky dávkovania |
Doba (hodiny) |
Koncentrácia fexofenadínu (ng/ml) |
pes (číslo) |
7845 |
3181 |
priemer |
Fexofenadín+PEG 400 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0,5 |
783,93 |
154,38 |
469,16 |
1 |
5866,28 |
687,3 |
3276,79 |
1,5 |
7574,3 |
820,16 |
4197,23 |
2 |
10116,53 |
1277,5 |
5697,02 |
3 |
9794,6 |
3736,69 |
6765,65 |
5 |
4794,46 |
4342,66 |
3068,56 |
7 |
1400,87 |
565,14 |
983,01 |
9 |
890,27 |
240,76 |
565,52 |
12 |
585,41 |
139,86 |
362,64 |
|
14 |
293,91 |
82,72 |
188,32 |
22 |
108,74 |
59,66 |
84,20 |
24 |
93,73 |
51,54 |
72,64 |
Príklad 2
Vplyv vo vode rozpustného vitamínu E na biologickú dostupnosť fexofenadínu u psov
Vplyv vo vode rozpustného vitamínu E (d-a-tokoferylpolyetylénglykoljantáran) na biologickú dostupnosť fexofenadínu sa stanovil pri dvoch postených samcov psov beagle v dvojsmernom krížovom pokusnom
I 1 usporiadaní. Ošetrenie A spočívalo v orálnom podaní vodného roztoku dávky 1 mg/kg samotného 14C-značeného fexofenadínu a ošetrenie B spočívalo v orálnom podaní vodného roztoku rovnakej dávky 14C-značeného fexofenadínu a dávky 10 lU/kg vo vode rozpustného vitamínu E. Ošetrenie bolo uskutočnené v opačnom poradí krížového usporiadania na dvoch psoch a medzi ošetreniami uplynula doba vymývania jedného týždňa. Analyzovala sa rádioaktivita v plazme a v moči, pričom je známe, že predstavuje nezmenený
31408/H fexofenadín u psa.
Výsledky ukázali, že bolo dosiahnuté zvýšenie o 50 % v plazmovom 14C AUC, keď sa vo vode rozpustný vitamín E spoločne podal s 14C fexofenadínom (tabuľka II). Znamená to, že sa biologická dostupnosť fexofenadínu zvýšila o 50 % vo vode rozpustným vitamínom E. Obrázok 2 ukazuje zvýšenie priemerných koncentrácií v plazme pri spoločnom podávaní vo vode rozpustného vitamínu E.
TABUĽKA II
Koncentrácia [14C] fexofenadínu vplazme u psov pri orálnom podaní dávky roztoku 1 mg/kg [14C]fexofenadínu samotnej, alebo s 10 lU/kg vo vode rozpustného vitamínu E.
Podmienky dávkovania |
Doba (hodiny) |
Koncentrácia [14C]fexofenadínu (ng ekv./ml) |
pes (číslo) |
7845 |
3181 |
priemer |
Samotný fexofenadín |
0 |
0 |
0 |
0 |
0,5 |
509 |
829 |
669 |
1 |
546 |
673 |
609,5 |
1.5 |
815 |
743 |
779 |
2 |
924 |
559 |
741,5 |
3 |
882 |
386 |
634 |
5 |
330 |
128 |
229 |
7 |
155 |
81 |
118 |
9 |
82 |
54 |
68 |
12 |
40 |
26 |
33 |
14 |
33 |
18 |
25,5 |
|
22 |
15 |
5 |
10 |
24 |
9 |
8 |
8,5 |
31408/H
TABUĽKA II (pokračovanie)
Podmienky dávkovania |
Doba (hodiny) |
Koncentrácia [^Cjfexofenadínu (ng ekv./ml) |
pes (číslo) |
7845 |
3181 |
priemer |
Fexofenadín + WS vit E |
0 |
0 |
0 |
0 |
0,5 |
853 |
1472 |
1162,5 |
1 |
1721 |
1098 |
1409,5 |
1.5 |
1974 |
805 |
1389,5 |
2 |
1515 |
572 |
1043,5 |
3 |
1104 |
558 |
831 |
5 |
230 |
257 |
243,5 |
7 |
163 |
120 |
141,5 |
9 |
90 |
73
|
81,5 |
12 |
51 |
40 |
45,5 |
14 |
48 |
31 |
39/5 T1 |
|
22 |
14 |
11 |
12,5 |
24 |
10 |
13 |
11,5 |
Zvýšenie absorpcie a biologickej dostupnosti fexofenadínu, ktorý nastal pri súčasnom podaní vo vode rozpustného vitamínu E, bol rovnako zrejmý z močového vylučovania 14C fexofenadínu v moči, ktoré vzrástlo v priemere trikrát (tabuľka III).
