SA519410842B1 - نكليوتيدات مُعلَّمة واستخداماتها - Google Patents
نكليوتيدات مُعلَّمة واستخداماتها Download PDFInfo
- Publication number
- SA519410842B1 SA519410842B1 SA519410842A SA519410842A SA519410842B1 SA 519410842 B1 SA519410842 B1 SA 519410842B1 SA 519410842 A SA519410842 A SA 519410842A SA 519410842 A SA519410842 A SA 519410842A SA 519410842 B1 SA519410842 B1 SA 519410842B1
- Authority
- SA
- Saudi Arabia
- Prior art keywords
- nucleotide
- redox
- conductive channel
- nucleotides
- electrically conductive
- Prior art date
Links
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 title claims abstract description 338
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 title claims abstract description 337
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims abstract description 21
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 claims abstract description 18
- 238000006479 redox reaction Methods 0.000 claims description 94
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 54
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 claims description 40
- 238000009739 binding Methods 0.000 claims description 34
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 34
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 34
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 33
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 claims description 28
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 27
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 claims description 23
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 20
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 claims description 20
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 20
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 17
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 claims description 14
- 108091093037 Peptide nucleic acid Chemical group 0.000 claims description 13
- 229920000388 Polyphosphate Polymers 0.000 claims description 12
- 239000001205 polyphosphate Substances 0.000 claims description 12
- 235000011176 polyphosphates Nutrition 0.000 claims description 12
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical group OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 230000005669 field effect Effects 0.000 claims description 11
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 9
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 9
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 9
- VTJUKNSKBAOEHE-UHFFFAOYSA-N calixarene Chemical compound COC(=O)COC1=C(CC=2C(=C(CC=3C(=C(C4)C=C(C=3)C(C)(C)C)OCC(=O)OC)C=C(C=2)C(C)(C)C)OCC(=O)OC)C=C(C(C)(C)C)C=C1CC1=C(OCC(=O)OC)C4=CC(C(C)(C)C)=C1 VTJUKNSKBAOEHE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 8
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 8
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 8
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 8
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 7
- 150000003852 triazoles Chemical class 0.000 claims description 7
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 claims description 6
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 claims description 6
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 claims description 6
- 229910052707 ruthenium Inorganic materials 0.000 claims description 6
- KJTLSVCANCCWHF-UHFFFAOYSA-N Ruthenium Chemical compound [Ru] KJTLSVCANCCWHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000011701 zinc Substances 0.000 claims description 5
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims description 4
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 claims description 4
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 claims description 4
- YKBGVTZYEHREMT-KVQBGUIXSA-N 2'-deoxyguanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)O1 YKBGVTZYEHREMT-KVQBGUIXSA-N 0.000 claims description 3
- GZEFZLXJPGMRSP-UHFFFAOYSA-N 37,38,39,40-tetrazanonacyclo[28.6.1.13,10.112,19.121,28.04,9.013,18.022,27.031,36]tetraconta-1(37),2,4,6,8,10,12(39),13,15,17,19,21,23,25,27,29,31,33,35-nonadecaene Chemical compound c1ccc2c3cc4[nH]c(cc5nc(cc6[nH]c(cc(n3)c2c1)c1ccccc61)c1ccccc51)c1ccccc41 GZEFZLXJPGMRSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 3
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 claims description 3
- CKTSBUTUHBMZGZ-SHYZEUOFSA-N 2'‐deoxycytidine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 CKTSBUTUHBMZGZ-SHYZEUOFSA-N 0.000 claims description 2
- CKTSBUTUHBMZGZ-UHFFFAOYSA-N Deoxycytidine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1C1OC(CO)C(O)C1 CKTSBUTUHBMZGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 2
- MPMSMUBQXQALQI-UHFFFAOYSA-N cobalt phthalocyanine Chemical compound [Co+2].C12=CC=CC=C2C(N=C2[N-]C(C3=CC=CC=C32)=N2)=NC1=NC([C]1C=CC=CC1=1)=NC=1N=C1[C]3C=CC=CC3=C2[N-]1 MPMSMUBQXQALQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- WWXKNUYLTWOLJS-UHFFFAOYSA-N cyclopenta-1,3-diene (4-cyclopenta-2,4-dien-1-ylphenyl)methanol iron(2+) Chemical compound [Fe++].c1cc[cH-]c1.OCc1ccc(cc1)-[c-]1cccc1 WWXKNUYLTWOLJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 241000511343 Chondrostoma nasus Species 0.000 claims 1
- 101100257999 Danio rerio stambpa gene Proteins 0.000 claims 1
- 235000008247 Echinochloa frumentacea Nutrition 0.000 claims 1
- 102100026933 Myelin-associated neurite-outgrowth inhibitor Human genes 0.000 claims 1
- 240000004072 Panicum sumatrense Species 0.000 claims 1
- DYAHQFWOVKZOOW-UHFFFAOYSA-N Sarin Chemical compound CC(C)OP(C)(F)=O DYAHQFWOVKZOOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 150000002085 enols Chemical class 0.000 claims 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims 1
- 235000008001 rakum palm Nutrition 0.000 claims 1
- 101150076714 stambp gene Proteins 0.000 claims 1
- 239000011800 void material Substances 0.000 claims 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 25
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 25
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 17
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 14
- -1 nucleotide phosphates Chemical class 0.000 description 13
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 13
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 11
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 10
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 10
- UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N triphosphoric acid Chemical compound OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 8
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 8
- 239000002086 nanomaterial Substances 0.000 description 8
- 239000002070 nanowire Substances 0.000 description 8
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 8
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 6
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 6
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 6
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 6
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 5
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 5
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 4
- 229910021389 graphene Inorganic materials 0.000 description 4
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 4
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 230000027756 respiratory electron transport chain Effects 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- 235000007319 Avena orientalis Nutrition 0.000 description 3
- 244000075850 Avena orientalis Species 0.000 description 3
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 description 3
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 3
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 3
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 229920001940 conductive polymer Polymers 0.000 description 3
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- KTWOOEGAPBSYNW-UHFFFAOYSA-N ferrocene Chemical compound [Fe+2].C=1C=C[CH-]C=1.C=1C=C[CH-]C=1 KTWOOEGAPBSYNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 3
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- IEQIEDJGQAUEQZ-UHFFFAOYSA-N phthalocyanine Chemical compound N1C(N=C2C3=CC=CC=C3C(N=C3C4=CC=CC=C4C(=N4)N3)=N2)=C(C=CC=C2)C2=C1N=C1C2=CC=CC=C2C4=N1 IEQIEDJGQAUEQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 238000004557 single molecule detection Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 3
- ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 2-deoxy-D-ribose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)CC=O ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- DMULVCHRPCFFGV-UHFFFAOYSA-N N,N-dimethyltryptamine Chemical compound C1=CC=C2C(CCN(C)C)=CNC2=C1 DMULVCHRPCFFGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 2
- 241000255588 Tephritidae Species 0.000 description 2
- RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N Titanium Chemical compound [Ti] RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000015107 ale Nutrition 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 239000002041 carbon nanotube Substances 0.000 description 2
- 229910021393 carbon nanotube Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 2
- 239000004020 conductor Substances 0.000 description 2
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 2
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 2
- SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N dATP Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 2
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 229920001600 hydrophobic polymer Polymers 0.000 description 2
- RHZWSUVWRRXEJF-UHFFFAOYSA-N indium tin Chemical compound [In].[Sn] RHZWSUVWRRXEJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002074 nanoribbon Substances 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 239000004065 semiconductor Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 2
- 230000008866 synergistic binding Effects 0.000 description 2
- 239000010936 titanium Substances 0.000 description 2
- 229910052719 titanium Inorganic materials 0.000 description 2
- CHEANNSDVJOIBS-MHZLTWQESA-N (3s)-3-cyclopropyl-3-[3-[[3-(5,5-dimethylcyclopenten-1-yl)-4-(2-fluoro-5-methoxyphenyl)phenyl]methoxy]phenyl]propanoic acid Chemical compound COC1=CC=C(F)C(C=2C(=CC(COC=3C=C(C=CC=3)[C@@H](CC(O)=O)C3CC3)=CC=2)C=2C(CCC=2)(C)C)=C1 CHEANNSDVJOIBS-MHZLTWQESA-N 0.000 description 1
- GKWLILHTTGWKLQ-UHFFFAOYSA-N 2,3-dihydrothieno[3,4-b][1,4]dioxine Chemical compound O1CCOC2=CSC=C21 GKWLILHTTGWKLQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UZVMVUUAAXJDIL-UHFFFAOYSA-N 37,38,39,40-tetrazanonacyclo[28.6.1.13,10.112,19.121,28.04,9.013,18.022,27.031,36]tetraconta-1(37),2,4,6,8,10,12(39),13,15,17,19,21,23,25,27,29,31,33,35-nonadecaene zinc Chemical compound [Zn].N1C(C=C2C3=CC=CC=C3C(C=C3C4=CC=CC=C4C(=C4)N3)=N2)=C(C=CC=C2)C2=C1C=C1C2=CC=CC=C2C4=N1 UZVMVUUAAXJDIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000256844 Apis mellifera Species 0.000 description 1
- 241000219195 Arabidopsis thaliana Species 0.000 description 1
- 241000239290 Araneae Species 0.000 description 1
- ROFVEXUMMXZLPA-UHFFFAOYSA-N Bipyridyl Chemical compound N1=CC=CC=C1C1=CC=CC=N1 ROFVEXUMMXZLPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000258971 Brachiopoda Species 0.000 description 1
- 235000014698 Brassica juncea var multisecta Nutrition 0.000 description 1
- 235000006008 Brassica napus var napus Nutrition 0.000 description 1
- 240000000385 Brassica napus var. napus Species 0.000 description 1
- 235000006618 Brassica rapa subsp oleifera Nutrition 0.000 description 1
- 235000004977 Brassica sinapistrum Nutrition 0.000 description 1
- 101150003532 CSH gene Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 240000008574 Capsicum frutescens Species 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 241000195585 Chlamydomonas Species 0.000 description 1
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- 108020001019 DNA Primers Proteins 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 241000252212 Danio rerio Species 0.000 description 1
- 241000255925 Diptera Species 0.000 description 1
- 241001115402 Ebolavirus Species 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 101001050288 Homo sapiens Transcription factor Jun Proteins 0.000 description 1
- 240000008415 Lactuca sativa Species 0.000 description 1
- 241000270322 Lepidosauria Species 0.000 description 1
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001599018 Melanogaster Species 0.000 description 1
- ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N Molybdenum Chemical compound [Mo] ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100490488 Mus musculus Add3 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000202934 Mycoplasma pneumoniae Species 0.000 description 1
- NCIKQJBVUNUXLW-UHFFFAOYSA-N N-methyltryptamine Chemical compound C1=CC=C2C(CCNC)=CNC2=C1 NCIKQJBVUNUXLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 241000223960 Plasmodium falciparum Species 0.000 description 1
- 241000233872 Pneumocystis carinii Species 0.000 description 1
- 229920001609 Poly(3,4-ethylenedioxythiophene) Polymers 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 238000003559 RNA-seq method Methods 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 101150107869 Sarg gene Proteins 0.000 description 1
- 241000235347 Schizosaccharomyces pombe Species 0.000 description 1
- 241000295644 Staphylococcaceae Species 0.000 description 1
- 241000282890 Sus Species 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 241001441722 Takifugu rubripes Species 0.000 description 1
- 241000532784 Thelia <leafhopper> Species 0.000 description 1
- 102100023132 Transcription factor Jun Human genes 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 244000098338 Triticum aestivum Species 0.000 description 1
- 241000269368 Xenopus laevis Species 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- SGSXWFDMRKAVLS-UHFFFAOYSA-N [6'-acetyloxy-5-[3-[3-[4-(1-methylindol-3-yl)-2,5-dioxopyrrol-3-yl]indol-1-yl]propylcarbamoyl]-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-3'-yl] acetate Chemical compound C1=C(C=2C(NC(=O)C=2C=2C3=CC=CC=C3N(C)C=2)=O)C2=CC=CC=C2N1CCCNC(=O)C(C=C1C(=O)O2)=CC=C1C12C2=CC=C(OC(C)=O)C=C2OC2=CC(OC(=O)C)=CC=C12 SGSXWFDMRKAVLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 238000005054 agglomeration Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- QTPILKSJIOLICA-UHFFFAOYSA-N bis[hydroxy(phosphonooxy)phosphoryl] hydrogen phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O QTPILKSJIOLICA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 238000001311 chemical methods and process Methods 0.000 description 1
- 239000002322 conducting polymer Substances 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000007596 consolidation process Methods 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- PORCMJJTZXANLJ-UHFFFAOYSA-N cyclopenta-1,3-diene iron(2+) Chemical compound [Fe++].[Fe++].c1cc[cH-]c1.c1cc[cH-]c1.c1cc[cH-]c1.c1cc[cH-]c1 PORCMJJTZXANLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N dATP Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1CC(O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-N dCTP Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](CO[P@](O)(=O)O[P@](O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)C1 RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-N 0.000 description 1
- HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N dGTP Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N 0.000 description 1
- NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N dTTP Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)C1 NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005684 electric field Effects 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 1
- 230000004992 fission Effects 0.000 description 1
- 238000001917 fluorescence detection Methods 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 description 1
- 229910021397 glassy carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 238000009499 grossing Methods 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical group I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 229910052738 indium Inorganic materials 0.000 description 1
- APFVFJFRJDLVQX-UHFFFAOYSA-N indium atom Chemical compound [In] APFVFJFRJDLVQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AMGQUBHHOARCQH-UHFFFAOYSA-N indium;oxotin Chemical compound [In].[Sn]=O AMGQUBHHOARCQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011147 inorganic material Substances 0.000 description 1
- 150000002605 large molecules Chemical class 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 229910052750 molybdenum Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011733 molybdenum Substances 0.000 description 1
- 239000002071 nanotube Substances 0.000 description 1
- 238000002663 nebulization Methods 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- RUFLMLWJRZAWLJ-UHFFFAOYSA-N nickel silicide Chemical compound [Ni]=[Si]=[Ni] RUFLMLWJRZAWLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910021334 nickel silicide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000011368 organic material Substances 0.000 description 1
- 150000002902 organometallic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920000767 polyaniline Polymers 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Chemical group 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Chemical group 0.000 description 1
- 229920000123 polythiophene Polymers 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000005096 rolling process Methods 0.000 description 1
- 235000012045 salad Nutrition 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 230000011218 segmentation Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 229910021428 silicene Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910021332 silicide Inorganic materials 0.000 description 1
- FVBUAEGBCNSCDD-UHFFFAOYSA-N silicide(4-) Chemical compound [Si-4] FVBUAEGBCNSCDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 239000002109 single walled nanotube Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 1
- 125000002264 triphosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])O* 0.000 description 1
- WFKWXMTUELFFGS-UHFFFAOYSA-N tungsten Chemical compound [W] WFKWXMTUELFFGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052721 tungsten Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010937 tungsten Substances 0.000 description 1
- 230000005641 tunneling Effects 0.000 description 1
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6869—Methods for sequencing
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
- C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
- C07H19/16—Purine radicals
- C07H19/20—Purine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
- B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
- B01L3/502—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
- C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
- C07H19/06—Pyrimidine radicals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
- C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
- C07H19/06—Pyrimidine radicals
- C07H19/10—Pyrimidine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/6851—Quantitative amplification
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/28—Electrolytic cell components
- G01N27/30—Electrodes, e.g. test electrodes; Half-cells
- G01N27/327—Biochemical electrodes, e.g. electrical or mechanical details for in vitro measurements
- G01N27/3275—Sensing specific biomolecules, e.g. nucleic acid strands, based on an electrode surface reaction
- G01N27/3277—Sensing specific biomolecules, e.g. nucleic acid strands, based on an electrode surface reaction being a redox reaction, e.g. detection by cyclic voltammetry
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/483—Physical analysis of biological material
- G01N33/487—Physical analysis of biological material of liquid biological material
- G01N33/48707—Physical analysis of biological material of liquid biological material by electrical means
- G01N33/48721—Investigating individual macromolecules, e.g. by translocation through nanopores
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2300/00—Additional constructional details
- B01L2300/06—Auxiliary integrated devices, integrated components
- B01L2300/0627—Sensor or part of a sensor is integrated
- B01L2300/0663—Whole sensors
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2300/00—Additional constructional details
- B01L2300/12—Specific details about materials
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
- Hematology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Nanotechnology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Electrochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Clinical Laboratory Science (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
يتعلق الاختراع الحالي بالنكليوتيد المُعلَّم labeled nucleotide الذي يشتمل على نيوكليوتيد nucleotide، وجزيء ربط متصل linking molecule بمجموعة فوسفات phosphate من النوكليوتيدات، وعلامة شحنة نشطة لتفاعل اختزال وأكسدة redox-active charge tag متصلة بجزيء الربط. يجب أن تتأكسد أو تختزل علامة شحنة تفاعل الاختزال والأكسدة النشطة بواسطة قناة موصلة كهربائياً electrically conductive channel عندما يتم الحفاظ عليها بالقرب من منطقة الاستشعار sensing zone للقناة الموصلة كهربائيًا. شكل3
Description
نكليوتيدات مُعلّمة واستخداماتها LABELED NUCLEOTIDES AND USES THEREOF الوصف الكامل خلفية الاختراع تتضمن البروتوكولات المختلفة في البحوث البيولوجية أو الكيميائية إجراء عدد كبير من التفاعلات الخاضعة للرقابة على أسطح الدعم المحلية أو داخل غرف التفاعل reaction chambers المحددة مسبقًا. يمكن عندئذ ملاحظة التفاعلات المعينة أو اكتشافها وقد يساعد التحليل اللاحق في تحديد أو الكشضف عن خواص المواد الكيميائية المشاركة في التفاعل. في بعض الأمثلة؛ تولد التفاعلات الخاضعة للرقابة وميضاًء وبالتالي يمكن استخدام نظام ضوئي optical system في عملية الكشف. وفي بعض الأمثلة gal تعمل التفاعلات الخاضعة للرقابة على تغيير الشحنة أو الموصلية أو بعض الخصائص الكهربائية الأخرى » وبالتالي يمكن استخدام نظام إلكتروني electronic system في عملية الكشف. 0 يصف طلب براءة الاختراع الأمريكية رقم: 2009170716 طرق Jul il الأحماض النووية nucleic acids من خلال اكتشضاف نوع نشط للأخسدة redox يشير إلى دمج النوكليوتيد .nucleotide يصف طلب براءة الاختراع الأمريكية رقم: 2002039738 مركبات» طرق وأنظمة لتسلسل حمض نووي باستخدام اكتشضاف جزيء واحد باستخدام فوسفاتات نوكليوتيد معلمة labelled nucleotide phosphates 5 تُظهر تبديل الشحنة. يتم اكتشاف منتجات التسلسل لتمكين التسلسل في الوقت الفعلي كتدفق أشطر متوالية قابلة للإكتشاف خلال قناة اكتشاف .detection channel الوصف العام للاختراع الجانب الأول الذي تم الكخف die هنا هو النكليوتيدات المُعلّمة. تتعلق الأرقام من 1 إلى 6 بهذا الجانب الأول. 0 1. في مثال؛ يشتمل النوكليوتيد المُعلّم على نيوكليوتيد ¢nucleotide جزيء ربط متصل linking molecule بمجموعة فوسفات phosphate من النوكليوتيدات؛ وعلامة da Gol) La Gl) لتفاعل الاختزال والأكسدة redox-active charge tag المرتبطة بجزيء الريط؛ تتم أكسدة أو اختزال علامة
الشحنة النشطة لتفاعل الاختزال والأكسدة بواسطة قناة موصلة electrically conductive Lb gS channel عند الاحتفاظ بها بالقرب من منطقة استشعار sensing zone للقناة الموصلة كهربائياً. 2. في المثال )1( للنيوكليوتيد المُعلّم» تتضمن علامة الشحنة النشطة لتفاعل الاختزال والأكسدة ذرة فلز منسق coordinated metal atom تكون خاضعة تفاعل اختزال مؤكسد redox reaction 3. في المثال (1) أو (2) للنيوكليوتيد المُعلّم» يشتمل جزيء الريط على منطقة خصوصية متصلة بعلامة شحن الاختزال المؤكسد النشطة. 4 في المثال (3)؛ تتفاعل منطقة الخصوصية مع منطقة مستقبلة على حبل مرتبط بالقناة الموصلة (Giles وتشمل منطقة الخصوصية علامة تقارب tag جانصتاكة. 5. في المثال (4)» يتم تهجين منطقة الخصوصية مع المنطقة المستقبلة acceptor region على 0 الحبل المرتبط بالقناة الموصلة كهربائيًا» وتتضمن علامة التقارب affinity tag متوالية النيوكليوتيدات nucleotide sequence بما في ذلك من حوالي نيوكليوتيد واحد إلى حوالي Bde نيوكليوتيدات nucleotides أو متوالية حمض نووي ببتيدي La peptide nucleic acid sequence في ذلك من حوالي حمض نووي ببتيدي peptide nucleic acid واحد إلى حوالي عشرة أحماض نووية ببتيدية -peptide nucleic acids 6. في أي من الأمثلة )1( إلى )5( من النوكليوتيد clad) تتضمن علامة شحنة تفاعل الاختزال والأكسدة النشطة 10 شحنات أو أقل في Alla غير مؤكسدة أو غير مختزلة؛ وتتضمن علامة شحنة تفاعل الاختزال والأكسدة النشطة من حوالي 1 شحنة إلى حوالي 100 شحنة في حالة مؤكسدة أو مختزلة. من المفهوم أن أي ميزات للنيوكليوتيد المُعلَّم التي تم الكخف عنها هناء بما في ذلك الأمثلة من 0 (1) إلى (6)»؛ يمكن دمجها bie بأي طريقة و / أو تكوين مرغوب فيه. الجانب الثاني الذي تم الكف aie هنا هو الطريقة. وتتعلق الأرقام من 7 إلى 18 بهذا الجانب الثاني. 7. في مثال» تشتمل الطريقة على إدخال قالب حمض نووي template nucleic acid لقناة موصلة كهربائيًا ذات بوليميريز polymerase مرتبط بها؛ إدخال النيوكليوتيدات المُعلّمة labeled nucleotides 5 إلى القناة الموصلة كهربائيًا؛ واحدًا على الأقل من النيوكليوتيدات المُعلّمة؛ بما في ذلك النيوكليوتيدات وعلامة الشحن النشطة لتفاعل الاختزال والأكسدة المرتبطة بهاء حيث يرتبط
أحد النيوكليوتيدات المُعلّمة بالبوليميريز ¢polymerase بينما يرتبط أحد النيوكليوتيدات المُعلّمة؛ fol تفاعل الاختزال والأكسدة بين علامة الشحنة النشطة لتفاعل الاختزال والأكسدة الخاصة بالنيوكليوتيد والقناة الموصلة كهربائياً لتغيير حالة الشحن لعلامة الشحنة dda dal) لتفاعل الاختزال والأكسدة الخاصة بالنوكليوتيدات؛ واستجابة لتفاعل الاختزال المؤكسد؛ الكشف عن استجابة القناة الموصلة كهربائيا. 8. في المثال (7) من الطريقة؛ ينطوي بدء تفاعل الاختزال والأكسدة على تطبيق جهد Cad charging voltage على القناة الموصلة كهربائيًا؛ والكشف عن استجابة قناة موصل كهربائيا ينطوي على تطبيق جهد القراءة reading voltage على قناة موصل Lil eS 9. يشتمل مثال على الطريقة (7) أو (8) Laid على ربط استجابة القناة الموصلة كهربائيًا مع 0 علامة شحنة تفاعل الاختزال والأكسدة الخاصة بالنيوكليوتيد للواحدة المرتبطة بالنيوكليوتيدات المعلّمة؛ واعتمادًا على علامة شحنة تفاعل الاختزال والأكسدة النشطة الخاصة بالنيوكليوتيدات؛ تحديد النوكليوتيد للنيوكليوتيد المصاحب المعلّم. 0. على سبيل المثال؛ قد يشتمل المثال (9) أيضًا على شطر علامة شحنة الاختزال المؤكسد من النوكليوتيدات المعلمّة المرتبطة بهاء حيث يتم دمج النكليوتيد في النوكليوتيدات المعلّمة المصاحبة 5 في حبل ناشئ مكمل لقالب الحمض النووي. 1. في المثال )10( اقتران واحد من النيوكليوتيدات sag cabal تفاعل الاختزال المؤكسد redox reaction والكشف» والريط والتعرف تتم جميعها في دورة تسلسلية؛ وتشتمل الطريقة Lia على إجراء دورة تسلسلية تالية من خلال السماح للنيوكليوتيد المعلم التالي بالارتباط بالبوليميراز ؛ في حين يرتبط النيوكليوتيد Abell التالي» يبدا تفاعل اختزال وأكسدة آخر بين علامة شحنة أخرى 0 تفاعل اختزال وأكسدة مرتبطة بالنيوكليوتيدات وقناة موصلة كهربائياً لتغيير حالة شحن من لعلامة شحنة تفاعل اختزال وأكسدة أخرى مرتبطة بالنوكليوتيدات؛ استجابة لتفاعل اختزال وأكسدة آخرء اكتشاف استجابة أخرى للقناة الموصلة كهربائيًا؛ ريط الاستجابة الأخرى للقناة الموصلة كهربائياً بعلامة شحنة الاختزال المؤكسد الخاصة بالنيوكليوتيد؛ واستناداً إلى علامة شحنة الاختزال المؤكسد النشطة الأخرى الخاصة بالنيوكليوتيدات»؛ تحدد النيوكليوتيد من النيوكليوتيدات المعلمة التالية.
2. قد يشتمل المثال (11) أيضًا على شطر علامة شحنة الاختزال المؤكسد الخاص بالنيوكليوتيد في النوكليوتيدات التالية المُعلّمة» حيث يتم دمج النوكليوتيدات في النكليوتيدات التالية في حبل مكمل لقالب الحمض النووي ¢template nucleic acid وتكرار دورة التسلمسل .sequencing cycle 3. في أي من الأمثلة من (7) إلى (12) من الطريقة؛ تتضمن علامة شضحنة تفاعل الاختزال والأكسدة النشطة ذرة فلزية منسقة تخضع لتفاعل اختزال مؤكسد. 4. في أي من الأمثلة (7) إلى (13) من الطريقة؛ تتضمن علامة شحنة Jeli الاختزال والأكسدة النشطة 10 شحنات أو أقل في حالة غير مؤكسدة أو غير مختزلة؛ وتتضمن علامة شحنة الاختزال المؤكسد النشطة من حوالي شحنة واحدة إلى حوالي 100 شحنة في حالة تغير الشحنة. 5. في أي من ABI من (7) إلى (14) من الطريقة؛ تشتمل النيوكليوتيدات Addl) على 0 ثنيوكليوتيدات مُعلّمة أولى بما في ذلك ديوكسي نادينوسين متعدد الفوسفات deoxyadenosine polyphosphate باعتباره نيوكليوتيد وعلامة شحنة أولى لاختزال وأكسدة محددة بالنيوكليوتيدات؛ نكليوتيدات ثانية La Lalas في ذلك الديوكسيجوانوزين متعدد الفوسفات deoxyguanosine polyphosphate باعتباره نوكليوتيد وعلامة شضحتة ثانية لاختزال وأكسدة محددة بالنيوكليوتيدات؛ ونيوكليوتيدات ثالثة Lo Lalas في ذلك البوليغوسفات ديوكس_يسييتيدين deoxycytidine polyphosphate 5 على أنها النوكليوتيدات وعلامة شضحنة ثالثة لاختزال وأكسدة محددة بالنيوكليوتيدات؛ ونيوكليوتيدات رابعة Lay Balas في ذلك الديوكسيثيميدين متعدد الفوسفات deoxythymidine polyphosphate باعتبارها نيوكليوتيد وعلامة شحنة نشطة رابعة لتفاعل الاختزال والأكسدة الخاصة بالنيوكليوتيدات؛ وعلامات الشحنة الأولى والثانية والثالثة والرابعة لتفاعل الاختزال والأكسدة الخاصة بالنيوكليوتيد تختلف عن بعضها البعض. 0 16. في المثال (15)؛ يتم شحن اثنتين من علامات الشحن النشطة لتفاعل الاختزال والأكسدة الأولى» والثانية؛ والثالثة والرابعة الخاصة بالنيوكليوتيد بشحنة موجبة في Alls تعديل الشحنة؛ واثنتين أخرتين من lle الشحن النشطة لتفاعل الاختزال والأكسدة الأولى والثانية؛ والثالثة؛ والرابعة الخاصة بالنيوكليوتيد بشحنة سالبة في حالة تعديل الشحنة. 7. في أي من الأمثلة (7) إلى (16) من الطريقة؛ توجد النيوكليوتيدات المُعلّمة في محلول منظم 5 منتخفض الملح Jow salt buffer
8. في أي من الأمثلة (7) إلى (17) من الطريقة؛ تكون القناة الموصلة كهربائياً هي قناة ترانزستور متأثر بالمجال field effect transistor من المفهوم أن أي ميزات للطريقة؛ بما في ذلك الأمثلة (7) إلى (17)؛ يمكن دمجها Bie بأي شكل. وعلاوة على ذلك؛ من المفهوم أن أي مجموعة من ميزات هذه الطريقة و / أو النكليوتيدات المْعلّمة يمكن استخدامها lie و / أو دمجها مع أي من الأمثلة التي تم الكشف عنها هنا. الجانب الثالث الذي تم الكشف die هنا هو مجموعة. الأرقام من 19 إلى 22 تتعلق بهذا الجانب الثالث. 9. في أحد Jai lia) المجموعة على خلية تدفق eflow cell بما في ذلك قناة موصلة كهربائياً لها dos متصل بها ويوليميريز polymerase متصل يالقناة الموصلة كهريائيًا عبر الحبل؛ 0 قالب حمض نووي لإدخاله في خلية التدفق؛ الكواشف التي سيتم إدخالها في خلية التدفق؛ الكواشف reagents بما في ذلك النيوكليوتيدات المُعلّمة؛ واحد على الأقل من النيوكليوتيدات Label بما في ذلك: النيوكليوتيدات؛ جزيء ربط متصل بمجموعة فوسفات phosphate من النوكليوتيدات؛ وعلامة dis الاختزال المؤكسد النشطة المرتبطة بجزيء call تكون شحنة الاختزال المؤكسد النشطة مؤكسدة أو مختزلة بواسطة القناة الموصلة كهربائياً عندما يتم الحفاظ عليها بالقرب من منطقة 5 استشعار للقناة الموصلة كهربائياً؛ وكاشف للكشف عن استجابة من القناة الموصلة كهربائياً عندما يحدث تفاعل الاختزال والأكسدة بين علامة شحنة الاختزال المؤكسد النشط والقناة الموصلة كهربائيًا. 0. في المثال (19) من المجموعة؛ يتم تحديد علامة شحنة تفاعل الاختزال والأكسدة النشطة من المجموعة التي تتكون من الفيروسين ferrocene الزنك تترا بينزو برفيرين zine ctetrabenzoporphyrin 0 الكويالت فتالوسيانين cobalt phthalocyanine تريس )2¢2"— باي بيريدين) روتينيوم ctris-(2,2"-bipyrimidine)ruthenium 4- كحول الفيروزين بنزيل -4 cferrocenylbenzyl alcohol 5- (4-هيدروكسي ميثيل فينيل) -10 » 15 »20 -تراي ميسيتيل بورفيناتوزينك «5-(4-hydroxymethylphenyl)-10,15,20-trimesitylporphinatozinc(Il) (II) وكالكسارين نشط لتفاعل الاختزال والأكسدة .redox-active calixarene 5 21. في أي من الأمثلة )19( أو (20) من المجموعة؛ تنتمل علامة شحنة تفاعل الاختزال والأكسدة النشطة على 10 شحنات أو أقل في حالة غير مؤكسدة أو غير مختزلة؛ وتتضمن علامة
شحنة تفاعل الاختزال والأكسدة النشطة من حوالي 1 شحنة إلى حوالي 100 شحنة في حالة مؤكسدة أو مختزلة. 2. في أي من الأمثلة (19) إلى (21) من المجموعة؛ تكون القناة الموصلة كهربائياً هي قناة ترانزستور متأثر بالمجال.
