WO2009056773A2 - Utilisation cosmetique d'un extrait de cicer arietinum, principe actif, procede d'obtention et compositions - Google Patents

Utilisation cosmetique d'un extrait de cicer arietinum, principe actif, procede d'obtention et compositions Download PDF

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WO2009056773A2
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skin
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Definitions

  • the present invention relates to the use of an extract of Cicer arietinum as an active ingredient, in or for the preparation of an energizing cosmetic composition for energizing and revitalizing the skin.
  • the invention also relates to a particular extract of Cicer arietinum, to a process for obtaining such an extract, as well as to cosmetic compositions including an extract of Cicer arietinum.
  • Aesthetics and appearance take an important place in our societies. In particular, more and more men seek to reduce their wrinkles and to have a moisturized, vital and toned skin. There is therefore a need for a product that can protect, moisturize, vitalize and effectively regenerate the skin, especially male skin.
  • Cicer arietinum which has an energizing effect on the skin, especially in men's skin.
  • the skin needs a level of energy sufficient to remain metabolically active and ensure its protection, repair and regeneration. All these metabolic reactions consume energy.
  • ATP adenosine triphosphate
  • ATP is a ribonucleotide, consisting of a nitrogen base (adenine), a sugar (ribose) and three phosphate chained groups. These are the bonds between the phosphate groups that are rich in energy.
  • the terminal phosphate group of ATP is hydrolyzed to release energy from the binding and adenosine diphosphate (ADP).
  • ADP adenosine diphosphate
  • ATP is constantly hydrolyzed and regenerated.
  • the stock of ATP directly available by the cells being very low, it is quickly consumed when the metabolic activity of the cell is high.
  • the cell must then regenerate ATP cell stocks from the ATP stores present in its cytosol in the form of phosphocreatine.
  • Phosphocreatine regenerates ATP cell stocks by ceding a phosphate group to ADP molecules. This balance is regulated by an enzyme, creatine kinase.
  • the creatine kinase / phosphocreatine system plays a key role in the energy metabolism of cells and regulates bioenergetic responses.
  • the present invention proposes to increase the intracellular rate of ATP and boost the metabolism of skin cells, both by stimulating the neosynthesis of ATP and by promoting the regeneration of ATP by stimulating the activity of creatine kinase.
  • the invention relates to the use of at least one extract Cicer arietinum as active ingredient, in an energizing cosmetic composition.
  • Such an extract reinforces the bioenergetic potential of the skin: by stimulation of the neosynthesis of ATP of the cutaneous cells, and
  • Cicer arietinum extract may be used in a cosmetic composition for:
  • the active ingredient extracted from Cicer arietinum according to the invention has an energizing effect on the skin.
  • the Cicer arietinum extract according to the invention can be used as an active ingredient in or for the preparation of a composition intended to combat the signs of fatigue and aging, and / or intended to bring to the skin a good-looking effect.
  • the invention relates to an extract of Cicer arietinum, adapted for use as an active ingredient in or for the preparation of a cosmetic and / or dermopharmaceutical composition, in particular intended for an energizing effect on the skin.
  • the invention also relates to a process for obtaining such an extract.
  • the invention also relates to a cosmetic or dermopharmaceutical composition for an energizing effect of the skin, comprising an extract of Cicer arietinum as active ingredient.
  • composition according to the invention may contain from 0.01 to 20% of an extract of Cicer arietinum as active ingredient.
  • composition preferably carried out topically.
  • composition according to the invention may be in the form of creams, oil-in-water emulsions, water-in-oil or multiple emulsions, solutions, suspensions or powders.
  • the invention therefore relates to the use of at least one extract of Cicer arietinum as active ingredient in an energizing cosmetic composition.
  • the invention aims to use an extract comprising an oligopeptide active fraction with a molecular weight of less than 5000Da.
  • the extract can be used in a cosmetic composition for:
  • the extract used is preferably an extract capable of accelerating cell renewal, stimulating the protein metabolism of the dermal cells, and / or stimulating the neosynthesis of ATP and the regeneration of the ATP of the dermal cells.
  • the invention also relates to active principles extracted from Cicer arietinum, particularly suitable for use in an energizing cosmetic composition.
  • active ingredients extracted from Cicer arietinum have the following characteristics:
  • the solids content (measured by passing in an oven at 105 ° C. in the presence of sand of a sample of given initial weight until a constant weight is obtained) is between 20 and 150 g / l, more especially between 50 and 80 g / l.
  • the pH measured by the potentiometric method at room temperature leads to values between 4 and 7, more particularly between
  • the protein level (determined by the LOWRY method) is between 8 and 60 g / l, more particularly between 20 and 30 g / l. 4 / Characterization of the protein fraction
  • the chromatogram shows that the active ingredients according to the invention are mainly composed of peptides with a molecular weight of less than 5000 Daltons (Da). 5 / Identification of the active fraction
  • the active principle is separated into 3 fractions according to their molecular mass, according to the cutoff thresholds:
  • fraction A and the active ingredient according to the unfractionated invention have the same stimulatory activity of protein metabolism.
  • the other fractions B and C 1 and the model mixture are not effective.
  • the active fraction of the active principle according to the invention is the oligopeptide part of molecular weight between 772Da and 5000Da.
  • the invention relates to a process for obtaining particular active principles extracted from Cicer arietinum.
  • the obtaining process according to the invention comprises at least the succession of the following steps:
  • the active ingredient according to the invention is obtained by the succession of the following steps:
  • the hydrolysis is carried out with enzymes chosen from glycosidases and / or peptidases.
  • the active ingredient obtained after at least two enzymatic hydrolyses and thermal inactivation constitutes the crude active extract.
  • This crude active extract can be further purified by fractionation, in particular by a chromatography method or purified and concentrated by a dialysis method.
