SE531639C2 - Kosmetiska kompositioner som innehåller extrakt av lingon (Vaccinium vitis idea) - Google Patents

Description

25 30 35 531 E33 2 medicinskt effektiva föreningar. Hudvårdsberedningen har inhibitoriska effekter på melaninbiidning.

JP2002 003 389 beskriver ett kosmetikum som tar hand om fria radikaler (radicai scavenger) med utmärkta radikalomhändertagande egenskaper. Kompositionen innefattar en pressad och filtrerad substans och/eller extrakt av en tranbärsfmkt som i allt väsentligt består av en antocyaninpolymer.

Vattenhaltiga lingonextrakt skiljer sig från fröoljan eller tranbärsextrakten genom sitt innehåll av flavonoider och fenolsyror.

Det finns därför ett behov av alternativa, effektiva kosmetiska kompositioner för lokal applicering på huden för behandling och/eller fördröjning av de synliga tecknen på åldrande och fotoskadad hud, såsom rynkor, linjer, slapphet, hyperpigmentering, torr hud och àldersfiäckar.

Ett syfte för uppfinningen är därför att tillhandahålla en Kosmetisk komposition för behandling och/eller förebyggande av normala hudtillstånd till följd av kronologiskt åldrande eller fotoåldrande, såsom rynkor, linjer, slapphet, hyperpigmentering och åldersfläckar, och/eller av torr, fjällande, kliande, irriterad hud.

Sammanfattning av uppfinningen Uppfinningen tillhandahåller följaktligen användning av en terapeutiskt effektiv mängd av ett vattenhaltigt extrakt av en kombination av frukt- och bladextrakt av lingon (Vaccinium vitis idea) och/eller derivat därav, vid tillverkning av en kosmetisk komposition för behandling av hudtillstånd. Den kosmetiska kompositionen är lämplig för användning vid tillstånd som har valts från gruppen bestående av rynkbildning, slapphet, fotoskadad hud, torr hud, fjällande hud, irriterad hud, kliande hud och åldersfläckar.

I en föredragen utföringsform föreligger omkring 50 viktprocent av extraktet av lingon (svenska tranbär) och/eller derivat därav, som bladextrakt och de andra 50 procenten som fruktextrakt. Minst 50 viktprocent av extraktet föreligger företrädesvis som bladextrakt.

Det har oväntat visat sig att effektiv behandling och motverkande av hudtillstànd till följd av kronologiskt åldrande eller fotoåldrande, såsom rynkor, linjer, slapphet, hyperpigmentering och åldersfläckar, och/eller av torr, fjällande, kliande, irriterad hud kan erhållas genom applicering av kosmetiska kompositioner på huden, vilka innefattar en specifik synergistisk kombination av frukt- och bladextrakt av lingon (svenska tranbär) eller derivat därav.

Den kosmetiska kompositionen kan innefatta från 0,0001 till 50 viktprocent av extrakt av lingon (svenska tranbär), företrädesvis från 0,01 till 10 viktprocent av extrakt av lingon (svenska tranbär), mest föredraget från 0,1 till 5 viktprocent av extrakt av lingon (svenska tranbär). 10 15 20 25 30 35 3 Sådana kompositioner är särskilt användbara förtopisk applicering på humanhud för kosmetisk behandling och/eller förebyggande av hudtillstånd som har valts från gruppen bestående av rynkbildning, slapphet, fotoskadad hud, torr hud, fjällande hud, irriterad hud, kliande hud och åldersfläckar. Kompositionerna är även användbara för applicering på huden som en kosmetisk behandling som befrämjar epidermal regenerering och cellulär fömyelse genom keiering avjoner, skydd mot fria radikaler men i synnerhet skydd mot UV-stràlning, induktion av epidermal differentiering och inhibition av kollagenas.

Vattenhaltiga bärextrakt skiljer sig fràn fröoljefraktioner genom sitt innehåll av flavonoider och fenolsyror. De innehåller till exempel kämpferol, quercetin, myricetin, kumarinsyra och ferulinsyra etc. Markerade skillnaderi koncentration av biokemikalierna återfinns i olika familjer och genus. Tranbär är en av de rikaste källorna av flavonoider och är i synnerhet rika på quercetin och myricetin. Även typ A proantocyanidiner återfinns i synnerhet i tranbär, medan B-typerna återfinns i andra typer av bär. Svenska tranbär eller lingon (Vaccinium vitis idea) innehåller dessutom jämfört med europeiska tranbär (Vaccinium oxycoccus) dubbelt så mycket fenoler, högre kvantiteter av secisolariciresinol, antocyaniner och cyanidiner, tillsammans med mer resveratrol. l en utföringsform tillhandahåller uppfinningen en topisk komposition som innefattar: (a) en terapeutiskt effektiv mängd av ett vattenhaltigt extrakt av en kombination av frukt- och bladextrakt av lingon (Vaccinium vitis idea) tillsammans med (b) en dermatologiskt acceptabel bärare.

Kompositionen enligt uppfinningen kan innefatta en dermatologiskt/kosmetiskt acceptabel vehikel med verkan som utspädningsmedel, dispergeringsmedel eller bärare för extrakten av lingon (svenskt tranbär). Bäraren kan väljas från gruppen bestående av vatten, vätskeformiga eller fasta lenande ämnen, silikonoljor, emulgermedel, lösningsmedel, fuktighetsbevarande medel, förtjockningsmedel, pulver, drivgaser och liknande.

Bäraren kommer vanligen att utgöra från 5 till 99,9 viktprocent, företrädesvis från 25 till 80 viktprocent av kompositionen, och kan i frånvaro av andra kosmetiska tillsatser utgöra återstoden av kompositionen.

Kompositionen kan även innefatta andra specifika aktiva ämnen som är fördelaktiga för huden, såsom solskyddsmedel, fuktande ämnen, ämnen som gör huden ljusare. Vehikeln kan även vidare inkludera tillsatser såsom parfymer, opakgörande medel, konserveringsmedel, färgämnen, buffrar och andra ingredienser som motverkar åldrande.

