SK1692002A3

SK1692002A3 - Substituted pyrrolidin-2,3,4-trion-3-oxime derivatives, process for their preparation, pharmaceutical compositions comprising the same and their use

Info

Publication number: SK1692002A3
Application number: SK169-2002A
Authority: SK
Inventors: Michael Przewosny; Hans-Dietrich Stachel; Hermann Poschenrieder
Original assignee: Gruenenthal Chemie
Priority date: 1999-08-06
Filing date: 2000-07-25
Publication date: 2002-07-02
Also published as: ES2226876T3; EP1200400A1; NO20020578L; MXPA02001215A; BR0013313A; DE19936521A1; PL353875A1; CA2380973A1; IL147978A0; NO20020578D0; JP2003506436A; HUP0202433A2; AU779187B2; HUP0202433A3; NZ516905A; ZA200201789B; DE50008020D1; WO2001010831A1; ATE277901T1; AR030678A1

Description

Oblasť techniky

Vynález sa týka substituovaných derivátov pyrolidín-2,3,4-trión-3-oxímu, spôsobu ich výroby, liečiv tieto látky obsahujúcich a použitia týchto látok na výrobu liečiv.

Doterajší stav techniky

Ošetrenie chronických a nechronických bolestivých stavov má v medicíne veľký význam. V súčasnej dobe existuje celosvetová potreba účinnej terapie bolestivých stavov. Veľký dopyt po pre pacientov vhodnom a cieľovo orientovanom ošetrení chronických a nechronických bolestivých stavov, pričom sa pod tým chápe úspešné a k spokojnosti pacientov vedúce ošetrenie, je dokumentovaný vo veľkom počte vedeckých prác, ktoré sa v poslednej dobe objavili v oblasti užívaných analgetík, ako i v oblasti základného výskumu pre nocicepciu.

Klasické opioidy, ako je napríklad morfín, sú pri terapii silných až veľmi silných bolestí dobre účinné. Sú však limitované známymi vedľajšími účinkami, ako sú okrem iného napríklad dýchacie ťažkosti, zvracanie, útlmové stavy, obstipácia, návyk, závislosť, ako i vznik tolerancie. Môžu sa teda podávať dlhšiu dobu alebo vo vyšších dávkach iba za zvláštnych bezpečnostných opatrení, ako sú napríklad špeciálne predpisy pre ordinovanie (Goodman, Gilman, The Pharmacological Basis of Therapeutics, Pergamon Press, New York 1990). Okrem toho sú pri niektorých bolestivých stavoch, najmä pri neuropatických alebo incidenciálnych bolestiach, menej účinné.

Opioidy rozvíjajú svoj analgetický účinok väzbou na membránovo stále receptory, ktoré patria do skupiny tzv. G-proteín-väzbových receptorov. Okrem toho existujú ďalšie receptory a iónové kanály, ktoré sa podstatne zúčastňujú

31875/H na systéme vzniku bolesti a ďalšieho vedenia bolesti, ako je napríklad N-metylD-aspartát-(NMDA)-kanál, cez ktorý prebieha podstatná časť komunikácie synapsov a ktorým sa riadi výmena iónov medzi nervovou bunkou a jej okolím.

Poznatky o fyziologickom význame iónový kanál - selektívnych látok sa získali objavením patch-clamp-techniky, pomocou ktorej sa dá dokázať účinok NMDA-antagonistov na hospodárenie s vápnikom vo vnútri buniek.

Úlohou predloženého vynálezu je objavenie nových zlúčenín, ktoré by boli vhodné na terapiu bolestivých stavov alebo na anxiolýzu. Okrem toho by mali tieto účinné látky vykazovať pokiaľ možno málo vedľajších účinkov opioidných analgetík, ako je napríklad nevoľnosť, zvracanie, závislosť, dýchacie ťažkosti a obstipácia. Ďalšou úlohou je dať k dispozícii nové účinné látky na ošetrenie inflamatórnych a/alebo alergických reakcií, depresií, zneužívania drog a/alebo alkoholu, gastritídy, hnačiek, močovej inkontinencie, kardiovaskulárnych ochorení, ochorení dýchacích ciest, kašľa, duševných ochorení, epilepsie, schizofrénie, Alzheimerovej choroby, Huntingtonovej choroby, Parkinsonovej choroby, cerebrálnych ischémií, cerebrálnych infarktov, psychóz spôsobených zvýšenou hladinou aminokyselín, prípadov mŕtvice, mozgových edémov, hypoxie, anoxie, AIDS-demencie, encefalomyelitídy, Tourette-syndrómu alebo perinatálnej asfyxie.

Podstata vynálezu

Zistilo sa, že substituované deriváty pyrolidín-2-trión-3-oxímu ďalej uvedeného všeobecného vzorca I pôsobia selektívne ako NMDA-antagonisty na glycínové väzbové miesta a sú vhodné na ošetrenie inflamatórnych a/alebo alergických reakcií, depresií, zneužívania drog a/alebo alkoholu, gastritídy, hnačiek, močovej inkontinencie, kardiovaskulárnych ochorení, ochorení dýchacích ciest, kašľa, duševných ochorení, epilepsie, schizofrénie, Alzheimerovej choroby, Huntingtonovej choroby, Parkinsonovej choroby, cerebrálnych ischémií, cerebrálnych infarktov, psychóz spôsobených zvýšenou hladinou aminokyselín, prípadov mŕtvice, mozgových edémov, hypoxie, anoxie,

31875/H

AIDS-demencie, encefalomyelitídy, Tourette-syndrómu alebo perinatálnej asfyxie a okrem toho majú výrazné analgetické a anxiolytické účinky.

Predmetom predloženého vynálezu sú teda substituované deriváty pyrolidín-2,3,4-trión-3-oxímu všeobecného vzorca I:

v ktorom:

R¹ znamená vodíkový atóm, skupinu OR⁸, COR⁵, CSR⁵, NR^SR⁷, COOR⁵, CONR⁶R⁷ alebo CSNR⁶R⁷, alkylovú skupinu s 1 až 10 uhlíkovými atómami, výhodne s 1 až 6 uhlíkovými atómami, arylovú skupinu, heteroarylovú skupinu alebo arylovú skupinu, viazanú cez alkylénovú skupinu s 1 až 6 uhlíkovými atómami, výhodne cez alkylénovú skupinu s 1 až 3 uhlíkovými atómami,

R² a R³ sú rovnaké alebo rôzne a znamenajú vodíkový atóm, atóm fluóru, chlóru alebo brómu, trifluórmetylovú skupinu, skupinu OR^Ô alebo SR⁸, alkylovú skupinu s 1 až 10 uhlíkovými atómami, výhodne s 1 až 6 uhlíkovými atómami, arylovú skupinu, heteroarylovú skupinu alebo arylovú skupinu, viazanú cez alkylénovú skupinu s 1 až 6 uhlíkovými atómami, výhodne cez alkylénovú skupinu s 1 až 3 uhlíkovými atómami,

R⁴ znamená vodíkový atóm, hydroxyskupinu, skupinu OR⁸, SR⁸, COR⁵, COOR⁵, COCOR⁵, CONR⁶R⁷ alebo CSNR⁶R⁷, výhodne hydroxyskupinu alebo skupinu OR⁸, alkylovú skupinu s 1 až 10 uhlíkovými atómami, výhodne s 1 až 6 uhlíkovými atómami, arylovú skupinu, heteroarylovú skupinu alebo arylovú skupinu, viazanú cez alkylénovú skupinu s 1 až 6 uhlíkovými atómami, výhodne cez alkylénovú skupinu s 1 až 3

31875/H uhlíkovými atómami,

R⁵ znamená vodíkový atóm, alkylovú skupinu s 1 až 10 uhlíkovými atómami, výhodne s 1 až 6 uhlíkovými atómami, arylovú skupinu, heteroarylovú skupinu alebo arylovú skupinu, viazanú cez alkylénovú skupinu s 1 až 6 uhlíkovými atómami, výhodne cez alkylénovú skupinu s 1 až 3 uhlíkovými atómami,

R⁶ a R⁷ sú rovnaké alebo rôzne a znamenajú vodíkový atóm, skupinu OR⁸, COR⁵ alebo COOR⁵, alkylovú skupinu s 1 až 10 uhlíkovými atómami, výhodne s 1 až 6 uhlíkovými atómami, arylovú skupinu, heteroarylovú skupinu alebo arylovú skupinu, viazanú cez alkylénovú skupinu s 1 až 6 uhlíkovými atómami, výhodne cez alkylénovú skupinu s 1 až 3 uhlíkovými atómami a

R⁸ znamená alkylovú skupinu s 1 až 10 uhlíkovými atómami, výhodne s 1 až 6 uhlíkovými atómami, arylovú skupinu, heteroarylovú skupinu alebo arylovú skupinu, viazanú cez alkylénovú skupinu s 1 až 6 uhlíkovými atómami, výhodne cez alkylénovú skupinu s 1 až 3 uhlíkovými atómami, vo forme racemátov, enantiomérov, diastereomérov alebo zodpovedajúcej bázy alebo zodpovedajúcej fyziologicky prijateľnej soli.

Pod alkylovými zvyškami sa chápu tiež rozvetvené, nerozvetvené alebo cyklické nesubstituované alebo aspoň jednoducho, výhodne fluórom, chlórom, brómom, kyanoskupinou, nitroskupinou alebo skupinou CHO, SO₂C₁-₆-alkylovou, SO₂CF₃, OR⁵, NR⁶R⁷, COR⁵, COOR⁵, COCOR⁵, CONR⁶R⁷alebo CSNR⁶R⁷ substituované uhľovodíky, pričom zvyšky R⁵ až R⁷ majú významy uvedené pri vzorci I. Keď tieto alkylové zvyšky obsahujú viac ako jeden substituent, potom môžu byť tieto substituenty rovnaké alebo rôzne. Výhodné alkylové zvyšky sú metylová, etylová, propylová, izopropylová, nbutylová, sek-butylová, terc-butylová, neopentylová, n-hexylová, cyklopropylová, cyklobutylová, cyklopentylová alebo cyklohexylová skupina.