  • the crude or purified extract is then solubilized in water or in any mixture containing water, and then sterilized by ultrafiltration.
  • the invention can be illustrated by results of studies evaluating the effect of an example of active ingredient extracted from Cicer arietinum according to the invention.
  • the study is performed by measuring intracellular ATP on human fibroblasts and keratinocytes from male donors.
  • the Measurement of intracellular ATP is carried out after depletion, quantitative decrease of I 1 ATP, by bioluminescence technique. at. Study of ATP synthesis on human fibroblasts
  • the operating protocol is as follows.
  • human fibroblasts are inoculated in complete medium and incubated for 2 days.
  • the depletion is carried out: the fibroblasts are treated with a solution of deoxyglucose and NaN3 sodium azide. In parallel control depletion fibroblasts are treated with HBSS solution.
  • the fibroblasts are then incubated for 30 minutes, then treated with a Cicer arietinum extract according to the invention at 0.5% or 1% or with a 5 ⁇ M ADP positive control.
  • the amount of intracellular ATP is assayed by bioluminescence with a luminometer.
  • the operating protocol is as follows. At J1, keratinocytes are inoculated in complete medium and incubated for 2 days.
  • the depletion is carried out: the keratinocytes are treated with a solution of deoxyglucose and NaN3 sodium azide.
  • non-depletion control keratinocytes are treated with an HBSS solution.
  • the keratinocytes are then incubated for 30 minutes, then treated with a 0.5% or 1% Cicer arietinum extract according to the invention or with a 5 ⁇ M ADP positive control.
  • the amount of intracellular ATP is assayed by bioluminescence with a luminometer.
  • Cicer arietinum increases the intracellular level of ATP by 53%.
  • the active ingredient extracted from Cicer arietinum stimulates the neosynthesis of ATP: it is capable of increasing the intracellular level of ATP of fibroblasts and human keratinocytes.
  • the study is carried out on human keratinocytes by measuring the enzymatic activity creatine kinase, according to the operating protocol that follows.
  • the human keratinocytes are inoculated for 3 days in a humid atmosphere.
  • the cells are treated with the active ingredient extracted from Cicer arietinum according to the invention at 0.5% and 1%.
  • the cells are then incubated for a few hours and then recovered for fractional protein extraction.
  • the organelle fraction containing mainly creatine kinase is then used for the determination of the creatine kinase activity.
  • the active ingredient extracted from Cicer arietinum according to the invention thus promotes the regeneration of cellular stocks of ATP.
  • This study aims to study the ability of the active ingredient extracted from Cicer arietinum according to the invention to stimulate protein metabolism.
  • the study is carried out on human fibroblasts by measuring the total protein content by colorimetric technique.
  • the human fibroblasts are inoculated and incubated for 24 hours.
  • the cells are treated with the active ingredient extracted from Cicer arietinum according to the invention at 0.5% and 1%, and then they are incubated for 72 hours.
  • the cells are recovered and an amount of intracellular total protein is assayed using a dosing kit.
  • Cicer arietinum increases protein synthesis by 57% on human fibroblasts.
  • the active ingredient extracted from Cicer arietinum stimulates the metabolic activity of the dermal cells. 2 / In vivo studies
  • the objective of the study is to evaluate the influence of the active ingredient extracted from Cicer arietinum according to the invention formulated at 4% in emulsion against placebo, on the cellular renewal of the skin.
  • - b chrominance parameter, characteristic of melanic yellow skin pigmentation. As b decreases, the skin becomes lighter.
  • the three cutaneous measurement zones are determined at the belly of the volunteers and the staining is applied to the DHA.
  • the color of the skin is measured with the chromameter on each of the three zones.
  • the volunteers apply the placebo and the active ingredient extracted from Cicer arietinum twice daily, formulated at 4%. Every two or three days, the skin color is measured at the three skin areas.
  • the objective of this study is to evaluate the influence on the radiance of the complexion of the active ingredient extracted from Cicer arietinum according to the invention formulated at 4% against placebo.
  • the study is conducted on 20 healthy male volunteers.
  • the radiance of the complexion is studied:
  • the measurements made with the chromameter make it possible to obtain values for an ITA parameter (Individual Typological Angle) so as to evaluate the variation of the shiny appearance of the skin.
  • ITA parameter defines the degree of pigmentation of the skin: the higher it is, the clearer and brighter the skin.
  • the evaluation carried out by the expert consists in judging various parameters representative of the brightness of the complexion, with scales of score ranging from 1 to 10. The following parameters are observed:
  • a skin surface irregularity is correlated with a dull appearance of the skin
  • the transparency of the skin the finer a skin is, the more it lets the light through, which gives a good-looking effect
  • - the radiation of the skin the greater the intensity of light hooks on the prominent areas of the face is important the more luminous the skin
  • two symmetrical cutaneous zones are determined at the temples of each volunteer.
  • the color of the skin is measured with the chromameter on these two zones and the expert evaluates the radiance of the complexion.
  • the color of the skin is measured with the chromameter on the two cutaneous zones at the temples and the expert evaluates the radiance of the complexion.
  • the results obtained for the active principle according to the invention concerning the ITA parameter show a percentage of variation between OJ and J28 of + 3% compared with those obtained with the placebo.
  • the aim of the study is to evaluate the effectiveness of the active ingredient extracted from Cicer arietinum formulated at 4% in emulsion against placebo, on the tonicity and fatigability of the skin at the level of the lower face.
  • the measurements are made with a cutometer: the skin is sucked by a constant vacuum probe for a constant duration.
  • the depth of Skin penetration into the probe is measured by two optical prisms, which allows to obtain curves from which it is possible to calculate various parameters characteristic of the mechanical properties of the skin.
