SK14402003A3 - Kryštalické formy azitromycínu - Google Patents

Description

Oblasť vynálezu

Predmetný vynález sa týka kryštalických foriem azitromycínu. Azitromycín je komerčne dostupná zlúčenina a ide o antibiotikum, ktoré je účinné pri liečbe širokého spektra bakteriálnych infekcií. Kryštalická forma podľa predmetného vynálezu je taktiež použiteľná ako antibiotické činidlo u cicavcov, vrátane ľudí a u rýb a vtákov.

Doterajší stav techniky

Azitromycín je zlúčenina nasledujúceho vzorca:

Azitromycín je opísaný a nárokovaný v patentoch Spojených štátov amerických číslo US 4,517,359 a US 4,474,768. Azitromycín je rovnako známy pod názvom 9-deoxo-9a-aza-9a-metyl-9a-homoerytromycín A.

217/B

Medzi ďalšie patenty alebo patentové prihlášky, ktorá sa priamo alebo nepriamo týkajú azitromycínu, patrí európsky patent číslo EP 298,650, v ktorom je nárokovaný dihydrát azitromycínu, patent Spojených štátov amerických číslo US 4,963,531, v ktorom je nárokovaný spôsob liečenia infekcií spôsobených kmeňom druhu Toxoplasma gondii, patent Spojených štátov amerických číslo US 5,633,006, v ktorom je nárokovaná farmaceutická kompozícia vo forme žuvacej tablety alebo kvapalnej suspenzie so zníženou horkosťou, patent Spojených štátov amerických číslo US 5,686,587, v ktorom je nárokovaný medziprodukt pre prípravu azitromycínu, patent Spojených štátov amerických číslo US 5,605,889, v ktorom je nárokovaná orálna dávkovacia forma, ktorá znižuje potravinový efekt” spojený s podávaním azitromycínu, patent Spojených štátov amerických číslo US 6,068,859, ktorý nárokuje farmaceutickú formu s riadeným dávkovaním, ktoré obsahuje azitromycín, patent Spojených štátov amerických číslo US 5,498,699, ktorý nárokuje kompozíciu obsahujúcu azitromycín v kombinácii s dvojväzbovými alebo trojväzbovými kovmi, európsky patent číslo EP 925,789, ktorý nárokuje spôsob liečenia očných infekcií, čínska patentová prihláška číslo CN 1123279A, ktorá sa týka solí azitromycínu rozpustných vo vode, čínska patentová prihláška číslo CN 1046945C, ktorá sa týka dvojitých solí sodnej soli azitromycíndihydrogénfosfátu, čínska patentová prihláška číslo CN 1114960A, ktorá sa týka kryštálov azitromycínu, čínska patentová prihláška číslo CN 1161971A, ktorá sa týka kryštálov azitromycínu, čínska patentová prihláška číslo CN 1205338A, ktorá sa týka spôsobu prípravy vo vode rozpustných solí azitromycínu, zverejnená medzinárodná prihláška číslo WO 00/32203, ktorá sa týka etanolátu azitromycínu a európska patentová prihláška číslo EP 984,020, ktorá sa týka klatrátu monohydrátu azitromycínu v izopropylalkohole.

Podstata vynálezu

Predmetný vynález sa týka kryštalických foriem azitromycínu. Pokiaľ nie je uvedené inak, rozumie sa v tomto texte výrazmi ”kryštalická/é forma/y” alebo ”forma/y” jedna alebo viac kryštalických foriem azitromycínu.

217/B

Konkrétne sa tento vynález týka kryštalickej formy azitromycínu, ktorá je vybraná z nasledujúcich foriem: C, D, E, F, G, H, J, M, N, O, P, Q a R, pričom uvedené kryštalické formy sú definované v tomto texte. Kryštalické formy F, G, H, J, M, N, O a P spadajú do skupiny azitromycínu I a patrí do monoklinickej priestorovej grupy P2i s bunkou rozmerov a = 16,3 ± 0,3 A, b = 16,2 ± 0,3 A, c = 18,4 ± 0,3 A a β = 109 ± 2°. Kryštalické formy C, D, E a R spadajú do skupiny azitromycínov II a patria do ortorombické priestorové grupy P2^2^ s bunkou rozmerov a = 0,9 ± 0,4 Á, b = 12,3 ± 0,5 A a c = 45,8 ± 0,5 A. Kryštalická forma Q potom nespadá ani do jednej z uvedených skupín I a II.

Kryštalickú formu azitromycínu F možno v monokryštalickej štruktúre opísať sumárnym vzorcom C₃8H72N2Oi2.H2O.0,5C₂H5OH a ide o hemietanolát/monohydrát azitromycínu. Kryštalická forma F je ďalej charakteristická tým, že v práškových vzorcoch obsahuje 2 až 5 hmotnostných percent vody a 1 až 4 hmotnostné percentá etanolu a spektrom práškovej rôntgenovej difrakcie, ktoré obsahuje piky 2Θ uvedené v tabuľke 9. Spektrum ¹³C NMR merané v pevnom stave (¹³C ssNMR) kryštalickej formy F obsahuje dva piky s chemickým posunom približne 179 ± 1 ppm, ktorými sú dva piky s chemickým posunom 179,5 ± 0,2 ppm a 178,6 ± 0,2 ppm, skupinu piatich píkov s chemickým posunom v rozmedzí od 6,4 do 11,0 ppm a piky zodpovedajúce etanolu, ktorých chemický posun je 58,0 ± 0,5 ppm a 17,2 ± 0,5 ppm. Uvedené piky zodpovedajúce rozpúšťadlu môžu byť široké a pomerne málo intenzívne.

Ďalej sa predmetný vynález týka v podstate čistej kryštalickej formy azitromycínu F , kryštalickej formy azitromycínu F, ktorá podstate neobsahuje kryštalickú formu azitromycínu G a kryštalickej formy azitromycínu F, ktorá v podstate neobsahuje dihydrát azitromycínu.

Ďalej sa predmetný vynález týka spôsobu prípravy kryštalickej formy azitromycínu F, ktorá zahrňuje úplné rozpustenie azitromycínu v etanole pri teplote v rozmedzí od 40 do 70 °C a ochladenie vzniknutého roztoku spojené so zmenšením objemu etanolu alebo s prídavkom vody za účelom docielenia kryštalizácie. Do rozsahu tohto vynálezu spadajú rovnako spôsoby prípravy v podstate čistej kryštalickej formy azitromycínu F, kryštalickej formy azitromycínu

217/B

F, ktorá v podstate neobsahuje kryštalickú formu azitromycínu G a kryštalickej formy azitromycínu F, ktorá v podstate neobsahuje dihydrát azitromycínu.

Kryštalickú formu azitromycínu G možno v monokryštalickej štruktúre opísať sumárnym vzorcom C₃₈H72N₂O₁2.1,5H2O a ide o seskvihydrát azitromycínu. Kryštalická forma G je ďalej charakteristická tým, že v práškových vzorcoch obsahuje 2,5 až 6 hmotnostných percent vody a menej ako 1 hmotnostné percento organického rozpúšťadla a spektrum práškovej rontgenovej difrakcie, ktoré obsahuje piky 2Θ uvedené v tabuľke 9. Spektrum ¹³C NMR merané v pevnom stave (¹³C ssNMR) kryštalickej formy G obsahuje jeden pík s chemickým posunom približne 179 ± 1 ppm, ktorým je pík s chemickým posunom 179,5 ± 0,2 ppm (ktorý môže byť rozštiepený na piky s rozdielom chemických posunov menším ako 0,3 ppm) a päť píkov s chemickým posunom v rozmedzí od 6,3 do 11,0 ppm.

Ďalej sa predmetný vynález týka v podstate čistej kryštalickej formy azitromycínu G a kryštalickej formy azitromycínu G, ktorá v podstate neobsahuje dihydrát azitromycínu.

Ďalej sa predmetný vynález týka spôsobu prípravy v podstate čistej kryštalickej formy azitromycínu G a kryštalickej formy azitromycínu G, ktorá v podstate neobsahuje dihydrát azitromycínu, ktoré zahrňujú úplné rozpustenie azitromycínu v zmesi metanolu a vody alebo v zmesi acetónu a vody pri teplote v rozmedzí od 40 do 60 °C a ochladenie vzniknutého roztoku za účelom docielenia kryštalizácie.

Kryštalickú formu azitromycínu H možno opísať sumárnym vzorcom C38H72N2Oi2.H2O.C₃H₈O₂ a ide o hemi-1,2-propándiolát/monohydrát azitromycínu.

Kryštalickú formu azitromycínu J možno v monokryštalickej štruktúre opísať sumárnym vzorcom C₃₈H7₂N2Oi2.H₂O.0,5C₃H7OH a ide o hemi-npropanolát/monohydrát azitromycínu. Kryštalická forma J je ďalej charakteristická tým, že v práškových vzorcoch obsahuje 2 až 5 hmotnostných percent vody a 1 až 5 hmotnostných percent 1-propanolu a spektrom práškovej

217/B • · · · róntgenovej difrakcie, ktoré obsahuje piky 2Θ uvedené v tabuľke 9. Spektrum ¹³C NMR merané v pevnom stave (¹³C ssNMR) kryštalickej formy J obsahuje dva piky s chemickým posunom približne 179 ± 1 ppm, ktorými sú piky s chemickým posunom 179,6 ± 0,2 ppm a 178,4 ± 0,2 ppm, skupinu piatich píkov s chemickým posunom v rozmedzí od 6,6 do 11,7 ppm a pík odpovedajúci npropanolu, ktorého chemický posun je 25,2 ± 0,4 ppm. Uvedený pík zodpovedajúci rozpúšťadlu môže byť široký a pomerne málo intenzívny.

Ďalej sa predmetný vynález týka spôsobu prípravy kryštalickej formy azitromycínu J, ktorá zahrňuje úplné rozpustenie azitromycínu v n-propanole pri teplote v rozmedzí od 25 do 55 °C a ochladenie vzniknutého roztoku spojené s prídavkom vody za účelom docielenia kryštalizácie.

Kryštalickú formu azitromycínu M možno opísať sumárnym vzorcom C38H₇2N2O₁₂.H2O.0,5C3H₇OH a ide o hemiizopropylalkoholát/monohydrát azitromycínu. Kryštalická forma M je dalej charakteristická tým, že v práškových vzorcoch obsahuje 2 až 5 hmotnostných percent vody a 1 až 4 hmotnostné percentá 2-propanolu a spektrom práškovej róntgenovej difrakcie, ktoré obsahuje piky 2Θ uvedené v tabuľke 9. Spektrum ¹³C NMR merané v pevnom stave (¹³C ssNMR) kryštalickej formy M obsahuje jeden pík s chemickým posunom približne 179 ± 1 ppm, ktorým je pík s chemickým posunom 179,6 ± 0,2 ppm, pík s chemickým posunom 41,9 ± 0,2 ppm a skupinu piatich píkov s chemickým posunom v rozmedzí od 6,9 do 16,4 ppm a pík zodpovedajúci izopropylaikoholu, ktorého chemický posun je 26,0 ± 0,4 ppm. Uvedený pík zodpovedajúci rozpúšťadlu môže byť široký a pomerne málo intenzívny.

Ďalej sa predmetný vynález týka v podstate čistej kryštalickej formy azitromycínu M, kryštalickej formy azitromycínu M, ktorá v podstate neobsahuje kryštalickú formu azitromycínu G a kryštalickej formy azitromycínu M, ktoré v podstate neobsahuje dihydrát azitromycínu.

Ďalej sa predmetný vynález týka spôsobu prípravy v podstate čistej kryštalickej formy azitromycínu M, kryštalickej formy azitromycínu M, ktorá v podstate neobsahuje kryštalickú formu azitromycínu G, a kryštalickej formy azitromycínu M, ktorá v podstate neobsahuje dihydrát azitromycínu, ktoré

217/B zahrňujú úplné rozpustenie azitromycínu v izopropylalkohole pri teplote v rozmedzí od 40 do 60 °C a zníženie obsahu izopropylalkoholu s následným ochladením zmesi alebo ochladenie zmesi s následným prídavkom vody za účelom docielenia kryštalizácie.

Kryštalickou formou azitromycínu N je zmes izomorfov azitromycínu zo skupiny I. Uvedená zmes môže obsahovať rôzne percentuálne podiely izomorfov, t.j. kryštalických foriem F, G, H, J, M a ďalších a rôzne množstvá vody a organických rozpúšťadiel, ako je etanol, izopropylalkohol, npropylalkohol, propylénglykol, acetón, acetonitril, butanol, pentanol atď. Množstvo vody, vyjadrené v hmotnostných percentách sa môže pohybovať v rozmedzí od 1 hmotnostného percenta do 5 hmotnostných percent a celkové množstvo organických rozpúšťadiel sa môže pohybovať v rozmedzí od 2 hmotnostných percent do 5 hmotnostných percent, pričom množstvo každého rozpúšťadla sa môže pohybovať v rozmedzí od 0,5 hmotnostného percenta do 4 hmotnostných percent.

Vzorky formy azitromycínu N vykazujú v rôznych proporciách všetky charakteristické piky foriem azitromycínu zo skupiny I. Kryštalickú formu azitromycínu N je možné charakterizovať ako zmesové kryštály” alebo kryštalické pevné roztoky” izomorfov zo skupiny I.

Kryštalická forma azitromycínu n vykazuje chemické posuny, ktoré sú kombináciou píkov jednotlivých izomorfov zo skupiny I. U uvedených píkov sa môžu v rozsahu ± 0,2 ppm meniť chemické posuny a ich relatívne intenzity a šírky, čo je spôsobené zmiešaním rôznych podielov jednotlivých izomorfov, ktoré obsahuje kryštalický pevný roztok, ktorý tvorí kryštalickú formu azitromycínu N.

Kryštalickú formu azitromycínu P možno opísať sumárnych vzorcom C₃8H₇₂N₂O₁₂.H₂O.0,5 CsHi₂O a ide o hemi-n-pentanolát/monohydrát azitromycínu.

217/B . A_r' ^r ' r

Kryštalickú formu azitromycínu Q možno opísať sumárnym vzorcom

C₃8H72N₂Oi₂.H₂O.0,5C₄H8O a ide o hemitetrahydrofuranát/monohydrátu azitromycínu.

Kryštalickú formu azitromycínu R možno opísať sumárnym vzorcom C38H7₂N₂Oi₂.H₂O.C₅H₁₂O a ide o mono-metyl-terc-butyleterát/monohydrát azitromycínu.

Kryštalickú formu azitromycínu D možno v jej monokryštalickej forme opísať sumárnym vzorcom C38H72N₂O₁₂.H₂O.C₆H₁₂ a ide o monocyklohexanát/monohydrát azitromycínu. Kryštalická forma D je ďalej charakteristická tým, že v práškových vzorcoch obsahuje 2 až 6 hmotnostných percent vody a 3 až 12 hmotnostných percent cyklohexánu a spektrom práškovej rôntgenovej difrakcie, ktoré obsahuje piky 2Θ uvedené v tabuľke 9. Spektrum ¹³C NMR merané v pevnom stave (¹³C ssNMR) kryštalickej formy D obsahuje jeden pík s chemickým posunom približne 179 ± 1 ppm, ktorým je pík s chemickým posunom 178,1 ± 0,2 ppm, piky s chemickými posunmi 103,9 ± 0,2 ppm, 95,1 ± 0,2 ppm, 84,2 ± 0,2 ppm a skupinu troch píkov s chemickým posunom v rozmedzí od 8,4 do 11 ppm.

Ďalej sa predmetný vynález týka spôsobov prípravy kryštalickej formy D azitromycínu, ktoré zahrňujú suspendovanie dihydrátu azitromycínu v cyklohexáne.

Kryštalickú formu azitromycínu E možno opísať sumárnym vzorcom C38H7₂N2Oi2.H₂O.C₄H8O a ide o mono-tetrahydrofuranát/monohydrát azitromycínu.

