SE470379B

SE470379B - Nya retinsyraestrar av antibiotika, deras framställningsförfarande och farmaceutiska och kosmetiska kompositioner innehållande dem

Info

Publication number: SE470379B
Application number: SE8701845A
Authority: SE
Inventors: M Philippe; H Sebag; D Dupuis; A Rougier
Original assignee: Oreal
Priority date: 1986-05-06
Filing date: 1987-05-05
Publication date: 1994-02-07
Also published as: FR2598420B1; FR2598420A1; DE3714937C2; NO871870D0; NO871870L; NO168041C; JPS62289593A; IT8720389A0; NO168041B; GB2191483B; GB2191483A; ES2006478A6; BE1004152A4; DK229387A; NL8701054A; DK169345B1; CH674847A5; NL193946C; SE8701845L; GB8710673D0

Description

15 20 25 30 35 470a-579 z Acnes etiopatogenes även om den är dåligt definierad börjar i bildningen av en karakteristisk skada, komedon. Denna resulte- rar i tilltäppning av hårtalgkanalen till följd av en diskera- tinisering av infundibulumzonen i kanalen.

Tilltäppníng har till väsentlig effekt att modifiera sebums viskositet och de fysikaliska/kemiska egenskaperna i miljön (pH, syrets ångtryck ...).

Denna modifiering medger hyperproliferation av stammar, som föreligger i huden, huvudsakligen Propionibacterium acnes. anaerob eller lufttolererande stam.

Acne har inte i något fall infektiösa egenskaper i det hän- seendet att denna dermatos inte motsvarar implantation av en speciell patogen stam och att den inte är överförbar.

Bakteriehyperprolierationen har slutligen till följd att i miljön frige vissa proteaser eller hyaluronidaser av bakterie- ursprung, som orsakar en lys av follikelsäcken och sålunda frigivning av inflammatoriska föreningar i läderhuden och sätter igång reaktioner av inflammatorisk typ i organismen.

Aven om naturen hos de inflammatoriska föreningarna för när- varande inte är bestämda förefaller deras bakterieursprung föga tvivelsam. vilket därigenom förklarar de bra terapeutiska resultaten vid acneinflammation med antibiotiska föreningar både vid oral och topisk administrering.

Bland antibiotika rekommenderas ofta erytromycin och klinda- mycin men erfordrar (isynnerhet för erytronycinet) relativt höga koncentrationer för att erhålla en godtagbar verkan.

Vidare utvecklar, såsom nyligen utförda studier visat, vissa stammar av Propionibacterium acnes en successiv resistans mot erytromycin, linkomycin och klindamycin så att behandlingen med dessa antibiotika kan visa sig vara föga effektiv. 10 20 25 30 35 Topisk administrering av klindamycin och isynnerhet erytro- mycin omfattar även ett problem med penetrering genom stratum corneum. vilket pâ grund härav begränsar deras effektivitet.

De nya retinestrarna av antibiotika. isynnerhet erytromycin A. klindamycin och linkomycin enligt uppfinningen erbjuder en godtagbar lösning på de problem. som föreligger vid användning av antibiotika i så mâtto att utförda försök har kunnat visa att dessa nya estrar har en selektiv verkan mot den huvud- mikroorganism, som är ansvarig för inflamnationen. nämligen Propionibacterium acnes, samtidigt som de har en mycket låg aktivitet gentemot kutana mikrooroganismer såsom Staphylococcus epidermidis, vilket tillåter behandling av dessa âkommor i huden utan att dess jämvikt störes.

Det skall även framhållas att dessa nya retinsyraestrar av antibiotika, isynnerhet retinsyraestrarna av all trans och 13-cis av erytromycin A och linkomycin visar sig vara aktiva mot stammar av Propionibacterium acnes, som är resistenta mot utgângsantibiotikat.

De nya retinsyraestrarna av antibiotika enligt uppfinningen har visat sig vara aktiva utan att ha olägenheterna hos retin- syra.

Sålunda tolereras de nya estrarna bättre av huden och de har visat sig vara mycket mindre toxiska vid oral administrering än kombinationen antibiotika/retinsyra.

Retinsyraestrarna av antibiotika enligt uppfinningen har i förhållande till andra kända antibiotika fördelen att ha en keratolytisk aktivitet vid fall av estrar av retinsyra all trans och en potentiell anti-seborréaktivitet vid fall av 13-cis-retinsyra, vilket gör att dessa estrar verkar vara en “prodrug".

De nya retinsyraestrarna av antibiotika enligt uppfinningen är vidare lipofila. vilket medger förbättring av penetreringen 10 15 20 25 30 35 479379 4 genom epidermis.

Teknikens ståndpunkt relativt kombinationen av retinsyra och erytromycín utgöres av den produkt, som tillhandahålles av CILAG-laboratorierna under benämningen 'Antibio-Aberel'.

Teknikens ståndpunkt relativt estrarna av erytromycin A åter- ges med det franska patentet US 2 862 921. som avser fram- ställningen av mättade och mono-omättade fettsyraestrar av erytromycin A såsom erytromycin A-monostearat och erytromycin A-monooleat.