  • the present study consists in observing the following parameters:
  • two symmetrical cutaneous zones are determined at the level of the lower face, and the tonicity and the fatigability of the skin are measured on these two zones.
  • the volunteers apply twice a day the placebo and the active ingredient according to the invention formulated at 4% emulsion.
  • the tonicity and fatigability of the skin are measured on the two symmetrical cutaneous zones at the level of the lower face.
  • Cicer arietinum extract according to the invention formulated at 4% in emulsion, increases the tonicity of the skin by 12%, and reduces the fatigability of the skin by 13%.
  • the present invention also covers cosmetic and / or dermopharmaceutical compositions including an extract of Cicer arietinum as active principle, in various galenic forms, in particular gel, solution, emulsion, cream, etc.
  • Cicer arietinum as an active ingredient, this in proportions between 1 and 5%.
  • the stability is characterized by an absence of precipitation of the extract, an absence of creaming and an absence of phase shift.
  • Formulations which have shown a physical stability including 5% of an active ingredient according to the invention may be mentioned.
  • Cicer extract ar ietinum according to the invention 5.0%
  • Cicer extract ar ietinum according to the invention 5.0%
  • Cicer extract ar ietinum according to the invention 5.0%
  • Cicer extract ar ietinum according to the invention 5.0%
  • Cicer extract arietinum according to the invention 4%
  • Cicer extract arietinum according to the invention 4%
  • Cicer extract arietinum according to the invention 4%

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Abstract

L'objet de l' invention est l'utilisation d'au moins un extrait de Cicer arietinum en tant que principe actif dans ou pour la préparation d'une composition cosmétique énergisante. L'invention se rapporte également à un extrait de Cicer arietinum, à un procédé d'obtention d'un tel extrait et à des compositions cosmétiques incluant un extrait de Cicer arietinum.

Description

UTILISATION COSMETIQUE D'UN EXTRAIT DE CICER ARIETINUM, PRINCIPE ACTIF, PROCEDE D'OBTENTION ET COMPOSITIONS
La présente invention concerne l'utilisation d'un extrait de Cicer arietinum en tant que principe actif, dans ou pour la préparation d'une composition cosmétique à efficacité énergisante, destinée à dynamiser et revitaliser la peau.
L'invention se rapporte également à un extrait particulier de Cicer arietinum, à un procédé d'obtention d'un tel extrait, ainsi qu'à des compositions cosmétiques incluant un extrait de Cicer arietinum.
L'esthétisme et l'apparence prennent une place importante dans nos sociétés. En particulier de plus en plus d'hommes, cherchent à atténuer leurs rides et à avoir une peau hydratée, vital isée et tonique. II existe donc un besoin pour un produit qui permet de protéger, hydrater, vitaliser et régénérer efficacement la peau, en particulier la peau masculine.
C'est ce à quoi répond la présente invention en proposant un principe actif issu de
Cicer arietinum qui présente un effet énergisant au niveau de la peau, en particulier au niveau de la peau masculine. La peau a besoin d'un niveau d'énergie suffisant pour rester métaboliquement active et assurer sa protection, sa réparation et sa régénération. Toutes ces réactions métaboliques consomment en effet de l'énergie.
L'énergie dans la cellule est produite à partir de molécules basiques (glucides, protéines, lipides) obtenues pour l'essentiel par l'alimentation. L'oxydation de ces composés au niveau des mitochondries, conduit à la libération d'énergie sous la forme d'un composé hautement énergétique, l'adénosine triphosphate (ATP). L'ATP est un ribonucléotide, composé d'une base azotée (l'adénine), d'un sucre (le ribose) et de trois groupements phosphate enchaînés. Ce sont les liaisons entre les groupements phosphate qui sont riches en énergie.
Lorsque la cellule a besoin d'énergie, le groupement phosphate terminal de l'ATP est hydrolyse pour libérer l'énergie de la liaison et de l'adénosine diphosphate (ADP). En fonction des besoins des cellules, l'ATP est constamment hydrolyse, puis régénéré.
Le stock d'ATP directement disponible par les cellules étant très faible, il est rapidement consommé lorsque l'activité métabolique de la cellule est élevée. La cellule doit alors régénérer les stocks cellulaires d'ATP à partir des réserves d'ATP présentes dans son cytosol sous forme de phosphocréatine. La phosphocréatine régénère les stocks cellulaires d'ATP en cédant un groupe phosphate aux molécules d'ADP. Cet équilibre est régulé par une enzyme, la créatine kinase. Le système créatine kinase / phosphocréatine joue un rôle clé dans le métabolisme énergétique des cellules et il régule les réponses bioénergétiques.
Toutefois, avec l'âge et les stress oxydants variés que subissent les cellules de la peau, l'intégrité et la fonctionnalité des mitochondries sont altérées : la néosynthèse d'ATP est réduite. Par ailleurs l'activité de la créatine kinase est fortement diminuée, ce qui entraîne le déclin des capacités énergétiques des cellules cutanées.
C'est pourquoi, la présente invention se propose d'augmenter le taux intracellulaire d'ATP et de booster le métabolisme des cellules de la peau, à la fois en stimulant la néosynthèse d'ATP et en favorisant la régénération de l'ATP en stimulant l'activité de la créatine kinase.
En particulier, l'invention vise l'utilisation d'au moins un extrait Cicer arietinum en tant que principe actif, dans une composition cosmétique énergisante.
Un tel extrait permet de renforcer le potentiel bioénergétique de la peau : - par stimulation de la néosynthèse d'ATP des cellules cutanées, et
- par stimulation de l'activité de la créatine kinase qui régénère l'ATP. Par « énergisant » on entend augmentant la production et le stockage d'ATP cellulaire. Avantageusement, un extrait Cicer arietinum peut être utilisé dans une composition cosmétique pour :
- stimuler le métabolisme protéique des cellules dermiques, et/ou
- accélérer le renouvellement cellulaire cutané, et/ou
- augmenter la tonicité de la peau, et/ou - réduire la fatigue de la peau.
