SA113340251B1 - حوافز لتفاعل تنشيط التعبير الجينى للنبات واستخدامها - Google Patents

حوافز لتفاعل تنشيط التعبير الجينى للنبات واستخدامها Download PDF

Info

Publication number
SA113340251B1
SA113340251B1 SA113340251A SA113340251A SA113340251B1 SA 113340251 B1 SA113340251 B1 SA 113340251B1 SA 113340251 A SA113340251 A SA 113340251A SA 113340251 A SA113340251 A SA 113340251A SA 113340251 B1 SA113340251 B1 SA 113340251B1
Authority
SA
Saudi Arabia
Prior art keywords
sequence
gene expression
nucleic acid
dna
yyy
Prior art date
Application number
SA113340251A
Other languages
English (en)
Inventor
بيتولينو جوزيف
لى جيانكوان
سى. بلو ريان
ال. ايفانس ستيفن
Original Assignee
دو اجروسينسيس ال ال سي
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by دو اجروسينسيس ال ال سي filed Critical دو اجروسينسيس ال ال سي
Publication of SA113340251B1 publication Critical patent/SA113340251B1/ar

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/67—General methods for enhancing the expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4702—Regulators; Modulating activity
    • C07K14/4705—Regulators; Modulating activity stimulating, promoting or activating activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
    • C12N15/625—DNA sequences coding for fusion proteins containing a sequence coding for a signal sequence
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
    • C12N15/8217—Gene switch
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y203/00—Acyltransferases (2.3)
    • C12Y203/01—Acyltransferases (2.3) transferring groups other than amino-acyl groups (2.3.1)
    • C12Y203/01183—Phosphinothricin acetyltransferase (2.3.1.183)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/70—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction
    • C07K2319/71—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction containing domain for transcriptional activaation, e.g. VP16
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/80—Fusion polypeptide containing a DNA binding domain, e.g. Lacl or Tet-repressor
    • C07K2319/81—Fusion polypeptide containing a DNA binding domain, e.g. Lacl or Tet-repressor containing a Zn-finger domain for DNA binding
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
    • Y02A40/10—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in agriculture
    • Y02A40/146—Genetically Modified [GMO] plants, e.g. transgenic plants

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
  • Hydroponics (AREA)
  • Traffic Control Systems (AREA)

Abstract

يتعلق هذا الاختراع بتركيبات ‏compositions‏ وطرق ‏methods‏ لزيادة التعبير الجينى ‏expression‏ لعديد النيوكليوتيد ‏polynucleotide‏ ذو الأهمية. تتعلق بعض التجسيمات بعديدات ‏ببتيد ‏polypeptides‏ جديدة لتنشيط التعبير الجينى وبدائل ‏variants‏ لها والتى تم تعريفها فى ‏النباتات، وطرق لاستخدامها. تتعلق تجسيمات خاصة باستخدام عديد ببتيد ‏‎ polypeptide‏ رابط لـ ‏DNA‏ واحد على الأقل فى بروتين اندماج ‏fusion protein‏ لاستهداف عديد ببتيد تنشيط تعبير ‏جينى ‏transactivation polypeptide‏ واحد على الأقل أو بديل ‏variant‏ له لموقع ارتباط ‏محدد ‏specific binding site‏ على حمض نووى ‏nucleic acid‏ يشتمل على عديد النيوكليوتيد ‏ذو الأهمية، بحيث يمكن زيادة تعبيره الجينى ‏expression‏.‏

Description

— \ — حوافز لتفاعل تنشيط التعبير الجينى للنبات واستخدامها ‎Plant transactivation interaction motifs‏ ‎and uses thereof‏ الوصف الكامل خلفية الاختراع يتمتع هذا الطلب بحق أسبقية استناداً لطلب البراءة المؤقتة الأمريكى رقم مسلسل 45 5.7 1/54 المودع فى ¥ فبراير؛ ‎«Ye VY‏ المعنون 800 ‎“Plant Transactivation Interaction Motifs‏ ‎Uses Thereof.”‏ © يتعلق الوصف الحالى بتكنولوجيا حيوية للنبات ‎Wplant biotechnology‏ تتعلق التجسيمات بعديدات ببتيد ‎polypeptides‏ (على سبيل ‎«JE‏ بروتين دمج ‎(fusion protein‏ تشتمل على حافز تفاعل ‎interaction motif‏ عامل استنساخ تركيبى ‎synthetic transcription factor‏ من منشط تعبير جينى للنبات ‎transactivator‏ 01801. تتعلق بعض التجسيمات باستخدام هذا البروتين ‎protein‏ للتعبير الجينى للحمض النووى ذو الأهمية أو لزيادة التعبير الجينى للحمض ‎٠‏ النووى ‎acid‏ 0001816 ذو الأهمية. تتعلق بعض التجسيمات بعديدات ‎afin‏ تقوم بترميز 9 بروتين تشتمل على حافز تفاعل عامل استنساخ تركيبى ‎synthetic transcription‏ 800] من منشط تعبير جينى نباتى. تتعلق أمثلة اخاصة ‎(LA‏ أنسجة ‎tissues‏ و/أو كائنات حية ‎Organisms‏ مضيفة تشتمل على عديد ببتيد ‎polypeptide‏ أو عديد نيوكليوتيد ‎polynucleotide‏ للاختراع. ‎١‏ يستخدم على نطاق واسع إدخال جينات مستنسخة ومعزولة فى ‎WIA‏ النبات ‎plant cells‏ (التحول ‎transformation ual)‏ 0606116))؛ والتجديد التالى للنباتات المعدلة جينياً ‎transgenic‏ ‎plants‏ لإجراء تعديلات وراثية ‎genetic modifications‏ للنباتات ومواد النبات ‎plant‏ ‏5 . التحول الجينى للنباتات لإدخال سمة مرغوب فيها (على سبيل المثال؛ تحسين نوعية الغذاء ‎nutritional quality‏ « زيادة الإنتاج؛ مقاومة الآفات ‎pest resistance‏ أو الأمراض؛ ‎Yo‏ تحمل الضغط ‎stress tolerance‏ ؛ ومقاومة مبيدات الأعشاب ‎(herbicide resistance‏ ‎£Y14‏
ا تستخدم عادة الآن لإنتاج نباتات معدلة وراثياً جديدة ومحسنة للتعبير الجينى لسمة مرغوب فيها. يتم إدخال ‎DNA‏ عادة عشوائياً فى ‎DNA‏ النووى أو الصانع لخلية نبات حقيقية النواة ‎eukaryotic plant cell‏ ؛ وخلايا تحتوى على ‎DNA‏ مدمجة فى ‎LAN DNA‏ ثم عزلها واستخدامها لإنتاج ‎LDA‏ نباتية ثابتة التحول. وفى كثير من الأحيان؛ يكون من المرغوب فيه © الهندسة الوراثية ‎genetically engineer‏ لمجموعة مختلفة من نبات واحد للتعبير الجينى لأكثر من سمة مدخلة واحدة عن طريق إدخال تتابعات ترميز ‎coding sequences‏ متعددة؛ والتى قد تشتمل على عناصر تنظيمية متماثلة (أو متطابقة). يتم التحكم فى التعبير الجينى للجينات المحورة ‎transgenes‏ (بالإضافة إلى الجينات الذاتية ‎(endogenous genes‏ من خلال أليات ‎mechanisms‏ تتضمن تفاعلات ‎٠‏ 17161800005 بروتين ‎multiple protein-DNA DNA-‏ وبروتين — بروتين ‎protein—protein‏ ‏عديدة. من خلال هذه التفاعلات؛ تستطيع العناصر التنظيمية ‎regulatory elements‏ للحمض النووى ‎(Ao)‏ سبيل ‎(Jal‏ محفزات ‎promoters‏ ومعززات ‎(enhancers‏ نقل أنماط للتعبير الجينى ‎expression‏ لتتابع ترميز ‎coding sequence‏ والتى تكون ‎UW‏ تأسيسية أو محددة. على سبيل المثال؛ قد يؤدى المحفز ‎promoter‏ إلى زيادة استنساخ تتابع الترميز فى أنسجة ‎VO‏ معينة؛ أثناء فترات تطور محددة؛ أو استجابة للمحفزات البيئية. وللأسف؛ فإن الصفات الأصيلة للمحفزات التقليدية للتعبير الجينى للترانسجين ‎aad transgene expression‏ من نطاق السيطرة على التعبير الجينى والتى قد تستخدم للبذل فى الخلية المضيفة ‎host cell‏ أحد القيود العملية للمحفزات التقليدية هى أنه من الصعب ضبط مستوى التعبير الجينى بدقة للجين المدخل بسبب القيود فى قوة المحفز ولإخماد التعبير الجينى للترانسجين عن طريق محفزات قوية بالأخص أو ‎٠‏ الاستخدام المتزامن فى نفس الخلية لنسخ عديدة من نفس المحفز. من المرغوب فيه أيضاً بدء أو زيادة التعبير الجينى للجينات الذاتية أو الأصلية. منشطات التعبير الجينى ‎a Transactivators‏ بروتينات ‎proteins‏ والتى تعمل عن طريق توظيف خلال تفاعلات بروتين- بروتين عدد من بروتينات مختلفة متضمنة فى استنساخ ‎Ae) DNA transcription‏ سبيل ‎JB‏ مركبات إعادة بناء النيوكليوسوم ‎nucleosome—‏ ‎remodeling complexes Yo‏ ؛ المركب الوسيط ‎mediator complex‏ ؛ وعوامل استنساخ ‎£Y14‏
وه عامة؛ مثل ‎(TFIIH «TBP (TFIIB‏ لبدء أو تعزيز معدل الاستنساخ عن طريق التأثير على تجميع/تفكيك ‎assembly [disassembly‏ النيوكليوسوم ‎nucleosome‏ تكوين مركب ما قبل ‎(dal‏ تخليص المحفز ‎«promoter clearance‏ و/أو معدل الاستطالة ‎elongation‏ تتضمن تفاعلات البروتين- بروتين لمنشطات التعبير الجينى وشركاء الارتباط الخاصة بها عناصر تركيبية ٠ه‏ داخلية منفصلة ‎Jala discrete internal structural elements‏ منشطات التعبير الجينى المعروفة ب "نطاقات تنشيط التعبير الجينى ‎transactivation domains‏ (نطاقات تنشيط التعبير الجينى).” نطاقات تنشيط التعبير الجينى يعتقد أنها تشارك فى تناظر التتابع الأولى القليل واعتماد التركيب المحدد فقط عند الارتباط بالهدف. 333:210-2 ‎Sigler (1988) Nature‏ ويعتقد أن الرواسب ‎residues‏ الحمضية ‎acidic‏ والكارهة للماء ‎hydrophobic‏ داخل نطاقات تنشيط ‎٠‏ التعبير الجينى المهمة (انظرء على سبيل المثال» (1991) ‎Cress and Triezenberg‏ ‎(Science 251)4989(:87-0‏ ويعتقد أن مساهمة الرواسب الفردية فى التنشيط تكون صغيرة. 277:46043-50 ‎.Hall and Struhl (2002) J.
Biol.
Chem.‏ بروتين فيريون الهربس البسيط ‎(VP16) ٠١ Herpes Simplex virion protein‏ هو منشط تعبير جينى ‎transactivator‏ والذى يعمل على تحفيز استنساخ الجينات المبكرة الفورية ‎Vo‏ الفيروسية فى الخلايا المصابة ‎cells‏ 10160160 ب ‎HSV‏ وكما مع منشطات التعبير الجينى؛ ينشط بروتين فيريون الهربس البسيط الاستنساخ خلال سلسلة من تفاعلات بروتين- بروتين التى يتضمن نطاق تنشيط التعبير الجينى الخاص بهاء والتى تكون عالية الحموضة. وقد تبين أن نطاق تنشيط التعبير الجينى الحمضى الخاص ببروتين فيريون الهربس البسيط يتفاعل مع بروتينات شريكة مختلفة سواء فى المعمل أو فى خلايا الكائنات الحية. على سبيل ‎(JUN‏ يحتوى نطاق ‎٠‏ تنشيط التعبير الجينى لبروتين فيريون الهربس البسيط على حافز تفاعل والذى يتفاعل مباشرة مع الوحدة الفرعية 1761 ل ‎Langlois et al. (2008) J.
Am.
Chem.
Soc. ( TFIIH‏ 130:10596-604(¢ ويرتبط هذا التفاعل بقدرة بروتين فيريون الهربس البسيط لتنشيط كل من مرحلة بدء واستطالة الاستتساخ للجينات المبكرة الفورية الفيروسية ‎viral immediate early‏ ‎.genes‏ ‎Yo‏ ‎£Y14‏
الوصف العام للاختراع
موصوف هنا حوافز تفاعل بروتين - بروتين ‎protein—protein interaction motifs‏ نطاق تنشيط التعبير الجينى الجديدة التى تم عزلها عن البروتينات التى تقوم بتنشيط التعبير الجينى للنباتات» والأحماض النووية ‎nucleic acids‏ المرمزة لها. قد يتم استخدام حوافز التفاعل الجديدة © هذه فى ‎TAD‏ تركيبى لمنح خواض تنظيمية جينية ‎gene regulatory properties‏ على عديد ببتيد ‎polypeptide‏ يشتمل على نطاق تنشيط التعبير الجينى. على سبيل المثال؛ تتضمن بعض التجسيمات بروتين دمج منشط نسخى ‎transcriptional activator‏ الذى يشتمل على ‎we‏ ببتيد لنطاق رابط ل ‎DNA‏ وعديد ببتيد لنطاق تنشيط التعبير الجينى هذا. اعتماداً على النطاق الرابط ل ‎DNA‏ الخاص الذى يتم دمجه مع نطاق تنشيط التعبير الجينى فى بروتين الدمج المنشط النسخى؛ ‎Ve‏ قد يتم استخدام تنشيط التعبير الجينى لزيادة التعبير الجينى للجين موضوع الاهتمام. على سبيل المثال؛ قد يتم ارتباط عديد نيوكليوتيد مغاير ‎heterologous polynucleotide‏ الذى يرتبط به النطاق الرابط ل ‎DNA‏ على نحو قابل للتشغيل بالجين ‎pum se‏ الاهتمام؛ وبالتالى استهداف بروتين الاندماج (ونطاق تنشيط التعبير الجينى الوظيفية الخاصة به)؛ سوف يزيد ارتباطه من التعبير الجينى للجين موضوع الاهتمام. على نحو بديل؛ قد يتم هندسة النطاق الرابط ل ‎DNA‏ لربط عديد ‎Vo‏ النيوكليوتيد داخلى المنشاً الذى يرتبط على نحو قابل للتشغيل ب؛ أو قريب من؛ الجين موضوع الاهتمام. عند ارتباط بروتين الدمج المنشط النسخى ‎transcriptional activator fusion‏ 007 بموقع ارتباط ‎DNA‏ مستهدف؛ قد يتم تحفيز نسخ جين مرتبط على نحو قابل للتشغيل
بموقع ارتباط ‎DNA‏ المستهدف. كما يوصف هنا حوافز تفاعل بروتين- بروتين لنطاق تنشيط التعبير الجينى بديلة تركيبية؛ ‎٠‏ والأحماض النووية المرمزة لها. فى بعض الأمثلة؛ يتم هندسة حافز تفاعل بروتين- بروتين لنطاق تنشيط التعبير الجينى بديل تركيبى عن طريق إدخال طفرة واحدة أو أكثر (على سبيل المثال» طفرة محافظة ‎«conservative mutation,‏ أو طفرة محددة فى ‎Bla‏ لحافز التفاعل ‎interaction‏ ‎(Motif)‏ فى نطاق تنشيط التعبير الجينى للمنشط الجينى (على سبيل ‎(JB‏ منشط جينى نباتى ‎transactivator‏ 01801). بشكل مفاجئ؛ قد يمنح بديل تركيبى نطاق تنشيط التعبير الجينى مولد ‎Yo‏ بهذه الطريقة الذى يشتمل على حافز تفاعل بديل خواص تنظيمية جينية تختلف عن نطاق تنشيط
£Y14
-+- التعبير الجينى غير المعدل عند ازدواجه مع النطاق الرابط ل ‎DNA‏ فى بروتين دمج منشط نسخى. على سبيل المثال؛ قد يعزز البديل التركيبى الخاص نطاقات تنشيط التعبير الجينى الذى يشتمل على حافز تفاعل بديل مستوى التنشيط النسخى الذى يمنحه حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى الموجود فى الطبيعة عند التعبير الجينى له فى نفس الموضع فى بروتين دمج والذى يشتمل
© على نطاق رابط ل ‎DNA‏
تتضمن بعض التجسيمات بروتين دمج منشط نسخى تركيبى. فى تجسيمات خاصة. قد يزيد بروتين الدمج من نسخ الجين موضوع الاهتمام» حيث يشتمل بروتين الدمج على عديد ببتيد أول يشتمل على نطاق رابط ل ‎DNA‏ مرتبط على نحو قابل للتشغيل بعديد ببتيد ثانى والذى يشتمل على حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى. فى بعض الأمثلة؛ قد يتم اختيار حافز تفاعل
‎٠‏ نطاق تنشيط التعبير الجينى من مجموعة حوافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى التى تتكون من المتواليات أرقام: ‎VT)‏ على سبيل ‎JB‏ وبدون حصر؛ قد يوجد حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى داخل نطاق تنشيط التعبير الجينى الذى يشتمل على تتابع حمض أمينى ‎amino‏ ‎sequence‏ 8010 مختار من المجموعة التى تتكون من المتواليات أرقام: 7-+ والمتواليات أرقام: ‎BY T=) os‏ بعض الأمثلة؛ قد يكون حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى هو حافز
‏19 تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل يحتوى على؛ على سبيل المثال وبدون حصرء تتابع حمض أمينى مختار من المجموعة التى تتكون من المتواليات أرقام: ‎0A Y‏ على سبيل ‎JE‏ ‏وبدون حصرء قد يوجد حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل داخل نطاق تنشيط التعبير الجينى يشتمل على تتابع حمض أمينى مختار من المجموعة التى تتكون من المتواليات أرقام: بذ الس د
‎١‏ تتضمن بعض التجسيمات عديد نيوكليوتيد والذى يرمز بروتين دمج منشط نسخى يشتمل على عديد ببتيد أول يشتمل على نطاق رابط ل ‎DNA‏ مرتبط على نحو قابل للتشغيل بعديد ببتيد ثانى يشتمل على حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى. قد يكون عديد الببتيد للنطاق الرابط ل ‎DNA‏ أى نطاق رابط ل ‎DNA‏ الذى يرتبط على وجه التحديد بموقع ارتباط ‎DNA‏ مستهدف خاص. على سبيل المثال وبدون حصرء قد يكون عديد الببتيد للنطاق الرابط ل ‎DNA‏ عديد ببتيد
‎YO‏ مختار من المجموعة التى تتكون من نطاق رابط ل ‎DNA‏ إصبع خارصين ‎zinc finger‏ ؛ نطاق
—y—
رابط ل ‎<LexA TAL ¢GAL4 «UPA DNA‏ كاظم ‎Lack ¢Tet repressor‏ ومستقبل هرمون ستيرويد ‎.steroid hormone receptor‏ فى أمثلة خاصة؛ قد يتم اختيار التتابع المرمز للنطاق الرابط ل ‎DNA‏ من المجموعة التى تتكون من المتوالية رقم: 17؛ المتوالية رقم: ‎CIA‏ ‏والمتوالية رقم: 3.99 أمثلة خاصة؛ قد يشتمل عديد النيوكليوتيد على تتابع مرمز للبروتين الرابط ل ‎DNA‏ الذى يكون مطابقاً بنسبة 96860 ‎AA 9695 9646 (AS‏ أو ‎96٠00‏ على الأقل للتتابع المختار من المجموعة التى تتكون من المتوالية رقم: ‎CTY‏ المتوالية رقم: ‎TA‏ و المتوالية