Teknikens ståndpunkt relativt klindamycin- och linkomycin- syraestrarna återges isynnerhet av det tyska patentet 2 017 003 som beskriver framställningen av linkomycin- klíndamycinsyraestrar, vars acylkedja innehåller mellan l och och 18 kolatomer.

Föreliggande uppfinning avser all-trans- eller 13-cis-retin- syraestrar av ett antibiotika valt bland erytromycin A, linkomycin och klindamycin, varvid estern av erytromycín A är monoestern i 2'-ställningen, estern av linkomycin är mono-, di-, tri- eller kvadriestern i 2-, 3-, 4- och/eller 7-ställ- ningarna och estern av klindamycin är mono-, di- eller tri- estern i 2-, 3- eller 4-ställningarna eller ett salt eller blandningar av dessa.

Retinsyraestrarna i 2'-ställning av erytromycin A kan återges med följande formel: 10 15 20 25 30 35 ¿7o 379 vari R betecknar en all trans retínylgrupp eller 13-cis retínylgrupp, varvid retinylgruppen har följande formel: (II) Retínsyraestrarna 1 3-ställning i línkomycín och klindamycín kan återges med följande formler: 10 15 20 25 30 35 SCH3 n: IV vari R har samma betydelse som givits ovan.

Föreliggande uppfinning avser även framställningsförfarandet för all trans och l3-cis retinsyraestrarna av erytromycin A, av linkomycin och klindamycin.

Olika förestringsförfaranden kan användas men företrädesvis utföres denna förestring i vattenfritt organiskt lösnings- medelsmedium. företrädesvis i tetrahydrofuran enbart eller i blandning med ett annat organiskt lösningsmedel såsom pyridin. genom att ett överskott av blandad anhydrid av karbonsyra och all trans eller l3-cis retinsyrorna (framställd in situ, t.ex. utgående från etylkloroforniat och all trans eller 13-cis syra) med erytronycin A. linkomycin eller klindanycin i form av bas i närvaro av en organisk bas eller uineralbas såsom pyridin och/eller natriumvätekarbonat.

Denna metod med blandad anhydrid medger framställning av retinsyraestrarna i 2'-ställning av erytronycin A och i 3-ställning av linkomycin och klindamycin utan isomerisering av retinylgruppen.

De andra förestringsförfarandena, isynnerhet av linkomycin och klindamycin med den metod. som använder inidazolider av retin- 1.; 10 15 20 25 30 35 ¿7o 379 syraestrar i ett vattenfritt lösningsmedel såsom N.N-dimetyl- formamid i närvaro av en bas såsom natrium- eller kalium-t.- -butylat leder till en blandning av retinsyraestrar av dessa antibiotika.

Hed den senare metoden erhålles sålunda estern i 7-ställning av linkomycin huvudsakligen tillsammans med estrarna i 2-, 3- och 4-ställning.

På samma sätt erhåller man en blandning av monoestrar i 2-, 3- och 4-ställning av klindamycin.

Denna senare metod orsakar vidare ofta en isomerisering av retinylgruppen.

Föreliggande uppfinning avser även farmaceutiska kompositio- ner, som kan administreras topiskt, oralt, parenteralt eller rektalt samt kompositioner av kosmetisk karaktär för behand- ling av olika dermatoser, isynnerhet acne, vilken komposition föreligger i vattenfri form och innehåller minst en ester av all trans eller l3-cis retinsyra med erytromycin A, linkomycin eller klindamycin enligt uppfinningen i en koncentration mellan 0,01 och 10 men företrädesvis mellan 0,05 och l vikt% i förhållande till kompositionens totala vikt.

För framställningen av kompositionerna enligt uppfinningen innehållande som aktiv substans minst en all trans eller 13-cis retinsyraester av erytromycin A, linkomycin eller klindamycin kan man använda vehiklar och adjuvans, som beskri- ves i litteraturen inom farmacin, kosmetiken och tillhörande områden.

För framställningen av lösningar kan man t.ex. använda ett eller flera organiska lösningsmedel som är godtagbara i fysio- logiskt hänseende.

De godtagbara organiska lösningsmedlen väljs isynnerhet från den grupp, som utgöres av aceton, isopropylalkohol. fettsyra- 10 15 20 25 30 35 470 579 a triglycerider, glykoletrar. alkylestrar med Cl-C4 av syror med kort kedja och polytetrahydrofuranetrar_ Kompositionerna enligt uppfinningen kan även innehålla för- tjockningsmedel såsom cellulosa och/eller derivat av cellulosa i en mängd av 0,5-20 vikta i förhållande till kompositionens totala vikt.

Kompositionerna enligt uppfinningen kan dessutom tillsammans med minst en retinsyraester av antibiotika enligt uppfinningen innehålla minst ett annat känt medel mot acne.

Man kan om så erfordras tillsätta ett vanligt adjuvans. som väljs från den gruPP. Som utgöres av anti-oxiderande medel, konserveringsmedel, parfymer och färgmedel.