Predmetný vynález sa ďalej týka azitromycínu v amorfnej forme a spôsobu prípravy amorfného azitromycínu, ktorý zahrňuje odstránenie vody a/alebo rozpúšťadiel z kryštálovej mriežky azitromycínu. Práškové rôntgenové difrakčné spektrum amorfného azitromycínu neobsahuje ostré piky 2Θ, ale naopak obsahuje dva široké zaguľatené piky. Prvý z týchto píkov sa nachádza v rozmedzí medzi 4° a 13°. Druhý z týchto píkov sa potom nachádza v rozmedzí medzi 13° a 25°.

217/B

Predmetný vynález sa ďalej týka farmaceutických kompozícií na liečenie bakteriálnej infekcie alebo protozoálnej infekcie u cicavca, ryby alebo vtáka, pričom tieto farmaceutické kompozície zahrňujú terapeuticky účinné množstvo vyššie opísaných kryštalických zlúčenín, alebo amorfný azitromycín a farmaceutický prijateľný nosič.

Predmetný vynález sa ďalej týka spôsobu liečby bakteriálnej infekcie alebo protozoálnej infekcie u cicavca, ryby alebo vtáka, ktorý zahrňuje podávanie terapeuticky účinného množstva vyššie opísaných kryštalických zlúčenín, alebo amorfného azitromycínu uvedenému cicavcovi, rybe alebo vtákovi.

Predmetný vynález sa ďalej týka spôsobu prípravy kryštalických foriem azitromycínu, ktoré zahrňujú suspendáciu azitromycínu v príslušnom rozpúšťadle alebo rozpustenie azitromycínu v zahriatom organickom rozpúšťadle alebo v zmesi organického rozpúšťadla/vody a vyzrážanie kryštalického azitromycínu ochladením uvedeného roztoku, ktoré je spojené so znížením objemu rozpúšťadla, alebo rozpustenie azitromycínu v rozpúšťadle alebo v zmesi rozpúšťadiel a vyzrážanie kryštalického azitromycínu pridaním vody do vzniknutého roztoku. Amorfná forma azitromycínu sa pripravuje zahrievaním kryštalickej formy azitromycínu vo vákuu.

Výrazom liečenie alebo liečba” sa v tomto texte rozumie, pokiaľ nie je uvedené inak, liečenie alebo prevencia bakteriálnej infekcie alebo protozoálnej infekcie, ak je zaistené spôsobom podľa predmetného vynálezu, a to vrátane vyliečenia uvedenej infekcie, zníženia symptómov uvedenej infekcie alebo spomalenia progresie uvedenej infekcie. Výraz liečiť” je v tomto texte definovaný v súlade s definíciou zhora uvedených výrazov liečenie” alebo liečba”.

Výrazom ”v podstate neobsahuje” pri opise danej kryštalickej formy azitromycínu sa v tomto texte rozumie, že táto kryštalická forma obsahuje menej ako 20 hmotnostných percent označenej/označených kryštalickej/ kryštalických formy/foriem, výhodnejšie táto kryštalická forma obsahuje menej ako 10 hmotnostných percent označenej/označených kryštalickej/kryštalických

217/B

Γ r · e e r r c r formy/foriem, výhodnejšie táto kryštalická forma obsahuje menej ako 5 hmotnostných percent označenej/označených kryštalickej/kryštalických formy/foriem a ešte výhodnejšie táto kryštalická forma obsahuje menej ako 1 hmotnostné percento označenej/označených kryštalickej/kryštalických formy/foriem. Tak napríklad formulácia kryštalická forma azitromycínu F, ktorá v podstate neobsahuje dihydrát azitromycínu” opisuje kryštalickú formu azitromycínu F obsahujúcu 20 hmotnostných percent alebo menej dihydrátu azitromycínu, výhodnejšie 10 hmotnostných percent alebo menej dihydrátu azitromycínu, najvýhodnejšie potom 1 hmotnostné percento alebo menej dihydrátu azitromycínu.

Výrazom ”v podstate čistá” pri opise danej kryštalickej formy azitromycínu sa v tomto texte rozumie, že táto kryštalická forma obsahuje menej ako 20 hmotnostných percent reziduálnych zložiek, ako je/sú iná/iné polymorfná alebo izomorfná kryštalická/kryštalické forma/formy azitromycínu. Vo výhodnom uskutočnení tohto vynálezu obsahuje v podstate čistá forma azitromycínu menej ako 10 hmotnostných percent alternatívnych polymorfných alebo izomorfných kryštalických foriem azitromycínu, výhodnejšie menej ako 5 hmotnostných percent alternatívnych polymorfných alebo izomorfných kryštalických foriem azitromycínu a najvýhodnejšie menej ako 1 hmotnostné percento alternatívnych polymorfných alebo izomorfných kryštalických foriem azitromycínu.

Výrazom ”v podstate bez prítomnosti dihydrátu azitromycínu” pri opise čistého kryštalického azitromycínu sa v tomto texte rozumie, že uvedený kryštalický azitromycín obsahuje menej ako približne 5 hmotnostných percent dihydrátu azitromycínu, výhodnejšie menej ako približne 3 hmotnostné percentá dihydrátu azitromycínu a najvýhodnejšie menej ako 1 hmotnostné percento dihydrátu azitromycínu.

Pokiaľ nie je uvedené inak, rozumie sa v tomto texte výrazom bakteriálna infekcia” alebo protozoálna infekcia” bakteriálna infekcia a protozoálna infekcia a choroby spôsobené týmito infekciami, ktoré sa vyskytujú u cicavcov, rýb a vtákov, a ďalej poruchy súvisiace s bakteriálnymi infekciami a

217/B protozoálnymi infekciami, ktoré je možné liečiť, alebo ktorým je možné zabrániť, podávaním antibiotík, ako sú zlúčeniny podľa predmetného vynálezu. Skupina takýchto bakteriálnych infekcií a protozoálnych infekcií a porúch súvisiacich s uvedenými infekciami zahrňuje pneumóniu, zápal stredného ucha, sinusitídu, bronchitídu, tonzilitídu a mastoiditídu súvisiacu s infekciou nasledujúcimi mikroorganizmami: Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Moraxella catarrhalis, Staphylococcus aureus alebo PeptoStreptococcus spp., faryngitídu, reumatickú horúčku a glomerulonefritídu súvisiacu s infekciou nasledujúcimi mikroorganizmami: Streptococcus pyogenes, streptokokmi zo skupiny C a G, Clostridium diptheriae alebo Actinobacillus haemolyticum, infekcie respiračného traktu súvisiace s infekciou nasledujúcimi mikroorganizmami: Mycoplasma pneumoniae, Legionella pneumophila, Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae alebo Chlamydia pneumoniae, nekomplikované infekcie kože a mäkkého tkaniva, abscesy a osteomyelitídu a horúčku omladníc súvisiacu s infekciou nasledujúcimi mikroorganizmami: Staphylococcus aureus, koaguláza-pozitívnymi stafylokokmi (t.j. S. epidermidis, S. hemolyticus, atd.), Streptococcus pyogenes, Streptococcus agalactiae, Streptokoky zo skupín C - F (streptokoky minutecolony), streptokokmi viridans, Corynebacterium minutissimum, Clostridium spp., alebo Bartonella henselae, nekomplikované akútne infekcie močových ciest súvisiace s infekciou nasledujúcimi mikroorganizmami: Staphylococcus saprophytics alebo Enterococcus spp., uretritídu a cervicitídu, a sexuálne prenosné choroby súvisiace s infekciou nasledujúcimi mikroorganizmami: Chlamydia trachomatis, Haemophilus ducreyi, Treponema pallidum, Ureaplasma urealyticum alebo Neiserria gonorrhoea, toxínové choroby súvisiace s infekciami mikroorganizmom S. aureus (syndróm otravy jedlom a syndróm toxického šoku), alebo streptokokmi zo skupín A, B a C; Vredy súvisiace s infekciou mikroorganizmom Helicobacter pylori, systemické febrilné syndrómy súvisiace s infekciou mikroorganizmom Borrelia recurrentis; lymskú chorobu súvisiacu s infekciou mikroorganizmom Borrelia burgdorferi, konjunktivitídu, keratitídu a dakrocystitídu súvisiacu s infekciou nasledujúcimi mikroorganizmami: Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae, S. aureus,

217/B

S. pneumoniae, S pyogenes, H. influenzae alebo Listería spp., roztrúsený Mycobacterium avium complex (MAC) súvisiaci s infekciou mikroorganizmom Mycobacterium avium alebo Mycobacterium intracellulare, gastroenteritídu súvisiacu s infekciou mikroorganizmom Campylobacter jejuni, črevnú protózu súvisiacu s infekciou mikroorganizmom Cryptosporidium spp., odontogénnu infekciu súvisiacu s infekciou streptokokmi viridans, opakujúci sa kašeľ súvisiaci s infekciou mikroorganizmom Bordetella pertussis, plynovú gangrénu súvisiacu s infekciou mikroorganizmom Clostridium perfringens alebo Bacteroides spp., a aterosklerózu súvisiacu s infekciou mikroorganizmom Helicobacter pylori alebo Chlamydia pneumoniae, bez akéhokoľvek obmedzenia na ďalej uvedené príklady. Do uvedenej skupiny patrí tiež ateroskleróza a malária. Skupina bakteriálnych a protozoálnych infekcií a porúch súvisiacich s týmito infekciami, ktoré je možné liečiť alebo ktorým je možné zabrániť u zvierat, zahrňuje bovinné respiračné ochorenia súvisiace s infekciou nasledujúcimi mikroorganizmami: P. haem., P. multocida, Mycoplasma bovis alebo Bordatella spp., črevné ochorenia kráv súvisiace s infekciou mikroorganizmom E. coli alebo prvokmi (t.j. prvokom kokcidia, Cryptosporidia atď.), mastitídu dojníc súvisiacu s infekciou nasledujúcimi mikroorganizmami: Staph. aureus , Strep. uberís, Strep. agalactiae, Strep. dysgalactiae, Klebsiella spp., Corynebacterium alebo Entercoccus spp., respiračné ochorenia ošípaných súvisiace s infekciou nasledujúcimi organizmami: A. pleuro, P. multocida alebo Mycoplasma spp.; črevné ochorenia ošípaných súvisiace s infekciou nasledujúcvimi mikroorganizmami: E. coli, Lawsonia intracelluaris, Salmonella alebo Serpulina hyodylsinteriae, kravskú paznehticu súvisiacu s infekciou mikroorganizmom Fusobacterium spp., kravskú metritídu súvisiacu s infekciou mikroorganizmom E. coli, kravské vlasovité bradavice súvisiace s infekciou mikroorganizmami Fusobacterium necrophorum alebo Bacteroides nodosus, kravskú žmurku súvisiacu s infekciou mikroorganizmom Moraxella bovis, predčasné ukončenie brezivosti u kráv súvisiace s infekciou prvokom (t.j. neosporium), infekcie močových ciest u psov a mačiek súvisiace s infekciou mikroorganizmom E. coli, kožné infekcie a infekcie mäkkého tkaniva u psov a mačiek súvisiace s infekciou nasledujúcimi mikroorganizmami: Staph. epidermidis, Staph.

217/B c r t ty. ,./

Intermedius, koaguláza-negatívnymi stafylokokmi alebo P. multocida, a dentálne alebo ústne infekcie u psov a mačiek súvisiace s infekciou nasledujúcimi mikroorganizmami: Alcaligenes spp., Bacteroides spp., Clostrídium spp., Enterobacter spp., Eubacterium, PeptoStreptococcus, Porphyromonas alebo Prevotella, bez akéhokoľvek obmedzenia na uvedené príklady. Ďalšie bakteriálne infekcie a protozoálne infekcie a poruchy s nimi súvisiace, ktoré je možné liečiť alebo ktorým je možné zabrániť spôsobom podľa predmetného vynálezu, sú opísané v publikácii J. P. Sanford a spolupracovníci, ”The Sanford Guide To Antimicrobial Therapy,” 26. vydanie (Antimicrobial Therapy, Inc., 1996).

Do rozsahu tohto vynálezu spadajú tiež izotopovo označené zlúčeniny, v ktorých je jeden alebo viac atómov nahradených atómom, ktorého atómová hmotnosť a hmotnostné číslo sa líši od atómovej hmotnosti a hmotnostného čísla atómu rovnakého prvku, ktorý sa obvykle nachádza v prírode. Ako príklad izotopov, ktoré môžu byť vpravené do zlúčenín podľa predmetného vynálezu je možné uviesť izotopy vodíka, uhlíka, dusíka, kyslíka, fosforu, síry, fluóru a chlóru, ako je ²H, ³H, ¹³C, ¹⁴C, ¹⁵N, ¹⁸O a ¹⁷O. Takéto rádioaktívne označené a stabilné izotopovo označené zlúčeniny sú vhodné pre použitie vo výskume alebo v diagnostických nástrojoch.

Prehľad obrázkov na výkresoch

Na obrázku 1 je vypočítaný tvar spektra práškovej difrakcie kryštalickej formy azitromycínu A. Na osi x sú uvedené hodnoty v stupňoch 2-théta (2Θ). Na osi y je znázornená intenzita nameraných impulzov.

Na obrázku 2 je experimentálne získaný tvar spektra práškovej difrakcie kryštalickej formy azitromycínu A. Na osi x sú uvedené hodnoty v stupňoch 2théta (2Θ). Na osi y je znázornená intenzita nameraných impulzov.

Na obrázku 3 je znázornený prekrytie obrázkov 1 a 2, pričom vypočítanému tvaru difrakčného spektra kryštalickej formy azitromycínu A (obr. 1) zodpovedá spodná krivka a experimentálne získanému tvaru spektra

217/B • » • e e e c ·13 kryštalickej formy azitromycínu A (obr. 2) zodpovedá horná krivka. Na osi x sú uvedené hodnoty v stupňoch 2-théta (2Θ). Na osi y je znázornená intenzita nameraných impulzov.

Na obrázku 4 je vypočítaný tvar spektra práškovej difrakcie kryštalickej formy azitromycínu C. Na osi x sú uvedené hodnoty v stupňoch 2-théta (2Θ). Na osi y je znázornená intenzita nameraných impulzov.

Na obrázku 5 je vypočítaný tvar spektra práškovej difrakcie kryštalickej formy azitromycínu D. Na osi x sú uvedené hodnoty v stupňoch 2-théta (2Θ). Na osi y je znázornená intenzita nameraných impulzov.

Na obrázku 6 je experimentálne získaný tvar spektra práškovej difrakcie kryštalickej formy azitromycínu D. Na osi x sú uvedené hodnoty v stupňoch 2théta (2Θ). Na osi y je znázornená intenzita nameraných impulzov.

Na obrázku 7 je znázornené prekrytie obrázkov 5 a 6, pričom vypočítanému tvaru difrakčného spektra kryštalickej formy azitromycínu D (obr. 5) zodpovedá spodná krivka a experimentálne získanému tvaru spektra kryštalickej formy azitromycínu D (obr. 6) zodpovedá horná krivka. Na osi x sú uvedené hodnoty v stupňoch 2-théta (2Θ). Na osi y je znázornená intenzita nameraných impulzov.

Na obrázku 8 je vypočítaný tvar spektra práškovej difrakcie kryštalickej formy azitromycínu E. Na osi x sú uvedené hodnoty v stupňoch 2-théta (2Θ). Na osi y je znázornená intenzita nameraných impulzov.

Na obrázku 9 je vypočítaný tvar spektra práškovej difrakcie kryštalickej formy azitromycínu F. Na osi x sú uvedené hodnoty v stupňoch 2-théta (2Θ). Na osi y je znázornená intenzita nameraných impulzov.