Ainsi, en boostant le potentiel énergétique des cellules cutanées, le principe actif extrait de Cicer arietinum selon l'invention, a un effet énergisant sur la peau.
Avantageusement, il est particulièrement adapté à la peau masculine. Son utilisation en tant que principe actif dans ou pour la préparation d'une composition cosmétique permet de dynamiser et de revitaliser la peau. En particulier, l'extrait de Cicer arietinum selon l'invention peut être utilisé en tant que principe actif dans ou pour la préparation d'une composition destinée à combattre les signes de fatigue et de vieillissement, et/ou destinée à apporter à la peau un effet bonne mine.
Selon un autre aspect, l'invention vise un extrait de Cicer arietinum, adapté pour une utilisation en tant que principe actif dans ou pour la préparation d'une composition cosmétique et/ou dermopharmaceutique, notamment destinée à un effet énergisant de la peau. L'invention concerne également un procédé d'obtention particulier d'un tel extrait. Enfin, l'invention vise aussi une composition cosmétique ou dermopharmaceutique destinée à un effet énergisant de la peau, comprenant un extrait de Cicer arietinum en tant que principe actif.
La composition selon l'invention peut contenir de 0,01 à 20 % d'un extrait de Cicer arietinum en tant que principe actif.
L'administration d'une telle composition est de préférence effectuée par voie topique.
La composition selon l'invention peut se présenter sous forme de crèmes, émulsions huile-dans-eau, eau-dans-huile ou émulsions multiples, solutions, suspensions ou encore poudres.
La présente invention est maintenant décrite en détail pour permettre de mieux appréhender les résultats obtenus regroupés en tableaux.
L'invention a donc pour objet l'utilisation d'au moins un extrait de Cicer arietinum en tant que principe actif dans une composition cosmétique énergisante. Préférentiellement l'invention vise l'utilisation d'un extrait comprenant une fraction active oligopeptidique de poids moléculaire inférieur à 5000Da.
L'extrait peut être utilisé dans une composition cosmétique pour :
- dynamiser et revitaliser la peau,
-combattre les signes de fatigue et de vieillissement et/ou apporter à la peau un effet bonne mine, et/ou
- augmenter la tonicité de la peau.
Selon l'invention l'extrait utilisé est préférentiellement un extrait capable d'accélérer le renouvellement cellulaire, stimuler le métabolisme protéique des cellules dermiques, et/ou stimuler la néosynthèse d'ATP et la régénération de l'ATP des cellules dermiques.
Selon un deuxième aspect, l'invention vise également des principes actifs extraits de Cicer arietinum, particulièrement adaptés pour une utilisation dans une composition cosmétique énergisαnte. Ces principes actifs extraits de Cicer arietinum présentent les caractéristiques suivantes :
1/ Matières sèches :
Le taux de matières sèches (mesuré par passage à l'étuve à 1050C en présence de sable d'un échantillon de poids initial donné jusqu'à obtention d'un poids constant) est compris entre 20 et 150 g/1, plus particulièrement entre 50 et 80 g/1.
2/ Mesure du pH :
Le pH mesuré par la méthode potentiométrique à température ambiante conduit à des valeurs comprises entre 4 et 7, plus particulièrement entre
4,5 et 5,5.
3/ Détermination de la teneur en protéines
Le taux de protéines (déterminée par la méthode de LOWRY ) est compris entre 8 et 60 g/l, plus particulièrement entre 20 et 30 g/l. 4/ Caractérisation de la fraction protéique
La caractérisation de la fraction protéique est réalisée par FPLC (Fast
Protein Liquid Chromatography). Le chromatogramme montre que les principes actifs selon l'invention sont composés majoritairement de peptides de poids moléculaire inférieur à 5000 Daltons (Da). 5/ Identification de la fraction active
Pour déterminer la ou les fractions actives, le principe actif est séparé en 3 fractions en fonction de leur masse moléculaire, selon les seuils de coupure :
- Fraction A : supérieure à 772 Da
- Fraction B : entre 247 et 772 Da - Fraction C : inférieure à 247 Da
On compare ensuite la capacité de chacune des 3 fractions du principe actif à stimuler le métabolisme protéique de fibroblastes humains, ainsi que celle d'un mélange modèle de carbohydrates modélisant le principe actif selon l'invention.
Testés à la même concentration, la fraction A et le principe actif selon l'invention non fractionné, présentent la même activité stimulatrice du métabolisme protéique. Les autres fractions B et C1 ainsi que le mélange modèle, ne présentent pas d'efficacité.
Par conséquent, ce sont majoritairement les composés de la fraction A, constituée environ à 63% de carbohydrates et à 37% d'oligopeptides, qui confèrent au principe actif selon l'invention son efficacité. Le mélange modèle de carbohydrates n'ayant pas d'efficacité, la fraction active du principe actif selon l'invention est la partie oligopeptides de poids moléculaire compris entre 772Da et 5000Da.
Selon un autre aspect, l'invention vise un procédé d'obtention particulier de principes actifs extrait de Cicer arietinum. Le procédé d'obtention selon l'invention comprend au moins la succession des étapes suivantes :
- solubilisation de poudre de Cicer arietinum dans l'eau, et
- au moins deux hydrolyses enzymatiques successives. Préférentiellement, le principe actif selon l'invention est obtenu par la succession des étapes suivantes :
- solubilisation de poudre de Cicer arietinum dans l'eau,
- au moins deux hydrolyses enzymatiques successives,
- séparation des phases soluble et insoluble,
- inactivation enzymatique par traitement thermique, - filtration,
-purification par ultraf iltration, et
- filtration et filtration stérilisante. Préférentiellement, l'hydrolyse est réalisée avec des enzymes choisies parmi les glycosidases et/ou les peptidases.