Den topiska kompositionen enligt den föreliggande uppfinningen kan framställas på ett sätt som är välkänt inom teknikområdet för framställning av hudvårdsprodukter. De aktiva komponentema är i allmänhet på sedvanligt sätt införda i en dermatologiskt acceptabel bärare. De aktiva komponenterna kan lämpligen först lösas upp 10 15 20 25 30 35 ïšïši 5355 4 eller dispergeras i en del av det vatten, annat lösningsmedel eller vätska som skall införas i kompositionen.

De föredragna kompositionerna är emulsioner med olja i vatten eller vatten i olja.

Kompositionen kan vara i form av sedvanliga hudvàrdande produkter såsom en kräm, gel eller lotion, eller liknande. Kompositionen kan även vara i form av ett rengöringsmedel (cleanser), till exempel en bad- eller duschgel, vilken eventuellt kan innehålla ett administreringssystem för de aktiva ämnena för att främja vidhäftning till huden vid sköljning. Kompositionen kan även vara en underlagskräm (foundation) eller annan färgande produkt, till exempel mascara eller läppstift. Produkten är mest föredraget en topisk produkt som skall lämnas kvar (”leave-on”); en produkt som skall appliceras på huden utan ett avsiktligt sköljningssteg nära inpå dess applicerlng på huden.

Kompositionen kan packas på vilket lämpligt sätt som helst, såsom i en burk, en flaska, tub, rullkula (roll-ball) elleri påsar.

Uppfinningen tillhandahåller vidare ett kosmetiskt förfarande för behandling/förebyggande av hudtillstånd som väljs frän gruppen bestående av rynkbildning, slapphet, fotoskadad hud, torr hud, fjällande hud, irriterad hud, kliande hud och åldersfläckar, varvid förfarandet innefattar applicering på huden av en topisk komposition som innefattar ett extrakt av lingon (svenska tranbär). Extraktet kan innefatta omkring 50 viktprocent fruktextrakt av lingon och omkring 50 viktprocent bladextrakt av lingon.

Förfarandet enligt den föreliggande uppfinningen kan utföras en eller flera gånger dagligen på den hud som kräver behandling. Förbättring av hudens utseende kommer vanligen att bli synlig efter 3 till 6 månader, beroende på hudens tillstånd, koncentrationen av de aktiva komponenter som används i förfarandet enligt uppfinningen, den mängd av kompositionen som används och frekvensen med vilken den appliceras. En liten kvantitet av kompositionen appliceras i allmänhet på huden från en lämplig behållare eller applikator, till exempel från 0,1 till 5 ml, och sprids över och/eller masseras in i huden genom användning av händerna eller fingrarna eller en lämplig anordning. Ett sköljningssteg kan eventuellt följa, beroende på huruvida kompositionen är formulerad som en produkt som skall lämnas kvar ("leave on”) eller en rengöringsprodukt.

Kompositionerna och förfarandena enligt uppfinningen tillhandahåller följaktligen åldrandemotverkande fördelar som resulterari befrämjande av slät och smidig hud med förbättrad hudelasticitet och en reducerad eller fördröjd uppkomst av rynkor, samt åldrad hud med förbättrad hudfärg. En allmän förbättring av hudens utseende, textur och kondition erhålles, i synnerhet med avseende på utstrålning, klarhet, och allmänt ungdomligt utseende. Förfarandena och kompositionema enligt uppfinningen tillhandahåller följaktligen en mångfald av hudvårdsfördelar. 10 15 20 25 30 533 535 5 Termen "behandling" inkluderar som använd häri inom sitt omfång reduktion, fördröjning och/eller förebyggande av uppkomst av rynkad, àldrad, fotoskadad, torr och/eller torr och irriterad hud och höjer i allmänhet hudens kvalitet genom att förbättra dess utseende och textur, genom att motverka eller reducera rynkbildning och öka hudens flexibilitet, fasthet, släthet, smidighet och elasticitet. De kosmetiska kompositionerna, förfarandena och användningarna av extrakten av lingon (svenska tranbär) enligt uppfinningen kan vara användbara för behandling av hud som redan är i ett rynkat, àldrat, fotoskadat, torrt och irriterat tillstànd eller för behandling av ungdomlig hud för förebyggande eller reduktion av försämrande förändringar till följd av normalt åldrande, men i synnerhet fotoåldrandeprocessen.

Detaljerad beskrivning av uppfinningen Extrakt av lingon (svenska tranbär -Vaccinium vitis idea) Extrakt av lingon (\/accinium vitis idea) som skall användas i enlighet med den föreliggande uppfinningen föreliggeri den topiska kompositionen i en effektiv mängd som har erhållits frán frukt ochlelier fràn bladet. Kombinationen av båda extrakten kommer mest föredraget att användas, och en 50:50-kombination av extraktet av blad och frukt kommer mest föredraget att användas.

Extrakt av lingon (\/accinium vitis idea) innefattar ett vattenhaltigt extrakt med mycket polyfenoier, i synnerhet flavonoler och flavanoler, och oligosackarider. Både blad- och fruktextrakt innehåller aromatiska syraföreningar såsom hydroxibensoesyra och hydroxikanelsyra, vanliga flavanoler är epicatechin, medan vanliga flavonoler är quercitrin och quercetin. Bladextraktet innehåller mer flavonolerjämfört med frukten, sà att nästan lika stora kvantiteter av flavanoler och flavonoler föreligger i extraktet av lingon (svenska tranbär), när de kombineras. Den vanliga kompositionen med de kombinerade polyfenolerna som skulle kunna identifieras är inte desto mindre: Familj Föreningar Koncentration (°/°) Hydroxibensoesyra 1,3 Fenol 12,5 Hydroxikanelsyra 13,5 Flavanol 25.9 Flavonol Quercetin 26,6 i På grund av den naturliga biologiska variationen av polyfenoleri växter bör dessa kompositioner enbart ses som typiska exempel och deras koncentrationer kommer att 10 15 20 25 30 35 šåfi E39 6 variera från sats till sats och från år till år, men ungefär samma förhållanden mellan klasser förutses.