من المفهوم أن أي ميزات لهذه المجموعة؛ Loy في ذلك الأمثلة (19) إلى (22)؛ يمكن دمجها le بأي طريقة مرغوية. علاوة على ذلك» من المفهوم أن أي مجموعة من ميزات هذه المجموعة و / أو الطريقة و / أو النكليوتيد dal) يمكن استخدامها معًا و / أو دمجها مع أي من الأمثلة التي تم الكشف عنها هنا. علاوة على ذلك؛ من المفهوم أن أي ميزات لأي من النيوكليوتيدات المُعلّمة و / أو أي من الطرق
0 و / أو أي من هذه المجموعات قد يتم دمجها Lie بأي طريقة مرغوية؛ و / أو جنبا إلى جنب مع أي من الأمثلة التي تم الكشف عنها هنا. شرح مختصر للرسومات ستظهر خصائص أمثلة الكشف الحالي بالرجوع إلى الوصف والرسومات التفصيلية (A حيث تتوافق الأرقام المرجعية Jie المكونات المتشابهة؛ على الرغم من أنها غير متطابقة. من أجل 5 الإيجازء قد يتم أو لا يتم وصف الأرقام المرجعية أو الميزات التي لها وظيفة تم ذكرها مسبكًا فيما يتعلق بالرسومات الأخرى التي تظهر فيها. الشكل 1 هو مثال تخطيطي على مثال للنيوكليوتيد المُعل؛ الشكل 2 عبارة عن منظور تخطيطي وجزئي لمثال لنظام تم الكشف die هنا؛ الشكل 3 عبارة عن رسم تخطيطي للبوليميريز المرتبط بقناة موصلة كهربائياً لمستشعر الشحنة Jai pg charge sensor 0 بالنيوكليوتيدات المُعلّمة التي ply hua (Sa على الشحنة؛ الشكل 4 عبارة عن مخطط 3335( يوضح مثال لطريقة تم الكشف عنها هنا؛ الشكل 15 هو شكل تخطيطي لمثال على النيوكليوتيدات المُعلّمة المستخدمة في طريقة التسلسل؛ و الشكل 5 ب هو مثال تخطيطي لمثال للتفاعل بين dia ومنطقة خصوصية لمثال للنيوكليوتيد المُعلَّم تم الكشف die هنا. 5 الوصف التفصيلي
تم الكف عن النيوكليوتيدات المُعلّمة هنا ally يمكن استخدامها للكشف عن جزيء واحد في إجراءات متوالية الحمض النووي. قد يحتوي المستشعر المستخدم في الكشف عن جزيء واحد على قناة واحدة موصلة كهربائيًا مع بوليميربز واحد متصل بها. يتيح ذلك إمكانية اكتشاف حدث دمج واحد (على سبيل المثال؛ دمج قاعدة في خيط ناشضئ بواسطة البوليميراز) في وقت واحد لكل مستشعر فردي sensor توفر النيوكليوتيدات المُعلّمة طريقة كشف فريدة يمكن استخدامها لمتوالية الحمض النووي والكشضف عن الأحماض النووية nucleic acids وغيرها من نواتج التحليل بشفكل عام. تم توضيح مثال تخطيطي على النوكليوتيد Abed 10 في الشكل 1. كما هو موضح؛ يتضمن النوكليوتيد abel) 10 نيوكليوتيد 12( جزيء ربط 14 أو 14 'متصل بمجموعة فوسفات 16 من 0 النوكليوتيدات 12؛ و علامة شحنة نشطة لتفاعل اختزال أكسدة 18 متصلة بجزيء Ll 14 أو 14 تتم أكسدة أو اختزال علامة شحنة تفاعل الاختزال والأكسدة النشطة 18 من خلال قناة موصلة كهربائياً (الرقم المرجعي 32( الشكل 2) عند الاحتفاظ بها بالقرب من منطقة الاستشعار (الرقم المرجعي 31؛ الشكل 3) للقناة الموصلة كهريائيًا 32. يمكن اعتبار النكليوتيد المُعلَّمِ 10 نيوكليوتيدات غير طبيعية أو اصطناعية لأنها متميزة هيكلياً أو كيميائياً عن نيوكليوتيد طبيعي .natural nucleotide 5 قد يكون النوكليوتيد 12 من النكليوتيدات المُعلّمة 10 نيوكليوتيد طبيعي. تشتمل النيوكليوتيدات الطبيعية على قاعدة حلقية غير متجانسة تحتوي على النيتروجين nitrogen-containing heterocyclic base 20 وسكر 22 ومجموعة فوسفات واحدة أو أكثر 16. Jad أمثلة النيوكليوتيدات الطبيعية» على سبيل المثال؛ رببيوكليوتيدات ribonucleotides أو ديوكسي 0 رببونوكليوتيدات .deoxyribonucleotides في رببونوكليوتيد ribonucleotide السكر 22 عبارة عن Ag 1005© su) ديوكسي رببونوكليوتيدات؛ السكر 22 هو ديوكسي «deoxyribose gu) أي Su يفتقر إلى مجموعة هيدروكسيل hydroxyl يوجد في موضع 2 في ريبوز. في مثال؛ يكون النوكليوتيد 12 في شكل الفوسفات لأنه يحتوي على العديد من مجموعات الفوسفات 16 (على سبيل المثال؛ ثلاثي الفوسفات Je) سبيل المثال» فوسفات «(gamma phosphate Lela )= 5 الفوسفات ctetra-phosphate فوسفات بنتا <penta-phosphate فوسفات خماسي <hexa-phosphate إلخ. يمكن أن تكون القاعدة الحلقية غير المتجانسة heterocyclic base 20 (أي النوكليوباز
(nucleobase قاعدة البيورين purine base أو قاعدة بيربميدين pyrimidine base تمل قواعد البيورين الأدينين (A) adenine و جوانين ¢(G) guanine والمنتقات المعدلة أو النظائر منها. تشمل قواعد البيريميدين Pyrimidine السيتوزين ¢(C) cytosine الثيمين thymine (1)؛ والبوراسيل uracil (نا)؛ والمشتقات المعدلة أو النظائر منها. ترتبط ذرة C-1 من دايوكسي ريبوز ب 1-1 لبيريميدين أو 17-9 من البيورين. قد dai dn أي نظير للحمض النووي على أي من العمود الفقري للفوسفات phosphate backbone أو السكر أو النوكليوياز المتغير. تشمل الأمثلة على نظائر الحمض النووي cnucleic acid analogs على سبيل (Jill القواعد العامة أو النظائر الأساسية لسكر الفوسفات cphosphate-sugar backbone analogs مثل الأحماض النووية الببتيدية peptide .(PNA) nucleic acids يشمل النوكليوتيد المُعلَّم 10 أيضًا جزيء الربط 14 أو 14 '. في بعض الأمثلة؛ لا يشتمل جزيء WS) Lal هو موضح في 14 في الشكل 1) على منطقة خصوصية 24. وفي أمثلة أخرى؛ يشتمل جزيء الربط WS) هو موضح في 14 في الشكل 1) على منطقة الخصوصية 24. كما هي كما هو موضح تخطيطيًا في الشكل 1؛ عندما تكون منطقة الخصوصية 24 جزءًا من جزيء الريط 14 قد توجد المنطقة 24 في النهاية حيث تترابط كيميائيًا مع علامة الشحنة النشطة في 5 الأكسدة والاختزال 18. سيتم وصف منطقة الخصوصية 24 بشكل إضافي أدناه. قد يكون جزيء الربط 14 أو 14 'من النوكليوتيد baal 10 أي جزيء طويل السلسلة يمكن أن يرتبط Lila في إحدى النهايات؛ بمجموعة الفوسفات 16 من النوكليوتيد 12 والتي يمكن أن تربط iba في الطرف الآخر؛ بعلامة شحنة تفاعل الاختزال والأكسدة النشط 18. يمكن أيضًا اختيار جزيء الربط 14 أو 14 "حتى لا يتفاعل مع بوليميريز 26 المستخدم في النظام 30 (انظر 0 الشكل 2) الذي تم الكشفف die هنا. يتم تحديد جزيء الربط 14 أو 14 'بحيث يكون طويلًا بما يكفي للسماح لعلامة dla ail) din al) لتفاعل الأكسدة والاختزال 18 بالإقامة داخل منطقة الاستشعار 31 (الشكل 3) من القناة الموصلة Wl eS 32 (الشكل 2). على سبيل المثال؛ قد يشتمل جزيء الربط 14 أو 14 "على سلسلة ألكيل calkyl chain سلسلة بولي (إيثيلين جليكول) de sans poly(ethylene glycol) chain أميدو camido group مجموعة فوسفات phosphate group 25 حلقة غير متجانسة Jie heterocycle تريازول ctriazole نيوكليوتيدات nucleotides أو توليفات منها. قد تشتمل أمثلة سلسلة الألكيل على 6 ذرات كريون carbon atoms على الأقل؛
— 0 1 — وأمثلة من سلسلة بولي (جلايكول الإيثيلين) poly(ethylene glycol) chain قد تشمل 3 وحدات جليكول إيثيلين ethylene glycol units على الأقل. يوضح المثال التالي مثالا على النكليوتيد المُعلّم 10( حيث يشتمل جزيء الربط 14 و 14: على سلسلة الكيل ومجموعة أميد وسلسلة بولي (إيثيلين جليكول) وتريازول:
u يوي > a : بلمة لعلاماتا مت متعمةتمقه اا ل ا الل أي Charge Tag - (Specficity Region) WTR Eo Ah 2 ® Sp A gS a 8 9D الحا لامي الحا بحاس اجيس ER ريا ا اج ا fe fer بيك #8 يوضح المثال التالي مثالا aT على النوكليوتيد المُعلّم 10 ؛ حيث يشتمل جزيء الربط 14( 14 على سلاسل ١ لألكيل calkyl chains ومجموعة ١ لأميد camide وسلاسل بولي (ايثيلين جليكول) 6و تريازول ومجموعة الفوسفات : NE : 8 تم تت Wa WW ا 1 Sy 0 Su “Ny اع وال ار ا # ee ان را ال os 4 لكي حا ag = 0 TN As rhe de dn dw de LF لمي م بي RB ad Fim 1 3 حي ااال عي & (Specificity Region) - Charge Tag 10 ا ا ا المي يح يوضح المثال التالي مثالا aT على النوكليوتيد المُعلّم 10 ؛ حيث يشتمل جزيء الربط 14( 14 على سلاسل الألكيل» ومجموعات الأميد؛ وسلاسل متعدد (إيثيلين جليكول)؛ و تربازول» ومجموعة J لفوسفات : on & ٍ: 8 : : Rody 5 ل © متمق Sx م للحي م EE ييا we “5 Ee fone we > M Si dw ody de de de RI ب wi nt (Specificity Region) - Charge Tag عل يل ع اق Fwy INFN يوضح المثال التالي مثالاً AT على النكليوتيد aladl) 10( حيث يشتمل جزيء الربط 14( 14 على سلاسل الكيل» ومجموعة anal وسلاسل بولي (إيثيلين جليكول)؛ وتريازول» ومجموعة فوسفات؛ وسلسلة بوتى نوكليوتيد :polynucleotide chain
ٍ م متمة مات اق حرصت اليا مضه 3» 3 Oo A
CT ْم Be
Charge Tag - (Speciicity Regio Yop Sine في حين تم وصف العديد من الأمثلة التي تريط الجزيئات 14؛ 14 'ء فمن المفهوم أنه يمكن استخدام جزيئات hall الأخرى 14 14'. كما هو موضح في الشكل 1 والأمثلة السابقة؛ قد تتضمن بعض النيوكليوتيدات المُعلّمة 10 أيضًا منطقة الخصوصية 24 كجزء من جزيء الريط 14 '. منطقة الخصوصية 24 قادرة على التفاعل مع منطقة مستقبل acceptor region على حبل 28 (الشكل 2( يرتبط بالقناة الموصلة كهرياثبًا 2. قد تتضمن منطقة الخصوصية 24 علامة تقارب؛ والتي يمكن أن ترتبط مؤْقثًا بالمنطقة المستقبلة للحبل 28. قد يكون تقارب الارتباط لعلامة التقارب Ugh بدرجة كافية لريط منطقة الخصوصية 24 بالمنطقة المستقبلة على الحبل 28 عندما يحتفظ البوليميريز 26 بالنيوكليوتيد 0 المْعلِّم 10 ولكن قد يكون Lind ضعيفًا بدرجة كافية لإطلاق منطقة خصوصية 24 من المنطقة المستقبلة بعد حدث التضمين (على سبيل المثال؛ عندما يشطر البوليميريز 26 بشكل طبيعي الرابطة بين فوسفات ألفا وجزيء الريط 14؛ 14 أو بين فوسفات alpha phosphate Wl وفوسفات بيتا «(beta phosphate بمعنى آخرء يمكن تحديد معدلات الدخول والخروج في منطقة الخصوصية 4 (على سبيل المثال؛ علامة التقارب) من وإلى المنطقة المستقبلة لتحسين استشعار الجزيء 5 المفرد الشامل. قد يكون معدل التفاعل بين منطقة التقارب / المنطقة المستقبلة مرتفعًاء على سبيل المثال» نظرًا للتركيز العالي الفعّال لمنطقة الخصوصية 24, وبالتالي علامة التقارب» قبل دمج النوكليوتيدات. يزيد هذا المعدل المرتفع من الوقت الذي ترتبط فيه علامة التقارب بالمنطقة المستقبلة. بعد الانتشطار؛ يمكن أيضًا اختيار معدل عدم التفاعل ليكون مرتفعًا بدرجة كافية بحيث ينفصل المجمع (بين علامة التقارب والمنطقة المستقبلة) بسرعة كافية بحيث يكون هناك احتمال 0 ضيف لحالة ربط (بين علامة التقارب في النوكليوتيد المُدمج سابقًا والمنطقة المستقبلة) عندما يدخل النوكليوتيدات التالي deal 10 إلى موقع بوليميراز 26 النشط.
في مثال محدد؛ يحدث تهجين لمنطقة الخصوصية 24 مع المنطقة المستقبلة على الحبل 28 ally قد تتضمن علامة التقارب متوالية النيوكليوتيد nucleotide sequence أو متوالية حمض نووي ببتيدي peptide nucleic acid sequence قادر على الريط المؤقت بالمنطقة المستقبلة على الحبل 28 (الشكل 2). في أحد الأمثلة؛ تشتمل علامة التقارب على متوالية نيوكليوتيد تشمل من
واحد من النوكليوتيدات إلى حوالي عشرة النوكليوتيدات أو من حوالي واحد من الحمض النووي للببتيد peptide nucleic acid إلى حوالي عشضرة من الأحماض النووية peptide nucleic ull acids في أمثلة أخرى؛ تتضمن علامة التقارب ما يصل إلى ستة من النيوكليوتيدات أو الأحماض النووية الببتيدية. في مثال LS) AT هو موضح وموصوف في الشكل 5 ب)؛ قد تشتمل منطقة الخصوصية 24 أيضًا على إيتوسين (او إينوسينات) inosine(s) محيطة بجانبي متوالية
0 اانوكليوتيدات. في أمثلة (gal قد تكون علامة التقارب عبارة عن مجموعة حمض غير نووي Jie cnon-nucleic acid الببتيدات التي لها صلة ببعضها البعض أو للبوليمرات غير المتآلفة مع hydrophobic polymers sll يتضمن مثال البروتين المحدد lake وهو شكل هيكلي مكرر في البروتينات حيث يتم لف 2 إلى 7 من حلقات ألفا be مثل خيوط الحبل. بمعنى AT يتم إنشاء الملفاتال ملفوفة بواسطة حلقتي ألفا أو أكثر يلفان بعضهما البعض لتشكيل ملف مميز. تشمل 5 الأمثلة على الملفات الملفوفة البروتينات البروتينات المشفرة بالجين الورمي00600:016:05 c- Jie
.c-jun و Fos
قد تكون علامة ca all ذات الأكسدة والاختزال 18 أي علامة شحن قادرة على زبادة شحتتها عندما تتأكسد (تفقد إلكترون (electron أو تختزل (تكتسب إلكترونًا) بواسطة القناة الموصلة كهربائيًا
2. على سبيل المثال؛ عندما يتم الحفاظ عليها في مكان قريب في منطقة الاستشعار 31 من
0 القناة الموصلة كهربائيًا 32. قد تكون علامة الشحن 18 محايدة صافية (إصفر شحن)؛ أو قريبة من هذه الحالة (10 شحنات أو (J قبل أن يحدث تفاعل الأكسدة والاختزال. بمعنى آخر؛ في
الحالة غير المؤكسدة أو غير المختزلة؛ تحمل علامة شحنة تفاعل الاختزال والأكسدة النشضطة 18 عشر شحنات أو أقل. لا تشمل الشحنات التي تحملها علامة الشحنة ذات نشاط الأكسدة والاختزال 8 أي شحنة من الفوسفات 16 أو جزيء Tag 14( 14 'من النكليوتيد المُعلّمِ 10. بعد حدوث
dels 5 الأكسدة والاختزال» تتغير الشحنة الكلية الصافية لعلامة شحن الأكسدة والاختزال النشطة 8 (أي؛ تحمل شحنات موجبة أكثر أو شحنات سالبة أكثر). في أحد الأمثلة؛ تتضمن علامة
شحن الأكسدة والاختزال النشطة 18 حوالي 10 شحنات أو أقل في حالة غير مؤكسدة أو غير
مختزلة؛ وتتضمن علامة شحنة تفاعل الاختزال والأكسدة النشطة 18 من حوالي 1 شحنة إلى
حوالي 100 شحنة في حالة مؤكسدة أو مختزلة . يجب أن يكون مفهوما أن عدد شحنات علامة
شحنة تفاعل الاختزال والأكسدة النشطة 18 في الحالة غير المؤكسدة أو غير المختزلة أقل من
عدد شحنات علامة الشحن الأكسدة dail) 18 في الحالة المؤكسدة أو المختزلة. في مثال OAT
تتضمن علامة شحن تفاعل الاختزال والأكسدة النشطة 18 حوالي 10 شحنات أو أقل في حالة
غير مؤكسدة أو غير Alida وتشمل علامة شحن تفاعل الأكسدة والاختزال ada all 18 من
حوالي 20 شحنة إلى حوالي 50 شحنة في حالة مؤكسدة أو مختزلة.