Pod arylovým zvyškom sa chápu tiež nesubstituované alebo aspoň jednoducho hydroxyskupinou, atómom fluóru, chlóru alebo brómu,

31875/H trifluórmetylovou skupinou, kyanoskupinou, nitroskupinou, skupinou CHO, SOaCve-alkylovou, SO₂CF₃, OR⁵, NR⁶R⁷, COR⁵, COOR⁵, COCOR⁵, CONR⁶R⁷alebo CSNR⁶R⁷, alkylovou skupinou s 1 až 6 uhlíkovými atómami, alkoxyskupinou s 1 až 6 uhlíkovými atómami, alkylénovou skupinou s 2 až 6 uhlíkovými atómami, heterocyklylovou skupinou a/alebo fenylovou skupinou substituované fenylové zvyšky, pričom zvyšky R⁵ až R⁷ majú významy uvedené pri vzorci I. Arylový zvyšok môže tiež znamenať prípadne substituovaný naftylový zvyšok. Fenylové zvyšky môžu byť tiež kondenzované s ďalšími kruhmi.

Pod heteroarylovým zvyškom sa chápu tiež päťčlenné alebo šesťčlenné nenasýtené, pripadne nakondenzovaným arylovým zvyškom opatrené heterocyklické zlúčeniny, ktoré obsahujú aspoň jeden heteroatóm, výhodne dusík a/alebo kyslík a/alebo síru. Výhodné heteroarylové zvyšky sú zvyšky furánu, tiofénu, pyrolu, pyridínu, pyrimidínu, chinolínu, izochinolínu, ftalazínu alebo chinazolínu.

Obzvlášť výhodné sú nasledujúce substituované deriváty pyrolidin-2,3,4trión-3-oxímu:

5-(metoxyfenylmetylén)pyrolidín-2,3,4-trión-3-oxím,

5-(brómfenylmetylén)pyrolidín-2,3,4-trión-3-oxím,

5-benzylidén-pyrolidín-2,3,4-trión-3-oxím,

5-(2-chlórbenzylidén)pyrolidín-2,3,4-trión-3-oxím,

5-(4-chlórbenzylidén)pyrolidín-2,3,4-trión-3-oxím,

5-(2,3-dichlórbenzylidén)pyrolidín-2,3,4-trión-3-oxím,

5-(2,4-dichlórbenzylidén)pyrolidín-2,3,4-trión-3-oxím,

5-(2,6-dichlórbenzylidén)pyrolidín-2,3,4-trión-3-oxím a

31875/H

5-(3-chlórbenzylidén)pyrolidín-2,3,4-trión-3-oxím.

Predmetom predloženého vynálezu je ďalej spôsob výroby substituovaných derivátov pyrolidín-2,3,4-trión-3-oxímu všeobecného vzorca I, pri ktorom sa nechá reagovať tetramová kyselina všeobecného vzorca II:

v ktorom majú zvyšky R¹ až R³ významy uvedené pri vzorci I, v ľadom chladenom roztoku, výhodne v ľadom chladenom roztoku ľadovej kyseliny octovej, s vodným roztokom dusitanu sodného na zlúčeniny všeobecného vzorca I, v ktorom R⁴ znamená hydroxyskupinu a zvyšky R¹ až R³ majú významy uvedené vyššie pri všeobecnom vzorci I a tieto sa čistia výhodne

I kryštalizáciou z etylalkoholu a izolujú.

Syntéza východiskových zlúčenín, tetramových kyselín všeobecného vzorca II, sa môže vykonávať podľa H. Poschenriedera a kol. (Árch. Pharm. Pharm. Med. Chem., 1998, Vol. 331, str. 389 až 394) a Stachela a kol. (J. Heterocycl. Chem., 1980, Vol. 17, str. 1195 až 1199 a Liebigs Ann. Chem., 1985, str. 1692 až 1696), ako i podľa tu citovanej literatúry. Tieto citácie sa tu uvádzajú ako referencie a sú teda časťou tohto zverejnenia.

Zlúčeniny všeobecného vzorca I, v ktorom R⁴ znamená hydroxyskupinu a zvyšky R¹ až R³ majú významy uvedené pri všeobecnom vzorci I, sa výhodne nechajú reagovať pod atmosférou ochranného plynu v absolútnych rozpúšťadlách, výhodne v éteroch s otvoreným reťazcom a/alebo cyklických, pri nízkych teplotách za prítomnosti silných báz, výhodne hydroxidov alkalických kovov a/alebo hydroxidov kovov alkalických zemín a/alebo organokovových báz, s alkylhalogenidmi s 1 až 10 uhlíkovými atómami, výhodne s 1 až 6 uhlíkovými atómami, s arylhalogenidmi, heteroarylhalogenídmi alebo

31875/H s arylalkylhalogenidmi s 1 až 6 uhlíkovými atómami v alkyle, výhodne s arylalkylhalogenidmi s 1 až 3 uhlíkovými atómami, na zlúčeniny všeobecného vzorca I, v ktorom zvyšok R⁴ znamená skupinu OR⁸ a zvyšky R¹ až R³ a R⁸majú významy uvedené pri všeobecnom vzorci I.

Zlúčeniny všeobecného vzorca i, v ktorom zvyšok R⁴ znamená skupinu OR⁸ a zvyšky R¹ až R³ a R⁸ majú významy uvedené pri všeobecnom vzorci I, sa môžu ďalej derivatizovať tak, že sa nechajú reagovať, výhodne pod atmosférou ochranného plynu, v absolútnom rozpúšťadle, výhodne v éteroch s otvoreným reťazcom a/alebo cyklických éteroch, s chloridmi kyselín všeobecného vzorca R⁵-(C=O)-CI a/alebo bromidmi kyselín všeobecného vzorca R⁵-(C=O)-Br alebo estermi kyseliny chlórmravčej všeobecného vzorca CI-(C=O)-O-R⁵, prípadne estermi kyseliny fluórmravčej všeobecného vzorca F-(C=O)-O-R⁵ alebo s karbonátmi s otvoreným reťazcom všeobecného vzorca R⁵-O-(C=O)-O-R⁵, prípadne so zodpovedajúcim spôsobom substituovanými cyklickými karbonátmi, výhodne so zodpovedajúcim spôsobom substituovanými cyklickými karbonátmi, ktoré majú 5 alebo 6 atómov v kruhu, pričom zvyšok R⁵ má významy, uvedené vyššie pri všeobecnom vzorci I, na zlúčeniny všeobecného vzorca I, v ktorom zvyšok R⁴ znamená skupinu COR⁵ a COOR⁵ a zvyšky R¹ až R³ a R⁵ majú významy uvedené vyššie pri všeobecnom vzorci I a tieto sa potom čistia a izolujú pomocou bežných spôsobov.

Zlúčeniny všeobecného vzorca I, v ktorom znamená zvyšok R⁴hydroxylovú skupinu a zvyšky R¹ až R³ majú významy uvedené vyššie pri všeobecnom vzorci I, sa môžu nechať zreagovať s alifatickými, aromatickými, prípadne heteroaromatickými izokyanátmi alebo izotiokyanátmi pri nízkych teplotách v aprotických polárnych rozpúšťadlách na zlúčeniny všeobecného vzorca I, v ktorom zvyšok R⁴ znamená skupinu CONR⁶R⁷ alebo CSNR⁶R⁷, zvyšok R⁶ alebo R⁷ znamená vodíkový atóm a zvyšky R¹ až R³ a R⁶ majú významy uvedené vyššie pri všeobecnom vzorci I a tieto sa potom čistia a izolujú pomocou bežných spôsobov.

Výroba zlúčenín všeobecného vzorca I, v ktorom znamená zvyšok R⁴alkylovú skupinu s 1 až 10 uhlíkovými atómami, arylovú skupinu, heteroarylovú

31875/H skupinu alebo cez alkylénovú skupinu s 1 až 6 uhlíkovými atómami viazanú arylovú skupinu, sa môže vykonávať podľa metódy Maruoka a Yamamota, uvedenej vAngew. Chem., Vol. 105, str. 2831, 1985, prípadne Maruoka a kol., Org. Synth., Vol. 66, str. 185. Zodpovedajúce zverejnenia sú týmto zahrnuté ako referencie.

Výroba zlúčenín všeobecného vzorca I, v ktorom zvyšok R⁴ znamená vodíkový atóm alebo skupinu SR⁸ alebo COCOR⁵ a zvyšky R⁵ a R⁸ majú významy, uvedené vyššie pri všeobecnom vzorci I, sa môžu získať pomocou rôznych odborníkom známych metód. Výroba zlúčenín všeobecného vzorca I, v ktorom zvyšok R⁴ znamená skupinu CONR⁶R⁷ alebo CSNR⁶R⁷ a zvyšky R⁶ a R⁷ znamenajú buď vodíkový atóm alebo majú významy uvedené vyššie pri všeobecnom vzorci I, sa môžu rovnako získať pomocou rôznych odborníkom známych metód.

Skúšky pomocou ¹H-NMR-spektroskopie ukázali, že sa deriváty pyrolidín-2,3,4-trión-3-oxímu všeobecného vzorca I, získané pomocou vyššie opísaných spôsobov, môžu vyskytovať ako zmes syn- a anti-izomérov, ktoré sa nemôžu ďalej deliť.

Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu všeobecného vzorca I sa dajú previesť pomocou kyselín, ako je napríklad kyselina chlorovodíková, bromovodíková, sírová, metánsulfónová, mravčia, octová, šťaveľová, jantárová, vínna, mandlová, fumárová, mliečna, citrónová, glutámová, asparágová alebo zmesi aspoň dvoch z týchto kyselín, známym spôsobom na zodpovedajúce fyziologicky prijateľné soli. Výhodne sa vykonáva tvorba solí v rozpúšťadle, ako je napríklad dietyléter, diizopropyléter, alkylestery kyseliny octovej, acetón, 2butanón alebo zmes z aspoň dvoch z týchto rozpúšťadiel. Na výrobu zodpovedajúcich hydrochloridov je okrem toho vhodný trimetylchlórsilán vo vodnom roztoku.

Substituované deriváty pyrolidín-2,3,4-trión-3-oxímu podľa predloženého vynálezu všeobecného vzorca I sú toxikologický neškodné a predstavujú teda vhodné farmaceutické účinné látky.

31875/H

Ďalším predmetom predloženého vynálezu sú teda liečivá, ktoré obsahujú ako účinnú látku aspoň jeden substituovaný derivát pyrolidín-2,3,4trión-3-oxímu všeobecného vzorca I a/alebo zodpovedajúcu bázu a/alebo zodpovedajúcu fyziologicky prijateľnú soľ, ako i prípadne ďalšie účinné a/alebo pomocné látky. Liečivo môže tiež obsahovať zmes z aspoň dvoch enantiomérov a/alebo zodpovedajúcej bázy a/alebo zodpovedajúcej fyziologicky prijateľnej soli zlúčeniny podľa predloženého vynálezu všeobecného vzorca I, pričom enantioméry sa nevyskytujú v ekvimolárnom množstve.

Výhodne sa liečivá používajú na ošetrenie alebo liečenie bolestí, inflamatómych a/alebo alergických reakcií, depresií, zneužívania drog a/alebo alkoholu, gastritídy, hnačiek, močovej inkontinencie, kardiovaskulárnych ochorení, ochorení dýchacích ciest, kašľa, duševných ochorení, neurodegeneratívnych ochorení, epilepsie, schizofrénie, Alzheimerovej choroby, Huntingtonovej choroby, Parkinsonovej choroby, cerebrálnych ischémií, cerebrálnych infarktov, psychóz spôsobených zvýšenou hladinou aminokyselín, prípadov mŕtvice, mozgových edémov, stavov nedostatočného zásobovania centrálneho nervového systému, hypoxie, anoxie, AIDSdemencie, encefalomyelitídy, Tourette-syndrómu, perinatálnej asfyxie alebo na anxiolýzu.

Ďalším predmetom predloženého vynálezu je tiež použitie aspoň jedného substituovaného derivátu pyrolidín-2,3,4-trión-3-oxímu všeobecného vzorca I a/alebo zodpovedajúcej bázy a/alebo zodpovedajúcej fyziologicky prijateľnej soli na výrobu liečiva na ošetrenie alebo liečenie bolestí, inflamatómych a/alebo alergických reakcií, depresií, zneužívania drog a/alebo alkoholu, gastritídy, hnačiek, močovej inkontinencie, kardiovaskulárnych ochorení, ochorení dýchacích ciest, kašľa, duševných ochorení, neurodegeneratívnych ochorení, epilepsie, schizofrénie, Alzheimerovej choroby, Huntingtonovej choroby, Parkinsonovej choroby, cerebrálnych ischémií, cerebrálnych infarktov, psychóz spôsobených zvýšenou hladinou aminokyselín, prípadov mŕtvice, mozgových edémov, stavov nedostatočného

31875/H zásobovania centrálneho nervového systému, hypoxie, anoxie, AIDSdemencie, encefalomyelitídy, Tourette-syndrómu, perinatálnej asfyxie alebo na anxiolýzu.

Na prípravu zodpovedajúcich farmaceutických prípravkov sa použijú okrem aspoň jedného substituovaného derivátu pyrolidín-2,3,4-trión-3-oxímu všeobecného vzorca I dodatočne bežné pomocné látky, ako sú napríklad nosiče, plnidlá, rozpúšťadlá, zried’ovacie činidlá, farbivá alebo spojivá. Voľba pomocných látok, ako i ich použité množstvá, závisí od druhu aplikácie, teda od toho, či sa má liečivo aplikovať orálne, intravenózne, intraperitoneálne, intradermálne, intramuskulárne, intranazálne, bukálne alebo miestne, napríklad na infekcie na koži, sliznici a do očí a tieto látky sú odborníkom známe. Na orálnu aplikáciu sú vhodné napríklad prípravky vo forme tabliet, dražé, kapsúl, granulátov, kvapiek, štiav a sirupov, ako i multipartikulárne prípravky, napríklad pelety alebo granuláty, ktoré sa môžu napríklad naplniť do kapsúl alebo zlisovať do tabliet. Na parenterálnu, topickú a inhalatívnu aplikáciu sú vhodné napríklad roztoky, suspenzie, ľahko rekonštituovateľné suché prípravky, ako i spreje. Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu všeobecného vzorca I v depote, v rozpustenej forme alebo v náplastiach, prípadne za prídavku prostriedkov podporujúcich penetráciu kožou, sú vhodné perkutánne aplikačné prípravky. Orálne alebo perkutánne aplikovateľné formy prípravkov môžu uvoľňovať zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa predloženého vynálezu tiež spomalene.

Množstvo účinnej látky, aplikovanej u pacientov, sa mení v závislosti od hmotnosti pacienta, od aplikačnej formy, indikácie a závažnosti ochorenia. Zvyčajne sa aplikujú 2 mg/kg až 500 mg/kg telesnej hmotnosti pacienta aspoň jedného derivátu pyrolidín-2,3,4-trión-3-oxímu všeobecného vzorca I.

31875/H

Farmakologické skúšky

a) Skúška väzby na receptory

Skúšky na zistenie afinity substituovaných derivátov pyrolidín-2,3,4~trión3-oxímu podľa predloženého vynálezu všeobecného vzorca I pre glycínové väzbové miesta NMDA-receptorového kanálu sa vykonávali na homogenizátoch mozgových membrán (homogenizát z Cortex- a Hippocampus-Areal z mozgu samčích krýs, kmeň Wistar, Carles River, WIGA GmbH, Sulzbach, Nemecko) podľa Baróna, B. M. a kol., J. Pharmacol. Exp. Ther., Vol. 279, str. 62 až 68 (1995).

Kvôli tomu sa Cortex a Hippocampus vypreparovali z čerstvo odobratých krysích mozgov a homogenizovali v 5 mmol/l TRIS-acetátového pufra, 0,32 mol/l sacharózy pH 7,4 (10 ml/g čerstvej hmotnosti) pomocou Potterovho homogenizátora (firma Braun, Melsungen, Nemecko, 10 zdvihov banky pri 500 otáčkach za minútu) za chladenia ľadom a potom odstred’ovali počas 10 minút pri 1 000 g a teplote 4 °C. Prvý supernatant sa spojí a sediment sa znova homogenizuje s 5 mmol/l TRIS-acetátového pufra, 0,32 mol/l sacharózy pH 7,4 (5 ml/g čerstvej hmotnosti Cortexu a Hippocampu krysieho mozgu) sa homogenizuje pomocou Potterovho homogenizátora (10 zdvihov banky pri 500 otáčkach za minútu) za chladenia ľadom a potom sa odstred’uje počas 10 minút pri 1 000 g a teplote 4 °C. Získaný supernatant sa spojí so supernatantom z prvého odstreďovania a odstred’uje sa pri 17 000 g počas 20 minút pri teplote 4 ^eC. Supernatant po tomto odstredení sa vyleje a sediment membrán sa vyberie 5 mmol/l TRIS-acetátového pufra pH 8,0 (20 ml/g pôvodnej čerstvej hmotnosti) a homogenizuje sa za 10 zdvihov banky pri 500 otáčkach za minútu.

Potom sa membránový homogenizát inkubuje počas 1 hodiny pri teplote 4 °C a odstred’uje sa počas 30 minút pri 50 000 g a teplote 4 °C. Supernatant sa vyleje a centrifugačné kyvety so sedimentom membrány sa uzatvoria parafínom a mrazia sa počas 24 hodín pri teplote -20 °C. Potom sa sediment membrán nechá roztopiť a vyberie sa pomocou 5 mmol/l TRIS-acetátového pufra, 0,1 % saponínu (hmotnosť/objem) pH 7,0 (10 ml/g pôvodnej čerstvej hmotnosti), homogenizuje sa za 10 zdvihov banky pri 500 otáčkach za minútu a

31875/H potom sa odstreďuje počas 20 minút pri 50 000 g a teplote 4 °C. Získaný supematant sa vyleje, sediment sa vyberie malým objemom 5 mmol/l TRISacetátového pufra pH 7,0 (asi 2 ml/g pôvodnej čerstvej hmotnosti) a znova sa homogenizuje za 10 zdvihov banky pri 500 otáčkach za minútu. Po stanovení obsahu proteínov sa membránový homogenizát upraví 5 mmol/l TRISI acetátového pufra pH 7,0 na koncentráciu proteínu 10 mg proteínu/ml a po rovnakých dieloch sa nechá zmraziť až do vykonávania pokusov.

Kvôli testu väzby na receptory sa vzorka nechá roztopiť, zriedi sa 1 : 10 5 mmol/l TRIS-acetátovým pufrom, homogenizuje sa za 10 zdvihov pri 500 otáčkach za minútu za chladenia ľadom v Potterovom homogenizátore a odstreďuje sa počas 60 minút pri 55 000 g pri teplote 4 °C. Supematant sa oddekantuje a membránový sediment sa nariedi pomocou ľadového 50 mmol/l TRIS-acetátového pufra pH 7,0 na koncentráciu proteínu 1 mg/ml a znova sa homogenizuje za 10 zdvihov pri 500 otáčkach za minútu a za miešania pomocou magnetického miešadla sa v ľadovom kúpeli udržiava v suspenzii. Z tohto membránového homogenizátu sa použije vždy 100 μΙ na 1 ml vsádzky v teste väzby na receptory (0,1 mg proteínu/ml v konečnej vsádzke).