Bland de användbara anti-oxidationsmedlen nämnes t.ex. t.-butylhydroxikinon. butylhydroxianisol, butylhydroxitoluen och a-tokoferol och dess derivat.

Omvandlingarna av föreningarna enligt uppfinningen till farmakologiska och galeniska former utföres på känt sätt.

De galeniska formerna kan för topisk administrering vara krämer. mjölker. geler, lotions. mer eller mindre förtjockade. lotions burna av kuddar, pomador, stift eller aerosolformule- ringar. som förekommer i form av spray eller skum.

Kompositionerna för oral administrering kan föreligga i form av tabletter. kapslar. drageer. sirapar. suspensioner, emul- sioner, pulver, granulat eller lösningar. Den dagliga dosen vid oral administrering är ca 0.1 mg till 5 mg/kg/dag och företrädesvis från l mg till 2,5 mg/kg/dag.

Kompositionerna kan även föreligga i form av suppositorier.

Behandlingen av acne med hjälp av de topiska kompositionerna enligt uppfinningen består i att två eller tre gånger per dag 10 15 20 25 30 35 s 478 379 anbringa en tillräcklig mängd på de zoner av huden. som skall behandlas, och detta under en period av 6 till 30 veckor och företrädesvis 12 till 24 veckor.

Kompositionerna enligt uppfinningen kan även användas i före- byggande syfte, dvs. på de zoner av huden, som är känsliga för angrepp av acne.

Jämförande studie avseende aktiviteten hos retinsyraestrar av antibiotika Aktiviteten hos retinsyraestrarna av erytromycin A, linkomycin och klindamycin har undersökts med utspädningsmetoden för att bestämma den minimala inhiberande koncentrationen (MIK), vilken metod beskrivits och använts av G.A. DENYS et al, Antimicrobial Agents and Chemotherapy (1983) 23. 335-337 och J.J. LEYDEN et al, J. Am. Acad. Dermatol. (1983) 8 (1) 41-5, genom att som stam använda Propionibacterium acnes, stam P37 tillhandahâllen av CUNLIFFE och HOLLAND.

Denna stam P37 har varit föremål för undersökningar, som beskrivits i följande publikationer: - J. GREENHAN. K.T. HOLLAND och W.J. CUNLIFFE. Journal Of General Hicrobiology (1983) LZ2. l30l-1307, - E. INGHAH, K.T. HOLLÄND. G. GOWLAND och W.J. CUNLIFFE. íbid (1980) lli. 59-65 och - Y.T. HOLLAND, J. GREENMAN och W.J. CUNLIFFE. Journal of Applied bacteriology (1979) il. 383-394.

Val och isolering av känsliga och resistenta populationer Stammen P37 är känslig för erytromycin såsom den minimala inhiberande koncentrationen visar (KIK = 0.78u9/ml).

I motsats härtill efter 8 successiva subkulturer i samma medium (RCM [förstärkt klostridiummedium (oxid)] 19/20, DHSO 19/20 i volym) successiv stabilisering av denna stam i 10 15 20 25 30 35 47Ü 379 io mediumet manifesterar sig en successiv resistens mot erytro- mycin i följande former: - Efter spridning av ett standardinokulum (DO = 1,8 till 450 nm) på agarmedium (RCH + furazolidon) i Petri-skål placeras en skiva med 9 mm diameter i centrum på denna. På skivan placeras 50 ng erytromycin (i lösning i DHSO). 'a - Efter 6 dagar vid 36°C i anaerob miljö (system GAS-PAK), B.B.L) syns tydligt en zon där stammens tillväxt inhiberas, (total diameter = 42 mm). varvid en stor majoritet av kolonierna föreligger vid inhiberingszonens periferi.

I motsats härtill förekommer i det inre av denna nâgra tydliga kolonier.

De tvâ slagen av kolonierna uttages sålunda genom avskrapning av agarosmediumet (steriliserad platinaödla): l) l det inre av inhiberingszonen uttages stammar. som benämnes P 37 E<:)pâ grund av deras tydliga resistens mot erytromycin. 2) 1 cm utanför inhiberingszonens periferi uttages stammar, som benämnes P 37 EG).

Efter isolering och odling visar stammarna P 37'EC) och P 37 E(:)effektivt mycket olika känsligheter för erytro- mycin, vilket framgår av följande värden på de respektive KIK.

HIK (ng/ml) P 37 o.7a P 37 E 0.78 ' P 37 1:9 so Detta fenomen bekräftas av undersökningen av IK 50 (S0%-ig inhiberande koncentration) som representerar den koncentration av erytromycin där, vid en konstant odlingstid. 50% överlevan- n 10 15 20 25 30 35 ll de återfinns i populationen.