Extrakt av lingon (\/accinium vitis idea) som skall användas i enlighet med den föreliggande uppfinningen föreligger i den topiska kompositionen i en effektiv mängd. Den totala mängden av det aktiva ämnet föreligger normalt i en mängd mellan 0,0001 och 50 viktprocent av kompositionen. Mängden är mer föredraget från 0,01 % till 10 % och mest föredraget från 0,1 % till 5 %, för att maximera fördelama vid en minimal kostnad.

För att den föreliggande uppfinningen enklare skall kunna förstås presenteras följande exempel, vilka enbart har àskàdliggörande syfte.

Hudàldrande är en komplicerad process som styrs av ett antal faktorer som delas upp i inre och yttre faktorer som inkluderar genetik, exponering för omgivningsstress (UV, mekanisk stress), hormonförändringar eller metabolism. De kombinerade resultaten av dessa olika faktorer är försämring av hudens struktur, dess funktion och dess utseende (Rittie et al., 2002). l synnerhet omgivningens och UV-strálnings inverkan är mycket viktig i hudens åldrandeprocess (Rittie et al., 2002). Det är nu känt att dessa effekter är direkt relaterade till utjämning av den dermala-epidermala förbindelsen (Junction), till nedbrytning av hudens fibersystem, den extracellulära matrisen (ECM) och till förändring av epidermis.

ECM bildas av fibroblaster och keratinocyter. Den består av makromolekyler som inkluderar kollagener, elastin, proteoglykaner och fibronektin. Kollagen och elastin är de huvudsakliga komponenterna i ECM och ingår i vävnader i from av olösliga, rigida och stabila fibrer. De är tätt sammanvävda och organiserade lett nätverk av mikrofibriller som ger soliditet och mekanisk resistans till bindvävnader. ECM verkar således som ett fysiskt stöd, men utför även biologiska, intracellulära utbytes- och kommunikationsfunktioner som är nödvändiga för nära kontakt mellan dermis och epidermis och hudvävnadens integritet.

Kronologiskt åldrande eller omgivningsstress (i synnerhet solljus) förstör denna balans. Cellulär metabolisk aktivitet minskar och förnyelsen av kollagenfibrer minskar.

Enzymatlska aktiviteter ökar parallellt dramatiskt och resulterar i en överdriven och anarkisk nedbrytning av kollagenfibrer och en strukturförlusti ECM. Huden förlorar sin smidighet och elasticitet och blir slapp.

Alltsedan McCords och Fridovichs arbete 1969 om superoxiddismutas har betydande intresse fokuserats på förhållandet mellan fria radikaler [superoxid (02) och hydroxyl (OH-)-anjoner och andra reaktiva syrehaltiga föreningar (reactive oxygen species, (ROS)] och hudens åldrande. Ursprunget till fria radikaler kan vara endogent (aktivering av arakidonsyrametabolism, aktivering av fagocytos eller ackumulering av reducerade metaboliter) eller exogent (strålning, UV fràn solljus, luftföroreningar, tobaksrök, bekämpningsmedel med mera). 10 15 20 25 30 ššfi E39 7 Samtliga celler har varierande grader av kemiska och enzymatiska arsenaler mot fria radikaler. Detta möjliggör för dem att utöva ett naturligt skydd mot dessa högst reaktiva molekyler och att optimalt kontrollera deras skadliga effekter. Cellulära responser kan emellertid variera beroende på den oxidatlva stressens omfattning. Små kvantiteter av ROS stimulerar cellprollferation och det överuttryck av antioxidativa enzymer som kan anpassas till och reagera pâ stressen. När de produceras i överdrivna kvantiteter kan ROS à andra sidan sett attackera en serie av biologiska substrat. Dessa skyddssystem övermannas ofta och kan inte hantera ett övermannande radikalflöde. Detta mättnadsfenomen förstärks med àldern. ROS orsakari detta fall ofta irreversibel cellskada och kan till och med leda till celldöd (McCord et al., 1996). De huvudsakliga effektema av denna okontrollerade oxidatlva stress är intensiva, målriktade och irreversibla: oxidation av proteiner och enzyminaktivering, DNA-kedjebrott och lipidperoxidering.

Exempel 1 Extrakt av svensk tranbärsfrukt (Vaccinium vitis idea) är mer effektivt än extrakt av europeisk tranbärsfrukt (Vaccinium oxycoccus) för skyddande av humana keratinocfler mot oxidativ §l@_S_S_- Aktiva syreföreningar och andra fria radikaler antas medverka vid aktinàldrande. För att bestämma vissa substansers skyddande aktiviteter genomfördes cellivsduglighetstester. Cellodlingar med humana keratinocyter utsattes artificiellt för stress genom hypoxantin-xantinoxidas-systemet. De fria radikaler som bildas under denna stress leder till ökad celldöd. Den antioxidativa aktiviteten hos den testade produkten bestämdes genom mätning av cellöverlevnaden.

Humana keratinocyter ympades pà cellodlingsplattor om 12 brunnar med 2 ml cellsuspension per brunn. Cellodlingama inkuberades under 2 timmar i närvaro eller frånvaro av extrakt med en koncentration av 1 % och 2 %, och utsattes för kemisk aggression med en lösning med hypoxantin (160 ug/ml) - xantinoxidas (10 mU/ml). Extraktens skyddande effekter mot kemiskt inducerade fria radikaler utvärderades genom spektrofotometrisk mätning av cellöverlevnad, utförd med MTT-förfarandet (3-(4.5-dimetyltiazol-2-yl)-2.5- difenyltetrazoliumbromid) vid 540 nm.

Resultaten uttrycks som effektivltetsprocent.

A-B Effektivitetsprocent = A X 100 med 10 15 20 25 E31 BBQ A obehandlad kontroll- A behandlad kontroll A = kontrolltoxicitet = A obehandlad kontroll A obehandlad produkt- A behandlad produkt B = produkttoxicitet = A obehandlad produkt Testema genomfördes som triplikat_ Resultaten visas i tabell 1.

EFFEKTIVITET (%) Tabell 1 1 % koncentration 2 % koncentration Svensk tranbarsfrukt 95 % 100 % Europeisk tranbärsfrukt 27 % 84 % Extrakt av svensk tranbärsfrukt (Vaccinlum vitis idea) är uppenbart mycket effektivare än extrakt av europeiska tranbär (Vaccinlum oxycoccus) för att skydda mot oxidativ stress.

