SK15912003A3 - Farmaceutická formulácia obsahujúca iota-karagenan a spôsob jej prípravy - Google Patents

Description

Oblasť techniky

Predložený vynález sa týka novej farmaceutickej formulácie na orálnu aplikáciu, ktorá obsahuje zásaditú farmaceutický aktívnu zložku, ktorej rozpustnosť závisí od pH, čo zabraňuje uvoľňovaniu zásaditej farmaceutický aktívnej zložky z formulácie pri kyslom pH (najmä pod pH 3) a výhodne umožňuje riadené uvoľňovanie farmaceutický aktívnej zložky, ktoré je v podstave nezávislé od širokého rozsahu pH v gastrointestinálnom trakte; ďalej sa týka spôsobu prípravy uvedenej formulácie a použitia uvedenej formulácie v medicíne.

Doterajší stav techniky

Účinné farmaceutické formulácie pre riadené uvoľňovanie sú žiadané farmaceutické produkty, lebo umožňujú: optimalizáciu podávania lieku, znížiť frekvenciu podávania lieku a minimalizovať nežiaduce vedľajšie účinky. Návrhy takých systémov s riadeným uvoľňovaním však nie sú jednoduchou záležitosťou, zvlášť ak lieková formulácia je zamýšľaná pre orálne podanie a musí prejsť gastrointestinálnym traktom, ktorý sa medzi iným v priebehu svojho priebehu vyznačuje veľkými rozdielmi v pH.

Veľa liekov, ktoré majú zásadité vlastnosti, sa ionizuje pri nízkom pH a v tejto oblasti pH sa výrazne viac rozpúšťa v porovnaní s neutrálnejším prostredím. Tento prejav pH-závisľej rozpustnosti v gastrointestinálnom trakte môže mať za následok rôzne disolučné profily lieku, spolu so zodpovedajúcimi problémami in vivo biologickej dostupnosti.

Opísaných je niekoľko pokusov o prekonanie problémov, spojených so závislosťou rozpustnosti zásaditých liečiv od pH. Patrí k nim použitie enterického polyméru, ktorý je nerozpustný pri nízkom pH, čím sa spomalí uvoľňovanie liečiva v prostredí s níz2 kym pH (pozri napríklad spis US 4968508 a A. Streubel a kol., J. Controlled Release, 67, 101-110 (2000), alebo inkorporácia organickej kyseliny s nízkou molekulovou hmotnosťou, aby sa vytvorilo kyslé mikroprostredie v matrici formulácie, čím sa udržiava rozpustnosť liečiva na konštantnej úrovni (pozri napríklad K. E. Gabr, Eur. J. Pharm. Biopharm., 38(6), 199-202 (1992) a V.K. Thoma a Th. Zimmer, Pharm. Ind. 51(1), 98-101 (1989). Inkorporácia aniónového polyméru (napríklad alginátu sodného), vykazujúceho pH-závislú rozpustnosť, do liekovej formulácie kzorá riež obsahuje neutrálny polymér, poskytla formuláciu, tvoriacu nerozpustný gél pri nízkom pH, čím vznikne silná bariéra proti difúzii, a to sa považuje za hlavný mechanizmus, spomaľujúci uvoľňovanie liečiva pri nízkom pH (US 4792452; a P. Timmins a kol., Pharmaceutical Development and Technology, 2(1), 25-31 (1997)). Iné metódy používajú polyméry s nábojom, aby sa uvoľňovanie liečiva ovplyvňovalo buď iónovou interakciou s liečivom (pozri C. Caramella a kol., Pharm. Res. 14(11), 531 (1997), H.Y. Park a kol., Drug Delivery, 5, 13-18 (1998), N. Caram-Lelham, P’n.D. Thesis, Uppsala University (1996)), alebo aby sa ovplyvňovali gélotvorné a napučiavacie vlastnosti týchto polymérov (pozri K.M. Picker, Drug Dev. and Ind. Pharmacy, 25(3), 339-346 (1999)). Použité formulácie sa spravidla zakladajú na jednom type polyméru.

Baveja a kol. (Int. J. Pharmaceutics, 39, 39-45 (153/() zistili, že keď neiónový polymér (HPMC) sa zmieša mionovým polymérom (NaCMC), uvoľňovanie sa spomalí. Range Rac a kol. (Drug Dev. Ind. Pharmacy, 14, 2299 (1988)) opisujú zmesi metylcelulózy a NaCMC, ktoré poskytujú rôzne profily uvoľňovania. Zmesi λ-karagenanu a aktívnej zložky sú opísané v spise WO 99/21586.

Opísané sú kombinácie stratégií, ktoré majú za ciel disolučný profil, ktorý je nezávislý od pH (pozri spisy WO 96/26717, WO 99/29305 a WO 99/39698). Všetky tieto tri spisy opisujú trojzložkovú matricovú formuláciu, obsahujúcu tri polyméry s typicky rozdielnou rozpustnosťou vo vode a rozdielnymi napučiavacimi vlastnosťami, ktorých zloženie je možné meniť a nastavením týchto vlastností je možné riadiť rýchlosť uvoľňovania. Dve z týchto zložiek sú gélotvorný polymér s rozpustnosťou významne závislou od pH, ako je alginát sodný, a gélotvorný polymér s rozpustnosťou, ktorá je málo alebo zanedbateine závislá od pH, ako je hydroxypropyimetylcelulóza (HPMC) alebo polyetylénoxid. Tretia zložka je buď enterický poťahový polymér, ako je kopolymér kyseliny metakrylovej (WO 96/26717), EUDRAGIT® L alebo S, ktoré sú špecifické typy polymérov kyseliny metakrylovej (WO 99/29305), alebo vo vode nerozpustný polymér, ako je etylcelulóza (WO 99/39698). Tieto stratégie však všeobecne nemajú špecificky cielené zásadité liečivá a na to, aby aspoň z časti spomaľovali uvoľňovanie liečiva pri nízkych hodnotách pH, závisia od oolymérov typu enterického poťahu, alebo od vo vode nerozpustných polymérov, ako je polymér metakrylovej kyseliny, alebo od pH-závislom gélotvornom polymére, ako je alginát sodný.

Podstata vynálezu

Predložený vynález poskytuje farmaceutickú formuláciu pre orálne podanie, ktorá obsahuje iota-karagenan, jeden alebo niekoľko neutrálnych gélotvorných polymérov, a zásaditú farmaceutický aktívnu zložku; táto formulácia inhibuje uvoľňovanie zásaditej farmaceutický aktívnej zložky z formulácie pri kyslom pH (výhodne pod pH 3; zvlášť okolo pH 1).

V podstate pH-nezávislé uvoľňovanie znamená, že rýchlosť uvoľňovania je významne znížená pri pH 1 a lahko zvýšená alebo nezmenená pri pH 6,8, takže množstvo zásaditej farmaceuticky aktívnej zložky, uvoľnené v akomkoľvek okamihu, sa stáva menej závislé od pH.

Predložený vynález ďalej poskytuje farmaceutickú formuláciu pre orálne podanie, ktorá obsahuje iota-karagenan, jeden alebo niekoľko gélotvorných polymérov, a zásaditú farmaceutický aktív4 nu zložku.

Iota-karagenan je výhodne prítomný vo formulácii podľa vynálezu v množstve presahujúcom 15% hmotnostných, a je výhodne prírodného pôvodu. Jeden typ icta-karagenanu farmaceutickej akosti (dostupný od firmy FMC Biopolymer) má viskozitu nie menšiu ako 5 centipoise (cps), výhodne v rozsahu 5 až 10 cps (pre 1,5% roztok, ktorý sa zahreje na 82°C, porom sa viskozita meria pri 75°C na Brookfieldovom LV viskozimetri za použitia vretena #1 pri rýchlosti 30 ot/min). Iota-karagenan technickej akosti (od firmy Fluka Biochemica) má výhodne viskozitu nie menšiu ako 14 mPa.s, pre 0,3% vodný roztok, ktorý sa zahreje na 20°C, potom sa viskozita meria metódou padajúcej guľôčky na viskozimetri typu Haake, za použitia Laudovho termostatu C3 (Hakke Mess-Systém III) za použitia pozlátených nerezových guľôčok s hustotou 7,8 g/cm³.

Neutrálny gélotvorný polymér je jeden, alebo zmes niekoľkých neutrálnych erodovatelných polymérov, ktoré majú gélotvorné vlastnosti a vykazujú v podstate pH-nezávislú rozpustnosť. Tento neutrálny gélotvorný polymér je výhodne prítomný vo formulácii v množstve väčšom ako 10%, ale výhodnejšie väčšom ako 20% hmotnostných. (Termíny erodovaťelný a erózia označujú rozpúšťanie alebo rozpad (dezintegráciu) buď polyméru samotného alebo v kombinácii. Rozpúšťanie je možné urýchliť miešaním a rozpad je možné urýchliť mechanickou interakciou s tuhou látkou).

Vhodné neutrálne gélotvorné polyméry zahŕňajú polyetylénoxid (PEO), deriváty a členy skupiny PEO (napríklad polyetylénglykol (PEG), ktorý ak je to možné existuje v tuhom stave a má vhodnú molekulovú hmotnosť alebo viskozitu). Tak napríklad, neutrálny gélotvorný polymér je polyetylénoxid alebo polyetylénglykol.

Ak sa PEO používa ako samotný gélotvorný polymér, má výhodne molekulovú hmotnosť (MW) > 4 milióny (4 M) (napríklad MW sa rovná 4 až 8 miliónom), čo zodpovedá vodnému roztoku s viskozitou v rozsahu 1650 až 5500 mPa.s (alebo 1650 až 5500 cps, merané v

1% vodnom roztoku pri 25°C, za použitia Brokfieldovho viskozimetra RVF s vretenom č. 2 pri 2 ot/min) . Iné príklady vhodných PEO zahŕňajú PEO s molekulovou hmotnosťou asi 5 miliónov (5 M), čo zodpovedá vodnému roztoku s viskozitou v rozsahu 5500 až 7500 mPa.s, alebo PEO s molekulovou hmotnosťou asi 8 miliónov (8 M), čo zodpovedá vodnému roztoku s viskozitou v rozsahu 10 000 až 15 000 mPa.s. Tento rozsah pokrýva hodnotu pre typickú viskozitu roztoku (v cps), meranú pri 25°C, udávanú pre tento polymér v USP 24/NF, 2000 edition, str. 2285-2286. PEC teda môže mať molekulovú hmotnosť 4 až 8 miliónov.

Ak PEG je použitý ako jediný neutrálny gélotvorný polymér, má výhodne vysokú molekulovú hmotnosť, napríklad asi 20 000, čo zodpovedá rozsahu viskozity 2700 až 3500 mPa.s (alebo 2700 až 3500 cps), merané za použitia 50% vodného roztoku (hmotn./hmotn.) pri 20°C na kapilárnom viskozimetri (podía Ubbelohdeho alebo na ekvivalentnom viskozimetri). (Pozri European Pharmacopoeia 3^rd Ed., 2000, Supplement str. 908-909).

Iné vhodné gélotvorné polyméry zahŕňajú deriváty celulózy, ako je hydroxypropylmetylcelulóza (HPMC) alebo hydroxyetylcelulóza (HEC) (ale preferovaná je HPMC) s vhodne vysokými viskozitami (napríklad HPMC 10 000 cps, HPMC 15 000 cps, HEC typu HH alebo HEC typu H). Ak sú použité ako jediný neutrálny polymér, hydroxypropylmetylcelulózové polyméry ako HPMC 10 000 cps a HPMC 15 000 cps, majú zdanlivé viskozity ⁷500 až 14 000 mPa.s (alebo 7500 až 14 000 cps) , respektíve 11 .250 až 21 000 mPa.s (alebo 11 250 až 21 000 cps), merané pri 20°C v 2% (hmotn./hmotn.) vodnom roztoku, vztiahnuté na sušenú látku, za použitia kapilárneho viskozimetra (podlá Ubbelohdeho alebo na ekvivalentnom viskozimetri). Jeden typ hydroxyetylceluiózového polyméru, napríklad Natrasol 250 Pharma, typ HH od firmy Hercules Incorporated (Aqualon) vykazuje typicky viskozitu asi 20 000 mPa.s, nameranú na Brookfieldovom viskozimetri (Synchro-Lectric Model LVF, 1% roztok, vreteno č. 4, rýchlosť 30 ot/min, faktor 200, 25°C) (pozri Natrosol Physical and Chemical Proper6 ties booklet, 33.007-E6 (1993), str. 21).

Keď sa použije zmes neutrálnych gélotvorných polymérov, môže táto obsahovať napríklad zmes dvoch alebo niekoľkých PEO, dvoch alebo niekoľkých HPMC, zmes PEO a HPMC alebo zmes PEO a PEG. Tak napríklad PEO s molekulovou hmotnosťou 4, 5 alebo 8 miliónov sa môže zmiešať s PEO s molekulovou hmotnosťou 1 milión, s PEO s molekulovou hmotnosťou 400 000, s PEO s molekulovou hmotnosťou 100 000 alebo s PEG s molekulovou hmotnosťou 6000.

Alternatívne sa neutrálny gélotvorný polymér (napríklad PEO) môže použiť v kombinácii s ne-gélotvorným neutrálnym polymérom (ako je nizkomolekulárny PEG, napríklad PEG s molekulovou hmotnosťou nižšou ako 10 000). Príklady nizkomolekulárnych PEG v takej kombinácii zahŕňajú PEG s molekulovou hmotnosťou 8000 (zodpovedajúcou viskozitnému rozsahu 260 až 510 mPa.s), alebo PEG s molekulovou hmotnosťou 6000 (zodpovedajúcou viskozitnému rozsahu 200 až 270 mPa.s).