Na obrázku 10 je experimentálne získaný tvar spektra práškovej difrakcie kryštalickej formy azitromycínu F. Na osi x sú uvedené hodnoty v stupňoch 2théta (2Θ). Na osi y je znázornená intenzita nameraných impulzov.

217/B

Na obrázku 11 je znázornené prekrytie obrázkov 9 a 10, pričom vypočítanému tvaru difrakčného spektra kryštalickej formy azitromycinu F (obr. 9) zodpovedá spodná krivka a experimentálne získanému tvaru spektra kryštalickej formy azitromycinu F (obr. 10) zodpovedá horná krivka. Na osi x sú uvedené hodnoty v stupňoch 2-théta (20). Na osi y je znázornená intenzita nameraných impulzov.

Na obrázku 12 je vypočítaný tvar spektra práškovej difrakcie kryštalickej formy azitromycinu G. Na osi x sú uvedené hodnoty v stupňoch 2-théta (20). Na osi y je znázornená intenzita nameraných impulzov.

Na obrázku 13 je experimentálne získaný tvar spektra práškovej difrakcie kryštalickej formy azitromycinu G. Na osi x sú uvedené hodnoty v stupňoch 2théta (20). Na osi y je znázornená intenzita nameraných impulzov.

Na obrázku 14 je znázornené prekrytie obrázkov 12 a 13, pričom vypočítanému tvaru difrakčného spektra kryštalickej formy azitromycinu G (obr. 12) zodpovedá spodná krivka a experimentálne získanému tvaru spektra kryštalickej formy azitromycinu G (obr. 13) zodpovedá horná krivka. Na osi x sú uvedené hodnoty v stupňoch 2-théta (20). Na osi y je znázornená intenzita nameraných impulzov.

Na obrázku 15 je vypočítaný tvar spektra práškovej difrakcie kryštalickej formy azitromycinu J. Na osi x sú uvedené hodnoty v stupňoch 2-théta (20). Na osi y je znázornená intenzita nameraných impulzov.

Na obrázku 16 je experimentálne získaný tvar spektra práškovej difrakcie kryštalickej formy azitromycinu J. Na osi x sú uvedené hodnoty v stupňoch 2théta (20). Na osi y je znázornená intenzita nameraných impulzov.

Na obrázku 17 je znázornené prekrytie obrázkov 15 a 16, pričom vypočítanému tvaru difrakčného spektra kryštalickej formy azitromycinu J (obr. 15) zodpovedá spodná krivka a experimentálne získanému tvaru spektra kryštalickej formy azitromycinu J (obr. 16) zodpovedá horná krivka. Na osi x sú uvedené hodnoty v stupňoch 2-théta (20). Na osi y je znázornená intenzita

217/B nameraných impulzov.

Na obrázku 18 je experimentálne získaný tvar spektra práškovej difrakcie kryštalickej formy azitromycínu M. Na osi x sú uvedené hodnoty v stupňoch 2théta (2Θ). Na osi y je znázornená intenzita nameraných impulzov.

Na obrázku 19 je experimentálne získaný tvar spektra práškovej difrakcie kryštalickej formy azitromycínu N. Na osi x sú uvedené hodnoty v stupňoch 2théta (2Θ). Na osi y je znázornená intenzita nameraných impulzov.

Na obrázku 20 je experimentálne získaný tvar spektra práškovej difrakcie amorfného azitromycínu. Na osi x sú uvedené hodnoty v stupňoch 2-théta (2Θ). Na osi y je znázornená intenzita nameraných impulzov.

Na obrázku 21 je tvar ¹³C NMR spektra kryštalickej formy azitromycínu A, ktoré bolo merané v pevnom stave.

Na obrázku 22 je tvar ¹³C NMR spektra kryštalickej formy azitromycínu D, ktoré bolo merané v pevnom stave.

Na obrázku 23 je tvar ¹³C NMR spektra kryštalickej formy azitromycínu F, ktoré bolo merané v pevnom stave.

Na obrázku 24 je tvar ¹³C NMR spektra kryštalickej formy azitromycínu G, ktoré bolo merané v pevnom stave.

Na obrázku 25 je tvar ¹³C NMR spektra kryštalickej formy azitromycínu J, ktoré bolo merané v pevnom stave.

Na obrázku 26 je tvar ¹³C NMR spektra kryštalickej formy azitromycínu

M, ktoré bolo merané v pevnom stave.

Na obrázku 27 je tvar ¹³C NMR spektra kryštalickej formy azitromycínu

N, ktoré bolo merané v pevnom stave.

Na obrázku 28 je tvar ¹³C NMR spektra amorfného azitromycínu, ktoré bolo merané v pevnom stave.

Na obrázku 29 je tvar ¹³C NMR spektra farmaceutickej tablety obsahujúcej kryštalickú formu azitromycínu G, ktoré bolo merané v pevnom

217/B stave.

Na obrázku 30 je experimentálne získaný tvar spektra práškovej difrakcie kryštalickej formy azitromycínu Q. Na osi x sú uvedené hodnoty v stupňoch 2théta (2Θ). Na osi y je znázornená intenzita nameraných impulzov.

Na obrázku 31 je experimentálne získaný tvar spektra práškovej difrakcie kryštalickej formy azitromycínu R. Na osi x sú uvedené hodnoty v stupňoch 2théta (2Θ). Na osi y je znázornená intenzita nameraných impulzov.

Na obrázku 32 je tvar ¹³C NMR spektra kryštalickej formy azitromycínu H, ktoré bolo merané v pevnom stave.

Na obrázku 33 je tvar ¹³C NMR spektra kryštalickej formy azitromycínu R, ktoré bolo merané v pevnom stave.

Bolo zistené, že azitromycín existuje v rôznych kryštalických formách. Dihydrát, t.j. kryštalická forma A, a nestechiometrický hydrát, t.j. kryštalická forma B, sú opísané v európskom patente číslo EP 298 650 a v patente Spojených štátov amerických číslo US 4,412,359. Ďalej bolo objavených ďalších 16 foriem, ktoré sa označujú ako kryštalické formy C, D, E, F, G, H, I, J, K, L, M, N, O, P, Q a R. Tieto formy sú buď hydráty alebo hydrát/solváty voľnej bázy azitromycínu. Kryštalickými formami L a K sú metastabilné nižšie hydráty kryštalickej formy A, ktoré je možné detegovať pri vyšších teplotách. Boli opísané kryštalické štruktúry foriem A, C, D, E, F, G, H, J a O. Štruktúrne dáta týkajúce sa týchto kryštalických foriem sú opísané nižšie.

217/B pr ec r r r r r e e r r r r r - e f r r r r r c r , r r C

C r c r ' r r <.

Kryštalografické dáta formy azitromycínu A

Kryštalická forma A C38H72N2O12.2H2O

Tabuľka 1

Empirický vzorec Molekulová hmotnosť Veľkosť kryštálu (milimeter) Priestorová grupa Rozmery bunky

Z (na vzorec) Hustota (gram/cm³) R

785,2

0,19x0,24x0,36 P2i2i2i ortorombická a = 14,735 (5) A b = 16,844 (7) A c= 17,81 (1) A a = 90° β = 90° γ = 90°

1,18

0,060

217/B

Kryštalografické dáta formy azitromycínu C

Kryštalická forma C C38H72N2O12.H2O

Tabuľka 2

Empirický vzorec Molekulová hmotnosť Veľkosť kryštálu (milimeter) Priestorová grupa Rozmery bunky

Z (na vzorec) Hustota (gram/cm³) R

767,15

0,16x0,16x0,19 Ρ2ι2^ι ortorombická a = 8,809 (3) Á b= 12,4750 (8) A c = 45,59 (3) A a = 90° β = 90° γ = 90°

1,01

0,106

217/B r f r r λ r

Kryštalografické dáta formy azitromycínu D

Kryštalická forma D C38H72N2O12.H2O.C6H12

Tabuľka 3

Empirický vzorec Molekulová hmotnosť Veľkosť kryštálu (milimeter) Priestorová grupa Rozmery bunky

Z (na vzorec) Hustota (gram/cm³) R

851,15

0,52x0,32x0,16 Ρ2ι2·|2ι ortorombická a = 8,8710 (10) A b = 12,506 (2) A c = 45,697 (7) A cc = 90° β = 90° γ = 90°

1,11

0,0663

217/B

Kryštalografické dáta formy azitromycínu E

Kryštalická forma E C38H72N2O12H2O.C4H8O

Tabuľka 4

Empirický vzorec Molekulová hmotnosť Veľkosť kryštálu (milimeter) Priestorová grupa Rozmery bunky

Z (na vzorec) Hustota (gram/cm³) R

839,2

0,17 xO,19x0,20 Ρ2ι2τ2! ortorombická a = 8,869 (3) A b = 12,086 (3) A c = 46,00 (1) A a = 90° β = 90° γ = 90°

1,13

0,087

217/B • pe f e * r r

Tabuľka 5 Kryštalograficke dáta formy azitromycínu F

Empirický vzorec Veľkosť kryštálu (milimeter) Molekulová hmotnosť Priestorová grupa Rozmery bunky

Z (na vzorec) Hustota (gram/cm³) R

Kryštalická forma F C₃₈H₇₂N₂O₁₂.H₂O.0,5C₂H₆O 0,14x0,20x0,24 790,2

P2i monoklinická a= 16,281 (2) A b = 16,293 (1) A c= 18,490 (3) A a = 90° β = 109,33(1)° γ = 90°

1,13

0,0688

217/B

Tabuľka 6 Kryštalografické

Empirický vzorec

Molekulová hmotnosť Veľkosť kryštálu (milimeter) Priestorová grupa Rozmery bunky

Z (na vzorec) Hustota (gram/cm³) R formy azitromycínu G

Kryštalická forma G C38H72N2O12· 1,5H2O 776,0

0,04x0,20x0,24 P2! monoklinická a= 16,4069 (8) A b = 16,2922 (8) Ä c= 18,3830 (9) A a = 90° β = 110,212 (2)° γ = 90°

1,12

0,0785

217/B c c

Tabuľka 7 Kryštalografické dáta formy azitromycínu H

Empirický vzorec Veľkosť kryštálu (milimeter) Molekulová hmotnosť Priestorová grupa Rozmery bunky

Z (na vzorec) Hustota (gram/cm³) R

Kryštalická forma H θ38Η72Ν2θΐ2·Η2θ.0,5θ3Η8θ2

0,14x0,20x0,24

805,0

P2-I monoklinická a = 16,177 (1)A b = 16,241 (2) A c= 18,614 (1) A a = 90° β = 108,34(1)° γ = 90°

1,15

0,0687

217/B

Tabuľka 8 Kryštalograficke dáta formy azitromycínu J

Empirický vzorec Molekulová hmotnosť Veľkosť kryštálu (milimeter) Priestorová grupa Rozmery bunky

Z (na vzorec) Hustota (gram/cm³) R

Kryštalická forma J

C₃₈H₇₂N₂O₁₂.H₂O.0,5C₃H₈O

796,0

0,40 x 0,36 x 0,20 Ρ2ϊ monoklinická a = 16,191 (6) A b = 16,237 (10) A c = 18,595(14) A a = 90° β = 108,92 (4)° γ = 90°

1,14

0,0789

217/B r e c r

Tabuľka 8A Kryštalografické dáta formy azitromycínu O

Empirický vzorec	Kryštalická forma 0 C38H72N20i2-0,5H2C).0,5C4HioO
Molekulová hmotnosť	795,04
Veľkosť kryštálu (milimeter)	0,40x0,36x0,20
Priestorová grupa	P2i monoklinická
Rozmery bunky	a = 16,3602 (11) A
Z (na vzorec)	b = 16,2042 (11) A c = 18,5459 (12) A a = 90° β = 109,66(10)° γ = 90° 4
Hustota (gram/cm3)	1,14
R	0,0421

Medzi uvedenými šestnástimi kryštalickými formami sa rozlišujú dve izomorfné skupiny. Do skupiny I patria kryštalické formy F, G, H, J, M, N, O a P. Do skupiny II patria kryštalické formy C, D, E a R. Kryštalická forma Q nespadá ani do jednej zo skupín I a II. Kryštalické formy spadajúce do jednej skupiny sú izomorfy, ktoré kryštalizujú v rovnakej priestorovej grupe, a to iba s malými zmenami v parametroch buniek, pričom tieto skupiny zahrňujú chemicky príbuzné štruktúry, ktoré však majú rôzne elementárne zloženia. V tomto prípade je príčinou rozdielu v chemickom zložení jednotlivých izomorfov inkorporácia rôznych množstiev molekúl vody/rôznych molekúl rozpúšťadla. V súlade s tým vykazujú uvedené izomorfy podobné avšak nie identické tvary spektier róntgenovej difrakcie a NMR spektier meraných v pevnom stave (ssNMR). Ďalšie techniky, ako je spektroskopia v blízkej infračervenej oblasti (NIR), diferenčné skenovacie kalorimetrie (DSC), plynová chromatografia (GC), tepelnogravimetrická analýza (TGA) alebo tepelnogravimetrická analýza

217/B spriahnutá s infračervenou spektroskopiou (TG-IR), stanovenie vody podľa Karla Fischera a molekulárne modelovanie/vizualizácia poskytujú dáta potvrdzujúce identifikáciu izomorfov. Teploty dehydratácie/desolvatácie boli stanovené diferenčnou skenovacou kalorimetriou (DSC) pri rýchlosti ohrievania 5 °C/minúta.

Kryštalická forma C: Uvedená kryštalická forma bola identifikovaná z monokryštálovej štruktúry (viď tabuľka 2), pričom bolo zistené, že ide o monohydrát azitromycínu. Táto kryštalická forma spadá do priestorovej grupy P2-i2-|2i a podobné parametre bunky ako kryštalickej formy D a E, a preto patrí medzi izomorfy spadajúce do skupiny II. Vypočítaný tvar práškového spektra róntgenovej difrakcie tejto kryštalickej formy bol podobný vypočítaným tvarom práškových spektier róntgenovej difrakcie kryštalických foriem D a E.

Kryštalická forma D: Kryštalická forma D bola kryštalizovaná z cyklohexánu. Uvedená monokryštálová štruktúra formy D vykazuje stechiometriu monohydrátu/monocyklohexanátu azitromycínu (viď tabuľka 3). Bolo zistené, že molekuly cyklohexánu sú umiestnené neusporiadane v kryštálovej mriežke. Z údajov pre monokryštál bolo vypočítané, že obsah vody a cyklohexánu v kryštalickej forme D je rovný 2,1 percenta, respektívne 9,9 percenta. Ako experimentálne zistený, tak vypočítaný tvar práškového spektra róntgenovej difrakcie tejto kryštalickej formy bol podobný vypočítaným tvarom práškových spektier róntgenovej difrakcie kryštalických foriem C a E. Práškové vzorky formy D vykázali pri DSC analýze desolvatačný/dehydratačný endoterm s počiatkom pri teplote približne 87 °C a široký endoterm v rozmedzí od 200 °C do 280 °C (kedy došlo k rozloženiu látky), pričom DSC analýza prebiehala pri rýchlosti ohrevu 5 °C/minúta a v rozmedzí od 30 °C do 300 °C.

Kryštalická forma D bola pripravená suspendáciou azitromycínu v cyklohexáne počas od 2 do 4 dní. Pevná kryštalická forma azitromycínu D bola izolovaná filtráciou a usušená.

Kryštalická forma E: Kryštalická forma E bola získaná vo forme monokryštalickej štruktúry, ktorá bola izolovaná zo zmesi tetrahydrofuránu (THF)/voda. Podľa analýzy monokryštálu ide o monohydrát a

217/B monotetrahydrofuranát (viď tabuľka 4). Tvar práškového spektra rôntgenovej difrakcie vypočítaný na základe znalostí štruktúry monokryštálu bol podobný vypočítaným tvarom práškových spektier rôntgenovej difrakcie kryštalických foriem C a D, čo radí túto kryštalickú formu medzi izomorfy zo skupiny II.