رقم: ادا فى بعض الأمثلة؛ قد يشتمل عديد النيوكليوتيد على تتابع مرمز لحافز تفاعل ‎Glas‏ تنشيط التعبير الجينى الذى يرمز حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى أو حافز تفاعل نطاق تنشيط ‎٠‏ التعبير الجينى بديل؛ على سبيل ‎(JE‏ يحتوى على تتابع مختار من المتواليات أرقام: ‎OA)‏ ‏تتضمن التجسيمات الخاصة عديد نيوكليوتيد الذى يرمز بروتين دمج منشط نسخى يشتمل على حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى واحد على الأقل. تتضمن تجسيمات خاصة عديد نيوكليوتيد الذى ‎Jan‏ بروتين دمج منشط نسخى يشتمل على ‎Glas‏ رابط ل ‎DNA‏ واحد على الأقل. تتضمن الأمثلة على عديدات النيوكليوتيد التى ترمز بروتين دمج منشط نسخى تركيبى وفقاً ‎Vo‏ لبعض تجسيمات الاختراع عديدات النيوكليوتيد التى تشتمل على تتابع نيوكليوتيد واحد على الأقل لترميز نطاق رابط ل ‎DNA‏ وتتابع نيوكليوتيد واحد على الأقل لترميز حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى (أو بديل لهما)؛ حيث يشتمل عديد النيوكليوتيد. على سبيل المثال وبدون حصر؛ تتابع نيوكليوتيد واحد على الأقل مختار من المجموعة التى تتكون من: المتواليات أرقام: 3-74؟1؛ تتابع نيوكليوتيد ‎A‏ يكون ‎Gildas‏ إلى حد كبير لواحد من المتواليات أرقام: 749-؟9؛ تتابع ‎Yo‏ نيوكليوتيد له تطابق تتابع 9686 على الأقل لواحد من المتواليات أرقام: 97-749؛ تتابع نيوكليوتيد له تطابق تتابع 9685 على الأقل لواحد من المتواليات أرقام: 97-1749؛ تتابع نيوكليوتيد له تطابق تتابع 9698 على الأقل لواحد من المتواليات أرقام: 97-749؛ تتابع نيوكليوتيد له تطابق تتابع 09 على الأقل لواحد من المتواليات أرقام: 93-174؛ تتابع نيوكليوتيد له تطابق تتابع 9697 على الأقل لواحد من المتواليات أرقام: 97-179؛ تتابع نيوكليوتيد له تطابق تتابع 9694 على الأقل ‎andy Yo‏ من المتواليات أرقام: 97-4؛ تتابع نيوكليوتيد ‎nucleotide sequence‏ له تطابق تتابع
—A— ‏على الأقل لواحد من المتواليات أرقام: 97-1749؛ مكمل عديد النيوكليوتيد الذى يكون قابل‎ 4 ‏للتهجين على وجه التحديد لواحد على الأقل من المتواليات أرقام: 97-1749؛ والمكمل العكسى‎ ‏لعديد نيوكليوتيد الذى يكون قابل للتهجين على وجه التحديد لواحد على‎ reverse complement
ATV ‏الأقل من المتواليات أرقام:‎ ° فى بعض التجسيمات؛ قد يتم إدراج عديد نيوكليوتيد الذى يرمز بروتين دمج منشط نسخى فى ناقل معاد الاتحاد ‎recombinant vector‏ ؛ على سبيل ‎(JU‏ لتوفير التعبير الجينى للبروتين فى خلية مضيفة. وفقاً ‎lA‏ تتضمن بعض الأمثلة ناقل يشتمل على عديد نيوكليوتيد واحد على الأقل للاختراع؛ و/أو خلية مضيفة التى تم إدخال هذا الناقل فيها. موصوف هنا أيضاً وسائل لزيادة معدل التعبير الجينى ‎transactivation‏ للتعبير الجينى ‎Ve‏ النباتى 0 ‎gene expression.‏ 01801. كما هو مستخدم ‎(la‏ تتضمن 'وسائل لزيادة معدل التعبير الجينى للتعبير الجينى النباتى" عديد ببتيد مختار من المجموعة التى تتكون من المتوالية رقم: ١٠؛‏ المتوالية رقم: ١9؛‏ المتوالية رقم: ؛ 3 المتوالية رقم: 0 ‎eV‏ المتوالية رقم: ؟ ؟؛ المتوالية رقم: 8؟؛ المتوالية رقم: 7 ؛ والمتوالية رقم: ‎.0Y‏ فى بعض التجسيمات؛ قد يتم استخدام بروتين تركيبى ‎synthetic protein‏ يشتمل على واحدة على الأقل من وسائل زيادة معدل التعبير الجينى لللتعبير الجينى النباتى لتعديل التعبير الجينى للجين موضوع الاهتمام فى خلية نباتية ‎plant cell‏ بالإضافة ‎J)‏ ذلك؛ موصوف هنا وسائل لزيادة التعبير الجينى التى يتم اشتقاقها من 2 . كما هو مستخدم ‎(lia‏ تتضمن ” وسائل لزيادة التعبير الجينى التى يتم اشتقاقها من ‎"ERF2‏ عديد ببتيد مختار من المجموعة التى تتكون من المتواليات أرقام: ‎77-١١7‏ و المتوالية رقم؛: ‎VY‏ بالإضافة إلى ذلك موصوف وسائل لزيادة التعبير الجينى التى يتم اشتقاقها من ‎PTI4‏ ‎Yo‏ كما هو مستخدم ‎lia‏ تتضمن 'وسائل لزيادة التعبير الجينى التى يتم اشتقاقها من ‎"PTI4‏ عديد ببتيد مختار من المجموعة التى تتكون من المتواليات أرقام: 8-77؟ والمتوالية رقم: ‎NYY‏ ‏بالإضافة إلى ذلك موصوف وسائل لزيادة التعبير الجينى التى يتم اشتقاقها من 471اع88. كما هو مستخدم ‎cla‏ تتضمن 'وسائل لزيادة التعبير الجينى التى يتم اشتقاقها من 811471" عديد ببتيد مختار من المجموعة التى تتكون من المتواليات أرقام: 4-749 ؟ والمتوالية رقم: ‎YY‏ بالإضافة ‎Yo‏ إلى ذلك موصوف وسائل لزيادة التعبير الجينى التى يتم اشتقاقها من ‎LORCA2‏ كما هو مستخدم £Y14
‎q —_‏ _ ‎clin‏ تتضمن 'وسائل لزيادة التعبير الجينى التى يتم اشتقاقها من ‎"ORCA2‏ عديد ببتيد مختار من المجموعة التى تتكون من المتواليات أرقام: £070 والمتوالية رقم: ‎YE‏ بالإضافة إلى ذلك موصوف وسائل لزيادة التعبير الجينى التى يتم اشتقاقها من /088581. كما هو مستخدم هناء تتضمن ”" وسائل لزيادة التعبير الجينى ‎all‏ يتم اشتقاقها من ‎'DREBIA‏ عديد ببتيد مختار من © المجموعة التى تتكون من المتواليات أرقام: ‎41-4١‏ والمتوالية رقم: ‎Yo‏ بالإضافة إلى ذلك موصوف هنا وسائل لزيادة التعبير الجينى التى يتم اشتقاقها من 08571. كما هو مستخدم هناء تتضمن 'وسائل لزيادة التعبير الجينى التى يتم اشتقاقها من ‎"CBF‏ عديد ببتيد مختار من المجموعة التى تتكون من المتواليات أرقام: 497 ‎oY‏ والمتوالية رقم: ‎YT‏ بالإضافة إلى ذلك موصوف هنا وسائل لزيادة التعبير الجينى التى يتم اشتقاقها من ‎DOF‏ كما هو مستخدم هناء ‎٠‏ تتضمن " وسائل لزيادة التعبير الجينى التى يتم اشتقاقها من 0051" عديد ببتيد مختار من المجموعة التى تتكون من المتواليات أرقام: 28-57 والمتوالية رقم: ‎NYY‏
‏موصوف هنا أيضاً طرق لزيادة التعبير الجينى باستخدام بروتين دمج منشط نسخى تركيبى. فى ‎GRY)‏ قد يتم إدخال ‎Jib‏ تعبير جينى ‎expression vector‏ يشتمل على عديد نيوكليوتيد لترميز بروتين دمج منشط نسخى تركيبى فى خلية مضيفة (على سبيل المثال؛ خلية ‎Vo‏ نباتية؛ خلية خميرة ‎yeast cell‏ ؛ خلية تديية ‎mammalian cell‏ « وخلية مخلدة ‎(immortalized cell‏ تشتمل على الجين موضوع الاهتمام المرتبط على نحو قابل للتشغيل بموقع ارتباط ‎DNA‏ مستهدف لبروتين الدمج. قد يؤدى التعبير الجينى لبروتين الدمج فى الخلية المضيفة؛ والارتباط اللاحق لبروتين الدمج بموقع ارتباط ‎DNA‏ المستهدف المرتبط على نحو قابل للتشغيل؛ إلى بدء النسخ أو زيادة النسخ للجين موضوع الاهتمام. فى ‎Ald‏ خاصة؛ قد يتم إدخال موقع ‎٠‏ ارتباط ‎DNA‏ المستهدف فى الخلية المضيفة؛ بحيث يتم ارتباط موقع ارتباط ‎DNA‏ المستهدف على نحو قابل للتشغيل بالجين موضوع الاهتمام. فى أمثلة أخرى, قد يشتمل بروتين الدمج المنشط النسخى التركيبى على عديد ببتيد لنطاق رابط ل ‎DNA‏ الذى يتم هندسته للارتباط بموقع ارتباط
‎DNA‏ مستهدف الذى يكون مرتبط على نحو قابل للتشغيل بالجين موضوع الاهتمام. فى بعض التجسيمات؛ قد يتم إدخال ناقل يشتمل على عديد نيوكليوتيد لترميز بروتين ‎YO‏ دمج منشط نسخى تركيبى فى خلية مضيفة؛ بحيث يتم بعد ذلك تكامل عديد النيوكليوتيد فى ‎DNA‏
=« \ — الجينومى ‎genomic DNA‏ للخلية المضيفة (على سبيل المثال؛ عبر ‎sale)‏ الاتحاد المتجانسة ‎(homologous recombination‏ وبالتالى» قد يكون بروتين دمج منشط نسخى تركيبى؛ وعلاوة على ذلك حمض نووى مرمز له؛ موجود داخل كائن حى معدل ‎ih‏ (على سبيل المثال؛ نبات معدل ‎ly 5. (transgenic plant ays‏ عليه؛ يتم أيضاً وصف هذه الكائنات الحية المعدلة ‎o‏ ورائياً ‎transgenic organisms‏ هنا. فى الأمثلة قد يكون حمض نووى مرمز لبروتين دمج منشط نسخى تركيبى إما متكامل بشكل عشوائى»؛ أو فى مكان محدد مسبقاًء فى جينوم ‎genome‏ ‏الخلية فى الكائن الحى المعدل وراثياً ‎transgenic organism‏ موصوف ‎Loaf‏ طرق للتعبير الجينى للجين موضوع الاهتمام باستخدام بروتين دمج منشط نسخى تركيبى و/أو حمض نووى مرمز له. فى بعض التجسيمات؛ قد يتم إدخال ناقل يشتمل على ‎٠‏ عديد نيوكليوتيد مرمز لبروتين دمج منشط نسخى تركيبى فى خلية مضيفة تشتمل على الجين موضوع الاهتمام المرتبط على نحو قابل للتشغيل بموقع ارتباط ‎DNA‏ مستهدف لبروتين الدمج. فى بعض ‎ABN‏ يشتمل بروتين الدمج المنشط النسخى التركيبى على وسائل لتنشيط التعبير الجينى للتعبير الجينى لنبات. بعد إدخال الناقل فى الخلية المضيفة؛ قد يبدأ أو يتزايد التعبير الجينى للجين موضوع الاهتمام؛ وبالتالى إنتاج منتج التعبير الجينى للجين موضوع الاهتمام فى ‎١‏ الخلية المضيفة؛ على سبيل المثال؛ بكمية وفقاً للتحكم التنظيمى فى بروتين الدمج. قد يتم عزل منتجات التعبير الجينى هذه و/أو تنقيتها من الخلية المضيفة وفقاً لأى طريقة معروفة فى المجال. سوف تصبح المزايا السابقة وغيرها من المزايا أكثر وضوحاً من الوصف التفصيلى التالى للتجسيمات المتعددة؛ التى تسير بالإشارة إلى الأشكال المرفقة. ‎Yo‏ شر ح مختصر للرسومات شكل ‎١‏ يتضمن حافز تفاعل محدد لنطاق تنشيط التعبير الجينى لبروتين فيريون الهربس البسيط (نطاق تنشيط التعبير الجينى)؛ النطاق الفرعى ‎IT‏ (المتوالية رقم: 4). تشير العلامات النجمية إلى الأحماض الأمينية ‎amino acids‏ لنطاق تنشيط التعبير الجينى لبروتين فيريون الهربس البسيط؛ ‎£Y14‏
— \ \ — النطاق الفرعى ‎ell‏ المقترح أن تتصل مباشرةً بالوحدة الفرعية 7001 ل 11114 على النحو المقترح بواسطة 130:10596-604 ‎et al. (2008) J.
Am.
Chem.
Soc.‏ كأواو0ها. شكل ¥ يتضمن محاذاة للنطاق الفرعى اا لتنشيط التعبير الجينى لبروتين فيريون الهربس البسيط مع النبات المحدد لنطاقات تنشيط التعبير الجينى. تحتوى نطاقات تنشيط التعبير الجينى © للنبات المذكور على حافز تفاعل. يتم إبراز حوافز التفاعل ‎interaction motifs‏ المنحازة. يتم وضع علامة نجمية (*) على رواسب حافز التفاعل للنطاق الفرعى اا من بروتين فيريون الهربس البسيط التى تم اقتراح أن تتصل بعوامل النسخ ‎transcription factors‏ شكل © يتضمن محاذاة تبين التعديلات التى قد يتم إدخالها إلى حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى ل ‎ERF2‏ لإنتاج حافز تفاعل ‎ERF2‏ بديل. يتم إدراج تتابعات ‎ERF2‏ الأصلى ‎٠‏ وحوافز تفاعل بروتين فيريون الهربس البسيط للمقارنة. يتم إبراز الاتصالات المباشرة. شكل ؛ يتضمن محاذاة تبين التعديلات التى قد يتم إدخالها فى حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى ل 5114 لإنتاج حافز تفاعل 0114 بديل. يتم إدراج تتابعات 5114 الأصلى وحوافز تفاعل 7016 للمقارنة. يتم إبراز الاتصالات المباشرة. شكل © يتضمن محاذاة تبين التعديلات التى قد يتم إدخالها فى حافز تفاعل نطاق تنشيط ‎Vo‏ التعبير الجينى ل 81581 لإنتاج حافز تفاعل 81581 بديل. يتم إدراج تتابعات 1581م الأصلى وحوافز ‎Jeli‏ 7016 للمقارنة. يتم إبراز الاتصالات المباشرة. شكل + يتضمن محاذاة تبين التعديلات التى قد يتم إدخالها فى حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى ل ‎ORCA2‏ لإنتاج حافز تفاعل 060/82 بديل. يتم إدراج تتابعات 08082 الأصلى وحوافز ‎Jeli‏ 7016 للمقارنة. يتم إبراز الاتصالات المباشرة.
‎٠‏ شكل ‎١7‏ يتضمن محاذاة تبين التعديلات التى قد يتم إدخالها فى حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى ل | ‎DREBIA‏ لإنتاج حافز تفاعل ‎DREBIA‏ بديل. يتم إدراج تتابعات ‎DREBIA‏ الأصلى وحوافز تفاعل 7016 للمقارنة. يتم إبراز الاتصالات المباشرة.
‎ARE
— \ \ — شكل ‎A‏ يتضمن محاذاة تبين التعديلات ‎Al‏ قد يتم إدخالها فى حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى ل ‎CBF1‏ لإنتاج حافز تفاعل ‎CBF1‏ بديل. يتم إدراج تتابعات 0811 الأصلى وحوافز تفاعل 7/016 للمقارنة. يتم إبراز الاتصالات المباشرة. شكل 9 يتضمن محاذاة تبين التعديلات ‎Al‏ قد يتم إدخالها فى حافز تفاعل نطاق تنشيط © التعبير الجينى ل 0051 لإنتاج حافز تفاعل 0051 بديل. يتم إدراج تتابعات ‎DOF‏ الأصلى وحوافز تفاعل 7/016 للمقارنة. يتم إبراز الاتصالات المباشرة. شكل ‎٠١‏ يتضمن خريطة لناقل دمج للخميرة ‎yeast integration vector‏ « -10ام 1/-286؛ الذى يحتوى على مواقع ارتباط 4اع2 ل ‎HAS‏ (موقع عالى الانجذاب ‎High‏ ‎(Affinity Site‏ عكس اتجاه جين مراسل ‎reporter gene‏ 1ا11/ا. تم استهداف الناقل لموقع ‎¢S. cerevisiae ١10‏ واحتوى على الجين المقاوم ل ‎KanMX‏ للاختيار فى كل من الخميرة ‎yeast‏ والبكتيريا ‎bacteria‏ ‏شكل ‎١١‏ يتضمن توضيح بيانى لمستويات التعبير الجينى للجين المراسل ل ‎Mell‏ الذى أنتج خميرة من التنشيط بواسطة حوافز تفاعل تنشيط التعبير الجينى للنبات ‎plant‏ ‎transactivation‏ المختلفة. ‎Yo‏ شكل ‎VY‏ يتضمن خريطة بلازميد ‎plasmid‏ 0/89897م: معزز أكتين-١‏ 8010-2 ‎Arabidopsis thaliana promoter containing‏ يحتوى على ‎A‏ أزواج أساسية لمواقع ارتباط )£6( إصبع زنك ترادفية ‎١49-547‏ عكس اتجاه موقع البداية النسخى ‎transcriptional start‏ 6 الذى يدفع جين مراسل ‎gus‏ المستخدم لاختبار بروتينات الدمج الإصبعية للزنك 2006 ‎finger fusion proteins‏ لحوافز تفاعل تنشيط التعبير الجينى للنبات. يحتوى الناقل الثنائى ‎binary vector ٠‏ أيضاً على معزز يوبيكويتين-١٠ ‎A. thaliana ubiquitin—10 promoter‏ الذى يدفع مؤشر قابل للاختيار ‎pat‏ لإنتاج حالة نبات مراسل ‎reporter plant‏ مستهدف. شكل ‎١١‏ يتضمن خريطة لبلازميد ‎.PDAB107881‏ ‏شكل ‎VE‏ يتضمن خريطة لبلازميد ‎.PDAB107882‏ ‎£Y14‏
١س‎ شكل ‎Yo‏ يتضمن خريطة لبلازميد ‎.PDAB107883‏ شكل ‎١١‏ يتضمن خريطة لبلازميد ‎.PDAB107884‏ شكل ‎VV‏ يتضمن خريطة لبلازميد ‎.PDAB107885‏ شكل ‎YA‏ يتضمن خريطة لبلازميد ‎.PDAB107886‏ ° شكل ‎٠١9‏ يتضمن خريطة لبلازميد ‎.PDAB107887‏ شكل ‎٠١‏ يتضمن خريطة لبلازميد ‎.PDAB106272‏ شكل ‎VY‏ يتضمن خريطة لبلازميد ‎.PDAB106238‏ شكل ‎YY‏ يتضمن خريطة لبلازميد ‎.PDAB106273‏ شكل ‎YY‏ يتضمن خريطة لبلازميد ‎.PDAB106274‏ .PDAB106275 ‏يتضمن خريطة لبلازميد‎ YE ‏شكل‎ ٠١ شكل ‎YO‏ يتضمن خريطة لبلازميد ‎.PDAB106276‏ شكل 776 يتضمن خريطة لبلازميد ‎.PDAB106277‏ شكل ‎YY‏ يتضمن خريطة لبلازميد ‎.PDAB106278‏ شكل ‎YA‏ يتضمن خريطة لبلازميد ‎.PDAB106279‏ ‎vo‏ شكل ‎YA‏ يتضمن تمثيل بيانى للانحراف المتوسط والمعيارى (الماس) والشرائح الربعية (الخطوط والمربعات) لمستوى نسخ ‎GUS‏ الذى تم تطبيعه بواسطة مستوى التعبير الجينى داخلى ‎endogenous gene expression‏ المنشاً للمعالجات المختلفة لحافز تفاعل تنشيط التعبير الجينى للنبات. تم مقارنة تنشيط الجين المرإسل ‎QUS‏ من حوافز تفاعل تنشيط التعبير الجينى للنبات المختلفة بمكافحة ناقل فارغ ‎empty vector‏ وتنشيط الوحدة الفرعية للنطاق 11 لبروتين
VP16 ٠
— \ ¢ —
شكل ‎٠١0‏ يتضمن خريطة لبلازميد ‎:pGalGUS‏ يتم استخدام ستة مواقع ارتباط 814 ترادفية مدمجة مع معزز أكتين ‎AL thaliana Y=‏ الذى يدفع جين مراسل ‎gus‏ لاختبار حوافز تفاعل تنشيط التعبير الجينى للنبات ‎plant transactivation interaction motifs‏ المدمجة مع البروتين الرابط ‎binding protein‏ ل ‎.Galg‏ يحتوى الناقل الثنائى أيضاً على معزز يوبيكويتين -