Zmes dvoch alebo niekoľkých HPMC môže zahŕňať nizkcviskózne (ne-gélotvorné) aj vysokoviskózne (gélotvorné) látky. Napríklad, HPMC 50 cps, HPMC 15 cps a HPMC 6 cps, ktorých zdanlivé viskozity sú 40 až 60 mPa.s, 11,3 až 21,0 mPa.s, respektíve 4,8 až 7,2 mPa.s (podľa skôr definovaných metód), sa môžu použiť ako zmesi s HPMC 10 000 cps'' alebo s HPMC 15 000 cps.

Zmes dvoch alebo niekoľkých polymérov rovnakého druhu, ale rôznej molekulovej hmotnosti, sa vyznačuje lepším riadením erózie, keď formulácia je vo forme tablety. Čím vyššia je molekulová hmotnosť použitého PEO, samotného alebo v zmesi, rým menej tohto polyméru je potrebné na prípravu formulácie podľa vynálezu .

Presná formulácia podľa vynálezu závisí od molekulovej hmotnosti a distribúcie molekulovej hmotnosti u zvoleného gélotvorného polyméru, práve tak ako od kvality každého z použitých polymérov .

V jednom z aspektov vynálezu neutrálny gélotvorný polymér je PEO s molekulovou hmotnosťou asi 4 milióny alebo viac, PEG s molekulovou hmotnosťou asi 20 000 alebo viac, alebo derivát celulózy so zdanlivou viskozitou asi 7500 cps alebo vyššou (merané ako je opísané skôr).

Pomer neutrálneho gélotvorného polyméru (napríklad PEO, PEG alebo HPMC, zvlášť PEO alebo HPMC, alebo ich vzájomné zmesi, alebo 2 alebo niekoľko PEO alebo HPMC) k iota-karagenar.u sa výhodne pohybuje v rozsahu 20:80 až 80:20 (zvlášť asi 40:60 až 60:40, napríklad asi 50:50).

Zásadité farmaceutický aktívne zložky obsahujú jednu alebo niekolko zásaditých skupín, ktoré majú pKa výhodne od do 12 (napríklad od 1 do 10, zvlášť od 1 do 7) a prípadne obsahujú tiež jednu alebo niekoľko zásaditých skupín ktoré majú pKa vyššie ako 10. Zásaditá farmaceutický aktívna zložka môže oak mať jednu alebo niekolko hodnôt pKa, ale aspoň jedna z nich má hodnotu výhodne od 1 do 12 (napríklad od 1 do 10, zvlášť od 1 do 7). Príklady zásaditých skupín v týchto zásaditých farmaceutický aktívnych zložkách, ktoré majú pKa od 1 do 12 (napríklad od 1 do 10) zahŕňajú hydroxyamidíny, sekundárne alebo terciárne amíny, alebo primárne a sekundárne amidy.

Vhodné zásadité farmaceutický aktívne zložky vykazujú výhodne nízku až strednú rozpustnosť vo vode (napríklad rozpustnosť vo vode až 50 mg/ml, zvlášť 0,001 až 20 mg/ml, pri 25 ^:Z a pri pH 7,0) a sú kladne nabité jedným alebo niekolkými kladnými nábojmi (v závislosti od počtu a pKa zásaditých skupín vc farmaceutický aktívnej zložke) pri nízkom pH (napríklad pri pH 1 až 6, zvlášť pri pH 1 až 2).

Vhodná zásaditá farmaceutický aktívna zložka je napríklad zlúčenina, vykazujúca kardiovaskulárnu aktivitu (ako je peptidický, alebo peptidu podobný, inhibítor trombínu). Pepoidické inhibítory trombínu majú molekulovú hmotnosť pod 1000, obsahujú 1, 2, 3 alebo 4 peptidické väzby a vykazujú pH-závislú rozpusťnosť. Zahŕňajú peptidické inhibítory trombínu (a ich prcfarmaká) , ktoré sú genericky, a konkrétnejšie, opísané v prehľadnom článku Claessona (Blood Coagul. Fibrín. 5, 411 (1994), práve tak ako tie, ktoré sú opísané v patentovom spise US No. 4 246 078 ; v International Patent Applications WO 97/23499, WO 9~/02284, WO 97/46577, WO 98/01422, WO 93/05069, WO 93/11152, WO 92/23609, WO 95/35309, WO 96/25426, WO 94/29336, WO 93/18060 a WC 92/01168 a European Patent Publication No. 623 596, 648 780, -68 231, 559 046, 641 779, 185 390, 526 877, 542 525, 195 212, 362 002, 364 344, 530 167, 293 881, 686 642, 669 317 a 601 459. Peptidické inhibítory trombínu (alebo ich profarmaká) zvlášť zahŕňajú inogatrán, melagatrán {HOOC-CH₂-RCgl-Aze-Pab-H; glycín, N-[2—[[[[4-aminoiminometyl)fenyljmetyl]amino)karbonyl]-1-azetzdinyl]-l-cyklohexyl-2-oxoetyl]-, [2R-[2S]]-)} a H376/95 {ximelagatrán; EtO2C-CH₂-RCgl-Aze-Pab-OH; pozri príklad 17 vo WO 9~/23499; glycín, N- [ l-cyklohexyl-2- [2- [ [ [ [4- [ (hydroxyimino) amincr.eryl ] fenyljmetyl]amino]karbonyl]-1-azetidinyl]-2-oxoetyl]etylester, [S- (L,SÚ ]-} .

V inom aspekte vynálezu peptidické inhibítory trombínu (alebo ich profarmaká) zahŕňajú inogatrán, melagatrán, 6376/95, Ph(3-C1) ( 5-OCH₂CH₂F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe) a Ph(2-Cl)-(5-OCHF₂) -(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe) .

V ďalšom aspekte predložený vynález poskytuje formuláciu ako je opísaná skôr, v ktorej zásaditá farmaceutický aktívna zložka je:

Ph(3-C1) (5-OCHF₂)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(OMe) (zlúčenina A); Ph(3-Cl) (5-OCHF?)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2,6-diF) (OMe) 'zlúčenina D) ;

Ph(3-C1) (5-OCH₂CH₂F)- (R)CH (OH)C(O)-(S)Aze-Pab(OMe) (zlúčenina E) ; Ph(3-C1) (5-OCHF₂)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(OH) (zlúčenina ľ) ; Ph(3-Cl) (5-OCHF₂)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2,6-diF) (OH) zlúčenina G) ;

Ph(3-Cl) ( 5-OCH₂CH₂F)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(OH) (zlúčenina H) .

Zlúčeninu G je možné pripraviť metódami, ktoré sú podobné metódam, opísaným ďalej pre prípravu zlúčenín F a H.

V inom aspekte sa vynález týka farmaceutickej formulácie, v ktorej zásaditá farmaceutický aktívna zložka je:

1. 4—({3—[7—(3,3-dimetyl-2-oxobutyl)-9-oxa-3,7-diazabicyklo[3,3.1]ηοη-3-yl]propyl}amino)benzonitril (táto zlúčenina je v ďalšom označovaná ako zlúčenina B);

2. terc-butyl-2-{7-[3-(4-kyánanilino)propyl]-9-oxa-3,~-diazabicyklo[3.3.1]non-3-yl}etylkarbamát;

3. terc-butyl-2-{7-[4-(4-kyánfenyl)butyl]-9-oxa-3,7-diazabicyklo [3.3.1]non-3-yl}etylkarbamát; alebo

4. terc-butyl-2-{7 - [(2S)-3-(4-kyánfenoxy)-2-hydroxypropyl]-9-oxa-3,7-diazabicyklo[3.3.1]ηοη-3-yl}etylkarbamát (táto zlúčenina je v ďalšom označovaná ako zlúčenina C);

pričom tieto zlúčeniny sú opísané v spise WO 01/28992.

V ďalšom aspekte vynálezu zásaditá farmaceutický aktívna zložka je metoprolol alebo jeho sol (ako je jeho sukcinát alebo tartrát).

Formulácia podlá predloženého vynálezu môže obsahovať: prídavky na spracovanie, stabilizátory, zmäkčovadlá, farbivá, mazadlá (ako je stearylfumarát sodný), spojivá, plnivá alebo povrchovo aktívne látky, alebo iné excipienty, bežne používané pri príprave farmaceutických prostriedkov.

V jednom z konkrétnych aspektov vynálezu, formulácia podlá predloženého vynálezu obsahuje mazadlo (ako je stearylfumarát sodný).

V inom aspekte predloženého vynálezu, molárny pomer iota-karagenanu k zásaditej farmaceutický aktívnej zložke sa pohybuje v rozsahu 3:1 až 1:3.

V ďalšom aspekte, farmaceutická formulácia podlá predložené10 ho vynálezu obsahuje 15 až 80% iota-karagenanu.

V inom aspekte, farmaceutická formulácia podľa predloženého vynálezu obsahuje 15 až 80% jedného alebo niekoľkých gélotvorných polymérov.

V ďalšom aspekte, farmaceutická formulácia podľa predloženého vynálezu obsahuje 1 až 50% zásaditej farmaceutický aktívnej zložky.

V ešte ďalšom aspekte, farmaceutická formulácia pohla predloženého vynálezu obsahuje 0 až 10% (zvlášť 1 až 10%) prídavku na spracovanie, stabilizátora, zmäkčovadla, farbiva, mazadla, spojiva alebo plniva, alebo iného excipientu, bežne používaného pri príprave farmaceutických prostriedkov.

Máme za to, že inhibícia uvoľňovania zásaditej farmaceutický aktívnej zložky z formulácie pri kyslom pH (zvlášť v podstate pH-nezávislého riadeného uvoľňovania) je založená na nasledujúcom mechanizme. Pri nízkom pH by zásadité farmaceutický aktívne ingredientné liečivo malo mať relatívne vysokú rozpustnosť, pretože existuje v silne ionizovanom stave, a preto by sme očakávali, že sa bude rýchlo uvoľňovať z akejkoľvek neutrálnej matrice. Domnievame sa, že pri kyslom pH a v prítomnosti iota-karagenanu sa negatívne nabitý íota-karagenan a kladne nabité liečivo priťahujú, čo spomaľuje uvoľňovanie liečiva a tým prispieva ku konštantnéjšiemu disolučnému profilu. Pri vyššom pH, kedy farmaceutické liečivo nie je tak silne ionizované, alebo nie je ionizované vôbec, a preto by sa malo pomaly uvoľňovať z akejkoľvek neutrálnej matrice, máme za to, že skôr uvedená iónová interakcia je tiež menej významná a disolučný profil je riadený prevažne kombináciou napučiavacích, gélotvorných a eróznych profilov neutrálneho gélotvorného polyméru(polymérov) a aniónového polyméru, iota-karagenanu, ktoré sú použité vo formulácii.

Výsledné napučiavacie, gélotvorné a erózne vlastnosoi formulácie podľa vynálezu súvisia s vlastnosťami ako je molekulová hmotnosť a distribúcia molekulárnej hmotnosti gélotvorného polyméru (polymérov) aj aniónového polyméru, a tiež súvisia s pH-závislou rýchlosťou hydrolýzy aniónového polyméru. Je teda možné získať rôzne rýchlosti uvoľňovania zásaditej farmaceutický aktívnej zložky úpravou charakteru (napríklad molekulovej hmotnosti alebo distribúcie molekulovej hmotnosti) gélotvorného polyméru, množstva iota-karagenanu vo formulácii a/alebo pomeru gélotvorného polyméru k iota-karagenanu.

Formulácia podľa predloženého vynálezu môže byť vo forme pevnej dávkovej formy (ako sú tablety, tobolky, pelety alebo prášok, dispergovaný vo vhodnom zásobníku, alebo vo forme kombinovanej formulácie (ako sú poťahované pelety, podávané ako tablety, tobolky alebo sáčiky)).

V jednom z aspektov vynález poskytuje tablety, obsahujúce 20 až 500 mg (zvlášť 40 až 60 mg) zásaditej farmaceutický aktívnej zložky (ako je H376/95; alebo zlúčenina A, B alebo C).

Keď je farmaceutická formulácia podlá predloženého vynálezu vo forme tabliet, sú tieto tablety výhodne pripravené oak, aby sa všetka zásaditá farmaceutický aktívna zložka, v ionizovanej alebo neionizovanej forme podľa pH v každej časti gastrointestinálneho traktu, uvoľnila v priebehu asi 20 hodín, napríklad 18 až 22 hodín (alternatívne 20 až 26 hodín).

Ešte ďalší aspekt sa týka prípravy formulácie podlá predloženého vynálezu, spočívajúcej v zmiešaní iota-karagenanu, jedného alebo niekoľkých neutrálnych gélotvorných polymérov a zásaditej farmaceutický aktívnej zložky, a prípadne v komprimácii uvedenej zmesi (výhodne za prítomnosti mazadla (ako je stearylfumarát sodný, predávaný pod názvom PRUV™) ) , s cieľom pripraviť tablety.

Tabletová formulácia sa môže pripraviť napríklad priamou komprimáciou alebo granuláciou za vlhka.

Pri priamej komprimácii sa zásaditá farmaceutický aktívna zložka starostlivo zmieša s gélotvorným polymérom a iota-karagenanom a podľa potreby s prídavnými excipientami. Preosiate mazadlo (ako je stearylfumarát sodný) sa pridá k tejto zmesi a znova sa s ňou premieša. Výsledná zmes sa potom komprimuje do tabliet.