Kryštalická forma E bola pripravená rozpustením azitromycínu v tetrahydrofuráne (THF). Difundáciou vodnej pary do nasýteného roztoku azitromycínu v tetrahydrofuráne po určitú dobu bola získaná kryštalická forma azitromycínu E.

Kryštalická forma F: Monokryštál formy F kryštalizoval v monoklinickej priestorovej grupe, označovanej ako P2i, s asymetrickou jednotkou obsahujúcou dve molekuly azitromycínu, dve molekuly vody a jednu molekulu etanolu, tzn. že sa jednalo o monohydrát/hemietanolát (viď tabuľka 5). Táto kryštalická forma je izomorfná ku všetkým kryštalickým formám spadajúcim do skupiny kryštalických foriem azitromycínu, ktoré sa označujú ako skupina I. Tvar vypočítaného práškového spektra rôntgenovej difrakcie tejto kryštalickej formy je podobný tvarom vypočítaných práškových spektier ostatných izomorfov spadajúcich do skupiny I. Teoretický obsah vody a etanolu tvorí 2,3 percenta, respektíve 2,9 percenta. Práškové vzorky formy F vykazujú desolvatačný/dehydratačný endoterm s počiatkom pri teplote v rozmedzí od 110 °C do 125 °C. Kryštalická forma F sa pripravuje rozpustením azitromycínu v etanole (v 1-3 hmotnostných objemoch) pri teplote v rozmedzí od približne 50 °C do približne 70 °C. Po úplnom rozpustení azitromycínu sa roztok ochladí na teplotu nižšiu ako je teplota miestnosti, čím dôjde k vyvolaniu kryštalizácie. Za účelom zvýšenia výťažku kryštálov je možné vákuovou destiláciou znížiť objem etanolu a získaný zvyšok 1 až 2 hodiny miešať. V alternatívnom prípade je možné do roztoku pridať približne 0,1 až 2 objemy vody (ktorá môže byť prípadne vychladená na teplotu v rozmedzí od 0 °C do 20 °C), pričom v tomto prípade sa vylúčená pevná látka izoluje do 30 minút po prídavku vody. Ochladenie uvedeného etanolového roztoku azitromycínu pred pridaním vody na teplotu nižšiu ako 20 °C, výhodne nižšiu ako 15 °C, výhodnejšie nižšiu ako 10 °C a najvýhodnejšie na teplotu 5 °C vedie k získaniu v podstate Čistej

217/B kryštalickej formy F. Takto získaná pevná kryštalická forma azitromycinu F sa izoluje filtráciou a suší.

Kryštalická forma G. Štruktúra monokryštálu formy G sa skladá z dvoch molekúl azitromycinu a troch molekúl vody na každú asymetrickú jednotku (viď tabuľka 6). Táto štruktúra zodpovedá seskvihydrátu s teoretickým obsahom vody 3,5 percenta. Obsah vody v práškových vzorcoch kryštalickej formy G sa pohybuje od približne 2,5 percenta do približne 6 percent. Celkový obsah reziduálnych organických rozpúšťadiel je menší ako 1 percento zodpovedajúceho rozpúšťadla, ktoré sa používa pri kryštalizácii, čo je výrazne pod stechiometrickými množstvami prítomnými v solváte. Táto kryštalická forma začína dehydrovať pri teplote v rozmedzí od približne 110 °C do približne 120 °C

Kryštalickú formu G je možné pripraviť pridaním azitromycinu k vopred pripravenej zmesi voda/organické rozpúšťadlo (1:1, vyjadrené v objemových dieloch), kde uvedeným organickým rozpúšťadlom môže byť metanol, acetón, acetonitril, etanol alebo izopropylalkohol. Vzniknutá zmes sa mieša a zahrieva počas 4 až 6 hodín na zvýšenú teplotu (napr. v rozmedzí od 45 °C do 55 °C), čím dôjde k rozpusteniu azitromycinu. K vyzrážaniu potom dochádza v priebehu ochladzovania roztoku na teplotu miestnosti. Takto získaná pevná kryštalická forma azitromycinu G sa izoluje filtráciou a suší.

Kryštalická forma H: Touto kryštalickou formou je monohydrát/ hemipropylénglykolát voľnej bázy azitromycinu (viď tabuľka 7). Uvedená forma bola izolovaná zo zmesového roztoku, ktorý obsahoval propylénglykol. Kryštálová štruktúra formy H je izomorfná ku kryštalickým formám spadajúcim do skupiny I.

Kryštalická forma azitromycinu H sa pripravuje rozpustením dihydrátu azitromycinu v 6 objemoch propylénglykolu. K vzniknutému propylénglykolovému roztoku azitromycinu sa pridajú 2 objemy vody a dôjde ku kryštalizácii. Vzniknutá suspenzia sa mieša 24 hodín a následne sa pevné diely izolujú filtráciou a ponechajú sa uschnúť na vzduchu pri teplote miestnosti, čím je získaná kryštalická forma H.

217/B • · r ŕ ľ c

Kryštalická forma J: Kryštalickou formou J je monohydrát/hemi-npropanolät (viď tabuľka 8). Vypočítaný obsah rozpúšťadiel tvorí približne 3,8 percenta n-propanolu a približne 2,3 percenta vody. Z experimentálnych údajov vyplýva, že práškové vzorky tejto kryštalickej formy obsahovali od približne 2,5 percenta do približne 4,0 percent n-propanolu a od približne 2,5 percenta do približne 3 percent vody. Tvar práškového rontgenového difrakčného spektra je veľmi podobný tvarom spektier práškovej rôntgenovej difrakcie izomorfov tejto formy, ktorými sú kryštalické formy F, G, H, M a N. Podobne ako kryštalické formy F a G vykazujú práškové vzorky formy J dehydratačný/desolvatačný endoterm pri teplote v rozmedzí od 115 °C do 125 °C.

Kryštalická forma J sa pripravuje rozpustením azitromycínu v 4 objemoch n-propanolu pri teplote v rozmedzí od približne 25 °C do 55 °C. K roztoku sa pri teplote miestnosti pridá približne 6 až 7 objemov vody a vzniknutá suspenzia sa nepretržite mieša od 0,5 hodiny do 2 hodín. Pevná kryštalická forma azitromycínu J sa izoluje filtráciou a suší.

Kryštalická forma K: Bolo zistené, že tvar spektra práškovej rôntgenovej difrakcie zodpovedá zmesi kryštalickej formy azitromycínu A a mikrokryštalického vosku získanej po 3 hodinovom zahrievaní na teplotu 95 °C. Ide o nižší hydrát kryštalickej formy A, pričom ide vlastne o metastabilnú formu existujúcu pri zvýšenej teplote.

Kryštalická forma L: táto kryštalická forma bola pozorovaná iba po zahrievaní dihydrátu azitromycínu, teda kryštalickej formy A. Pri meraní práškovej rôntgenovej difrakcie pri rôznych teplotách (VT-PXRD) bol zistený nový tvar spektra práškovej rôntgenovej difrakcie za podmienok, keď bola kryštalická forma A ohriata na teplotu približne 90 °C. Táto nová kryštalická forma, označovaná ako forma L, je nižším hydrátom kryštalickej formy A, pretože forma A stráca podľa tepelno-gravimetrickej analýzy (TGA) pri teplote 90 °C približne 2,5 percenta zo svojej hmotnosti, čo zodpovedá premene na monohydrát. Pri ochladení na teplotu miestnosti dochádza k rýchlej konverzii kryštalickej formy L na kryštalickú formu A.

217/B

Kryštalická forma M: táto forma bola izolovaná zo suspenzie v zmesi izopropylalkohol/voda a inkorporuje do svojej štruktúry tak vodu, ako aj izopropylalkohol. Tvar spektra práškovej róntgenovej difrakcie, ako i tvar NMR spektra meraného v pevnom stave bol podobný tvarom zodpovedajúcich spektier izomorfov zo skupiny I, čo je známkou, že i táto kryštalická forma patrí do skupiny I. Analogicky k známym kryštálovým štruktúram izomorfov zo skupiny I by i štruktúra monokryštálu formy M mala byť monohydrát/ hemiizopropylalkoholátom. Teplota dehydratácie/desolvatácie kryštalickej formy M je od približne 115 °C do 125 °C.

Kryštalickú formu M je možné pripraviť rozpúšťaním azitromycínu v 2 až 3 objemoch izopropylaikoholu pri teplote v rozmedzí od 40 °C do 50 °C. Vzniknutý roztok sa ochladí na teplotu nižšiu ako 15 °C, výhodne nižšiu ako 10 °C, výhodnejšie na teplotu približne 5 °C a pridajú sa k nemu 2 až 4 objemy vody ochladenej na teplotu približne 5 °C, čím sa docieli kryštalizácia. Na počiatku kryštalizácie je možné zmes naočkovať kryštálmi formy M. Vzniknutá suspenzia sa mieša po dobu kratšiu ako približne 5 hodín, výhodne po dobu kratšiu ako približne 3 hodiny, výhodnejšie po dobu kratšiu ako približne 1 hodinu a ešte výhodnejšie po dobu približne 30 minút alebo menej a následne sa pevné podiely izolujú filtráciou. Izolované kryštály je možné resuspendovať v izopropylalkohole. Týmto postupom sa získava kryštalická forma M v podstate neobsahujúca dihydrát azitromycínu.

Kryštalická forma N: Táto kryštalická forma azitromycínu bola izolovaná zo suspenzie formy A v zmesi voda/etanol/izopropylalkohol, pričom kryštály formy N môžu obsahovať rôzne množstvá kryštalizačného rozpúšťadla a vody. Obsah vody v kryštalickej forme N sa pohybuje v rozmedzí od približne 3,4 hmotnostného percenta do približne 5,3 hmotnostného percenta. Analýzou plynovou chromatografiou (GC) bolo odhalené, že uvedená kryštalická forma obsahuje rôzne množstvá etanolu a izopropylaikoholu. Celkový obsah rozpúšťadiel vo vzorcoch kryštalickej formy N je obvykle nižší ako približne 5 percent, a to podľa podmienok jej prípravy a sušenia. Tvar spektra práškovej róntgenovej difrakcie kryštalickej formy N je podobný tvarom spektier práškovej

217/B » e

rôntgenovej difrakcie kryštalických foriem F, G, H, J a M zo skupiny izomorfov označovaných ako skupina I. Dehydratačný/desolvatačný endoterm(y) kryštalickej formy N môže/môžu byť širšie a môžu sa nachádzať v teplotnom rozmedzí od 110 °C do 130 °C.

Kryštalickú formu azitromycínu N je možné pripraviť rekryštalizáciou azitromycínu zo zmesi organických rozpúšťadiel, ktoré môžu byť inkorporované do kryštálovej mriežky azitromycínu, ako je etanol, izopropylalkohol, n-propanol, acetón, acetonitril atd’., a vody. Uvedená zmes rozpúšťadiel sa zohrieva na teplotu od 45 °C do 60 °C a k takto ohriatej zmesi rozpúšťadiel sa pridá azitromycín až do celkom približne 4 objemov. Po rozpustení sa do roztoku za neustáleho miešania pridajú pri teplote v rozmedzí od 45 °C do 60 °C 1 až 3 objemy vody. Kryštalická forma N sa zráža vo forme pevnej bielej látky. Vzniknutá suspenzia sa nechá za neustáleho miešania vychladnúť na teplotu miestnosti. Potom sa pevná kryštalická forma N izoluje filtráciou a suší.

Kryštalická forma O: touto kryštalickou formou je, podľa údajov zistených pre monokryštál tejto formy, hemihydrát/hemi-n-butanolát voľnej bázy azitromycínu (viď tabuľka 8A). Táto kryštalická forma bola izolovaná z nbutanolového roztoku azitromycínu, ktorým difundovalo antirozpúšťadlo. Kryštalická štruktúra formy O je izomorfná ku kryštalickým formám patriacim do skupiny I.

Azitromycín sa úplne rozpustí v n-butanole. Difúzne pridanie antirozpúšťadla, ako je hexán, voda, izopropyléter (IPE) alebo iné rozpúšťadlo, v ktorom nie je azitromycín rozpustený, vedie k vyzrážaniu kryštalickej formy O.

Kryštalická forma P: Ide o navrhnutú kryštalickú formu, ktorou je hemihydrát/hemi-n-pentanolát voľnej bázy azitromycínu. Túto kryštalickú formu je možné izolovať z n-pentanolového roztoku azitromycínu pomocou difúzie antirozpúšťadlom. Kryštalická štruktúra formy P je izomorfná ku kryštalickým formám patriacim do skupiny I.

217/B

r. r

Kryštalickú formu P je možné pripraviť nasledujúcim postupom:

azitromycín s úplne rozpustí v n-pentanole. Difúzne pridanie antirozpúšťadla, ako je hexán, voda, izopropyléter (IPE) alebo iného rozpúšťadla, v ktorom nie je azitromycín rozpustný, vedie k vyzrážaniu kryštalickej formy P.

Kryštalická forma Q: Kryštalická forma Q vykazuje unikátny tvar spektra práškovej rontgenovej difrakcie. Táto forma obsahuje približne 4 percentá vody a približne 4,5 percenta tetrahydrofuránu (THF), pričom ide o hydrát/ hemitetrahydrofuranát azitromycínu. K dehydratácii/desolvatácii dochádza hlavne pri teplote od približne 80 °C do približne 110 °C.

Dihydrát azitromycínu sa rozpustí v 6 objemoch tetrahydrofuránu (THF) a k vzniknutému roztoku sa pridajú 2 objemy vody. Roztok sa nechá voľne odpariť do sucha, čím vznikne kryštalická forma Q.

Kryštalická forma R: Táto kryštalická forma sa pripravuje pridaním amorfného azitromycínu do 2,5 objemu terc-butylmetyléteru (MTBE). Vzniknutá hustá biela suspenzia sa mieša 3 dni pri teplote miestnosti. Potom sa vákuovou filtráciou izolujú pevné podiely a tieto sa nechajú usušiť na vzduchu. Výsledná kryštalická forma azitromycínu R teoreticky obsahuje 2,1 hmotnostného percenta vody a 10,3 hmotnostného percenta terc-butylmetyléteru.

Vďaka podobnosti svojich štruktúr majú jednotlivé izomorfy sklon k tvorbe zmesí jednotlivých kryštalických foriem, ktoré spadajú do jednej skupiny. Tieto zmesi sa niekedy označujú tiež ako zmesové kryštály” alebo kryštalické pevné roztoky”. Kryštalická forma N je takýmto kryštalickým pevným roztokom a na základe zloženia rozpúšťadla a údajov zistených pri meraní NMR spektra v pevnej fáze, bolo zistené, že ide o zmes izomorfov zo skupiny I.

Ako izomorfy zo skupiny I, tak izomorfy zo skupiny II sú hydráty a/alebo solváty azitromycínu. Molekuly rozpúšťadla v dutinách kryštálov majú za určitých podmienok sklon k výmene za molekuly vody. Z tohto dôvodu sa môže obsah rozpúšťadla/vody v uvedených izomorfoch v určitom obsahu meniť.

217/B e r r r r r r e e or r r r

Kryštalické formy spadajúce do izomorfnej skupiny I sú pri zahrievaní stabilnejšie ako kryštalická forma A. Kryštalické formy F, G, H, J, M a N vykazujú vyššiu teplotu začiatku dehydratácie (v rozmedzí od 110 °C do 125 °C) ako kryštalická forma A, ktorá začína dehydratovať pri teplote v rozmedzí od približne 90 °C do približne 110 °C, pričom súčasne s touto dehydratáciou dochádza pri teplote približne 90 °C ku konverzii na kryštalickú formu L.