‎A. thaliana ٠١ ©‏ الذى يدفع مؤشر ‎LE‏ للاختيار ‎pat‏ لإنتاج ‎Als‏ النبات المراسل المستهدفة. شكل ‎١‏ يتضمن خريطة لبلازميد 5لا01/1-6: يتم استخدام ثمانية مواقع ارتباط ‎UPA-Box consensus binding sitesi as;‏ ترادفية مدمجة مع معزز أكتين-7 ‎A.‏ ‏38 الذى يدفع جين مراسل 915 لاختبار حوافز تفاعل تنشيط التعبير الجينى للنبات المدمجة مع البروتين الرابط ل ‎TAL‏ يحتوى الناقل الثنائى أيضاً على ‎Hime‏ يوبيكويتين ‎٠١-‏ .م ‎٠‏ 81808 الذى يدفع مؤشر قابل للاختيار ‎pat‏ لإنتاج ‎Als‏ النبات المراسل المستهدفة. الوصف ‎١‏ لتفصيلي: يتم توضيح تتابعات الحمض النووى ‎nucleic acid sequences‏ المدرجة فى قائمة التتابع المرفقة باستخدام اختصارات حروف معيارية لقواعد النيوكليوتيد ‎nucleotide bases‏ ؛ كما هو ‎١‏ محدد فى 1.822 5 ‎C.F.R.‏ 37. يتم إظهار شريط واحد فقط لكل تتابع حمض نووى ‎nucleic‏ ‎cacid sequence‏ ولكن من المفهوم أن الشريط المكمل ‎complementary strand‏ يجب تضمينه بأى إشارة إلى الشريط المعروض ‎strand‏ 60/ا015018. فى قائمة التتابع المرفقة: المتوالية رقم: ‎١‏ يبين نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات ‎VP16‏ يحتوى على حافز تفاعل (تحته خط): ‎GMTHDPVSYGALDVDDFEFEQMFTDALGIDDFGG‏ ‎Yo‏ المتوالية رقم: ‎١‏ يبين نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات ‎ERF2‏ يحتوى على حافز تفاعل (تحته خط): ‎NDSEDMLVYGLLKDAFHFDTSSSDLSCLFDFPA‏ ‏المتوالية رقم: ؟ يبين نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات ‎PTI4‏ يحتوى على حافز تفاعل (تحته خط): ‎£Y14‏
اج \ — ‎CLTETWGDLPLKVDDSEDMVIYGLLKDALSVGWSPFSFTAG‏ ‏المتوالية رقم: ؛ يبين نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات ‎AIERFL‏ يحتوى على حافز تفاعل (تحته خط): ‎CFTESWGDLPLKENDSEDMLVYGILNDAFHGG‏ ‏المتوالية رقم: © يبين نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات 0140/2 يحتوى على حافز تفاعل (تحته خط): ‎FNENCEEIISPNYASEDLSDIILTDIFKDQDNYEDE‏ ‏المتوالية رقم: 7 يبين نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات ‎DREBIA‏ يحتوى على حافز تفاعل (تحته خط): ‎GFDMEETLVEAIYTAEQSENAFYMHDEAMFEMPSLLANMAEGM‏ ‎Yo‏ المتوالية رقم: ‎١‏ يبين نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات 0871 يحتوى على حافز تفاعل (تحته خط): 6 ‎EQSEGAFYMDEETMFGMPTLLDNMAEG‏ ‏المتوالية رقم: ‎A‏ يبين نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات ‎DOF1 plant transactivation‏ يحتوى على حائز ققفاعل ‎motif‏ 7 (تحته خطا): ‎SAGKAVLDDEDSFVWPAASFDMGACWAGAGFAD‏ ‎Yo‏ المتوالية رقم: 8 يبين نطاق فرعى ‎I‏ لنطاق تنشيط تعبير جينى ‎VP16‏ الذى يمثل حافز ‎Je lal)‏ ‎Jala‏ المتوالية رقم: ‎DDFEFEQMFTD ١‏ المتوالية رقم: ‎٠١‏ يبين ‎Bla‏ تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات ‏ 2ع : ‎DAFHFDTSSSD‏ ‏المتوالية رقم: ‎١١‏ يبين حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات ‎tPTI4‏ ‎DDSEDMVIYGLLKD ٠‏ المتوالية رقم: ‎VY‏ يبين حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات 4.1 اغ2م: ‎ENDSEDMLV‏
_ أ \ _ المتوالية رقم: ‎VY‏ يبين حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات 0840/82: ‎EDLSDIILTD‏ ‏المتوالية رقم: ‎VE‏ يبين حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات ‎:DREBIA‏ ‎ENAFYMHDEAMFEMP‏ ‏© المتوالية رقم: ‎V0‏ يبين حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات 08571: ‎DEETMFGMP‏ ‏المتوالية رقم: ‎١6‏ يبين حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات ‎:DOF1‏ ‎EDSFVWPAASFD‏ ‏المتواليات أرقام: ‎77-١١7‏ تبين تتابعات حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات ‎ERF2‏ ‎٠‏ البديل. المتواليات أرقام: 78-77 تبين تتابعات حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات ‎PTI4‏ ‏البديل. ‏المتواليات أرقام: 5-749 تبين تتابعات حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات 1 ‎AERF‏ ‏البديل. ‎Vo‏ المتواليات ‎Yo lif‏ -£0 تبين تتابعات حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات ‎ORCA2‏ ‏البديل. ‏المتواليات أرقام: )£18 تبين تتابعات حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات ‎DREBIA‏ البديل. المتواليات أرقام: ‎0Y—£Y‏ تبين تتابعات حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات ‎CBF1‏ ‎YS‏ البديل. المتواليات أرقام: ‎0A=0F‏ تبين تتابعات حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات ‎plant‏ ‎transactivation DOF]‏ البديل. ‎ARE‏
المتواليات أرقام: 11-09 تبين البادئات ‎primers‏ المستخدمة لتركيب البلازميد ‎plasmid‏ ؛ ‎.pHO-zBG-MEL1‏ ‏المتوالية رقم: ‎TY‏ يبين تتابع عديد نيوكليوتيد لنطاق ارتباط ‎:Z6 DNA‏ ‎TGTGGTGGGAGAGGAGGGTGG‏ ‏0 المتوالية رقم: ‎TA‏ يبين تتابع مكرر ‎A‏ مرات ترادفياً لنطاق ارتباط ‎:Z6 DNA‏ ‎ggtgtggtgggagaggagggtgggagtgtggtgggagaggagggtggetetgtggtgggagaggag‏ ‎ggtggagatgtggtgggagaggagggtggtctigtggtgggagaggagggtggggatgtggtgggag‏ ‎aggagggtggccttgtggtgggagaggagggtggaggtgtggtgggagaggagggtggcettaagecy‏ ‏6 ‎٠‏ المتواليات أرقام: 75-4 تبين البادئات والمسابر ‎probes‏ المستخدمة فى مقايسات ‎pal spat‏ ‎HP‏ ‏المتواليات أرقام: ‎tYA=Vo‏ تبين البادئات المستخدمة لتحليل ‎PCR‏ ل ‎PTUs‏ بمنتجات التبغ ‎tobacco‏ ‏المتوالية رقم: 79 يبين تتابع نيوكليوتيد تركيبى مرمز لحافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى ‎Vo‏ لنبات أصلى ‎plant‏ 0817/8 من ‎VP16‏ الذى تم دمجه مع البروتين الرابط ل ‎:Z6 Zinc Finger‏ ‎ggcatgacccatgatcctgtgtcttatggagccttggatgttgatgactttgagtttgagcagatgttcacaga‏ ‎tgcactgggcatcgatgactttggtgga‏ ‏المتوالية رقم: ‎Av‏ يبين تتابع نيوكليوتيد تركيبى ‎(v3) synthetic nucleotide sequence‏ ‎٠‏ بروتين رابط ل ‎:Z6 Zinc Finger‏ ‎aatgactctgaggacatgctggtgtatggtttgctcaaggatgcctttcactttgacacctccagctcagacce‏ ‎tctcctgcectctttgacttcccagec‏
م \ _ المتوالية ‎AV iad)‏ يبين تتابع نيوكليوتيد تركيبى ‎(V3)‏ مرمز لحافز تفاعل تنشيط التعبير الجينى لنبات أصلى من 0114 الذى تم دمجه مع بروتين رابط ل ‎:Z6 Zinc Finger‏ ‎tgcctgacagaaacttggggagacttgcctctcaaggttgatgactctgaggacatggtgatctatggtetg‏ ‎ttgaaggatgcactctcagtggggtggtccccattctctttcacggcetggt‏ ‏© المتوالية رقم:87/ يبين تتابع نيوكليوتيد تركيبى ‎(V3)‏ مرمز لحافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير
الجينى لنبات أصلى من ‎AtERFT‏ الذى تم دمجه مع بروتين رابط ل ‎Zinc Finger‏ 26: ‎tgcttcacggaatcctggggagaccticctttgaaggagaatgactctgaggacatgttggtgtacggaat‏ ‎cctcaatgatgcttttcatggtggce‏ ‏المتوالية رقم: 87 يبين تتابع نيوكليوتيد تركيبى ‎(V3)‏ مرمز لحافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير
:26 Zinc Finger ‏الجينى لنبات أصلى من 040/82 الذى تم دمجه مع بروتين رابط ل‎ ٠ ttcaatgagaattgtgaagaaatcatctctccaaactacgcatcagaggacttgtctgacatcatcttgacg gacatcttcaaggaccaagacaactatgaggatgag ‏مرمز لحافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير‎ (V3) ‏المتوالية رقم:84 يبين تتابع نيوكليوتيد تركيبى‎ ‏الذى تم‎ DREBIA ‏من‎ 1810/6 plant transactivation domain ‏الجينى لنبات أصلى‎
:Z6 Zinc Finger ‏ل‎ Ly) ‏دمجه مع بروتين‎ VO ggctttgacatggaagaaacattggtggaggccatctacactgctgaacagagcgagaatgccttctac atgcatgatgaggcaatgtttgagatgccatctcttctggccaacatggctgagggaatg ‏مرمز لحافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير‎ (V3) ‏المتوالية رقم:85 يبين تتابع نيوكليوتيد تركيبى‎ :26 Zinc Finger ‏الجينى لنبات أصلى من 0871 الذى تم دمجه مع بروتين رابط ل‎ gaacagtcagaaggtgctttctacatggatgaagagaccatgtttgggatgccaaccctictggataacat ٠ ggcagaggga
‎q —_‏ \ _ المتوالية رقم:87 يبين تتابع نيوكليوتيد تركيبى ‎(V3)‏ مرمز لحافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى لنبات أصلى من 0051 الذى تم دمجه مع بروتين رابط ل ‎Zinc Finger‏ 26: ‎tcagctgggaaggcagtcttggatgatgaggacagctttgtttggcctgetgecatectttgacatgggtgect‏ ‎gctgggcetggagcetggctttgectgac‏ ‏© المتوالية رقم:7/ يبين تتابع نيوكليوتيد تركيبى ‎(V2)‏ مرمز لحافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى لنبات بديل تمثيلى من ‎ERF2‏ الذى تم دمجه مع بروتين رابط ل ‎Zinc Finger‏ 126 ‎aatgactctgaggacatgctggtgtatggtttgctcaaggatgatttccactttgagacaatgttctcagacct‏ ‎gtcctgcectctttgacttcccagec‏ ‏المتوالية ‎AAza8)‏ يبين تتابع نيوكليوتيد تركيبى ‎(V2) synthetic nucleotide sequence‏ مرمز ‎Jalal ٠‏ تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى لنبات بديل تمثيلى من 72114 ‎cA‏ ثم دمجه مع بروتين رابط ل ‎:Z6 Zinc Finger‏ ‎tgcctgacagaaacttggggagacttgcctctcaaggttgatgactttgagtttgagatgatgttcacagat‏ ‎gcactctcagtggggtggtccccattctctttcacggcetggt‏ ‏المتوالية رقم: ‎A‏ يبين تتابع نيوكليوتيد تركيبى ‎(V2)‏ مرمز لحافز تفاعل ‎interaction motif‏ ‎V0‏ نطاق تنشيط التعبير الجينى لنبات بديل تمثيلى من 8858451 الذى تم دمجه مع بروتين رابط ل ‎:Z6 Zinc Finger‏ ‎tgcttcacggaatcctggggagaccticctttgaaggagaatgactttgagtttgaaatgttcacagattacg‏ ‎gaatcctcaatgatgcttttcatggtggce‏ ‏المتوالية رقم: 960 يبين تتابع نيوكليوتيد تركيبى ‎(V2)‏ مرمز لحافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير ‎٠‏ - الجينى لنبات بديل تمثيلى من 040/82 الذى تم دمجه مع بروتين رابط ل ‎Zinc Finger‏ 26: ‎ttcaatgagaattgtgaagaaatcatctctccaaactacgcatcagaggactttgatcttgagatgttgacg‏ ‎gacatcttcaaggaccaagacaactatgaggatgag‏
=« \ _ المتوالية رقم: ‎9١‏ يبين تتابع نيوكليوتيد تركيبى ‎(V2)‏ مرمز لحافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى لنبات بديل تمثيلى من ‎DREBIA‏ الذى تم دمجه مع بروتين رابط ل ‎Zinc Finger‏ 26: ‎ggctttgacatggaagaaacattggtggaggccatctacactgctgaacagagcgaggactttgagtttg‏ ‎aagcaatgttcatggattctctictggccaacatggctgagggaatg‏ ‏0 المتوالية رقم: 97 يبين تتابع نيوكليوتيد تركيبى ‎(V2)‏ مرمز لحافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير
الجينى لنبات بديل تمثيلى من 0811 الذى تم دمجه مع بروتين رابط ل ‎Zinc Finger‏ 26: ‎gaacagtcagaaggtgctttctacatggatgactttgagttcgagacaatgttcatggacacccttctggat‏ ‎aacatggcagaggga‏ ‏المتوالية رقم: 97 يبين تتابع نيوكليوتيد تركيبى ‎(v2) synthetic nucleotide sequence‏ مرمز
‎Saad ٠‏ تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى لنبات بديل تمثيلى من ‎DOFT‏ الذى تم دمجه مع بروتين رابط ل ‎:Z6 Zinc Finger‏ ‎tcagctgggaaggcagtcttggatgatgaggactttgagtttgaagccatgttcacggacatgggtgectg‏ ‎ctgggctggagctggctttgctgac‏
‏المتواليات أرقام: 98-494 تبين البادئات والمسابر المستخدمة فى مقايسات 90/5 و
‎.BYEEF HP ٠ consensus binding ‏المتوالية رقم: 99 يبين تتابع تكرار ترادفى مأخوذ من تتابع ارتباط التوافق‎ ‏بواسطة 1/4833 ويسمى نطاق‎ 1700101016 genes ‏للجينات القابلةٌ للتحريض‎ sequence :UPA DNA ‏ارتباط‎ ‎TATATAAACCTNNCCCTCT
‎exemplary synthetic ‏يبين نطاق تنشيط التعبير الجينى تركيبى تمثيلى‎ ٠٠١ ‏المتوالية رقم:‎ Ye ‏تنشيط التعبير الجينى للنبات‎ Glas ‏يشتمل على حافز تفاعل‎ transactivation domain ‏(تحته خط):‎ ERF2
— \ \ — ‎GMTHDPVSYGALDVDAFHFDTSSSDALGIDDFGG‏ ‏المتوالية رقم ‎٠١:‏ يبين نطاق تنشيط التعبير الجينى تركيبى تمثيلى يشتمل على حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات ‎PTI4‏ (تحته خط): ‎GMTHDPVSYGALDVDDSEDMVIYGLLKDALGIDDFGG‏ ‏المتوالية رقم ‎٠١:‏ يبين نطاق تنشيط التعبير الجينى تركيبى تمثيلى يشتمل على حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات 811451 (تحته خط): ‎GMTHDPVSYGALDVENDSEDMLVALGIDDFGG‏ ‏المتوالية ‎V8;‏ + ) يبين نطاق تنشيط التعبير الجينى تركيبى تمثيلى يشتمل على حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات ‎ORCA2‏ (تحته خط):
GMTHDPVSYGALDVEDLSDIILTDALGIDDFGG ٠ ‏يبين نطاق تنشيط التعبير الجينى تركيبى تمثيلى يشتمل على حافز تفاعل‎ ٠1 ‏المتوالية رقم‎ plant transactivation domain ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى تلنبات‎ interaction motif ‏(تحته خط):‎ DREBIA
GMTHDPVSYGALDVENAFYMHDEAMFEMPALGIDDFGG
‎Yo‏ المتوالية رقم:5٠١٠‏ يبين نطاق تنشيط التعبير الجينى تركيبى تمثيلى يشتمل على حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات 0811 (تحته خط): ‎GMTHDPVSYGALDVDEETMFGMPALGIDDFGG‏ ‏المتوالية )8 + ) يبين نطاق تنشيط التعبير الجينى تركيبى تمثيلى يشتمل على حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات ‎DOF]‏ (تحته خط): ‎GMTHDPVSYGALDVEDSFVWPAASFDALGIDDFGG ٠٠ ‎£Y14
— \ \ — المتوالية رقم:١١٠‏ يبين نطاق تنشيط التعبير الجينى تركيبى تمثيلى يشتمل على حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات ‎ERF2‏ (تحته خط): ‎GMTHDPVSYGALDVDDFHFETMFSDALGIDDFGG‏ ‏المتوالية ‎Vo Ardy‏ يبين نطاق تنشيط التعبير الجينى تركيبى تمتيلى ‎exemplary synthetic‏ ‎Al transactivation domain ©‏ يشتمل على حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات ‎ERF2‏ بديل (تحته خط): ‎NDSEDMLVYGLLKDDFHFETMFSDLSCLFDFPA‏ ‏المتوالية ;828 + ) يبين نطاق تنشيط التعبير الجينى تركيبى تمثيلى يشتمل على حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات 7114 بديل (تحته خط): ‎GMTHDPVSYGALDVDDFEFEMMFTDALGIDDFGG ٠ ‏يشتمل على حافز تفاعل‎ AT ‏يبين نطاق تنشيط التعبير الجينى تركيبى تمثيلى‎ ٠١١ ‏المتوالية رقم:‎ ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات 2114 بديل (تحته خط):‎
CLTETWGDLPLKVDDFEFEMMFTDALSVGWSPFSFTAG
‏المتوالية رقم:١١١ يبين نطاق تنشيط التعبير الجينى تركيبى تمثيلى يشتمل على حافز تفاعل نطاق‎ ‎Vo‏ تنشيط التعبير الجينى للنبات 8481471 بديل (تحته خط): ‎GMTHDPVSYGALDVENDFEFEMFTDALGIDDFGG‏ ‏المتوالية ‎Yi)‏ )) يبين نطاق تنشيط التعبير الجينى تركيبى تمثيلى ‎AT‏ يشتمل على حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات 8481471 بديل (تحته خط): ‎CFTESWGDLPLKENDFEFEMFTDYGILNDAFHGG‏ ‎YS‏ المتوالية رقم:"١١‏ يبين نطاق تنشيط التعبير الجينى تركيبى تمثيلى يشتمل على حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات 040/82 بديل (تحته خط): ‎£Y14
‎Ad —‏ \ — ‎GMTHDPVSYGALDVEDFDLEMLTDALGIDDFGG‏ ‏المتوالية رقم:؛ ‎١١‏ يبين نطاق تنشيط التعبير الجينى تركيبى تمثيلى ‎AT‏ يشتمل على حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات 0140/2 بديل (تحته خط): ‎FNENCEEIISPNYASEDFDLEMLTDIFKDQDNYEDE‏ ‏5 المتوالية ,028 ‎VV‏ يبين نطاق تنشيط التعبير الجينى تركيبى تمثيلى يشتمل على حافز تفاعل نطاق
‏تنشيط التعبير الجينى للنبات 10142817 بديل (تحته خط): ‎GMTHDPVSYGALDVEDFEFEAMFMDALGIDDFGG‏ ‏المتوالية رقم ‎١:‏ يبين نطاق تنشيط التعبير الجينى تركيبى تمثيلى آخر يشتمل على حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات 042817 بديل (تحته خط):
‎GFDMEETLVEAIYTAEQSEDFEFEAMFMDSLLANMAEGM ~~ ٠ ‏المتوالية رقم:7١١١ يبين نطاق تنشيط التعبير الجينى تركيبى تمثيلى يشتمل على حافز تفاعل‎ plant transactivation domain ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى تلنبات‎ interaction motif
‎CBF]‏ بديل (تحته خط):
‎GMTHDPVSYGALDVDDFEFETMFMDALGIDDFGG
‎٠‏ المتوالية رقم ‎١١:‏ يبين نطاق تنشيط التعبير الجينى تركيبى تمثيلى آخر يشتمل على حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات ‎CBF]‏ بديل (تحته خط): ‎EQSEGAFYMDDFEFETMFMDTLLDNMAEG‏ ‏المتوالية رقم:9١١‏ يبين نطاق تنشيط التعبير الجينى تركيبى تمثيلى يشتمل على حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات ‎DOF]‏ بديل (تحته خط):
‎GMTHDPVSYGALDVEDFEFEAMFTDALGIDDFGG ٠
‎£Y14
— ¢ \ — المتوالية رقم ‎YY ee‏ يبين نطاق تنشيط التعبير الجينى تركيبى تمثيلى آخر يشتمل على حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات 10011 بديل (تحته خط): ‎SAGKAVLDDEDFEFEAMFTDMGACWAGAGFAD‏ ‏المتواليات أرقام: ‎١7-١١١‏ تبين تتابعات حافز تفاعل ‎interaction motif sequences‏ نطاق 0 تنشيط التعبير الجينى للنبات بديل.