Vo väzbovom teste sa ako pufor použije 50 mmol/l TRIS-acetátový pufor pH 7,0 a ako rádioaktívny ligand 1 nmol/l (³H)-MDL 105.519 (Barón, B. M. a kol., J. Pharmacol. Exp. Ther., Vol. 279, str. 62 - 68 (1996)). Podiel nešpecifickej väzby sa stanovuje za prítomnosti 1 mmol/l glycínu.

V ďalších vsádzkach sa pridávajú zlúčeniny podľa predloženého vynálezu v koncentračných radoch a zisťuje sa vytesňovanie rádioaktívneho ligandu z jeho špecifickej väzby na glycín-väzbové miesto NMDAreceptorového kanálu. Zodpovedajúce trojnásobné vsádzky sa inkubujú počas 120 minút pri teplote 4 °C a potom sa kvôli stanoveniu rádioaktívnych ligandov, viazaných na membránový homogenizát, získajú filtráciou cez filtračný materiál zo sklených vláken (typ Whatman GF/B, firma Adi Hassel, Mníchov, Nemecko). Rádioaktivita, získaná z filtra zo sklených vláken, sa meria po prídavku scintilátora (Ready Protein, firma Beckmann Coulter GmbH, Krefeld, Nemecko) v β-čítači (Packard TRI-CARB Liquid Szintillation Analyzer 2000CA, firma

31875/H

Packard Inštrument, Meriden, CT 06450, USA).

Afinita zlúčenín podľa predloženého vynálezu ku glycínovým väzbovým miestam NMDA-receptorového kanálu sa vypočíta ako IC₅₀ (koncentrácia s 50 % vytesnenia rádioaktívneho ligandu z jeho špecifickej väzby) podľa zákona o vzájomnom pôsobení hmoty pomocou nelineárnej regresie a po prepočte (podľa Cheng-Prussoffovej rovnice (Z. Cheng, W. H. Prussoff, 1973, Biochem. Pharmacol., Vol. 22, str. 3099 - 3108)) sa uvádza ako hodnota Ki.

b) NMDA/glycín-indukované Iónové prúdy na RNK - injikovaných Xenopus oocytoch

Pokusy o stanovenie funkčných zmien NMDA-receptorového kanálu zlúčeninami podľa predloženého vynálezu všeobecného vzorca I sa vykonávajú na oocytoch juhoafrickej pazúrovitej žaby Xenopus laevis. Kvôli tomu sa v oocytoch vytvoria neuronálne NMDA-receptorové kanály po injekcii RNK z myších mozgov a merajú sa prúdy iónov, vyvolané koaplikáciou NMDA a glycínu.

Oocyty Xenopus v štádiu V a VI (Dumont, J. N., J. Morphol., Vol. 136, str. 153 - 180 (1972)) sa mikroinjikujú celkovou RNK z mozgového tkaniva mláďat myší (100 - 130 ng/bunka) a až 10 dní sa udržiavajú v kultivačnom médiu (zloženie: 88,0 mmol/l NaCl, 1,0 mmol/l KCI, 1,5 mmol/l CaCI₂, 0,8 mmol/l MgSO4, 2,4 mmol/l NaHCO3, 5 mmol/l HEPES, 100 lU/ml penicilín, 100 pg/ml streptomycín, pH 7,4) pri teplote 20 °C. Transmembránové iónové prúdy sa registrujú pomocou konvenčnej dvojelektródovej techniky napäťových svoriek pri potenciáli zotrvania -70 mV (Bloms - Funke, P. a kol. (1996), Neurosci. Lett., 205, str. 115 - 118 (1996)). Na zaznamenávanie dát a riadenie pokusnej aparatúry sa používa OTC-Inferface a Software Cellworks (firmy npi, Nemecko). Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu sa pridajú do nominálneho média, bez Mg²⁺ (zloženie: 89,0 mmol/l NaCl, 1,0 mmol/l KCI, 1,8 mmol/l CaCI₂, 2,4 mmol/l NaHCO₃, 5 mmol/l HEPES, pH 7,4) a aplikuje sa systemicky pomocou koncentračnej svorky (firma NPI, Nemecko). Aby sa otestovali efekty

31875/H substancie, ktoré sú sprostredkované cez glycín B-väzbové miesta NMDAreceptorového kanálu, zaznamená sa krivka účinku dávky glycínu s a bez zodpovedajúcej zlúčeniny podľa predloženého vynálezu. Na to sa kumulatívne koaplikuje NMDA vo fixnej koncentrácii 100 pmol/l s glycínom s narastajúcou koncentráciou (0 - 100 μιτιοΙ/l). Potom sa experiment opakuje rovnakým spôsobom s pevnou koncentráciou zlúčeniny podľa predloženého vynálezu. Prúdové amplitúdy sa normujú na amplitúdy odpoveďou kontroly na koaplikáciu NMDA (100 pmol/l) s glycínom (10 μίτιοΙ/Ι). Analýza dát sa vykonáva pomocou Software Igor-Pro (Version 3.1, WaveMetrics, USA). Všetky výsledky sa udávajú ako stredná hodnota z aspoň troch experimentov na rôznych oocytoch aspoň dvoch žiab. Signifikancia pre nepárové merané veličiny sa zisťuje pomocou Mann-Whitney U-testu a pre párové merané veličiny pomocou Wilcoxon-testu (Sysstat, SPSS Inc., USA). Hodnoty EC₅₀ sa vypočítajú pomocou nasledujúceho vzorca:

Y ⁼ Ymin (Ymax Ymin ) / (1 + (X/ECso) - P) v ktorom znamenajú:

Y_min minimálna hodnota testu

Ymax maximálna hodnota testu

Y relatívna amplitúda prúdu

X koncentrácia testovanej substancie

P slope faktor.

Pri posunutí vpravo krivky účinku dávky glycínu sa graficky zistí na základe štítovej regresie pA2 - hodnota zlúčeniny podľa predloženého vynálezu. Koncentračné pomery sa kalkulujú na základe hodnoty EC₅o, ktorá sa nezávisle vypočíta pre každú krivku účinku dávkovania.

31875/H

c) Formalínový test na myšiach

Pokusy o stanovenie antinociceptívneho účinku zlúčenín podľa predloženého vynálezu sa vykonávajú pomocou formalínového testu na samcoch bielych myší (NMRI, 25 - 35 g, Iffa Credo, Belgicko).

Vo formalínovom teste sa rozlišuje prvá (skoršia) fáza (0-15 minút po formalínovej injekcii) a druhá (neskoršia) fáza (15-60 minút po formalínovej injekcii) (D. Dubuisson a kol., Pain, Vol. 4, str. 161 - 174 (1977)). Skoršia fáza predstavuje priamu reakciu na formalínovú reakciu model pre akútnu bolesť, zatiaľ čo neskoršia fáza sa pokladá za model pre perzistujúcu (chronickú) bolesť (T. J. Coderre a kol., Pain, Vol. 52, str. 259 - 285 (1993)).

Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu sa skúšajú v druhej fáze formalínového testu, aby sa získali výpovede o účinkoch zlúčenín podľa predloženého vynálezu pri chronicko/zápalovej bolesti.

Jednorazovou subkutánnou formalínovou injekciou (20 μΙ, 1 % vodný roztok) do chrbtovej strany pravej zadnej labky sa u voľne pohyblivých pokusných zvierat indukuje nociceptívna reakcia, ktorá sa prejavuje zreteľným oblizovaním a ohrýzaním zodpovedajúcej labky.

Pre časovú oblasť pokusu v druhej (neskoršej) fáze formalínového testu sa kontinuálne zisťuje nociceptívna reakcia pozorovaním zvierat. Kvantifikácia reakcie na bolesť sa vykonáva sumarizáciou sekúnd, v ktorých zvieratá v časovej oblasti pokusu oblizujú a ohryzávajú zodpovedajúcu labku. Po injekcii zlúčenín, ktoré sú vo formalínovom teste antinociceptívne účinné, sa opísané reakcie zvierat redukujú, eventuálne dokonca zrušia. V súlade s pokusmi, pri ktorých zvieratá dostali pred aplikáciou formalínu injekčné zlúčeniny podľa predloženého vynálezu, sa kontrolným zvieratám pred aplikáciou formalínu vstreklo vehikulum, to znamená rozpúšťadlo (napríklad 0,9 % roztok NaCl). Reakcia zvierat po podaní substancie (10 myší na dávku substancie) sa porovnáva s kontrolnou skupinou (10 myší).

Na základe kvantifikácie reakcie na bolesť sa zisťuje účinok substancie vo formalínovom teste ako zmena v porovnaní s kontrolou v percentách.

31875/H

Výpočty ED₅₀ sa vykonávajú pomocou regresnej analýzy. V závislosti od druhu aplikácie zlúčenín podľa predloženého vynálezu sa volí doba aplikácie pred injekciou formalínu (intraperitoneálne: 15 min., intravenózne: 5 min.).

d) Skúška Writhingovým testom na myšiach

Analgetická účinnosť sa skúša fenylchinónom indukovaným Writhingtestom na myšiach (modifikovaným podľa I. C. Hendershota a kol., popísaným v J. Pharmacol. Expl. Ther., 125, 237 až 240 (1959)). Na to sa použijú samce NMRI - myší s hmotnosťou v rozmedzí 25 až 30 g (Iffa, Credo, Belgicko). Skupiny vždy po 10 zvieratách dostanú na dávku substancie 10 minút po intravenóznom podaní zodpovedajúcej zlúčeniny pre myš 0,3 ml 0,02 % vodného roztoku fenylchinónu (fenylbenzochinón, firma Sigma, Deisenhofen; výroba roztoku za prídavku 5 % etylalkoholu a udržiavanie vo vodnom kúpeli pri teplote 45 °C), aplikované intraperitoneálne. Potom sa zvieratá umiestnia jednotlivo do pozorovacích klietok. S pomocou tlačidlového počítadla sa zisťuje počet bolestí indukovaných naťahovacích pohybov (Writhingova reakcia = pretlačenie tela s vylúčením vedľajších extrémov) 5 až 20 minút po dávke fenylchinónu. Ako kontrola sa používajú zvieratá, ktoré dostanú len fyziologický roztok chloridu sodného. Všetky substancie sa testujú v štandardných dávkach 10 mg/kg telesnej hmotnosti myši. Percentuálna inhibícia (% inhibície) Writhingovej reakcie substancií sa vypočíta podlá nasledujúceho vzorca:

Writhingova reakcia ošetrených zvierat. 100 % inhibície = 100 -_

Writhingova reakcia kontrolných zvierat

Pre niektoré zo zlúčenín podľa predloženého vynálezu sa z od dávky závislého poklesu Writhingových reakcií v porovnaní s paralelne skúšanými fenylchinónovými kontrolnými skupinami vypočítajú pomocou regresnej analýzy (vyhodnocovací program Martens EDV Service, Eckental) hodnoty ED₅₀ s 95 % oblasťou dôveryhodnosti Writhingovej reakcie.