Le principe actif obtenu après au moins deux hydrolyses enzymatiques et inactivation thermique constitue l'extrait actif brut. Cet extrait actif brut peut être encore purifié par fractionnement, notamment par une méthode de chromatographie ou purifié et concentré par un procédé de dialyse. L'extrait brut ou purifié est ensuite solubilisé dans de l'eau ou dans tout mélange contenant de l'eau, puis stérilisé par ultrafiltration.
L'invention peut être illustrée par des résultats d'études évaluant l'effet d'un exemple de principe actif extrait de Cicer arietinum selon l'invention.
Pour ces études, le principe actif particulier utilisé présente les caractéristiques suivantes :
- teneur en matières sèches : 64,8g/l,
- pH : 4,7, - teneur en sucres totaux sur une gamme de glucose : 28,4g/l soit une teneur en sucres totaux de 43% par rapport à l'extrait sec,
- teneur en protéines totales par la méthode de Lowry : 24,5 g/l soit une teneur en protéines totales de 38% par rapport à l'extrait sec,
- teneur en polyphénols totaux : 0,lg/l. Ce principe actif est conservé avec 1,53% de phénoxyéthanol. 1/ Etudes in vitro
-1-1/Evaluation de l'effet sur la néosynthèse d'ATP Cette étude a pour objectif d'étudier la capacité d'un extrait de Cicer arietinum selon l'invention à stimuler la néosynthèse d'ATP, molécule clé du métabolisme énergétique.
L'étude est réalisée par mesure de l'ATP intracellulaire sur fibroblastes et kératinocytes humains provenant de donneurs masculins. La mesure de l'ATP intracellulaire est réalisée après déplétion, diminution quantitative de I1ATP, par technique de bioluminescence. a. Etude de la synthèse d'ATP sur f ibroblastes humains
Le protocole opératoire est le suivant.
A Jl, les fibroblastes humains sont ensemencés en milieu complet et incubés pendant 2 jours.
A J3, on réalise la déplétion : les fibroblastes sont traités avec une solution de déoxyglucose et de l'Azide de sodium NaN3. En parallèle des fibroblastes témoins sans déplétion sont traités avec une solution HBSS.
Les fibroblastes sont ensuite incubés pendant 30 minutes, puis traités avec un extrait de Cicer arietinum selon l'invention à 0,5% ou à 1% ou avec un témoin positif ADP 5 μM.
Après incubation, on dose la quantité d'ATP intracellulaire par bioluminescence avec un luminomètre.
Les résultats obtenus du taux d'ATP sont présentés dans le tableau ci- dessous :
Figure imgf000009_0001
On constate que testé à 1% sur des fibroblastes humains dépiétés en ATP, le principe actif extrait de Cicer arietinum selon l'invention augmente le taux intracellulaire d'ATP de 74%. b. Etude de la synthèse d'ATP sur kératinocytes humains
Le protocole opératoire est le suivant. A Jl, les kérαtinocytes sont ensemencés en milieu complet et incubés pendant 2 jours.
A J3, on réalise la déplétion : les kératinocytes sont traités avec une solution de déoxyglucose et de l'Azide de sodium NaN3. En parallèle des kératinocytes témoins sans déplétion sont traités avec une solution HBSS.
Les kératinocytes sont ensuite incubés pendant 30 minutes, puis traités avec un extrait de Cicer arietinum selon l'invention à 0,5% ou à 1% ou avec un témoin positif ADP 5 μM.
Après incubation, on dose la quantité d'ATP intracellulaire par bioluminescence avec un luminomètre.
Les résultats obtenus du taux d'ATP sont présentés dans le tableau ci- dessous :
Figure imgf000010_0001
On constate que testé à 1% sur kératinocytes humains dépiétés en ATP, le principe actif extrait de Cicer arietinum selon l'invention augmente le taux intracellulaire d'ATP de 53%.
Ainsi le principe actif extrait de Cicer arietinum selon l'invention stimule la néosynthèse d'ATP : il est capable d'augmenter le taux intracellulaire d'ATP de f ibroblastes et de kératinocytes humains.
1-2/Evaluation de l'effet sur la régénération du stock d'ATP L'objectif de cette étude est d'évaluer la capacité du principe actif extrait de Cicer arietinum selon l'invention, à stimuler l'activité de la créatine kinase, dont le rôle est de régénérer rapidement le stock d'ATP.
L'étude est réalisée sur kératinocytes humains par mesure de l'activité enzymatique créatine kinase, selon le protocole opératoire qui suit.
A Jl les kératinocytes humains sont ensemencés pendant 3 jours en atmosphère humide.
A J4, les cellules sont traitées a^ec le principe actif extrait de Cicer arietinum selon l'invention à 0,5% et 1%.
Les cellules sont ensuite incubées pendant quelques heures, puis sont récupérées pour réaliser une extraction protéique par fractionnement. Le fraction organelle contenant majoritairement la créatine kinase est ensuite utilisée pour le dosage de l'activité créatine kinase.
Les résultats obtenus sont présentés en suivant :
Figure imgf000011_0001
Ces résultats montrent que testé à 1%, le principe actif extrait de Cicer arietinum selon l'invention augmente l'activité créatine kinase des kératinocytes humains de 20%.
Le principe actif extrait de Cicer arietinum selon l'invention favorise donc la régénération des stocks cellulaires d'ATP.
1-3/Evaluation de l'effet sur le métabolisme protéique
Cette étude a pour but d'étudier la capacité du principe actif extrait de Cicer arietinum selon l'invention à stimuler le métabolisme protéique. L'étude est réalisée sur fibroblαstes humains par mesure du taux de protéines totales par technique colorimétrique.