Pri granulácii za vlhka sa zásaditá farmaceutický aktívna zložka starostlivo zmieša s gélotvorným polymérov a iota-karagenanom. Výsledná zmes sa potom môže navlhčiť:

Roztokom vhodného spojiva (ako je polyvinylpyrolidón (PVP), rozpustený vo vhodnom rozpúšťadle (ako je etanol alebc voda); alebo vhodným rozpúšťadlom (ako je etanol alebo voda); a vzniknutá zmes sa granuluje za použitia štandardných alebo modifikovaných postupov (ako je sprejová granulácia). Po vysušení vzniknutého granulátu (napríklad v sušiarni pri vhodnej teplote (ako napríklad asi 50°C) po vhodný čas (ako je 20 až 24 hodín) sa granulát rozomelie (napríklad mletím za sucha alebo za vlhka), zmieša sa s mazadlom (ako je stearylfumarát sodný, stearát horečnatý alebo mastenec) a vzniknutá kompozícia sa lisuje do tabliet. Vysušený granulát sa môže použiť na plnenie toboliek (ako sú želatínové tobolky).

Ďalší aspekt predloženého vynálezu sa týka spôsobu prípravy formulácie ako je opísaná skôr.

Zlúčeniny, aktívne proti trombínu, a ich profarmaká sa môžu použiť na terapiu a/alebo profylaxiu trombózy a nadmernej zrážanlivosti v krvi a/alebo tkanivách živočíchov, vrátane človeka. Je známe, že nadmerná zrážanlivosť môže viesť k trombc-embolickým ochoreniam. Stavy, súvisiace s nadmernou zrážanlivosťou a trombo-embolickými ochoreniami, ktoré je možné uviesť, zahŕňajú zdedenú alebo získanú rezistenciu proti aktivovanému proteínu C, ako je mutácia faktora V (factor V Leiden) a zdedenej alebo získanej deficiencie antitrombínu III, proteínu C, proteínu S alebo heparínového kofaktora II. Iné stavy, o ktorých je zná13 me, že súvisia s nadmernou zrážanlivosťou a trombo-embolickým ochorením, zahŕňajú cirkulujúce antifosfolipidové protilátky (Lupus anticoagulant), homocysteinémiu, heparínom indukovanú trombocytopéniu a defekty fibrinolýzy, práve tak ako koagulačné syndrómy (napríklad roztrúsenú intravaskulárnu koaguláciu (DIC) a všeobecne vaskulárne poranenia (napríklad v dôsledku chirurgického zákroku).

V ďalšom aspekte sa predložený vynález týka formulácie, ako je opísaná skôr, na použitie v terapii (liečbe aj profylaxii), napríklad ako liečivo (ako je liečivo pre kardiovaskulárne poruchy, napríklad tromboembolizmus).

Formulácia podľa predloženého vynálezu je užitočná na prípravu liečebného prostriedku, použiteľného v terapii.

Iný aspekt predloženého vynálezu sa týka spôsobu terapie kardiovaskulárnych porúch (napríklad tromboembolizmu) u teplokrvných živočíchov, trpiacich alebo ohrozených uvedenými poruchami, ktorý spočíva v podaní terapeuticky účinnej dávky zlúčeniny podľa vynálezu jedincovi, ktorý takú terapiu potrebuje.

Niektoré peptidické inhibítory trombínu, alebo ich profarmaká, sa môžu pripraviť postupmi, opísanými ďalej.

Všeobecné postupy

TLC sa uskutočňuje na silikagéli. Chirálna HPLC analýza sa uskutočňuje na 46 mm x 250 mm kolóne Chiracel OD s 5 cm predkolónkou. Teplota kolóny sa udržiava na 35°C, prietok 1,0 ml/min. Používa sa UV detektor Gilson 115 UV pri vlnovej dĺžke 228 nm. Ako mobilné fázy sa používajú hexány, etanol a kyselina trifluóroctová, ktorých príslušné pomery sú udané u jednotlivých zlúčenín. Typicky, produkt sa rozpustí v minimálnom množstve etanolu a tento roztok sa zriedi mobilnou fázou.

V ďalej uvedených preparáciách sa LC-MS/MS uskutočňuje na prístroji HP-1100 s injektorom CTC-PAL a s použitím kolóny 5 Tm, 4 x 100 mm ThermoQuest, Hypersil BDS-C18. Použije sa MS detektor API-3000 (Sciex) , prietok 1,2 ml/min a mobilná fáza (gradient) pozostáva z 10 až 90% acetonitrilu s 90 až 10% 4 mM vodného octanu amónneho, pričom obidva obsahujú 0,2% kyseliny mravčej.

Hmotnostné spektrá s nízkym rozlíšením (LRMS) sa merajú na spektrometri Micromass ZQ v ESI posneg switching ion módu (hmotnostný rozsah m/z 100 až 800); a hmotnostné spektrá s vysokým rozlíšením (HRMS) sa merajú na spektrometri Micromass LTC v ES negatívnom ionizačnom móde (rozsah m/z 100 až 1000); akc vnútorný hmotnostný štandard sa použije Leucine Enkefalin (C28H3-N5O7) .

^XH NMR spektrá sa merajú za použitia tetrametylsiiánu ako vnútorného štandardu.

Príprava Ph(3-Cl) (5-OCHF₂)-(R)CH(OH)C(O)-(S) Aze-Pab(OMe) (zlúčenina A)

(i) 3-Chlór-5-metoxybenzaldehyd

3,5-Dichlóranizol (74,0 g; 419 mmol) v THF (200 ml) sa prikvapká ku kovovému horčíku (14,2 g; 585 mmol, premytý 0,5N HCI) v THF (100 ml) pri 25°C. Po pridaní sa prikvapká 1,2-dibrómetán (3,9 g; 20,8 mmol). Výsledná tmavohnedá zmes sa zahrieva do refluxu 3 hodiny. Potom sa zmes ochladí na 0°C a pridá sa N,N-dímetylformamid (60 ml) v jednej dávke. Zmes sa rozdelí medzi dietyléter (3 x 400 ml) a 6N HCI (500 ml). Spojené organické extrakty sa premyjú solankou (300 ml), vysušia sa nad Na₂SCu, sfiltrujú sa a zahustia vo vákuu. Zvyšný olej sa podrobí flash chro15 matografii (2 x) na silikagéli v sústave hexán-etylacetát (4:1), čím sa získa 38,9 g (54%) subvýslednej zlúčeniny vo forme žltého olej a.

A NMR (300 MHz, CDC1₃) , δ 9,90 (s, 1H) ; 7,53 (s, 1H) ; J 38 (s,

1H); 7,15 (s, 1H); 3,87 (s, 1H).

(ii) 3-Chlór-5-hydroxybenzaldehyd

Roztok 3-chlór-5-metoxybenzaldehydu (22,8 g; 134 mmol; pozri stupeň (i)) v dichlórmetáne (250 ml) sa ochladí na 0°C. Potom sa k nemu v priebehu 15 minút prikvapká bromid boritý (15,8 ml;

167 mmol) . Zmes sa mieša 2 hodiny a potom sa pomaly pridá voda (50 ml). Roztok sa extrahuje etyléterom (2 x 100 ml), organické vrstvy sa spoja, vysušia sa nad Na₂SO₄, sfiltrujú sa a zahustia vo vákuu. Flash chromatografia na silikagéli v sústave hexán-etylacetát (4:1) poskytne subvýslednú zlúčeninu (5,2 g; 25%).

A NMR (300 MHz, CDCI3) , δ 9,85 (s, 1H) ; 7,35 (s, 1H) , “,20 (s,

1H) ; 7, 10 (s, 1H) ; 3,68 (s, 1H) .

(iii) 3-Chlór-5-difluórmetoxybenzaldehyd

Roztok 3-chlór-5-hydroxybenzaldehydu (7,5 g; 48 mmcl; pozri stupeň (ii)) v 2-propanole (250 ml) a 30% KOH (100 ml) sa zahrieva do refluxu. Do tejto reakčnej zmesi sa 2 hodiny uvádza za miešania CHCIF2. Reakčná zmes sa ochladí, okyslí IN Hli a extrahuje etylacetátom (2 x 100 ml). Organické vrstvy sa premyjú soľankou (100 ml), vysušia sa nad Na₂SO₄, sfiltrujú sa a zahustia vo vákuu. Zvyšok sa podrobí flash chromatografii na silikagéli v sústave hexán:etylacetát (4:1), čím sa získa subvýsledná zlú- » čenina (4,6 g; 46%) .

A NMR (300 MHz, CDC1₃) , δ 9,95 (s, 1H) ; 7,72 (s, 1H) ; ,52 (s,

1H) ; 7,40 (s, 1H) ; 6,60 (t, J_H-_F= 71,1 Hz, 1H) .

(iv) Ph(3-C1) (5-OCHF₂) - (R, S) CH (OTMS) CN

Roztok 3-chlór-5-difluórmetoxybenzaldehydu (4,6 g;22,3 mmol;

pozri stupeň (iii)) v dichlórmetáne (200 ml) sa ochladí na 0°C. Potom sa pridá Znl₂ (1,8 g; 5,6 mmol) a trimetylsilylkyanid (2,8 g; 27,9 mmol) a reakčná zmes sa nechá zohriať na laboratórnu teplotu a mieša sa 15 hodín. Potom sa zmes čiastočne zahustí vo vákuu, čím sa získa subvýsledná zlúčenina vo forme kvapaliny, ktorá sa použije priamo v stupni (v) , bez ďalšieho čistenia alebo charakterizácie.

(v) Ph(3-Cl) (5-OCHF₂) - (R, S) CH (OH) C (NH) OEt

Ph(3-C1) (5-OCHF₂)-(F,S)CH(OTMS)CN (6,82 g; predpokladané 22,3 mmol); pozri stupeň (iv)) sa prikvapká k HCl/EtOH (500 ml). Reakčná zmes sa mieša 15 hodín a potom sa čiastočne zahustí vo vákuu, čím sa získa subvýsledná zlúčenina vo forme kvapaliny, ktorá sa použije priamo v stupni (vi), bez ďalšieho čistenia alebo charakterizácie.

(vi) Ph(3-Cl) (5-OCHF₂) - (F, S) CH (OH) C (O) OEt

Ph (3-C1) (5-OCHF₂) - (F, S) CH (OH)C(NH)OEt (6,24 g; predpokladané 22,3 mmol; pozri stupeň (v)) sa rozpustí v THF (250 ml), pridá sa 0,5M H₂SO₄ (400 ml) a reakčná zmes sa mieša 65 hodín pri 40°C. Potom sa reakčná zmes čiastočne zahustí vo vákuu, aby sa odstránila väčšina THF a zvyšok sa extrahuje Et₂O (3 x 100 ml), vysuší sa nad Na₂SO₄, sfiltruje sa a zahustí vo vákuu. Získa sa tak subvýsledná zlúčenina vo forme tuhej látky, ktorá sa použije v stupni (vii) bez ďalšieho čistenia alebo charakterizácie.

(vii) Ph(3-Cl) (5-OCHF₂)-(F,S)CH(OH)C(O)0H

Roztok Ph ( 3-C1) (5-OCHF₂) - (F, S) CH (OH) C (O) OEt (6,25 g; predpokladané 22,3 mmol; pozri stupeň (vi)) v 2-propanole (175 ml) a 20% KOH (350 ml) sa mieša pri laboratórnej teplote 15 hodín. Reakčná zmes sa potom čiastočne zahustí vo vákuu, aby sa odstránila väčšina 2-propanolu. Zvyšná zmes sa okyslí IM H₂SO₄, extrahuje sa Et₂O (3 x 100 ml), vysuší sa nad Na₂SO₄ a zahustí sa vo vákuu. Získaný tuhý zvyšok sa podrobí flash chromatografii na silikagéli v sústave CHCl₃-MeOH-konc.NH₄OH (6:3:1), čím sa získa amónna sol subvýslednej zlúčeniny. Táto amónna sol sa potom rozpustí v zmesi etylacetátu (75 ml) a vody (75 ml) a okyslí sa 2N HCl. Organická vrstva sa oddelí a premyje solankou (50 ml), vysuší sa nad Na₂SO₄ a zahustí sa vo vákuu. Získa sa tak subvýsledná zlúčenina (3,2 g; 57%, stupeň (iv) až (vii)).

^XH NMR (300 MHz, CD₃OD) , Ô 7,38 (s, 1H) ; 7,22 (s, 1H) , 7,15 (s,

1H) ; 6,89 (t, J_H-_F = 71,1 Hz, 1H) ; 5,16 (s, 1H) .

(viii) Ph ( 3-C1) (5-OCHF₂) - (R) CH (OH) C (O) OH (a) a Ph ( 3-C1) ( 5-OCHF₂) -(S)CH(OAc)C(O)OH (b)

Zmes Ph (3-C1) (5-OCHF₂) - (R, S) CH (OH) C (O) OH (3,2 g; 12,7 mmol; pozri stupeň (vii)) a lipázy PS Amano (~2,0 g) vo vinyiacetáte (125 ml) a MTBE (125 ml) sa refluxuje 48 hodín. Reakčná zmes sa ochladí, sfiltruje sa cez celit® a filtračný koláč sa premyje etylacetátom. Filtrát sa zahustí vo vákuu a zvyšok sa podrobí flash chromatografii na silikagéli v sústave CHCl₃-MeOH-konc.NH4OH (6:3:1), čím sa získajú amónne soli subvýsledných zlúčenín (a) a (b). Zlúčenina (a) vo forme svojej soli sa rozpustí vo vode, okyslí sa 2N HCl a extrahuje sa etylacetátom. Organická vrstva sa premyje soľankou, vysuší sa nad Na₂SO₄, sfiltruje sa a zahustí vo vákuu, čím sa získa subvýsledná zlúčenina (a) (1,2 g; 37%).