قد تتضمن علامة الشحنة 18 في حالة الأكسدة والاختزال أي ذرة معدنية منسقة (أي في مكانها) 0 يمكن أن تخضع لتفاعل الأكسدة والاختزال. تشمل أمثلة الذرات المعدنية metal atoms الحديد
iron والكويالت «cobalt والروقينيوم ruthenium والزنك ezine والنحاس copper والليثيوم
«حسنطاناء والفضة silver وما إلى ذلك. في بعض الأمثلة المحددة؛ يتم اختيار علامة شحنة تفاعل
الاختزال والأكسدة النشطة من المجموعة المكونة من الفيروسين» ورابع الزنك رباعي البروبيلين
—'2¢2) = وتريس ccobalt phthalocyanine والكويالت فثالوسيانين «zine tetrabenzoporphyrin 4- كحول 4- الفيروسيينيل البنزيل ctris-(2,2-bipyrimidine)ruthenium بيبيريميدين) الروثيتيوم 5
alcohol الإعدتطانا60060]» 5 - (4 - هيدروكسي ميثيل فينيل) - 10 15 20 تراي
ميسيتيل بورفيناتوزينك 5-(4-hydroxymethylphenyl)-10,15,20-trimesitylporphinatozinc(Il)
([1)؛ وكالكسارين نشط لتفاعل الأكسدة والاختزال .redox-active calixarene
قد يكون الفيروكين أي مركب عضوي معدني organometallic compound يتضمن الصيغة Fe (CsHs) < 0 من أحد الأمثلة المحددة الفيروسين ferrocene المتفرع:
— 4 1 — =r ~ ar Fo a= Fe = Fe J <> = ا 5 الخ i 7 Si — oF Pi } 1 \ 3 Fe ل - Fe هك - / NN i” Fe 4 | } & ل م “TN اصن J 5 \ si ~ ,5 تآ Fe £ 0" 8 "٠. ل طار7 SL © AN ~~ ى = Fe Ni Fe E> Fe fa) 1 الذي فيه يمكن أن تتحول +762 إلى +763 عند الأكسدة؛ وبالتالي إدخال شضحنة موجبة في كل "Fe' . 0 يحتوي الزنك تترا بينزو برفيرين Zine tetrabenzoporphyrin على البنية: 8 N = co” مل LN N—~IZIn—N Z N RSS 5 حيث CoHs = R أو CHis أو مطكاد©. يمكن أن تتحول Zn" إلى Zn عند الأكسدة « وبالتالي إدخال شحنة موجبة. وتشتمل أمثلة الفثالوسيانين على:
he مخ Sl و مر قمر Th 5 ماي Fa تيب نما 35% حي oF : Son, . ا Fo FOO كلاهما جزيئات محايدة الصافي molecules 061-0601781 في المحلول. عند الأكسدة؛ يتحول Co? C0 LY 5 ل للهيكل الأول وخمس شحنات موجبة للهيكل الثاني). تُعرف المركبات الأخرى المحتوية على الكوبالت التي تحتوي على حالات أكسدة والتي تتراوح من -3 إلى +5؛ ويمكن أن تستخدم كعلامات شحن سالبة في تفاعلات الاختزال والأكسدة 18 أو كعلامات شحن موجبة في تفاعلات الاختزال والأكسدة 18. 0 يحتوي تريس - )2 2 = باي بيريدين) Tris-(2,2"-bipyrimidine)ruthenium agg ll على البنية:
— 6 1 — © ب سم 8 | سس #< | اذ حب ~~ ~~ Ru 2+ ؤ و > | و x = N ل ل > Ru’+ Cua نم كر أن يصبح جخري عند | لأكسدة 3 وبالتالي يقوم بإدخال شحنة موجبة. يحتوي كحول 4- فيروزينيل البنزيل 4-ferrocenylbenzyl alcohol على البنية: Pa GH ب & 3 الاح NE 8 4 3 ا 2 Se i NI Fa RX ch التي يمكن أن تتحول Fel+ إلى دقو[ عند ١ لأكسدة ¢ وبالتالي إدخال شحنة موجبة. 5 = (4-هيدروكسي ميثيل فينيل) -10415+20-تراي ميسيتيل بوريفينوسينك )1( -5-4 hydroxymethylphenyl)-10,15,20-trimesitylporphinatozine(I1) له البنية : A © 71 و & ّ. يبب eR Ry a تب ¢ ; : ملا 0 4 dy No FH برك 1 Nef SN i ” Nem SE fi = حيث يمكن أن يصبح 201 + 202 + عند الاختزال؛ وبالتالي إدخال شحنة سالبة. تشمل بعض أمثلة الكاليكسارين Jaa في الأكسدة redox-active calixarenes ما يلي :
— 7 1 — ب هذ ير “ICN 1 0 و >8 7 Hw حر يد © اص ارا يخ مر تت لسر 5 0 م الأ ال Ns? FA ل Sop AL 3 ol hed FE og . 3 : 557 Te ~ { م اله dob 1 ان 90 ا ل ل ب ممصي ا لا A 1 نيا J TN ل X 3 له x My “i Phy 8 a on NCA mT A o o 0 i aE 1 at CY «EY £ Ea أ أ AL oP NE NEN ENTE 7 لديا A > ل SN dif ايز A 5 § 4 ا wd gE FEY EN Boo Q Or =r EY Can ! نو we لا بع ما A ا : با . 3 ; R 8 RB 8 Ah 1 REN »> NOS GAS Se RE { صل OS SE في 88 Of أن “Yodo a i Wu A % 2 الى 1 5 BE EUR كل تفاعلات الأكسدة والاختزال الموصوفة Gl قابلة للانعكاس؛ وبالتالي يمكن استخدام المركبات في حالة الأكسدة العليا الخاصة بها وقد يتم تقليلها عندما تكون في منطقة استشعار القناة الموصلة كهربائيًا 31؛ أو يمكن استخدامها فى حالة الأكسدة السفلية ويمكن أن تتأكسد عندما تكون فى منطقة استشعار قناة موصلة كهريائيا 31 كما ذُكر أعلاه؛ قد تكون علامة الشحنة 18 لنشاط الأكسدة والاختزال التي تم الكشف عنها هنا محايدة أو ad محايدة فى محلول ‘ ولا تحمل شحنة أكبر حتى تخضع لتفاعل ١ لأكسدة . على هذا النحو؛ لا تُعتبر النيوكليوتيدات المعلمة 10 فى المحلول جزيئات ذات شحنة عالية»؛ كما أن التراكم بين النيوكليوتيدات المُعلّمة ذات الشحنة المعاكسة 10 (التى تحتوي على علامات نشطة عكسية 0 لشحنة الأكسدة والاختزال شبه محايدة 18) أقل Naat
يمكن استخدام النيوكليوتيدات المُعلّمة 10 في مجموعة و / أو في نظام 30 (تم عرض مثال يوضح الأخير في الشكل 2). قد تتضمن المجموعة أو النظام 30 القناة الموصلة كهريائيا 32. قد تكون القناة الموصلة كهربائيا 32 داخل أو eda من وعاء؛ مثل عين أو أنبوب أو قناة أو حاوية أو لوحة بتري أو زجاجة أو ما شابه. مثال آخر للوعاء المناسب هو خلية التدفق 34. يمكن استخدام أي تكوين لخلايا التدفق مناسب للتطبيقات الموصوفة هنا. بعض الأمثلة على تدفق الخلايا هي تلك المتوفرة تجارياً من Tllumina, Tne. (سان «gana كاليفورنيا). تعتبر خلايا التدفق 34 ملائمة لتوصيل الكواشف الكتلية إلى مجموعة من القنوات الموصلة كهربائيا 32 التي يمكن معالجتها بشكل فردي أثناء تثبيت مكونات التفاعل (مثل قالب الأحماض النووية «template nucleic acids النيوكليوتيدات المُعلّمة 10؛ وما إلى ذلك) للقنوات الموصلة كهربائيا ذات الصلة 32 أو أثناء 0 التفاعلات اللاحقة مع مكونات التفاعل على القنوات الموصلة كهربائياً 32. العمليات الدورية؛ مثل تفاعلات متوالية الحمض النووي؛ مناسبة بشكل خاص لخلايا التدفق 34. ويمكن استخدام slog A مفيد بشكل ald وهو عين في صفيحة متعددة العيون multiwell plate أو لوحة معيار دقيق plate 101010116 في المثال الموضح في الشكل 2؛ تتضمن خلية التدفق 34 القناة الموصلة كهربائيًا 32. كما هو 5 مستخدم هناء يقد بمصطلح "لقناة الموصلة TELS أن يعني جزءًا من جهاز الكشف detection device الذي يترجم الاضطرابات على سطحه أو في المجال الكهربائي المحيط بها إلى إشارة كهريائية. على سبيل المثال؛ يمكن للقناة الموصلة كهربائياً 32 ترجمة وصول أو رحيل مكون التفاعل (مثل النكليوتيد Haid) 10) إلى Ha) كهريائية electrical signal في الأمثلة التي تم الكشف عنها هناء يمكن للقناة الموصلة كهربائيًا 32 Lad ترجمة التفاعلات بين عنصرين من 0 عناصر التفاعل (قالب الحمض النووي ونوكليوتيد 20 من النكليوتيد المُعلّم 10) إلى إشارة يمكن اكتشافها من خلال تفاعلها مع علامة شحنة تفاعل الاختزال والأكسدة النشطة 18 من النيوكليوتيد axl 10. قد تكون القناة الموصلة كهربائياً 32 هي قناة مستشعر الشحن 35. قد يشمل مستشعر الشحن charge sensor 35 أطراف المصدر والصرف 98 و © والقناة 32 التي تريط الطرفين 5 و B.D 5 يكون للقناة 32 أي هندسة مناسبة؛ على سبيل المثال؛ أنبوب؛ سلك؛ صفيحة» إلخ.
قد تكون النهايات 5 0 أي مادة موصلة مناسبة. من أمثلة مصادر الصرف والصرف المناسبة: cull oS) وسيليد الكويالت cobalt silicide والتيكل nickel وسيليسيد التيكل nickel silicide والألومنيوم aluminum والتتجستين tungsten والنحاس copper والتيتاتيوم asad sally titanium molybdenum وأكسيد القصدير الإنديوم (ITO) indium tin oxide وأكسيد الزنك الإنديوم indium zin oxide 5 والذهب والبلاتين platinum والكريون carbon إلخ. قد تتضمن القناة الموصلة كهربائياً 32 أي مادة موصلة أو شبه موصلة يمكن أن تأكسد أو تختزل علامة شحنة تفاعل الاختزال والأكسدة Aa iil 18. يمكن أن تتكون المادة من مادة عضوية organic material أو مادة غير عضوية inorganic material أو كليهما. بعض الأمثلة على مواد القناة المناسبة تشضمل السيليكون والكريون Jie) الكربون الزجاجي glassy carbon والجرافين graphene 0 وما إلى ذلك) والبوليمرات؛ مثل البوليمرات الموصلة conductive polymers (على سبيل المثال؛ بولي برول cpolypyrrole بوليانيلين ¢polyaniline بولي ثيوفين «polythiophene Js (3 .4-إيثيلين دايوكسي ثيوفين) poly(3,4-ethylenedioxythiophene) مع بولي (4 -سترين سلفونات) ¢(PEDOT-PSS) poly(4-styrenesulfonate) إلخ)؛ المعادن» إلخ. في بعض الأمثلة؛ قد تكون القناة الموصلة كهريائيا 26 عبارة عن بنية نانوية لها بعد واحد على الأقل على مقياس النانو (يتراوح من 1 نانومتر إلى أقل من 1 ميكرون). في مثال واحد؛ يشير هذا البعد إلى البعد الأكبر. على سبيل المثال؛ قد تكون القناة الموصلة كهربائيًا 26 عبارة عن بنية نانوية شبه موصلة ug semi-conducting nanostructure نانوية من الجرافين graphene 020050160178 وبنية نانوية معدنية emetallic nanostructure وبنية نانوية بوليمرية موصلة conducting polymer nanostructure قد تكون البنية متناهية الصغر هي أنابيب نانوية متعددة 0 أو أحادية الجدار» أسلاك متناهية الصغر nanowire مادة متناهية الصغر 0000:0000 إلخ. من أمثلة مستشعر الشحنة 35 هو ترانزستور يتأثر بالمجال «(FET) field effect transistor مثل je up يتأثر بالمجال النانوي الكريوني (CNT) carbon nanotube القائم؛ ترانزستور يتأثر بالمجال النانو كريوني أحادي الجدار «(SWNT) single-walled carbon nanotube ترانزنستور يتأثر بالمجال» أسلاك متناهية الصغر السيليكونية silicon nanowire (9:1117)» ترانزستور يتأثر 5 بالمجال؛ أسلاك متناهية الصغر بوليمر nanowire 001106 جرافين شريط الثانو graphene nanoribbon ترانزستور يتأثر بالمجال (و شرائط النانوترانزستورات يتأثر بالمجال field effect
(FETs) transistores ذات الصلة المصئعة من مواد ثنائية الأبعاد (MoS) ie والسيليسين silicene » وما إلى ذلك) ¢ ونفق ترانزستور slay بالمجال tunnel field effect transistore TFET) (« وأجهزة عتبة شديدة الاتحدار .steep subthreshold slope devices من أمثلة مستشعر الشحنة 35 المبين في الشكل 2 هو ترانزستور يتأثر بالمجال له بنية نانوية بما في ذلك المصدر 8؛ والصرف © والقناة الموصلة كهربائيًا 32 بين المصدر 5 والصرف B.D تكون القناة الموصلة كهربائيًا 2 أنابيب نانوية كريونية carbon nanotube أنابيب نانوية كريونية أحادية الجدار single-walled carbon nanotube أسلاك سيليكونية silicon nanowire أسلاك نانوية بوليمرية «polymer nanowire إلخ. تعمل القناة الموصلة كهريائياً 32 كمحطة بوابة؛ وبالتالي تظهر Lia ك "0" في الشكل 2. في الأمثلة 2. قد تعمل البوابة 6 / القناة الموصلة 0 كهربائياً 32 كقطب الأكسدة والاختزال (توفير أو استقبال الإلكترونات) لعلامة الشحنة النشطة لتفاعل الأكسدة والاختزال 18 للنيوكليوتيدات المُعلّمة 10. وبشكل أكثر danas يمكن استخدام البوابة الموصلة للكهرياء 732 6 لنقل إلكترونات من أو إلى علامة الشحن النشطة لتفاعل الأكسدة والاختزال 18. قد يحدث نقل الإلكترون عبر نفق عبر أكسيد بوابة (غير موضح) على on على الأقل من سطح البوابة 6 / قناة موصلة كهربائياً 32. في بعض الأمثلة؛ قد يتم استخدام الطبقة 5 السميكة لأكسيد البوابة لتعديل كفاءة النقل الحالية بحيث يمر الحد الأدنى من وقت الاتصال قبل تنشيط علامة شحنة تفاعل الاختزال والأكسدة النشطة 18 بما فيه الكفاية. قد يشير وقت التلامس إلى الوقت الذي تُحمل فيه علامة الشحن 18 النشطة في تفاعل الاختزال والأكسدة على die من البوابة 6 / القناة الموصلة كهربائيًا 32 حتى يحدث انتقال الإلكترون باحتمال كبير. ستعتمد هذه الفترة الزمنية على العديد من العوامل؛ بما في ذلك نوع علامة الشحنة النشطة لتفاعل الأكسدة 0 والاختزال 18 وسمك أكسيد البوابة ومسافة علامة الشحن 18 من البوابة 6 / القناة الموصلة Bikes 32. ويمكن استخدام هذا لضمان يميز مستشعر الشحنة 35 بما فيه الكفاية بين النيوكليوتيدات dda) 10 المنتشرة lly تتصل عند عبورها بالبوابة © / القناة الموصلة كهربائيًا 2 ولكن لا ترتبط Sad بالبوليميراز 26 المرتبط بالبوابة 6 / القناة الموصلة كهربائيًا 32. من المتوقع أن تظل النكليوتيدات 10 المرتبطة بالقناة في الموقع النشط للبوليميريز 26 في الحالة 5 المرتبطة لفترة زمنية أطول بكثير من الوقت الذي يحدث فيه تفاعل عابر. على Jia dw قد يظل النوكليوتيد المُعلَّم 10 مرتبطًا بالموقع النتشط للبوليميريز (على سبيل المثال؛ بوليميريز 26)
لفترة زمنية من مئات من المايكروثانية إلى مئات الميلي ثانية. قد يحدث تفاعل عابر على الجداول الزمنية للانتشار والتي تكون أسرع من حيث الحجم. في هذا المثال؛ يتم تثبيت البوليميريز 26 على البوابة 6 / قناة موصلة كهربائيًا 32 من مستشعر الشحن 32 باستخدام حبل 28. يتم استخدام الحبل 28 كمرسى للبوليميريز 26. قد يظهر الحبل 28 الإلكترون all electron على النقل. من الأمثلة على الحبال 28 المناسبة: سلإسل الحمض النووي nucleic acid chains (على dun المثال؛ تلك التي تحتوي على 5 إلى 25 نيوكليوتيدات «(nucleotides والببتيدات peptides وسلاسل الكربون المفردة «single carbon chains وأوليمومرات أو بلمرات غير موصلة أو منخفضة التوصيل» إلخ. في بعض الأمثلة؛ يحتفظ الحبل 28 بالبوليميراز 26 على بعد 10 نانومتر على الأقل من البوابة 0 6 / القناة الموصلة كهربائيًا 32 من مستشعر الشضحن 35. قد يكون هذا al مرغويًا فيه على سبيل المثال؛ عندما لا يكون من المستحسن الشعور بشحنات البوليميراز 26 و / أو الشحنات السالبة لقالب الحمض النووي 36 الذي يحتفظ بالبوليميريز 26. ومع ذلك؛ إذا كان من المرغوب فيه معرفة البوليميريز 26 و / أو شحنة قالب الحمض النووي 36؛ فقد يحمل الحبل 28 بوليميريز 6 أقل من حوالي 10 نانومتر؛ أقل من حوالي 9 نانومتر؛ أقل من حوالي 8 نانومترء أقل من 5 حوالي 7 نانومتر» أقل من حوالي 6 نانومتر» أقل من حوالي 5 نانومتر؛ أقل من حوالي 4 نانومتر؛ J من حوالي 3 نانومتر» أقل من حوالي 2 نانومتر» أو حوالي 1 نانومتر من البوابة 6 لمستشعر الشحن 32. قد يؤدي استخدام مستشعر الشحنة القائم على ترانزستور يتأثر بالمجال 35 إلى تمكين ما يلي: (1) يمكن تحقيق حساسية جزيء واحد باستخدام ترانزستور يتأثر بالمجال مصمم بشكل صحيح؛ و 0 (2) درجة عالية من التوازي (تسمى أيضًا 'تعدد الإرسال") يتم تسهيلها نظرًا لأن التغير الذي تم اكتشافه في الشحنة يقع في مكان قريب من البوابة 6 / القناة الموصلة كهربائيًا 32 مما يؤدي إلى تجنب التداخل التبادلي بين مواقع ترانزستور يتأثر بالمجال المجاورة التي يمكن معالجتها بشكل فردي (على سبيل المثال» في مصفوفة). علاوة على ذلك؛ يمكن تصنيع بنية نانو السيليكون ترانزستور يتأثر بالمجال باستخدام عمليات متوافقة مع مرافق تصنيع أشباه الموصلات. 5 قد تتضمن أمثلة المجموعة و / أو النظام 30 Lad قالب حمض نووي 36 يتم إدخاله في خلية التدفق 34 والكواشف (غير موضحة في الشكل 2) والتي سيتم إدخالها في خلية التدفق 34 .