A Jl, les f ibroblastes humains sont ensemencés et incubés pendant 24 heures.
A J2, les cellules sont traitées avec le principe actif extrait de Cicer arietinum selon l'invention à 0,5% et 1%, puis elles sont incubées pendant 72 heures.
A J5, les cellules sont récupérées et on effectue un dosage de la quantité de protéines totales intracellulaires à l'aide d'un kit de dosage.
Le tableau suivant présente les résultats obtenus :
Figure imgf000012_0001
On constate que testé à 1%, le principe actif extrait de Cicer arietinum selon l'invention augmente la synthèse protéique de 57% sur f ibroblastes humains.
Ainsi, en augmentant les stocks énergétiques disponibles, le principe actif extrait de Cicer arietinum selon l'invention stimule l'activité métabolique des cellules dermiques. 2/ Etudes in vivo
2-1/Evaluation de l'effet sur le renouvellement cellulaire cutané
L'objectif de l'étude est d'évaluer l'influence du principe actif extrait de Cicer arietinum selon l'invention formulé à 4% en émulsion contre placebo, sur le renouvellement cellulaire de la peau.
Cette étude est réalisée sur 35 volontaires sains, de sexe masculin. L'effet est évalué par mesure de la couleur de la peau, après coloration à la dihydroxyacétone (DHA) au niveau du ventre à l'aide d'un chromamètre. Les zones de mesure sont les suivantes :
- zone non traitée : pas de traitement après coloration à la DHA, - zone traitée placebo : application biquotidienne de la formule placebo, après coloration à la DHA,
- zone traitée principe actif selon l'invention : application biquotidienne de la formule contenant 4% de principe actif extrait de Cicer arietinum selon l'invention, après coloration à la DHA. Les mesures colorimétriques de la peau sont réalisées à l'aide d'un chromamètre qui convertit les couleurs situées dans la plage de perception humaine en un code numérique composé de plusieurs paramètres. Pour la présente étude, on évalue deux paramètres :
- b : paramètre de chrominance, caractéristique de la pigmentation jaune mélanique cutanée. Plus b diminue, plus la peau s'éclaircit.
- ΔE, caractéristique de la variation de la couleur. Plus ΔE augmente, plus la peau s'éclaircit.
Le protocole opératoire de l'étude est expliqué en suivant.
A J- 3, on détermine les trois zones cutanées de mesure au niveau du ventre des volontaires et on applique la coloration à la DHA.
A JO, on mesure la couleur de la peau au chromamètre sur chacune des trois zones.
Entre JO et J14, les volontaires appliquent biquotidiennement le placebo et le principe actif extrait de Cicer arietinum selon l'invention formulé à 4%. Tous les deux ou trois jours, la couleur de la peau est mesurée au niveau des trois zones cutanées.
Les moyennes des résultats obtenus pour le paramètre b sont présentées dans le tableau suivant : J2-J0 J4-J0 J7-J0 J9-J0 JIl-JO J14-J0
Zone non traitée -0,35 -O ,82 -1,66 -2 ,26 -2 ,51 -3 ,12
Placebo -0,73 -1 25 -2,14 -2 ,60 -2 ,60 -2 ,90
Extrait de Cicer arietinum selon -1,02 -1 59 -2,64 -3 ,41 -3 ,36 -3 ,50 l'invention 47o
Les moyennes des résultats obtenus pour le paramètre ΔE sont présentés dans le tableau suivant :
Figure imgf000014_0001
Dans les conditions de l'étude, on constate que le principe actif extrait de Cicer arietinum selon l'invention, en comparaison au placebo, diminue significativement le paramètre b et augmente ΔE significativement. Il permet d'accélérer un renouvellement des cellules cutanées.
Ces résultats montrent donc qu'après 14 jours d'applications biquotidiennes et en comparaison au placebo, le principe actif extrait de Cicer arietinum selon l'invention formulé à 4% en émulsion accélère de façon significative le renouvellement cellulaire.
2-2/Evaluation de l'effet sur l'éclat du teint
L'objectif de cette étude est d'évaluer l'influence sur l'éclat du teint du principe actif extrait de Cicer arietinum selon l'invention formulé à 4% contre placebo.
L'étude est réalisée sur 20 volontaires sains de sexe masculin. L'éclat du teint est étudié:
- avec un chromamètre au niveau des tempes, et - en aveugle par un expert entraîné, l'évaluation des différents paramètres étant effectuée sur les pommettes, le front, le menton et les yeux des volontaires.
Les mesures réalisées avec le chromamètre permettent d'obtenir des valeurs pour un paramètre ITA (Angle Typologique Individuel) de façon à évaluer la variation de l'aspect éclatant de la peau. Le paramètre ITA définit le degré de pigmentation de la peau : plus il est élevé, plus la peau est claire et lumineuse.
L'évaluation réalisée par l'expert consiste à juger différents paramètres représentatifs de l'éclat du teint, avec des échelles de score allant de 1 à 10. Les paramètres suivants sont observés :
- le grain de peau : une irrégularité de surface cutanée est corrélée à un aspect terne de la peau,
- la transparence de la peau : plus une peau est fine, plus elle laisse passer la lumière, ce qui donne un effet bonne mine, - le rayonnement de la peau : plus l'intensité des accroches lumière sur les zones saillantes du visage est importante, plus la peau est lumineuse,
- la couleur rouge : un teint uniforme se traduit par une couleur rouge peu importante,
- la couleur olive : plus la couleur olive diminue, plus l'effet bonne mine est important,
- la couleur beige : ce paramètre doit rester constant, puisqu'il dépend de la pigmentation,
- la couleur rosé claire : plus le teint est rosé, plus il est perçu comme frais et éclatant, - la présence de rides et ridules : un teint paraît plus jeune, plus lumineux si les rides et ridules sont estompées,
- l'état de fatigue des yeux et la présence de cernes : lorsque la peau est reposée, le teint paraît plus éclatant. L'évaluation par l'expert en fonction de son observation se traduit comme suit :
Figure imgf000016_0001
Pour cette étude, le protocole opératoire est le suivant :
Entre J- 15 et JO, les volontaires arrêtent l'application de produits cosmétiques sur l'ensemble du visage.