Pre zlúčeninu (a):

^XH NMR (300 MHz, CD₃OD) , δ 7,38 (s, 1H) ; 7,22 (s, 1H) ; 7,15 (s,

1H) ; 6,89 (t, J_H__F = 71,1 Hz, 1H) ; 5,17 (s, 1H) .

(ix) Ph(3-Cl)(5-OCHF₂)-(R)CH(OH)C(0)-Aze-Pab(Teoc)

K roztoku Ph (3-C1) (5-OCHF₂) - (R) CH (OH) C (O) OH (1,1 g;

4,4 mmol; pozri stupeň (viii)) a Η-Aze-Pab(Teoc) (pozri medzinárodnú patentovú prihlášku WO 00/42059; 2,6 g; 5,7 mmol) v dimetylformamide (50 ml) sa pri 0°C pridá PyBOP (2,8 g; 5,3 mmol·) a kolidín (1,3 g; 10,6 mmol) . Reakčná zmes sa mieša 2 hodiny pri 0°C a potom pri laboratórnej teplote ďalších 15 hodín. Potom sa reakčná zmes zahustí vo vákuu a zvyšok sa podrobí flash chromatografii na silikagéli (3 x), najskôr v sústave CHCl₃-EtCH (9:1), potom v sústave EtOAc-EtOH (20:1), a nakoniec v sústave CH-C1₂-CH₃OH (95:5), čím sa získa subvýsledná zlúčenina (1,0 g; 37%) vo forme bielej tuhej látky.

H NMR (300 MHz, CD₃OD, zmes rotamérov) , δ Ί,Ί°> až 7,85 (d, J =

8,7 Hz, 2H) ; 7,15 až 7,48 (m, 5H) ; 6,89 a 6,91 (t, J_h-f= 71,1 Hz, 1H) ; 5,12 a 5,20 (s, 1H); 4,75 až 4,85 (m, 1H); 3,97 až 4,55 (m, 6H) ; 2,10 až 2,75 (m, 2H); 1,05 až 1,15 (m, 2H) ; 0,09 s, 9H) .

MS (m/z): 611 (M + 1)⁺.

(x) Ph(3-Cl) (5-OCHF2) ~ (R) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (OMe, Teoc)

Ph (3-C1) (5-OCHF₂) - (R) CH (OH) C (O)-Aze-Pab (Teoc) (0,40 g;

0,65 mmol; pozri stupeň (ix)) sa rozpustí v 20 ml acezcnitrilu a pridá sa 0,50 g (6,0 mmol) hydrochloridu O-metylhydroxylamínu. Zmes sa zahrieva 2 hodiny pri 70°C, potom sa rozpúšťadlo odparí a zvyšok sa rozdelí medzi vodu a etylacetát. Vodná fáza sa ešte dvakrát extrahuje etylacetátom a spojené organické fázy sa premyjú vodou, solankou, vysušia sa nad Na₂SO₄, sfiltrujú sa a odparia. Výťažok produktu je 0,41 g (91%) .

H NMR (400 MHz, CDC1₃) , δ 7,83 (bt, 1H) ; 7,57 (bs, 1H) ; ’,47 (d,

2H) ; 7,30 (d, 2H) ; 7,20 (m, 1H) ; 7,14 (m, 1H) ; 7,01 m, 1H) ;

6,53 (t, 1H) ; 4,89 (s, 1H) ; 4,87 (m, 1H) ; 4,47 (m, 2H) ; 4,4 až

4,2 (b, 1H) ; 4,17 až 4,1 (m, 3H) ; 3,95 (s, 3H) ; 3,67 (m, 1H) ;

2,68 (m, 1H); 2,42 (m, 1H); 0,97 (m, 2H) ; 0,01 (s, 9H) .

(xi) Ph(3-Cl) (5-OCHF₂) - (R) CH (OH) C (O) - (S) Aze-Pab (OMe)

Ph (3-C1) (5-OCHF₂) - (R) CH (OH) C (O) -Aze-Pab (OMe, Teoc) '0,40 g; 0,62 mmol; pozri stupeň (x)) sa rozpustí v 5 ml TFA a nechá sa 30 minút reagovať. TFA sa odparí a zvyšok sa rozdelí medzi etylacetát a vodný roztok NaHCO₃. Vodná fáza sa dvakrát extrahuje etylacetátom a spojené organické fázy sa premyjú vodou a soľan19 kou, vysušia sa nad Na₂SO₄, sfiltrujú sa a rozpúšťadlo sa odparí. Produkt sa podrobí lyofilizácii zo zmesi voda-acetonitril. Nie je potrebné žiadne čistenie; výťažok 0,28 g (85%).

^XH NMR (600 MHz, CDC1₃) , δ 7,89 (bt, 1H) ; 7,57 (d, 2H) ; ~,28 (d,

2H); 7,18 (m, 1H) ; 7,13 (m, 1H) ; 6,99 (m, 1H) ; 6,51 z, 1H) ;

4,88 (s, 1H) ; 4,87 (m, 1H) ; 4,80 (bs, 2H) ; 4,48 (dd, 1H] ; 4,43 (dd, 1H); 4,10 (m, 1H) ; 3,89 (s, 3H) ; 3,68 (m, 1K) ; 2,68 (m,

1H); 2,40 (m, 1H).

¹³C NMR (125 MHz; CDCI3) : (karbonylové a/alebo amidínové uhlíkové atómy, rotaméry) δ 172,9; 170,8; 152,7; 152,6.

HRMS: vypočítané pre C₂₂H23C1F₂N₄O5 (M - H)^- 495, 1242, nájdené

495,1247.

Príprava zlúčeniny D (Ph(3-C1) (5-OCHF₂)-(R)CH(OH)C(C'- S)Aze-Pab(2,6-diF)(OMe) (i) 2,6-Difluór-4-[ (metylsulfinyl) (metyltio)metyl]benzor.iuril (Metylsulfonyl)(metyltio)metán (7,26 g; 0,0584 mol) sa rozpustí v 100 ml suchého THF v atmosfére argónu a roztok sa ochladí na -78°C. Potom sa prikvapká za miešania butyllítium v hexáne (16 ml 1,6M roztoku; 0,0256 mol). Zmes sa mieša 15 min. Medzitým sa roztok 3,4,5-trifluórbenzonitrilu (4,0 g; 0,025 mmol) v 100 ml suchého THF ochladí na -78°C v atmosfére argónu a kanylou sa do neho v priebehu 35 minút pridá prvý roztok. Po 30 minútach sa odstráni chladiaci kúpel a keď teplota reakčnej zmesi dosiahne laboratórnu teplotu, zmes sa naleje do 400 ml vody. THF sa odparí a zvyšná vodná fáza sa extrahuje trikrát dietyléterom. Spojené éterické fázy sa premyjú vodou, vysušia sa nad Na₂SO₄ a odparia sa. Získa sa 2,0 g (30%) produktu.

^XH NMR (500 MHz, CDC1₃) , δ 7,4 až 7,25 (m, 2H) ; 5,01 (s, 1H, diastereomér) ; 4,91 (s, 1H, diastereomér) , 2,88 (s, 3H, diastereomér) ; 2,52 (s, 3H, diastereomér); 2,49 (s, 3H, diastereomér);

2,34 (s, 3H, diastereomér); 1,72 (br, 1H).

(ii) 2,β-Difluór-4-formylbenzonitril

2,6-Difluór-4-[(metylsulfinyl)(metyltio)metyl]benzonitril (2,17 g; 8,32 mmol; pozri stupeň (i)) sa rozpustí v 90 ml THF a pridá sa 3,5 ml koncentrovanej kyseliny sírovej. Zmes sa nechá stáť 3 dni pri laboratórnej teplote a potom sa naleje do 450 ml vody. Extrahuje sa trikrát etylacetátom a spojené organické fázy sa premyjú dvakrát vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a solankou, vysušia sa nad Na₂SO₄ a rozpúšťadlo sa odparí. Výťažok 1,36 g (98%). Poloha formylovej skupiny sa určí pomocou ¹³C NMR spektroskopie. Signál fluorovaných atómov uhlíka pri 162,7 ppm vykazuje očakávanú interakčnú schému s dvoma interakčnými konštantami veľkosti 260 Hz a 6,3 Hz, zodpovedajúcimi ipso-, respektíve meta-interakcii atómov fluóru.

^ľH NMR (400 MHz, CDC1₃) , δ 10,35 (s, 1H) ; 7,33 (m, 2H) .

(iii) 2,6-Difluór-4-hydroxymetylbenzonitril

2,6-Difluór-4-formylbenzonitril (1,36 g; 8,13 mmol; pozri stupeň (ii)) sa rozpustí v 25 ml metanolu a roztok sa ochladí v ľadovom kúpeli. K roztoku sa po častiach pridáva borohydrid sodný (0,307 g; 8,12 mmol) za miešania a reakčná zmes sa potom nechá 65 minút. Rozpúšťadlo sa odparí a zvyšok sa rozdelí medzi dietyléter a vodný roztok hydrogénuhličitanu sodného. Éterická vrstva sa premyje ešte vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a solankou, vysuší sa nad Na₂SO₄ a rozpúšťadlo sa odparí. Surový produkt zakrátko skryštalizuje a môže sa použiť ďalej bez čistenia. Výťažok 1,24 g (90%).

^XH NMR (400 MHz, CDC1₃) , δ 7,24 (m, 2H) ; 4,81 (s, 2H) ; 2,10 (br,

1H) .

(iv) 4-Kyán-2,6-difluórbenzylmetánsulfonát

K ľadom chladenému roztoku 2,6-difluór-4-nydroxymeuylbenzonitrilu (1,24 g; 7,32 mmol; pozri stupeň (iii)) a metánsulfonylchloridu (0,93 g; 8,1 mmol) v 60 ml metylénchloridu sa za mieša21 nia pridá trietylamín (0,81 g; 8,1 mmol). Po 3 hodinách pri 0°C sa zmes premyje dvakrát IM HCl a raz vodou, vysuší sa nad Na₂SO₄ a rozpúšťadlo sa odparí. Produkt sa môže použiť bez ďalšieho čistenia, výťažok 1,61 g (89%).

⁴Η NMR (300 MHz, CDC1₃) , δ 7,29 (m, 2H) ; 5,33 (s, 2H) ; 3,07 (s,

3H) .

(v) 4-Azidometyl-2,6-difluórbenzonitril

Zmes 4-kyán-2, 6-difluórbenzylmetánsulfonátu (1,61 g; 6,51 mmol; pozri stupeň (iv)) a azidu sodného (0,72 g; 0,0111 mol) v 10 ml vody a 20 ml dimetylformamidu sa mieša cez noc pri laboratórnej teplote. Výsledná zmes sa potom naleje do 200 ml vody a extrahuje sa trikrát dietyléterom. Spojené éterické fázy sa premyjú päťkrát vodou, vysušia sa nad Na₂SO₄ a rozpúšťadlo sa odparí. Malá vzorka sa odparí pre potreby NMR analýzy a produkt sa skryštalizuje. Zvyšok sa opatrne odparí, ale nie celkom do sucha. Podlá NMR spektra a analytickej HPLC sa predpokladá takmer kvantitatívny výťažok (teória 1,26 g).

^ľH NMR (400 MHz, CDC1₃) , δ 7,29 (m, 2H) ; 4,46 (s, 2H) .

(vi) 4-Aminometyl-2,6-difluórbenzonitril

Reakcia sa uskutoční spôsobom, opísaným v J. Chem. Res. (M) (1992), 3128. K suspenzii 520 mg 10% Pd/C (50% vlhkosti) v 20 ml vody sa pridá roztok borohydridu sodného (0,834 g; C,3221 mol) v 20 ml vody. Dôjde k vývoju malého množstva plynu. 4-Azidometyl-2,β-difluórbenzonitril (1,26 g; 6,49 mmol; pozri stupeň (v)) sa rozpustí v 50 ml THF a v priebehu 15 minút sa pridá k skôr uvedenej vodnej zmesi v ľadovom kúpeli. Zmes sa mieša i hodiny, potom sa k nej pridá 20 ml 2M HCl a sfiltruje sa cez celit. Celit sa premyje ešte vodou a spojené vodné fázy sa premyjú etylacetátom a potom sa zalkalizujú 2M NaOH. Extrahuje sa zrikrát metylénchloridom a spojené organické fázy sa premyjú vodou, vysušia nad Na₂SO₄ a rozpúšťadlo sa odparí. Výťažok je 0,87 g (80%) .

⁴H NMR (400 MHz, CDC1₃) , δ 7,20 (m, 2Η) ; 3,96 (s, 2H) ; 1,51 (br,

2H) .

(vii) 2,6-Difluór-4-terc-butoxykarbonylaminometylbenzonitril

K roztoku 4-aminometyl-2, 6-difluórbenzonitrilu (0, 876 g; 5,21 mmol; pozri stupeň (vi)) v 50 ml THF sa pridá roztok di-terc-butyldikarbonátu (1,14 g; 5,22 mmol) v 10 ml THF. Zmes sa mieša 3,5 hodiny, potom sa THF odparí a zvyšok sa rozdelí medzi vodu a etylacetát. Organická vrstva sa premyje trikrát 0,5M HCl a vodou, vysuší sa nad Na₂SO₄ a rozpúšťadlo sa odparí. Produkt sa môže použiť bez ďalšieho čistenia. Výťažok je 1,38 g (99%) .