قد يكون قالب الحمض النووي 36 أي عينة يتم تسلسلهاء؛ وقد تتكون من حمض الديوكسي ردبونيوكليك (DNA) Deoxyribonucleic acid أو حمض نووي Ribonucleic acid (Sig) (RNA) أو نظيرها. يمكن أن يكون مصدر القالب (أو الهدف) للأحماض النووية 36 هو حمض الديوكسي رببونيوكليك الجيني أو حمض نووي ريبوزي المرسال أو الأحماض النووية الأخرى من مصادر أصلية. في بعض الحالات؛ يمكن تضخيم قالب الأحماض النووية 36 المشتقة من هذه المصادر قبل استخدامها في طريقة أو نظام 30 هنا. يمكن استخدام أي من مجموعة متنوعة من تقنيات التضخيم المعروفة بما في ذلك؛ على سبيل المثال لا الحصرء تفاعل سلسلة البوليميريز (PCR) polymerase chain reaction تضخيم دائرة التدحرج rolling circle amplification ¢(RCA) تضخيم الإزاحة المتعددة (MDA) multiple displacement amplification » أو تضخيم 0 التتمهيد العشضوائي ٠ (RPA) random primer amplification يجب أن يكون مفهوما أن تضخيم الأحماض النووية المستهدفة 26 قبل استخدامها في الطريقة أو النظام 30 الموضح هنا اختياري. على هذا cal) لن يتم تضخيم قالب الأحماض النووية 36 قبل استخدامه في بعض الأمثلة. يمكن اختيارياً اختيار قالب / أحماض نووية مستهدفة من مكتبات تركيبية. يمكن أن تحتوي الأحماض النووية التركيبية على تراكيب حمض الديوكسي زريبونيوكليك أو حمض نوي ريبوزي
5 الأصلي أو يمكن أن تكون نظائرها. تشمل العينات البيولوجية التي يمكن استخلاص قالب الأحماض النووية 36 منهاء على سبيل المثال؛ تلك الموجودة في الشدييات؛ مثل القوارض chilly والجرذان والأرانب وخنازير غينيا والفطريات والحصان والأغنام والخنزير والماعز «idly القطء الكلب» الرئيسيات؛ الرئيسيات البشرية أو غير البشرية؛ نبات مثل أرأبيدوسيس ثاليانا Arabidopsis thaliana أو الذرة أو الذرة البيضاء 0 أو الشوفان أو القمح أو الأرز أو الكانولا أو فول الصويا؛ طحالب Jie الكلاميديموناس ربنهاردتي ¢Chlamydomonas reinhardii الخيطية Jie أنواع معينة؛ حشضرة مثل ذبابة الفاكهة السوداء؛ البعوض» ذبابة الفاكهة؛ نحل العسل أو العنكبوت؛ سمكة Jie الزرد. الزواحف برمائيات Jie الضفدع أو (ug gi) ليفيس ¢Xenopus laevis الديسكو العقيدي tdictyostelium discoideum الفطربات fungi مثل المكورات الرئوية الجؤجؤية pneumocystis carinii تاكيفوجو روبرايبس (Takifugu rubripes 25 الخميرة» ساكاراموسيس سيرفيسيا Saccharamoyces cerevisiae أو سكيزوساكروميسيس بومب ¢Schizosaccharomyces pombe أو المتصورة المنجلية plasmodium
falciparum يمكن Lad استخلاص قالب الأحماض النووية 36 من أوليات النواة prokaryotes مثل البكتيريا bacterium أو LS, ay القولونية Escherichia coli أو المكورات العنقودية staphylococci أو الميكوبلازما الرئوية pneumoniae 700:600145714؛ فيروس مثل فيروس التهاب الكبد الويائي Hepatitis © virus C أو فيروس ebola virus Yeu) أو فيروس العوز المناعي البشري Lig yd human immunodeficiency virus 80. يمكن اشتقاق قالب الأحماض dugg 36 من مزرعة متجانسة أو تجمعات الكائنات المذكورة أعلاه أو بدلاً من ذلك من مجموعة من الكائنات الحية المختلفة. على سبيل المثال؛ في مجتمع أو نظام بيئي. علاوة على ذلك؛ قد لا يتم اشتقاق قالب / مستهدف الأحماض النووية 36 من المصادر الطبيعية؛ ولكن يمكن تصنيعها باستخدام التقنيات المعروفة. على سبيل المثال؛ يمكن تجميع تحقيقات التعبير 0 الجيني أو تحقيقات التنميط الجيني واستخدامها في الأمثلة الموضحة هنا. في بعض الأمثلة؛ يمكن الحصول على قالب / مستهدف الأحماض النووية 36 كأجزاء من واحد أو أكثر من الأحماض النووية الأكبر. يمكن إجراء التجزئة باستخدام أي مجموعة متنوعة من التقنيات المعروفة في المجال Lay في ذلك؛ على سبيل المثالء الإرذاذ أو الموجات الصوتية sonication أو sla al الكيميائي chemical cleavage أو الانقسام ا لأنزيمي enzymatic cleavage 15 أو القص الطبيعي. قد ينجم التفتت أيضًا عن استخدام تقنية تضخيم معينة تنتج النسخة عن طريق نسخ gia فقط من حمض نووي أكبر. على سبيل المثال» ينتج تضخيم تفاعل سلسلة البوليميريز شظايا لها حجم محدد بواسطة طول تسلسل النوكليوتيدات على القالب الأصلي الذي يقع بين المواقع التي يتم فيها تهجين البادئات المرفقة flanking primers أثناء التضخيم. (Sa أن يكون لمجموع قالب /مستهدف الأحماض النووية 36؛ أو نسخة منهاء متوسط طول 0 حبل مرغوب فيه أو مناسب لتطبيق معين من الطرق أو المجموعات أو النظام 30 المبين هنا. على سبيل المثال» يمكن أن يكون متوسط طول الشريط أقل من حوالي 100.000 نيوكليوتيد» أو 0 نيوكليوتيد» أو 10000 نيوكليوتيد» أو 5000 نيوكليوتيد» أو 1000 نيوكليوتيد» أو 500 نيوكليوتيد» أو 100 نيوكليوتيد؛ أو 50 نيوكليوتيد. بشكل بديل أو إضافي؛ يمكن أن يكون متوسط طول الحبل أكبر من حوالي 10 نيوكليوتيد» 50 نيوكليوتيد» 100 نيوكليوتيد؛ 500 نيوكليوتيد؛ 5 1000 نيوكليوتيد» 5000 نيوكليوتيد» 10000 نيوكليوتيد» 10000 نيوكليوتيد. يمكن أن يتراوح
متوسط طول الشريط لمجموعة من الأحماض النووية المستهدفة» أو نسخة منهاء في نطاق يتراوح بين الحد الأقصى والحد الأدنى للقيمة الموضحة أعلاه. في بعض الحالات؛ يمكن إنتاج مجموعة من قوالب / مستهدفات الأحماض النووية 36 في ظل ظروف أو تهيئتها بطريقة (aT بحيث يكون لأعضائها الحد الأقصى للطول. على سبيل المثال؛ يمكن أن يكون الحد الأقصى للطول للأعضاء أقل من حوالي 100.000 نيوكليوتيد؛ أو 50000 نيوكليوتيد» أو 10000 نيوكليوتيد» أو 5000 نيوكليوتيد» أو 1000 نيوكليوتيد؛ أو 500 نيوكليوتيد؛ أو 100 نيوكليوتيد؛ أو 50 نيوكليوتيد. بشكل بديل أو إضافي؛ يمكن إنتاج مجموعة من قوالب الأحماض النووية 36 أو نسخة منهاء في ظل ظروف أو تكوينها بطريقة أخرى بحيث يكون لأعضائها الحد الأدنى للطول. على سبيل المثال؛ يمكن أن يكون الحد الأدنى للطول للأعضاء 0 أكثر من حوالي 10 نيوكليوتيد» أو 50 نيوكليوتيد» أو 100 نيوكليوتيد؛ أو 500 نيوكليوتيد؛ أو 0 نيوكليوتيد؛ أو 5000 نيوكليوتيد؛ أو 10000 نيوكليوتيد؛ أو 10000 نيوكليوتيد. يمكن أن يكون الحد الأقصى والحد الأدنى لطول السلسلة للأحماض النووية للقالب 36 في مجموعة ما بين الحد الأقصى والحد الأدنى للقيمة الموضحة أعلاه. كما هو مبين في الشكل 2؛ Gla قالب الحمض النووي 36 (على سيل المثال؛ حبل حمض 5 الديوكسي رببونيوكليك المفرد) المراد تسلسله مرتبط بالبوليميريز 26 بعد إدخاله في مائع مع أو بفصله عن الكواشف, مثل النيوكليوتيدات المُعلّمة 10 الموصوفة سابقا (لا يظهر في الشكل 2). قد يكون قالب الحمض النووي 36 و / أو الكواشف (على سبيل (Jal النيوكليوتيدات المُعلّمة 10( موجودًا في السائل وبتم إدخاله في خلية التدفق 34. قد يحتوي السائل على محلول منظم منخفض الملح. على سبيل المثال؛ قد يشمل المحلول المنظم المنخفض الملح من أكبر من 0 ملم 0 إلى حوالي 50 ملم من الملح. على سبيل المثال؛ قد (ging المحلول المنظم ذي الملح المنخفض على ما يصل إلى 5 مم “148 في المحلول المنظم تريس (الرقم الهيدروجيني 8.0). قد يكون استخدام محلول منظم منخفض الملح أمرًا مرغويًا فيه حتى لا تتأثر منطقة الاستشعار 31 (أي طول ديباي) (lla أي أنها ليست طويلة جدَّا بحيث تمنع استشعار علامات الشحن 18. قد يشتمل السائل أيضًا على محفزات؛ Jie الإنزيمات؛ التي تسهل (deli) والإضافات (AY) والمذيبات 5 (مثل الماء وثنائي ميثيل سلفوكسيد dimethyl sulfoxide (01150)؛ والبيتين cbetaine والفورماميد formamide وما إلى ذلك).
في بعض الأمثلة؛ يمكن استخدام العديد من النيوكليوتيدات المُعلِّمة 10 المختلفة معًا في السائل الذي يتم تقديمه إلى مستشعر الشحن 35. في هذه الأمثلة؛ يجب أن يكون من المفهوم أن جزيء Lal 14؛ 14 قد يكون مطابقًا لجميع أنواع النيوكليوتيدات المُعلّمة؛ أو يمكن أن يكون مختلفا. يمكن تغيير خصائص جزيء الربط 14؛ 14؛ مثل الطول والصلابة؛ للتأثير على معدل تفاعل الأكسدة والاختزال. يمكن ضبط هذه الخواص بشكل منفرد من أجل التكليوتيد المُعلّم 10 وعلامة الشحن المرتبطة بنشاط الأكسدة والاختزال 18. يمكن Lad تغيير خصائص منطقة الخصوصية 4 من جزيء الربط 14 للتأثير على معدل تفاعل الأكسدة. يمكن تغيير جزيء الربط 14( 14 sal أو تقليل مقدار الوقت الذي تكون فيه علامة شحنة 18 الأكسدة النشطة على مقرية من القناة الموصلة كهربائيًا 32. (Sarg استخدام هذه التعديلات للتأثير على معدل نقل الإلكترون. عند 0 القيام بذلك؛ يمكن جعل التداخل العابر بين علامة call 18 والقناة الموصلة كهربائيًا 32 من النيوكليوتيدات المُعلّمة 10 المنتشرة أقل احتمالًا لنقل الإلكترون. بدلاً من ذلك؛ يمكن أن يؤدي الاحتفاظ بعلامة شضحنة تفاعل الاختزال والأكسدة dda ail) 18 لفترة أطول على مقرية من القناة
الموصلة كهربائيًا 32 إلى زيادة احتمال نقل الإلكترون. في مثال واحد؛ يتم استخدام أربعة نيوكليوتيدات معلمة 10 مختلفة في السائل الذي يتم تقديمه إلى 5 مستشعر الشحن 35 يتضمن كل منها نيوكليوتيد مختلف 12 (بشكل ald قاعدة مختلفة 20( وشحنة أخرى نشطة لتفاعل الاختزال والأكسدة 18. مثال على ذلك في الشكل 3. في هذا (Jad) تتضمن النيوكليوتيدات المُعلّمة 10: النيوكليوتيد الأول المُعلِّم 8.10 بما في ذلك بولى فوسفات الديوكسي نادينوسين deoxyadenosine polyphosphate باعتباره نيوكليوتيد وأول شحنة لها نشطة لتفاعل الاختزال والأكسدة خاصة بالنيوكليوتيدات (موضح مع أربع شحنات موجبة في الشكل 3)؛ و النكليوتيد الثاني المُعلّم 10 6 بما في ذلك الفوسفات ديوكسي جوانوسين deoxyguanosine polyphosphate كنوكليوتيدات وعلامة شحتة Jeli الاختزال والأكسدة خاصة بالنوكليوتيدات (موضح مع أربع شحنات سالبة في الشكل 3)؛ النوكليوتيد الثالث المُعلَّم 010 بما في ذلك متعدد فوسفات ديوكسيسيتيدين deoxyceytidine polyphosphate على أنه نيوكليتيد وعلامة شحنة ثانية لتفاعل الاختزال والأكسدة خاصة بالنوكليوتيدات (تظهر مع شحنتين سالبتين في الشكل 3)؛ 5 والنيوكليوتيد الرابع المُعلّم بما في ذلك متعدد فوسفات ديوكسي تاي ميدين deoxythymidine polyphosphate على أنه نيوكليتيد وعلامة شحنة رابعة لتفاعل الاختزال والأكسدة الخاص
بالنيوكليوتيدات (موضح بشحنة موجبة واحدة في الشكل 3). في هذا المثال؛ تختلف علامات الشحن النشط salad الأكسدة الخاصة بتفاعل الاختزال والأكسدة الأولى والثانية والثالثة والرابعة عن بعضها البعض. في المثال الموضح في الشكل 3؛ يتم شحن اثنين من علامات شحن الاختزال والأكسدة الأولى والثانية والثالثة والرابعة الخاصة بالنيوكليوتيدات بشحنة موجبة (على سبيل المثال» داي أوكسي أدينوسين ثلاثي الفوسفات (dATP) Deoxyadenosine triphosphate و داي أوكسي ثيميدين ثلاثني الفوسفات ((ATTP) Deoxythymidine triphosphate في حالة الشحن المعدلة (أي ؛» بعد حدوث تفاعل الأكسدة والاختزال)؛ aig شحن الاثنين الآخرين من علامات الشحن النشط لتفاعل الاختزال والأكسدة الأولى والثانية والثالثة والرابعة الخاصة بالنيوكليوتيدات (على سبيل (JE داي أوكسي 0 جوانوسين ثلاثي الفوسفات (dGTP) Deoxyguanosine triphosphate و داي أوكسي سيتدين ثلاثي الفوسفات Deoxycytidine triphosphate (1617)) بشحنة سالب في حالة الشحن المعدل (أي بعد حدوث تفاعل الختزال والأكسدة). في المثال الموضح في الشكل 3,؛ على الرغم من أن الشحنات على اثنين من علامات الشحن النشط لتفاعل الاختزال والأكسدة الخاص بالنوكليوتيد هي نفسها (موجبة أو سالبة)؛ لا يزال من 5 الممكن استخدام العلامات 18 لتمييز الأنواع المختلفة من النيوكليوتيدات لأن الشحنات لها نقاط قوة مختلفة (على سبيل المثال؛ بعد تنشيط تفاعل الاختزال والأكسدة). يوفر المثال التوضيحي الموضح في الشكل 3 تمييزًا لأريع حالات استنادًا إلى موضع تهجين حبل واحد وأربع علامة للشحنة النشطة لتفاعل الاختزال والأكسدة 18 . على وجه التحديد» تحتوي كل من داي أوكسي جوانوسين ثلاثي الفوسفات و داي أوكسي سيتدين ثلاثي الفوسفات على علامات شحن سالبة لتفاعل الاختزال 0 والأكسدة 18 والتي تميزها عن داي أوكسي أدينوسين ثلاثي الفوسفات و داي أوكسي ثيميدين ثلاثي الفوسفات ؛ و داي أوكسي جوانوسين ثلاثي الفوسفات يمكن تمييزهما عن داي أوكسي سيتدين ثلاثي الفوسفات بسبب شحنة of بشكل مميز عن الشحنة على داي أوكسي سيتدين ثلاثي الفوسفات. cially يمكن تمييز داي أوكسي أدينوسين ثلاثي الفوسفات و داي أوكسي ثيميدين ثلاثي الفوسفات عن بعضهما البعض بسبب الشحنة الموجبة العالية في مجموعة داي أوكسي 5 أدينوسين DE الفوسفات مقارنة بمجموعة داي أوكسي ثيميدين ثلاثي الفوسفات .
في بعض الأمثلة؛ قد لا يكون من الممكن وجود علامات شحن نشطة لتفاعل اختزال وأكسدة 18 من كل من المقاييس الموجبة والسالبة التي تعمل في نفس المائع؛ لأن الجهد المطلوب cal العلامة السالبة قد يؤدي إلى تفريغ علامة موجبة؛ والعكس صحيح. على هذا النحو؛ في أمثلة أخرى؛ قد يكون من المستحسن استخدام أمثلة للنيوكليوتيدات المُعلّمة 10 التي تم الكشف عنها هنا والتي تشمل علامات الشحن النشطة لتفاعل الاختزال والأكسدة 18 من قطبية واحدة؛ واستخدام النيوكليوتيدات الأخرى التي تحمل علامات والتي تشمل علامات الشحن الدائم (أي بدون الأكسدة والاختزال). تتضمن أمثلة العلامات المشحونة بشكل دائم علامات الشحن السالبة؛ على سبيل المتال» مجموعة الفوسفات و / SUS ميثيل تريبتامين (DMT) Dimethyltryptamine و | أو فلورينيل ميثيلوكسي كريونيل (FMOC) Fluorenylmethyloxycarbonyl ؛ أو العلامات المشحونة 0 الموجبة؛ Jie أمين الأساسي. على سبيل المثال؛ يمكن استخدام من واحدة إلى ثلاثة نيوكليوتيدات مختلفة تحمل علامات 10 (بما في ذلك علامات الشحن النشطة لتفاعل الاختزال والأكسدة 18 )؛ ويمكن أن يشضمل ما تبقى من النيوكليوتيدات التي تحمل علامات مشضحونة بشكل دائم وليس علامات الشحن النشطة لتفاعل الاختزال والأكسدة 18 . وبفيد ذلك على وجه التحديد خاصة في حالة استخدام حالات الاختزال أو الأكسدة (ولكن ليس كلاهما). يجب أن يكون مفهوما أن التكتل 5 لا يجب أن يحدث في هذه الحالات؛ لأنه لا يوجد تركيز عالي Les لجزيئات كبيرة من كلا النوعين من الشحنة في المحلول في نفس الوقت. يوضح الشكل 3 أيضًا منطقة الاستشعار 31 (المنطقة المظللة حول البوابة 6 / القناة الموصلة Wiles 32). يمكن تشغيل مستشعرات الشحنة 35 في ظروف dalle ذات صلة بيولوجيًا؛ على سييل JO) في حدود حوالي 1 مم إلى حوالي 100 مم. قد يتراوح طول فحص ديباي لمحاليل 0 الملح هذه بين حوالي 0.3 نانومتر وحوالي 10 نانومتر؛ مما قد يحد من منطقة الاستشعار 31 إلى بضعة نانومتر خارج سطح البوابة 6 وغالبًا ما يقلل مستويات الإشارة إلى حد الكشف. في حين أن العديد من البوليميراز المربوطة 28 معروضة على القناة الموصلة كهربائيًا 32 في الشكل 3؛ من المفهوم أنه في مستشعر شحنة معين 35؛ يتم ربط بوليميريز 28 واحد بقناة واحدة موصلة كهربائيًا 32. على هذا النحو؛ يوضح المثال الموضح في الشكل 3 البوليميراز 28 خلال 5 أربعة أحداث مختلفة لدمج النوكليوتيدات؛ والتأثير على علامات الشحن المختلفة لنشاط الأكسدة والاختزال 18 خلال أحداث الدمج ذات الصلة.