IK 50 (ng/ml) P 37 50 P 37IE<) 5 P 37 ES 100 èvo 579 Den minimala inhiberande koncentrationen (MIK) uttryckt i pg/ml för retinsyraestrarna av erytromycin A. av linkomycin och klindamycin testade gentemot stammarna P 37<:)och P ï7C>âterges i följande tabell: Retinsyraestrar av P 37IE<) antibiotika (känslig) 2'-O-(all-trans-retinyl)- erytromycin A 14 2'-O~(l3-cis-retinyl)~ erytromycin A 20 O-(l3-cis-retinyl)-3- linkomycin 17,5 O-(all-trans-retinyl)-3- klindamycin 18 0-(l3-cis-retinyl)-3- klindamycin 1.5 Kontroller: 2'-oleoyl-erytromycin A (Z-9) 50 3-O-oleoyl-linkomycin 19 3-0-oleoyl-klindamycin 54 erytromycin A 1 linkomycin 13 klindamycin l Pavrzf) (resistent) 13 34 25 50 35 100 42 >l38 > 50 66 10 Tabellen här nedan visar de minimala inhiberande koncentra- tionerna av retinsyraestrarna av antibiotika mot tvâ stammar av Staphylococcus epidermidis: 10 15 20 25 30 35 470 ÉY9 12 Retinsyraestrar av antibiotika Staph. epi. 3 Staph. Epi. 6 2'-O-(al1-trans-retiny1)- erytromycin A 75 39 2'-0-(l3-cis-retinyl)- erytromycin A 1l0\ 110 3-o-(13-cis-recinyl) \ klindamycin 113 113 3-0-(13-cis-retinyl) linkomycin 100 100 Kontroller: erytromycin A m__l3 _ 30 klindamycin ' 7 8 linkomycin 14 20 Stammen 'Staph. epi. 3' har isolerats från en patient med acne under det att stammen 'Staph. epi. 6' har isolerats från en patient utan acne. Isoleringen av stammarna har utförts med metoden enligt WILLIAHSON-KLIGHAN ('A new method for the quantitative investigation of cutaneous bacteria' P.

HILLIAMSON och A. KLIGHAN, J.l.D., vol. 45. n°6, 1965). Tio- faldiga spädningar av proverna utföres, och 0.1 nl av dessa spädningar ympas på ett selektivt medium. som medger isolering av stafylokocker.

Som man kan konstatera i den första tabellen är retinsyra- estrarna av erytronycin A och 1ínkonycin_!e5 aktiva mot resistenta stammar av Propionibacterium acnes än huvudanti- biotikana. Vidare har 2'-oljesyraestern av erytronycin A (amerikanskt patent 2 862 921) sant 3-oljesyraestern av klindamycin (DOS 2 017 003) tagna som jämförande estrar visat sig vara tydligt mindre aktiva not de känsliga stammarna (P 37 ECD) och resistenta stammarna (P 37 E<:Ö än estrarna enligt uppfinningen, vilket sålunda förstärker intresset isyn- nerhet för retinsyraestrarna av_erytronycin A och klindamycin.

Den andra tabellen visar intresset hos alla dessa retinsyra- estrar av antibiotika gentemot 'den kutana ekologin' eftersom 10 15 20 25 30 35 13 470 579 de är mycket mindre aktiva mot stammarna av Staphylococcus epidermidis än huvudantibiotika.

Här återges flera beskrivande exempel på framställningen av retinsyraestrarna av antibiotika enligt uppfinningen samt flera exempel på farmaceutiska eller kosmetiska kompositioner för behandling av dermatoser, isynnerhet acne.

Exempel l Framställning av 2'-0-(13-cis-retinyl)-erytromycin A I en kolv under inert atmosfär löses 5 g (l6,6 mol) l3-cis- -retinsyra i 35 ml vattenfri tetrahydrofuran. Reaktionsbland- ningen kyles till O°C, varefter man häller i 3 ml (38 mol) vattenfri pyridin och 1,6 ml (l6,6 mol) etylkloroformiat.

Lösningen omröres 5 minuter och man tillsätter 2,5 g (30 mmol) natriumvätekarbonat sedan 4.9 g (6,7 mmol) erytromycin A, som tidigare lösts i 150 ml tetrahydrofuran. Reaktionsblandningen lämnas sedan under omrörning under 10 minuter under det att den får återgå till rumstemperatur (kromatografi på tunnskikt av silikagel:metylenklorid/metanol l0%). Lösningen hälles på 60 ml vatten, extraheras sedan med etylacetat. Den organiska fasen torkas över magnesiumsulfat, filtreras. torkas sedan under partiellt vakuum. Den så erhållna råa produkten kromato- graferas pâ silikagelkolonn (högtrycksvätskekromatografi H.P.L.C) under användning av elueringsmedlet:etylacetat (7)/hexan (3) för att leda till isoleringen av 4,4 g (65% utbyte) av ren 0-retinyl(l3-cis)-2'-erytromycin A.