^XH NMR (300 MHz, CDC1₃) , δ 7,21 (m, 2H) ; 4,95 (br, 1H) ; 4,43 (br,

2H); 1,52 (s, 9H).

(viii) Boc-Pab(2,6-diF)(OH)

Zmes 2,6-difluór-4-terc-butoxykarbonylaminometylbenzonitrilu (1,38 g; 5,16 mmol; pozri stupeň (vii)), hydrochloridu hydroxylamínu (1,08 g; 0,0155 mol) a trietylamínu (1,57 g; 0,0155 mol) v 20 ml etanolu sa mieša 36 hodín pri laboratórnej teplote. Potom sa rozpúšťadlo odparí a zvyšok sa rozdelí medzi vodu a metylénchlorid. Organická vrstva sa premyje vodou, vysuší nad Na₂SO₄ a rozpúšťadlo sa odparí. Produkt sa môže použiť bez ďalšieho čistenia. Výťažok 1,43 g (92%).

^XH NMR (500 MHz, CD₃OD) , δ 7,14 (m, 2H) ; 4,97 (br, 1H) ; 4,84 (br, 2H); 4,40 (br, 2H); 1,43 (s, 9H).

(ix) Boc-Pab(2,6-diF).HOAc

Reakcia sa uskutoční postupom, opísaným Judkinsom a kol., (Synth. Comm. (1998), 4351). Boc-?ab(2,6-diF)(OH) (1,32 g;

4,37 mmol; pozri stupeň (viii)), anhydrid kyseliny octovej (0,477 g; 4,68 mmol) a 442 mg 10% Pd/C (50% vlhkosti) v 100 ml kyseliny octovej sa hydrogenuje 3,5 hodiny pri tlaku 5 atm. Zmes sa sfiltruje cez celit, premyje sa etanolom a rozpúšťadlo sa odparí. Zvyšok sa podrobí lyofilizácii z acetonitrilu a vody s niekolkými kvapkami etanolu. Subvýsledný produkt je možné použiť bez ďalšieho čistenia. Výťažok produktu je 1,49 g (99%;.

⁴Η NMR (400 MHz, CD₃OD) , δ 7,45 (m, 2H) ; 4,34 (s, 2H) ; í, 90 (s,

3H); 1,40 (s, 9H).

(x) Boc-Pab(2,6-diF)(Teoc)

K roztoku Boc-Pab(2,6-diF).HOAc (1,56 g; 5,49 mmol·; pozri stupeň (ix) ) v 100 ml THF a 1 ml vody sa pridá 2-(trimetylsilyl)etyl-p-nitrofenylkarbonát (1,67 g; 5,89 mmol). Potom sa v priebehu 5 minút prikvapká roztok uhličitanu draselného (1,57 g; 0,0114 mol) v 20 ml vody a zmes sa mieša cez noc. THF sa odparí a zvyšok sa rozdelí medzi vodu a metylénchlorid. Vodná vrstva sa extrahuje metylénchloridom a spojené organické fázy sa premyjú dvakrát vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného, vysušia sa nad Na₂SO₄ a rozpúšťadlo sa odparí. Zvyšok sa podrobí flash chromatografii na silikagéli v sústave heptán-etyiacetát (2:1), čím sa získa 1,71 g (73%) čistého produktu.

^ΧΗ NMR (400 MHz, CDC1₃) , δ 7,43 (m, 2H) ; 4,97 (br, IH) ; 4,41 (br, 2H); 4,24 (m, 2H) ; 1,41 (s, 9H) ; 1,11 (m, 2H) ; 0,06 (s, 9H’. .

(xi) Boc-Aze-Pab(2,6-diF)(Teoc)

Boc-Pab(2,6-diF)(Teoc) (1,009 g; 2,35 mmol; pozri stupeň (x) ) sa rozpustí v 50 ml etylacetátu, nasýteného plynným, chlorovodíkom. Zmes sa nechá stáť 10 minút, rozpúšťadlo sa odparí, odparok sa rozpustí v 18 ml DMF a potom sa ochladí v ľadovom kúpeli. Pridá sa Boc-Aze-OH (0,450 g; 2,24 mmol), PyBOP (í,24 g; 2,35 mmol) a nakoniec diizopropyletylamín (1,158 g; 8,96 mmol). Reakčná zmes sa 2 hodiny mieša, potom sa naleje do 350 ml vody a extrahuje sa trikrát etylacetátom. Spojené organické fázy sa premyjú soľankou, vysušia sa nad Na₂SO₄ a rozpúšťadlo sa odparí. Zvyšok sa podrobí flash chromatografii na silikagéli v sústave heptán-etyiacetát (1:3), čím sa získa 1,097 g (96%) požadovaného produktu .

J NMR (500 MHz, CDC1₃) , δ 7,46 (m, 2H) ; 4,65 až 4,5 (m, 3H) ; 4,23 (m, 2H) ; 3,87 (m, 1H) ; 3,74 (m, 1H) ; 2,45 až 2,3 (m, 2H) ; 1,40 (s, 9H); 1,10 (m, 2H); 0,05 (s, 9H) .

(xii) Ph(3-Cl) (5-OCHF₂-(F)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-diF) (Teoc)

Boc-Aze-Pab(2,6-diF)(Teoc) (0,256 g; 0,500 mmol; pozri stupeň (xi)) sa rozpustí v 20 ml etylacetátu, nasýteného plynným chlorovodíkom. Zmes sa nechá stáť 10 minút, rozpúšťadlo sa odparí a odparok sa rozpustí v 5 ml DMF. Potom sa pridá Ph(3-Cl)(5-OCHF₂) - (F) CH (OH) C (O) OH (0,120 g; 0,475 mmol; pozri prípravu zlúčeniny A (viii)), PyBOP (0,263 g; 0,498 mmol) a nakoniec diizopropyletylamín (0,245 g; 1,89 mmol). Reakčná zmes sa mieša 2 hodiny a potom sa naleje do 350 ml vody a extrahuje sa trikrát etylacetátom. Spojené organická fázy sa premyjú solankou, vysušia sa nad Na₂SO₄ a rozpúšťadlo sa odparí. Zvyšok sa podrobí flash chromatografii na silikagéli v etylacetáte, čím sa získa 0,184 g (60%) požadovaného podvýsledného produktu.

^ľH NMR (400 MHz, CD₃OD, zmes rotamérov), δ 7,55 až 7,45 'm, 2H) ;

7, 32	(m, 1H, majoritný	rotamér);	7,27	(m,	1H, minoritný	rota-
mér)	; 7,2 až 7,1 (m, 2H)	1; 6,90 (t,	1H,	majoritný rotamér);	6, 86
(t,	1H, minoritný rotamér); 5,15	(s,	1H,	majoritný rotamér);
5, 12	(m, 1H, minoritný	rotamér);	5,06	(s,	1H, minoritný	rota-

mér) ; 4,72 (m, 1H, majoritný rotamér) ; 4,6 až 4,45 (m, 2H); 4,30 (m, 1H, majoritný rotamér); 4,24 (m, 2H); 4,13 (m, 1H, majoritný rotamér); 4,04 (m, 1H, minoritný rotamér); 3,95 (m, 1H, minoritný rotamér); 2,62 (m, 1H, minoritný rotamér); 2,48 (m, 1H, majoritný rotamér); 2,22 (m, 1H, majoritný rotamér); 2,1C (m, 1H, minoritný rotamér); 1,07 (m, 2H); 0,07 (m, 9H).

(xiii) Ph(3-Cl) (5-OCHF₂)-(F)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-diF)-(OMe,

Teoc)

Zmes Ph(3-Cl) ( 5-OCHF₂)-(F)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-diľ) (Teoc) (64 mg; 0,099 mmol; pozri stupeň (xii)) a hydrochlorid 0-metyl25 hydroxylamínu (50 mg; 0,60 mmol) v 4 ml acetonitrilu sa zahrieva 3 hodiny na 70°C. Rozpúšťadlo sa odparí a zvyšok sa rozdelí medzi vodu a etylacetát. Vodná vrstva sa extrahuje dvakrát etylacetátom a spojené organické fázy sa premyjú vodou, vysušia sa nad Na₂S0₄ a rozpúšťadlo sa odparí. Produkt je možné použiť bez ďalšieho čistenia. Výťažok 58 mg (87%).

^XH NMR (400 MHz, CDC1₃) , δ 7,90 (bt, 1H) ; 7,46 (m, 1H) ; 7,25 až

6,95 (m, 5H) ; 6,51 (t, 1H) ; 4,88 (s, 1H) ; 4,83 (m, 1H) ; 4,6 až

4.5 (m, 2H) ; 4,4 až 3,9 (m, 4H) ; 3,95 (s, 3H) ; 3,63 (m, 1H) ; 2,67 (m, 1H) ; 2,38 (m, 1H) ; 1,87 (br, 1H); 0,98 (m, 2H) ; 0,01 (s, 9H) .

(xiv) Ph(3-Cl) (5-OCHF₂) - (R) CH (OH) C (0) - (S) Aze-Pab (2,6-diF) (OMe)

Ph(3-Cl) (5-OCHF₂) -(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2,6-diF) (OMe,Teoc) (58 mg; 0,086 mmol; pozri stupeň (xiii)) sa rozpustí v 3 ml TFA, ochladí sa v ľadovom kúpeli a nechá sa 2 hodiny reagovať. Potom sa TFA odparí a zvyšok sa rozpustí v etylacetáte. Organická vrstva sa premyje dvakrát vodným roztokom uhličitanu sodného a vodou, vysuší sa nad Na₂SO₄ a rozpúšťadlo sa odparí. Zvyšok sa podrobí lyofilizácii z vody a acetonitrilu, čím sa získa 42 mg (92%) výslednej zlúčeniny.

^;H NMR (300 MHz, CDC1₃) , δ 7,95 (bt, 1H) ; 7,2 až 7,1 (m, 4H) ;

6,99 (m, 1H) ; 6,52 (t, 1H) ; 4,88 (s, 1H) ; 4,85 až 4,75 (m, 3H) ;

4.6 až 4,45 (m, 2H) ; 4,29 (br, 1H) ; 4,09 (m, 1H) ; 3,89 (s, 3H) ;

3,69 (m, 1H); 2,64 (m, 1H); 2,38 (m, 1H); 1,85 (br, 1H).

¹³C NMR (100 MHz; CDC1₃) : (karbonylové a/alebo amidínové uhlíky) δ 172,1; 169,8; 151,9.

APCI-MS: (M + 1) = 533/535 m/z.

Príprava zlúčeniny E (Ph (3-C1) (5-OCH₂CH₂F) - (R) CH (OH) C (0) - (S) Aze-Pab(OMe) (i) (2-Monofluóretyl)metánsulfonát

K magneticky miešanému roztoku 2-fluóretanolu (5,0 g;

78,0 mmol) v dichlórmetáne (90 ml) sa v dusíkovej atmosŕ	ere pri
0°C pridá trietylamín (23,7 g; 234 mmol) a metánsulfony)	.chlorid
(10,7 g; 93,7 mmol). Zmes sa mieša 1,5 hodiny pri 0°C, z:	riedi sa
dichlórmetánom (100 ml) a premyje sa 2N HCI (100 ml)	Vodná
vrstva sa extrahuje dichlórmetánom (50 ml) a spojené 0:	rganické
extrakty sa premyjú solankou (75 ml), vysušia sa nad	Na2SO4,

sfiltrujú sa a zahustia vo vákuu, čím sa získa subvýslectá zlú-

čenina (9,7 g; 88%) vo forme žltého oleja, ktorý sa použ	:ije bez
ďalšieho čistenia.
4H NMR (300 MHz, CDC13) , δ 4,76 (t, J = 4 Hz, 1Η) ; 4,64	t, J =
4 Hz, 1Η) ; 4,52 (t, J = 4 Hz, 1Η) ; 4,43 (t, J = 4 Hz, 1?	i ; 3,09
(s, 3H) .

(ii) 3-Chlór-5-monofluóretoxybenzaldehyd
K roztoku 3-chlór-5-hydroxybenzaldehydu (8,2 g; 52,;	; mmol);
(pozri experiment (ii) v príprave zlúčeniny A) a uhličitá	•tu dra-
selného (9,4 g; 68,2 mmol) v DMF (10 ml) sa v atmosfére	dusíka
prikvapká pri laboratórnej teplote roztok (2-monofluór;	;tyl) me-
tánsulfonátu (9,7 g; 68,2 mmol; pozri stupeň (i))	v DMF
(120 ml). Zmes sa zahrieva 5 hodín na 100°C a potom sa mi	.eša cez
noc pri laboratórnej teplote. Reakčná zmes sa ochladí	ta 0°C,
naleje sa do ľadovej 2N HCI a extrahuje sa etylacetátom.	Spoj ené
organické extrakty sa premyjú soľankou, vysušia sa nac	Na2SO4,
sfiltrujú sa a zahustia sa vo vákuu. Hnedý olej sa podrob	:í chro-
matografii na silikagéli v sústave hexán-etylacetát (4:	1) , čím
sa získa subvýsledná zlúčenina (7,6 g; 71%) vo forme žlté ja.	ito ole-

t ^LH NMR (300 MHz, CDC1₃) , δ 9,92 (s, IH) ; 7,48 (s, IH) ; ,32 (s,

IH) ; 7,21 (s, IH) ; 4,87 (t, J = 4 Hz, IH) ; 4,71 (t,	= 3 Hz,
IH); 4,33 (t, J = 3 Hz, IH); 4,24 (t, J = 3 Hz, IH).