Exempel 2 Uppvisande av svneraism för extrakt av blad & frukt frän linqon (svenska tranbär) avseende fotoskyddande av humana keratinocyter.

Syftet med denna studie var att pä humana keratinocyter bestämma den fotoskyddande aktiviteten mot UVB-strálning hos blad- & fruktextrakt av lingon, jämfört med bladextrakt av lingon och med fruktextrakt av lingon.

Keratinocyter odlades i KSFM-medium (lnvitrogen), ympades vid en densitet av 70 000 celler/brunn pà 24-brunnsplattor. Strälningen genomfördes med en UV-lampa av modellen ”Biosun” (Vilbert-Lourmat, Frankrike). UVB-intensiteterna var 0,6J/cm2, varför sig, i närvaro av: - Bladextrakt av lingon vid 0,50 % & 1 % - Fruktextrakt av lingon vid 0,50 % 1 % - Blad- & fruktextrakt av lingon vid 0,50 % & 1 % Efter strålningen hölls cellema vid 37°C under 6 timmarl en fuktig atmosfär som innehöll 5 % C02. Den fotoskyddande effekten hos vardera produkten uppskattades genom 9 mätning av keratinocytemas överlevnadsförmàga efter färgning med lvi.T.T. Resultaten uttrycks som procentuellt cellskydd.

Cellskydd / kontroll (%) = X 100 med 5 Abs icke bestràlad kontroll- Abs bestràlad kontroll A: kontromoxicitet z Abs icke bestråiad kontroll Abs icke bestràlad produkt- Abs bestràlad produkt B: produkttoxicitet = Abs icke bestrålad produkt Abs: absorbans. Samtliga experiment utfördes som triplikat. 10 Resultaten visas i tabell 2.

Tabell 2: Fotoskyddande effekt av extrakt av LINGON (frukt, blad, blandning ”blad & fru kt") efter UV-angrepp Dos Genomsnittliga Genomsnittliga (MF1 + Genomsnittliga Signifikant resultat Frukt resultat Blad ML1)/2 resultat Frukt resultat (MP1) (Mu) + blad enligt student- testet (i><0,05) 0,5 % 10 70 40 53 0.0053 SYHGFQi 1 % 23 100 61 ,s 66 0.0041 Syneroi 1 5 I alla ytterligare experiment visas enbart effektema av de kombinerade extrakten på celiulär aktivitet, även om båda enskilda extrakten är effektiva. 10 15 20 25 30 ïšišå E33 10 Exempel 3 Effekt av blad- & fniktextrakt av lingon (svenska tranbär) som ett starkt radikalmotverkande ämne Huden är den första skyddsbarriären mot föroreningar i omgivningen inklusive kemiska föroreningar (industriella utsläpp, avgaser) eller solstrålning. Föroreningsfaktorer i omgivningen utlöser en respons fràn hudens försvarssystem som ett resultat av sina oxiderande egenskaper. De inducerar en oxidatlv stress och en obalans l hudens antioxidativa system (Afaq et al., 2001), på grund av bildningen av fria radikaler. Kroppen skyddas naturligt från dessa fria radikaler genom kemiska eller enzymatiska detoxifieringssystem, vilka kan bli överlastade. Dà moblliseras fällor för fria radikaler, vilka kan stoppa dessa reaktioner. Fria radikaler som producerats av olika typer av skiftande angrepp (stress, föroreningar, tobak) betraktas nu som ämnen som bär ansvaret för förtida åldrande genom att orsaka bland annat vävnadsförsämringar, skada hos DNA och hos immunsystemet.

Syftet med denna studie var att bestämma den kelerande förmågan hos blad- & fruktextrakt av lingon (svenska tranbär), mot metalljoner såsom järn. Principen är baserad pà kvantifiering av fri metall med en spektrofotometrisk analys. Analysen av den järn-kelerande förmågan (järnlösning med 10 mg/l) hos blad- och fruktextrakt av lingon (svenska tranbär) genomfördes med ett kolorimetriskt kit (SlGMA, metod nummer 565).

Reagenset ferrozin, ett sulfonerat derivat av difenyltriazin, bildar ett vattenlösligt magentakomplex med järn som inte komplexbundits av blad- och fruktextraktet av lingon (svenska tranbär). Blad- och fruktextraktet av lingon (svenska tranbär) testades vid koncentratlonerna 0,50 %, 1 % och 2 %.

Resultaten visas l tabell 3: Tabell 3: koncentration Kelerande verkan (%) 0,50 % 27 1 % 48 2 % 81 Blad- och fruktextrakt av lingon (svenska tranbär) vid 1 % uppvisar en stark kelerande verkan mot järn. 10 15 20 25 30 EMI-Fl E33 11 Exempel 4 Effekt av blad- och fruktextrakt av lingon (svenska tranbär) pä keratinocyters vitalitet efter UV-bestràlning UVB-stràlning bär ansvaret för solbränne- och immunsuppressionsfenomen_ Den orsakar även ett antal hudstörningar, varav de viktigaste är hudcancrar. Den skadar vidare DNA. UVA är den huvudsakliga komponenten i UV-delen av solspektnimet och är involverad i hudäldrande, i synnerhet förslappning av huden. Den är även involverad i förtryckande av vissa immunologiska funktioner. De indirekta effekterna av UVA uppkommer från fotosensitiseringsreaktioner, som följer pä absorption av UVA av olika cellkromoforer. UV-strälning bär även ansvaret för bildning av bestämda kemiska föreningar som kallas reaktiva syreföreningar (ROS), vilka har förmäga att orsaka betydande skada direkt pà cellnivä, såsom oxidering av proteiner (Sander et al., 2002) som förlorar sin funktionalitet, lipider eller nukleinsyror. Celler har som tur är skyddssystem som är effektiva mot oxidativ stress och bekämpar en mängd dagliga angrepp.

Syftet med denna studie var att pä humana keratinocyter bestämma den fotoskyddande verkan hos blad- och bärextrakt av lingon (svenska tranbär) mot UVB- stràlning. Fria radikaler som inducerats av UV-strälning bär ansvaret för en ökad celldöd.