31875/H

Príklady uskutočnenia vynálezu

Nasledujúce príklady slúžia na bližšie objasnenie spôsobu podľa predloženého vynálezu, neobmedzujú však nijako všeobecnú myšlienku vynálezu.

Výťažky vyrobených zlúčenín sa nijako neoptimalizujú.

Všetky teploty topenia sú nekorigované.

Príklad 1

5-(metoxyfenylmetylén)pyrolidín-2,3,4-trión-3-oxím

K ľadom ochladenému roztoku 2 mmol 4-hydroxy-5-(metoxyfenylmetylén)-1,5-dihydropyrol~2-ónu (vyrobený podľa H. Poschenriedera a kol. (Árch. Pharm. Pharm. Med. Chem., 1998, Vol. 331, str. 389 - 394) a H. D. Stachel a kol. (J. Heterocycl. Chem., 1980, Vol. 17, str. 1195 - 1199 a Liebigs Ann. Chem., 1985, str. 1692 - 1696)) v 5 ml ľadovej kyseliny octovej sa za miešania prikvapká vodný roztok 1,1 mmol (0,075 g) dusitanu sodného. Získaný roztok sa potom mieša počas 30 minút pri teplote miestnosti a vo vákuu sa zahustí. Získaný zvyšok sa čistí kryštalizáciou z etylalkoholu. Výťažok 5-(metoxyfenylmetylén)pyrolidín-2,3,4-trión-3-oxímu je 60 %.

T.t.: 174 °C.

Pri analýze tejto zlúčeniny pomocou ¹H-NMR-spektroskopie sa získali nasledujúce signály:

(dô-DMSO, δ ppm): 11,95 (s, 1H), 10,74 (s, 0.66H), 10,71 (s, 0.33H), 7,46 (m, 5H), 3,42 (s, 1H), 3,41 (s, 2H).

Príklad 2

5-(brómfenylmetylén)pyrolidín-2,3,4-trión-3-oxím

K ľadom ochladenému roztoku 2 mmol 5-(brómfenylmetylén)-4-hydroxy1,5-dihydropyrol-2-ónu (vyrobený podľa H. Poschenriedera a kol. (Árch. Pharm.

31875/H

Pharm. Med. Chem., 1998, Vol. 331, str. 389 - 394) a H. D. Stachel a kol. (J. Heterocycl. Chem., 1980, Vol. 17, str. 1195 - 1199 a Liebigs Ann. Chem., 1985, str. 1692 - 1696)) v 5 ml ľadovej kyseliny octovej sa za miešania prikvapká vodný roztok 1,1 mmol (0,075 g) dusitanu sodného. Získaný roztok sa potom mieša počas 30 minút pri teplote miestnosti a vo vákuu sa zahustí. Získaný zvyšok sa čistí kryštalizáciou z etylalkoholu. Výťažok 5(brómfenylmetylén)pyrolidín-2,3,4-trión-3-oxímu je 65 %.

T.t.: 158 °C.

(de-DMSO, δ ppm): 14,46 (s, 1H), 11,06 (s, 0,70H), 11,00 (s, 0,30H), 7,40 7,26 (m, 5H).

Príklad 3

5-benzylidén-pyrolidín-2,3,4-trión-3-oxím

K ľadom chladenému roztoku 2 mmol 5-benzylidén-4-hydroxy-1,5dihydropyrol-2-ónu (vyrobený podľa H. Poschenriedera a kol. (Árch. Pharm. Pharm. Med. Chem., 1998, Vol. 331, str. 389 - 394) a H. D. Stachel a kol. (J. Heterocycl. Chem., 1980, Vol. 17, str. 1195 - 1199 a Liebigs Ann. Chem., 1985, str. 1692 - 1696)) v 5 ml ľadovej kyseliny octovej sa za miešania prikvapká vodný roztok 1,1 mmol (0,075 g) dusitanu sodného. Získaný roztok sa potom mieša počas 30 minút pri teplote miestnosti a vo vákuu sa zahustí. Získaný zvyšok sa čistí kryštalizáciou z etylalkoholu. Výťažok 5-benzylidén-pyrolidín2,3,4-trión-3-oxímu je 65 %.

T.t.: 205 °C.

(de-DMSO, δ ppm): 14,66 (s, 1H), 11,25 (s, 0.66H), 11,18 (s, 0.33H), 7,64 7,31 (m, 5H), 6,42 (s, 0,33H), 6,36 (s, 0,66H).

31875/H

Príklad 4

5-(2-chlórbenzylidén)pyrolidín-2,3,4-trión-3-oxím

K ľadom chladenému roztoku 2 mmol 5-(2-chlórbenzylidén)-4-hydroxy1,5-dihydropyrol-2-ónu (vyrobený podľa H. Poschenriedera a kol. (Árch. Pharm. Pharm. Med. Chem., 1998, Vol. 331, str. 389 - 394) a H. D. Stachel a kol. (J; Heterocycl. Chem., 1980, Vol. 17, str. 1195 - 1199 a LiebigsAnn. Chem., 1985, str. 1692 - 1696)) v 5 ml ľadovej kyseliny octovej sa za miešania prikvapká vodný roztok 1,1 mmol (0,075 g) dusitanu sodného. Získaný roztok sa potom mieša počas 30 minút pri teplote miestnosti a vo vákuu sa zahustí. Získaný zvyšok sa čistí kryštalizáciou z etylalkoholu. Výťažok 5-(2chlórbenzylidén)pyrolidín-2,3,4-trión-3-oxímu je 60 %.

T.t.: 176 °C.

(d₆-DMSO, δ ppm): 11,40 (s, 0,66H), 11,34 (s, 0.33H), 7,46 - 7,21 (m, 4H), 6,52 (s, 0.33H), 6,47 (s, 0,66H).

Príklad 5

5-(4-chlórbenzylidén)pyrolidín-2,3,4-trión-3-oxím

K ľadom chladenému roztoku 2 mmol 5-(4-chlórbenzylidén)-4-hydroxy1,5-dihydropyrol-2-ónu (vyrobený podľa H. Poschenriedera a kol. (Árch. Pharm. Pharm. Med. Chem., 1998, Vol. 331, str. 389 - 394) a H. D. Stachel. a kol. (J. Heterocycl. Chem., 1980, Vol. 17, str. 1195 - 1199 a Liebigs Ann. Chem., 1985, str. 1692 - 1696)) v 5 ml ľadovej kyseliny octovej sa za miešania prikvapká vodný roztok 1,1 mmol (0,075 g) dusitanu sodného. Získaný roztok sa potom mieša počas 30 minút pri teplote miestnosti a vo vákuu sa zahustí. Získaný zvyšok sa čistí kryštalizáciou z etylalkoholu. Výťažok 5-(4chlórbenzylidén)pyrolidín-2,3,4-trión-3-oxímu je 50 %.

T.t.: 190 °C.

31875/H

(de-DMSO, δ ppm): 11,35 (s, 0,66H), 11,28 (s, 0,33H), 7,67 - 7,64 (m, 2H), 7,45 - 7,35 (m, 2H), 6,40 (s, 0.33H), 6,35 (s, 0.66H).

Príklad 6

5-(2,3-dichlórbenzylidén)pyrolidín-2,3,4-trión-3-oxím

K ľadom chladenému roztoku 2 mmol 5-(2,3-dichlórbenzylidén)-4hydroxy-1,5-dihydropyrol-2-ónu (vyrobený podľa H. Poschenriedera a kol. (Árch. Pharm. Pharm. Med. Chem., 1998, Vol. 331, str. 389 - 394) a H. D. Stachel a kol. (J. Heterocycl. Chem., 1980, Vol. 17, str. 1195 - 1199 a Liebigs Ann. Chem., 1985, str. 1692 - 1696)) v 5 ml ľadovej kyseliny octovej sa za miešania prikvapká vodný roztok 1,1 mmol (0,075 g) dusitanu sodného. Získaný roztok sa potom mieša počas 30 minút pri teplote miestnosti a vo vákuu sa zahustí. Získaný zvyšok sa čistí kryštalizáciou z etylalkoholu. Výťažok 5-(2,3-dichlórbenzylidén)pyrolidín-2,3,4-trión-3-oxímu je 55 %.

T.t.: 180 °C.

(de-DMSO, δ ppm): 11,43 (s, 0.66H), 11,37 (s, 0,33H), 7,63 - 7,37 (m, 3H), 6,50 (s, 0.33H), 6,45 (s, 0.66H).