A JO, on détermine deux zones cutanées symétriques au niveau des tempes de chaque volontaire. On mesure la couleur de la peau au chromamètre sur ces deux zones et l'expert évalue l'éclat du teint.
Entre JO et J27, les volontaires appliquent biquotidiennement le placebo et le principe actif extrait de Cicer arietinum selon l'invention.
A J28, on mesure la couleur de la peau au chromamètre sur les deux zones cutanées au niveau des tempes et l'expert évalue l'éclat du teint. Pour l'étude chromαmétrique, les résultats obtenus pour le principe actif selon l'invention concernant le paramètre ITA, montrent un pourcentage de variation entre JO et J28 de + 3% par rapport à ceux obtenus avec le placebo.
Pour l'évaluation par l'expert sur l'éclat du teint, les résultats obtenus sont présentés ci-dessous :
Figure imgf000017_0001
Ainsi, cette étude montre qu'après 28 jours d'applications biquotidiennes et en comparaison au placebo, le principe actif extrait de Cicer arietinum selon l'invention formulé à 4% en émulsion augmente signif icativement le paramètre ITA caractéristique de la clarté et de la luminosité du teint. Par ailleurs, selon un expert entraîné, il améliore signif icativement l'éclat du teint, en augmentant le rayonnement de la peau de 14%, en diminuant la couleur olive de 11%, en augmentant la couleur rosé de 8% et en améliorant l'appréciation globale du teint de 10%.
2-3/Evaluation de l'effet sur la tonicité et la fatiqabilité de la peau
Le but de l'étude est d'évaluer l'efficacité du principe actif extrait de Cicer arietinum formulé à 4% en émulsion contre placebo, sur la tonicité et la fatigabilité de la peau au niveau du bas du visage.
Cette étude est réalisée sur 20 volontaires sains de sexe masculin.
Les mesures sont réalisées avec un cutomètre : la peau est aspirée par une sonde à dépression constante pendant une durée constante. La profondeur de pénétration de la peau dans la sonde est mesurée par deux prismes optiques, ce qui permet d'obtenir des courbes à partir desquels il est possible de calculer divers paramètres caractéristiques des propriétés mécaniques de la peau. Parmi ces paramètres, la présente étude consiste à observer les paramètres suivant :
- X qui représente la tonicité de la peau (si (-X) augmente, la tonicité augmente), et
- R4 qui représente la fatigabilité de la peau (si R4 diminue, « l'effet fatigue » de la peau est moins important).
Le protocole de l'étude est exposé en suivant.
Entre J-15 et JO, les volontaires arrêtent l'application de produits cosmétiques sur l'ensemble du visage.
A JO, on détermine deux zones cutanées symétriques au niveau du bas du visage, et on mesure la tonicité et la fatigabilité de la peau sur ces deux zones.
Entre JO et J27, les volontaires appliquent deux fois par jour le placebo et le principe actif selon l'invention formulé à 4% en émulsion.
A J28, on mesure la tonicité et la fatigabilité de la peau sur les deux zones cutanées symétriques au niveau du bas du visage.
Les résultats obtenus pour le principe actif selon l'invention sont présentés en pourcentage de variation entre JO et J28 par rapport à ceux obtenus avec le placebo, dans le tableau suivant :
Figure imgf000018_0001
On constate donc que, dans les conditions de cette étude, après 28 jours d'applications biquotidiennes et en comparaison au placebo, le principe actif extrait de Cicer arietinum selon l'invention, formulé à 4% en émulsion, augmente de 12% la tonicité de la peau, et diminue de 13% la fatigabilité de la peau.
La présente invention couvre aussi les compositions cosmétiques et/ou dermopharmaceutiques incluant un extrait de Cicer arietinum en tant que principe actif, dans différentes formes galéniques, notamment gel, solution, émulsion, crème....
Il convient d'analyser la stabilité des formes galéniques incluant un extrait de
Cicer arietinum en tant que un principe actif, ceci dans des proportions comprises entre 1 et 5%. La stabilité est caractérisée par une absence de précipitation de l'extrait, une absence de crémage et une absence de déphasage.
On peut citer des formulations ayant montré une stabilité physique incluant 5% d'un principe actif selon l'invention.