Smp. = 82°C (hexan/etylacetat) [q]š2 = -l7° (C = 6 mg/ml diklorometan) Mikroanalys : C57H93N0l4; H = l0l6,4 C H N beräknat % : 67.36 9,22 l,38 funnet 2 : 67,48 9,32 1,38 10 15 20 25 30 35 470 579 14 1.R. : band vid 1735 cml (ester) 13 NHR av C (CDCl3. intern ref. T.H.S.) 7-negativa effekter i l'(-2.2 ppm) och 3'(-2.1 ppm) antyder läget för estern i 2'-ställning. Kolen C"20 (20,94 ppm), C"l4 (ll7,28 ppm) och C"l2 (l3l,9 ppm) i retinkedjan över- ensstämmer med l3-cis-stereokemin i retinkedjan.

Exemgel 2 Framställning av 2'-O-(all-trans-retinyl)-erytromycin A I en rundbottnad kolv under inert atmosfär löses 5 g (l6,6 mmol) all-trans-retinsyra i 35 ml vattenfri tetrahydrofuran.

Reaktionsblandningen kyldes till 0°C varefter man satsar 3 ml (38 mmol) vattenfri pyridin och 1.6 ml (l6.6 mmol) etylkloro- formiat. Lösningen omröres S minuter och man tillsätter 2,5 g (30 mmol) natriumvätekarbonat. sedan 4,9 g (6,7 mmol) erytro- mycin A, som tidigare lösts i 150 ml tetrahydrofuran. Reak- tionsblandningen lämnas sedan under omrörning under 10 timmar varvid temperaturen får stiga till rumstemperatur (kromatogra- fi på tunnskikt av silikagel : metylenklorid/:etanol 10%).

Lösningen hälles i 60 ml vatten, extraheras sedan med etyl- acetat. Den organiska fasen torkas över magnesiunsulfat, filtreras varefter man koncentrerar under partiellt vakuum.

Den så erhållna råa produkten kronatograferas på silikagel- kolonn (högtrycksvâtskekronatografi H.P.L.C.) under användning av elueringsmedlet : etylacetat (7)/hexan (3) för att leda till isoleringen av 4,1 g (60% utbyte) av ren 2'-O-(all-trans- -retinyl)-erytronycin A.

Snp. e 76“C (etylacetat/hexan) [a]š2 = -65° (C = 2 mg/ml diklorometan) Hikroanalys : C57H93NOl4.4H20; H 4 l088.5 C H N beräknat 2 : 62,89 9,35 1,29 funnet % : 62.91 8,90 1.29 10 15 20 25 30 35 15 47Û 579 NHR av 1 3C (CDCI3, intern ref. T.M.S.) 7-negativa effekter i l'(-2 ppm) och 3'(-1,9 ppm) vilket an- ger läget för estern i 2'-ställning. Kolen C"20 (l4,l4 ppm), C"l4 (ll9.36 ppm) och C"12 (l35.l9 ppm) överensstäm- mer med all-trans-stereokemin i retinkedjan.

Exempel 3 Framställning av 3-0-(all-trans-retinyl)-klindamycin I en kolv under inert atmosfär löser man 5 g (l6.6 mmol) retinsyra (all trans) i 30 ml vattenfri tetrahydrofuran. Reak- tionsblandningen kyles till 0°C, varefter man tillsätter 6 ml (76mmol) vattenfri pyridin och 1,6 ml (l6.6 mmol) etylkloro- formiat. Lösningen omröres 5 minuter och man tillsätter 1,25 g (15 mmol) natriumvätekarbonat sedan 2,35 g (5,5 mmol) klinda- mycin, som tidigare lösts i 100 ml av en blandning av tetra- hydrofuran (8)/pyridin (2). Reaktionsblandningen lämnas sedan under omrörning under l0 minuter under det att temperaturen får stiga till rumstemperatur (kromatografi på tunnskikt av silikagel : metylenklorid/metanol 5%). Lösningen hälles på 80 ml vatten extraheras sedan med etylacetat. Den organiska fasen torkas över magnesiumsulfat. filtreras. koncentreras sedan under partiellt vakuum. Den så erhållna råa produkten kremato- graferas pâ silikagelkolonn (H.P.L.C) under användning av elueríngsmedlet : etylacetat (5)/hexan (5) för att leda till isoleringen av 2.15 g (55% utbyte) ren 3-0-(all-trans- -retinyl)-klindamycin.

Smp. - 62°C (etylacetat/hexan) un? .~ +so° (c _- ioo :ng/ml dikiømmetan) Hikroanalys : C38H59S06Cl.2,5H2O; M - 752.5 C H N beräknat % I 69.44 8.08 3,23 funnet % : 60.66 3.57 3.72 10 15 20 25 30 35 470 579 16 NHR för 136 (CDCl3. intern ref. T.H.S.): 7-negativa effekter i 4-ställning (-2.8 ppm) och i 2-ställning (-1,9 ppm). De kemiska skiften för C"l4 (ll7,84 ppm) och C"20 (l4.ll ppm) bekräftar all-trans-stereokemin i retinkedjan.