Príklad 7

5-(2,4-dichlórbenzylidén)pyrolidín-2,3,4-trión-3-oxím

K ľadom chladenému roztoku 2 mmol 5-(2,4-dichlórbenzylidén)-4hydroxy-1,5-dihydropyrol-2-ónu (vyrobený podľa H. Poschenriedera a kol. (Árch. Pharm. Pharm. Med. Chem., 1998, Vol. 331, str. 389 - 394) a H. D. Stachel a kol. (J. Heterocycl. Chem., 1980, Vol. 17, str. 1195 - 1199 a Liebigs

31875/H

Ann. Chem., 1985, str. 1692 - 1696)) v 5 ml ľadovej kyseliny octovej sa za miešania prikvapká vodný roztok 1,1 mmol (0,075 g) dusitanu sodného. Získaný roztok sa potom mieša počas 30 minút pri teplote miestnosti a vo vákuu sa zahustí. Získaný zvyšok sa čistí kryštalizáciou z etylalkoholu. Výťažok 5-(2,4-dichlórbenzylidén)pyrolidín-2,3,4-trión-3-oxímu je 55 %.

T.t.: 180 °C.

(de-DMSO, δ ppm): 11,38 (s, 0.66H), 11,32 (s, 0.33H), 7,68 - 7,65 (m, 2H), 7,45 - 7,43 (m, 1H), 6,42 (s, 0,33H), 6,36 (s, 0,66H).

Príklad 8

5-(2,6-dichlórbenzylidén)pyrolidín-2,3,4-trión-3-oxím

K ľadom chladenému roztoku 2 mmol 5-(2,6-dichlórbenzylidén)-4hydroxy-1,5-dihydropyrol-2-ónu (vyrobený podľa H. Poschenriedera a kol. (Árch. Pharm. Pharm. Med. Chem., 1998, Vol. 331, str. 389 - 394) a H. D. Stachel a kol. (J. Heterocycl. Chem., 1980, Vol. 17, str. 1195 - 1199 a Liebigs Ann. Chem., 1985, str. 1692 - 1696)) v 5 ml ľadovej kyseliny octovej sa za miešania prikvapká vodný roztok 1,1 mmol (0,075 g) dusitanu sodného. Získaný roztok sa potom mieša počas 30 minút pri teplote miestnosti a vo vákuu sa zahustí. Získaný zvyšok sa čistí kryštalizáciou z etylalkoholu. Výťažok 5-(2,6-dichlórbenzylidén)pyrolidín-2,3,4-trión-3-oxímu je 65 %.

T.t.: 232 °C.

(de-DMSO, δ ppm): 11,12 (s, 0.66H), 11,08 (s, 0.33H), 7,50 - 7,48 (m, 2H), 7,39 - 7,35 (m, 1H), 6,27 (s, 0.33H), 6,22 (s, 0.66H).

31875/H

Príklad 9

5-(3-chlórbenzylidén)pyrolidín-2,3,4-trión-3-oxím

K ľadom chladenému roztoku 2 mmol 5-(3-chlórbenzylidén)-4-hydroxy1,5-dihydropyrol-2-ónu (vyrobený podľa H. Poschenriedera a kol. (Árch. Pharm. Pharm. Med. Chem., 1998, Vol. 331, str. 389 - 394) a H. D. Stachel a kol. (J. Heterocycl. Chem., 1980, Vol. 17, str. 1195 - 1199 a Liebigs Ann. Chem., 1985, str. 1692 - 1696)) v 5 ml ľadovej kyseliny octovej sa za miešania prikvapká vodný roztok 1,1 mmol (0,075 g) dusitanu sodného. Získaný roztok sa potom mieša počas 30 minút pri teplote miestnosti a vo vákuu sa zahustí. Získaný zvyšok sa čistí kryštalizáciou z etylalkoholu. Výťažok 5-(3chlórbenzylidén)pyrolidín-2,3,4-trión-3-oxímu je 50 %.

T.t.: 185 °C.

(d₆-DMSO, δ ppm): 14,69 (s, 0,66H), 14,53 (s, 0,33H), 11,47 (s, 0,66H), 11,40 (s, 0,33H), 7,72 - 7,20 (m, 4H), 6,38 (s, 0.33H), 6,33 (s, 0,66H).

Farmakologické skúšky

a) Skúšky pre receptorovú väzbu

Skúšky na stanovenie afinity zlúčenín podľa predloženého vynálezu podľa príkladu 1 a 2 ku glycínovému väzbovému miestu NMDA-receptorového kanála sa vykonávajú vyššie opísaným spôsobom.

Afinita glycínového väzbového miesta NMDA-receptorového kanálu sa vypočíta ako IC₅₀ (koncentrácia s 50 % vytesnenia rádioaktívnych ligandov z ich špecifickej väzby) podľa zákona o vzájomnom pôsobení hmoty pomocou nelineárnej regresie a je uvedená v nasledujúcej tabuľke 1 po prepočte (podľa Cheng-Prussoffovej rovnice (Y. Cheng, W. H. Prussoff, 1973, Biochem. Pharmacol., Vol. 22, str. 3099 - 3108)) ako hodnota Ki.

31875/H

Tabuľka 1

Príklad	Glycínové väzbové miesto NMDA-receptorového kanálu Ki (pmol/l)
1	0,116
2	0,430

b) NMDA/glycín-indukované iónové prúdy na RNK-injikovaných Xenopus oocytoch

Skúška určenia funkčných zmien NMDA-receptorového kanálu zlúčeninou podľa predloženého vynálezu z príkladu 1 sa vykonáva spôsobom opísaným vyššie.

Výsledok skúšky zlúčeniny podľa predloženého vynálezu z príkladu 1 na iónové prúdy, vyvolané NMDA/glycínom na RNK-injikovaných oocytoch, je uvedený v nasledujúcej tabuľke 2.

Tabuľka 2

Príklad	NMDA-indukovaná relatívna prúdová amplitúda n	Iónové prúdy
	NMDA	NMDA + glycín (0,3 μΜ)	NMDA + glycín (10 μΜ)
Kontrola	1,42 %	70,23 %	100%
Príklad 1	-0,58 %	0,08 %	59,93 %

Zo skúšok vyplýva antagonistický účinok zlúčeniny podľa príkladu 1.

c) Formalínový test na myšiach

Skúšky na zistenie antinociceptívneho účinku zlúčenín podľa

31875/H predloženého vynálezu sa vykonávajú spôsobom opísaným vyššie.

Zodpovedajúce výsledky formalínového testu na myšiach sú zhrnuté v nasledujúcej tabuľke 3.

Tabuľka 3

Príklad	% zmeny proti kontrole pri 10 mg/kg
1	63,9
2	36,3
3	47,6

d) Writhingov test na myšiach

Skúška analgetického účinku sa vykonáva za indukcie fenylchinónom na myšiach spôsobom opísaným vyššie. Všetky skúšané zlúčeniny podľa predloženého vynálezu vykazujú výrazný analgetický účinok. Výsledky sú zhrnuté v nasledujúcej tabuľke 4.

Tabuľka 4

Príklad	% inhibície Writhingovej reakcie pri 10 mg/kg intravenózne
3	25
4	55
5	50
6	52
7	46
8	51
9	81

31875/H

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Substituované deriváty pyrolidín-2,3,4-triónu všeobecného vzorca I:

v ktorom:

R¹ znamená vodíkový atóm, skupinu OR⁸, COR⁵, CSR⁵, NR⁶R⁷, COOR⁵, CONR⁶R⁷ alebo CSNR⁶R⁷, alkylovú skupinu s 1 až 10 uhlíkovými atómami alebo nesubstituovanú fenylovú skupinu,

R² a R³ sú rovnaké alebo rôzne a znamenajú vodíkový atóm, atóm fluóru, chlóru alebo brómu, trifluórmetylovú skupinu, skupinu OR⁸ alebo SR⁸, alkylovú skupinu s 1 až 10 uhlíkovými atómami, arylovú skupinu, heteroarylovú skupinu alebo arylovú skupinu, viazanú cez alkylénovú skupinu s 1 až 6 uhlíkovými atómami,

R⁴ znamená vodíkový atóm, hydroxyskupinu, skupinu OR⁸, SR⁸, COR⁵, COOR⁵, COCOR⁵, CONR⁶R⁷ alebo CSNR⁶R⁷ alebo alkylovú skupinu s 1 až 10 uhlíkovými atómami,

R⁵ znamená vodíkový atóm alebo alkylovú skupinu s 1 až 10 uhlíkovými atómami,

R⁶ a R⁷ sú rovnaké alebo rôzne a znamenajú vodíkový atóm, skupinu OR⁸, COR⁵ alebo COOR⁵ alebo alkylovú skupinu s 1 až 10 uhlíkovými atómami á

R⁸ znamená alkylovú skupinu s 1 až 10 uhlíkovými atómami,

31875/H vo forme racemátov, enantiomérov, diastereomérov alebo zodpovedajúcej bázy alebo zodpovedajúcej fyziologicky prijateľnej soli.
2. Substituované deriváty pyroIidín-2,3,4-triónu podľa nároku 1 všeobecného vzorca I, v ktorom R¹ znamená alkylovú skupinu s 1 až 6 uhlíkovými atómami a zvyšky R² až R⁸ majú významy uvedené v nároku 1.
3. Substituované deriváty pyrolidín-2,3,4-triónu podľa nároku 1 alebo 2 všeobecného vzorca I, v ktorom R² a/alebo R³ znamenajú alkylovú skupinu s 1 až 6 uhlíkovými atómami a zvyšky R⁴ až R⁸, ako i prípadne R² alebo R³ majú významy uvedené v nároku 1.
4. Substituované deriváty pyrolidín-2,3,4-triónu podľa nároku 1 alebo 2 všeobecného vzorca I, v ktorom R² a/alebo R³ znamenajú cez alkylénovú skupinu s 1 až 3 uhlíkovými atómami viazaný arylový zvyšok a zvyšky R⁴ až R⁸, ako i prípadne R² alebo R³ majú významy uvedené v nároku 1.
5. Substituované deriváty pyrolidín-2,3,4-triónu podľa niektorého z nárokov 1 až 4 všeobecného vzorca I, v ktorom R⁴ znamená hydroxyskupinu a zvyšky R⁵ až R⁸ majú významy uvedené v nároku 1.
6. Substituované deriváty pyrolidín-2,3,4-triónu podľa niektorého z nárokov 1 až 4 všeobecného vzorca I, v ktorom R⁴ znamená skupinu OR⁸ a zvyšky R⁵ až R⁸ majú významy uvedené v nároku 1.
7. Substituované deriváty pyrolidín-2,3,4-triónu podľa niektorého z nárokov 1 až 4 všeobecného vzorca I, v ktorom R⁴ znamená alkylovú skupinu s 1 až 6 uhlíkovými atómami a zvyšky R⁵ až R⁸ majú významy uvedené v nároku 1.
8. Substituované deriváty pyrolidín-2,3,4-triónu podľa niektorého z nárokov 1 až 7 všeobecného vzorca I, v ktorom R⁵ znamená alkylovú skupinu s 1 až 6 uhlíkovými atómami a zvyšky R⁶ až R⁸ majú významy uvedené v nároku 1.
9. Substituované deriváty pyrolidín-2,3,4-triónu podľa niektorého z nárokov 1 až 8 všeobecného vzorca I, v ktorom zvyšok R⁶ a/alebo R⁷ znamená