بالإشارة الآن إلى الشكل 4؛ تم توضيح مثال للطريقة. تتضمن الطريقة 100 إدخال قالب حمض نووي 36 لقناة موصلة كهربائيًا 32 لها بوليميريز 26 مرتبط بها (مرجع رقم 102)؛ إدخال التكليوتيد idl 10 إلى القناة الموصلة كهربائيًا 32( واحد على الأقل من النكليوتيد aid) 10 بما في ذلك النوكليوتيدات 12 و علامة الشحنة النشطة لتفاعل الاختزال والأكسدة 18 المرتبطة بهاء حيث يرتبط أحد النكليوتيدات المُعلِّمة 10 بالبوليميريز 26 ( مرجع الرقم 104)؛ أثناء ارتباط أحد التكليوتيدات المُعلّمة 10 يبدا تفاعل الاختزال والأكسدة بين علامة الشحنة النشطة لتفاعل الاختزال والأكسدة الخاصة بالنيوكليوتيد 18 والقناة الموصلة كهريائياً 32 لتغيير حالة شحن علامة الشحنة dla all لتفاعل الاختزال والأكسدة الخاصة بالنيوكليوتيدات 18 (المرجع رقم 106)؛ واستجابة لتفاعل الاختزال المؤكسد؛ الكشف عن استجابة مستشعر الشحنة 32 (مرجع رقم 108). سيتم 0 الرجوع إلى الشكل 515 كب أيضًا أثناء مناقشة الطريقة 100. كما هو مبين في الشكل أ قد يتم الاحتفاظ بقالب الحمض النووي 36 المقدم إلى مستشعر الشحن 32 في مكانه بواسطة بوليميراز 26 المرتبط بمستشعر الشحن 32. قالب الحمض النووي 36 الموضح في الشكل 15 قد يكون حبل لحمض الديوكسي رببونيوكليك. أيضًا كما هو موضح في الشكل 5أ؛ قد يتضمن النكليوتيد dled 10 قاعدة 20 مكملة للحمض 5 النووي المستهدف لقالب الحمض النووي 36. سيتم تعليق النوكليوتيدات 10 في مكانهاء Wha بواسطة البوليميريز 26 المرتبط أيضًا بقالب الحمض النووي 36. في حالة وجوده؛ قد تتفاعل منطقة خصوصية 24 من جزيء الربط 14 للنيوكليوتيد bead) 10 مع الحبل 28. يظهر الشكل 5 ب مثال على النكليوتيد Aled 10 المرتبطة بالحبل 28. في هذا Jal يشتمل جزيء الربط 14 للنيوكليوتيد 10 المُعلِّم على منطقة الخصوصية 24 (على سبيل المثال» B (A eo 0 ©) التي لها صلة بجزءِ Je) سبيل المثال» (CB A من الحبل 28. في هذا المثال بالذات؛ تشضتمل منطقة الخصوصية 24 (على سبيل المثال» ' ه؛ '8؛ © ') على النيوكليوتيدات أو الأحماض النووية الببتيدية التي تكون مكملة للنيوكليوتيدات أو الأحماض النووية الببتيدية للجزء (على سبيل المثال؛ (CB A من الحبل 28. في مثال آخر؛ قد تكون منطقة الخصوصية 24 ومنطقة المستقبل في الحبل 28 عبارة عن أنواع غير حمض نووي لها صلة ببعضها البعض. في JB 5 آخرء قد تكون منطقة الخصوصية 24 عبارة عن مجموعة حمض غير نووي لها صلة بالبوليمر غير المتآلف مع الماء (مثال على الحبل 28). الربط المحدد بين هذه المناطق يمكن أن
ينتج عن إقران قاعدة Watson-Crick القياسي ٠ يمكن أن تشتمل منطقة الخصوصية 24؛ في هذا المثال؛ Load على إينوزين )1( يحيط بسلسلة النوكليوتيدات A و 3 و ©. الإينوسينات هي قواعد عامة؛ وبالتالي يمكن أن تقترن بجميع النوكليوتيدات الأربعة الأصلية من الحمض النووي. على هذا «sail يمكن أن تحدث تفاعلات ربط إضافية من تفاعلات القواعد العامة (على سبييل (Jha 5 إينوزين (I مع النيوكليوتيدات الأصلية على الحبل 28. وهكذاء Lovie يرتبط النوكليوتيد lal) 10 بالبوليميريز 26 أثناء التأسيس؛ يحدث الربط التأزري بين منطقة الخصوصية 24 من النوكليوتيد Heal 10 والرباط 28 مما يزيد بشكل كبير من استقرار التفاعل بين النكليوتيد المُعلّم 10 Lally 28 عندما لا يشتمل جزيء الربط 14 من النوكليوتيد abel) 10 على المنطقة المحددة 24 يجب أن 0 يكون مفهوما أن النوكليوتيدات 10 الموصوفة ستوضع في مكانها عن طريق التفاعل مع البوليميريز 26. طول جزيء Tal 14 يمكن أن يساعد في التأكد من أن علامة Gaal ذات الأكسدة النشطة 18 محتفظ بها داخل منطقة الاستشعار 31 من البوابة 6 / القناة الموصلة كهربائيًا 32. يتسبب التفاعل بين النكليوتيد abel) 10 والبوليمريز 26 أو بين النكليوتيد dad 10 والبوليمريز 26 والرياط 28 في أن تأتي شحنة الاختزال والأكسدة النشطة 18 داخل منطقة الاستشعار 31 للقناة الموصلة كهريائيًا 32. يساعد Jeli) (التفاعلات) أيضًا في الحفاظ على علامة شحنة تفاعل الاختزال والأكسدة النشطة 18 في منطقة الاستشعار 31 لفترة كافية لنقل الشحنة بشكل فعال وكامل. قد يصل الوقت إلى عشضرات الميلي ثانية. يختلف هذا التفاعل الطويل نسبيًا عن التكليوتيدات الأخرى المُعلّمة 10 الموجودة في المحلول؛ والتي قد تنتشر وتلمس القناة الموجّهة 0 كهربائيًا لفترة وجيزة 32. هذا التفاعل ليس Ssh بما يكفي لنقل Ain al) الكافي؛ وبالتالي في هذه cc al) تكون علامة شحنة الاختزال والأكسدة النشطة 18 غير مشحونة ولا يتم الكشف عن أي استجابة بواسطة مستشعر الشحن 32. في المثال الموضح في الشكل 5أ؛ تدخل علامة شحنة النشط لمادة الأكسدة والاختزال التشضط لفثالوسيانين 18 من النكليوتيدات المُعلّمة.مجالًا le) سبيل المثال؛ منطقة الاستشعار 31) التي 5 تقع من حوالي 1 نانومتر إلى حوالي 2 نانومتر من قناة موصلة كهربيا 32. نظرًا لأن النوكليوتيد
laid 10 مثبت في مكانه؛ فإن Ale الشحن 18 النشطة في الأكسدة في وضع يمكنها من شحنها بواسطة البوابة 6 / القناة الموصلة كهربائيًا 32. لبدء تفاعل الاختزال والأكسدة بين البوابة 6 / القناة الموصلة كهربائيًا 32 (على سبيل المثال؛ أسلاك السيليكون النانوية؛ الأنابيب النانوية الكريونية؛ وما إلى ذلك) وعلامة الشحنة النشطة لتفاعل الأكسدة والاختزال 18؛ الجهد المطبق على البوابة 6 / القناة الموصلة كهربائياً 32 يمكن ضبطها على جهد أكسدة أو جهد اختزال Akal شحنة نشاط الأكسدة والاختزال 18. عند التأكسد؛ تفقد علامة الشحنة النشطة لتفاعل الاختزال والأكسدة 18 الإلكترونات»؛ وبالتالي تخلق البوابة 6 / القناة الموصلة كهربائياً 32 شحنات موجبة صافية لعلامة شحنة تفاعل الاختزال والأكسدة النشطة 18. في حالة الاختزال» تكتسب علامة شحنة تفاعل الاختزال والأكسدة النشطة 18 (Gg p< وبالتالي 0 فإن البوابة G / القناة الموصلة كهربائياً 32 تحقن شحنة سالبة صافية في علامة شحنة الاختزال المؤكسد والاختزال 18. نتيجة تفاعل الاختزال والأكسدة؛ يتم تغيير Alla علامة شحنة الاختزال المؤكسد والاختزال 18. تؤدي هذه الحالة المشحونة للغاية ذات التغير الكبير (على سبيل المثال؛ مقارنة بحالة علامة الشحنة النشطة لتفاعل الأكسدة والاختزال 18 قبل الشحن؛ وهي الحالة غير المؤكسدة أو غير المختزلة) إلى اضطراب الحقل حول القناة الموصلة كهربائيًا 32 وتنتج إشارة 5 يمكن اكتشافها. قد يعتمد الجهد المطبق على القناة الموصلة كهربائياً 32 أثناء تفاعل الاختزال والأكسدة وأثناء الكشف على علامة dias تفاعل الاختزال والأكسدة النشطة 18 التي يتم استخدامها. على سبيل المثال؛ قد يكون جهد الشحن مختلقًا عن جهد القراءة؛ وبالتالي فإن قناة التوصيل بالكهرياء 32 قد تتغير بين جهد الشحن وجهد القراءة. في «Jie ينطوي بدء تفاعل الاختزال والأكسدة على تطبيق جهد شحن على القناة الموصلة كهربائيًا 32 واكتشاف استجابة القناة الموصلة كهربائيًا 32 يتضمن تطبيق قراءة الجهد على القناة الموصلة كهربائيًا 32. تشير استجابة القناة الموصلة كهربائيًا 32 بعد Jeli الاختزال والأكسدة إلى حالة الشحن المتغيرة لعلامة شحن تفاعل الأكسدة والاختزال 18. قد تكون استجابة القناة الموصلة كهربائيًا 32 بعد تفاعل الاختزال والأكسدة مؤشرا على القاعدة 20 من النوكليوتيد ail 10 لأن علامة Lad 5 تفاعل الاختزال والأكسدة النشطة 18 هي خاصة بالنيوكليوتيدات (أي؛ يتم تحديد علامة محددة 18 لقاعدة محددة 20). على هذا النحو؛ قد تتضمن الطريقة 100 أيضًا ربط استجابة القناة الموصلة
كهربائيًا 32 بعلامة الشحنة النشطة لتفاعل الاختزال والأكسدة الخاصة بالنيوكليوتيد 18 المرتبط بالنيوكليوتيدات المُعلّمة 10 (أيء النكليوتيد aaa 10 المرتبط ببوليميراز 26)؛ واستناداً إلى علامة 8 من الشحنة المشبعة لنشاط الأكسدة والاختزال الخاصة بالنيوكليوتيد؛ تحديد النوكليوتيدات (على سبيل (JU القاعدة 20( من النكليوتيد Aled) 10 (مثل النوكليوتيد pad 10 المرتبطة بالبوليميريز 26).
سيتم دمج القاعدة 20 من النوكليوتيد 10 المصاحب المرتبط في حبل ناشئ 38 والذي يتم تهجينه إلى قالب الحمض النووي 36. وهذا بدوره سوف يكسر الرابطة بين مجموعة الفوسفات 16 من النوكليوتيدات 10 والقاعدة النيوكليوتيدية المُدمجة حديثًا 20. على سبييل المثال؛ بعد دمج قاعدة النيوكليوتيد 20 في الحبل الناشضيء 38 فإن الرابطة بين فوسفات ألفا وجزيء Tal 16 أو بين 0 فوسفات ألفا وفوسفات بيتا يتم محوها بشكل طبيعي. ونتيجة لذلك؛ فإن ما تبقى من النكليوتيد ales 10 (على سبيل المثال؛ المكونات 14 أو 14 'و 18) تصبح حرة الانفصال عن قاعدة النيوكليوتيد 20 والتحرك بعيدًا عن القناة الموصلة كهربائيًا 32( وبالتالي إعادة الحقل حول القناة الموصلة كهربائيًا 32 إلى الحالة التي كانت عليها قبل ربط التكليوتيد dad) 10 مع البوليميريز 6. واختفاء وظهور الإشارة بحيث يكون الحقل المحيط بالقناة الموصلة كهربائياً 32 مضطرب 5 ويعود إلى الحالة غير المضطرية؛ على (sill يمكن أن يرتبط مع دمج قاعدة النيوكليوتيد 20 في الحبل الناشيء 38 لقالب الحمض النووي 36. على هذا النحو؛ تشمل أمثلة الطريقة 100 أيضًا شطر (على سبيل المثال» في مجموعة الفوسفات 16( علامة الشحنة النشطة لتفاعل الاختزال والأكسدة 18 وجزيء Jal) 14 14 "من النكليوتيد المُعلَّم 10 المرتبط» حيث يتم دمج قاعدة النيوكليوتيد 20 من النوكليوتيدات 10 المرتبطة في حبل ناشيء 38 مكمل للحمض النووي للقالب 0 36. قد ينطوي الشطر على انتظار حدوث شطر طبيعي. نظرًا لأن الإشارة تعود إلى حالة أساسية القواعد المتعاقبة للنيوكليوتيد المُعلَّم 20 من الممكن اكتشضاف الأجزاء المتجانسة داخل الحبل
الناشيء 38 على طول حبل القالب 36. بعض الأمثلة التي تم الكشف عنها هنا تستغل الارتباط التآزري للنيوكليوتيد eal) 10 للبوليميريز 26 بمفرده أو بالاقتران مع الحبل 28؛ من أجل إحضار وتعليق علامة الشحنة ذات الأكسدة 5 والاختزال 18 على مقرية من منطقة الاستشعار 31 من القناة الموصلة كهربائيًا 32. يمكن أن يكون استقرار المجمع المكون بين الحبل 28 ومنطقة الخصوصية 24 منخفضًا laws بحيث لا
يتشكل المجمع (بين منطقة الخصوصية 24 والرباط 28( بالنسبة للنيوكليوتيدات المُعلّمة 10 والتي لا يرتبط أيضًا بالبوليميريز 26 (أي أن النيوكليوتيدات المُعلّمة 10 والتي تكون حرة في المحلول لا ترتبط بشكل كبير بالرياط 28). بمعنى آخرء يمكن أن يكون معدل إيقاف تشغيل المجمع مرتفعًا بدرجة كافية بحيث يكون العمر قصيرًا. ومع ذلك؛ عندما يتم تكوين ارتباط مستقر بين النكليوتيد Jal 5 10 والبوليمريز 26 يزداد التركيز المحلي لجزيء الربط 14 14 "حول الحبل 28؛ مما يؤدي إلى ارتفاع معدل منطقة الخصوصية 24 إلى الحبل 28. وبهذه الطريقة؛ يزداد بشكل كبير وقت الارتباط الكلي في الحالة المرتبطة بالبوليميريز للنيوكليوتيدات المُعلّمة 10 مقارنة بالحالة غير المرتبطة بالنيوكليوتيدات الحرة 10. التأثير التأزري للارتباطات بالنيوكليوتيدات المُعلّمة 10 بالنسبة للبوليميريز 30؛ بمفرده أو بالاقتران مع الحبل 28 يتيح تقارب الريط الكلي بشكل عام. بعد الشطر 0 الطبيعي للبوليميريز 26 بعد دمج قاعدة النيوكليوتيد 20 يتم فقد التأثير التأزري وتتفصسل علامة الشحن 18 أيضًا عن القناة الموصلة كهربائيًا 32. في مثال الطريقة 100( ربط واحد من النيوكليوتيدات المُعلّمة 10 مع البوليميريز 28 ؛ ويدء تفاعل الأكسدة والاختزال» والاكتشضاف»؛ day الاستجابة؛ وتحديد قاعدة النوكليوتيدات المدمجة 20 معًا تشكل جميعها دورة التسلسل. قد تشتمل الطريقة 100 Wad على إجراء دورة تسلسل أخرى مع نيوكليوتيدات أخرى تحمل علامات 10 Ally ترتبط بالبوليميريز 26. قد يشمل أداء دورة التسلسل التالية السماح لواحدة من النيوكليوتيدات المُعلّمة 10 بالريط مع بوليميريز 26؛ في حين يرتبط الجزء التالي من النيوكليوتيدات المُعلّمة 10( يبدا تفاعل اختزال وأكسدة آخر بين علامة شفحنة الاختزال والأكسدة الخاصة بالنيوكليوتيد 18 ومستشعر الشحنة 32 لتغيير حالة علامة شحنة الاختزال والأكسدة النكليوتيدية 18؛ استجابة لتفاعل اختزال وأكسدة OAT يتم اكتشاف استجابة 0 أخرى لمستشعر الشحنة 32؛ ربط الاستجابة الأخرى لمستشعر الشحن 32 بعلامة الشحن النشط الأخرى لتفاعل الأكسدة والاختزال؛ وبناءً على العلامة 18 الأخرى لشضحنة الأكسدة والاختزال الخاصة بالنيوكليوتيد» تحدد النيوكليوتيدات (القاعدة 20) للنيكليوتيد التالي من النيوكليوتيدات المُعلّمة 10 (على سبيل المثال؛ المرتبطة بالبوليميريز 26). يمكن شطر علامة الشحن النشطة الخاصة بتفاعل الاختزال والأكسدة الآخر ¢ ang دمج النيوكليوتيد (قاعدة 20) من النوكليوتيدات 5 المعلمة 10 في الحبل الناشيء 38 المكمل لقالب الحمض النووي 36. يمكن تكرار دورة التسلسل.