طريقة (طرق) تنفيذ الاختراع نظرة عامة على التجسيمات المختلفة موصوف هنا نطاقات تنشيط تعبير جينى نباتى ‎plant transactivation domains‏ جديدة (نطاقات تنشيط التعبير الجينى)؛ حوافز تفاعل ‎DNA‏ وبدائل تركيبية لما سبق والتى قد تكون
‎Vo‏ مفيدة كمنشطات نسخية ‎transcriptional activators‏ ؛ والتى قد يتم دمجها فى بروتين دمج منشط نسخى تركيبى مع عديد ببتيد رابط ل ‎(DNA‏ للتنشيط الاستتساخى ‎transcriptional‏ ‏07 للجين موضوع الاهتمام. حوافز تفاعل نطاقات تنشيط التعبير الجينى نباتية جديدة خاصة ونطاق تنشيط التعبير الجينى الموصوفة هنا يتم عزلها من البروتينات النباتية؛ ‎ERF2;‏ ‎AtERF1; ORCA2; DREBIA; 1‏ :114 ؛ و ‎DOF]‏ يمكن استخدام بروتينات دمج
‎١‏ المنشط النسخى ‎Synthetic transcriptional activator fusion proteinsi Sill‏ التى تشتمل على حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى نباتى جديد و/أو نطاق تنشيط التعبير الجينى كما هو موصوف هنا فى تجسيمات خاصة لزيادة (على سبيل المثال؛ بدء) التعبير الجينى فى أنواع عديدة من الخلايا (على سبيل المثال» خلايا ‎yeast cells syed‏ وخلايا نبات ‎plant‏ ‏5اا66)؛ وفعلياً أى جين ‎gene‏
‎٠‏ نطاقات تنشيط التعبير الجينى ‎Transactivation domains‏ تكون مستقلة وظيفياً؛ أى؛ يستطيع نطاق تنشيط التعبير الجينى فردى تنظيم الاستنساخ عند دمجه مع إحدى النطاقات الرابطة ل ‎DNA‏ المتغايرة المختلفة العديدة؛ وعند ربطها فى مواقع مختلفة فى منطقة محفز. ‎Halland‏ ‎(Struhl (2002)‏ أعلاه. ويعتقد أن نطاقات تنشيط التعبير الجينى يشارك فى تناظر تتابع أولى قليل ويتخذ تركيب عند الارتباط فقط بهدف. )1988( ‎(Sigler‏ أعلاه. وعلى الرغم من أن
‎£Y14
ه0١"‏ الرواسب الحمضية والكارهة للماء داخل نطاقات تنشيط التعبير الجينى يعتقد أنها هامة (انظرء على سبيل المثال» (1991) ‎(Cress and Triezenberg‏ أعلاه؛ ويعتقد أن مساهمة الرواسب الفردية ‎blallindividual residues‏ تكون صغيرة. )2002( ‎(Hall and Struhl‏ أعلاه. من الصعب التنبؤ مسبقاً إذا كان حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى التركيبى سيعمل على 0 بدء أو تعزيز التعبير الجينى فى خلية نبات ‎plant cell‏ تكون القدرة على عدم التنبؤ هذه جزئياً على الأقل نتيجة لحقيقة أن بعض نطاقات تنشيط التعبير الجينى تكون منشطات تعبير جينى قوية جداً والتى قد تؤدى إلى "إخماد" (على سبيل ‎(Jha‏ عن طريق مكونات معايرة للآلية النسخية الخلوية ‎transcriptional machinery‏ 81انااا66) كوظيفة لكل من تركيزها الخلوى ‎intracellular concentration‏ وقوة نطاقات تنشيط التعبير الجينى الخاصة ‎hil le‏ على ‎Vo‏ سبيل المثال؛ 6,271,341 ‎U.S.
Patent‏ ( 016/انطاقات تنشيط التعبير الجينى طافرة مع تنظيم جين متدرج ‎.(graded gene regulation‏ موصوف هنا الاكتشاف غير المتوقع أن حوافز تفاعل نطاقات تنشيط التعبير الجينى نباتية جديدة معينة ونطاق تنشيط التعبير الجينى تشارك فى تناظر التتابع مع 016/انطاق تنشيط التعبير الجينى تمنح مستويات مختلفة جداً من التنظيم عندما تضعها الجينات تحت سيطرتها. باستخدام ‎Vo‏ إبستراتيجية قابلة للتعميم ل "مبادلة ‎swapping‏ " نطاقات تنشيط التعبير الجينى لإنتاج بروتينات دمج لمنشط تعبير جينى نسخى تركيبى؛ وقد وجد بشكل مدهش أن حوافز تفاعل نطاقات تنشيط التعبير الجينى ونطاق تنشيط التعبير الجينى جديدة معزولة من 0114 ‎(DREBI1A‏ 2؛ اع ‎CBF‏ قادرة على توفير زيادات أكبر فى استنساخ الجين ‎transcription‏ 9616 فى خلية نباتية أكثر من المتوفر بواسطة 016/؛ والمعروف فى المجال بأنه منشط تعبير جينى ‎transactivator ٠‏ جيد جداً. وقد وجد أيضاً أن حوافز تفاعل نطاقات تنشيط التعبير الجينى ونطاق تنشيط التعبير الجينى من 88585171 080/82؛ و0071 توفر زيادات أقل فى الاستنساخ الجينى ‎.gene transcription‏ موصوف هنا أيضاً الاكتشاف غير المتوقع أن حوافز تفاعل نطاقات تنشيط التعبير الجينى ونطاق تنشيط التعبير الجينى ‎dha‏ تشتمل على تغيرات حمض أمينى ‎acid‏ 807100 قليلة جداً وطفيفة ‎Yo‏ فيما يتعلق بالتتابع الأصلى قد توفر مزيد من التعزيز أو الضبط للخواص التنظيمية الجينية التى ‎£Y14‏
-؟١'-‏ تظهر بواسطة نطاق تنشيط التعبير الجينى الأصلى. على سبيل ‎(JB‏ وجد بشكل مدهش أن حوافز تفاعل ‎ERF2‏ و 0871 نطاق تنشيط التعبير الجينى بديلة تؤدى إلى استنساخ أكبر بشكل ملحوظ للجين الواقع تحت سيطرتها أكثر من حافز التفاعل الأصلى المقابل فى النباتات. اختصارات ‎Chs |‏ جين إنزيم سينثاز كالكون ‎chalcone synthase gene‏ ‎HAS‏ موقع عالى الألفة ‎HP‏ مسبار تحلل مائى ‎hydrolysis probe‏ ‎HSV‏ فيروس الهربس البسيط ‎Herpes Simplex Virus‏ ‎Murashige MS‏ و ‎Skoog‏ ‎—p PNPG ©.‏ نيتروفنيل - الفا ‎—D-‏ جلوكوبيرانوسيد ‎p—nitrophenyl—‏ ‎alpha—-D-glucopyranoside‏ ‎sas PTU‏ استنساخية نباتية ‎plant transcriptional unit‏ ‎SSC‏ سترات صوديوم ملحى ‎saline-sodium citrate‏ ‎Glas TAD‏ تنشيط تعبير جينى ‎transactivation domain‏ ‎TBP ١‏ بروتين رابط ل ‎TATA-binding protein TATA‏ ‎DNA T-DNA‏ ناتل ‎transfer DNA‏ ‎TFIIB‏ عامل استتساخ ‎transcription factor [IB ١18‏ ‎TFIIH‏ عامل استنساخ ‎IH‏ ‏1 محرض ورم ‎tumor—inducing‏ (بلازميدات ‎plasmids‏ مشتقة ‎٠‏ من ‎(A. tumefaciens‏ ‎£Y14‏
ا" ‎UAS‏ تتابع تنشيط المنطقة ‎upstream activation sequence‏ تجاه الطرف 70 من الشريط ‎VP16‏ بروتين فيريون الهربس البسيط ‎Herpes Simplex Virion‏ ‎Protein‏ 1 \ ‎o‏ لتسهيل مراجعة التجسيمات المتنوعة للوصف, يتم ‎dae)‏ التوضيحات التالية للمصطلحات المحددة. داخلى: كما هو مستخدم هنا, المصطلح ‎"JAI‏ يشير إلى المواد (على سبيل المثال, جزيئات الحمض النووى ‎acid molecules‏ 71101616 وعديدات الببتيد) التى ‎Lan‏ من داخل كائن خاص, نسيج, أو خلية. وعلى سبيل المثال, قد يشير عديد الببتيد ‎"LIAN‏ المعبر عنه فى خلية ‎٠‏ نباتية إلى عديد الببتيد الذى يعبر عنه عادة فى خلايا من نفس النوع من النباتات التى أجرى عليها الهندسة الوراثية من نفس الأنواع. وبالمثل, قد يشير الحمض النووى 'الداخلى” الموجود فى خلية نباتية إلى حمض نووى (على سبيل المثال, ‎DNA‏ الجينومى) الذى يوجد عادة فى ‎WIA‏ من نفس النوع من النباتات التى لم يجرى عليها هندسة وراثية لنفس الأنواع. تعبير جينى: كما هو مستخدم هنا, "تعبير ‎Cian‏ لتتابع مرمز (على سبيل المثال, جين أو ‎VO‏ ترانسجين) يشير إلى العملية التى بواستطها يتم تحويل المعلومة المرمزة من وحدة استنساخ حمض نووى ‎Nucleic acid transcriptional unit‏ (متضمنة, على سبيل ‎DNA, Jt‏ أر ‎cDNA‏ ‏الجينومى إلى جزء تشغيلى, غير تشغيلى, أو تركيبى لخلية (على سبيل ‎JB‏ بروتين). ويمكن التأثير على التعبير الجينى بواسطة إشارات خارجية ‎external signals‏ ؛ على سبيل المثال, تعرض الخلية, النسيج, أو الكائن الحى لعامل يزيد أو يقلل التعبير الجينى الموجود هنا ويمكن ‎٠‏ - تنظيم التعبير الجينى ‎Lal‏ أياً كان فى مسار من ‎DNA‏ إلى ‎RNA‏ إلى البروتين. ويحدث تنظيم التعبير الجينى, على سبيل المثال, من خلال التحكمات التى تتم على الاستنساخ, الترجمة, انتقال ومعالجة ‎RNA‏ تحلل الجزيئات المتوسطة ‎of, Mina Jie‏ من خلال التنشيط, الإخماد ‎inactivation‏ عمل حجيرات ‎,compartmentalization‏ أو ‎Jas‏ جزيئات البروتين ‎protein‏ ‎molecules‏ المحددة بعد عملها, أو بواسطة اتحادات لأى مما سبق. ويمكن قياس التعبير الجينى ‎£Y14‏
CY A-
عند مستوى ‎RNA‏ أو مستوى البروتين بواسطة الطرق المعروفة فى المجال, المتضمنة, دون
تحديد, مخطط ‎RT-PCR Northern‏ مخطط ‎Western‏ واختبار (ات) فاعلية البروتين فى
المعمل, فى موقعه, أو فى الجسم.
‎sal‏ التعبير الجينى: كما هو مستخدم هنا, المصطلح 'زيادة التعبير الجينى” يشير إلى بدء
‏5 التعبير الجينى, بالإضافة إلى الزيادة الكمية فى مقدار منتج التعبير الجينى الناتج من تركيب قالب
‎.template construct‏ وفى بعض التجسيمات, قد يستخدم عديد الببتيد المشتمل على نطاق
‏تنشيط التعبير الجينى 'لزيادة التعبير الجينى” من حمض نووى. وفى تلك التجسيمات, قد تحدد
‏الزيادة فى التعبير الجينى بالمقارنة مع مقدار منتج التعبير الجينى الناتج فى تحكم (على سبيل
‏المثال, من التركيب فى غياب البروتين المشتمل على نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات).
‎Ve‏ بروتين الدمج: كما هو مستخدم هنا, المصطلح 'بروتين الدمج” يشير إلى جزئ يشتمل على اثنين على الأقل من عديدات الببتيد المرتبطة عملياً. وفى أمثلة معينة, قد يتم التعبير عن اثنين من عديدات الببتيد المرتبطة عملياً ‎sale‏ كجزء من المنتجات الوراثية ‎gene products‏ المختلفة (على سبيل المثال, فى الكائنات الحية المختلفة). وفى أمثلة أخرى, قد يشتق اثنين على الأقل من عديدات الببتيد المرتبطة عملياً فى بروتين الدمج الموصوف هنا المتفاعل بينياً عادة مع
‏5 _ بروتين مستهدف واحد على الأقل أو حمض نووى فى خلية وفيها يتم التعبير عن بروتين الدمج. ‎les‏ سبيل المثال, قد يتم التفاعل البينى لعديد الببتيد المرتبط عملياً مع واحدة أو أكثر من عامل (عوامل) الاستنساخ ‎transcription factor‏ أو عنصر (عناصر) بروتينى لآلية استنساخ خلوية, أو أنه قد يتفاعل بينياً مع بولى نيوكليوتيد محدد أو عنصر تركيبى ‎element‏ 51111010012 لحمض نووى.
‎Y.‏ غير متجانس: كما هو مستخدم هنا, المصطلح "غير متجانس” يشير إلى المواد (على سبيل المثال, جزيئات الحمض النووى وعديدات الببتيد) التى لا ‎Lam‏ من داخل كائن خاص, نسيج, أو خلية. وعلى سبيل المثال, قد يشير عديد الببتيد "الغير متجانس” المعبر عنه فى خلية نباتية إلى عديد الببتيد الذى لم يعبر عنه عادة فى خلايا من نفس النوع من النباتات التى لم يجرى عليها الهندسة الوراثية من نفس الأنواع (على سبيل المثال, عديد الببتيد الذى يعبر عنه فى خلايا مختلفة
‎YO‏ .من نفس الكائن ‎al‏ أو خلايا لكائن ‎a‏ مختلف).
—vq- ‏"المعزول" (مثل حمض نووى أو‎ biological component ‏معزول: المكون البيولوجى‎ ‏بروتين) يتم فصله تماماً, ينتج بعيداً عن, أو ينقى بعيداً عن المكونات البيولوجية الأخرى فى خلية‎
RNA ‏الكائن الحى التى يوجد فيها المكون بصورته الطبيعية (على سبيل المثال, ظملانا‎ ,extra—chromosomal ‏الأخرى وخارج الكروموسوم‎ chromosomal ‏الكروموسومية‎ ‏سبيل المثال, يمكن عزل‎ le) ‏والبروتينات), بينما يتم التغير الكيميائى أو الوظيفى فى المكون‎ 0 chemical ‏بواسطة كسر الروابط الكيميائية‎ chromosome ‏الحمض النووى من كروموسوم‎ ‏المتبقى فى الكروموسوم). وقد تتضمن جزيئات‎ DNA ‏التى توصل الحمض النووى ب‎ 5 ‏جزيئات الحمض النووى والبروتينات المنقاة بواسطة‎ "elie! ‏الحمض النووى والبروتينات التى يتم‎ ‏ويتضمن المصطلح الأحماض‎ standard purification methods ‏طرق التنقية القياسية‎ recombinant ‏النووى والبروتينات المحضرة بواسطة التعبير عن حامل الشفرة الوراثية‎ - ٠ ‏فى خلية عائل, بالإضافة إلى جزيئات الحمض النووى المخلقة كيميائياً, البروتينات,‎ 0 peptides ‏والببتيدات‎ ‏كما هو مستخدم هنا, المصطلح "جزئ‎ :Nucleic acid molecule ‏جزئ الحمض النووى‎ ‏للنيوكليوتيدات, والتى قد‎ polymeric form ‏ميرى‎ Jo ‏الحمض النووى" قد يشير إلى شكل‎ ‏جينومى, وأشكال مخلقة‎ DNA cDNA RNA ‏تتضمن كلاً من الأشرطة والأشرطة المكملة من‎ VO ‏ديوكسى‎ ribonucleotide ‏وبوليميرات مخلقة مما سبق. وقد يشير النيوكليوتيد إلى ريبونيوكليوتيد‎ ‏أو شكل معدل لأى نوع من النيوكليوتيد. ويعتبر 'جزئ‎ , deoxyribonucleotide ‏ريبونيوكليوتيد‎ ‎polynucleotide ‏حمض نووى" كما هو مستخدم هنا مترادفاً مع "حمض نووى" و"بولى نيوكليوتيد‎ ‏قواعد على الأقل, ما لم يذكر غير ذلك. ويشتمل‎ ٠١ ‏ويكون طول جزئ الحمض النووى عادة‎ ." ‏المصطلح على أشكال أحادية ومزدوجة الشريط 0010016-50800©0 من ه8/لا0ا. ويمكن أن‎ ٠ ‏يتضمن جزئ الحمض النووى على أى من أو كل من النيوكليوتيدات الموجودة فى الطبيعة والمعدلة‎ ‏الموجودة بطبيعتها و/أو الغير‎ NUCleotide linkages ‏المرتبطة سوياً بواسطة روابط النيوكليوتيد‎ ‏موجودة بطبيعتها.‎ ‏جزئ "خارجى” يمثل الجزئ الذى لا يعتبر أصلى لنظام محدد (على سبيل المثال, المادة‎ ‏و/أو نبات) بالنسبة لتتابع النيوكليوتيد‎ elite variety ‏متنوع» تنوع زهرات‎ germplasm ‏الوراثية‎ Yo £Y14
ل و/أو الموقع الخلوى لعديد الببتيد. وفى تجسيمات, قد تكون عديدات النيوكليوتيد أو عديدات الببتيد الخارجية أو الغير متجانسة عبارة عن جزيئات يتم إمدادها صناعياً إلى نظام بيولوجى ‎biological‏ ‏0 (على سبيل المثال, خلية نبات, جين نبات ‎plantgene‏ أنواع أو تنوع نبات خاص, و/أو كروموسوم نبات ‎(plant chromosome‏ ولا يكون أصلى لذلك النظام البيولوجى الخاص. © وبالتالى, قد يبين تحديد الحمض النووى بأنه 'خارجى” أن الحمض النووى الناتج من مصدر غير المصدر الموجود فى الطبيعة, أو أنه قد يبين أن الحمض النووى له تكوين غير طبيعى, موقع ‎genetic location i)‏ أو, ترتيب من العناصر. وعلى النقيض من ذلك, على سبيل المثال, يكون الحمض النووى "الأصلى" أو "الداخلى" عبارة عن حمض نووى (على سبيل المثال, جين) لا يحتوى على عنصر حمض نووى فضلاً ‎lee‏ ‎٠‏ هو موجود عادة فى الكروموسوم أو ‎sale‏ وراثية ‎genetic material‏ أخرى والتى يوجد عليها الحمض النووى عادة فى الطبيعة. ويتم ترميز نسخة وراثية داخلية ‎endogenous gene‏ ‎transcript‏ بواسطة تتابع نيوكليوتيد عند موقعه الكروموسومى ‎chromosomal I0CUS‏ الطبيعى, ولم يزود صناعياً للخلية. وقد تعدل جزيئات الحمض النووى ‎Liles Nucleic acid molecules‏ أو بطريقة ‎١‏ كيميائية حيوية, أو قد تحتوى على قواعد نيوكليوتيد غير طبيعية أو مشتقة, كما سيفهم بسهولة بواسطة ذوى الخبرة فى المجال. وتشتمل تلك التعديلات, على سبيل المثال, على علامات, إضافة مثيل, استبدال واحدة أو أكثر من النيوكليوتيدات الموجودة فى الطبيعة مع نظير, تعديلات نيوكليوتيد داخلى (على سبيل المثال, روابط غير مشحونة ‎uncharged linkages‏ على سبيل المثال, مثيل فوسفونات ‎,phosphotriesters ji.) JS sau é, methyl phosphonates‏ ‎٠‏ فوسفوراميدات ‎phosphoramidates‏ كربامات ‎,carbamates‏ الخ؛ روابط مشحونة ‎charged‏ ‎Je :linkages‏ سبيل المثال, فوسفوروثيوات ‎,phosphorothioates‏ الخ؛ شقوق ملحقة ‎pendent moieties‏ ؛ على سبيل المثال, ببتيدات ‎peptides‏ ؛ كلابيات داخلية 65 1©0): على سبيل المثال, أكريدين ‎acridine‏ سورالين ‎psoralen‏ الخ؛ كلابيات ‎chelators‏ ¢ عوامل ألكلة ‎alkylators‏ ؛ وروابط معدلة ‎:modified linkages‏ على سبيل ‎Yo‏ المثال, ألفا أحماض نووية أنوميرية ‎alpha anomeric nucleic acids,‏ الخ). ويتضمن ‎£Y14‏