31875/H alkylovú skupinu s 1 až 6 uhlíkovými atómami a zvyšok R⁸, ako prípadne i R⁶alebo R⁷ majú významy uvedené v nároku 1.
10. Substituované deriváty pyrolidín-2,3,4-triónu podľa niektorého z nárokov 1 až 9 všeobecného vzorca I, v ktorom zvyšok R⁸ znamená alkylovú skupinu s 1 až 6 uhlíkovými atómami.
11. Substituované deriváty pyrolidín-2,3,4-triónu podľa nároku 1, ktorými sú:

5-(metoxyfenylmetylén)-pyrolidín-2,3,4-trión-3-oxím,

5-(brómfenylmetylén)-pyrolidín-2,3,4-trión-3-oxím,

5-benzylidén-pyrolidín-2,3,4-trión-3-oxím,

5-(2-chlórbenzylidén)-pyrolidín-2,3,4-trión-3-oxím,

5-(4-chlórbenzylidén)-pyrolidín-2,3,4-trión-3-oxím,

5-(2,3-dichlórbenzylidén)-pyrolidín-2,3,4-trión-3-oxím,

5-(2,4-dichlórbenzylidén)-pyrolidín-2,3,4-trión-3-oxím,

5-(2,6-dichlórbenzylidén)-pyrolidín-2,3,4-trión-3-oxím a

5-(3-chlórbenzylidén)-pyrolidín-2,3,4-trión-3-oxím.
12. Spôsob výroby substituovaných derivátov pyrolidín-2,3,4-triónu všeobecného vzorca I podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že sa nechá reagovať tetramová kyselina všeobecného vzorca II:

v ktorom majú zvyšky R¹ až R³ významy uvedené pri vzorci I, v ľadom chladenom roztoku s vodným roztokom dusitanu sodného na zlúčeniny

31875/H všeobecného vzorca I, v ktorom R⁴ znamená hydroxyskupinu a zvyšky R¹ až R³majú významy uvedené vyššie pri všeobecnom vzorci I a tieto sa čistia a izolujú.
13. Spôsob výroby substituovaných derivátov pyrolidín-2,3,4-triónu všeobecného vzorca I podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že sa zlúčeniny všeobecného vzorca I, v ktorom R⁴ znamená hydroxyskupinu a zvyšky R¹ až R³majú významy uvedené pri všeobecnom vzorci I, nechajú reagovať v absolútnych rozpúšťadlách pri nízkych teplotách za prítomnosti silných báz s alkylhalogenidmi s 1 až 10 uhlíkovými atómami na zlúčeniny všeobecného vzorca I, v ktorom zvyšok R⁴ znamená skupinu OR⁸ a zvyšky R¹ až R³ a R⁸majú významy uvedené pri všeobecnom vzorci I.
14. Spôsob výroby substituovaných derivátov pyrolidín-2,3,4-triónu všeobecného vzorca I podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že sa zlúčeniny všeobecného vzorca I, v ktorom R⁴ znamená skupinu OR⁸ a zvyšky R¹ až R³ a R⁸ majú významy uvedené pri všeobecnom vzorci I, nechajú reagovať v absolútnom rozpúšťadle s chloridmi kyselín všeobecného vzorca R⁵-(C=O)-CI a/alebo bromidmi kyselín všeobecného vzorca R⁵-(C=O)-Br alebo estermi kyseliny chlórmravčej všeobecného vzorca CI-(C=O)-O-R⁵, prípadne estermi kyseliny fluórmravčej všeobecného vzorca F-(C=O)-O-R⁵ alebo s karbonátmi s otvoreným reťazcom všeobecného vzorca R⁵-O-(C=O)-O-R⁵, prípadne so zodpovedajúcim spôsobom substituovanými cyklickými karbonátmi, pričom zvyšok R⁵ má významy, uvedené pri všeobecnom vzorci I, na zlúčeniny všeobecného vzorca I, v ktorom zvyšok R⁴ znamená skupinu COR⁵ alebo COOR⁵ a zvyšky R¹ až R³ a R⁵ majú významy uvedené pri všeobecnom vzorci I a tieto sa potom čistia a izolujú pomocou bežných spôsobov.
15. Spôsob výroby substituovaných derivátov pyrolidín-2,3,4-triónu všeobecného vzorca I podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že sa zlúčeniny všeobecného vzorca I, v ktorom R⁴ znamená hydroxylovú skupinu a zvyšky R¹až R³ majú významy uvedené pri všeobecnom vzorci I, nechajú reagovať s alifatickými izokyanátmi alebo izotiokyanátmi pri nízkych teplotách v aprotických polárnych rozpúšťadlách na zlúčeniny všeobecného vzorca I,

31875/H v ktorom zvyšok R⁴ znamená skupinu CONR⁶R⁷ alebo CSNR⁶R⁷, zvyšok R⁶alebo R⁷ znamenajú vodíkový atóm a zvyšky R¹ až R³ a R⁶ alebo R⁷ majú významy uvedené pri všeobecnom vzorci I a tieto sa potom čistia a izolujú pomocou bežných spôsobov.
16. Spôsob podľa nároku 12, vyznačujúci sa tým, že sa nechá reagovať kyselina tetramová všeobecného vzorca II v ľadom chladenom roztoku ľadovej kyseliny octovej s vodným roztokom dusitariu sodného.
17. Spôsob podľa nároku 12 alebo 16, vyznačujúci sa tým, že sa zlúčeniny všeobecného vzorca I, v ktorom znamená R⁴ hydroxylovú skupinu a zvyšky R¹ až R³ majú významy uvedené pri vzorci I, čistia a izolujú kryštalizáciou, výhodne kryštalizáciou z etylalkoholu.
18. Spôsob podľa nároku 13, vyznačujúci sa tým, že sa zlúčeniny všeobecného vzorca I, v ktorom znamená R⁴ hydroxylovú skupinu a zvyšky R¹až R³ majú významy uvedené pri vzorci I, nechajú reagovať pod atmosférou ochranného plynu.
19. Spôsob podľa nároku 13 alebo 18, vyznačujúci sa tým, že sa zlúčeniny všeobecného vzorca I, v ktorom znamená R⁴ hydroxylovú skupinu a zvyšky R¹ až R³ majú významy uvedené pri vzorci I, nechajú reagovať v éteroch s otvoreným reťazcom a/alebo cyklických éteroch.
20. Spôsob podľa niektorého z nárokov 13, 18 alebo 19, vyznačujúci sa tým, že sa zlúčeniny všeobecného vzorca I, v ktorom znamená R⁴ hydroxylovú skupinu a zvyšky R¹ až R³ majú významy uvedené pri vzorci I, nechajú reagovať za prítomnosti hydroxidov alkalických kovov a/alebo hydroxidov kovov alkalických zemín a/alebo organokovových báz.
21. Spôsob podľa niektorého z nárokov 13 alebo 18 až 20, vyznačujúci sa tým, že sa zlúčeniny všeobecného vzorca I, v ktorom znamená R⁴hydroxylovú skupinu a zvyšky R¹ až R³ majú významy uvedené pri vzorci I, nechajú reagovať s alkylhalogenidmi s 1 až 6 uhlíkovými atómami.
22. Spôsob podľa nároku 14, vyznačujúci sa tým, že sa zlúčeniny všeobecného vzorca I, v ktorom znamená R⁴ skupinu OR⁸ a zvyšky R¹ až R³ a

31875/H

R⁸ majú významy uvedené pri vzorci I, nechajú reagovať pod atmosférou ochranného plynu.
23. Spôsob podľa nároku 14 alebo 22, vyznačujúci sa tým, že sa zlúčeniny všeobecného vzorca I, v ktorom znamená R⁴ skupinu OR⁸ a zvyšky R¹ až R³ a R⁸ majú významy uvedené pri vzorci I, nechajú reagovať v éteroch s otvoreným reťazcom a/alebo cyklických éteroch.
24. Spôsob podľa niektorého z nárokov 14, 22 alebo 23, vyznačujúci sa tým, že použité cyklické karbonáty majú 5 alebo 6 kruhových atómov.
25. Liečivo, obsahujúce ako farmaceutický účinnú látku aspoň jeden substituovaný derivát pyrolidín-2,3,4-triónu všeobecného vzorca I podľa nároku 1 a/alebo zodpovedajúcu bázu a/alebo zodpovedajúcu fyziologicky prijateľnú soľ a prípadne ďalšie účinné látky a/alebo pomocné látky.
26. Liečivo podľa nároku 25 na ošetrenie alebo liečenie bolestí, inflamatórnych a/alebo alergických reakcií, depresií, zneužívania drog a/alebo alkoholu, gastritídy, hnačiek, močovej inkontinencie, kardiovaskulárnych ochorení, ochorení dýchacích ciest, kašľa, duševných ochorení alebo epilepsie.
27. Liečivo podľa nároku 25 na ošetrenie alebo liečenie schizofrénie, Alzheimerovej choroby, Huntingtonovej choroby, Parkinsonovej choroby, cerebrálnych ischémií, cerebrálnych infarktov, psychóz spôsobených zvýšenou hladinou aminokyselín, prípadov mŕtvice, mozgových edémov, hypoxie, anoxie, AIDS-demencie, encefalomyelitídy, Tourette-syndrómu, perinatálnej asfyxie alebo na anxiolýzu.
28. Použitie aspoň jedného substituovaného derivátu pyrolidín-2,3,4triónu všeobecného vzorca I podľa nároku 1 a/alebo zodpovedajúcej bázy a/aiebo zodpovedajúcej fyziologicky prijateľnej soli na výrobu liečiva na ošetrenie bolestí.
29. Použitie aspoň jedného substituovaného derivátu pyrolidín-2,3,4triónu všeobecného vzorca I podľa nároku 1 a/alebo zodpovedajúcej bázy a/alebo zodpovedajúcej fyziologicky prijateľnej soli na výrobu liečiva na ošetrenie inflamatórnych reakcií.