Amorfný azitromycín: Všetky kryštalické formy azitromycínu obsahujú vodu alebo rozpúšťadlo(á) alebo tak vodu, ako aj rozpúšťadlo(á). Pokiaľ sa z kryštalických pevných látok odstráni voda a rozpúšťadlo(á), prechádza daná kryštalická forma na amorfnú formu azitromycínu. Výhodou amorfných pevných látok je vysoká počiatočná rýchlosť rozpúšťania.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Pokiaľ nie je uvedené inak, bol východiskovým materiálom pri príprave rôznych kryštalických foriem podľa nižšie opísaných príkladov dihydrát azitromycínu. Ako uvedený východiskový materiál je však možné použiť i ďalšie formy azitromycínu, ako je amorfný azitromycín alebo akákoľvek iná nedihydrátová kryštalická forma azitromycínu.

Príklad 1

Príprava kryštalickej formy D

Kryštalická forma D bola pripravená suspendáciou dihydrátu azitromycínu v cyklohexáne a miešaním tejto suspenzie 2 až 4 dni pri zvýšenej teplote, napr. v rozmedzí od 25 °C do 50 °C. Pevná kryštalická forma D bola izolovaná filtráciou a usušená.

217/B • »

Príklad 2

Príprava kryštalickej formy F

2A: Dihydrát azitromycínu bol pomaly pridaný do jedného objemu teplého etanolu, ktorého teplota bola približne 70 °C, a vzniknutá zmes bola miešaná pri teplote v rozmedzí od 65 °C do 70 °C až do úplného rozpustenia azitromycínu. Pre uľahčenie kryštalizácie bolo možné roztok naočkovať 1 až 2 hmotnostnými percentami kryštálov formy F. Roztok sa nechal postupne vychladnúť až na teplotu v rozmedzí od 2 °C do 5 °C a potom bol do zmesi pridaný jeden objem vychladenej vody. Kryštalická pevná látka bola izolovaná vákuovou filtráciou krátko (výhodne v priebehu menej ako 30 minút) po pridaní vody.

2B: Dihydrát azitromycínu bol pomaly pridaný do jedného objemu teplého etanolu, ktorého teplota bola približne 70 °C, a vzniknutá zmes bola miešaná pri teplote v rozmedzí od 65 °C do 70 °C až do úplného rozpustenia azitromycínu. Pre uľahčenie kryštalizácie bolo možné roztok naočkovať 1 až 2 hmotnostnými percentami kryštálov formy F. Roztok sa nechal postupne vychladnúť až na teplotu v rozmedzí od 2 °C do 5 °C a vákuovou destiláciou mohol byť znížený objem etanolu. Zmes bola 2 hodiny miešaná a vylúčená kryštalická pevná látka bola izolovaná vákuovou filtráciou. Izoláciou uvedených kryštálov bola získaná v podstate čistá kryštalická forma azitromycínu F, kryštalická forma azitromycínu F, ktorá v podstate neobsahovala formu azitromycínu G a kryštalická forma azitromycínu F, ktorá v podstate neobsahovala dihydrát azitromycínu.

Príklad 3

Príprava kryštalickej formy G

Do reakčnej nádoby bola vpravená kryštalická forma azitromycínu A. V oddelenej nádobe sa zmiešalo 1,5 objemu metanolu a 1,5 objemu vody. Táto zmes rozpúšťadiel bola pridaná do reakčnej nádoby obsahujúcej kryštalickú

217/B e i- r formu azitromycínu A. Vzniknutá suspenzia bola za neustáleho miešania zahrievaná približne 5 hodín na teplotu 50 °C. Zahrievanie bolo prerušené a zmes sa nechala za neustáleho miešania vychladnúť na teplotu miestnosti. Kryštalická forma azitromycínu G bola izolovaná filtráciou a ponechaná približne 30 minút schnúť na vzduchu. Izolovaná kryštalická forma azitromycínu G bola ďalej sušená vo vákuovej sušiarni pri teplote 45 °C. Týmto postupom bola získaná v podstate čistá kryštalická forma azitromycínu G a kryštalická forma azitromycínu G, ktorá v podstate neobsahovala dihydrát azitromycínu.

Príklad 4

Príprava kryštalickej formy J

Kryštalická forma J bola pripravená rozpustením azitromycínu v 4 objemoch n-propanolu pri teplote približne 25 °C. K roztoku bolo pridané 6,7 objemu vody a vzniknutá suspenzia bola 1 hodinu nepretržite miešaná a následne ochladená na teplotu 0 °C. Pevná kryštalická forma azitromycínu J bola izolovaná filtráciou a usušená.

Príklad 5

Príprava kryštalickej formy M v podstate neobsahujúcej dihydrát azitromycínu

5A: Dihydrát azitromycínu bol úplne rozpustený v 2 objemoch teplého izopropylalkoholu, ktorého teplota bola v rozmedzí od 40 °C do 50 °C. Za účelom uľahčenia kryštalizácie bolo možné roztok naočkovať kryštálmi formy M. Následne bol roztok ochladený na teplotu v rozmedzí od 0 °C do 5 °C, boli do nej pridané 4 objemy vychladenej vody ako rozpúšťadla a vylúčená pevná látka bola izolovaná vákuovou filtráciou. Pevná látka bola na 3 až 5 hodín resuspendovaná pri teplote 40 °C až 45 °C v 1 objeme izopropylalkoholu a táto suspenzia bola následne ochladená na teplotu v rozmedzí od 0 °C do 5 °C. Pevná kryštalická látka bola izolovaná vákuovou filtráciou krátko (približne 15 minút) po pridaní vody. Potom bola uvedená pevná látka resuspendovaná pri teplote v rozmedzí od 25 °C do 40 °C v 0,5 až 1 objeme izopropylalkoholu,

217/B r c suspenzia bola ochladená na teplotu približne 5 °C a následne prefiltrovaná, čím bola získaná pevná kryštalická modifikácia M.

5B: 1940 gramov dihydrátu azitromycínu bolo úspešne rozpustených v 2 objemoch teplého izopropylalkoholu, ktorého teplota bola 45 °C. Vzniknutý číry roztok bol prefiltrovaný cez filter zabudovaný do potrubia, s otvormi veľkosti 2 mikrometre, do čistej reakčnej nádoby. Teplota roztoku bola udržovaná na 45 °C a roztok bol naočkovaný kryštálmi formy M. V priebehu 8 minút bolo k roztoku pridaných 7,8 litra vychladenej vody. Roztok bol ochladený na teplotu 5 °C a bol pozorovaný vznik hustej suspenzie. Pevná látka bola izolovaná vákuovou filtráciou a prenesená do čistej reakčnej nádoby. Kryštalický azitromycín bol suspendovaný v 1 objeme izopropylalkoholu, pričom táto suspenzia bola zahrievaná na teplotu 35 °C. Následne bola suspenzia ochladená za 30 minút na teplotu 5 °C a zo zmesi bola odfiltrovaná kryštalická látka.

Týmito postupmi bola získaná v podstate čistá kryštalická forma azitromycínu M, ktorá v podstate neobsahovala formu azitromycínu G a kryštalická forma azitromycínu M, ktorá v podstate neobsahovala dihydrát azitromycínu.

Príklad 6

Príprava kryštalickej formy N

Do reakčnej nádoby boli pridané 2 objemy etanolu a 2 objemy izopropylalkoholu a vzniknutá zmes bola ohriata na teplotu 50 °C. Kryštalická forma azitromycínu A bola za neustáleho miešania pridaná do uvedenej zahriatej zmesi etanol/izopropylalkohol za vzniku číreho roztoku. Do reakčnej nádoby boli pridané 2 objemy destilovanej vody (ktorá mala rovnakú teplotu ako bola teplota v miestnosti). Miešanie zmesi pokračovalo pri teplote 50 °C a po približne 1 hodine došlo k vyzrážaniu kryštalickej formy azitromycínu N. Zahrievanie bolo prerušené 5 hodín po pridaní vody. Suspenzia sa nechala vychladnúť na teplotu miestnosti. Vyzrážaná kryštalická forma azitromycínu N

217/B bola izolovaná filtráciou a sušená 4 hodiny vo vákuovej sušiarni pri teplote 45 °C.

C í>

Príklad 7

Príprava amorfného azitromycínu

Kryštalická forma azitromycínu A bola cez noc zahrievaná vo vákuovej sušiarni na teplotu v rozmedzí od 110 °C do 120 °C. Amorfná pevná látka bola izolovaná a podľa potreby skladovaná spolu so sušidlom.

Príklad 8

Príprava kryštalickej formy H

Dihydrát azitromycínu alebo iná kryštalická forma bola rozpustená v 6 objemoch propylénglykolu. K vzniknutému propylénglykolovému roztoku azitromycínu boli pridané 2 objemy vody, čím bol vyvolaný vznik zrazeniny. Suspenzia bola miešaná 24 hodín a vylúčená pevná látka bola odfiltrovaná a usušená na vzduchu pri teplote miestnosti, čím bola získaná kryštalická forma H.

Príklad 9

Príprava kryštalickej formy Q

Kryštalický prášok bol pripravený rozpustením 500 miligramov kryštalickej formy azitromycínu A v 2 mililitroch tetrahydrofuránu. K vzniknutému číremu, bezfarebnému roztoku bol pri teplote miestnosti pridaný 1 mililiter vody. Hneď, ako sa roztok začal zakalovať bol k nemu pridaný ďalší 1 mililiter tetrahydrofuránu (THF) za účelom úplného rozpustenia azitromycínu a tento roztok bol miešaný pri teplote miestnosti. V priebehu 7 dní sa z roztoku nechalo voľne odpariť rozpúšťadlo a následne bola izolovaná suchá pevná látka, ktorá bola ďalej charakterizovaná.

217/B

Príklad 10

Prášková rôntgenová difrakčná analýza

Tvary spektier práškovej rontgenovej difrakcie boli zistené pomocou difraktometra Bruker D5000 (od spoločnosti Bruker, Madison, Wisconsin, USA), ktorý bol vybavený medeným žiaričom, pevnými štrbinami (1,0, 1,0, 0,6 milimetra) a polovodičovým detektorom Kevex. Dáta boli zhromažďované v oblasti od 3,0° do 40,0° stupnice 2Θ, a to s použitím kroku veľkosti 0,04°, pričom meranie v určitom uhle trvalo vždy 1 sekundu. Zistené výsledky sú zhrnuté v tabuľke 9.

Experimentálny tvar spektra práškovej rontgenovej difrakcie kryštalickej formy azitromycínu A je znázornený na priloženom obrázku 2.

Experimentálny tvar spektra práškovej rontgenovej difrakcie kryštalickej formy azitromycínu D je znázornený na priloženom obrázku 6.

Experimentálny tvar spektra práškovej rontgenovej difrakcie kryštalickej formy azitromycínu F je znázornený na priloženom obrázku 10.

Experimentálny tvar spektra práškovej rontgenovej difrakcie kryštalickej formy azitromycínu G je znázornený na priloženom obrázku 13.

Experimentálny tvar spektra práškovej rontgenovej difrakcie kryštalickej formy azitromycínu J je znázornený na priloženom obrázku 16.

Experimentálny tvar spektra práškovej rontgenovej difrakcie kryštalickej formy azitromycínu M je znázornený na priloženom obrázku 18.

Experimentálny tvar spektra práškovej rontgenovej difrakcie kryštalickej formy azitromycínu N je znázornený na priloženom obrázku 19.

Experimentálny tvar spektra práškovej rontgenovej difrakcie amorfnej formy azitromycínu je znázornený na priloženom obrázku 20.

217/B e » r r e ,' _r ,' ' >

Experimentálny tvar spektra práškovej róntgenovej difrakcie kryštalickej formy azitromycínu Q je znázornený na priloženom obrázku 30.

Experimentálny tvar spektra práškovej róntgenovej difrakcie kryštalickej formy azitromycínu R je znázornený na priloženom obrázku 31.

Experimentálne odchýlky boli od vzorky ku vzorke ± 0,2° 2Θ a tie isté odchýlky boli pozorované medzi teoreticky vypočítanými tvarmi spektier práškovej róntgenovej difrakcie (tieto výpočty boli uskutočnené na základe znalostí štruktúry monokryštálu) a experimentálne zistenými tvarmi spektier. Z detailných analýz nameraných dát vyplynulo, že izomorfy patriace do skupiny I je možné rozoznať podľa charakteristických píkov v spektrách práškovej róntgenovej difrakcie, ktoré sú uvedené v tabuľke 9

Tabuľka I - Piky spektra práškovej difrakcie azitromycínu (hodnoty sú uvedené v stupňoch 20 ± 0,2°)

A	D	F	G	J	M	N	Q
7,2	32	5,7	5,0	5,0	5,0	62	5,7
7,9	7,3	6x2	5,8	5,7	5,6	7,3	6,1
92	7,7	7,4	θχ2	6x2	62	7,8	62
9,9	10,1	7,8	7,4	7,3	7,3	9,8	8,4
11,2	10,6	8,9	7,9	7,8	7,8	77,2	9,5
12,0	11,5	9,8	9,8	8,2	8,2	11,9	10,6
12,7	12,3	10,3	10,2	9,7	9,8	12,5	11,2
13,0	12,8	77,2	10,8	10,3	10,2	74,0	11,5
14,0	13,6	11,5	77,2	77,2	77,2	74,3	12,4
15,6	14,5	11,9	77,6	77,4	11,9	14J_	12,7
16,0	15,4	12,2	12,0	11,9	12,2	15,3	13,4
16,4	15,6	12,5	12,5	12,3	12,5	15,7	13,6
16,8	16,9	73,9	13,3	12,5	74,0	76,7	14,1
17,5	18,3	14,3	14,0	73,9	74,6	76,6	14,4
18,2	19,0	14,7	14,4	74,2	15,3	17,1	14,9

217/B « Λ

A	D	F	G	J	M	N	Q
18,7	19,9	14,8	14,6	14,6	15,9	17,4	16,3
19,1	20,8	15,3	14,9	15,3	16,6	18,5	17,2
19,8	21,4	15,7	15,3	15,7	17,1	19,0	18,2
20,5	21,6	16,2	15,7	16,0	1.7Λ	19,6	19,0
20,9	22,0	16,6	16,3	16,6	18,4	20,0	19,5
21,2	23,0	17,1	16,6	17,0	18,5	20,4	19,8
21,6	23,3	17,2	1,7,2	17,2	19,1	21,0	20,2
21,8		17,7	17,4	17,5	19,6	21,8	20,5
24,0		18,0	17,8	18,1	20,0	22,5	21,1
		18,5	18,1	18,5	20,4	23,5	21,6
		19,0	18,6	19,0	20,9		21,9
		19,6	19,0	19,7	21,7		22,2
		20,0	19,6	20,0	22,5		23,6
		20,5	20,0	20,4	23,2		25,1
		2LP	20,5	20,9	23,6
		21,7	21,1	21,7
		22,0	21,8	22,4
		22,4	22,5	22,6
		22,6	23,5	23,3
		23,1		23,5
		23,5

Podčiarknuté hodnoty sú piky charakteristické pre formy A a D v skupine I a pre formu Q.

Hodnoty písané podčiarknutou kurzívou udávajú série píkov, ktoré sú charakteristické pre všetky izomofry zo skupiny I.

Izomorfy zo skupiny I majú nasledujúce spoločné charakteristické znaky: difrakčné piky 6,2 °2θ, 11,2 °2Θ, 21,0 ± 0,1 °2θ a 22,5 ± 0,1 °2θ. Každý z izomorfov potom vykazuje charakteristické série difrakčných píkov, ktoré sú

217/B e r λ » opísané nižšie a všetky uvedené série píkov sa vyznačujú charakteristickou vzdialenosťou medzi jednotlivými píkmi.

Polohy píkov v difrakčných spektrách sú uvedené s presnosťou ± 0,2 °2θ.

Reprezentatívny tvar spektra práškovej rontgenovej difrakcie kryštalickej formy A je zobrazený na obrázku 2. Kryštalická forma A vykazuje charakteristické piky 9,3 °20, 13,0 °2Θ a 18,7 °20.