“yy topological conformation ‏شكل طوبوغرافى‎ (of ‏المصطلح "جزئ الحمض النووى" أيضاً‎ ‏المشتملة على أشكال أحادية الشريط 5171016-50300©0, مزدوجة الشريط, مزدوجة جزئياً‎ ‏دائرية, ومقفولة.‎ hairpinned ‏ثلاثية, دبوسية شعرية‎ partially duplexed ‏وتستخدم بعض التجسيمات شكل خاص من الحمض النووى, أوليجونيوكليوتيد‎ ‏عبارة عن جزيئات حمض‎ Oligonucleotides ‏وتكون الأوليجونيوكليوتيدات‎ .0ligonucleotide © ‏قاعدة نووية أو أقل (بالرغم من أن بعض‎ ٠٠ ‏نووى قصيرة نسبياً, متضمنة بصورة نموذجية‎ ‏ويمكن تشكيل الأوليجونيوكليوتيد بواسطة‎ .)2 ٠ ‏الأوليجونيوكليوتيدات قد تشتمل على ما يزيد عن‎ ‏لحمض نووى طويل متضمناً‎ (restriction digestion ‏انقسام (على سبيل المثال, تفتت التقييد‎ ‏أو قد يتم تخليقة كيميائياً , بطريقة‎ ,oligonucleotide sequence ‏تتابع الأ وليجونيو كليوتيد‎ ‏الفردية.‎ nucleoside phosphoramidites ‏محددة التتابع, من الفوسفوراميديت للنيوكليوسيد‎ Vo ‏لتحديد جزئ حمض‎ probe sequence ‏ويمكن استخدام الأوليجونيوكليوتيد كتتابع مسبار‎ ‏نووى متضمناً تتابع نيوكليوتيد خاص. ووفقاً لما سبق, قد يحضر مسبار أوليجونيوكليوتيد‎ cloning ‏تخليقياً أو بواسطة مستعمرة. وتعرف ناقلات المستعمرة‎ oligonucleotide probe ‏المناسبة لذوى الخبرة فى المجال. وقد يميز مسبار الأوليجونيوكليوتيد أو قد يكون غير‎ +65 ‏مميز. وتوجد تقنيات متنوعة لتمييز جزيئات الحمض النووى, متضمنة, على سبيل المثال وبدون‎ VO ‏؛ بداية عشوائية؛ وتتبع ديوكسى‎ nick translation ‏تحديد, تمييز إشعاعى بواسطة ترجمة شق‎ ‏حيث تميز النيوكليوتيدات المستخدمة, على سبيل المثال,‎ deoxytransferase ‏ترانسفيريز‎ ‏وتتضمن العلامات الأخرى التى قد تستخدم, على سبيل المثال وبدون تحديد:‎ . 32P ‏بواسطة‎ ‎enzyme ‏؛ مواد أساسية للأنزيم‎ enzymes ‏؛ أنزيمات‎ fluorophores ‏فلورو فور‎ enzyme ‏؛ ومثبطات للأنزيم‎ enzyme cofactors ‏؛ عوامل مساعدة للأنزيم‎ Substrates ٠ ‏للتحديد, بذاتها أو بالاتحاد مع‎ ALE ‏وبصورة بديلة, فإن استخدام علامة توفر إشارة‎ inhibitors ‏حيث‎ receptors ‏يرتبط بها مستقبلات‎ ligands ‏العوامل المتفاعلة الأخرى, قد يستبدل بليجاندات‎ ‏تميز المستقبلات (على سبيل المثال, بواسطة العلامات المبينة سابقاً) لتوفير الإشارات القابلة‎
Leary etal. ‏للتحديد, إما بذاتها, أو بالارتباط مع كواشف أخرى. أنظر, على سبيل المثال,‎ .)1983( Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80:4045-9 Yo £Y14
دم وتشتمل بعض تجسيمات الاختراع على بولى نيوكليوتيد وهو "قابل للتهجين على وجه التحديد" أو 'مكمل على وجه التحديد” لتتابع هدف نيوكليوتيد. وتعتبر ‎WE‏ للتهجين على وجه التحديد' و'مكمل على وجه التحديد" مصطلحات تدل على درجة كافية من التكملة بحيث أن الارتباط الثابت والمحدد يحدث بين النيوكليوتيد وجزئ الحمض النووى المتضمن تتابع هدف 0 النيوكليوتيد الخاص. وقد لا يحتاج جزئ الحمض النووى ‎90٠٠١0‏ تكملة لتتابع هدفه حتى يكون قابلاً للتهجين بالتحديد. ويكون جزئ الحمض النووى قابلاً للتهجين بالتحديد عند وجود درجة كافية من التكملة لتجنب الارتباط الغير محدد للحمض النووى بتتابعات غير مستهدفة تحت ظروف يطل فيها الارتباط المحدد, على سبيل المثال, تحت ظروف التهجين ‎hybridization conditions‏ الشديدة. ‎Ya‏ وستتغير ظروف التهجين المؤدية إلى درجات خاصة من الشدة على أساس طبيعة طريقة التهجين المختارة وتركيبة وطول تتابعات الحمض النووى المهجنة ‎hybridizing nucleic acid‏ ‎SEQUENCES.‏ وبوجه عام, ستسهم درجة حرارة التهجين والشدة الأيونية ‎ionic strength‏ ‎diay)‏ خاصة تركيز ‎Na+‏ و/أو ‎(Mg++‏ لمنظم التهجين ‎buffer‏ 117/51101280010 فى شدة التهجين, برغم الغسيل عدة مرات المؤثرةٍ أيضاً على الشدة. وتعرف الحسابات المتعلقة بظروف ‎٠‏ _ التهجين المطلوبة للحصول على درجات خاصة من الشدة لذوى الخبرة فى المجال, وتناقش, على سبيل المثال, فى ‎Sambrook et al. (ed.) Molecular Cloning: A Laboratory‏ ‎Manual, 2nd ed., vol. 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold‏ ‎Spring Harbor, NY, 1989, chapters 9 and 11; and Hames and Higgins‏ ‎Nucleic Acid Hybridization, IRL Press, Oxford, 1985‏ (.605). وقد توجد تعليمات ‎٠‏ ودلالة تفصيلية أخرى بالنسبة لتهجين الأأحماض النووية, على سبيل المثال, فى ‎Tijssen‏ "نظرة عامة لمبادئ التهجين واستراتيجية اختبارات مسبار الحمض النووى ‎probe‏ 8610 7101616" , فى ‎Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology —‏ ‎Hybridization with Nucleic Acid Probes, Part |, Chapter 2, Elsevier, NY,‏ ‎and Ausubel et al., Eds., Current Protocols in Molecular Biology,‏ ;1993 ‎.Chapter 2, Greene Publishing and Wiley —Interscience, NY, 1995 Yo‏ ‎£Y14‏
اا وكما هو مستخدم هنا, تشتمل "الظروف الصارمة" على ظروف ‎Ally‏ بها سيحدث فقط التهجين إذا وجد ‎JB‏ من 9675 عدم توافق بين جزئ التهجين وهدف ‎DNA‏ وتتضمن "الظروف الصارمة” مستويات خاصة ‎Lal‏ من الشدة. وبالتالى, كما هو مستخدم هنا تكون الظروف "خفيفة الصرامة” هى تلك التى بها لن تتهجن الجزيئات التى بها عدم توافق للتابع أكثر من ©967؛ وتكون © الظروف (متوسطة الصرامة) التى بها لن تتهجن الجزيئات التى بها عدم توافق للتتابع أكثر من 0 6؛ والظروف "عالية الصرامة” التى بها لن تتهجن التتابعات التى بها عدم توافق أكثر من + )%. وتكون الظروف "شديدة الصرامة جداً” هى تلك التى بها لن تتهجن التتابعات التى بها عدم توافق أكثر من 967. وفى تجسيمات خاصة, تكون الظروف الصارمة عبارة عن تهجين لمدة ‎١‏ ساعة عند ‎٠‏ 0 19م فى منظم التهجين ‎,PerfectHyb™ xii; (Sigma-Aldrich) hybridization buffer‏ متبوعاً بغسيل متتالى لمدة ‎f+‏ دقيقة عند 15م فى ‎.0.1X 550/0.196 SDS‏ تتابعات النيوكليوتيد المرتبطة عملياً: يعتبر تتابع النيوكليوتيد الأول 'مرتبط عمليا” مع أو بتتابع نيوكليوتيد ثانى عندما يكون تتابع النيوكليوتيد الأول فى علاقة وظيفية مع تتابع النيوكليوتيد الثانى. وعلى سبيل المثال, يتم ارتباط المنشط عملياً بتتابع مرمز لو أن المنشط يؤثر على ‎١‏ استنساخ أو تعبير التتابع المرمز. وعن الإنتاج بشكل حامل للشفرة الوراثية, تكون تتابعات النيوكليوتيد المرتبطة عملي مماسه بوجه عام و, عند الضرورة تربط منطقتين مرمزتين للبروتين ‎protein—coding regions‏ فى نفس إطار القراءة وعلى أية حال, لن تحتاج تتابعات النيوكليوتيد لأن تكون مماسه حتى ترتبط عملياً. ويقصد من المصطلح, 'مرتبط ‎lee‏ عند الاستخدام بالرجوع إلى تتابع منظم للجين ‎gene regulatory sequence | ٠‏ وتتابع مرمز, أن التتبع المنظم يؤثر على تعبير تتابع الترميز المرتبط. وتشير "التتابعات المنظمة ‎Regulatory sequences‏ ", أو 'عناصر التحكم ‎control‏ ‎LY)" elements‏ تتابعات النيوكليوتيد ‎Al‏ تؤثر على توقيت ومستوى/مقدار الاستتساخ؛ معالجة وثبات ‎RNA‏ أو ترجمة التتابع المرمز المصاحب. وقد تتضمن التتابعات المنظمة التقليدية مناطق غير مترجمة *#'؛ منشطات؛ تتابعات أمامية للترجمة ‎translation leader sequences‏ ؛ © إنترونات ‎introns‏ ؛ محسنات ‎enhancers‏ ؛ تركيبات الساق - الحلقة ‎stem-loop‏ ‎£Y14‏
ديه ‎structures‏ ¢ تتابعات الارتباط الكاظم ‎repressor binding sequences‏ ؛ تتابعات الانتهاء؛ تتابعات إدراك إضافة البولى أدينيل ‎polyadenylation recognition sequences‏ ؛ الخ. ويمكن وضع التتابعات المنظمة الخاصة ضد تيار و/أو فى نفس تيار تتابع الترميز المرتبط عملياً بها. أيضاً, قد توضع تتابعات منظمة خاصة مرتبطة عملياً بتتابع الترميز على الشريط المكمل ‎complementary 50800 ©‏ المصاحب لجزئ الحمض النووى مزدوج الشريط ‎double—‏
‎.stranded nucleic acid molecule‏ ولم تكن العناصر التى قد تكون "مرتبطة ‎Lee‏ بتتابع الترميز محددة للمنشطات أو التتابعات المنظمة الأخرى التقليدية. وعلى سبيل المثال, فى بعض التجسيمات, قد يرتبط النطاق المرتبط ب ‎DNA‏ لبروتين المنشط العرضى ‎transactivator‏ ‏00 بتتابع نيوكليوتيد قريب من المنشط أو المنطقة المنظمة الأخرى, بحيث أن بروتين
‎٠‏ المنشط العرضى قد يتفاعل مع المنشط أو المنطقة المنظمة الأخرى, أو جزئ مرتبط به (على سبيل المثال, عامل استتنساخ ‎(transcription factor‏ إتمام الاستتنساخ. وفى تلك الأمثلة, يكون تتابع النيوكليوتيد الذى يرتبط به بروتين المنشط العرضى من خلال نطاق ارتباطه ب ‎DNA‏ 'مرتبط عملياً” بتتابع الترميز تحت تحكم المنشط أو التتابع الأخرى المنظم.
‏عديدات الببتيد المرتبطة عملياً: كما هو مستخدم هما بالنسبة لعديد الببتيدات, يشير
‎Vo‏ المصطلح 'مرتبط عملياً” إلى اثنين على الأقل من عديدات الببتيد التى يتم توصيلها فى جزء واحد (على سبيل المثال, بروتين الدمج), وبالطريقة التى يمكن أن يؤدى كل بولى ببتيد وظيفته المطلوبة. وعادة, يتم ارتباط اثنين على الأقل من عديدات الببتيد تساهمياً من خلال روابط الببتيد. وقد ينتج بروتين الدمج المتضمن بولى ببتيدات مرتبطة عملياً بواسطة تقنيات ‎DNA‏ حامل الشفرة الوراثية القياسية. وعلى سبيل المثال, قد يتم ارتباط جزئ ‎DNA‏ الذى يشفر عديد الببتيد الأول
‎٠‏ بجزئ ‎DNA‏ أخر الذى يشفر بولى ببتيد ثانى, وقد يعبر عن جزئ ‎DNA‏ الهاجين الناتج فى خلية مضيفة لإنتاج بروتين الدمج المشتمل على عديدات الببتيد الأولى والثانية. وفى أمثلة خاصة, قد يرتبط اثنين من جزيئات ‎DNA‏ ببعضهما البعض فى الاتجاه 0 إلى ", بحيث أن, بعد الارتباط, إطار الترجمة لعديد الببتيدات المرمزة لم يتبدل (أى أن, جزيئات ‎DNA‏ ترتبط ببعضها البعض فى إطار).
—yvo- ‏التى قد تكون‎ DNA ‏المصطلح "المحفز" يشير إلى منطقة‎ ls ‏المحفز: كما هو مستخدم‎ ‏بوليميراز‎ RNA ‏ضد التيار من بداية الاستنساخ, والتى قد تكون ضمن إدراك وارتباط‎ ‏والبروتينات الأخرى لإتمام الاستتساخ. وقد يتم ارتباط المحفز عملياً بتتابع مرمز‎ polymerase ‏للتعبير الجينى فى خلية, أو قد يتم ارتباط المحفز عملياً بتتابع نيوكليوتيد مرمز لتتابع الإشارة الذى‎ "plant promoter ‏قد يرتبط عملياً بتتابع الترميز للتعبير فى خلية. وقد يكون"المحفز النباتى‎ © ‏عبارة عن محفز قادر على بدء الاستنساخ فى خلية نباتية.‎ ‏تفاضلياً‎ fag ‏وتشتمل أمثلة المحفزات تحت السيطرة المتطورة على المحفزات التى‎ ‏الاستنساخ فى أنسجة معينة, على سبيل المثال وبدون تحديد, الأوراق, الجذور, البذور, الألياف‎ .sclerenchyma ‏أو اللحاء‎ tracheids ‏التراكيد‎ xylem vessels ‏أوعية الزايليم‎ fibers ‏الاستنساخ فقط فى‎ fag ‏ويشار لتلك المنشطات بأنها 'مفضلة للنسيج”". ويشار للمنشطات التى‎ ٠ ‏أنسجة معينة بأنها " محددة للنسيج". ويؤثر المنشط "المحدد لنوع الخلية” مبدئياً على الاستنساخ فى‎ ‏أنواع خلية معينة فى واحدة أو أكثر من الأعضاء, على سبيل المثال وبدون تحديد, فى الخلايا‎ ‏فى الجذور أو الأوراق. وتتضمن المنشطات المحددة للنسيج المثالية‎ vascular cells ‏الحويصلية‎ ‎phaseolin ‏أو المفضلة للنسيج, لكن دون تحديد: منشط مفضل للجذر, مثلاً من جين فازيولين‎ ‏أو روبيسكو 001500 ؛ منشط‎ CAD ‏؛ منشط محدد للورقة ومحفز بالضوء مثلاً من كاب‎ gene Vo ‏من 152ه/ا؛ منشط محدد بحبوب اللقاح‎ Sic anther-specific promoter ‏محدد بالأنثر‎ microspore— ‏ومنشط مفضل للبوغ الدقيق‎ ¢ZM13 ‏مثلاً من‎ pollen ‏6م5-‎ 0116 promoter .apg ‏من‎ Si preferred promoter ‏وقد يكون المحفز "القابل للتحريض” عبارة عن المنشط الذى قد يكون تحت تحكم بيئى.‎ ‏أمثلة الظروف‎ yeni; Ward et al. (1993) Plant Mol.
Biol. 22:361-366 ‏أنظر‎ ٠ ‏على‎ ,inducible promoters ‏الاستنساخ بواسطة المحفزات القابلة للتحريض‎ fag ‏البيئية التى قد‎ inducible ‏سبيل المثال وبدون تحديد, ظروف هوائية ووجود الضوء. ومع المحفز القابل للتحريض‎ ‏وتشتمل‎ .170116109 agent ‏معدل الاستنساخ استجابة لعامل التحريض‎ Jay, promoter ‏الذى‎ ACEI ‏المحفزات القابلة للتحريض التمثيلية, لكن دون تحديد على: محفزات من نظام‎ ‏الذى يستجيب لمؤمنات مبيد‎ maize ‏من نشا الذرة‎ IN2 ‏جين‎ copper ‏يستجيب للنحاس‎ YO £Y14
1+ الأعشاب بنزين سلفوناميد ‎benzenesulfonamide herbicide safeners‏ ؛ كاظم ‎Tet‏ من 0 ؛والمحفز القابل للتحريض من جين هرمون إيسترويد ‎steroid hormone gene‏ النشاط النسخى ‎transcriptional activity‏ لها قد تحفز بواسطة هرمون الجلوكوكورتيكوستيرويد ‎612٠. (1991) Proc.
Natl.
Acad.
Sci. glucocorticosteroid hormone‏ 50808) ‎USA 88:0421) o‏ ونجد أن المحفزات محددة النسيج, مفضلة النسيج, المحددة بنوع الخلية, والقابلة للتحريض تكون فئة من المحفزات "غير التأسيسية”. ويكون المحفز "التأسيسى ‎'constitutive’ promoter‏ عبارة عن المحفز الذى قد يكون نشطاً فى معظم الظروف البيئية. وتتضمن المحفزات التأسيسية التمثيلية, لكن دون تحديد: محفزات من فيروسات نباتية ‎viruses‏ 01801, مثل محفز 355 من ‎CaMV | ٠‏ محفزات من جينات أكتين الأرز ‎rice actin genes‏ ؛ محفزات يوبيكويتين ‎ubiquitin‏ ‎promoters‏ ؛ ‎¢MAS ¢pEMU‏ محفز هيستون ‎H3 histone promoter‏ من نشا )33 ومحفز ‎ALS‏ شريط ‎١ Xbal /Ncol‏ ' إلى الجين التركيبى ‎Brassica napus structural gene‏ ‎ALS3‏ (أو تتابع نيوكليوتيد مشابه ‎day pall‏ المذكور ‎(Xbal/Neol‏ (نشرة ‎PCT‏ الدولية رقم 11/8 ‎Yo‏ وقد يتم استخدام أى من المحفزات التأسيسية وغير التأسيسية فى بعض تجسيمات الاختراع. وعلى سبيل المثال, قد يتم إعداد جين يراد تنظيمه بواسطة فاعلية بروتين دمج منشط الاستنساخ ‎Gla‏ (على سبيل المثال, فى خلية عائل), وفيها يتم ارتباط الجين عملياً بالمنشط. تطابق التتابع: المصطلح "تطابق التتابع” أو "التطابق", كما هو مستخدم هنا فى سياق اثنين من تتابعات الحمض النووى أو عديد الببتيد, قد يشير إلى الرواسب فى التتابعين المتشابهين ‎٠٠‏ عند التحاذى لأقصى مناظرة على نافذة مقارنة محددة. ‎LS‏ هو مستخدم هنا, المصطلح "النسبة المثوية لتطابق التتابع” قد تشير إلى القيمة المحددة بمقارنة تتابعين محاذيين بصورة مثالية (على سبيل المثال, تتابعات الحمض النووى, وتتابعات الحمض الأمينى) خلال إطار مقارنة, وفيها قد يتضمن جزء من التتابع فى إطار المقارنة إضافات أو محذوفات (أى, فجوات ‎(gaps‏ بالمقارنة بالتتابع المرجعى (والذى لا يشتمل على ‎£Y14‏
الا إضافات أو حذوفات) للمحاذاة المثالية للتابعين. وتحسب النسبة المئوية بتحديد عدد المواضع والتى عندها يوجد النيوكليوتيد المطابق أو راسب الحمض الأمينى ‎acid residue‏ 80100 فى كل التتابعات لإنتاج عدد من المواضع المتوافقة, قسمة عدد المواضع المتوافقة على العدد الكلى للمواضع فى إطار المقارنة, وضرب الناتج فى ‎٠٠١‏ لإنتاج النسبة ‎Ay idl)‏ لتطابق التتابع. ° وتعرف طرق محاذاة التتابعات للمقارنة فى المجال. ويتم وصف برامج متنوعة وحسابات التحاذى فى, على سبيل المثال: ‎Smith and Waterman (1981) Adv.
Appl.
Math.‏ ‎Needleman and Wunsch (1970) J.
Mol.
Biol. 48:443; Pearson and‏ ;2:482 ‎Lipman (1988) Proc.
Natl.
Acad.
Sci.
U.S.A. 85:2444; Higgins and Sharp‏ ‎Gene 73:237-44; Higgins and Sharp (1989) CABIOS 5:151-3;‏ )1988( ‎Corpet et al. (1988) Nucleic Acids Res. 16:10881-90; Huang et al. 1.‏ ‎Comp.
Appl.
Biosci. 8:155-65; Pearson et al. (1994) Methods‏ )1992( ‎Mol.
Biol. 24:307-31; Tatiana et al. (1999) FEMS Microbiol.
Lett.‏ 174:247-0. ويمكن أن يوجد الاعتبار التفصيلى لطرق محاذاة التتابع وحسابات التماثل فى, على سبيل المثال, .215:403-10 ‎Altschul et al. (1990) J.
Mol.
Biol.‏ ‎The National Center for Biotechnology Information (NCBI) Basic yo‏ ‎Local Alignment Search Tool (BLAST™; Altschul etal. (1990))‏ متاحاً من عدة مصادر, تتضمن ‎the National Center for Biotechnology Information (Bethesda,‏ ‎MD)‏ , وعلى الإنترنت, للاستخدام بالاتصال مع برامج تحليل التتابع المتعددة. ويعتبر وصف كيفية تحديد تطابق التتابع باستخدام هذا البرنامج متاحاً على الإنترنت تحت قسم "المساعدة" ل ‎BLAST™ ٠‏ ولمقارنات تتابعات الحمض النووى, قد تستخدم وظيفة 'تتابعات2 ‎Blast‏ "من برنامج ‎BLAST™ (Blastn)‏ باستخدام المعايير الافتراضية. وستوضح تتابعات الحمض النووى مع التشابه الكبير للتتابعات المرجعية كيفية زيادة تعريف النسبة المثوية عند الاختبار بواسطة هذه الطريقة. ‎LS,‏ هو مستخدم هنا بالنسبة لتتابعات النيوكليوتيد قد يشير المصطلح 'مطابق ‎olds‏ ‎Yo‏ لللتتابعات ‎Al‏ تزيد عن 9085 تطابق. وعلى سبيل المثال, قد يكون تتابع النيوكليوتيد المطابق
م ‎%A0,0 Lil‏ على الأقل؛ 9687 على الأقل؛ ‎%AY‏ على الأقل؛ 96/808 على الأقل؛ 9689 على الأقل؛ 9690 على الأقل؛ 9691 على الأقل؛ 9697 على الأقل؛ 9697 على الأقل؛ 9694 على الأقل؛ 9695 على الأقل؛ 9697 على الأقل؛ 96997 على الأقل؛ 9698 على الأقل؛ 9699 على الأقل؛ 969,5 على الأقل مطابق للتتابع المرجعى.