31875/H
30. Použitie aspoň jedného substituovaného derivátu pyrolidín-2,3,4triónu všeobecného vzorca l podľa nároku 1 a/alebo zodpovedajúcej bázy a/alebo zodpovedajúcej fyziologicky prijateľnej soli na výrobu liečiva na ošetrenie alergických reakcií.
31. Použitie aspoň jedného substituovaného derivátu pyrolidín-2,3,4triónu všeobecného vzorca I podľa nároku 1 a/alebo zodpovedajúcej bázy a/alebo zodpovedajúcej fyziologicky prijateľnej soli na výrobu liečiva na ošetrenie depresií.
32. Použitie aspoň jedného substituovaného derivátu pyrolidín-2,3,4triónu všeobecného vzorca I podľa nároku 1 a/alebo zodpovedajúcej bázy a/alebo zodpovedajúcej fyziologicky prijateľnej soli na výrobu liečiva na ošetrenie zneužívania drog a/alebo alkoholu.
33. Použitie aspoň jedného substituovaného derivátu pyrolidín-2,3,4triónu všeobecného vzorca I podľa nároku 1 a/alebo zodpovedajúcej bázy a/alebo zodpovedajúcej fyziologicky prijateľnej soli na výrobu liečiva na ošetrenie gastritídy.
34. Použitie aspoň jedného substituovaného derivátu pyrolidín-2,3,4triónu všeobecného vzorca I podľa nároku 1 a/alebo zodpovedajúcej bázy a/alebo zodpovedajúcej fyziologicky prijateľnej soli na výrobu liečiva na ošetrenie hnačiek.
35. Použitie aspoň jedného substituovaného derivátu pyrolidín-2,3,4triónu všeobecného vzorca I podľa nároku 1 a/alebo zodpovedajúcej bázy a/alebo zodpovedajúcej fyziologicky prijateľnej soli na výrobu liečiva na ošetrenie močovej inkontinencie.
36. Použitie aspoň jedného substituovaného derivátu pyrolidín-2,3,4triónu všeobecného vzorca I podľa nároku 1 a/alebo zodpovedajúcej bázy a/alebo zodpovedajúcej fyziologicky prijateľnej soli na výrobu liečiva na ošetrenie kardiovaskulárnych ochorení.
37. Použitie aspoň jedného substituovaného derivátu pyrolidín-2,3,4triónu všeobecného vzorca I podľa nároku 1 a/alebo zodpovedajúcej bázy

31875/H a/alebo zodpovedajúcej fyziologicky prijateľnej soli na výrobu liečiva na ošetrenie ochorení dýchacích ciest.
38. Použitie aspoň jedného substituovaného derivátu pyrolidín-2,3,4triónu všeobecného vzorca I podľa nároku 1 a/alebo zodpovedajúcej bázy a/alebo zodpovedajúcej fyziologicky prijateľnej soli na výrobu liečiva na ošetrenie kašľa.
39. Použitie aspoň jedného substituovaného derivátu pyrolidín-2,3,4triónu všeobecného vzorca I podľa nároku 1 a/alébo zodpovedajúcej bázy a/alebo zodpovedajúcej fyziologicky prijateľnej soli na výrobu liečiva na ošetrenie duševných ochorení.
40. Použitie aspoň jedného substituovaného derivátu pyrolidín-2,3,4triónu všeobecného vzorca I podľa nároku 1 a/alebo zodpovedajúcej bázy a/alebo zodpovedajúcej fyziologicky prijateľnej soli na výrobu liečiva na ošetrenie epilepsie.
41. Použitie aspoň jedného substituovaného derivátu pyrolidín-2,3,4triónu všeobecného vzorca I podľa nároku 1 a/alebo zodpovedajúcej bázy a/alebo zodpovedajúcej fyziologicky prijateľnej soli na výrobu liečiva na ošetrenie schizofrénie.
42. Použitie aspoň jedného substituovaného derivátu pyrolidín-2,3,4triónu všeobecného vzorca I podľa nároku 1 a/alebo zodpovedajúcej bázy a/alebo zodpovedajúcej fyziologicky prijateľnej soli na výrobu liečiva na ošetrenie Alzheimerovej choroby.
43. Použitie aspoň jedného substituovaného derivátu pyrolidín-2,3,4triónu všeobecného vzorca I podľa nároku 1 a/alebo zodpovedajúcej bázy a/alebo zodpovedajúcej fyziologicky prijateľnej soli na výrobu liečiva na ošetrenie Huntingtonovej choroby.
44. Použitie aspoň jedného substituovaného derivátu pyrolidín-2,3,4triónu všeobecného vzorca I podľa nároku 1 a/alebo zodpovedajúcej bázy a/alebo zodpovedajúcej fyziologicky prijateľnej soli na výrobu liečiva na ošetrenie Parkinsonovej choroby.

31875/H
45. Použitie aspoň jedného substituovaného derivátu pyrolidín-2,3,4triónu všeobecného vzorca I podľa nároku 1 a/alebo zodpovedajúcej bázy a/alebo zodpovedajúcej fyziologicky prijateľnej soli na výrobu liečiva na ošetrenie cerebrálnych ischémií.
46. Použitie aspoň jedného substituovaného derivátu pyrolidín-2,3,4triónu všeobecného vzorca I podľa nároku 1 a/alebo zodpovedajúcej bázy a/alebo zodpovedajúcej fyziologicky prijateľnej soli na výrobu liečiva na ošetrenie cerebrálnych infarktov.
47. Použitie aspoň jedného substituovaného derivátu pyrolidín-2,3,4triónu všeobecného vzorca I podlá nároku 1 a/alebo zodpovedajúcej bázy a/alebo zodpovedajúcej fyziologicky prijateľnej soli na výrobu liečiva na ošetrenie psychóz spôsobených zvýšenou hladinou aminokyselín.
48. Použitie aspoň jedného substituovaného derivátu pyrolidín-2,3,4triónu všeobecného vzorca I podľa nároku 1 a/alebo zodpovedajúcej bázy a/alebo zodpovedajúcej fyziologicky prijateľnej soli na výrobu liečiva na profylaxiu pri prípadoch mŕtvice.
49. Použitie aspoň jedného substituovaného derivátu pyrolidín-2,3,4triónu všeobecného vzorca I podľa nároku 1 a/alebo zodpovedajúcej bázy a/alebo zodpovedajúcej fyziologicky prijateľnej soli na výrobu liečiva na ošetrenie mozgových edémov.
50. Použitie aspoň jedného substituovaného derivátu pyrolidín-2,3,4triónu všeobecného vzorca I podľa nároku 1 a/alebo zodpovedajúcej bázy a/alebo zodpovedajúcej fyziologicky prijateľnej soli na výrobu liečiva na ošetrenie hypoxie.
51. Použitie aspoň jedného substituovaného derivátu pyrolidín-2,3,4triónu všeobecného vzorca I podľa nároku 1 a/alebo zodpovedajúcej bázy a/alebo zodpovedajúcej fyziologicky prijateľnej soli na výrobu liečiva na ošetrenie anoxie.
52. Použitie aspoň jedného substituovaného derivátu pyrolidín-2,3,4triónu všeobecného vzorca I podľa nároku 1 a/alebo zodpovedajúcej bázy

31875/H a/alebo zodpovedajúcej fyziologicky prijateľnej soli na výrobu liečiva na ošetrenie AIDS-demencie.
53. Použitie aspoň jedného substituovaného derivátu pyrolidín-2,3,4triónu všeobecného vzorca I podľa nároku 1 a/alebo zodpovedajúcej bázy a/alebo zodpovedajúcej fyziologicky prijateľnej soli na výrobu liečiva na ošetrenie encefalomyelitídy.
54. Použitie aspoň jedného substituovaného derivátu pyrolidín-2,3,4triónu všeobecného vzorca I podľa nároku 1 a/alebo zodpovedajúcej bázy a/alebo zodpovedajúcej fyziologicky prijateľnej soli na výrobu liečiva na ošetrenie Tourette-syndrómu.
55. Použitie aspoň jedného substituovaného derivátu pyrolidín-2,3,4triónu všeobecného vzorca I podľa nároku 1 a/alebo zodpovedajúcej bázy a/alebo zodpovedajúcej fyziologicky prijateľnej soli na výrobu liečiva na ošetrenie perinatálnej asfyxie.
56. Použitie aspoň jedného substituovaného derivátu pyrolidín-2,3,4triónu všeobecného vzorca I podľa nároku 1 a/alebo zodpovedajúcej bázy a/alebo zodpovedajúcej fyziologicky prijateľnej soli na výrobu liečiva na anxiolytické ošetrenie.