Exempel 4 Framställning av 3-0-(13-cis-retinyl)-klindamycin I en kolv under inert atmosfär löser man 5 g (l6,6 mmol) l3-cis-retinsyra i 30 ml vattenfri tetrahydrofuran. Reaktions- blandningen kyles till 0°C, varefter man häller i 6 ml (76 mmol) vattenfri pyridin och 1,6 ml (l6,6 mmol) etylkloro- formiat. Lösningen omröres S minuter och man tillsätter 1,25 g (15 mmol) natriumvätekarbonat sedan 2,35 g (5,5 mmol) klinda- mycin, som tidigare lösts i 100 ml av en blandning av tetra- hydrofuran (8)/pyridin (2). Reaktionsblandningen lämnas sedan under omrörning under 10 tinnar under det att temperaturen får stiga till rumstemperatur (kromatografi på tunnskikt av silikagel : metylenklorid/metanol 5%). Lösningen hälles på 80 ml vatten. extraheras sedan med etylacetat. Den organiska fasen torkas över magnesiumsulfat. filtreras. koncentreras sedan under partiellt vakuun. Den så erhållna råa produkten kromatograferas på silikagelkolonn (H.P.L.C) under användning av elueringsmedlet : etylacetat (5)/hexan (5) för att leda till isoleringen av 2 g (512 utbyte) av ren 3-0-(l3-cis- -retinyl)-klindamycin.

Smp. = 95°C (hexan/etylacetat) [a]š0 = +lll° (C = 15 mg/ml diklorometan) Hikroanalys : C38H59ClN2S06; H s 707.4 C H beräknat % : 64,52 8,41 funnet % : 64,47 8,45 l NHR för 3C (CDCI3, intern ref. T.H.S.). 10 15 20 25 30 35 17 479 'S79 Läget för estern angives med postiv ß-effekt i 3-ställning (+l,77 ppm) och de negativa 7-effekterna i 2-ställning (-1,4 ppm) och 4-ställning (-2.5 ppm). 13-cis-konfigurationen be- kräftas av C"20 (20.93 ppm) och C"l4 (l15.94 ppm).

Exempel 5 Framställning av 3-0-(13-cis-retinyl)-linkomycin I en rundbottnad kolv löses under inert atmosfär 5 g (16,6 mmol) 13-cis-retinsyra i 30 ml vattenfri tetrahydrofuran.

Reaktionsblandningen kyles till 0°C, varefter man häller i 6 ml (76 mmol) vattenfri pyridin och 1,6 ml (16,6 mmol) etyl- kloroformiat. Lösningen omröres 5 minuter och man tillsätter 1,25 g (15 mmol) natriumvätekarbonat sedan 2,2 g (5,4 mmol) linkomycin, som tidigare lösts i 100 ml av en blandning av tetrahydrofuran (7)/pyridin (3). Reaktionsblandningen lämnas sedan under omrörning under 10 timmar under det att tempera- turen fâr stiga till rumstemperatur (kromatografi på tunnskikt av silikagel : metylenklorid/metanol 10%). Lösningen hälles på 100 ml vatten, extraheras sedan med etylacetat. Den organiska fasen torkas över magnesiumsulfat. filtreras. koncentreras sedan under partiellt vakuum. Den så erhållna råa produkten kromatograferas på silikagelkolonn (H.P.L.C) under användning av elueringsmedlet : etylacetat (8)/hexan (2) för att leda till isoleringen av 1.85 g (502 utbyte) av ren 3-0-(13-cis- -retinyl)-linkomycin.

Smp. e 95°C (hexan/etylacetat) [alšo 4 +l03° (C = 7 mg/ml diklorometan) 2,5H202 N = 734.5 Hikroanalys : C38H6oN2S07.

C H beräknat 2 : 62.18 9,03 funnet % : 62.33 8.64 NHR för 13C (CDCl intern ref. T.M.S.).

BI 10 15 20 25 30 35 470 579 ia Läget för estern anges av den postiv ß-effekten i 3-ställ- ning (+l.6 ppm) och de negativa Y-effekterna i 2-ställning (-2,4 ppm) och 4-ställning (-1,9 ppm). l3-cis-konfigurationen bekräftas av C"20 (20.98 ppm) och C"l4 (ll5,83 ppm).

Exempel 6 Framställning av blandningen av monoestrarna av 7-O-(all-trans- -retinyl)-linkomycin, 3-O-(all-trans-retinyl)-linkomycin och 2-0-(all-trans-retinyl)-linkomycin I en rundbottnad kolv under inert atmosfär löste man 30 g (74 mmol) linkomycin i 300 ml vattenfri N.N-dimetylformamid. var- efter 830 mg (7,4 mmol) kalium-t.-butylat tillsättes och man fortsätter omrörningen vid rumstemperatur under 90 minuter.