(iii) Ph(3-Cl) (5-OCH2CH2F)-(R,S)CH(OTMS)CN
K roztoku 3-chlór-5-monofluóretoxybenzaldehydu	'7,6 g;
37,5 mmol; pozri stupeň (ii)) a jodidu zinočnatého	(3,0 g;

9,38 mmol) v dichlórmetáne (310 ml) sa pri 0°C v atmosfére dusíka prikvapká trimetylsilylkyanid (7,4 g; 75,0 mmol). Zmes sa mieša pri 0°C 3 hodiny a pri laboratórnej teplote cez noc. Potom sa zmes zriedi vodou (300 ml), organická vrstva sa oddelí, vysuší sa nad Na₂SO₄, sfiltruje sa a zahustí sa vo vákuu, čím sa získa subvýsledná zlúčenina (10,6 g; 94%) vo forme hnedého oleja, ktorý sa použije bez ďalšieho čistenia alebo charakterizácie.

(iv) Ph(3-Cl) (5-OCH₂CH₂F)-(R,S)CH(OH)C(O)OH

Koncentrovaná kyselina chlorovodíková (100 ml) sa pridá k Ph(3-C1) (5-OCH₂CH₂F)-(R,S)CH(OTMS)CN (10,6 g; 5,8 mmol; pozri stupeň (iii)) a roztok sa mieša 3 hodiny pri 100°C. Po ochladení na laboratórnu teplotu sa reakčná zmes ďalej ochladí na 0°C, pomaly sa zalkalizuje 3N NaOH (~300 ml) a premyje sa éterom (3 x 200 ml). Vodná vrstva sa okyslí 2M HCI (80 ml) a extrahuje etylacetátom (3 x 300 ml). Spojené etylacetátové extrakty sa vysušia nad Na₂SO₄, sfiltrujú sa a zahustia sa vo vákuu, čím sa získa subvýsledná zlúčenina (8,6 g; 98%) ako slabo žltá tuhá látka, ktorá sa použije bez ďalšieho čistenia. Rf = 0,28 (CHCl3-MeOH-konc.NH₄OH 90:8:2).

^XH NMR (300 MHz, CD₃OD) , δ 7,09 (s, 1H) ; 7,02 (s, 1H) ; 6,93 (s, 1H) ; 5,11 (s, 1H) ; 4,77 až 4,81 (m, 1H) ; 4,62 až 4,65 (m, 1H) ; 4,25 až 4,28 (m, 1H); 4,15 až 4,18 (m, 1H).

(v) Ph(3-C1) ( 5-OCH₂CH₂F)-(S)CH(OAc)C(O)OH (a) a Ph(3-Cl)-(5-OCH₂CH₂F)-(R)CH(OH)C(O)OH (b)

Roztok Ph (3-C1) (5-OCH₂CH₂F) - (R, S) CH (OH) C (O) OH (8,6 g; 34,5 mmol; pozri stupeň (iv)) a lipázy PS ''Amano (4,0 g) vo vinylacetáte (250 ml) a MTBE (250 ml) sa zahrieva v atmosfére dusíka 3 dni na 70°C. Po ochladení na laboratórnu teplotu sa enzým odstráni filtráciou cez celit®. Filtračný koláč sa premyje etylacetátom a filtrát sa zahustí vo vákuu. Zvyšok sa chromatografuje na silikagéli v sústave CHCl3-MeOH-Et3N (90:8:2), čím sa získa trietylamóniová sol subvýslednej zlúčeniny (a) vo forme žltého oleja. Naviac sa získa aj trimetylamóniová sol subvýslednej zlúčeniny (b) (4,0 g). Soľ subvýslednej zlúčeniny (b) sa rozpustí vo vode (250 ml), okyslí sa 2N HCl a extrahuje sa etylacetátom (3 x 200 ml) . Spojené organické extrakty sa vysušia nad Na₂SO₄, sfiltrujú sa a zahustia vo vákuu, čím sa získa subvýsledná zlúčenina (b) (2,8 g; 32%) ako žltý olej.

Pre zlúčeninu (b):

R_f = 0,28 (CHCl₃-MeOH-konc.NH₄OH 90:8:2) ^XH NMR (300 MHz, CD₃OD) , δ 7,09 (s, 1H) ; 7,02 (s, 1H) ; 6,93 (s, 1H) ; 5,11 (s, 1H) ; 4,77 až 4,81 (m, 1H) ; 4,62 až 4,65 (m, 1H) ; 4,25 až 4,28 (m, 1H); 4,15 až 4,18 (m, 1H).

(vi) Ph(3-Cl)(5-OCH₂CH₂F) - (R) CH (OH) C (O) - ( S) Aze-Pab (OMe)

K roztoku Ph (3-C1) (5-OCH₂CH₂F) - (R) CH (OH) C (O) OH (218 mg; 3,29 mrnol; pozri stupeň (v)) v DMF (30 ml) sa v atmosfére dusíka pri 0°C pridá HAZe-Pab(OMe).2HC1 (1,43 g; 4,27 mmol; pozri medzinárodnú patentovú prihlášku WO 00/42059), PyEOP 1,89 g; 3,68 mmol) a DIPEA (1,06 g; 8,23 mmol). Reakčná zmes sa mieša 2 hodiny pri 0°C a potom pri laboratórnej teplote cez noc. Potom sa reakčná zmes zahustí vo vákuu a zvyšok sa dvakrát podrobí chromatografii na silikagéli, najskôr v sústave CHCl₃-EtCE (15:1) a potom v sústave EtOAc-EtOH (20:1), čím sa získa výsledná zlúčenina (880 mg; 54%).

R_f = 0,60 (CHCl₃-EtOH 10:1) ^ľH NMR (300 MHz, CD₃OD, zložitá zmes rotamérov) , δ 7,58 až 7,60

(d, J =	8 Hz,	2H)	; 7,34 (d, J = 7 Hz, 2H);	7,05 až	7,08 (	m, 2H);
6,95 až	6,99	(m,	1H); 5,08 a 5,13 (m, 1H);	4,77 až	4,82 [	m, 1H) ;
4,60 až	4, 68	(m,	1H) ; 3, 99 až 4,51 (m, 7H(	); 3,82	(s, 3H	í; 2,10
až 2,75	(m,	2H) .	13C NMR (150 MHz; CD3OD) :	(karbonylcvé	a/alebo

amidínové atómy uhlíka, δ 173,3; 170,8; 152,5. APCI-MS: (M + 1) =

493 m/z.

Príprava zlúčeniny F (Ph (3-C1) (5-OCHF₂) - (R) CH (OH) C O)-Aze-Pab(OH)) (i) Ph(3-Cl) (5-OCHF₂)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH,Teoc)

Ph(3-C1) (5-OCHF₂)-(F)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc) '5,148 g;

0,24 mmol; pozri prípravu zlúčeniny D, stupeň (ix) sa rozpustí v 9 ml acetonitrilu a pridá sa 0,101 g (1,45 mmol) hydrochloridu hydroxylamínu. Zmes sa zahrieva 2,5 hodiny na 70°C, sfilcruje sa cez celit® a rozpúšťadlo sa odparí. Surový produkt (0,145 g; 75% čistota) sa bez ďalšieho čistenia použije priamo v ďalšom stupni .

(ii) Ph(3-Cl) (5-OCHF₂)-(R) CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH)

Ph (3-C1) (5-OCHF2) - (R) CH (OH) C (O)-Aze-Pab (OH, Teoc) 5,145 g;

0,23 mmol; pozri stupeň (i)) sa rozpustí v 0,5 ml dichlórmetánu a 9 ml TFA. Reakčná zmes sa nechá reagovať 60 minút. Potom sa TFA odparí a zvyšok sa prečistí preparatívnou HPLC. Frakcie produktu sa spoja a podrobia sa lyofilizácii (2 x) , čím sa získa 72 mg (celkový výťažok dvoch stupňov 62%) výslednej zlúčeniny.

MS (m/z) 482 (M - 1); 484 (M + 1)⁺.

A NMR (400 MHz, CD3OD) , δ 7,58 (d, 2H) ; 7,33 (m, 3H) ; ,15 (m,

2H); 6,89 (t, 1H, majoritný rotamér); 6,86 (t, 1H, mincricný rotamér); 5,18 (s, 1H, majoritný rotamér; a m, 1H, minoricrý rotamér); 5,12 (s, 1H, minoritný rotamér); 4,77 (m, 1H, majoritný rotamér); 4,42 (m, 2H) ; 4,34 (m, 1H, majoritný rotamér:; 4,14 (m, 1H, majoritný rotamér); 4,06 (m, 1H, minoritný rcvamér); 3,95 (m, 1H, minoritný rotamér); 2,66 (m, 1H, minoricrý rotamér); 2,50 (m, 1H, majoritný rotamér); 2,27 (m, 1H, majoritný rotamér); 2,14 (m, 1H, minoritný rotamér).

ⁱ³C NMR (100 MHz; CD₃OD) : (karbonylové a/alebo amidíncvé atómy uhlíka, rotaméry) δ 172,4; 172,3; 172,0; 171,4; 152,3; 132,1.

Príprava zlúčeniny H (Ph (3-C1) (5-OCH₂CHF₂) - (R) CH (OH) C O)-Aze-Pab(OH)) (i) Ph(3-Cl) (5-OCH₂CHE₂) - (R) CH (OH) C (O)-Aze-Pab (Z)

Boc-Aze-Pab(Z) (pozri medzinárodnú patentovú prihlášku WO 97/02284 ; 92 mg; 0,197 mmol) sa rozpustí v 10 ml etylacetátu, nasýteného plynným chlorovodíkom, a nechá sa reagovať 10 minút. Rozpúšťadlo sa odparí a zvyšok sa zmieša s Ph(3-Cl)(5-OCH₂CHF₂) -(R)CH(OH)C(O)OH (50 mg; 0,188 mmol), PyBOP (109 mg; 0,209 mmol) a nakoniec s diizopropyletylamínom (96 mg; 0,75 mmol) v 2 ml DMF. Zmes sa mieša 2 hodiny, potom sa naleje do 50 ml vody a extrahuje sa trikrát etylacetátom. Spojené organické fázy sa premyjú vodou, vysušia sa nad Na₂SO₄ a rozpúšťadlo sa odparí. Surový produkt sa podrobí flash chromatografii na silikagéli v sústave EtOAc:MeOH (9:1) . Získa sa 10C mg (87%) produktu.

^XH NMR (300 MHz, CD₃OD, zmes rotamérov), δ 7,85 až 7,75 (m, 2H) ;

7,45 až 7,25 (m, 7H); 7,11 (m, IH, majoritný rotamér); 7,08 (m,

IH, minoritný rotamér); 7,05 až 6,9 (m, 2H) ; 6,13 (bt, IH) ; 5,25 až 5,05 (m, 3H) ; 4,77 (m, IH, čiastočne prekrytý signálom CD₃OH) ;

4,5 až 3,9 (m, 7H) ; 2,64 (m, IH, minoritný rotamér); 2,47 (m, IH, majoritný rotamér); 2,25 (m, IH, majoritný rotamér); 2,13 (m, IH, minoritný rotamér).

(ii) Ph(3-Cl) (5-OCH₂CHF₂) - (R) CH (OH) C (O)-Aze-Pab (OH)

Hydrochlorid hydroxylamínu (65 mg; 0,94 mmol) a trietylamín (0,319 g; 3,16 mmol) sa zmieša v 8 ml THE a podrobí sa sonikácii 1 hodinu pri 40°C. Pridá sa pH(3-C1) (5-OCH₂CHF₂)-(R)CH (OH) C (O)-Aze-Pab(Z) (96 mg; 0,156 mmol; pozri stupeň (i)) a ďalších 8 ml THF. Zmes sa mieša 4,5 dňa pri 40°C. Rozpúšťadlo sa odparí a surový produkt sa prečistí preparatívnou HPLC v sústave CH₃CN-0,lM NH₄OAc (40:60). Výťažok 30 mg (38%), čistota 99%.

H NMR (300 MHz, CD₃OD, zmes rotamérov), δ 7,6 až 7,55 (m, 2H) ;

7,35 až 7,3 (m, 2H) ; 7,12 (m, IH, majoritný rotamér); 7,09 (m,

IH, minoritný rotamér); 7,05 až 6,9 (m, 2H) ; 6,15 (triplet multipletov, IH) ; 5,15 (m, IH, minoritný rotamér); 5,13 (s, IH, majoritný rotamér); 5,08 (s, IH, minoritný rotamér); 4,77 (m, IH, majoritný rotamér); 4,5 až 4,2 (m, 5H) ; 4,08 (m, IH, majo31 ritný rotamér); 3,97 (m, 1H, minoritný rotamér) ; 2,66 (m, 1H, minoritný rotamér); 2,50 (m, 1H, majoritný rotamér); 2,27 (m, 1H, majoritný rotamér); 2,14 (m, 1H, minoritný rotamér).

¹³C NMR (100 MHz; CD₃OD) : (karbonylové a/alebo amidíncvé atómy uhlíka, zmes rotamérov) δ 172,8; 172,2; 171,4; 159,1; 158,9;

154,2.