Den skyddande verkan hos den studerade produkten kan följaktligen bestämmas genom spektrofotometrisk mätning av cellöverlevnad efter färgning med M.T.T. Keratinocyter odlades i KSFM-medium (lnvitrogen), ympades vid en densitet av 50000 celler/brunn pä plattor om 12 brunnar. Besträlningen genomfördes med en UV-lampa av typen "Biosun“ (Vilbert-Lourmat, Frankrike). UVB-intensiteterna var 0,13 J/cmz i närvaro av blad- och fruktextrakt av lingon (svenska tranbär) i en koncentration av 0,10 %, 0,25 %, 0,50 % respektive 1 %. Efter besträlningen hölls cellema vid 37°C under 24 timmar i en fuktig atmosfär innehållande 5 % C02. Den fotoskyddande effekten hos vardera produkten uppskattades genom mätning av keratinocytöverlevnaden efter färgning med M.T.T.

Resultaten uttrycks som procentuellt cellskydd.

Cellskydd / kontroll (%) = ------ X 100 med 10 15 20 25 12 Abs icke bestràlad kontroll- Abs besträlad kontroll Amont ut 't i= ro om" e Abs icke besirålad kontroll Abs icke bestrålad produkt- Abs bestràlad produkt B: produkttoxicitet = Abs icke besträlad produkt Samtliga försök genomfördes som triplikat. Resultaten visas i tabell 4.

Tabell 4: koncentration Cellskydd / kontroll (%) 0,10 % + 31 0,25 % + 47 0,50 % + 63 1 % + 75 Blad- och fruktextrakt av lingon (svenska tranbär) uppvisar ett tydligt skyddande av celler mot UVB-inducerade fria radikaler.

Exempel 5 Effekt av blad- och fruktextrakt av linoon (svenska tranbär) på DNA hos keratinocxßr efter UV-bestràlning.

DNA-molekylen är en dubbelhelix som bestár av en följd av deoxiribosringar (socker) och fosfatgrupper. En purin- eller pyrimidinbas är kopplad till varje sockerrest.

Grundenheten i denna struktur kallas en nukleotid, och består av ett socker, en fosfatgrupp och en av purin- eller pyrimidinbaserna. Purinerna är adenin (A) och guanin (G); pyrimidinerna är cytosin (C) och tymin (T). Deras exakta ordningsföljd bestämmer det som vi kallar DNA-sekvensen. Deoxiribonukleinsyra (DNA) bär upp den genetiska informationen, celiens "hårddisk". Den inryms i ceilkärnan hos organismens alla celler och ansvarar för lagring och överföring av genetisk information (Robert, 1995). DNA- molekylens integritet är ständigt hotad. Molekylen försämras faktiskt av endogena fria radikaler, olika kemikalier och framförallt av UV A-, B- och C-strälning. Joniserande strålning resulterar i en modifiering av nukleotldbaserna, med bildning av pyrimidindimerer och strängskador. Dessa skador förhindrar cellernas korrekta funktion och orsakar genetiska mutationer som ofta är cancerogena. Det finns DNA- reparationsmekanismerför att bekämpa dessa angrepp. Den mest effektiva mekanismen 10 15 20 25 30 53% E35 13 är excisionsreparation. Denna process utförs av ett multienzymsystem som känner igen pyrimidindimerer, klipper av den skadade DNA-strängen, avlägsnar denna och stimulerar syntesen av en ny DNA-sträng. Den nya strängen är identisk med det aviägsnade fragmentet och är komplementärt mot den intakta, motstående strängen. l vissa fall känns skadan inte igen eller reparationsmekanismerna är icke kompletta. Dessa defekter resulterar i en betydande risk för genetisk mutation. Detta är anledningen till att det är viktigt att skydda DNA-strängar genom användning av antioxidanter som kan minska risken för skador.

För att bestämma den skyddande effekten hos blad- och fruktextraktet av lingon (svenska tranbär) mot UVB-strålning användes ett DNA-fragmenteringstest. UVB- strälning orsakar kedjebrott i DNA-strängar. Denna fragmentering kan visualiseras efter extraktion och elektrofores av DNA. Vår aktiva ingrediens mäste följaktligen ha förmåga att skydda DNA från brott orsakade av solstrálning. Humana keratinocyter inkuberades vid 37 °C under i timme i en inkubator innehållande 5 % C02 i närvaro eller frånvaro av ett 1-procentigt blad- och fruktextrakt av lingon (svenska tranbär) före UVB-besträlningen (DO, TOh). Bestrálningama genomfördes med en "Biosun” UV-lampa (Vilbert-Lourmat, Frankrike) med en UVB-intensitet av 180 mJ/cmz i närvaro eller frånvaro av produkten.

Cellerna àterfördes därefter till inkubatorn (37 °C, 5 % CO2)(D0, T1 h). Efter 24 timmars inkubering extraherades DNA fràn cellerna. DNA-strängbrott visualiserades efter elektrofores pä agarosgel, och analyserades medelst BlO-PROFlLE®-systemet (Vilbert- Lourmat, Frankrike)(D1). Resultaten visas i tabell 5.

Tabell 5 DNA-skydd / besträlad kontroll (%) Bestràlad kontroll 0 UVB + 1 % koncentrat + 39 Blad- och fruktextrakt av lingon (svenska tranbär) med en koncentration av 1 % skyddar DNA i keratinocyter från UVB-inducerad skada.

Exemgel 6 Effekt av blad- och fruktextrakt av lingon (svenska tranbär) Då ebidermal differentierihq Epidermis är ett skiktat epitel som består av celler vars morfologi är specifik för varje lager. Under deras förflyttning mot ytan genomgår keratinocyter biokemiska och strukturella modifieringar som gradvis omvandlar dem till keratfniserade celler: korneocyter som avlägsnas genom fjällning. För att bibehålla en konstant tjocklek fömyas epidermis genom celldelningar av stamceiler, följt av differentiering av keratinocyter till 10 15 20 25 30 533 E35 14 korneocyter. Den slutliga korneocytdifferentieringen kräver bildning av en fibermatris inne ikorneocyten, produktion av intracellulära lipider och uppkomst av ett keratinhölje. Den fibermatris som ersätter keratinocytens cytoplasma och cellkäma bildas från profilaggrin, vilken finns i keratohyalinkorn lstratum granulosum. Profiiaggrin omvandlas till filaggrin genom en kaskad av steg som inkluderar defosforylering och proteolys. Filaggrin möjliggör aggregering av cytokeratinfilament och bryts därefter ned totalt för bildning av NMF, vilket är hygroskopiska substanser med en hög vattenbindande förmåga.