2 الاستبدال التحفظى ‎:Conservative substitution‏ كما هو مستخدم هنا, يشير المصطلح "الاستبدال التحفظى” إلى استبدال يتم فيه استبدال راسب حمض أمينى ‎amino acid‏ ‎residue‏ بحمض أمينى ‎AT‏ فى نفس الفئة. ويكون استبدال الحمض الأمينى الغير محفوظ عبارة عن ذلك الاستبدال الذى فيه لا تقع الرواسب فى نفس الفئة, على سبيل المثال استبدال حمض أمينى قاعدى ‎basic amino acid‏ بحمض أمينى ‎amino acid‏ متعادل ‎neutral‏ أو غير
‎٠‏ قطبى +8ا0م-000. وتعرف فئات الأحماض الأمينية التى قد تعرف لغرض إجراء الاستبدال التحفظى فى المجال. وفى بعض التجسيمات, يتضمن الاستبدال التحفظى استبدال حمض أمينى اليفاتى ‎aliphatic‏ ‎amino acid‏ أول بحمض أمينى اليفاتى ثانى, مختلف. وعلى سبيل المثال, إذا كان الحمض الأمينى عبارة عن واحداً من ‎Met «Val ¢Leu cle «Pro Ala «Gly‏ , قد يستبدل الحمض ‎١‏ الأمينى الأول بالحمض الأمينى الثانى, المختلف المختار من ‎«Val sLeu ¢lle «Pro ¢Ala «Gly‏ ‎Met‏ . وفى أمثلة خاصة, إذا كان الحمض الأمينى الأول عبارة عن واحدة من ‎(Ala (Gly‏ ‎Leu ¢lle «Pro‏ 81/, فإن الحمض الأمينى الأول قد يستبدل بحمض أمينى ثانى مختلف مختار من ‎.Val sLeu ¢lle «Pro ¢Ala «Gly‏ وفى الأمثلة الخاصة المشتملة على استبدال الأحماض الأمينية الاليفاتية الكارهة للماء ‎hydrophobic aliphatic amino acids‏ إذا كان الحمض ‎٠‏ الأمينى الأول عبارة عن واحداً من 8ل/؛ ‎seu dle (Pro‏ وا8/ا, قد يستبدل الحمض الأمينى الأول بحمض أمينى ثانى, مختلف مختار من 8ل/؛ ‎dle Pro‏ © ا؛ وا8/ا. وفى بعض التجسيمات, يشتمل الاستبدال التحفظى على استبدال الحمض الآروماتى الأول بحمض أمينى آروماتى ‎aromatic amino acid‏ ثانى, مختلف. وعلى سبيل المثال, إذا كان الحمض الأمينى الأول ‎le‏ عن واحداً من ‎Tyr, «Trp Phe His‏ , فإن الحمض الأمينى الأول قد يستبدل ‎YO‏ بحمض أمينى ثانى, مختلف مختار من ‎Tyr, «Trp Phe ¢His‏ . وفى الأمثلة الخاصة المشتملة
+4
على استبدال الأحماض الأمينية الآروماتية الغير مشحونة ‎uncharged aromatic amino‏ 5, إذا كان الحمض الأمينى الأول عبارة عن واحدة من ‎Tyr «Trp Phe‏ , فإن الحمض
الأمينى الأول قد يستبدل بحمض أمينى ثانى, مختلف مختار من ‎«Trp Phe‏ والا1 . فى بعض التجسيمات»؛ يتضمن الاستبدال التحفظى استبدال حمض أمينى كاره للماء ‎hydrophobic amino acid ©‏ أول بحمض أمينى كاره للماء مختلف؛ ثانى. على سبيل ‎(JE‏ ‏إذا كان الحمض الأمينى الأول هو واحد من ‎Val; lle; Leu; Met; Phe; Tyr‏ بعالط؛ 5 ‎Trp‏ ‏قد يتم استبدال الحمض الأمينى الأول بحمض أمينى مختلف؛ ثانى مختار من ‎Ala; Val; lle;‏ ‎Met; Phe; Tyr‏ :(د©ا؛ ‎Trp,‏ . فى أمثلة خاصة تشمل استبدال الأحماض الأمينية الكارهة للماء ‎hydrophobic amino acids‏ « غير الأروماتية ‎non—aromatic‏ ؛ إذا كان الحمض ‎٠‏ الأمينى الأول هو واحد من ‎Val; lle; Leu‏ :18/؛ 5 ‎Met‏ قد يتم استبدال الحمض الأمينى الأول
بحمض أمينى مختلف»؛ ثانى مختار من ‎Met, «Ala; Val; lle; Leu‏ فى بعض التجسيمات؛ يتضمن الاستبدال التحفظى استبدال حمض أمينى قطبى ‎polar‏ ‎amino acid‏ أول بحمض أمينى قطبى مختلف؛ ثانى. على سبيل ‎JED‏ إذا كان الحمض الأمينى الأول هو واحد من ‎¢Ser; Thr; Asn; Gln; Cys; Gly; Pro; Arg; His; Lys; Asp‏ ‎Yo‏ ونا6؛ قد يتم استبدال الحمض الأمينى الأول بحمض أمينى مختلف؛ ‎SB‏ مختار من ‎Ser; Thr,‏ ‎¢Asn; 0: Cys; Gly; Pro; Arg; His; Lys; Asp‏ و نا©. فى أمثلة خاصة تشمل استبدال الأحماض الأمينية القطبية ‎polar amino acids‏ ؛ غير المشحونة ‎uncharged‏ ؛ إذا كان الحمض الأمينى الأول هو واحد من ‎Pro «Ser; Thr; Asn; Gin; Cys; Gly‏ قد يتم استبدال الحمض الأمينى الأول بحمض أمينى مختلف؛ ثانى مختار من ‎Ser; Thr; Asn; 60: Cys;‏ ‎.Pro «Gly ٠‏ فى أمثلة خاصة تشمل استبدال الأحماض الأمينية القطبية ‎polar amino acids‏ ‎٠‏ المشحونة ‎charged‏ ؛ إذا كان الحمض الأمينى الأول هو واحد من ‎¢His; Arg; Lys; Asp‏ ‎(Glu‏ قد يتم استبدال الحمض الأمينى الأول بحمض أمينى مختلف؛ ثانى مختار من ‎His; Arg;‏ ‎Asp‏ :8لاا؛ وا©. فى أمثلة أخرى تشمل استبدال الأحماض الأمينية القطبية؛ المشحونة؛ إذا كان الحمض الأمينى الأول هو واحد من ‎<Arg; Lys; Asp‏ و ‎(Glu‏ قد يتم استبدال الحمض ‎Yo‏ الأمينى الأول بحمض أمينى مختلف؛ ثانى مختار من ‎Arg; Lys; Asp‏ وناا6. فى ‎ibd‏ ‎£Y14‏
مو
خاصة ‎Jods‏ استبدال الأحماض الأمينية القطبية؛ موجبة الشحنة (قاعدية ‎(basic‏ إذا كان الحمض الأمينى الأول هو واحد من ‎Lys 5 His; Arg‏ قد يتم استبدال الحمض الأمينى الأول بحمض أمينى ‎cabling‏ ثانى مختار من ‎Lys, His; Arg‏ فى أمثلة أخرى تشمل استبدال الأحماض الأمينية القطبية؛ موجبة الشحنة؛ إذا كان الحمض الأمينى الأول هو ‎JArg‏ 5لا؛ قد © يتم استبدال الحمض الأمينى الأول بحمض أمينى آخر من ‎Arg‏ و5لاا. فى أمثلة خاصة تشمل استبدال الأحماض الأمينية القطبية ‎polar amino acids‏ ؛ سالبة الشحنة (حمضية ‎«(acidic‏ ‏إذا كان الحمض الأمينى الأول هو ‎Asp‏ أو ‎Glu‏ قد يتم استبدال الحمض الأمينى الأول بحمض أمينى ‎AT‏ من م88 ‎5.Glu‏ أمثلة خاصة تشمل استبدال أحماض أمينية قطبية غير الأحماض الأمينية القطبية موجبة الشحنة ‎positively charged polar amino acids‏ » إذا كان الحمض ‎٠١‏ الأمينى الأول هو واحد من ‎«Glu 5 «Ser; Thr; Asn; Gin; Cys; Gly; Pro; Asp‏ قد يتم استبدال الحمض الأمينى الأول بحمض أمينى مختلف؛ ثانى مختار من ‎Ser; Thr; Asn; GIn;‏ ‎Gly; Pro; Asp‏ :5لا©؛ وا6©. فى أمثلة خاصة تشمل استبدال أحماض أمينية قطبية أخرى غير الأحماض الأمينية القطبية سالبة الشحنة ‎negatively charged polaramino acids‏ « إذا كان الحمض الأمينى الأول هو واحد من ‎Ser; Thr; Asn; 60: Cys; Gly; Pro; Arg;‏ ‎Lys His ١‏ قد يتم استبدال الحمض الأمينى الأول بحمض أمينى مختلف؛ ثانى مختار من
.Lys 5 «Ser; Thr; Asn; GIn; Cys; Gly; Pro; Arg; His ‏فى بعض التجسيمات؛ يتضمن الاستبدال التحفظى استبدال حمض أمينى متعادل كهربائيا‎ ‏أول بحمض أمينى متعادل كهربائياً مختلف؛ ثانى. على‎ electrically neutral amino acid «Gly; Ser; Thr; Cys; Asn; GIn ‏إذا كان الحمض الأمينى الأول هو واحد من‎ (JE ‏سبيل‎ ‎Gly; Ser; ‏قد يتم استبدال الحمض الأمينى الأول بحمض أمينى مختلف؛ ثانى مختار من‎ Tyr, Yo
‎«Thr; Cys; Asn; GIn‏ والاا. فى بعض التجسيمات؛ يتضمن الاستبدال التحفظى استبدال حمض أمينى غير قطبى ‎amino acid‏ +8ا0م-000 أول ‎mess‏ أمينى غير قطبى مختلف؛ ثانى. على سبيل ‎Jal‏ إذا كان الحمض الأمينى الأول هو واحد من ‎Val; Leu; lle; Phe; Trp; Pro‏ بواط؛ ‎(Met;‏ قد ‎£Y14‏ gy يتم استبدال الحمض الأمينى الأول بحمض أمينى مختلف؛ ثانى مختار من ‎Ala; Val; Leu;‏ .Met , ‏بعاا؛‎ Phe; Trp; Pro ‏فى العديد من الأمثلة؛ قد يتم اختيار حمض أمينى ثانى خاص ليتم استخدامه فى‎ ‏الاستبدال التحفظى لاستبدال حمض أمينى أول من أجل زيادة عدد الفئات السابقة التى ينتمى إليها‎
Ser ‏كل من الأحماض الأمينية الأول والثانى. وبالتالى؛ إذا كان الحمض الأمينى الأول هو‎ ٠ ‏(حمض أمينى قطبى؛ غير آروماتى؛ ومتعادل كهربائياً)؛ فإن الحمض الأمينى الثانى قد يكون‎ ‏أو‎ «Thr; Asn; GIn; Cys; Gly; Pro; Arg; His; Lys; Asp ‏حمض أمينى قطبى آخر (أى؛‎
Thr; Asn; ‏آخر (أى‎ non-aromatic amino acid les) ‏حمض أمينى غير‎ «(Glu ‏أو‎ ¢(Met ‏؛ أو‎ 60: Cys; Gly; Pro; Arg; His; Lys; Asp; Glu; Ala; lle; Leu; Val ‏ومع ذلك؛ قد‎ (Tyr ‏أو‎ «Gly; Thr; Cys; Asn; GIn ‏(أى؛‎ AT ‏حمض أمينى متعادل كهربائياً‎ Vo
Thr; Asn; ‏يكون من المفضل أن يكون الحمض الأمينى الثانى فى هذه الحالة هو واحد من‎ ‏ولاا6؛ لأن هذه الأحماض الأمينية تشترك فى جميع التصنيفات وفقاً للقطبية؛» غير‎ «Gin; Cys ‏الآروماتية؛ والتعادلية الكهربائية. المعايير الإضافية التى قد يتم استخدامها اختيارياً لاختيار حمض‎ ‏أمينى ثانى خاص ليتم استخدامه فى الاستبدال التحفظى معروفة فى المجال. على سبيل المثال؛‎ ‏قد‎ (Ser ‏متاحة للاستخدام فى الاستبدال التحفظى ل‎ Gly 5 ¢Thr; Asn; 60: Cys ‏عندما تكون‎ Vo ‏من الاختيار من أجل تجنب تكوين الروابط المشتركة غير المرغوب فيها و/أو‎ Cys ‏يتم إزالة‎ ‏من الاختيار» لأنها تفتقر إلى‎ Gly ‏قد يتم إزالة‎ (Jilly disulfide 50005. ‏روابط ثانى سلفيد‎ ‏على سبيل‎ Thr ‏فى هذه الحالة؛ قد يتم اختيار‎ alkyl side chain ‏سلسلة جانبية للالكيل‎ side ‏المثال» من أجل الحفاظ على الأداء الوظيفى لمجموعة الهيدروكسيل للسلسلة الجانبية‎ ‏اختيار الحمض الأمينى الثانى الخاص المطلوب استخدامه فى‎ .chain hydroxyl group ٠ الاستبدال التحفظى يكون فى النهاية؛ مع ذلك ضمن صلاحيات الشخص الخبير. المصطلح "مشتق" كما هو مستخدم هنا ‎Lod‏ يتعلق بتتابع الحمض الأمينى يعنى التعديل الكيميائى لبروتين دمج للاختراع. بروتين تنشيط التعبير الجينى ‎protein‏ 118058017/81109: كما هو مستخدم ‎(la‏ يشير ‎Yo‏ المصطلح "بروتين تنشيط التعبير الجينى ‎Ladi 5) " transcriptional activator protein‏ £Y14
وه التعبير الجينى” أو "بروتين منشط نسخى" أو "بروتين دمج منشط نسخى") إلى عديد ببتيد الذى يرتبط بعنصر حمض نووى ‎lagsnucleic acid element‏ أو يعزز نسخ عديد النيوكليوتيد (على سبيل ‎J)‏ الجين موضوع الاهتمام) الذى يكون مرتبط على نحو قابل للتشغيل بعنصر الحمض النووى. تتضمن بروتينات تنشيط التعبير الجينى التى تكون أصلية لبعض الكائنات الحية؛ على © سبيل المثال وبدون حصر؛ البروتينات الرابطة ل ‎DNA‏ إصبع خارصين؛ النطاق الرابط ل ‎DNA‏ ‎¢GAL4 UPA‏ وا /آ. تتضمن التجسيمات الخاصة للاختراع منشطات التعبير الجينى لبروتين الدمج التركيبى ‎synthetic fusion protein transactivators‏ التى تشتمل على نطاق رابط ل ‎DNA‏ واحد على الأقل من بروتين رابط ل ‎DNA‏ وحافز تفاعل من نطاق تنشيط التعبير الجينى لنيات.
‎IK‏ ارتباط خاص: كما هو مستخدم هنا فيما يتعلق بعديدات الببتيد ونطاقات البروتين ‎protein domains‏ ؛ يشير المصطلح "ارتباط خاص” إلى تفاعل قوى بما فيه الكفاية بين عديد الببتيد أو نطاق البروتين ‎protein domain‏ وشريك (شركاء) ارتباطه ‎Jo)‏ سبيل المثال؛ عديد (عديدات) ببتيد يشتمل على تتابع حمض أمينى خاص؛ أو حمض نووى (أحماض نووية) يشتمل على تتابع نيوكليوتيد خاص) بحيث يحدث ارتباط ثابت وخاص مع شريك (شركاء) ‎(LUE‏ ولكن 0 ليس مع الجزيئات الأخرى التى تفتقر إلى تتابع حمض أمينى خاص أو تتابع نيوكليوتيد خاص التى يتم التعرف عليها بواسطة عديد ببتيد ارتباط محدد. قد يتم التحقق من الارتباط الثابت والخاص بواسطة التقنيات الروتينية لأولئك الخبراء فى المجال؛ مثل مقايسات “استخلاص البروتين البيوكيميائى” (على سبيل المثال؛ مقايسات استخلاص البروتين البيوكيميائى ‎«(GST pulldowns‏ مقايسات الخميرة-7- هجين ‎yeast-2-hybrid assays‏ مقايسات الخميرة-؟- ‎(oad‏ ‎«ELISA ٠‏ الخ. يمكن القول ‎ol‏ الجزيئات التى لديها سمة "الارتباط المحدد" ببعضها البعض 'ترتبط
‏على وجه التحديد" ببعضها البعض. التحول ‎Transformation‏ كما هو مستخدم ‎cls‏ يشير المصطلح "تحول" إلى تحول جزئ حمض نووى واحد أو أكثر فى خلية. يتم ‎Jad‏ خلية بواسطة جزئ حمض نووى محول فى الخلية عندما يصبح جزئ الحمض النووى منسوخ بثبات بواسطة الخلية؛ إما عن طريق إدراج جزئ ‎Yo‏ الحمض النووى فى الجينوم الخلوى ‎cellular genome‏ ؛ أو عن طريق النسخ المتماثل
‎£Y14
اسه
الإيبوسومى ‎.episomal replication‏ كما هو مستخدم ‎Jody cla‏ المصطلح "تحول" جميع التقنيات التى بواسطتها يمكن إدخال جزئ حمض نووى فى هذه الخلية. تتضمن الأمثلة؛ لكنها لا تقتصر على: العدوى بواسطة النواقل الفيروسية ‎viral vectors‏ ؛ التحول بواسطة نواقل البلازميد ‎plasmid vectors‏ ؛ الصعق الكهربائى ‎Fromm et al. (1986) ( electroporation‏ ‎¢(Nature 319:791-3 ©‏ عدوى الليبوسوم ‎Felgner et al. (1987) Proc. ) lipofection‏ ‎¢(Natl.
Acad.
Sci.
USA 84:7413-7‏ الحقن ‎Mueller etal. (1978) Cell ) 55 Sd)‏ 15:579-5)؛ التحول بوساطة الأجرعية ‎Fraley) Agrobacterium-mediated transfer‏ ‎¢(et al. (1983) Proc.
Natl.
Acad.
Sci.
USA 80:4803-7‏ امتصاص ‎DNA‏ ‏المباشر؛ وقصف 44,3 صغيرة ‎Klein et al. (1987) ) microprojectile bombardment‏
.(Nature 327:70 ٠ exogenous nucleic ‏تتابع حمض نووى خارجى المنشاً‎ :Transgene ‏الترانسجين‎ ‏فى بعض الأمثلة؛ قد يكون جين التحوير تتابع الذى يرمز عديد ببتيد يشتمل‎ .8010 sequence ‏على بروتين دمج منشط نسخى تركيبى واحد على الأقل. فى بعض الأمثلة؛ قد يرمز جين التحوير‎ ‏بروتين دمج منشط نسخى تركيبى يشتمل على نطاق تنشيط التعبير الجينى لنبات واحد على الأقل‎ ‏و/أو نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل واحد على الأقل. فى بعض الأمثلة؛ قد يرمز الترانسجين‎ ٠5 ‏الجين موضوع الاهتمام (على سبيل المثال» جين مراسل؛ جين يمتح مقاومة مبيدات الأعشاب‎ ‏يساهم فى سمة النباتات الهامة زراعياً). فى هذه الأمثلة‎ (pay ‏؛‎ herbicide resistance ‏محفز)‎ «Jd ‏قد يحتوى جين التحوير على تتابع تنظيمى واحد أو أكثر (على سبيل‎ clayey ‏مرتبط على نحو قابل للتشغيل بتتابع ترميز للترانسجين. لأغراض هذا الوصف؛ تم استخدام‎ ‏للإشارة إلى كائن حى (على سبيل المثال؛ نبات)؛ يشير‎ transgenic Wh, ‏المصطلح "معدل‎ ٠ ‏قد يكون‎ ABN ‏إلى كائن حى الذى يشتمل على تتابع حمض نووى خارجى المنشاً. فى بعض‎ ‏هو كائن حى الذى فيه تم‎ Lidl ‏الكائن الحى الذى يشتمل على تتابع الحمض النووى خارجى‎ molecular transformation ‏إدخال تتابع الحمض النووى بواسطة تقنيات التحول الجزيثى‎ ‏الذى يشتمل على تتابع الحمض النووى‎ ad) ‏قد يكون الكائن‎ gyal ‏فى أمثلة‎ techniques
وه خارجى ‎Laid)‏ هو كائن ‎a‏ الذى فيه يتم إدخال تتابع الحمض النووى بواسطة؛ على سبيل المثال؛ انجبال داخلى ‎introgression‏ أو تلقيخ خلطى ‎cross—pollination‏ فى نبات. الناقل: كما هو مستخدم هناء المصطلح 'ناقل" يشير إلى جزئ حمض نووى حيث قد يتم إدخاله فى خلية؛ على سبيل ‎(JB‏ لإنتاج خلية متحولة ‎(transformed cell‏ قد يتضمن ناقل © تتابعات حمض نووى التى تسمح بنسخه فى خلية مضيفة؛ ‎Jie‏ أصل النسخ المتماثتل. تتضمن الأمثلة على النواقل؛ لكنها لا تقتصر على: البلازميدات ‎plasmids‏ ؛ الكوزميدات ‎cosmids‏ ؛ العاقيات ‎bacteriophages‏ ؛ والفيروسات التى تحمل ‎DNA‏ خارجى المنشاً إلى خلية. قد يتضمن الناقل أيضاً جين واحد أو أكثر؛ جزيئات مضادة للانتساخ ‎antisense molecules‏ ؛ و/أو جينات واصمة قابلة للاختيار والعناصر الجينية الأخرى المعروفة فى المجال. قد يعمل الناقل ‎٠‏ على تنبيغ؛ تحويل؛ أو إصابة خلية؛ مما يتسبب فى تعبير الخلية جينياً لجزيئات الحمض النووى و/أو البروتينات المرمزة بواسطة الناقل. يتضمن الناقل اختيارياً مواد للمساعدة فى تحقيق دخول جزئ الحمض النووى فى الخلية (على سبيل المثال؛ ليبوسوم 100500718 ؛ غلاف بروتين ‎protein coating‏ « الخ). مالم يرد أو يفهم ضمنياً على وجه التحديد؛ تعنى مصطلحات "التنكير” و"التعريف” 'واحد ‎Vo‏ على الأقل." كما هو مستخدم هنا. مالم يوضح خلاف ذلك على وجه التحديد؛ يكون لجميع المصطلحات التقنية والعلمية المستخدمة هنا نفس المعنى حسب المفهوم الشائع من قبل أولئك أصحاب الخبرة العادية فى المجال الذى ينتمى له هذا الوصف. يمكن الاطلاع على تعريفات المصطلحات الشائعة فى مجال البيولوجيا الجزيئية ‎molecular biology‏ فى؛ على سبيل المثال ‎Lewin B., Genes V,‏ ‎Oxford University Press, 1994 (ISBN 0-19-854287-9); Kendrew et al.