Reprezentatívny tvar spektra práškovej rontgenovej difrakcie kryštalickej formy D je zobrazený na obrázku 6. Kryštalická forma D vykazuje charakteristické piky 3,9 °2θ, 10,1 °2θ, 10,6 °2θ a 21,4 °2θ.

Reprezentatívny tvar spektra práškovej rontgenovej difrakcie kryštalickej formy F je zobrazený na obr. 10. Kryštalická forma F vykazuje charakteristické piky izomorfov zo skupiny I a tri skupiny píkov, ktorými sú skupina píkov 1: 11,2 °20 a 11,5 °2θ, skupina píkov 2: 13,9 °20, 14,3 °2θ, 14,7 °2Θ a 14,8 °2θ, a skupina píkov 3: 16,2 °2θ, 16,6 °2θ, 17,1 °2θ, 17,2 °2θ a 17,7 °2θ.

Reprezentatívny tvar spektra práškovej rontgenovej difrakcie kryštalickej formy G je zobrazený na obrázku 13. Kryštalická forma G vykazuje charakteristické piky izomorfov zo skupiny I a tri skupiny píkov, ktorými sú skupina píkov 1: 11,2 °2θ a 11,6 °2θ, skupina píkov 2: 14,0 °20, 14,4 °20, 14,6 °20 a 14,9 °20, a skupina píkov 3: 16,3 °20, 16,6 °2θ, 17,2 °2Θ, 17,4 °2θ a 17,8 °2θ.

Reprezentatívny tvar spektra práškovej rontgenovej difrakcie kryštalickej formy J je zobrazený na obrázku 16. Kryštalická forma J vykazuje charakteristické piky izomorfov zo skupiny I a a tri skupiny píkov, ktorými sú skupina píkov 1: 11,2 °20 a 11,4 °20, skupina píkov 2: 13,9 °2θ, 14,2 °2θ a 14,6 °2θ, a skupina píkov 3: 16,0 °20, 16,6 °2Θ, 17,0 °2θ, 17,2 °2θ a 17,5 °2Θ.

Reprezentatívny tvar spektra práškovej rontgenovej difrakcie kryštalickej formy M je zobrazený na obrázku 18. Kryštalická forma M vykazuje charakteristické piky izomorfov zo skupiny I a a tri skupiny píkov, ktorými sú

217/B skupiny píkov 1: 11,2 °2θ, skupina píkov 2: 14,0 °2θ a 14,6 °2θ, a skupina píkov

3: 15,9 °2θ, 16,6 °2θ, 17,1 °2θ a 17,5 °2Θ.

Reprezentatívny tvar spektra práškovej rôntgenovej difrakcie kryštalickej formy N je zobrazený na obrázku 19. Kryštalická forma N vykazuje charakteristické piky izomorfov zo skupiny I. Skupiny píkov pre formu N sú podobné ako v prípade skupín píkov pre formy F, G, J a M, pričom ide o skupinu píkov 1: 11,2 °20 až 11,6 °2θ, skupinu píkov 2: 13,9 °2θ až 15,0 °20, a skupinu píkov 3: 15,9 °20 až 17,9 °2θ, pričom poloha, intenzita a šírka týchto píkov sa môže trochu meniť podľa meniaceho sa obsahu izomorfov zo skupiny I.

Reprezentatívny tvar spektra práškovej rôntgenovej difrakcie kryštalickej formy Q je zobrazený na obrázku 30. Kryštalická forma Q vykazuje charakteristické piky 6,8 °2θ, 8,4 °2θ a 20,2 °2θ.

Reprezentatívny tvar spektra práškovej rôntgenovej difrakcie kryštalickej formy R je zobrazený na obrázku 31.

Príklad 11

Rôntgenová analýza monokryštálu

Dáta boli zhromažďované pri teplote miestnosti s použitím róntgenových difraktometrov Bruker, ktoré boli vybavené medeným žiaričom s grafickými monochromátormi. Štruktúry monokryštálov boli stanovované priamymi metódami. Počítačová knižnica SHELXTL od spoločnosti Bruker AXS, Inc. postačovala pre uskutočnenie všetkých nevyhnutných kryštalografických výpočtov a molekulárnych zobrazení (viď SHELXTL® Reference Manual, Verzia 5.1, Bruker AXS, Madison, Wisconsin, USA (1997)).

217/B e ' e e r < r

C ' C C P f. f . f f ľ

Príklad 12

Výpočty tvarov spektier práškovej róntgenovej difrakcie z údajov pre monokryštál.

Za účelom porovnania dát získaných pre monokryštál a práškovú vzorku bolo možné z výsledkov analýz uskutočnených s monokryštálom vypočítať tvar spektra práškovej róntgenovej difrakcie. Pre uskutočnenie týchto výpočtov boli použité programy XFOG a XPOW, ktoré sú súčasťou počítačovej knižnice SHELXTL. Porovnanie vypočítaného tvaru spektra práškovej róntgenovej difrakcie s experimentálne zisteným tvarom spektra práškovej róntgenovej difrakcie slúžilo pre potvrdenie, či daná prášková vzorka zodpovedá priradenej štruktúre monokryštálu (viď tabuľka 9A). Tento postup bol uskutočnený v prípade kryštalických foriem azitromycinu A, D, F, G a J.

Vypočítaný tvar spektra práškovej róntgenovej difrakcie kryštalickej formy azitromycinu A je uvedený na obrázku 1.

Vypočítaný tvar spektra práškovej róntgenovej difrakcie kryštalickej formy azitromycinu D je uvedený na obrázku 5.

Vypočítaný tvar spektra práškovej róntgenovej difrakcie kryštalickej formy azitromycinu F je uvedený na obrázku 9.

Vypočítaný tvar spektra práškovej róntgenovej difrakcie kryštalickej formy azitromycinu G je uvedený na obrázku 12.

Vypočítaný tvar spektra práškovej róntgenovej difrakcie kryštalickej formy azitromycinu J je uvedený na obrázku 15.

Zistené výsledky sú zobrazené vo forme prekrývajúcich sa tvarov spektier práškovej róntgenovej difrakcie kryštalických foriem azitromycinu A, D, F, G a J na obrázkoch 3, 7, 11, 14 respektíve 17. Spodná krivka na každom z týchto obrázkov zodpovedá vždy vypočítanému tvaru spektra (pričom tento výpočet bol uskutočnený, ako už bolo uvedené, z údajov pre monokryštál) a horná krivka na každom z týchto obrázkov zodpovedá vždy experimentálne

217/B zistenému tvaru spektra. Zhoda medzi oboma tvarmi je známkou, že daná prášková vzorka zodpovedá príslušnej štruktúre monokryštálu.

t e r ,;. / Tabuľka 9A - Vypočítané a experimentálne zistené piky v spektrách práškovej rôntgenovej difrakcie izomorfov zo skupiny I

F vyp.	F exp.	G vyp.	G exp.	J vyp.	J exp.	M exp.
		5,2	5,0
		5,7	5,8	5,8	5,7	5,6
6,3	6,2	6,2	6,2	6,3	6,2	6,2
7,4	7,4	7,5	7,4	7,4	7,3	7,3
7,9	7,8	7,9	7,9	7,9	7,8	7,8
8,8	8,9	8,9	9,3	8,3	8,2	8,2
9,9	9,8	9,9	9,9	9,8	9,7	9,8
10,3	10,3		10,2	10,4	10,3	10,2
10,9		10,9	10,8
11,3	11,2	11,3	11,2	11,2	11,2	11,2
11,5	11,4	11,6	11,6	11,4	11,4	chýba
12,0	11,9	12,0	11,9	12,0	11,9	11,9
12,3	12,2	12,3		12,3	12,3	12,2
12,6	12,5	12,5	12,5	12,6	12,5	12,5
14,0	14,0	13,4	13,3	14,0	13,9	14,0
14,3	14,3	14,1	14,0	14,2	14,2	chýba
		14,4	14,4
14,7	14,7	14,7	14,6	14,7	14,6	14,6
14,9	14,8	14,9	14,9	14,8
15,4	15,3	15,4	15,3	15,3	15,3	15,3
15,8	15,7	15,7	15,7	15,8	15,7	15,9
16,2	16,2	16,3	16,3	16,0	16,0	chýba
16,6	16,6	16,6	16,6	16,7	16,6	16,6
17,1	17,2	17,1		17,1	17,0	17,1

217/B

C '•r r. r- c c r r o

--- ^r,.o ^r . -· ·

Fvyp.	F exp.	G vyp.	G exp.	J vyp.	J exp.	M exp.
17,3	17,3	17,3	17,2	17,4	17,2	chýba
17,5	17,4	17,5	17,4	17,6	17,5	17,5
17,7	17,7	17,9	17,8	17,9
18,0	18,0	18,1	18,1	18,2	18,1	18,4
18,6	18,5	18,7	18,7	18,5	18,5	18,5
19,1	19,0	19,1	19,0	19,1	19,0	19,1
19,7	19,6	19,6	19,6	19,8	19,7	19,6
20,0	20,0	20,0	20,0	20,1	20,0	20,0
20,5	20,4	20,6	20,5	20,5	20,4	20,4
21,1	21,0	21,2	21,0	20,8	20,9	20,9
21,8	21,7		21,6	21,6	21,7	21,7
22,1	22,0	21,8	21,8	21,8
22,5	22,4	22,3	22,2	22,5	22,4	22,5
22,7	22,6	22,5	22,5	22,8	22,6
23,1	23,1	22,9		23,4	23,3	23,2
23,6	23,5	23,5	23,5	23,7	23,5	23,6

Príklad 13

NMR analýza v pevnom stave

Všetky ¹³C NMR spektrá v pevnom stave (ďalej tiež ¹³C ss-NMR spektrá) boli merané na spektrometre s magnetickým pólom 11,75 T (Bruker Biospin, Inc., Billerica, MA, USA), čo zodpovedalo pracovnej frekvencii pre merania ¹³C NMR spektier 125 MHz. Spektrá boli merané pomocou rotačnej sondy CPMAS (cross-polarizatíon magnetic angle spínning), ktorá pracovala pri teplote a tlaku okolia. Podľa množstva analyzovanej vzorky boli použité sondy Bruker 7 mm BL alebo 4 mm BL, do ktorých bolo možné vpraviť 300 miligramov, respektíve 75 miligramov vzorky a ktoré pracovali pri maximálnej rýchlosti 7 kHz, respektíve 15 kHz. Získané dáta boli spracované pomocou funkcie exponenciálneho rozšírenia spektrálnej čiary o 5,0 Hz. Pri použití sondy veľkosti

217/B « ·

milimetrov bola pre zrušenie spin-spinovej interakcie protónov (tzv. decoupling) použitá frekvencia 65 kHz a v prípade použitia sondy veľkosti 4 milimetre bola za tým istým účelom použitá frekvencia 100 kHz. Bol uskutočnený dostatočný počet meraní, z ktorých bol vypočítaný priemer, čím boli pre všetky piky získané adekvátne pomery signálu a šumu. Obvykle bolo uskutočnených 600 skenov s dobou trvania jedného cyklu 3,0 sekundy, čo zodpovedalo približne 30 minútam celkovej doby merania. Uhol magnetického poľa bol nastavený pomocou práškového bromidu draselného štandardnými postupmi používanými v NMR spektroskopii. Jednotlivé spektrá sú vztiahnuté buď k signálu metylovej skupiny hexametylbenzénu (HMB), ktorého chemický posun je 17,3 ppm, alebo k signálu adamantánu (ADM), ktorý sa nachádza v smere rastúceho poľa a ktorého chemický posun je 29,5 ppm. Spektrá vzťahujúce sa k hexametylbenzénu (HMB) vykazujú v porovnaní s rovnakými spektrami, ktoré sú vztiahnuté k adamantánu (ADM), posun u všetkých píkoch o 0,08 ppm v smere klesajúceho poľa. Spektrálne okno zahrňovalo minimálne oblasť spektra od 190 ppm do 0 ppm. Zistené výsledky sú zhrnuté v tabuľke 10. ¹³C ss-NMR spektrá kryštalických foriem M, H a R boli vztiahnuté k adamantánu (ADM). ¹³C ss-NMR spektrá kryštalických foriem A, D, G, F, J a N boli vztiahnuté k hexametylbenzénu (HMB). Spektrá kryštalických foriem H a R boli merané pri rýchlosti sondy 15 kHz.

Tabuľka 10 - Chemické posuny v ¹³C ss-NMR spektrách azitromycínu (± 0,2 PPm)

A	D	G	F	J	M	N	H	R
178,1	178,1	179,5*	179,5	179,6	179,6	179,6	179,5	177,9
104,1	103^9	105,5	178,6	178,4	105,6	178,7	178,7	104,6
98,4	95,1	103,5	105,5	105,5	103,4	105,6	105,4	103,6
84,6	84,2	95,0	103,4	103,4	94,9	103,6	103,2	95,3
82,6	79,4	86,2	94,9	95,0	86,7	95,0	95,0	85,4
79,3	78,9	83,1	86,4	86,4	82,9	86,5	86,4	84,0
78,3	75,7	78,9	83,0	82,9	79,3	83,1	82,7	79,4

217/B r- · c c r r r ŕ r r r ,· r

A	D	G	F	J	M	N	H	R
75,6	74,6	78,2	79,1	79,2	78,1	79,0	79,2	79,0
74,7	74,0	77,6	78,1	78,1	77,0	77,9	78,3	75,6
73,9	72,9	76,4	77,9	76,8	76,7	76,5	78,0	74,5
73,5	71,9	75,7	76,5	76,2	74,7	74,8	76,4	73,9
70,8	71,0	74,7	74,7	74,7	74,2	74,2	74,7	73,9
68,0	69,4	74,3	74,1	74,1**	71,3	73,6	74,1	72,9
66,2	67,8	73,5	73,5	72,0	69,2	71,5	73,5	71,8
63,8	65,7	71,3	71,4	71,3	68,6	69,2	73,1	71,0
63,2	64,7	69,1	69,1	69,2	67,3	68,7	71,2	69,1
52,2	49,2	68,8	68,6	68,6	66,2	67,3	69,1	67,5
44,3	45,8	67,4	67,3	67,3**	65,5	66,2	68,4	65,6
42,6	43,1	65,9	66,1	66,2**	63,8	65,7	67,3	64,5
41,7	40,6	65,2	65,6	65,5**	63,3	63,7	66,9	49,4
39,1	37,1	64,0	63,6	63,7	50,0	58,7	66,1	45,7
35,4	36,4	63,3	58,0	50,0	47,1	50,1	65,5*	42,9
34,6	29,6	50,0	50,0	46,9	45,9	47,1	63,7*	41,6
26,9	29,3	46,9	47,0	45,9	44,7	46,0	49,9	40,4
26,3	28,0	46,0	45,9	44,7	43,8	44,8	46,8	37,0
23,7	27,7	44,5	44,7	43,7	41,9	43,8	45,9	36,2
23,3	22,1	43,7	43,7	41,6	41,1	41,5	44,5	29,4
21,7	21,1	41,5	41,5	41,0	37,4	41,1	43,8*	29,0
19,5	18,6	40,8	41,1	37,1	36,2	37,3	41,7	28,2
17,5	16,7	37,5	37,3	36,5**	33,6	36,5	40,9	27,4
15,9	16,1	36,5	36,4	35,4**	30,1	33,7	37,1	21,4
13,2	10,6	33,6	33,6	33,5	28,1	30,4	36,3	20,8
11,3	M	30,0	30,3	30,4	27,2	28,1	33,7	18,7
L2	θχθ	27,9	28,0	28,0	26,0	27,2	33,3	16,5
		27,3	27,1	27,1	23,2	26,0	30,5*	16,1
		23,1	23,2	25,2	22,8	23,2	27,9	15,7
		22,5	22,6	23,2	22,5	22,6	27,1	10,3

217/B

A	D	G	F	J	M	N	H	R
		21,9	21,9	22,5**	21,8	22,0	23,1	94
		20,9	20,8	21,9**	20,2	20,8	22,6	84
		20,2	20,4	20,7	18,9	19,0	22,3	θ4
		18,8	18,9	18,9	17,4	16,9	21,9
		17,0	16,8	16,8	16,3	15,8	20,7
		16,0	17,2	15,6**	15,5	12,2	20,3
		12,2	15,7	12,1	12,1	94	18,8
		10,4	12,2	11,5	10,3	94	17,1
		94	10,1	12,1	94	74	16,6
		94	θιθ	10,0	94	64	15,8
		Ζιθ	94	94	7J		15,4
		64	74	M	74		12,0
			64	6,8**			94
							94
							74
							74

Hodnoty chemických posunov uvedených hrubo a podčiarknuto zodpovedajú píkom alebo skupinám píkov, ktoré sú charakteristické pre danú kryštalickú formu. Hodnoty chemických posunov uvedené kurzívou zodpovedajú signálom rozpúšťadla, pričom tieto signály môžu byť široké a ich chemické posuny sa môžu meniť (o ± ppm). Hodnoty chemických posunov označené jednou hviezdičkou označujú piky, ktoré môžu byť rozštiepené (< 0,3 ppm). Hodnoty chemických posunov označené dvoma hviezdičkami sa môžu meniť o ± 0,3 ppm.