Gel limpide : - Carbopol : 0,5% avec Triéthanolamine : qsp pH=6,5 - Glycérol : 10,0%
- Propylène glycol : 10,0%
- Conservateur : 1,0%
- Extrait de Cicer arietinum selon l'invention: 5,0%
- Eau : 73,5% Gel opaque : - Sépigel 305 : 3,0%
- Lanol 99 : 12,0%
- Conservateur : 1,0%
- Extrait de Cicer arietinum selon l'invention: 5,0%
- Eau : 79,0% Gel émulsionné : - Montanov 202 : 3,0%
- Isopropyl palmitate : 10,0%
- Sepigel 305 : 2,0%
- Conservateur : 1,0% - Extrait de Cicer ar ietinum selon l'invention: 5,0%
- Eau : 79,0% Emulsion non ionique : - Montane 60 : 2,0%
- Montanox 60 : 4,0% - Isopropyl myristate : 8,0%
- Paraffin wax 130/135 : 3,0%
- Conservateur : 1,0%
- Extrait de Cicer ar ietinum selon l'invention: 5,0%
- Eau : 77,0% Emulsion anionique : - Acide stéarique : 7,0% Triethanolamine qsp pH=8
- Ritaphyl ICS : 20,0%
- Conservateur : 1,0%
- Extrait de Cicer ar ietinum selon l'invention: 5,0%
- Eau : 67,0% Emulsion cationique : - Quaternium-82 : 5,0%
- Alcool cétylique : 1,0%
- Gemseal 60 : 8,0%
- Alcool cétéarylique : 1,0%
- PEG 100 stéarate : 1,0% - Conservateur : 1,0%
- Extrait de Cicer ar ietinum selon l'invention: 5,0%
- Eau : 78,0%
De plus, des tests ont montré la compatibilité du principe actif a^/ec les matières premières utilisées en cosmétique. On peut également citer quelques exemples de compositions cosmétiques incluant un extrait de Cicer arietinum selon l'invention : - Crème visage homme :
Glycérol (Univar) 2,34% Sophim MC30 (Sophiù) 4%
Montαnov 14 (Seppic) 2%
Phytosquαlαne (Sophim) 1%
Beurre de Kαrité (Sictiα) 1%
DUBPTCC (Stéαrinerie Dubois) 2%
DUB STG AE30 (Stéαrinerie Dubois) 2,7%
DC 7-2100 (Dow Corning) 0,4%
Conservateurs 0,7%
Extrait de Cicer arietinum selon l'invention 4%
Eau 79,86%
- Gel homme :
Glycerox 767HC (Croda) 3%
DUBPTCC (Stéarinerie Dubois) 4%
Carbopol Ultrez 21 (Noveon) 1%
DC 200 (Dow Corning) 5%
NaOH qsp pH=6
Conservateurs 0,7%
Extrait de Cicer arietinum selon l'invention 4%
Eau 82,3%
- Lait adoucissant :
Satiaxane CX930 (Degussa) 0,4%
Carbopol Ultrez 10 (Noveon) 0,4%
NaOH qsp pH=6
DUB PTCC (Stéarinerie Dubois) 4%
Simulsol 58 (Seppic) 1%
Simulsol 78 (Seppic) 1%
Simulsol M45 (Seppic) 1%
Simulsol 220TM (Seppic) 1% Lαnol 2681 (Seppic) 3%
Micropeαrl MlOO (Seppic) 1%
Conservateurs 0,7%
Extrait de Cicer arietinum selon l'invention 4%
Eau 82,5%

Claims

REVENDICATIONS
1. Utilisation d'au moins un extrait Cicer arietinum en tant que principe actif énergisant dans une composition cosmétique.
2. Utilisation d'au moins un extrait de Cicer arietinum selon la revendication 1, dans une composition cosmétique énergisante, caractérisée en ce que ledit extrait comprend une fraction oligopeptidique de poids moléculaire inférieur à 5000Da.
3. Utilisation d'au moins un extrait de Cicer arietinum selon la revendication 1 ou 2, dans une composition cosmétique pour dynamiser et à revitaliser la peau.
4. Utilisation d'au moins un extrait de Cicer arietinum selon l'une des précédentes revendications, dans une composition cosmétique pour combattre les signes de fatigue et de vieillissement et/ou apporter à la peau un effet bonne mine.
5. Utilisation d'au moins un extrait de Cicer arietinum selon l'une des précédentes revendications, dans une composition cosmétique pour augmenter la tonicité de la peau et/ou réduire la fatigabilité de la peau.
6. Utilisation d'au moins un extrait de Cicer arietinum selon l'une des précédentes revendications, dans une composition cosmétique, caractérisée en ce que ledit extrait accélère le renouvellement cellulaire cutané.
7. Utilisation d'au moins un extrait de Cicer arietinum selon l'une des précédentes revendications, dans une composition cosmétique, caractérisée en ce que ledit extrait stimule le métabolisme protéique des cellules dermiques.
8. Utilisation d'au moins un extrait de Cicer arietinum selon l'une des précédentes revendications, dans une composition cosmétique, caractérisée en ce que ledit extrait stimule la néosynthèse d'ATP et la régénération de l'ATP des cellules dermiques.
9. Principe actif, extrait de Cicer arietinum, adapté pour l'utilisation selon l'une quelconque des précédentes revendications, caractérisé en ce qu'il comprend une fraction oligopeptidique de poids moléculaire compris entre 772 Da et 5000 Da.
10. Principe actif selon la revendication 9, caractérisé par : un taux de matières sèches compris entre 20 et 150 g/1, un pH compris entre 4 et 7, et - une teneur en protéines comprise entre 8 et 60 g/l.
11. Principe actif selon la revendication 9 ou 10, caractérisé par : un taux de matières sèches compris entre 50 et 80 g/1, un pH compris entre 4,5 et 5,5, et une teneur en protéines comprise entre 20 et 30 g/1.
12. Procédé d'obtention d'un principe actif selon l'une des revendications 9 à
11, caractérisé en ce qu'il comprend au moins les étapes suivantes :
- solubilisation de poudre de Cicer arietinum dans l'eau, et
- au moins deux hydrolyses enzymatiques successives.
13. Procédé d'obtention d'un principe actif selon l'une des revendications 9 à 11, caractérisé en ce qu'il comprend au moins les étapes suivantes :
- solubilisation de poudre de Cicer arietinum dans l'eau,
- au moins deux hydrolyses enzymatiques successives,
- séparation des phases soluble et insoluble,
- inactivation enzymatique par traitement thermique, - filtration,
-purification par ultraf iltration, et
- filtration et filtration stérilisante.
14. Composition cosmétique comprenant un principe actif selon l'une des revendications 9 à 11, caractérisée en ce qu'elle se présente sous forme de crèmes, émulsions huile-dans-eau, émulsions eau-dans-huile, émulsions multiples, solutions, suspensions ou poudres.
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