Bildningen av keratinhöljet startar i Malpighi-kroppen fràn förstadieproteiner (involukrin, keratolinin, lorikrin) och med deltagande av kalcium och ett membranenzym, transglutaminas som bildar kovalenta bindningar mellan dessa proteiner. lnvolukrin är bland de viktigaste proteinema, eftersom det är proteinskelettet i korneocyternas plasmamembran. Keratinhöljet gör komeocyter rigida och ansvarar för stratum comeums höga mekaniska motståndskraft. Cadheriner spelar en nödvändig roll inte enbart för intracellulär vidhäftning, utan även för styrning av cellmorfogenes och differentiering.

Cadherin E deltar i regleringen av proliferation och differentiering (Kee et al., 2001). Den uttrycks av Langerhans celler och keratinocyter, och möjliggör vidhäftning av dessa två celltyper. Den är lokaliserad i samtliga cellager i epiderrnis, med huvudvikt i differentierade lager (Serres, 1997).

Syftet med denna studie var att bestämma effekten av blad- och fruktextrakt av lingon (svenska tranbär) på uttrycket av mRNA som kodar för transglutaminas 1, vilken är en markör för keratinocytdifferentiering. Studien genomfördes på odlingar av humana keratinocytcer. Humana keratinocyter odlades under 48 timmar vid 37°C i en inkubatori en atmosfär med 5 % C02 i närvaro av blad- och fruktextrakt av lingon (svenska tranbär) med en koncentration av 0,50 %. Vid slutet av inkubationen samlades cellema in och totalt RNA extraherades. RNA gjordes till föremål för omvänt transkriptas och erhållet, komplementärt DNA analyserades med PCR, genom användning av oligonukleotlder som var komplementära mot en sekvens som kodar för genema för de studerade proteinema (transglutaminas och Cadherin E). Även mRNA för ß-aktin, den intema standarden, analyserades vid varje experimentell betingelse. Ampliconbandens intensitet pà agarosgeler kvantifierades genom bildanalys (BIO-PROFlL® system, BlO-1 D- mjukvara, VlLBERT LOURMAT, Frankrike). Resultaten uttrycks som intensitetsfömållandet mellan bandet för den analyserade genen och bandet för den interna standarden (ß-aktin). Resultaten visas i tabell 6 och 7.

Resultaten visas som uttrycksprocent av mRNA för transglutaminas 1. 10 15 20 25 531 E39 1 5 Tabell 6 mRNA-förhållande (%) Kontroll 100 0,50 % koncentrat 118 Vid testet vid en koncentration av 0,50 % reglerar extraktet keratinocytemas differentieríng genom att öka uttrycket av transglutaminas 1 och cadherin E.

Resultaten visas som uttrycksprocent av mRNA för cadherin E.

Tabell 7 mRNA-förhållande (%) Kontroll 100 0,50 % koncentrat 120 Blad- och fruktextrakt av lingon (svenska tranbär) med en koncentration av 0,50 % understödjer uttrycket av cadherin E (+ 20 %), vilken är en markör för keratinocytdifferentiering.

Exempel 7 Effekt av blad- och fruktextrakt av lingon (svenska tranbär) på kollagenas (MMP 1)- aktiviteten Kollagen är det fiberprotein som är vanligast i bindväv och ansvarar för hudens tonicitet. Anti-kollagenas-aktiviteten begränsar nedbrytningen av kollagenfibrer. Syftet med denna studie var att utvärdera anti-kollagenas-aktiviteten hos blad~ och fruktextrakt av lingon (svenska tranbär). En enhet av kollagenas harförmåga att hydrolysera 1 umol av FALGPA (furylakryloyl-Leu-Gly-Pro-Ala; Sigma, F5135) per minut vid 25 °C, pH 7,5 med kalciumjon. Denna hydrolysreaktion inbegriper en minskning av absorbansen vid 324 nm. Om en produkt har en anti-kollagenas-aktivitet sà kommer den att inhibera reaktionen på FALGPA-substratet och absorbansen kommer inte att sjunka.

Resultatet uttrycks som procent av anti-kollagenas-aktiviteten.

AA (blank) - AA (prov) % aktivitet = X 100 AA (blank) med 10 15 20 25 531 839 16 AA (To)~AA (T 10 min.) AA 10 Resultaten visas i tabell 8.

Tabell 8 Anti-kollagenas-aktivitet (%) 1 % koncentrat 31 2 % koncentrat 47 5 % koncentrat 75 Vid testet vid en koncentration av 2 % begränsar blad- och fruktextraktet av lingon (svenska tranbär) kollagenasaktiviteten med 47 %.

Exempel 8 Rynkmotverkande effekt av blad- och fruktextrakt av lingon (svenska tranbär) Syftet med denna studie var att in vivo kvantifiera den rynkmotverkande effektiviteten hos produkterna med nummer 253 (placebo) och 694 (placebo + 3 % av blad- och fruktextraktet av lingon (svenska tranbär) på kràkfötter. Studien genomfördes som en dubbelblind studie pâ 24 frivilliga försökspersoner som uppvisade rynkor pà kràkfötter. Studien genomfördes som en dubbelblind studie pà 24 frivilliga försökspersoner som uppvisade rynkor på kràkföttema. Platsen för applicering av produkterna är randomiserad (högra krákfoten/vänstra kràkfoten). Avtryck av de två kràkföttema gjordes före och efter 28 dagar med applicering två gànger per dag.