Hodnoty chemických posunov sú uvedené s presnosťou ± 0,2 ppm, pokiaľ nie je uvedené inak.

Reprezentatívne ¹³C ss-NMR spektrum kryštalickej formy A je zobrazené na obrázku 21. Kryštalická forma A vykazuje pík s chemickým posunom 178,1

217/B ppm a piky s chemickým posunom 104,1 ppm, 98,4 ppm, 84,6 ppm, 26,9 ppm,

13,2 ppm, 11,3 ppm a 7,2 ppm.

Reprezentatívne ¹³C ss-NMR spektrum kryštalickej formy D je zobrazené na obrázku 22. Kryštalická forma D vykazuje pík s chemickým posunom 178,1 ppm a piky s chemickým posunom 103,9 ppm, 95,1 ppm, 84,2 ppm, 10,6 ppm, 9,0 ppm a 8,6 ppm.

Reprezentatívne ¹³C ss-NMR spektrum kryštalickej formy F je zobrazené na obrázku 23. Kryštalická forma F vykazuje piky s chemickým posunom približne 179,1 ±2 ppm, ktorými sú piky s chemickým posunom 179,5 ppm a 178,6 ppm, séria 5 píkov s chemickým posunom 10,1 ppm, 9,8 ppm, 9,3 ppm, 7,9 ppm a 6,6 ppm a piky etanolu s chemickým posunom 58 ± 0,5 ppm a 17,2 ± 0,5 ppm. Uvedené signály zodpovedajúce rozpúšťadlu môžu byť široké a relatívne slabé.

Reprezentatívne ¹³C ss-NMR spektrum kryštalickej formy G je zobrazené na obrázku 24. Kryštalická forma G vykazuje piky s najväčším chemickým posunom približne 179,5 ppm, ktorým je jediný pík, ktorý môže byť rozštiepený o < 0,3 ppm, a sériu 5 píkov s chemickým posunom 10,4 ppm, 9,9 ppm, 9,3 ppm, 7,6 ppm a 6,5 ppm.

Reprezentatívne ¹³C ss-NMR spektrum kryštalickej formy J je zobrazené na obrázku 25. Kryštalická forma J vykazuje piky s chemickým posunom približne 179,1 ±2 ppm, ktorými sú piky s chemickým posunom 179,6 ppm a 178,4 ppm, sériu 4 píkov s chemickým posunom 10,0 ppm, 9,3 ppm, 8,1 ppm a 6,8 ppm a piky n-propanolu s chemickým posunom 11,5 ± 0,5 ppm a 25,2 ± 0,5 ppm. Uvedené signály zodpovedajúce rozpúšťadlu môžu byť široké a relatívne slabé.

Reprezentatívne ¹³C ss-NMR spektrum kryštalickej formy M je zobrazené na obrázku 26. Kryštalická forma M vykazuje pík s chemickým posunom približne 179,1 ± 2 ppm, ktorým je pík s chemickým posunom 179,6 ppm, piky s chemickým posunom 41,9 ppm a 16,3 ppm, sériu 5 píkov s chemickým posunom 10,3 ppm, 9,6 ppm, 9,3 ppm a 7,7 ppm a 7,1 ppm a pík

217/B e * r izopropylalkoholu s chemickým posunom 26,0 ± 0,5 ppm. Uvedené signály zodpovedajúce rozpúšťadlu môžu byť široké a relatívne slabé.

Reprezentatívne ¹³C ss-NMR spektrum kryštalickej formy N je zobrazené na obrázku 27. Kryštalická forma N vykazuje piky s chemickými posunmi, ktoré sú kombináciou píkov zodpovedajúcich jednotlivým izomorfom zo skupiny I. Uvedené piky sa môžu líšiť chemickým posunom a relatívnymi intenzitami a šírkou, čo je spôsobené zmesou rôznych podielov izomorfov, ktoré sú obsiahnuté v kryštalickom pevnom roztoku, ktorý sa označuje ako kryštalická forma N.

Reprezentatívne ¹³C ss-NMR spektrum amorfnej formy azitromycínu je zobrazené na obrázku 28. Amorfný azitromycín vykazuje signály so širokým rozmedzím chemického posunu. Charakteristické piky majú chemický posun 179 ppm a 11 ± 0,5 ppm.

Súhrn chemických posunov píkov, ktoré boli zistené pri meraní ¹³C ssNMR spektier kryštalických foriem azitromycínu A, D, F, G, H, J, M, N a R, je uvedený v tabuľke 10.

Príklad 14

NMR analýza dávkovej formy

Za účelom demonštrácie schopnosti ¹³C ss-NMR spektroskopie identifikovať kryštalickú formu azitromycínu obsiahnutú vo farmaceutickej dávkovej forme azitromycínu G, ktoré boli následne analyzované pomocou ¹³C ss-NMR spektroskopie. Uvedené tablety boli granulované za vlhka a tabletované na lise F-Press (od spoločnosti Manesty, Liverpool, Veľká Británia), a to s použitím formy veľkosti 0,262 x 0,531. Tablety boli formulované a tabletované tak, aby obsahovali 250 miligramov kryštalickej formy azitromycínu G, pričom celková hmotnosť tablety bola 450 miligramov a jej zloženie je uvedené nižšie. Tablety boli rovnomerne potiahnuté ružovo sfarbeným materiálom Opadry II® (čo je zmes monohydrátu laktózy, hydroxypropylmetylcelulózy, oxidu titaničitého, farbiva Drug & Cosmetic red #30

217/B a triacetínu) (tento materiál je komerčne dostupný od spoločnosti Colorcon,

West Point, PA, USA).

Materiál	Percentuálny obsah	Množstvo (gram)
Kryštalická forma azitromycínu G	58,23	174,69
Predželatínovaný kukuričný škrob	6,00	18,00
Bezvodný dikalciumfosfát	30,85	92,55
Sodná soľ kroskarmelózy	2,00	6,00
Stearát horečnatý s 10 percentami laurylsulfátu sodného	2,92	8,76
Celkom	100,0	300,0

Potiahnutá tableta bola jemne rozdrvená a prášková vzorka bola k tomu určeným nástrojom vpravená do rotora na meranie NMR spektier v pevnom stave, pričom tento rotor neobsahoval žiadny materiál, ktorý by poskytoval signály v ¹³C NMR spektrách. Analýza takto získanej vzorky bola uskutočnená za podmienok opísaných v príklade 13.

Reprezentatívne ¹³C ss-NMR spektrum tablety obsahujúce kryštalickú formu azitromycínu G je zobrazené na obrázku 29.

Príklad 15

Antimikrobiálny účinok

Účinok kryštalických foriem podľa predmetného vynálezu proti bakteriálnym a protozoálnym patogénom bol demonštrovaný schopnosťou zlúčeniny podľa tohto vynálezu inhibovať rast definovaných kmeňov ľudských (v prípade testu I) alebo zvieracích (v prípade testov II a III) patogénov.

217/B

Test I

Pri nižšie opísanom teste bola využitá bežná metodika a bežné interpretačné kritéria, pričom tento test bol navrhnutý tak, aby poskytol návrh chemických modifikáií, ktoré by viedli k zlúčeninám, ktoré by obchádzali doteraz známe mechanizmy rezistencie voči makrolidom. Pri teste I bol vytvorený panel kmeňov, ktorý zahrňoval rôzne cieľové patogénne druhy, vrátane predstaviteľov mechanizmov rezistencie voči makro makrolidom, ktorí boli skôr charakterizovaní. Použitie tohto panelu umožňuje stanoviť vzájomný vzťah chemickej štruktúry a účinku danej zlúčeniny, a to z hľadiska veľkosti účinku, šírky spektra účinku a štruktúrnych prvkov alebo modifikáií, ktoré môžu byť nevyhnutné pre obídenie mechanizmov rezistencie. Bakteriálne patogény, ktoré zahrňovali uvedený skríningový panel, sú vymenované v nižšie uvedenej tabuľke. V mnohých prípadoch je k dispozícii dvojica materského kmeňa, ktorý je citlivý na daný makrolid, a z neho odvodeného kmeňa, ktorý je rezistentný voči danému makrolidu, pričom táto dvojica slúži na poskytnutie presnejšieho stanovenia schopnosti danej zlúčeniny obísť mechanizmus uvedenej rezistencie. Kmene, ktoré obsahujú gén opisovaný ako ermA/ermB/ermC sú rezistentné voči antibiotikám na báze makrolidov, linkosamidov a streptogramínu B vďaka modifikáciám (metyláciam) molekúl 23S rRNA Ermmetylázou, čim je všeobecne zabránené viazaniu všetkých troch uvedených štruktúrnych skupín antibiotík. Boli opísané dva typ vypudzovania makrolidov, msr/\ kóduje zložku vypudzovacieho systému u stafylokokov, ktorá bráni vstupu makrolidov a streptogramínov, zatiaľ čo mefA/E kóduje transmembránový proteín, ktorý asi patrne vypudzuje iba makrolidy. K inaktivácii makrolidových antibiotík môže dochádzať a táto inaktivácia môže byť sprostredkovaná buď pri fosforylácii 2'-hydroxylovej skupiny (mph) alebo pri odštiepení makrocyklického laktónu (esterázou). Uvedené kmene je možné charakterizovať pomocou bežnej technológie využívajúcej polymerázové reťazové reakcie (PCR) a/aíebo sekvencovaním časti, ktorá je rozhodujúca pre vznik zhora opísanej rezistencie. Použitie technológie PCR v rámci predmetného vynálezu je opísané v publikácii

217/B ŕ · r r t e * - « · « ' t> r e r r r r r r / · r r r· t r r

J. Sutcliffe a spolupracovníci, Detection of Erythromycin-Resitant Determinants by PCR”, Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 1996, 40 (11), 2562-2566. Uvedený test bol uskutočnený na platniach s jamkami umožňujúcimi prácu v mikrolitrovom meradle a výsledky testu boli interpretované podľa pokynov Performance Standards for Antimicrobial Disk Susceptibility Tests - Sixth Edition, Approved Standard, ktoré vydala Národná komisia pre klinické laboratórne štandardy (NCCLS - The National Committee for Clinical Laboratory Standards). Pre vzájomné porovnanie jednotlivých kmeňov boli stanovené minimálne inhibičné koncentrácie (MIC). Kryštalická zlúčenina podľa tohto vynálezu bola na počiatku testu rozpustená v dimetylsulfoxide (DMSO) za vzniku zásobného roztoku s koncentráciou 40 miligramov/mililiter.

Označenie kmeňa	Mechanizmus rezistencie k makrolidom
Staphylococcus aureus 1116	citlivý materský kmeň
Staphylococcus aureus 1117	ErmB
Staphylococcus aureus 0052	citlivý materský kmeň
Staphylococcus aureus 1120	ErmC
Staphylococcus aureus 1032	msrA, mph, esteráza
Staphylococcus hemolyticus 1006	msrA, mph
Streptococcus pyogenes 0203	citlivý materský kmeň
Streptococcus pyogenes 1079	ErmB
Streptococcus pyogenes 1062	citlivý materský kmeň
Streptococcus pyogenes 1061	ErmB
Streptococcus pyogenes 1064	ErmB
Streptococcus agalactiae 1024	citlivý materský kmeň
Streptococcus agalactiae 1023	ErmB
Streptococcus pneumoniae 1016	citlivý kmeň
Streptococcus pneumoniae 1046	ErmB
Streptococcus pneumoniae 1095	ErmB

217/B • · • * Γ

Označenie kmeňa	Mechanizmus rezistencie k makrolidom
Streptococcus pneumoniae 1175	MefE
Streptococcus pneumoniae 0085	citlivý kmeň
Haemophilus influenzae 0131	citlivý kmeň
Moraxella catarrhalis 0040	citlivý kmeň
Moraxella catarrhalis 1055	rezistencia erytromycínového medziproduktu
Escherichia coli 0266	citlivý kmeň

Test II slúžil na otestovanie účinku proti kmeňu Pasteurella multocida a test III slúžil na otestovanie účinku proti Pasteurella haemolytica.

Test II

Tento test bol založený na zrieďovacej metóde a bol uskutočnený v mikrolitrovom meradle. Samostatná kolónia P. multocida (kmeň 59A067) bola inokulovaná do 5 mililitrov živného média BHI (brain heart infusion). Vzorka testovanej zlúčeniny bola pripravená rozpustením 1 miligramu zlúčeniny v 125 mikrolitroch dimetylsulfoxidu (DMSO). Zriedené roztoky testovanej zlúčeniny boli pripravené s použitím neinokulovaného živného média BHI. Použité koncentrácie testovanej zlúčeniny sa pohybovali v rozmedzí od 200 mikrogramov/mililiter do 0,098 mikrogramu/mililiter pri dvojnásobných sériových riedeniach. Živné médium BHI inokulované kmeňom P. multocida bolo zriedené neinokulovaným médiom BHI tak, aby výsledná suspenzia obsahovala 10⁴ buniek/200 mikrolitrov suspenzie. Bunkové suspenzie boli zmiešané s príslušne sériovo nariedenými roztokmi testovanej zlúčeniny a inkubované 18 hodín pri teplote 37 °C. Hodnota minimálnej inhibičnej koncentrácie (MIC) zodpovedá koncentrácii danej zlúčeniny, pri ktorej podľa stanovení v porovnaní s neinokulovanou porovnávacou vzorkou, dochádza k 100 percentnej inhibícii rastu kmeňa P. multocida.

217/B » » P f

Test III

Tento test bol založený na metóde agarového riedenia pomocou replikátora Steers. Dve až päť kolónii izolovaných z agarovej platne bolo inokulovaných do živného média BHI a táto zmes bola inkubovaná cez noc pri teplote 37 °C, pričom táto inkubácia bola spojená s trepaním rýchlosťou 200 otáčok za minútu. Na druhý deň bolo 300 mikrolitrov plne narastenej prekultury P. haemoltica inokulovaných do 3 mililitrov čerstvého živného média BHI a táto zmes bola inkubovaná pri teplote 37 °C, pričom i táto inkubácia bola spojená s trepaním rýchlosťou 200 otáčok za minútu. Príslušné množstvá testovaných zlúčenín boli rozpustené v etanole a bolí pripravené rady dvojnásobne sériovo zriedených roztokov. 2 mililitre daného sériovo zriedeného roztoku boli zmiešané s 18 mililitrami roztaveného agaru BHI a vzniknutá zmes sa nechala stuhnúť. Akonáhle uvedená inokulovaná kultúra P. haemolytica dosiahla hodnotu štandardnej McFarlandovej hustoty 0,5, bolo pomocou replikátora Steers inokulovaných približne 5 mikrolitrov tejto kultúry P. haemolytica na povrch agarových platní BHI, ktoré obsahovali rôzne koncentrácie testovanej zlúčeniny a takto inokulované platne boli inkubované 18 hodín pri teplote 37 °C. Počiatočné koncentrácie testovanej zlúčeniny sa pohybovali v rozmedzí od 100 mikrogramov/mililiter do 200 mikrogramov/mililiter. Hodnota minimálnej inhibičnej koncentrácie (MIG) zodpovedá koncentrácii danej zlúčeniny, pri ktorej podľa stanovení v porovnaní s neinokulovanou porovnávacou vzorkou, dochádza k 100 percentnej inhibícii rastu kmeňa P. haemolytica.