في الأمثلة التي تم الكشف عنها هناء يمكن أيضًا استخدام شكل موجي. يمكن رصد الشكل الموجي لتحديد متى يصل إلى واحد أو أكثر من حد الجهد لإمكانية تنفيذ الاختزال والأكسدة لعلامات الشضحن (18) lly لها إمكانات مختلفة في تفاعل الاختزال والأكسدة. في هذه الحالات؛ يمكن استخدام التغير في التيار الناتج من خلال البوابة 6 / القناة الموصلة كهربائياً 32 كمعلومات لتحديد القاعدة 20 للنيوكليوتيد المُعلَّم 10 بما في ذلك علامة الشحن لتفاعل الأكسدة والاختزال 18 المرتبطة بحد الجهد المحدد. في الأمثلة التي تم ca al عنها هناء يمكن أيضًّا مراقبة عدد الإلكترونات المنقولة إلى أو من علامة الشحن النشطة لتفاعل الأكسدة والاختزال. يمكن استخدام عدد الإلكترونات المنقولة لتحديد قاعدة النيوكليوتيد 20 المرتبطة بالبوليميراز 26 وأن padded) 26 يدمج في الحبل الناشيء 38. يمكن استخدام النيوكليوتيدات المُعلّمة 10 والنظام 10 التي تم الكشف عنها هنا لأي من التطبيقات المتنوعة. كما هو موضح في الأشكال 4 و 5 أ و 5 ب؛ هناك تطبيق مفيد بشكل خاص لمتوالية الحمض النووي» Jie التخليق الجزيئي الفردي بالتسلسل sequencing-by-synthesis (535). في جزيء واحد التخليق الجزيئي الفردي بالتسلسلء تتم مراقبة امتداد التمهيدي للحمض النووي على طول قالب الحمض النووي 36 (مثل الحمض النووي المستهدف أو نسخة منه) لتحديد متوالية 5 النيوكليوتيدات في القالب 36. (Sa أن تكون العملية الكيميائية الأساسية البوليميريز (على سبيل (JU كما يحفزه إنزيم بوليميريز 26 كما هو موصوف هنا). في مثال التخليق الجزيئي الفردي بالتسلسل على جزيء واحد قائم على البوليمريز؛ تتم إضافة النيوكليوتيدات le) سبيل المثال؛ القواعد 20) إلى التمهيدي (وبالتالي تمديد التمهيدي وتشكيل حبل ناشضئ 38) بطريقة تعتمد على القالب مثل اكتشاف ترتيب ونوع النيوكليوتيدات تضاف إلى التمهيدي La يتيح الاستخدام لتحديد 0 تسلسل القالب. يمكن إخضاع عدد وافر من القوالب المختلفة 36 في قنوات مختلفة موصلة كهربائياً 32 من تقنية التخليق الجزيئي الفردي بالتسلسل الجزيئية الفردية في ظل ظروف يمكن فيها تمييز الأحداث التي تحدث لقوالب مختلفة 36 بواسطة كاشفات فردية متصلة عملياً بكل قناة موصلة كهربائياً 32. يمكن وضع كل قناة موصلة كهربائياً 32 (ومحطات مصدرها وتصريفها 5؛ 0) داخل تجويف أو عين خلية التدفق؛ مما يساعد على عزل قناة واحدة 32 Gale عن قناة مجاورة 32 5 في صفيف.
تشتمل التطبيقات المناسبة الأخرى للنيوكليوتيدات المُعلّمة 10( والمجموعة؛ والنظام 30 التي تم الكشف عنها هنا على التسلسل حسب الارتباط والتسلسل حسب التهجين. هناك تطبيق مفيد DAT للنيوكليوتيدات المُعلّمة 10 والنظام 30 الذي تم الكشف die هنا وهو تحليل التعبير الجيني. يمكن اكتشاف التعبير الجيني أو قياسه باستخدام تقنيات متوالية حمض نووي ريبوزي ؛ كتلك التي يشار إليها باسم متوالية حمض نووي رببوزي. يمكن إجراء تقنيات متوالية حمض نووي (Sis) باستخدام منهجيات التسلسل المعروفة في المجال مثل تلك المبينة أعلاه باستثناء أنه يمكن استبدال الكشف عن ومضان النيوكليوتيدات المُعلّمة بصريًا بطرق الكشف القائمة على الشحن الموضحة هنا. يمكن أيضًا اكتشاف التعبير الجيني أو القياس الكمي باستخدام تقنيات التهجين التي تتم عن Gob التهجين المباشر إلى صفيف أو باستخدام اختبار تعدد الإرسال؛ يتم اكتشاف منتجاته على صفيف. 0 يمكن تكييف هذه الطرق بسهولة عن طريق استبدال الملصقات dyad) واكتشاف التألق باستخدام تقنيات الكشف القائمة على الشحن؛ وعلامات الشحن ذات الأكسدة والاختزال 18 الموضحة هنا. يجب تقدير أن جميع المفاهيم السابقة والمفاهيم الإضافية التي تتم مناقشتها بمزيد من التفصيل أدناه (شريطة ألا تكون هذه المفاهيم غير متسقة بشكل تبادلي) تعتبر جزءًا من الموضوع الابتكاري الموضح هنا. على dag الخصوص؛ تعتبر جميع الموضوعات المذكورة في عناصر الحماية والتي 5 تظهر في نهاية هذا الكشف جزءًا من الموضوع الابتكاري الموضح هنا. يجب أن ندرك Lal أن المصطلحات المستخدمة بشكل صريح في هذه الوثيقة والتي قد تظهر أيضًا في أي كشف مدرج بالإشارة يجب أن يمنح معنى أكثر انسجامًا مع المفاهيم المعينة الموضحة هنا. الإشارة عبر المواصفات إلى JE واحد» 'مثال JB AT وما إلى ذلك؛ تعني أن Baie معيئًا (على سبيل المثال» ميزة؛ بنية؛ و / أو خاصية) موصوفة فيما يتعلق بالمثال مضمن في مثال واحد على الأقل موصوف هناء وقد يكون أو لا يكون موجودًا في أمثلة أخرى. بالإضافة إلى cells من المفهوم أن العناصر الموصوفة لأي مثال (Sa دمجها بأي طريقة مناسبة في الأمثلة المختلفة ما لم يفرض السياق خلاف ذلك بوضوح. تُستخدم المصطلحات "بشكل كبير" و "حوالي" المستخدمة خلال هذا الكشف؛ بما في ذلك عناصر الحماية. لوصف التغيرات والاختلافات الصغيرة؛ مثل تلك التي تحدث بسبب الاختلاف في 5 المعالجة. على سبيل المثال؛ يمكن أن تشير إلى أقل من أو تساوي +5 7 مثل أقل من أو تساوي
of 2+ مثل أقل من أو تساوي +1 7 مثل أقل من أو تساوي 0.5 of مثل أقل من أو تساوي + Jia ¢70.2 أقل من أو تساوي + 70.1؛ مثل أقل من أو تساوي 5 10.05. علاوة على ذلك؛ من المفهوم أن النطاقات المقدمة هنا تمل النطاق المحدد وأي قيمة أو نطاق فرعي ضمن النطاق المحدد؛ كما لو أن هذه القيمة أو النطاق الفرعي تم النص عليهما JC 5 صريح. على سبيل (Jil) يجب تفسير النطاق الذي يمثله من حوالي 1 شحنة إلى حوالي 100 شحنة؛ ليس فقط ليشمل الحدود المكررة صراحة من حوالي 1 شحنة إلى حوالي 100 شحنة؛ ولكن أيضًا ليشمل القيم الفردية؛ مثل حوالي 5 شحنة؛ 50 شحنة؛ 75 شحنة؛ وما إلى ذلك؛ ونطاقات فرعية؛ مثل من حوالي 15 شحنة إلى حوالي 85 شحنة؛ إلخ. في حين تم وصف العديد من الأمثلة بالتفصيل؛ فمن المفهوم أنه يمكن تعديل الأمثلة التي تم 0 الكشف عنها. لذلك؛ يعتبر الوصف السابق غير محدود. قائمة التتابع: 2 إذدخال قالب حمض نووي في قناة موصلة كهربائياً بها بوليميراز مرتبط بها 4 إدخال نيوكليوتيدات معلمة إلى القناة الموصلة كهربائياً؛. حيث تشتمل واحدة منها على نيوكليوتيدات معلمة تتضمن نيوكليوتيد وعلامة شحنة نشطة لتفاعل الاختزال والأكسدة الخاص بالنيوكليوتيد المرتبطة بهاء حيث واحدة من النيوكليوتيدات المعلمة ترتبط بالبوليميراز 6 أثناء ربط أحد النيوكليوتيدات المعلمة بدء تفاعل الاختزال والأكسدة بين علامة 5 La نشطة لتفاعل الاختزال والأكسدة نشطة خاصة بالنيوكليوتيد والقناة الموصلة كهريائياً لتغيير حالة شحنة علامة الشحنة النشطة لتفاعل الاختزال والأكسدة الخاص بالنيوكليوتيد 0 108 استجابة لتفاعل الاختزال والأكسدة؛ اكتشاف استجابة القناة الموصلة كهربياً CF نانومتر SS للبوليميراز "ج' أنظر الشكل 5ب ا ا Lad Ade "a" 5 نشطة لتفاعل الاختزال والأكسدة 'و" إلى البوابة
Claims (3)
1. نوكليوتيد المُعلّم nucleotide 1308160 يشمل: نيوكليوتيد nucleotide جزيء ريط متصل linking molecule بمجموعة فوسفات phosphate من النوكليوتيد ¢nucleotide و علامة شحنة نشطة للاختزال والأكسدة redox-active charge tag متصلة بجزيء الريط linking ¢molecule وتتم أكسدة أو اختزال Ade شحنة تفاعل الاختزال والأكسدة redox-active charge tag النشطة بواسطة قناة موصلة كهربائياً electrically conductive channel عند الاحتفاظ بها بالقرب من منطقة استشعار sensing zone للقناة الموصلة كهربائيًاً electrically conductive ¢channel 00 حيث يشتمل جزيء الريط linking molecule على سلسلة ألكيل de gana calkyl chain أميد camide group سلسلة بوتي (إيثيلين جليكول) poly(ethylene glycol) chain وتريازول triazole
2. النيوكليوتيد المُعلّم labeled nucleotide وفقا لعنصر الحماية ]¢ حيث تتضمن علامة شحنة تفاعل الاختزال والأكسدة النشطة redox-active charge tag ذرة معدن منسقة coordinated metal 5 «ماة لتخضع لتفاعل الأكسدة والاختزال redox reaction
3. النيوكليوتيد المُعلّم labeled nucleotide وفقا لعنصر الحماية 1 أو 2 حيث يشتمل جزيء linking molecule SA على منطقة خصوصية متصلة بعلامة شحن الأكسدة والاختزال redox-
.active charge tag
4. النيوكليوتيد المُعلّم labeled nucleotide وفقا لعنصر الحماية 3 حيث تتفاعل منطقة الخصوصية مع منطقة مستقبل acceptor region على حبل مرتبط بالقناة الموصلة كهرياثبًا electrically conductive channel وتشمل منطقة الخصوصية علامة تقارب .affinity tag
5 5. النيوكليوتيد المُعلّم labeled nucleotide وفقا لعنصر الحماية of حيث يتم تهجين منطقة الخصوصية إلى المنطقة المستقبلة على الحبل المرتبط بالقناة الموصلة كهربائياً electrically
«conductive channel وتضمل علامة التقارب affinity tag متوالية النيوكليوتيدات nucleotide sequence التي Jad من نيوكليوتيد nucleotide واحد إلى عشرة نيوكليوتيدات nucleotides أو متوالية حمض نووي ببتيدي peptide nucleic acid sequence تشتمل على من حمض نووي ببتيدي peptide nucleic acid واحد إلى عشرة أحماض نووية ببتيدية -peptide nucleic acids
6. النيوكليوتيد المُعلّم nucleotide 1206160 وفقا لعنصر الحماية 1 حيث: تتضمن علامة شحنة تفاعل الاختزال والأكسدة النشطة redox-active charge tag 10 شحنات أو أقل في حالة غير مؤكسدة أو غير مختزلة؛ و تتضمن علامة شحنة تفاعل الاختزال والأكسدة النشطة redox-active charge tag من 1 شحنة 0 إلى 100 شحنة في حالة مؤكسدة أو مختزلة.
7. النيوكليوتيد المُعلّم labeled nucleotide وفقا لعنصر الحماية 1 حيث تتضمن سلسلة الألكيل alkyl chain 6 ذرات كريون carbon atoms على الأقل. 5 #- النيوكليوتيد المُعلّم labeled nucleotide وفقا لعنصر الحماية 1 حيث تتضمن سسلسلة بولي (إيثيلين جليكول) poly(ethylene glycol) chain 3 وحدات إيثيلين جليكول ethylene glycol على الأقل.
9. طريقة» تشمل: 0 إدخال قالب حمض نووي template nucleic acid إلى قناة موصلة كهريائياً electrically conductive channel تحتوي على بوليميريز polymerase مرتبط به؛ إدخال النيوكليوتيدات المُعلّمة labeled nucleotides إلى القناة الموصلة electrically Lb gS conductive channel واحد على الأقل من النيوكليوتيدات المُعلّمة nucleotides 1006160 بما في ذلك النيوكليوتيد nucleotide جزيء ريط linking molecule مرتبط بمجموعة فوسفات من 5 الننيوكليوتيد nucleotide وعلامة الشحن النشطة لتفاعل الاختزال والأكسدة الخاصة بالنيوكيلوتيد cnucleotide-specific redox-active charge tag حيث يرتبط أحد النيوكليوتيدات المُعلّمة labeled
nucleotides بالبوليميريز polymerase وبشتمل جزيء linking molecule ball على سلسلة ألكيل calkyl chain مجموعة أميد camide group سلسلة بولي(إيثيلين جليكول) poly(ethylene glycol) «chain وتريازول ¢triazole بيتما يرتبط aad النيوكليوتيدات المُعلّمة Taw dabeled nucleotides تفاعل الاختزال والأكسدة redox reaction 5 بين علامة الشحنة النشطة لتفاعل الاختزال والأكسدة redox-active charge tag الخاصة بالنيوكليوتيد nucleotide والقناة الموصلة كهربائياً electrically conductive channel لتغيير حالة الشحن لعلامة الشحنة النشطة لتفاعل الاختزال والأكسدة redox-active charge tag الخاصة بالنوكليوتيدات ‘nucleotide و استجابة تفاعل اختزال مؤكسد redox reaction الكشضف عن استجابة للقناة الموصلة كهرباثيًا
.electrically conductive channel 0
0. الطريقة وفقا لعنصر الحماية 9 حيث: بدء تفاعل الأكسدة والاختزال redox reaction ينطوي على تطبيق جهد الشحن charging voltage على القناة الموصلة telectrically conductive channel Wil eS اكتشاف الاستجابة يتضمن تطبيق جهد قراءة reading voltage على القناة الموصلة كهربائيًا
.electrically conductive channel
1. الطريقة وفقا لعنصر الحماية 9 تشمل كذلك: ربط استجابة القناة الموصلة electrically conductive channel Wl gS بعلامة الشحنة النشطة 0 تلتفاعل الاختزال والأكسدة redox-active charge tag الخاصة بالنيوكليوتيدات nucleotide لأحد النيوكليوتيدات المُعلّمة labeled nucleotides المصاحبة؛ و استنادًا إلى علامة شحنة تفاعل الاختزال والأكسدة النشطة redox-active charge tag الخاصة بالنيوكليوتيدات nucleotide تحديد النوكليوتيد nucleotide للنيوكليوتيد المُعلّم labeled nucleotide المصاحب.
2. الطريقة وفقا لعنصر الحماية 11( تشمل كذلك شطر علامة شحنة الاختزال والأكسدة redox- active charge tag الخاصة بالنيوكليوتيد nucleotide من النوكليوتيدات المعلمة labeled
nucleotides بهاء؛ ومن ثم دمج النوكليوتيدات nucleotide المرتبطة بالنيوكليوتيدات المصاحبة المُعلّمة labeled nucleotide في Jos ناشئ مكمّل لقالب حمض نووي .template nucleic acid
3. الطريقة وفقا لعنصر الحماية 12 حيث: ربط واحد من النيوكليوتيدات المُعلّمة eg 1806160 nucleotides تفاعل الأكسدة والاختزال redox creaction والكشف»؛ dally وتحديد الهوية Le تشكل جميعها دورة تسلسلية؛ و تشمل الطريقة كذلك: أداء الدورة التسلسلية التالية من خلال: السماح لواحدة من النيوكليوتيدات المُعلّمة nucleotides 1206160 التالية بالريط مع البوليميراز ¢polymerase 0 بينما يرتبط النيوكليوتيد المُعلّم labeled nucleotide التالي؛ fay تفاعل اختزال وأكسد redox reaction آخر بين علامة شحتة الاختزال والأكسدة redox-active charge tag النشطة الخاص بالنيوكليوتيد nucleotide والقناة الموصلة كهربائياً ual electrically conductive channel حالة شحنة علامة شحنة الاختزال والأكسدة redox-active charge tag الخاصة بالنكليوتيد nucleotide 5 الآخر النشط؛ استجابة لتفاعل اختزال وأكسدة redox reaction آخرء LE) استجابة أخرى للقناة الموصلة كهرياثيًا telectrically conductive channel ربط الاستجابة الأخرى للقناة الموصلة كهربائياً electrically conductive channel بعلامة شحنة الاختزال والأكسدة redox-active charge tag الخاصة بالنيوكليوتيد ¢nucleotide و 0 استنادًا إلى Ade شحنة الاختزال والأكسدة النشطة redox-active charge tag الأخرى الخاصة بالنيوكليوتيد (nucleotide تحديد النوكليوتيدات nucleotides التالي من النكليوتيدات المُعلّمة
.labeled nucleotides
4. الطريقة وفقا لعنصر الحماية 13( وتشمل كذلك:
شطر علامة شحنة الاختزال والأكسدة redox-active charge tag الخاصة بالنيوكليوتيد nucleotide الآخرء حيث يتم دمج النيوكليوتيد nucleotide التالي في النكليوتيدات nucleotides التالية في الحبل الناشئ المكمّل لقالب الحمض النووي ‘template nucleic acid تكرار دورة التسلسل.
5. الطريقة وفقاً لعنصر الحماية 9 Gua تتضمن علامة شحنة تفاعل الاختزال والأكسدة النشطة redox-active charge tag ذرة فلز منسق coordinated metal atom تخضع لتفاعل الأكسدة والاختزال .redox reaction
16. الطريقة وفقا لعنصر الحماية 9 حيث: تتضمن علامة شحنة تفاعل الاختزال والأكسدة النشطة redox-active charge tag 10 شحنات أو أقل في الحالة غير المؤكسدة أو غير المختزلة؛ و تتضمن علامة شحنة الاختزال والأكسدة النشطة redox-active charge tag من شحنة واحدة إلى 0 شحنة في حالة تغيير الشحنة.