APCI-MS: (M + 1) = 497/499 m/z.

Skratky

Ac	= acetyl;
APCI	chemická ionizácia pri atmosférickom tlaku (vo vzťahu k MS) ;
API	ionizácia pri atmosférickom tlaku (vc vzťahu k MS) ;
Aze (& (S) -Aze)	(S)-azetidín-2-karboxylát (ak nie je uvedené inak) ;
Boe	= terc-butyloxykarbonyl;
br	= široký (vo vzťahu k NMR);
CI	= chemická ionizácia (vo vzťahu k MS);
d	= dublet (vo vzťahu k NMR);
DCC	= dicyklohexylkarbodiimid;
dd	= dublet dubletov (vo vzťahu k NMR);
DIBAL-H	= diizobutylalumíniumhydrid;
DIPEA	= diizopropyletylamín;
DMAP	= 4-(N,N-dimetylamino)pyridín;
DMF	= N,N-dimetylformamid;
DMSO	= dimetylsulfoxid;
DSC	= diferenciálna skenovacia kolorimetria;
DVT	= trombóza hlbokej žily;

	hydrochlorid 1-(3-dimetylaminopropyl)-3-etyl
EDC	karbodiimidu;
ES	= elektrosprej;
ESI	= electrospray interface;
Et	= etyl;
éter	- dietyléter;
EtOAc	= etylacetát;
EtOH	= etanol;
Et2O	= dietyléter;
HAT U	0- (azabenzotriazol-l-yl) -N, N, N', N'-tetramezyl- uróniumhexafluórfosfát;
HBTU	[N, N, N', N'-tetrametyl-O- (benzotriazol-1-yl) uró- niumhexafluórfosfáz1;
Hex	= hexány;
HOAc	= kyselina octová;
HPLC	= vysoko účinná kvapalinová chromatografia;
LC	= kvapalinová chromazografia;
m	= multiplet (vo vzťahu k NMR);
Me	= metyl;
MeOH	= metanol;
MS	= hmotnostná spektroskopia;
MTBE	= metyl-terc-butyléter;
NMR	= nukleárna magnetická rezonancia;
OAc	- acetát;
Pab	= para-amidinobenzylamino;
H-Pab	= para-amidinobenzylamín;
Pd/C	= paládium na uhlí;

Ph = fenyl;

(benzotriazol-l-yloxy)tripyrolidinofosfóniumPyBOP hexafluórfosfát;

q = kvartet (vo vzťahu k NMR);

QF = tetrabutylamóniumfluorid;

s = singlet (vo vzťahu k NMR);

t = triplet (vo vzťahu k NMR);

[N, N, N', N'-tetrametyl-O- (benzotriazol-1-vi) uróTBTU niumtetrafluórborát;

TEA = trietylamín;

Teoc = 2-(trimetylsilyl)etoxykarbonyl;

2,2,6,6-tetrametyl-l-piperidinyloxylovv voľný

TEMPO radikál;

TFA = kyselina trifluóroctová;

TGA = termogravimetrická analýza;

THF = tetrahydrofurán;

TLC = tenkovrstvová chromatografia;

UV = ultrafialový.

Predpony n-, s-, i-, t- a terc- majú obvyklé významy, a to:

normálny, sekundárny, izo a terciárny.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklady 1 až 5 a 8 až 14 ilustrujú vynález, zatial čo príklady 6 a 7 sú uvedené len pre potreby porovnania a nie sú súčasťou predloženého vynálezu. V príkladoch a obrázkoch pomery v zátvorkách sa vzťahujú k hmotnostným pomerom neutrálneho gélotvorného polyméru k iota-karagenanu a neberú do úvahy zásaditú farmaceutický aktívnu zložku alebo akúkoľvek inú zložku, ktorá môže byť prítomná.

Sprievodné obrázky

Obrázok 1. Uvoľňovanie H376/95 zo zmesí s rôznymi pomermi iota-karagenanu ku PEO, 4M. Tablety sa analyzujú 2 hodiny pri pH 1 a zostávajúci čas pri pH 6,8.

Obrázok 2. Uvoľňovanie H376/95 zo zmesí, s pomerom 20:80 PEO s rôznou molekulovou hmotnosťou ku iota-karagenanu. Tablety sa analyzujú 2 hodiny pri pH 1 a zostávajúci čas pri pH 6,8.

Obrázok 3. Uvoľňovanie H376/95 zo zmesí s pomerom 80:20 PEO s rôznou molekulovou hmotnosťou ku iota-karagenanu. Tablety sa analyzujú 2 hodiny pri pH 1 a zostávajúci čas pri pH 6,8.

Obrázok 4. Uvoľňovanie H376/95 zo zmesí s rôznymi pomermi iota-karagenanu ku HPMC, 10 000 cps. Tablety sa analyzujú 2 hodiny pri pH 1 a zostávajúci čas pri pH 6,8.

Obrázok 5. Uvoľňovanie H376/95 zo zmesí s pomerom 50:50 PEO, 4M ku iota-karagenanu. Tablety sa analyzujú 24 hodín v rôznych artificiálnych médiách.

Obrázok 6. Uvoľňovanie H376/95 z neutrálneho gélotvorného polyméru PEO, 4M, analyzované v rôznych artificiálnych médiách.

Obrázok 7. Uvoľňovanie H376/95 z aniónového polyméru ioua-karagenanu, analyzované v rôznych artificiálnych médiách.

Obrázok 8. Uvoľňovanie zlúčeniny A zo zmesí s pomerom. 50:50 iota-karagenanu k PEO, 4M, pri pH 1 a 6,8. Tablety sa analyzujú 24 hodín v rôznych artificiálnych médiách.

Obrázok 9. Uvoľňovanie zlúčeniny A zo zmesí s pomerom 50:50 iota-karagenanu k HPMC, 10 000 cps, pri pH 1 a 6,8. Tablety sa analyzujú 24 hodín v rôznych artificiálnych médiách.

Obrázok 10. Uvoľňovanie zlúčeniny B z iota-karagenanu, zmiešaného s neutrálnym polymérom PEO, 4M, v pomeroch 50:50 a 80:20. Tablety sa analyzujú 2 hodiny pri pH 1 a zostávajúci čas pri pH 6,8.

Obrázok 11. Uvoľňovanie zlúčeniny B z iota-karagenanu, zmiešaného s neutrálnym polymérom HPMC, 10 000 cps, v pomere 50:50.

Tablety sa analyzujú 2 hodiny pri pH 1 a zostávajúci čas pri pH 6,8.

Príklad 1

Tento príklad ukazuje uvolňovanie H376/95 zo zmesí s rôznym pomerom ΡΕΟ, 4M, k iota-karagenanu. Tablety sa analyzujú 2 hodiny pri pH 1 a zostávajúci čas pri pH 6,8.

Pomer PEO, 4M k iota-karagenanu	80:20	50:50	20:80
H376/95	50,5 mg	50,5 mg	50,5 mg
polyetylénoxid, 4M	160,0 mg	100,0 mg	40,0 mg
iota-karagenan	40,0 mg	100,0 mg	160,0 mg
stearylfumarát sodný	2,5 mg	2,5 mg	2,5 mg
hmotnosť tablety	253 mg	253 mg	2 53 mg

Tablety sa pripravia priamou kompresiou. Aktívna zložka, PEO 4M a iota-karagenan sa starostlivo zmiešajú a mazadlo (stearylfumarát sodný) sa pridá cez sito 0,7 mm. Po ďalšom konečnom zmiešaní sa zmes lisuje v jednoduchom tabletovacom lise za použitia 9 mm razníka. Tablety sa analyzujú 2 hodiny v rozpúšťačom kúpeli UPS II (50 ot/min, 37°C, artificiálne médiá), obsahujúcom 0,lM HCI, pH 1. Potom sa tablety prenesú do rozpúšťacieho kúpela s 0,lM fosfátovým pufrom, pH 6,8, a sú analyzované ďalej. Výsledky analýzy sú uvedené na obrázku 1. Formulácia s pomerom 50:50 vykazuje v podstate pH-nezávislý disolučný profil v rozsahu pH 1 až 6,8. Dodatočne sa dá usúdiť, že zmiešaním aniónového polyméru iota-karagenanu a neutrálneho gélotvorného polyméru PEO 4M v rôznych pomeroch je možné modifikovať rýchlosť uvoľňovania v prostrediach s rôznym pH.

Príklad 2

Tento príklad ukazuje uvolňovanie H376/95 zo zmesí s pomerom 20:80 PEO rôznej molekulovej hmotnosti k iota-karagenanu. Table36 ty sa analyzujú 2 hodiny pri pH 1 a zostávajúci čas pri pH 6,8.

Pomer PEO 4M alebo 8M k iota-karagenanu	20 : 80
H376/95	50,5 mg
polyetylénoxid	40,0 mg
iota-karagenan	160,0 mg
stearylfumarát sodný	2,5 mg
hmotnosť tablety	2 53 mg

Tablety sa pripravia a analyzujú ako je opísané v príklade 1. Výsledky analýzy sú uvedené na obrázku 2 a ukazujú, že použitie neutrálneho gélotvorného polyméru s vyššou molekulovou hmotnosťou poskytuje nižšiu rýchlosť uvoľňovania pri neutrálnom pH. Rýchlosť uvoľňovania v oblasti nízkeho pH nie je ovplyvnená, pretože formulácia obsahuje dostatočné množstvo aniónového polyméru .

Príklad 3

Tento príklad ukazuje uvoľňovanie H376/95 zo zmesí s pomerom 80:20 PEO rôznej molekulovej hmotnosti k iota-karagenanu. Tablety sa analyzujú 2 hodiny pri pH 1 a zostávajúci čas pri pH 6,8.

Pomer PEO IM alebo 4M k iota-karagenanu	80:20
H376/95	50,5 mg
polyetylénoxid	160,0 mg
iota-karagenan	40,0 mg
stearylfumarát sodný	2,5 mg
hmotnosť tablety	2 53 mg

Tablety sa pripravia a analyzujú ako je opísané v príklade 1. Obrázok 3 ukazuje, ako použitie gélotvorného polyméru s vyššou molekulovou hmotnosťou môže znížiť rýchlosť uvoľňovania pri neutrálnom pH. Súčasne spomalovací účinok pri pH 1 je menej zre37 teľný, pretože je použité menšie množstvo iota-karagenanu v porovnaní s príkladmi na obrázku 2.

Príklad 4

Tento príklad ukazuje uvoľňovanie H376/95 zo zmesí s rôznym pomerom iota-karagenanu k HPMC, 10 000 cps. Tablety sa analyzujú 2 hodiny pri pH 1 a zostávajúci čas pri pH 6,8.

Pomer HPMC k iota-karagenanu	80:20	50:50	— 20:80
H376/95	50,5 mg	50,5 mg	50,5 mg
HPMC, 10 000 cps	160,0 mg	100,0 mg	40,0 mg
iota-karagenan	40,0 mg	100,0 mg	160,0 mg
stearylfumarát sodný	2,5 mg	2,5 mg	2,5 mg
hmotnosť tablety	253 mg	2 53 mg	253 mg

Tablety sa pripravia a analyzujú ako je opísané v príklade í. Výsledky analýzy v rôznych rozpúšťacích médiách sú uvedené na obrázku 4. Formulácia s pomerom 50:50 znova ukazuje v podstate pH-nezávislý disolučný profil v oblasti pH 1 až 6,8. Môžeme vyvodiť záver, že rýchlosť uvoľňovania môže byť znova modifikovaná zmiešaním iných neutrálnych gélotvorných polymérov, v tomto prípade HPMC, 10 000 cps, s aniónovým polymérom, iota-karagenanom, v rôznych pomeroch.

Príklad 5

Tento príklad ukazuje uvoľňovanie H376/95 zo zmesí s pomerom 50:50 PEO 4M k iota-karagenanu. Tablety sa analyzujú 24 hodín v rôznych médiách.

Pomer PEO 4M k iota-karagenanu	50:50
H376/95	50,5 mg
polyetylénoxid, 4M	100,0 mg
iota-karagenan	100,0 mg

stearylfumarát sodný	2,5 mg
hmotnosť tablety	2 53 mg

Tablety sa pripravia priamym lisovaním, ako je opísané v príklade 1. Analýzy sa uskutočňujú v rozpúšťacích kúpeľoch (USP prístroj 2 s tabletami, umiestnenými v košíku¹ po prúde kvapaliny) , kde sa tri tablety analyzujú 24 hodín v každom z médií: O,1M HCl a O,1M fosfátový pufor pH 6,8 s 5% etanolu (EtOH), pridaného pre lepšiu rozpustnosť liečiva. Výsledky, uvedené na obrázku 5, jasne ukazujú, že je možné pripraviť tablety s pH-nezávislým disolučným profilom, keď sa použije kompozícia s rovnakými dielmi PEO, 4M a iota-karagenanu.

[^x Na zákazku zhotovený štvorhranný košík z pletivového drôtu, ktorý v jednej z vrchných úzkych strán je priletovaný ku koncu oceľovej tyčky. Tyčka sa pretiahne krytom rozpúšťacej nádoby a upevní sa dvoma teflónovými maticami 3,2 cm od stredu nádoby. Nižší okraj dna košíka sa umiestni 1 cm nad lopatkou miešadla. Košík sa orientuje po prúde a skúmaná tableta je v jeho rohu].

Príklad 6

Tento príklad ukazuje uvoľňovanie H376/95 z neutrálneho gélotvorného polyméru PEO 4M v neprítomnosti iota-karagenanu v rôznych artificiálnych médiách.