Y.‏ ‎(eds.), The Encyclopedia of Molecular Biology, Blackwell Science Ltd.,‏ ‎(ISBN 0-632-02182-9); and Meyers R.A. (ed.), Molecular Biology‏ 1994 ‎and Biotechnology: A Comprehensive Desk Reference, VCH Publishers,‏ ‎Inc., 1995 (ISBN 1-56081-569-8).‏ ‎£Y14‏
هه حوافز التفاعل من نطاقات تنشيط التعبير الجينى للنبات يوفر هذا الوصف نطاقات تنشيط التعبير الجينى لنبات جديدة وحوافز تفاعل بروتين - بروتين منهاء بالإضافة إلى الأحماض النووية المرمزة لها. تم استخدام نطاقات تنشيط التعبير الجينى التى تم تحديدها وعزلها من بروتينات النبات ‎ERF2 (Arabidopsis « plant proteins‏ ‎thaliana); 114 (Solanum tuberosum); AtERF1 (A. thaliana); ORCA2 ٠‏ ‎(Catharanthus roseus); DREB1A (A. thaliana); CBF1 (A. thaliana);‏ ‎DOF] (Zea mays)‏ لتحديد حوافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات التى قد تكون فى بعض التجسميات 'متبادلة” فى نطاق تنشيط التعبير الجينى متغاير؛ أو تستخدم لإنتاج حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل. قد يتم استخدام نطاقات تنشيط التعبير الجينى للنبات ‎٠‏ المحددة حديثاً؛ حوافز التفاعل فيهاء و نطاقات تنشيط التعبير الجينالبديلة لها فى تجسيمات خاصة (على سبيل المثال؛ عن طريق تضمينها فى بروتين منشط نسخى تركيبى) لمنح تحكم تنظيمى فى التعبير الجينى جديد ومرغوب فيه للجين موضوع الاهتمام. تم توصيف نطاق تنشيط التعبير الجينى ل ‎TAD) VP16‏ 16/)؛ والمناطق التركيبية ل نطاقات تنشيط التعبير الجينى لنبات الجديدة السابقة ونطاقات التفاعل يشار إليها بالقياس ‎Yo‏ لللتركيبات المقابلة فى ‎TAD‏ 016/. يمكن تقسيم ‎VP16 TAD‏ إلى اثنين من النطاقات الفرعية؛ وكل نطاق فرعى يكون قادر على تنشيط النسخ على نحو مستقل وذاتياً عند ربطه بنطاق ارتباط هلا0. يشار إلى النطاقات الفرعية 1/016 فى بعض الأحيان بالنطاق الفرعى الأمينى ‎amino‏ ‎subdomain‏ (أو "النطاق الفرعى ‎١‏ لتنشيط التعبير الجينى ‎transactivation subdomain‏ ل 6 أو ‎L('VP16412-456"‏ يتفاعل ‎VPL6‏ من خلال نطاقات تفاعله مع العديد من ‎Yo‏ البروتينات المستهدفة المتضمنة فى النسخ؛ ‎Lay‏ فى ذلك الوحدة الفرحية 062/1101 لعامل النسخ ‎.(TF1IB) 8‏ لا يعتمد نشاط ‎VP16‏ فقط على الرواسب الحمضية؛ ولكن أيضاً على الأحماض الأمينية الكارهة للماء والآرماتية داخل نطاق تنشيط التعبير الجينى. انظرء على سبيل ‎Cress (Jul‏ ‎Triezenberg (1991) Science 251(4989):87-90‏ 800. ومع ذلك؛ قد يكون ‎٠/016‏ ‎Yo‏ 180 الحمضى أكثر تحملاً لتولد الطفرات من العديد من تتابعات عديد الببتيد الأخرى؛ بسبب
الافتقار إلى تركيب ثانوى منتظم فى نطاقات تنشيط التعبير الجينى الحمضية. (1988) ‎Sigler‏ ‎Nature 333:210-2‏ قد تساعد الطبيعة غير المنظمة للنطاقات ‎VP16 TAD ici‏ تفاعلات بروتين/بروتين المتعددة بوساطة نطاق تنشيط التعبير الجينى مع شركاء الارتباط المختلفة ‎(Dyson and Wright (2002) Curr.
Opin.
Struct.
Biol. 12(1):54-60)‏ وقد تتخذ النطاقات الفرعية نطاق تنشيط التعبير الجينى تركيب أكثر ترتيباً (على سبيل المثال» حلزون -
#قصير ‎(Langlois et al. (2008), supra)‏ عند ربطها بالبروتينات المستهدفة مما تكون عليه عندما تكون حرة فى محلول. انظرء على سبيل ‎Garza et al. (2009) Life Sci. «JB‏ ‎Jonker et al. (2005) Biochemistry 44(3):827-39;‏ ;84(7-8):189-93 ‎Langlois et al. (2008)‏ أعلاه.
‎١‏ تتضمن بعض التجسيمات بروتين منشط نسخى تركيبى يشتمل على حافز ‎Jeli‏ نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات؛ حيث يتم اختيار حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات من المجموعة التى تتكون من المتواليات أرقام: ‎T=)‏ تشتمل بعض البروتينات المنشطة النسخية التركيبية ‎synthetic transcriptional activator proteins‏ التمثيلية على نطاق تنشيط التعبير الجينى الذى يشتمل على حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات؛ وهذه البروتينات قد
‎Vo‏ يكون لها تتابع يتضمن؛ على سبيل المثال وبدون حصر؛ المتواليات أرقام: ‎AY‏ والمتواليات أرقام:١ ‎.٠١ 6-٠٠‏ تتضمن نطاقات تنشيط التعبير الجينى التمثيلية الإضافية التى تشتمل على حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات تلك المصممة من خلال استبدال تتابع حافز تفاعل ‎interaction motif sequence‏ نطاق تنشيط التعبير الجينى أصلى موجود فى نطاق تنشيط التعبير الجينى المنشط للتعبير الجينى الأصلى بواحد من المتواليات ‎NT) al‏
‎Ye‏ تستفيد بعض تجسيمات الاختراع من الاكتشاف المدهش بأن حوافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى البديلة؛ التى تشتمل على استبدالات حمض أمينى تحفظية و/أو استبدالات بالأحماض الأمينية الموجودة فى الموضع المماثل فى حافز التفاعل المتجانس ‎homologous‏ ‎le) interaction motif‏ سبيل المثال؛ من مماثل للبروتين الأصلى ‎native protein‏ الذى يشتمل على حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى المرجعى)؛ قد تحقق خواص تنظيمية جينية
‎YO‏ جديدة وخاصة. هذه الخواص الخاصة قد تكون مطلوبة للتعبير الجينى لعديد نيوكليوتيد؛ حيث
‎£Y14
يكون مستوى معين من التعبير الجينى مطلوب. على سبيل المثال؛ قد يوفر حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل تعبير جينى معزز على حافز نطاق تنشيط التعبير الجينى مرجعى أصلى الذى يعزز التعبير الجينى فى حد ذاته؛ وبالتالى قد يكون مطلوب فى تركيب البروتين وتفاعلات ‎dant‏ حيث يكون الهدف غالباً هو التعبير الجينى الأقصى. فى أمثلة أخرى؛ قد يوفر © حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل تعبير جينى أقل من حافز نطاق تنشيط التعبير
الجينى المرجعى الأصلى حيث يكون المطلوب أقل من التعبير الجينى الأقصى. وبالتالى؛ تتضمن بعض التجسيمات بروتين منشط نسخى تركيبى ‎synthetic‏ ‎transcriptional activator protein‏ يشتمل على حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل. فى بعض الأمثلة؛ قد يكون حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى البديل هو بديل لواحد ‎oe‏ المتواليات أرقام: ‎VT)‏ تتضمن حوافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى البديلة عديدات ببتيد لها تتابع الحمض الأمينى لتتابع تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى الأصلى؛ ولكن فيها يتم تغيير حمض أمينى واحد أو أكثر فى التتابع إلى الحمض الأمينى الموجود فى الموضع المقابل فى نطاق تنشيط التعبير الجينى مختلف؛ متماثتل. تتضمن حوافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى البديلة أيضاً عديدات ببتيد لها تتابع الحمض الأمينى لتتابع تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى ‎٠‏ أصلىء ولكن فيها يتم إجراء استبدال تحفظى لحمض أمينى واحد أو أكثر فى التتابع. قد يكون حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل؛ على سبيل المثال وبدون حصر؛ مطابق بنسبة على الأقل لتتابع حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى مرجعى (على سبيل المثال؛ تتابع مختار من المتواليات أرقام: ١٠-76١)؛‏ مطابق بنسبة 9646 على الأقل للتتابع المرجعى؛ مطابق بنسبة 9685 على الأقل للتتابع المرجعى؛ مطابق بنسبة ‎%A‏ على الأقل للتتابع ‎٠‏ المرجعى؛ مطابق بنسبة 9675 على الأقل للتتابع المرجعى؛ ‎Gildas‏ بنسبة 9670 على الأقل للتتابع المرجعى؛ مطابق بنسبة 9665 على الأقل للتتابع المرجعى؛ مطابق بنسبة 967680 على الأقل للتتابع المرجعى؛ مطابق بنسبة 9655 على الأقل للتتابع المرجعى؛ مطابق بنسبة + 965
على الأقل للتتابع المرجعى؛ أو مطابق بنسبة أقل من ‎٠‏ 969 للتتابع المرجعى. تتضمن حوافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى البديلة؛ على سبيل المثال وبدون ‎Yo‏ حصرء المتواليات أرقام: ‎77-١١7‏ (حوافز تفاعل ‏ 472 انطاق تنشيط التعبير الجينى بديلة
A
‏تمثيلية)؛ المتواليات أرقام: 78-77 (حوافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى 0114 بديلة‎ ‏تمثيلية)؛ المتواليات أرقام:74-؛؟ (حوافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى 888811 بديلة‎ ‏بديلة‎ 0860/82 all ‏(حوافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير‎ £0-V0 ‏تمثيلية)؛ المتواليات أرقام:‎ ‏بديلة‎ DREBIA ‏-7؛ (حوافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى‎ 4١ ‏تمثيلية)؛ المتواليات أرقام:‎
Ay 6871 ‏تمثيلية)؛ المتواليات أرقام: 7؛ -7© (حوافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى‎ © ‏تمثيلية)؛ و المتواليات أرقام: 0-57 (حوافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى 0051 بديلة‎ ‏تمثيلية). تتضمن نطاقات تنشيط التعبير الجينى التمثيلية التى تشتمل على حافز تفاعل نطاق‎ ‏تنشيط التعبير الجينى بديل تلك المصممة من خلال استبدال تتابع حافز تفاعل نطاق تنشيط‎ ‏التعبير الجينى الموجود فى نطاق تنشيط التعبير الجينى منشط تعبير جينى أصلى بنطاق تنشيط‎ ‏على سبيل‎ .58-١١7 ‏التعبير الجينى بديل مختار من المجموعة التى تتكون من المتواليات أرقام:‎ ٠ ‏تتضمن نطاقات تنشيط التعبير الجينى التمثيلية التى تشتمل على حافز تفاعل نطاق تنشيط‎ «JE
AY mV oY ‏التعبير الجينى بديل المتواليات أرقام:‎ يمكن التعرف على الأحماض النووية التى ترمز أى من وكل عديدات الببتيد السابقة ‎od‏ ‏من تتابع الحمض الأمينى لعديد الببتيد. على سبيل المثال؛ قد يتم ترميز نطاق تنشيط التعبير ‎١‏ الجينى أو حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بواسطة عديد الببتيد الأصلى الذى يتم نسخه لتوليد ‎MRNA‏ الذى يتم نقله بعد ذلك إلى الأحماض الأمينية لنطاق تنشيط التعبير الجينى أو حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى. ومع ذلك سوف يدرك أحد الخبراء فى المجال أنه؛ بسبب انحلال الرمز الجينى ‎genetic code‏ توجد العديد من عديدات الببتيد المكافئة الأخرى التى سوف ترمز عديد ببتيد مطابق. قد يتم ترميز حوافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى البديلة ‎٠‏ (على سبيل ‎(Ji)‏ المتواليات أرقام: ‎(OAV‏ بواسطة عديدات النيوكليوتيد التى تكون ‎ALE‏ ‏للتحديد بسهولة بالرجوع إلى جدول كودون ‎RNA‏ من تتابع الحمض الأمينى للبديل الخاص المطلوب. فى تجسيمات خاصة؛ قد يكون من المطلوب لتتابع النيوكليوتيد لعديد النيوكليوتيد الذى يرمز حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى (أو بديل له) أن يتم تجميعه وفقاً لاستخدام الكودون للخلية المضيفة؛ على سبيل المثال؛ وذلك لتحقيق أقصى قدر أو تحسين التعبير الجينى لبروتين ‎YO‏ (على سبيل المثال؛ بروتين ‎(med‏ يشتمل على حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى.
المنتشطات النسخية ‎transcriptional activators‏ لبروتين الدمج يوفر هذا الوصف أيضاً بروتينات دمج منشطة نسخية تركيبية تشتمل على حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات و/أو حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل. فى بعض التجسيمات؛ يشتمل بروتين دمج منشط نسخى تركيبى أيضاً على نطاق رابط ل ‎DNA‏ واحد على الأقل. يتم أيضاً توفير الأحماض النووية (على سبيل ‎(DNA (JE‏ التى ترمز بروتينات الدمج المنشطة النسخية التركيبية هذه. فى بعض التجسيمات؛ يشتمل بروتين دمج منشط نسخى تركيبى على عديد ببتيد أول على الأقل الذى يرتبط ب ‎DNA‏ بطريقة محددة التتابع (أى؛ ‎Slay‏ رابط ل ‎("DNA‏ قد يرتبط عديد الببتيد للنطاق الرابط ل 01/8 الأول لبروتين دمج المنشط النسخى التركيبى بشكل فعال بعديد ببتيد ‎٠‏ ثانى على الأقل يشتمل على حافز تفاعل ‎Glas‏ تنشيط التعبير الجينى للنبات أو حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل. فى بعض الأمثلة؛ قد يشتمل بروتين دمج منشط نسخى تركيبى على عديدات ببتيد إضافية؛ مثل تتابع مفساح موضوع بين عديدات الببتيد الأول والثانى فى بروتين الدمج؛ ببتيد رئيسى ‎leader peptide‏ ؛ ببتيد الذى يستهدف بروتين الدمج لعضية ‎organelle‏ ‎Je)‏ سبيل ‎(JE‏ النواة ‎¢(nucleus‏ عديدات الببتيد التى يتم شقها بواسطة إنزيم خلوى ‎cellular‏ ‎enzyme Vo‏ علامات ببتيد؛ وتتابعات الحمض الأمينى الأخرى التى لا تتعارض مع وظيفة عديدات ‎asin‏ الأول والثانى المرتبطة بشكل فعال. فى بعض التجسيمات؛ قد يتم ارتباط عديدات الببتيد الأول والثانى لبروتين دمج منشط نسخى تركيبى بشكل فعال من خلال التعبير الجينى لها من عديد نيوكليوتيد واحد مرمز لعديدات الببتيد الأول والثانى المربوطة ببعضها البعض فى الإطارء وذلك لخلق جين وهمى ‎chimeric‏ ‎Yo‏ 9606 لترميز بروتين دمج. تتضمن الأمثلة على عديدات النيوكليوتيد المرمزة لبروتين دمج منشط نسخى الذى يشتمل على نطاق رابط ل ‎DNA‏ وحافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى؛ بدون حصرء المتواليات أرقام: 97-179. فى تجسيمات بديلة؛ قد يتم ارتباط عديدات الببتيد الأول والثانى لبروتين دمج منشط نسخى تركيبى بشكل فعال بواسطة وسائل ‎cg al‏ مثل بواسطة الربط المتبادل لعديدات الببتيد الأول والثانى المعبر لها جينياً على نحو مستقل.
مه تتضمن حوافز تفاعل ‎GUS‏ تنشيط التعبير الجينى للنبات وحوافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى البديلة الذى قد تكون موجودة داخل بروتين دمج منشط نسخى تركيبى حوافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى وبدائلها الموصوفة فى قسم ‎(IV‏ أعلاه. على سبيل المثال؛ قد يشتمل بروتين دمج منشط نسخى تركيبى على عديد ببتيد ‎polypeptide‏ مختار من المجموعة التى 0 تتكون من المتواليات ‎OA val)‏
تتضمن النطاقات الرابطة ل ‎DNA‏ الذى قد تكون موجودة فى بروتين دمج منشط نسخى تركيبى النطاقات الرابطة ل ‎DNA‏ إصبع الخارصين من بروتينات إصبع الخارصين ‎zinc finger‏ (على سبيل المثال؛ نطاق رابط ل ‎DNA‏ 26). قد يتم تصميم النطاقات الرابطة ل ‎DNA‏ إصبع الخارصين الفردية لاستهداف وربط مجموعة كبيرة من مواقع ‎DNA‏ انظرء؛ على سبيل ‎(JE‏ ‎Wu et al. (2007) Cell.
Mol.
Life Sci. 64:2933-44 ٠‏ بروتينات إصبع الخارصين 2 المقبولة؛ بالإضافة إلى ‎Cys3His‏ غير المقبولة؛ تربط ‎DNA‏ من خلال إدخال حلزون- »0 فى الأخدود الرئيسى للحلزون المزدوج ‎helix‏ 16ا00005. إدراك ‎DNA‏ بواسطة نطاقات إصبع الخارصين يكون معيارى؛ يتصل كل إصبع فى المقام الأول بثلاثة أزواج قاعدة متتالية فى الهدف؛ ورواسب رئيسية ‎ALE‏ فى الإدراك بوساطة البروتين. من خلال تضمين النطاقات الرابطة ل ‎DNA ١‏ إصبع الخارصين المتعددة فى بروتين دمج منشط نسخى تركيبى؛ قد يتم أيضاً زيادة خصوصية ارتباط ‎DNA‏ لبروتين ‎ad)‏ (وبالتالى قد يتم أيضاً زيادة خصوصية أى آثار تنظيمية جينية ممنوحة بذلك). انظرء على سبيل ‎Urnov et al. (2005) Nature 435:646- «Jil‏ 1. وبالتالى؛ قد يتم تصميم نطاق رابط ل ‎DNA‏ إصبع الخارصين واحد أو أكثر واستخدامه بحيث يتفاعل بروتين دمج منشط نسخى تركيبى مدخل فى خلية مضيفة مع تتابع ‎DNA‏ الذى
‎Ye‏ يكون فريد من نوعه داخل جينوم الخلية المضيفة. فى بعض الأمثلة؛ يشتمل بروتين دمج منشط نسخى تركيبى على نطاق رابط ل ‎DNA‏ من ‎«GAL4‏ منشط تعبير جينى معيارى ‎modular transactivator‏ فى ‎Saccharomyces‏ ‎cerevisiae‏ ولكن الذى يعمل أيضاً كمنشط تعبير جينى فى العديد من الكائنات الحية الأخرى. انظرء على سبيل المثال» 335:563-4 ‎.Sadowski et al. (1988) Nature‏ فى هذا النظام التنظيمى؛ يتم تنظيم التعبير الجينى للجينات المرمزة لإنزيمات المسار الأيضى جالاكتوز
-ه- ‎galactose metabolic pathway‏ فى ‎cerevisiae‏ .5 بصرامة بواسطة مصدر الكربون ‎carbon source‏ المتاح. 51:458-76 ‎.Johnston (1987) Microbiol.