Han häller sådan i en lösning av 13 g (37 mmol) l-(all-trans- -retinyl)-imidazol i 150 ml N.N-dimetylformanid, och det resulterande mediumet omröres vid rumstemperatur under 12 timmar (kromatografi på tunnskikt av silikagel : metylen- klorid/metanol 7,52). Lösningen hälles på 500 nl vatten extra- heras sedan med etylacetat. Den organiska fasen torkas över magnesiumsulfat. filtreras, koncentreras sedan under partiellt vakuum. Den så erhållna råa produkten kromatograferas på silikagelkolonn (H.P.L.C) under användning av elueringsmedlet : etylacetat (7)/hexan (3) för att leda till isoleringen av 39 g (77%) av en blandning av retinsyranonoestrar (all-trans) av linkomycin i ställningarna 2-. 3- och 7-ställning.

NH för l3C (CDCl3 intern referens T.H.S.).

- Negativa 1-effekter i 8-ställning (-2.5 ppm) och i 6-ställning (-3,8 ppm) anger läget för förestringen av en monoester i 7-ställning. - y-negativ effekt i l-ställning (-4 ppm) anger nonoestern i 2-ställning och de y-negativa effekterna i 2-ställning (-2 ppm) och 4-ställning (-2,6 ppm) anger läget för nonoestern i 3-ställning. Postíonerna för Cl är vid 85.06 ppm för mono- estern i 2-ställning vid 88,45 ppm för nonoestern i 7-ställ- Il 10 15 20 25 30 35 19 470 379 ning och vid 89.67 ppm för monoestern i 3-ställning.

Konfigurationen för all-trans-retinsyrakedjan anges för C"l4 vid ll7,78 ppm och för C"20 vid 14.08 ppm. Man noterar spår av isomerisering genom närvaron av en topp vid 115,2 ppm (C"l4), som anger 13-cis-isomeren.

Exempel 7 Framställning av blandningen av monoestrarna av 2-O-(all-trans- -retinyl)-klindamycin, 3-0-(all-trans-retinyl)-klindamycin och 4-0-(all-trans-retinyl)-klindamycin I en rundbottnad kolv under inert atmosfär löses 20 g (47 mmol) klindamycin i 250 ml vattenfri N.N-dimetylformamid. varefter 527 mg (4,7 mmol) kalium-t.-butylat sättes till reak- tionsmediumet, som sedan omröres vid rumstmeperatur under 90 minuter. Man häller sedan i en lösning av 8.250 g (23.5 mmol) av 1-(all-trans-retinyl)-imidazol i l50 ml vattenfri N,N-di- metylformamid och reaktionsmediumet omröres vid rumstemperatur under 12 timmar (kromatografi på tunnskikt av silikagel metylenklorid/metanol 5%). Lösningen hälles sedan på 500 ml vatten, extraheras sedan med etylacetat. Den organiska fasen torkas över magnesiumsulfat. torkas. koncentreras sedan under partiellt tryck. Den så erhållna råa produkten kromatograferas på silikagelkolonn (H.P.L.C) under användning av eluerings- medlet : etylacetat (5)/hexan (5) för att leda till isole- ringen av 28 g (85%) av en blandning av monoestrar av all- -trans-retinsyra och klindamycin i 2-, 3- och 4-ställningarna.

NHR för 30 (CDCl intern referens T.H.S.) l 3' - Y-negativ effekt i l-ställning (-3 ppm) anger läget för estern i 2-ställning. - 7-negativa effekter i 4-ställning (-2,8 ppm) och 2-ställ- ning (-1.9 ppm) anger monoestern i 3-ställning och låg 1-negativ effekt i 3-ställning anger monoestern i 4-stâll- ning. 10 15 20 25 30 35 470 379 zo Lägena för Cl är vid 84,63 ppm för monoestern i 2-ställning, vid 88,79 ppm för monoestern i 3-ställning och vid 87,98 ppm för monoestern i 4-ställning.

A11-trans-konfigurationen för retinsyrakedjan är huvudsakligen (C"l4 vid 117,5 ppm och C"2O vid 14,08 ppm) men spåren av ísomerisering är tydliga, isynnernet i C"2o och C"l¿.