31408/H
TABUĽKA III
Percento [14C] fexofenadínu v moči psov pri podaní orálnej dávky 1 mg/kg [14C]fexofenadínhydrochloridu s pridaním vo vode rozpustnej pomocnej látky vitamínu E, alebo bez neho
Pes (číslo) |
Bez excipientu (% dávky) |
S excipientom (% dávky) |
Pomer |
7645 |
2,38 |
9,88 |
4,2 |
3181 |
2,80 |
4,79 |
1,7 |
Priemer |
2,59 |
7,34 |
3,0 |
Príklad 3
Vplyv PEG 1000 na biologickú dostupnosť fexofenadínu u psov
Vplyv polyetylénglykolu 1000 (PEG 1000) na biologickú dostupnosť fexofenadínu sa stanovil u dvoch postených samcov psov beagle. Ošetrenie A spočívalo v orálnom podaní jednej tablety s oneskoreným uvoľňovaním (SR) s 120 miligramami fexofenadínhydrochloridu a ošetrenie B spočívalo v podaní jednej tablety SR spolu s kapsulou obsahujúcou 0,5 gramov PEG 1000, rozpusteného v 2,5 mililitrov vody, podávanou v -1, -0,1, a 4 hodinách pred a po tablete SR. Ošetrenie A bolo uskutočnené dva mesiace pred ošetrením B. Bola analyzovaná plazmová koncentrácia fexofenadínu, aby sa stanovila relatívna biologická dostupnosť fexofenadínu pri súčasnom ošetrení PEG 1000 a bez neho.
Pri tomto postupe bolo dosiahnuté priemerne dvojnásobné zvýšenie hodnôt plazmovej koncentrácie [AUC(0-24 h), vypočítaných z koncentrácií uvedených v tabuľke IV], v prípade, že sa PEG 1000 spoločne podal s fexofenadínom. Špičková koncentrácia sa zvýšila v priemere trojnásobne. Táto zvýšená biologická dostupnosť v prítomnosti PEG 1000 je zrejmá z grafu priemerných plazmových koncentrácií fexofenadínu (obrázok 3).
31408/H
TABUĽKA IV
Koncentrácia fexofenadínu v plazme psov po podaní SR tablety s dávkou 120 mg fexofenadínu samotnej alebo s kapsulou s dávkou 0,5 gramov roztoku PEG 1000
Podmienky dávkovania |
Doba (hodiny) |
Koncentrácia fexofenadínu
(ng /ml) ; |
pes (číslo) |
7845 |
3181 |
priemer |
Samotný fexofenadín |
0 |
0 |
0 |
0 |
0,5 |
192,93 |
221,88 |
207,41 |
1 |
523,96 |
1196,64 |
860,30 |
1.5 |
748,57 |
1537,07 |
1142,82 |
2 |
1617,8 |
2088,09 |
1852,95 |
3 |
2316,21 |
1865,81 |
2091,01 |
5 |
2364,18 |
793,03 |
1578,61 |
7 |
1170,93 |
276,88 |
723,91 |
9 |
880,07 |
184,32 |
532,20 |
12 |
350,02 |
91,25 |
220,64 |
14 |
274,33 |
69,49 |
171,91 |
22 |
110,33 |
28,95 |
69,64 |
|
24 |
97,87 |
34,68 |
66,28 |
31408/H
TABUĽKA IV(pokračovanie)
Podmienky dávkovania |
Doba (hodiny) |
Koncentrácia fexofenadínu (ng /ml) |
pes (číslo) |
7845 |
3181 |
priemer |
Fexofenadin + PEG 1000 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0,5 |
15,28 |
147,24 |
81,31 |
1 |
669,27 |
473,48 |
571,38 |
1,5 |
1133,02 |
1687,98 |
1410,50 |
2 |
4541,31 |
3963,22 |
4252,27 |
3 |
7695,42 |
5595,32 |
6645,37 |
5 |
3398,34 |
2035,32 |
2716,83 |
7 |
1320,73 |
857,89 |
1089,31 |
9 |
784,42 |
377,1 |
580,76 |
12 |
315,74 |
202,89 |
259,32 |
24 |
109,69 |
112,75 |
111,22 |
31408/H ľ fyf-áwo