H376/95	50,5 mg
polyetylénoxid, 4M	200, 0 mg
stearylfumarát sodný	2,5 mg
hmotnosť tablety	2 53 mg

Tablety sa pripravia priamym lisovaním, ako je opísané v príklade 1. Analýzy sa uskutočňujú oddelene v rôznych rozpúšťacích kúpeľoch. Tablety v nádobách obsahujúcich O,1M HCl sa analyzujú 2 hodiny. Keď sa ako rozpúšťacie médium použz;e O,1M fosfátový pufor pH 6,8, tablety sa analyzujú 20 hodín. Výsledky na obrázku 6 ukazujú, že rýchlosť uvoľňovania pri pH 1 j e výrazne vyššia ako rýchlosť pri pH 6,8, čo naznačuje, že použirie samotného neutrálneho polyméru nestačí na dosiahnutie pH-nezávislého disolučného profilu pre zásadité liečivo s pH-závislou rozpustnosťou.

Príklad 7

Tento príklad ukazuje uvoľňovanie H376/95 z aniónovéhc polyméru iota-karagenanu v neprítomnosti neutrálneho gélccvorného polyméru v rôznych artificiálnych médiách.

H376/95	50,5 mg
iota-karagenan	200,0 mg
stearylfumarát sodný	2,5 mg
hmotnosť tablety	253 mg

Tablety sa pripravia priamym lisovaním, ako je opísané v príklade 1. Analýzy sa uskutočňujú oddelene v rôznych rozpúšťacích kúpeľoch, podobne ako v príklade 6. Obrázok 7 ukazuje, ako rýchlosť uvoľňovania pri pH 1 je nižšia v porovnaní s rýchlosťou pri pH 6,8. Tento efekt sme nepozorovali pri použroí akéhokoľvek iného homopolyméru, testovaného ako matricový pclvmér.

Príklad 8

Tento príklad ukazuje uvoľňovanie zlúčeniny A zo zmesi PEO 4M a iota-karagenanu v pomere 50:50. Tablety sa analyzujú 24 hodín v rôznych médiách.

	Hmotnosť (mg)
Zlúčenina A	50,0
iota-karagenan (Fluka)	100,0
PEO, 4M (Union Carbide)	100,0

PRUV™

2,5

Aktívna zložka sa zmieša manuálne s polymérmi a mazadlom. Zmes sa potom priamo lisuje do tabliet.

Príklad 9

Tento príklad ukazuje uvoľňovanie zlúčeniny A zo zmesi HPMC, 10 000 cps a iota-karagenanu v pomere 50:50. Tablety sa analyzujú 24 hodín v rôznych médiách.

	Hmotnosť (mg)
Zlúčenina A	50,0
iota-karagenan (Fluka)	100,0
HPMC, 10 000 cps	100,0
PRUV™	2,5

Aktívna zložka sa zmieša manuálne s polymérmi a mazadlom. Zmes sa potom priamo lisuje do tabliet.

Určenie kumulatívneho uvoľnenia zlúčeniny A z tabliet v príkladoch 8 a 9

Dve individuálne tablety sa testujú na uvoľňovanie _iečiva v 900 ml média za použitia USP rozpúšťacieho prístroja 2 (lopatka a košík¹) pri 50 ot/min a 37°C. Použité rozpúšťacie média sú 0,lM kyselina chlorovodíková (pH 1) a 0,lM nátriumfosfátový pufor (pH 6,8) s 5% etanolu na zlepšenie rozpustnosti liečiva. Je overené, že prídavok etanolu neovplyvňuje významne rýchlosť uvoľňovania z týchto kompozícií. In-line kvantitatívne stanovenie sa uskutoční za použitia systému vláknovej optiky (C Technologies) pri analytickej vlnovej dĺžke 235 nm pre 0,lM HCl ako rozpúšťacie médium, a pri analytickej vlnovej dĺžke 25C nm, keď sa ako rozpúšťacie médium použije modifikovaný fosfátový pufor pH 6,8. Vlnová dĺžka 350 nm sa použije ako referenčná vlnová dĺžka pre obidve médiá.

[^x Na zákazku zhotovený štvorhranný košík z pletivového drôtu, ktorý v jednej z vrchných úzkych strán je priletovaný ku koncu ocelovej tyčky. Tyčka sa pretiahne krytom rozpúšťačej nádoby a upevní sa dvoma teflónovými maticami 3,2 cm od stredu nádoby. Nižší okraj dna košíka sa umiestni 1 cm nad lopatkou miešadla. Košík sa orientuje po prúde a skúmaná tableta je v jeho rchu.]

Príklad 10

Tento príklad ukazuje uvoľňovanie zlúčeniny B zo zmesi PEO 4M a iota-karagenanu v pomere 50:50.

	Hmotnosť (mg)	Množstvo (%)
Zlúčenina B	41, 0	16
iota-karagenan (Fluka)	104,0	41 (50)
PEO, 4M (Union Carbide)	104,0	41 (50)
PRUV	2,5	1

Tablety sa pripravia ako je opísané v príklade 9. Uvoľňovacie dáta sú uvedené na obrázku 10.

Príklad 11

Tento príklad ukazuje uvoľňovanie zlúčeniny B zo zmesi PEO 4M a iota-karagenanu v pomere 80:20.

	Hmotnosť (mg)	Množstvo (%)
Zlúčenina B	41,0	16
iota-karagenan (Fluka)	41,8	17 (20)
PEO, 4M (Union Carbide)	167,2	66 (80)
PRUV	2,5	-

Tablety sa pripravia ako je opísané v príklade 9. Uvoľňovacie dáta sú uvedené na obrázku 10.

Príklad 12

Tento príklad ukazuje uvoľňovanie zlúčeniny B zo zmesi HPMC, 10 000 cps a iota-karagenanu v pomere 50:50.

	Hmotnosť (mg)	Množstvo (%)
Zlúčenina B	41,0	16
iota-karagenan (Fluka)	104,0	41 C'50)
HPMC, 10 000 cps (60SH)	104,0	41 (50)
PRUV	2,5	-

Tablety sa pripravia ako je opísané v príklade 9. Uvoľňovacie dáta sú uvedené na obrázku 11.

Príklad 13

Priame lisovanie zlúčeniny C s HPMC 10 000 cps

Aktívna látka sa zmieša s excipientami. Stearylfumarát sodný sa použije ako mazadlo. Zmes sa lisuje do tabliet vo výstredníkovom lise.

	Hmotnosť	Množstvo
Zlúčenina C	50 mg	16, 2%
HPMC, 10 000 cps	255,0 mg	82, 8%
stearylfumarát sodný	2,5 mg	1 o\° O 1-1

Uvoľňovanie:

C 5. S (min)	% uvoľnené v pufri pH 1,1	% uvoľnené v pufri pH 6,8
0	0	0
15	-	-
30	8	-
45	-	-
60	13	7
120	20	12
180	26	-

240	31	19
360	40	25
480	48	31
600	55	36
720	61	41
840	66	45
960	71	49
1080	75	53
1200	79	56

Priame lisovanie zlúčeniny C s HPMC 10 000 cps a iota-karagenanom v pomere 50:50

Aktívna látka sa zmieša s excipientami. Stearylfumarát sodný sa použije ako mazadlo. Zmes sa lisuje do tabliet vo výstredníkovom lise.

	Hmotnosť	Množstvo
Zlúčenina C	50 mg	1c, 2%
HPMC, 10 000 cps	127,0 mg	41,4%
iota-karagenan (Fluka)	127,0 mg	41,4%
stearylfumarát sodný	3,0 mg	1,0%

Uvoľňovanie

Čas (min)	% uvoľnené v pufri pH 1,1	% uvoľnené v pufri pH 6,8
0	0	-
15	-	-
30	3	-
45	-	-
60	4	4
120	7	8
180	10	-
240	12	16
360	17	27

480	22	38
600	27	51
720	32	63
840	37	75
960	41	87
1080	46	94
1200	50	97

Rýchlosť uvoľňovania sa stanoví nasledovne. Tri individuálne tablety sa testujú na uvoľňovanie liečiva v 900 ml média za použitia USP rozpúšťacieho prístroja 2 (lopatka a košík¹) pri 50 ot/min a 37°C. Použité rozpúšťacie médiá sú O,1M kyselina chlorovodíková (pH 1) a O,1M nátriumfosfátový pufor (pH 6,8). In-line kvantitatívne stanovenie sa uskutoční za použitia systému vláknovej optiky (C Technologies) pri analytickej vlnovej dĺžke 220 nm pre O,1M HCI ako rozpúšťacie médium, a pri analytickej vlnovej dĺžke 260 nm, keď sa ako rozpúšťacie médium použije fosfátový pufor pH 6,8. Vlnová dĺžka 350 nm sa použije ako referenčná vlnová dĺžka pre obidve médiá. V priebehu prvých dvoch hodín analýzy sa uvoľňovanie meria každých 15 minút a potom každú hodinu až do konca analýzy.

C¹ Na zákazku zhotovený štvorhranný košík z pletivového drôtu, ktorý v jednej z vrchných úzkych strán je priletovaný ku koncu oceľovej tyčky. Tyčka sa pretiahne krytom rozpúšťacej nádoby a upevní sa dvoma teflónovými maticami 3,2 cm od stredu nádoby. Nižší okraj dna košíka sa umiestni 1 cm nad lopatkou miešadla. Košík sa orientuje po prúde a skúmaná tableta je v jeho rohu.]

Príklad 14

	Hmotnosť	Množstvo
Zlúčenina D	100 mg	20%
HPMC, 10 000 cps	200 mg	40%
iota-karagenan	200 mg	40%

stearylfumarát sodný

5 mg

Ί 5-L o

Táto formulácia sa môže pripraviť ako je opísané v príklade

Claims (13)

1. Farmaceutická formulácia pre orálnu aplikáciu, obsahujúca iota-karagenan, jeden alebo niekoľko neutrálnych gélotvorných polymérov a zásaditú farmaceutický aktívnu zložku, táto formulácia potláča uvolňovanie zásaditej farmaceutický aktívnej zložky z formulácie pri kyslom pH.

2. Formulácia podlá nároku 1, vyznačujúca sa tým, že v nej zásaditá farmaceutický aktívna zložka obsahuje zásaditú skupinu, ktorá má pKa od 1 do 10.

3. Formulácia podľa nároku 1 alebo 2, vyznačujúca sa tým, že v nej zásaditá farmaceutický aktívna zložka je ximelagatrán alebo Ph ( 3-C1) ( 5-OCHF₂) - (R) CH (OH) C (C ; - í S) Aze-Pab(OMe); Ph(3-C1) (5-OCHF₂)-(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab(2,6-diF)(OMe) alebo Ph(3-Cl) (5-OCH₂CH₂F) -(R)CH(OH)C(O)-(S)Aze-Pab.OMe).

4. Formulácia podľa nároku 1, vyznačujúca sa tým, že v nej zásaditá farmaceutický aktívna zložka je:

4 — ({3—[7—(3,3-dimetyl-2-oxobutyl)-9-oxa-3,7-diazabicykle] 3 .3.1]non-3-yl]propyl}amino)benzonitril;

terc-butyl-2-{7-[3-(4-kyánanilino)propyl]-9-oxa-3,7-diazaoucyklo[3.3.1]non-3-yl}etylkarbamát;

terc-butyl-2-{7-[4-(4-kyánfenyl)butyl]-9-oxa-3,7-diazabioyklo[3.3.1]non-3-yl}etylkarbamát; alebo terc-butyl-2-{7 - [ (2S) -3- (4-kyánfenoxy)-2-hydroxypropyl]-9-oxa-3,7-diazabicyklo[3.3.1]non-3-yl}etylkarbamát.

5. Formulácia podľa nároku 1, 2, 3 alebo 4, vyznačujúca sa tým, že v nej neutrálny gélotvorný polymér je polyetylénoxid, polyetylénglykol alebo zmes dvoch alebo niekoľkých rôznych polyetylénoxidov.

6. Formulácia podlá nároku 1, 2, 3 alebo 4, vyznačujúca sa tým, že v nej neutrálny gélotvorný polymér je hydroxypropylmetylcelulóza alebo zmes dvoch alebo niekolkých hydroxypropylmetylcelulóz.

7. Formulácia podlá nároku 1, 2, 3 alebo 4, vyznačujúca sa tým, že v nej neutrálny gélotvorný polymér je zmes hydroxypropylmetylcelulózy a polyetylénoxidu.

8. Formulácia podlá ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúca sa tým, že v nej pomer neutrálneho gélotvorného polyméru k iota-karagenanu sa pohybuje v rozsahu 20:80 až 80:20.

9. Formulácia podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúca sa tým, že v nej zásaditá farmaceutický aktívna zložka je metoprolol.

10. Spôsob prípravy formulácie podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že sa zmieša iota-karagenan, jeden alebo niekoľko neutrálnych gélotvorných polymérov a zásaditá farmaceutický aktívna zložka.

11. Použitie formulácie podľa nároku 1 ako liečebného prostriedku.

12. Použitie formulácie podľa nároku 1 na prípravu liečebného prostriedku na terapiu kardiovaskulárnej poruchy.

13. Metóda terapie kardiovaskulárnej poruchy u pacienta, ktorý trpí uvedenou poruchou alebo je ňou ohrozený, vyznačujúca sa tým, že sa pacientovi podá terapeuticky účinné množstvo farmaceutickej formulácie podlá nároku 1.