7. الطريقة وفقا لعنصر الحماية 9 حيث: تشمل النيوكليوتيدات المُعلّمة labeled nucleotides نكليوتيدات مُعلّمة labeled nucleotides أولى بما في ذلك الديوكسي ادينوسين متعدد الفوسفات deoxyadenosine polyphosphate باعتباره النوكليوتيد nucleotide وعلامة الشحن الأولى النشطة 0 تلتفاعل الاختزال والأكسدة redox-active charge tag الخاصة بالنوكليوتيدات ¢nucleotide نكليوتيدات مُعلّمة labeled nucleotide ثانية Lay في ذلك الديوكسي جوانوسين متعدد الفوسفات deoxyguanosine polyphosphate باعتباره نوكليوتيد nucleotide وعلامة الشضحن الثاني لتفاعل الاختزال والأكسدة redox-active charge tag الخاصة بالنيوكليوتيدات ¢nucleotide ونيوكليوتيدات مُعلّمة labeled nucleotide ثالثة بما في ذلك ديوكسيسيتيدين متعدد الفوسفات deoxycytidine polyphosphate 25 باعتباره النوكليوتيد nucleotide وعلامة الشضحن التثالث لتفاعل الاختزال والأكسدة redox-active charge tag الخاصة بالنيوكليوتيدات ¢nucleotide و
نكليوتيدات dalek nucleotide رابعة بما في ذلك الديوكسي ثيميدين متعدد الفوسفات deoxythymidine polyphosphate باعتباره نيوكليوتيد nucleotide وعلامة الشحن الرابع لتفاعل الاختزال والأكسدة redox-active charge tag الخاصة بالنيوكليوتيدات ¢nucleotide و تختلف العلامات الأولى والثانية والثالثة والرابعة الخاصة بشحنة Jolin الاختزال والأكسدة redox- 5 عدا active charge الخاصة بالنوكليوتيدات nucleotide عن بعضها البعض.
8. الطريقة وفقا لعنصر الحماية 17( حيث يتم شحن اثنتين من علامات الشحن النشطة لتفاعل الاختزال والأكسدة redox-active charge tags الأولى» والثانية؛ والثالثة والرابعة الخاصسة بالنيوكليوتيد nucleotide بشضحتة موجبة في حالة تعديل cin al) واثنتين أخرتين من علامات 0 الشحن النشطة لتفاعل الاختزال والأكسدة redox-active charge tags الأولى والثانية؛ (ally والرابعة الخاصة بالنيوكليوتيد nucleotide بشحنة سالبة في حالة تعديل الشحنة.
9. الطريقة وفقا لعنصر الحماية 9< حيث تتواجد النيوكليوتيدات المُعلّمة labeled nucleotides في محلول alate منخفض الملح Jow salt buffer 15
0. الطريقة وفقا لعنصر الحماية 9؛ حيث تكون القناة الموصلة كهريائيا electrically conductive channel عبارة عن قناة ترانزستور تتأثر بالمجال field effect transistor
1. مجموعة تضم: 20 خلية التدفق flow cell تشتمل على: قناة موصلة كهربائياً Ud electrically conductive channel حبل متصل بها؛ و بوليميريز مرتبط بالقناة الموصلة كهرباثيًاً electrically conductive channel عبر الحبل؛ قالب الحمض النووي template nucleic acid لإدخاله في dala التدفق ‘flow cell الكواشف reagents التي سيتم إدخالها في خلية التدفق flow cell تشتمل الكواشف reagents على النيوكليوتيدات المُعلّمة nucleotides 1206160 واحدة على الأقل من النيوكليوتيدات المُعلّمة labeled nucleotides بما في ذلك: نيوكليوتيد nucleotide
جزيء ريط متصل linking molecule بمجموعة فوسفات phosphate من النوكليوتيدات nucleotide حيث Jai dy جزيء الريط linking molecule على سلسةة ألكيل calkyl chain مجموعة أميد camide group سسلسةة بولي (إيقلين جليكول) «poly(ethylene glycol) chain وتريازول ع18201؛ و علامة شحن نشطة لتفاعل اختزال وأكسدة redox-active charge tag متصلة بجزيء الريط clinking molecule علامة الشحنة النشطة لتفاعل الاختزال والأكسدة redox-active charge tag التي تتم أكسدتها أو اختزالها بواسطة القناة الموصلة كهربائياً electrically conductive channel عند الحفاظ عليها بالقرب من منطقة استشعار sensing zone للقناة الموصلة كهربائياً electrically ¢conductive channel و 0 كاشف detector للكشضف عن استجابة من القناة الموصلة كهربائياً electrically conductive channel عندما يحدث تفاعل الاختزال والأكسدة redox reaction بين علامة شحنة تفاعل الاختزال والأكسدة redox-active charge tag dda ill والقناة الموصلة electrically conductive Gl gS
.channel 5 22. المجموعة وفقا لعنصر الحماية 21 حيث يتم اختيار علامة شحنة تفاعل الاختزال والأكسدة redox-active charge tag dda all من المجموعة التي تتكون من الفيروسين 16:106606؛ زنك تترا بنزويورفيرين czine tetrabenzoporphyrin والكويالت فتثالوسياتين ccobalt phthalocyanine تريس (262"- بيبريميدين) الروثينيوم etris-(2,2-bipyrimidine)ruthenium و 4 فيروسينيل بنزيل الكحول 4-ferrocenylbenzyl alcohol 5 - (4-هيدروكسي ميثيل فينيل) -10 ¢ 15 » 20-تراي 0 ميسيتيل بورفيناتو زنك 5-(4-hydroxymethylphenyl)-10,15,20- (I) ctrimesitylporphinatozine(IT) وكالكسارين نشضط لتفاعل الاختزال والأكسدة redox-active
.calixarene 23 المجموعة وفقا لعنصر الحماية 21 حيث: 5 تتضمن Ade شحنة تفاعل الاختزال والأكسدة النشطة redox-active charge tag 10 شحنات أو أقل في حالة غير مؤكسدة أو غير مختزلة؛ و
— 3 4 — تتضمن علامة شحنة تفاعل الاختزال والأكسدة النشطة redox-active charge tag من 1 شحنة إلى 100 شحنة فى حالة مؤكسدة أو مختزلة.
4. المجموعة وفقا لأي عنصر من عناصر الحماية من 21 إلى 23 حيث تكون القناة الموصلة electrically conductive channel Wks 5 عبارة عن قناة ترانزستور ili بالمجال field effect
.transistor
_— 4 4 _— J 0 ا م 2 ا > vy + لح 6 Yo ثم سما لا لاب ا hoo (HT Messy smn : 'y ¢ Mrmr promised VY شكل ١ "re Ya ve حصي 7 ض veloc / | 2 مما SARIN | ; Mn ve Jt سسا تال Sm __ \ Y A § / ; ااا سس ات ض | ~ 1 ¢ الم _ لحلا ض 3 ا 0 Tt : / شكل ؟
— 4 5 — goon ere en لطي ا een fg we en wee wie fp sen win a nn a glee ad nes en نا
i . bo : bog i i ل Ed J بج 2 Plaga Vii tae YE ; : 8 i fo 9 | Eo ) Ed 2 § قل ل 6 ١| 71 1 Pi كم Fg i مي 7 ii x £ م i 5 ر 1 { X OJ i Poy 2 1 Mee” ١١ Mee” HD ee” Cob Coe YA Yr دك ا افك 1 Veda, © 1 ~ Hi =l م ١ 1 = ] - Hi 5. ! - 1 4 ! ا اال ie أ de BE لاس EE ماني £3 Zoli dn DET oe CEE Ce Santas 8 Pk, isi es spi SH 0d He = ade ond i a - i atl ا Lae a tied : odours ~~ wir ¥ 4 8 0 3 fo RE , Sn id 3 2 0 : Eh A 5 : ّ بط Sy ed on 5 Eh 0 Sy 2 ا 2 aa a el I | enol apn nen YF Hh } rie oH = v . ل 7 الأ ال RR SY, JOU + شكل
3 * 3 Sa YF PBF P ض | Yo 8 TT Yo Ye A i ¢ شكل
— 4 7 — "yg a 5 HA و امل صا ال ازا : ٍ a 0 . من م YY op 9 وا مدا ب 1 8 ارس i Ail أي i to md HY { بل 7 تيل He ay بن اي 0 الل .اصن On ORE , ام : امش 0 Do Of vi مز ِ # LNT / A ON) / ; 0 "A _/ 9 ِ rg 3 7 ~ F ATL مص 8 Ly pnd 5 4! كد 7 ج in goo 0 200) NPE \ 0 foe 7 Np N Ne 3 nd iF * Oy زم 7 ef شكل مأ ta TTT ~~ vn > ِب = IAN 7 4 Ce 1 د > م A \ 1 AY { إْ ب \ i AH 88 وجا ' 1 ood 3 { Ny ا ! x HI i : \ #8 / 0 ا | J . EE م
. v , oy, 4 © سم 3 ب > a en, يب ا ثاب ISS LJ
الحاضهة الهيلة السعودية الملضية الفكرية Swed Authority for intallentual Property pW RE .¥ + \ ا 0 § ام 5 + < Ne ge ”بن اج > عي كي الج دا لي ايام TEE ببح ةا Nase eg + Ed - 2 - 3 .++ .* وذلك بشرط تسديد المقابل المالي السنوي للبراءة وعدم بطلانها of سقوطها لمخالفتها ع لأي من أحكام نظام براءات الاختراع والتصميمات التخطيطية للدارات المتكاملة والأصناف ع النباتية والنماذج الصناعية أو لائحته التنفيذية. »> صادرة عن + ب ب ٠. ب الهيئة السعودية للملكية الفكرية > > > ”+ ص ب 101١ .| لريا 1*١ uo ؛ المملكة | لعربية | لسعودية SAIP@SAIP.GOV.SA
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201862710465P | 2018-02-16 | 2018-02-16 | |
| PCT/US2019/017830 WO2019160937A1 (en) | 2018-02-16 | 2019-02-13 | Labeled nucleotides and uses thereof |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SA519410842B1 true SA519410842B1 (ar) | 2022-11-14 |
Family
ID=67618753
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SA519410842A SA519410842B1 (ar) | 2018-02-16 | 2019-12-18 | نكليوتيدات مُعلَّمة واستخداماتها |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US11542550B2 (ar) |
| EP (1) | EP3752514A4 (ar) |
| JP (2) | JP6987898B2 (ar) |
| KR (1) | KR102415039B1 (ar) |
| CN (1) | CN111051324A (ar) |
| AU (1) | AU2019222685B2 (ar) |
| BR (1) | BR112019025493A2 (ar) |
| CA (1) | CA3065958C (ar) |
| IL (1) | IL270920A (ar) |
| MX (1) | MX2019014137A (ar) |
| PH (1) | PH12019502907A1 (ar) |
| SA (1) | SA519410842B1 (ar) |
| SG (1) | SG11201911570WA (ar) |
| WO (1) | WO2019160937A1 (ar) |
| ZA (1) | ZA201907988B (ar) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR102429576B1 (ko) * | 2020-04-29 | 2022-08-03 | 경희대학교 산학협력단 | 전도성 태그를 이용한 dna 염기서열을 식별하는 방법 및 장치 |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19533093C1 (de) | 1995-09-07 | 1996-12-05 | Deutsches Krebsforsch | Metallocen-Phosphoramidit-Konjugate, Verfahren zu ihrer Herstellung sowie deren Verwendung |
| US6869764B2 (en) | 2000-06-07 | 2005-03-22 | L--Cor, Inc. | Nucleic acid sequencing using charge-switch nucleotides |
| WO2001094609A1 (en) * | 2000-06-07 | 2001-12-13 | Li-Cor, Inc. | Charge-switch nucleotides |
| US20030104386A1 (en) | 2001-08-31 | 2003-06-05 | The Regents Of The University Of California | Methods for the specific detection of redox-active tags and the use thereof for capillary gel electrophoresis and DNA sequencing |
| US9151751B2 (en) | 2007-06-29 | 2015-10-06 | Applied Biosystems, Llc | Systems and methods for electronic detection with nanoFETS |
| US8372585B2 (en) * | 2007-12-31 | 2013-02-12 | Intel Corporation | Electronic sensing for nucleic acid sequencing |
| US8563240B2 (en) * | 2008-12-31 | 2013-10-22 | Intel Corporation | Nucleic acid sequencing and electronic detection |
| US9347900B2 (en) | 2011-10-14 | 2016-05-24 | Pacific Biosciences Of California, Inc. | Real-time redox sequencing |
| AU2015289828B2 (en) | 2014-07-15 | 2019-12-19 | Illumina, Inc. | Biochemically activated electronic device |
| SG11201708854PA (en) * | 2015-05-12 | 2017-11-29 | Illumina Inc | Field-effect apparatus and methods for sequencing nucelic acids |
| EP3332032B1 (en) * | 2015-08-06 | 2023-12-27 | Pacific Biosciences Of California, Inc. | Integrated circuits for selectively addressing sparsely arranged electronic measurement devices |
| EP3376996B1 (en) * | 2015-11-20 | 2022-09-07 | Pacific Biosciences of California, Inc. | Protected dye-labeled reagents |
| RU2637310C1 (ru) | 2016-06-08 | 2017-12-04 | Федеральное Государственное Бюджетное Учреждение Науки Институт Молекулярной Биологии Им. В.А. Энгельгардта Российской Академии Наук (Имб Ран) | Флуоресцентно-меченые дезоксиуридинтрифосфаты |
| WO2018065299A1 (en) * | 2016-10-05 | 2018-04-12 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Nucleic acid sequencing using nanotransistors |
-
2019
- 2019-02-13 US US16/626,425 patent/US11542550B2/en active Active
- 2019-02-13 WO PCT/US2019/017830 patent/WO2019160937A1/en unknown
- 2019-02-13 BR BR112019025493-5A patent/BR112019025493A2/pt unknown
- 2019-02-13 MX MX2019014137A patent/MX2019014137A/es unknown
- 2019-02-13 SG SG11201911570WA patent/SG11201911570WA/en unknown
- 2019-02-13 CA CA3065958A patent/CA3065958C/en active Active
- 2019-02-13 JP JP2019571262A patent/JP6987898B2/ja active Active
- 2019-02-13 CN CN201980003331.1A patent/CN111051324A/zh active Pending
- 2019-02-13 AU AU2019222685A patent/AU2019222685B2/en active Active
- 2019-02-13 EP EP19754283.0A patent/EP3752514A4/en active Pending
- 2019-02-13 KR KR1020197036050A patent/KR102415039B1/ko active IP Right Grant
- 2019-11-25 IL IL270920A patent/IL270920A/en unknown
- 2019-11-29 ZA ZA2019/07988A patent/ZA201907988B/en unknown
- 2019-12-18 SA SA519410842A patent/SA519410842B1/ar unknown
- 2019-12-20 PH PH12019502907A patent/PH12019502907A1/en unknown
-
2021
- 2021-12-01 JP JP2021195619A patent/JP2022046478A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ZA201907988B (en) | 2022-03-30 |
| KR102415039B1 (ko) | 2022-06-30 |
| EP3752514A4 (en) | 2021-11-03 |
| IL270920A (en) | 2020-01-30 |
| EP3752514A1 (en) | 2020-12-23 |
| JP2022046478A (ja) | 2022-03-23 |
| PH12019502907A1 (en) | 2020-10-19 |
| US11542550B2 (en) | 2023-01-03 |
| US20200157618A1 (en) | 2020-05-21 |
| CA3065958A1 (en) | 2019-08-22 |
| KR20200023281A (ko) | 2020-03-04 |
| MX2019014137A (es) | 2021-01-29 |
| BR112019025493A2 (pt) | 2020-09-01 |
| WO2019160937A1 (en) | 2019-08-22 |
| RU2019139633A3 (ar) | 2021-06-07 |
| JP6987898B2 (ja) | 2022-01-05 |
| CN111051324A (zh) | 2020-04-21 |
| AU2019222685B2 (en) | 2021-08-19 |
| CA3065958C (en) | 2023-01-03 |
| AU2019222685A1 (en) | 2019-12-19 |
| RU2019139633A (ru) | 2021-06-07 |
| SG11201911570WA (en) | 2020-01-30 |
| JP2020536487A (ja) | 2020-12-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Peng et al. | Signal amplification in living cells: a review of microRNA detection and imaging | |
| Tosar et al. | Electrochemical DNA hybridization sensors applied to real and complex biological samples | |
| Odenthal et al. | An introduction to electrochemical DNA biosensors | |
| Castaneda et al. | Electrochemical genosensors for biomedical applications based on gold nanoparticles | |
| Kashefi-Kheyrabadi et al. | Aptamer-conjugated silver nanoparticles for electrochemical detection of adenosine triphosphate | |
| JP6158253B2 (ja) | 電荷量タグを含む合成ヌクレオチドのデザイン、合成及び使用 | |
| Fojta et al. | Multiply osmium-labeled reporter probes for electrochemical DNA hybridization assays: detection of trinucleotide repeats | |
| Liu et al. | Electrochemical biosensor for DNA methyltransferase detection based on DpnI digestion triggering the formation of G-quadruplex DNAzymes | |
| Wasiewska et al. | Highly sensitive electrochemical sensor for the detection of Shiga toxin-producing E. coli (STEC) using interdigitated micro-electrodes selectively modified with a chitosan-gold nanocomposite | |
| Rashid et al. | Label free ultrasensitive detection of NS1 based on electrochemical aptasensor using polyethyleneimine aggregated AuNPs | |
| Raju et al. | A novel disposable electrochemical DNA biosensor for the rapid detection of Bacillus thuringiensis | |
| SA519410842B1 (ar) | نكليوتيدات مُعلَّمة واستخداماتها | |
| Karadeniz et al. | Electrochemical monitoring of the interaction between 4-nonylphenol and DNA by graphite and carbon nanotube modified graphite electrodes | |
| Meftah et al. | Sensitive electrochemical detection of polymorphisms in IL6 and TGFβ1 genes from ovarian cancer DNA patients using EcoRI and DNA hairpin-modified gold electrodes | |
| Veselinovic et al. | Two-tiered electrical detection, purification, and identification of nucleic acids in complex media | |
| Kostečka et al. | Sensing mispaired thymines in DNA heteroduplexes using an electroactive osmium marker: towards electrochemical SNP probing | |
| Rai et al. | Electrochemical amplification strategies in DNA nanosensors | |
| Zaffino et al. | Nanoprobes for enhanced electrochemical DNA sensors | |
| US20140228247A1 (en) | Sequence-specific analysis of nucleic acids | |
| RU2782056C2 (ru) | Меченые нуклеотиды и их применения | |
| BR112020026394A2 (pt) | método, sistema e aparelho de detecção | |
| Liu et al. | Measuring airborne antibiotic resistance genes in Swiss cities via a DNA-enabled electrochemical chip-based sensor | |
| Zhang et al. | Specific binding of dacarbazine to DNA bases and oligonucleotides based on gold nanoparticles | |
| Foguel et al. | MVF Sensor Enables Analysis of Nucleic Acids with Stable Secondary Structures | |
| Piekielska et al. | Impedimetric detection of hairpin ribozyme activity |