In vivo účinok kryštalických foriem podľa predmetného vynálezu je možné stanoviť bežnými štúdiami ochrany zvierat, ktoré sú odborníkovi v danej oblasti techniky dobre známe a ktoré sa obvykle uskutočňujú na myšiach.

Myši boli umiestnené do klietok (po desiatich kusoch) a pred ich použitím im bol ponechaný čas na aklimatizáciu v dĺžke minimálne 48 hodín. Zvieratá boli intraperitoneálne inokulované 0,5 mililitrom bakteriálnej suspenzie (kmeňa P. multocida 59A006) s koncentráciou 3 x 10³ CFU/mililiter. Pri každom experimente boli použité aspoň 3 neošetrované porovnávacie skupiny zvierat,

217/B ktorými boli: 1 skupina zvierat infikovaných 0,1 násobkom provokačnej dávky a 2 skupiny zvierat infikovaných 1 násobkom provokačnej dávky. Pri uvedenej štúdii bolo možné použiť i skupinu zvierat infikovanú 10 násobkom provokačnej dávky. Všeobecne bolo možné všetky zvieratá zahrnuté do danej štúdie infikovať behom 30 až 90 minút, a to zvlášť pokiaľ bola na aplikáciu provokačnej dávky použitá opakovacia injekčná striekačka (ako je injekčná striekačka Cornwall®). Tridsať minút po podaní prvej provokačnej dávky bolo začaté liečenie zvierat testovanou zlúčeninou. V prípadoch, kedy behom uvedených 30 minút nebola ešte všetkým zvieratám podaná provokačná dávka, bola pre začatie podávania dávky testovanej zlúčeniny nevyhnutná asistencia druhej osoby. Testovaná zlúčenina bola podávaná v subkutánnych alebo orálnych dávkach. Subkutánne dávky boli podávané do voľnej kože na zadnej strane krku zvierat, zatiaľ čo orálne dávky boli podávané pomocou kŕmiacej ihly. V oboch prípadoch bola každej myši podaná dávka objemu 0,2 mililitra. Testované zlúčeniny boli podávané 30 minút, 4 hodiny a 24 hodín po podaní provokačnej dávky. Pri každom teste boli použité i zlúčeniny známej účinnosti, pričom tieto zlúčeniny boli podávané rovnakými spôsobmi ako testované zlúčeniny. Zvieratá boli denne kontrolované a bol zaznamenávaný počet jedincov, ktorí prežili. Pozorovanie modelu monitorujúceho liečbu infekcie kmeňom P. multocida trvalo 96 hodín (4 dni) po podaní provokačnej dávky.

Hodnoty PD₅₀ boli vypočítané ako veľkosť dávky, pri ktorej daná testovaná zlúčenina ochránila 50 percent myší v skupine pred ich úmrtím, ktorého príčinou je bakteriálna infekcia, ktorá by v prípade absencie liečby daným liečivom mohla byť letálna.

Kryštalické formy podľa predmetného vynálezu (ktoré sa ďalej označujú ako aktívna zlúčenina(y) podľa tohto vynálezu) je možné pri liečení bakteriálnych alebo protozoálnych infekcií podávať orálne, parenterálne, topicky alebo rektálne. Všeobecne sa aktívna zlúčenina podľa predmetného vynálezu podáva v dávke od približne 0,2 miligramu/kilogram telesnej hmotnosti a deň do približne 200 miligramov/kilogram telesnej hmotnosti a deň, a to vo forme jedinej alebo niekoľkých dávok (t.j. vo forme 1 až 4 dávok denne), pričom v

217/B r p #» e uvedenom rozmedzí dávok môže byť nevyhnutné uskutočniť zmeny podľa druhu, hmotnosti a celkového stavu jedinca, ktorý má byť liečený, a podľa konkrétne zvoleného spôsobu podávania aktívnej zlúčeniny podľa tohto vynálezu. Avšak najvýhodnejšie sa používa dávka v rozmedzí od približne 2 miligramov/kilogram telesnej hmotnosti a deň do približne 50 miligramov/kilogram telesnej hmotnosti a deň. I v týchto hodnotách však môže byť nevyhnutné uskutočňovať zmeny podľa druhu cicavca, ryby alebo vtáka, ktorý má byť liečený, a podľa jeho individuálnej odozvy na dané liečivo, podľa druhu použitého farmaceutického prostriedku a podľa doby trvania a intervalu, v akom sa toto podávanie uskutočňuje. V niektorých prípadoch môžu byť dávky nižšie ako je spodná hranica vyššie uvedeného rozmedzia dávok, viac než primerané, zatiaľ čo v iných prípadoch môžu byť použité vyššie dávky, ako je horná hranica vyššie uvedeného rozmedzia dávok, bez toho, aby tieto vyššie dávky spôsobili škodlivé vedľajšie účinky, avšak za predpokladu, že tieto vyššie dávky sú rozdelené na niekoľko menších čiastkových dávok podávaných v priebehu celého dňa.

Aktívna zlúčenina podľa predmetného vynálezu sa môže podávať samostatne alebo v kombinácii s farmaceutický prijateľnými nosičmi alebo riedidlami, a to už spomenutými spôsobmi, pričom toto podávanie sa môže uskutočňovať vo forme jedinej dávky alebo vo forme niekoľkých čiastkových dávok. Konkrétnejšie je možné uviesť, že aktívna zlúčenina podľa predmetného vynálezu sa môže podávať v mnohých rôznych dávkových formách, tzn. že sa aktívne zlúčeniny podľa tohto vynálezu môžu kombinovať s rôznymi farmaceutický prijateľnými inertnými nosičmi do formy tabliet, kapsúl, pastiliek, tvrdých bonbónov, práškov, sprejov, krémov, mastí, čapikov, želé, pást, pleťových roztokov, vreciek, práškov na prípravu orálnych suspenzii, vodných suspenzií, injikovateľných roztokov, elixírov, sirupov a pod. Skupina takýchto nosičov zahrňuje pevné riedidlá alebo plnivá, sterilné vodné média a rôzne netoxické organické rozpúšťadlá atď. Okrem toho môžu byť orálne farmaceutické kompozície podľa tohto vynálezu vhodným spôsobom osladené a/alebo ochutené. Všeobecne je aktívna zlúčenina podľa predmetného vynálezu prítomná v uvedených dávkových formách v koncentrácii od približne

217/B • · hmotnostného percenta do približne 70 hmotnostných percent.

Na orálne podávanie je možné použiť tablety obsahujúce rôzne excipienty, ako je mikrokryštalická celulóza, citrát sodný, uhličitan vápenatý, dikalciumfosfát a glycerín spolu s rôznymi dezintegračnými činidlami, ako je škrob (výhodne kukuričný škrob, zemiakový škrob alebo maniokový škrob), kyselina algínová a niektoré komplexné kremičitany, spolu s granulačnými spojivami, ako je polyvinylpyrolidón, sacharóza, želatína a arabská guma. Ďalej je pre účely tabletovania veľmi často vhodné použiť lubrikačné činidlo, ako je stearát horečnatý, laurylsulfát sodný a mastenec. Pevné kompozície podobného typu je rovnako možné použiť ako plnivo v želatínových kapsuliach, pričom v tejto súvislosti je ako výhodný materiál možné uviesť laktózu alebo mliečny cukor a ďalej polyetylénglykoly vysokej molekulovej hmotnosti. Pokiaľ je na orálne podávanie žiaduce použiť vodnú suspenziu a/alebo elixíry, môže byť aktívna zlúčenina podľa predmetného vynálezu kombinovaná s rôznymi sladidlami alebo chuťovými činidlami, farbivami a, pokiaľ je to rovnako žiaduce, emulgačnými a/alebo suspendačnými činidlami spolu s takými riedidlami, ako je voda, etanol, propylénglykol, glycerín a ich rôzne zmesi.

Na parenterálne podávanie je možné použiť roztoky aktívnej zlúčeniny podľa tohto vynálezu buď v sezamovom alebo podzemnicovom oleji alebo vo vodnom propylénglykole. Uvedené vodné roztoky by mali byť v prípade nutnosti vhodným spôsobom pufrované (výhodne na pH vyššie ako 8) a dané kvapalné riedidlo by malo byť najskôr upravené tak, aby bolo izotonické. Takéto vodné roztoky sú vhodné pre účely podávania intravenóznej injekcie. Uvedené roztoky v olejoch sú vhodné pre účely podávania intraartikulámych, intramuskulárnych a subkutánnych injekcií. Príprava všetkých týchto roztokov za sterilných podmienok sa ľahko uskutočňuje štandardnými farmaceutickými postupmi, ktoré sú odborníkovi v danej oblasti techniky dobre známe.

Ďalej je rovnako možné podávať aktívnu zlúčeninu podľa tohto vynálezu topicky, pričom toto podávanie sa môže uskutočňovať pomocou krémov, želé, gélov, pást, náplastí, mastí a pod. v súlade so štandardnou farmaceutickou praxou.

217/B r- f

Na podávanie iným živočíchom ako človek, ako je dobytok alebo domáce zviera, je možné aktívne zlúčeniny podľa predmetného vynálezu primiešať do krmiva pre tieto zvieratá alebo je možné ich podávať orálne v pití určenom pre tieto zvieratá.

Aktívu zlúčeninu podľa predmetného vynálezu je rovnako možné podávať vo forme lipozómových systémov, ako sú malé unilamelárne vezikuly, veľké unilamelárne vezikuly a multilameláme vezikuly. Lipozómy je možné vytvoriť z rôznych fosfolipidov, ako je cholesterol, stearylamín alebo fosfatidylcholíny.

Claims (15)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Kryštalická forma azitromycínu, vyznačujúca sa tým, že je vybraná zo skupiny pozostávajúcej z kryštalickej formy D, kryštalickej formy E, v podstate čistej kryštalickej formy F, v podstate čistej kryštalickej formy G, kryštalickej formy H, kryštalickej formy J, kryštalickej formy M v podstate neobsahujúcej dihydrát azitromycínu, kryštalickej formy N, kryštalickej formy O, kryštalickej formy P, kryštalickej formy Q a kryštalickej formy R.
2. 2. Kryštalická forma azitromycínu podľa nároku 1, vyznačujúca sa tým, že uvedenou kryštalickou formou je kryštalická forma D, pričom táto kryštalická forma obsahuje v ¹³C NMR spektre meranom v pevnom stave charakteristické piky s chemickým posunom približne 178,1 ppm, 103,9 ppm, 95,1 ppm, 84,2 ppm, 10,6 ppm, 9,0 ppm a 8,6 ppm.
3. 3. Kryštalická forma azitromycínu podľa nároku 1, vyznačujúca sa tým, že uvedenou kryštalickou formou je kryštalická forma E.
4. 4. Kryštalická forma azitromycínu podľa nároku 1, vyznačujúca sa tým, že uvedenou kryštalickou formou je v podstate čistá kryštalická forma F, pričom táto kryštalická forma obsahuje v ¹³C NMR spektre meranom v pevnom stave charakteristické piky s chemickým posunom približne 179,5 ppm, 178,6 ppm, 58,0 ppm, 10,1 ppm, 9,8 ppm, 9,3 ppm a 7,9 ppm a 6,6 ppm.
5. 5. Kryštalická forma azitromycínu podľa nároku 4, vyznačujúca sa tým, že uvedená kryštalická forma zahrňuje 90 hmotnostných percent alebo viac kryštalickej formy azitromycínu F.

   32 217/B r c r e· c r f ľ- r r r r
6. 6. Kryštalická forma azitromycinu podľa nároku 1, vyznačujúca sa tým, že uvedenou kryštalickou formou je v podstate čistá kryštalická forma G, pričom táto kryštalická forma obsahuje v ^{10 * * 13}C NMR spektre meranom v pevnom stave charakteristické piky s chemickým posunom približne 179,5 ppm, 10,4 ppm, 9,9 ppm, 9,3 ppm, 7,6 ppm a 6,5 ppm.
7. 7. Kryštalická forma azitromycinu podľa nároku 6, vyznačujúca sa tým, že uvedená kryštalická forma zahrňuje 90 hmotnostných percent alebo viac kryštalickej formy azitromycinu G.
8. 8. Kryštalická forma azitromycinu podľa nároku 1, vyznačujúca sa tým, že uvedenou kryštalickou formou je kryštalická forma H, pričom táto kryštalická forma obsahuje v ¹³C NMR spektre meranom v pevnom stave charakteristické piky s chemickým posunom približne 179,5 ppm, 178,7 ppm, 9,9 ppm, 9,1 ppm a 7,9 ppm a 7,0 ppm.
9. 9. Kryštalická forma azitromycinu podľa nároku 1, vyznačujúca sa tým, že uvedenou kryštalickou formou je kryštalická forma J, pričom táto kryštalická forma obsahuje v ¹³C NMR spektre meranom v pevnom stave charakteristické piky s chemickým posunom približne 179,6 ppm, 178,4 ppm, 25,2 ppm, 11,5 ppm a 10,0 ppm, 9,3 ppm, 8,1 ppm a 6,8 ppm.
10. 10. Kryštalická forma azitromycinu podľa nároku 1, vyznačujúca sa tým, že uvedenou kryštalickou formou je kryštalická forma M v podstate neobsahujúca dihydrát azitromycinu, pričom táto kryštalická forma obsahuje v ¹³C NMR spektre meranom v pevnom stave charakteristické piky s chemickým posunom približne 179,6 ppm, 41,9 ppm, 26,0 ppm, 16,3 ppm a 10,3 ppm, 9,6 ppm, 9,3 ppm, 7,7 ppm a 7,1 ppm.

    32 217/B • * • r
11. 11. Kryštalická forma azitromycínu podľa nároku 1, vyznačujúca sa tým, že uvedenou kryštalickou formou je kryštalická forma N, pričom táto kryštalická forma obsahuje v ¹³C NMR spektre meranom v pevnom stave charakteristické piky s chemickým posunom približne 179,6 ppm, 178,7 ppm, 105,6 ppm, 58,1 ppm, 26,0 ppm, 9,9 ppm, 9,4 ppm, 7,9 ppm a 6,6 ppm.
12. 12. Kryštalická forma azitromycínu podľa nároku 1, vyznačujúca sa tým, že uvedenou kryštalickou formou je kryštalická forma O.
13. 13. Kryštalická forma azitromycínu podľa nároku 1, vyznačujúca sa tým, že uvedenou kryštalickou formou je kryštalická forma P.
14. 14. Kryštalická forma azitromycínu podľa nároku 1, vyznačujúca sa tým, že uvedenou kryštalickou formou je kryštalická forma Q.
15. 15. Kryštalická forma azitromycínu podľa nároku 1, vyznačujúca sa tým, že uvedenou kryštalickou formou je kryštalická forma R, pričom táto kryštalická forma obsahuje v ¹³C NMR spektre meranom v pevnom stave charakteristické piky s chemickým posunom približne 177,9 ppm, 103,6 ppm, 95,3 ppm, 10,3 ppm, 9,6 ppm, 8,9 ppm a 8,6 ppm.