Den rynkhàmmande effekten hos produkterna med nummer 253 och 694 analyserades genom observation av avtryck med hjälp av en profilometer utrustad med en bildanalysator. Avtryck l silikonpolymer gjordes före och efter applicering av produkten och undersöktes med S.l.A. (silikonbildanalys). Passerande ljus med en infallsvinkel av 35° kastar skuggor pä avtryckets yta, vilka därefter observeras med en CCD-kamera kopplad till en dator. Det undersökta omrâdet var 1 cmz. Analys av gråskalan pà den erhållna datorbilden tillhandahåller följande parametrar genom användning av QUANTlRlDES 99® (MONADERM, Monaco)-mjukvaran: - Antalet rynkor - Den totala rynkade ytan - Rynkornas totala längd 531 E35 17 Resultaten beräknades som procent genom användning av variationsmedelvärdet av de rynkparametrar som observerats som ett resultat av produkten jämfört med DO: Pdt D28 - Pdt DO Variation / DO (°/°) = X 100 Pdt DO 5 med: Pdïoo: Resultat före appllcering av produkten Pdtm: Resultat efter 28 dagar av applicering av produkten 10 Resultaten visas i tabell 9: Tabell 9: Rynkrnotverkande effekt hos produkterna 253 och 694 Antal rynkor 15 Produkt 253 Produkt 694 DO D28 DO D28 Medelvärde 197 192 211 184 SEM 11 9 12 13 A/ DO 1 % - 11 % (%) P 0,2868 0,0142 Total gynkad fia Produkt 253 Produkt 694 DO D28 DO D28 Medelvärde 24,43 25,22 24,71 21 ,O7 SEM 1,84 1,67 1,57 1,92 J A/ DO 9 % - 14 % (%) P 0,3024 0,0022 10 15 20 25 30 531 E39 18 Total längd Produkt 253 Produkt 694 DO D28 DO D28 Medelvärde 129,83 132,44 135,62 114,16 SEM 8,79 7,78 8,22 8,36 A / DO 7 % - 14 % (%) P 0,3492 0,0015 Efter 28 dagar med applicering två gånger per dag uppvisar produkten 253 (placebo) ingen rynkmotverkande effekt jämfört med D0.

Efter 28 dagar med applicering två gånger per dag minskar produkten 694 (placebo + 3 % av blad- och fruktextraktet av lingon (svenska tranbär» signifikant de olika parametrar som är karaktäristiska för hudens utseende.

- Antalet rynkor minskade med 11 % (P = 0,0142) - Den totala rynkade ytan minskade med 14 % (P = 0,0022) - Rynkornas totala längd minskade med 14 % (P = 0,0015) Exemgel 9 Effekt av blad- och fruktextrakt av lingon (svenska tranbär) på hudens elasticitet Syftet med den na studie var att in vivo kvantifiera effekten av produkterna med nummer 253 (placebo) och 694 (placebo + 3 % av blad- och fnlktextraktet av lingon (svenska tranbär) pä hudens elasticitet. Studien genomfördes som en dubbelblind studie på ansiktet hos 24 frivilliga försökspersoner. Ytan för applicering av produkterna randomiseras (vänstra ansiktshalvan l högra ansiktshalvan). Mätningar gjordes på kinden före och efter 28 dagar av behandling tvà gånger per dag, genom användning av en SEM 575 Cutometer® (Courage & Khazaka, Tyskland).

Huden sugs in i en probes mynning genom ett konstant vakuum under en konstant tidsperiod. Flera på varandra följande sugningar kan utföras. Probens penetrationsdjup i huden mäts med två optiska prismor som är placerade vid probens öppning (ingen friktion eller mekanisk effekt). Genom användning av de erhållna kurvorna är det möjligt att beräkna ett antal parametrar som är karaktäristiska för hudens mekaniska egenskaper.

Den följande är en typisk kurva som erhållits under en mätning som inbegripit fem på varandra följande sugningar om fem sekunder. 10 15 20 25 30 35 531 G35 19 ll Deformation (nun) A . Uf Uf Uv Ur Ue U a \ k- ng” . x X . s e 1. l a. s s s - . _ a Tid (s) O 5 10 15 20 25 30 35 40 5 Ue: Omedelbar deformation (elastisk komponent) Uv: Fördröjd deformation (seg komponent) Uf: Uv + Ue = utsträckbarhet eller total förlängning U'f: Slutlig utsträckbarhet Ur: Omedelbar tillbakadragning x: Resterande tillbakadragning x': Resterande deformation efter 5 cykler Ua: Total tillbakadragnlng.

Bland samtliga parametrar som beräknats från de erhållna kurvorna valdes de följande ut för att kvantifiera förändringar av biomekaniska egenskaper som erhållits från den applicerade produkten: l-ludelasticiteti klinisk bemärkelse bestäms av förhållandena: -Ur/Ue = R5 Om R5 ökar så ökar hudens elasticitet.

- Ua/Uf = R2 Om R2 ökar så ökar hudens elasticitet.

Resultaten beräknades som procentandel genom användning av variationsmedelvärdena för hudelasticitetsparametrarna som observerats som ett resultat av produkten, jämfört med DO: Ešfl 539 20 Pdt D28 - Pdt DO Variation / DO (%) = X 100 Pdt DO med 5 Pdtpo: Resultat före applicering av produkten Pdtm: Resultat efter 28 dagar av applicering av produkten Resultaten visas i tabell 10: 10 Tabell 10: Effekt av produkterna 253 och 694 på hudens elasticitet Parameter R2 Produkt 253 Produkt 694 DO D28 DO D28 Medelvärde 0,660 0,714 0,634 0,710 SEM 0,026 0,029 0,024 0,023 A / DO 11 % 15 % (%) P 0,0550 0,0121 15 Parameter R5 Produkt 253 Produkt 694 DO D28 DO D28 Medelvärde 0,572 0,597 0,575 0,639 SEM 0,031 0,029 0,032 0,026 A/ DO 10 % 17 % (%) P 0,2411 0,0323 10 15 20 513V! G39 21 Efter 28 dagars applicering och vid denna studies betingelser: - Produkten med nummer 253 (placebo) tenderar att öka parametrarna R2 och R5, vilka representerar hudens elasticitet (+ 11 %; + 10 %). Ökningen är inte signifikant (P>0,05).