Farmaceutíska och kosmetiska kompositioner A - Geler för topisk behandling av acne 1. Hydroxipropylcellulosa l g Butylhydroxitoluen 0,05 g 3-0-(13-cis-retinyl)-linkomycin 0,5 g Isopropanol g.s.p. 100 g 2. Hydroxipropylcellulosa 1,5 g Butylhydroxitoluen 0.05 g 0-(all-trans-retinyl)-klindamycin 0,3 g Isopropanol g.s.p. 100 g B - Lotions för topisk behandling av acne 1. Butylhydroxitoluen 0,05 g 2'-0-(all-trans-retinyl)-erytromycin A 1 g Fettsyratriglycerider med C8-C12 q.s.p. 100 g I detta exempel kan den aktiva föreningen ersättas med samma mängd av 2'-O-(13-cis-retinyl)-erytromycin A. 2. Butylhydroxitoluen 0.05 g 3-0-(13-cis-retínyl)-klindamycin 0,7 g Dimetyleter av polytetrahydrofuran (viskositet 22 Cpo) med formeln CH30-[(CH2)2-CH2-CH2-Oln-CH3 g.s.p 100 g I: 10 15 20 25 30 35 21 C - Stift för topisk behandling av acne 470 579 Vit vaselin 52 9 Vaselinolja 15 g Raffinerad paraffín 32 g 2'-0-(all-trans-retinyl)-erytromycin A l g D - Suppositorie (komposition för en enhet 2'-0-(all-trans-retinyl)-erytromycín A 0.05 g Fettsyratriglycerider C8-C12 0.25 g Halvsyntetiska glyceríder g.s.p. 2 g E - Kapsel innehållande 500 mg Väggarna í kapslarna utgöres av glycerin. sorbitol och gelatin. l. Kapsel med 50 mg aktiv substans 2'-O-(13-cis-retinyl)-erytromycin A 50 Flytande vaselinolja 200 Förtjockad vaselinolja 250 2. Kapsel med 10 mg aktiv substans 2'-O-(l3-cis~retiny1)-erytromycin A 10 Butylhydroxiaminos Butylhydroxitoluen Glyceroltribehenat 100 Fettsyratriglycerider med C8-C12 q.s.p. 500 F - Kapslar Kapslarnas väggar utgöres av gelatin och titanbioxid. 0. 0. m9 m9 m9 m9 os os m9 m9 2'-0-(all-trans-retinyl)-erytromycín A 20 mg Kolloidalt kísel 3 M9 Hagnesiumstearat 2 mg Majsstärkelse 76 mg Laktos g.s.p. 250 mg m9 m9

Claims

4\ ~q co CN sd un 22 Patentkrav

1. All-trans- eller 13-cis-retinsyraestrar av ett antibiotika valt bland erytromycin A, linkomycin och klindamycin, varvid esternanrerytromycin A är monoestern i 2'-ställningen, estern av linkomycin är mono-, di-, tri- eller kvadriestern i 2-, 3¶ 4- och/eller 7-ställningarna och estern av klindamycin är mono-, di- eller triestern i 2-, 3- eller 4-ställningarna eller ett salt eller blandningar av dessa.

2. Föreningar enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a d e av att de väljs från den grupp, som utgöres av: 2'-0-(all-trans-retinyl)-erytromycin A 2'O-(13-cis-retinyl)-erytromycin A 3-O-(13-cis-retinyl)-linkomycin 3-O-(all-trans-retinyl)-klindamycin och 3-O-(13-cis-retinyl)-klindamycin.

3. Föreningar enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a d e av att de utgöres av: 7-O-(all-trans-retinyl)-linkomycin 3-0-(all-trans-retinyl)-linkomycin 2-0-(all-trans-retinyl)-linkomycin 2-O-(all-trans-retinyl)-klindamycin 3-O-(all-trans-retinyl)-klindamycin 4-0-(all-trans-retinyl)-klindamycin.

4. Förfarande för framställning av all-trans- eller l3-cis- retinsyraestrar av erytromycin A, linkomycin och klindamycin enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a t av att det består i att i ett vattenfritt organiskt lösningsmedelsmedium om- sätta ett överskott av en blandad anhydrid av all-trans- eller 13-cis-retinsyra med erytromycin A, linkomycin eller klindamycin i form av bas i närvaro av en organisk eller oorganisk bas. 1,! *Cl CIS CN Nq \O 23 4-

5. Förfarande för framställning av all-trans- och l3-cis- retinsyraestrar av linkomycin och klindamycin enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a t av att det består i att i ett vattenfritt lösningsmedel i närvaro av en bas omsätta en imidazolid av all-trans- eller 13-cis-retinsyra med linko- mycin eller klindamycin i form av bas.

6.Farmaceutisk eller kosmetisk komposition för behandling av olika dermatoser, i synnerhet acne, k ä n n e t e c k- n a d av att den i en vattenfri vehikel såsom aktiv substans innehåller en all-trans- eller 13-cis-retinsyraester av ett antibiotikum vald från erytromycin A, linkomycin och klinda- mycin, varvid estern av erytromycin A är monoestern i 2'- ställning, estern av linkomycin är mono-, di-, tri- eller kvadriestern i 2-, 3-, 4- och/eller 7-ställningarna och estern av klindamycin är mono-, di- eller triestern i 2-, 3- eller 4-ställningarna eller ett salt eller blandningar av dessa enligt något av kraven 1-3.

7. Komposition enligt krav 6, k ä n n e t e c k n a d av att den innehåller från 0,01 till 10 vikt-% och företrädesvis från 0,05 till l vikt-% aktiv substans.

8. Komposition enligt något av kraven 6 och 7, k ä n n e - t e c k n a d av att vehikeln är aceton, isopropylalkohol, fettsyratriglycerider, glykoletrar, alkyl-Cl-C4-estrar av syror med kort kedja, polytetrahydrofuranetrar och bland- ningar därav.

9. Komposition enligt något av kraven 6-8, k ä n n e - t e c k n a d av att den dessutom innehåller ett förtjock- ande medel såsom cellulosa och/eller cellulosaderivat i en proportion från 0,5 till 20 vikt-% i förhållande till kom- positionens totala vikt.