- Produkten med nummer 694 (placebo + 3 % blad- och fruktextrakt av lingon (svenska tranbär)) ökar parametrarna R2 och R5 signifikant, vilka representerar hudens elasticitet: o Ökning av parametem R2 med 15 % (P = 0,0121) o Ökning av parametem R5 med 17 % (P = 0,0323).

Exempel 10 I detta exempel inkluderades extrakt av lingon (svenska tranbär) i kompositionerna enligt uppfinningen.

Formuleringen nedan beskriver en kräm med olja ivatten som inbegriper kompositionen enligt uppfinningen, vilken är lämplig för förfarandena och användningarna enligt den föreliggande uppfinningen. De angivna procentandelarna är per vikt av kompositionen, såvida annat inte angivits.

Viktprocent Hydrogenerad polyisobuten 4,5 Cyklopentasiloxan 4,5 Dimetikon 2,5 Glycerylstearat 2 Cetylalkohol 2 PEG 40 stearat 1,25 Natriumakrylat / akryloyldimetyltaurat- 1 sampolymer Tokoferylacetat 0,5 Konserveringsmedei QS Parfym QS Lingon, vitalt koncentrat 3 Vatten till 100 10 E31 E33 22 Exempel 11 Formuleringen nedan beskriver en underlagskräm som inbegriper kompositionen enligt uppfinningen, vilken är lämplig för förfarandena och förhållandena enligt den föreliggande uppfinningen. De angivna procentandelarna är per vikt av kompositionen, sàvida annat inte angivits.

Viktprocent Cyklopentasiloxan 14 Pigment 9 Polyglyceryl 4 isostearat 5 lsododekan 4 Butylenglykol 2 Bis-PEG/PPG-14/14 dlmetlkon 2 Hydrogenerad polyisobuten 1,5 Blvax 1,2 Magnesiumsulfat 1 Konserveringsmedel QS Parfym QS Lingon, vitalt koncentrat 3 Vatten till 100 Exempel 12 Formuleringen nedan beskriver en kroppsparfym som inbegriper kompositionen enligt uppfinningen, vilken är lämplig för förfarandena och förhållandena enligt den föreliggande uppfinningen. De angivna procentandelama är per vikt av kompositionen, sàvida annat inte angivits Viktprocent Denaturerad alkohol 55 Propylenglykol 5 Glycerin 3 Bensofenon 2 0,1 Parfym 6 Solubiliseringsmedel 2 Lingon, vitalt koncentrat 3 Vatten till 100 10 15 Eâfl E35 23 Samtliga ovanstående topiska kompositionertillhandahåller en effektiv Kosmetisk behandling för förbättrande av utseendet hos rynkad, àldrad, fotoskadad, och/eller irriterad hud, när de appliceras på hud som harförsämrats genom åldrande eller fotoåldrande eller när de appliceras på ungdomlig hud för att hjälpa till att förhindra eller försena sådana försämrande förändringar. Samtliga kompositioner kan beredas på sedvanligt sätt.

Orden "innefattar/innefattande” och orden ”har/inkluderar” används häri med hänvisning till den föreliggande uppfinningen för att specificera närvaror av nämnda egenskaper, enheter, steg eller komponenter, men utesluter inte närvaro eller tillsats av en eller flera andra egenskaper, enheter, steg, komponenter eller grupper därav.

Det torde inses att vissa egenskaper hos uppfinningen, vilka för tydlighetens skull beskrivs i ett sammanhang av separata utföringsforrner, även kan tillhandahållas l kombination i en enda utföringsform. På motsvarande sätt kan olika egenskaper hos uppfinningen som pä grund av koncishet beskrivs i' sammanhanget av en enda utföringsform även tillhandahållas separat elleri vilken lämplig underkombination som helst.

Claims (9)

53% 539 w-.Å . 7/ Patentkrav

1. Användning av 0,0001 till 50 viktprocent av ett vattenhaltigt extrakt av en kombination av frukt- och bladextrakt av lingon (Vaccinium vitis idea), vid framställning av en Kosmetisk komposition för behandling av hudtillstånd.

2. Användning enligt kravet 1, vari omkring 50 viktprocent av extraktet av lingon (Vaccinium vitis idea) föreligger som bladextrakt och de andra 50 procenten föreligger som fruktextrakt.

3. Användning enligt kravet 1 eller 2, vari kompositionen innefattar från 0,0001 till 50 viktprocent av extrakt av lingon (Vaccinium vitis idea), företrädesvis från 0,01 till 10 viktprocent av extrakt av lingon (Vaccinium vitis idea), mer föredraget från 0.1 till 5 viktprocent av extrakt av lingon (Vaccinium vitis idea).

4. Kosmetiskt förfarande för behandling och/eller förebyggande av hudtillstând som har valts från gruppen bestående av rynkbildning, slapphet. fotoskadad hud, torr hud. fiällande hud, irriterad hud, kliande hud och åldersfläckar, varvid förfarande innefattar applicering på huden av en topisk komposition som innefattar ett extrakt av lingon (Vaccinium vitis idea) vari extraktet innefattar 50 viktprocent av ett fruktextrakt av lingon och 50 viktprocent av ett bladextrakt av lingon.

5. Topisk komposition som innefattar: (a) 0,0001 till 50 viktprocent av ett vattenhaltigt extrakt av en kombination av frukt- och bladextrakt av lingon (Vaccinium vitis idea) tillsammans med (b) en dermatologiskt acceptabel bärare.

6. Topisk komposition enligt kravet 5, vari omkring 50 viktprocent av extraktet av lingon (Vaccinium vitis idea) föreligger som bladextrakt av lingon och de andra 50 procenten föreligger som fruktextrakt av lingon.

7. Topisk komposition enligt kravet 5 eller 6, vari den dermatologiskt acceptabla bäraren har valts från gruppen bestående av vatten, vätskeformiga eller fasta lenande ämnen, silikonoljor, emulgermedel, lösningsmedel, fuktighetsbevarande medel, förtjockningsmedel, pulver och drivgaser.

8. Topisk komposition enligt något av kraven 5 till 7, vari bäraren utgör från 5 till 99,9 viktprocent av kompositionen.

9. Topisk komposition enligt kravet 8, vari bäraren utgör från 25 till 80 viktprocent av kompositionen.