Rev.‏ التحكم النسخى فى هذه الإنزيمات الأيضية ‎metabolic enzymes‏ يكون بوساطة التفاعل بين البروتين التنظيمى الإيجابى ‎positive regulatory protein‏ ؛ 4ل/6؛ وتتابع ‎DNA‏ المتماثل في ‎١١‏ ‏© زوج قاعدة الذى يرتبط به ‎GALS‏ على وجه التحديد ‎(UAS)‏
يتكون ‎GALS‏ الأصلى من ‎AM‏ راسب حمض ‎amino acid residues id‏ » بوزن جزيثى ‎molecular weight‏ 44 كيلودالتون. يشتمل ‎GAL4‏ على نطاقات مستقلة وظيفياً الأنشطة المتحدة لها تشكل نشاط ‎GALS‏ فى جسم الكائن الحى. (1987) ‎Ma & Ptashne‏ ‎.Cell 48:847-53); Brent & Ptashne (1985) Cell 43(3 Pt 2(:729-6‏ يشتمل ‎٠‏ 15 حمض أمينى للطرف-لا من 6/14 على النطاق الرابط ل ‎Keegan et .GAL4 DNA‏ ‎.al. (1986) Science 231:699-704; Johnston (1987) Nature 328:353-5‏ يتطلب الارتباط محدد التتابع وجود كاتيون ثنائى التكافؤ ‎divalent cation‏ منسق بواسطة + رواسب ‎Cys‏ موجودة فى النطاق الرابط ل 01/8. يتفاعل النطاق الذى يحتوى على كاتيون 007 منسق مع ويدرك ثلاثى ‎CCG‏ محفوظ فى كل طرف ل ‎bp UAS‏ 17 عبر الاتصالات ‎Vo‏ المباشرة مع الأخدود الرئيسى ‎major groove‏ تحلزون ‎Marmorstein et al. (1992) .DNA‏ ‎Nature 356:408-14‏ وظيفة ارتباط ‎DNA‏ لنطاقات التنشيط النسخى ‎transcriptional‏ ‎activating domains‏ للطرف-9 لمواضع البروتين فى محيط المحفزء بحيث يمكن لنطاقات
التنشيط أن توجه النسخ. تتضمن النطاقات الرابطة ل ‎DNA‏ الإضافية ‎AN‏ قد تكون موجودة فى بروتين دمج منشط ‎Vo‏ نسخى تركيبى؛ على سبيل المثال وبدون حصرء تتابع ارتباط من جين قابل للتحريض ‎inducible‏ ‎gene‏ - 081/48853؛ تتابع ارتباط توافق من جين قابل للحث- ‎AVRBS3‏ أو تتابع ارتباط تركيبى مصمم منهم (على سبيل ‎(JE‏ نطاق رابط ل ‎¢UPA DNA‏ المتوالية رقم: 84)؛ ‎TAL‏ ‎LexA‏ (انظرء؛ على سبيل المثالء ‎LacR ¢(Brent & Ptashne (1985), supra‏ (انظرء على سبيل المثال» ‎Labow et al. (1990) Mol.
Cell.
Biol. 10:3343-56; Baim et‏ ‎Proc.
Natl.
Acad.
Sci.
USA 88(12):5072-6 Ye‏ )1991( .21)؛ مستقبل هرمون ستيرويد
ون ‎Elliston et al. (1990) J.
Biol.
Chem. ( steroid hormone receptor‏ 265:11517-121(¢ كاظم ‎(U.S.
Patent 6,271,341) Tet‏ وكاظم ‎Tet‏ طافر الذى يرتبط بتتابع مشغل ]16 فى وجود؛ ولكن ليس غياب؛ تتراسيكلين ‎¢(Tc) tetracycline‏ ومكونات النظام التنظيمى المرصوف فى ‎Wang et al. (1994) Proc.
Natl.
Acad.
Sci.
USA‏ © 91(17):8180-4 الذى يستخدم دمج ‎«GALS‏ مستقبل هرمون ‎hormone receptor‏ « و ‎VP16‏ ‏فى بعض الأمثلة؛ يشتمل بروتين دمج منشط نسخى تركيبى على أكثر من حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى ‎coals‏ على سبيل المثال وبدون حصرء قد يشتمل بروتين دمج منشط ‎A‏ تركيبى على ‎oF oY‏ ؛ أو أكثر نطاقات ‎Jeli‏ نطاق تنشيط التعبير الجينى. فى بعض ‎٠‏ الأمثلة؛ يشتمل بروتين دمج منشط نسخى تركيبى على أكثر من نطاق رابط ل ‎DNA‏ واحد. على سبيل المثال وبدون ‎pan‏ قد يشتمل بروتين دمج منشط نسخى تركيبى على 7 7 4 05 2 اء 9-8 ‎٠١‏ أو أكثر من النطاقات الرابطة ل ‎DNA‏ ‏جزيئات الحمض النووى التى تشتمل على عديد نيوكليوتيد مرمز لمنشط نسخى لبروتين دمج فى بعض التجسيمات؛ يوفر هذا الوصف جزئ حمض نووى يشتمل على تتابع عديد ‎Vo‏ نيوكليوتيد واحد على الأقل ‎Jape‏ لحافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات؛ حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل؛ نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات أو نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل. قد تشتمل جزيئات الحمض النووى هذه أيضاً على تتابع عديد نيوكليوتيد واحد على الأقل الذى يرمز نطاق رابط ل ‎DNA‏ على سبيل المثال؛ يشتمل حمض نووى فى بعض التجسيمات على تتابع عديد نيوكليوتيد أول مرمز لحافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات؛ ‎٠٠‏ حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل؛ نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات؛ أو نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل؛ مدمج فى الإطار بتتابع عديد نيوكليوتيد ثانى الذى يرمز نطاق رابط ل ‎«DNA‏ بحيث يتم نسخ الاثنين من تتابعات عديد النيوكليوتيد كجزء من بروتين دمج فردى. فى جزيئات الحمض النووى المقدمة فى بعض تجسيمات الاختراع؛ قد يتم فصل الكودون الأخير لتتابع عديد النيوكليوتيد الأول الذى يرمز حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات؛
سرع
حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل؛ نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات؛ أو نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل؛ والكودون الأول لتتابع عديد النيوكليوتيد الثانى الذى يرمز النطاق الرابط ل ‎DNA‏ بواسطة أى عدد من ثلاثيات النيوكليوتيد ‎nucleotide triplets‏ ؛ على سبيل ‎(JE‏ بدون الترميز لإنترون ‎intron‏ أو ‎STOP"‏ . وبالمثل؛ قد يتم فصل الكودون ‎codon‏ ‏5 الأخير لتتابع نيوكليوتيد الذى ‎Jap‏ تتابع عديد نيوكليوتيد أول الذى يرمز النطاق الرابط ل ‎DNA‏ ‏والكودون الأول لتتابع عديد النيوكليوتيد الثانى الذى يرمز حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات؛ حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل؛ نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات؛ أو نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل؛ بواسطة أى عدد من ثلاثيات النيوكليوتيد. فى هذه التجسيمات وغيرهاء قد يتم دمج الكودون الأخير من ‎ol) AT‏ أكثر ' فى تتابع الحمض النووى) تتابع عديد ‎٠‏ النيوكليوتيد الأول الذى يرمز حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات؛ حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل؛ نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات؛ أو نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل؛ وتتابع عديد النيوكليوتيد الثانى الذى يرمز نطاق رابط ل ‎(DNA‏ فى سجل المرحلة مع الكودون الأول لتتابع ترميز عديد نيوكليوتيد متصل مباشرةً به؛ أو فصله منه بما لا يزيد عن تتابع ببتيد قصيرء مثل ذلك المرمز بواسطة رابط نيوكليوتيد تركيبى (على سبيل المثال؛ رابط نيوكليوتيد ‎Vo‏ الذى قد يتم استخدامه لتحقيق الدمج). تتضمن الأمثلة على تتابعات عديد النيوكليوتيد الأخرى؛ على سبيل المثال وبدون حصر؛ العلامات؛ ببتيدات الاستهداف؛ ومواقع الانشقاق الإنزيمية ‎cleavage 5‏ 027/012106©. وبالمثل؛ قد يتم دمج الكودون الأول لأكثر ‎To‏ (فى تتابع الحمض النووى) من تتابعات عديد النيوكليوتيد الأول والثانى فى سجل المرحلة مع الكودون الأخير لتتابع ترميز عديد نيوكليوتيد ‎AT‏ متصل ‎Hale‏ به؛ أو يتم فصله ‎die‏ بما لا يزيد عن تتابع ببتيد
‎٠٠‏ قصير. قد يتكون تتابع فصل تتابع عديد النيوكليوتيد الذى يرمز حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات؛ حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل؛ نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات؛ أو نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل؛ وتتابع عديد النيوكليوتيد الذى يرمز نطاق رابط ل ‎(DNA‏ على سبيل المثال؛ من أى تتابع؛ بحيث لا يكون من المحتمل أن يغير تتابع الحمض ‎Yo‏ الأمينى المرمز بشكل كبير من نقل بروتين الدمج. نظراً للطبيعة المستقلة لنطاقات تفاعل نطاق
‎£Y14
يوه تنشيط التعبير الجينى (وبدائلها) المبينة هنا والنطاقات الرابطة ل ‎DNA‏ المعروفة؛ لن تتعارض التتابعات المتداخلة فى الأمثلة مع الوظائف الخاصة لهذه التركيبات. تتضمن بعض تجسيمات الاختراع أيضاً جزئ حمض نووى يشتمل على تتابع عديد نيوكليوتيد الذى يرمز حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات؛ حافز تفاعل نطاق تنشيط 0 التعبير الجينى بديل؛ ‎las‏ تنشيط التعبير الجينى للنبات؛ أو نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل؛ حيث لا يشتمل جزئ الحمض النووى على تتابع عديد نيوكليوتيد يرمز نطاق رابط ل ‎DNA‏ قد تكون جزيئات الحمض النووى هذه مفيدة؛ على سبيل المثال؛ فى تسهيل معالجة التتابع المرمز لحافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى فى التقنيات البيولوجية الجزيئية. على سبيل المثال؛ فى بعض التجسيمات؛ قد يتم إدخال التتابع المرمز ‎lal‏ تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى فى ناقل > مناسب للاستنساخ ‎ed‏ للتتابع فى ‎Jib‏ تعبير جينى؛ أو قد يتم إدخال تتابع مرمز لحافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى فى جزئ حمض نووى الذى يسهل إنتاج جزئ حمض نووى ‎DAT‏ ‏يشتمل على تتابع مرمز لحافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى المرتبط عملياً بتتابع النيوكليوتيد موضوع الاهتمام. جميع تتابعات النيوكليوتيد التى ترمزء على سبيل المثال؛ بروتين دمج الذى يشتمل على ‎Vo‏ حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات خاص واحد على الأقل؛ حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى ‎cay‏ نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات؛ أو نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل؛ ويشتمل أيضاً على نطاق رابط ل ‎DNA‏ خاص واحد على ‎(JAY)‏ ستكون ‎ALE‏ للإدراك فوراً بواسطة أولثك الخبراء فى المجال. يوفر انحلال الكود الجينى ‎genetic code‏ عدد محدود من تتابعات الترميز لتتابع حمض أمينى خاص. اختيار تتابع خاص لترميز بروتين دمج وفقاً لتجسيمات ‎٠‏ الاختراع يكون ضمن صلاحيات الممارس. قد تكون تتابعات الترميز المختلفة مطلوبة فى التطبيقات المختلفة. فى بعض التجسيمات؛ قد يكون من المطلوب تعديل نيوكليوتيدات تتابع عديد النيوكليوتيد الذى يرمز حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات؛ حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل؛ نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات؛ أو نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل (و/أو ‎Yo‏ نيوكليوتيدات التتابع المرمز للنطاق الرابط ل 8/ا/0)؛ على سبيل ‎(JE‏ لتعزيز التعبير الجينى
هه لتتابع عديد النيوكليوتيد فى مضيفة خاص. الرمز الجينى يكون لا لزوم له مع ‎TE‏ كودون ممكن؛ ولكن معظم الكائنات الحية تستخدم بشكل تفضيلى مجموعة فرعية من هذه الكودونات. الكودونات التى يتم استخدامها فى معظم الأحيان فى أنواع تسمى الكودونات المتلى ‎optimal‏ ‎codons‏ وتلك التى تكون غير مستخدمة فى معظم الأحيان تصنف على أنها كودونات نادرة أو © منخفضة الاستخدام. 105:61-72 ‎et al. (1991) Gene‏ 20809. قد يتم استبدال الكودونات لتعكس استخدام الكودون المفضل لمضيف خاص فى عملية يشار إليها أحياناً ب 'تحسين الكودون ‎".codon optimization‏ قد يتم تحضير تتابعات الترميز المحسنة ‎Al‏ تحتوى على الكودونات المفضلة من قبل مضيف بدائى النواة ‎prokaryotic‏ أو حقيقى النواة ‎eukaryotic‏ خاص عن طريق؛ على سبيل المثال؛ زيادة معدل النقل أو إنتاج نسخ ‎RNA‏ معادة الاتحاد لها الخواص ‎٠‏ المطلوبة (على سبيل ‎(JRA‏ نصف عمر أطول؛ مقارنةٌ بالنسخ المنتجة من تتابع غير محسن). التعبير الجينى لمنشط نسخى لبروتين دمج فى بعض التجسيمات؛ قد يتم إدخال جزئ (جزيئات) حمض نووى مرمز لبروتين دمج واحد على الأقل يشتمل على تتابع عديد نيوكليوتيد واحد على الأقل يرمز حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات (أو حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى ‎cay‏ نطاق تنشيط التعبير ‎Vo‏ الجينى للنبات؛ أو نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل)؛ وتتابع عديد نيوكليوتيد واحد على الأقل يرمز نطاق رابط ل ‎(DNA‏ فى خلية؛ نسيج؛ أو كائن حى للتعبير الجينى لبروتين الدمج فيها. فى بعض التجسيمات؛ قد يكون جزئ الحمض النووى هذاء على سبيل المثال؛ نظام ناقل يتضمن؛ على سبيل المثال وبدون حصر؛ بلازميد خطى ‎«linear plasmid‏ وبلازميد دائرى مغلق ‎closed circular plasmid‏ فى الأمثلة الخاصة؛ قد يكون الناقل هو ناقل تعبير جينى ‎expression vector | ٠‏ ؛ قد يتم إدخال تتابعات الحمض النووى وفقاً لتجسيمات خاصة؛ على سبيل المثال» فى ناقل؛ بحيث يتم ارتباط تتابع الحمض النووى عملياً بتتابع تنظيمى واحد أو أكثر. العديد من النواقل تكون متاحة لهذا الغرض؛ وقد يعتمد اختيار الناقل الخاص؛ على سبيل ‎JE‏ ‏على حجم الحمض النووى المطلوب إدخاله فى الناقل؛ الخلية المضيفة الخاصة المطلوب تحويلها بواسطة الناقل؛ و/أو كمية بروتين الدمج المطلوب التعبير الجينى له. عادةً ما يحتوى الناقل على ‎£Y14‏
-1ه- مكونات مختلفة؛ يعتمد تطابقها على وظيفة الناقل (على سبيل ‎(JUBA‏ تضخيم ‎DNA‏ والتعبير الجينى ل ‎(DNA‏ وخلية (خلايا) المضيف الخاصة التى يتوافق الناقل معها. قد تتضمن بعض التجسيمات ناقل تحويل نبات الذى يشتمل على تتابع نيوكليوتيد يشتمل على تتابع تنظيمى واحد على الأقل مرتبط عملياً بتتابع نيوكليوتيد واحد أو أكثر الذى يرمز بروتين دمج يشتمل على حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات واحد على الأقل؛ ‎la‏ تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل؛ نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات؛ أو نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل» مرتبط بشكل فعال بنطاق رابط ل ‎DNA‏ واحد على الأقل. قد يتم التعبير الجينى لواحد أو أكثر من تتابعات النيوكليوتيد. فى ظل تحكم التتابع التنظيمى (التتابعات التنظيمية)؛ فى خلية نباتية؛ نسيج؛ أو كائن حى لإنتاج بروتين الدمج. ‎١‏ فى بعض التجسيمات؛ التتابع التتظيمى المرتبط عملياً بتتابع نيوكليوتيد واحد أو أكثر الذى يرمز بروتين دمج يشتمل على حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات واحد على الأقل؛ حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل؛ نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات؛ أو نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل؛ مرتبط بشكل فعال بنطاق رابط ل ‎DNA‏ واحد على الأقل؛ قد يكون تتابع محفز الذى يعمل فى خلية مضيفة؛ مثل خلية بكتيرية ‎bacterial cell‏ حيث يكون من ‎No‏ المطلوب تضخيم جزئ الحمض النووى؛ أو خلية نبات حيث يكون من المطلوب التعبير الجينى لجزء الحمض النووى. ‏المحفزات المناسبة للاستخدام فى جزيئات الحمض النووى وفقاً لبعض التجسيمات تتضمن ‏تلك التى تكون قابلة للتحريض؛ فيروسية؛ تركيبية؛ أو تأسيسية؛ جميعها معروف جيداً فى المجال. ‏يتم توفير ‎ARG)‏ غير المحدودة للمحفزات التى قد تكون مفيدة فى تجسيمات الاختراع من قبل: ‎¢((RS81 maize ~~ promoter ‏براءة الاختراع الأمريكية أرقام 6.471.719 (محفز الذرة‎ Yo ‏(محفز الذرة‎ 1.471.447 ¢(rice actin promoter ‏(محفز أكتين الأرز‎ 3 ‏(محفز الذرة 4-1ا0)؛ 1.777.577 (محفز الذرة 3م)؛‎ 1.47.717 ¢(RS324 ‏متخ تتاف‎ ¢(constitutive maize promoters ‏(محفزات 3,30 التأسيسية‎ 1.77.71
L3 ‏و 0.070.157 (محفز 355)؛ 1.17.707 (محفز الذرة‎ 2.784.147 0.10.65 ‎؛)١‎ rice actin ‏أكتين الأرز‎ 101200 cp ils oF ‏80500ا0)؛ 1.479.757 (محفز أكتين الأرز‎ Yo
—oy— 84 ؟. (محفزات ‎ALE‏ للتحريض ‎VA ¢(light=inducible promoters ¢ sally‏ £0 ).1 (محفزات ‎ALE‏ للتحريض بالملح ‎T1.YOY. NYA ¢(salt-inducible promoters‏ (محفزات ‎ALE‏ ‏للتحريض بالممراض ‎¢(pathogen—inducible promoters‏ 1.175.050 (محفزات ‎ALE‏ ‏للتحريض ‎promoters‏ 100001016 بنقص الفوسفور ‎¢(phosphorous deficiency‏ 8 1.788.970 (محفزات ثنائية الاتجاه ‎¢(bidirectional promoters‏ 1.378.853 (محفز ‎—coixin‏ جاما ‎(gamma‏ وطلب براءة الاختراع الأمريكية برقم مسلسل ‎+A YOY. AS‏ (محفز .(maize chloroplast aldolase promoter ‏الدولاز صانعة يخضور الذرة‎ nopaline synthase ‏تتضمن المحفزات التمثيلية الإضافية محفز سينثاز نوبالين‎ ‘(Ebert et al. (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84(16):5745-9) (NOS) ‏(الذى يتم تنفيذه على البلازميدات‎ (OCS) octopine synthase ‏محفز سينثاز أوكتوبين‎ ٠ ‏محفزات‎ (Agrobacterium tumefaciens ‏من‎ 11001-10001719 plasmids ‏المحدثة للورم‎ cauliflower ‏محفز فيروس فسيفساء القرنبيط‎ Jie caulimovirus promoters ‏فيروس القرنبيط‎
Lawton et al. (1987) Plant Mol. Biol. 9:315-( 195 (CaMV) mosaic virus 35S - ‏محفز‎ Odell et al. (1985) Nature 313:810-2) CaMV 355 ‏؛ محفز‎ 4 (Walkeretal. (1987) Proc. Natl. Acad. figwort mosaic virus ‏فيروس الفسيفضاء‎ ٠ sucrose synthase promoter ‏محفز سينثاز السكروز‎ «Sci. USA 84(19):6624-8) ‏محفز‎ ¢(Yang and Russell (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:4144-8)
Chandler et al. (1989) Plant Cell ( R gene complex promoter ‏مركب الجين‎ ‏الرابط لكلوروفيل‎ protein gene promoter ‏محفز جين البروتين‎ ¢(1:1175-83 ‏.ذف‎ 110 (O.FYY.AYA ‏(براءة الاختراع الأمريكية أرقام‎ 681/1/355 a/b chlorophyll. 2.051.787 ‏(براءة الاختراع الأمريكية أرقام‎ FMV35S ‏و 07.195 5.)؛‎ 2.707
SCP1 ‏و5.778.715)؛ محفز /00151 (براءة الاختراع الأمريكية رقم 0.0914 5.85)؛ محفز‎
GenBank ( 6400.005 ‏(براءة الاختراع الأمريكية رقم 7+ 1.597/7.5)؛ ومحفزات‎
Accession No. V00087; Depicker et al. (1982) J. Mol. Appl. Genet. .(1:561-73; Bevan et al. (1983) Nature 304:184-7 +٠
—oA-
فى تجسيمات خاصة؛ قد تشتمل جزيئات الحمض النووى للاختراع على محفز محدد
النسيج. المحفز الخاص بالنسيج هو تتابع نيوكليوتيد الذى يوجه مستوى أعلى من نسخ تتابع نيوكليوتيد مرتبط عملياً فى النسيج الذى يتم تحديد المحفز له؛ بالنسبة لأنسجة أخرى للكائن الحى. تتضمن ‎ARG)‏ على المحفزات الخاصة بالنسيج؛ بدون حصر: المحفزات الخاصة بالبساط ‎tapetum-specific promoters ©‏ ؛ المحفزات الخاصة بالمثبر؛ المحفزات الخاصة باللقاح (انظرء على سبيل ‎Jia)‏ براءة الاختراع الأمريكية رقم 401.476 دتو ‎International PCT‏ ‎¢(Publication No.
WO 99/042587‏ المحفزات الخاصة بالبويضة ‎ovule-specific‏ ‎promoters‏ ¢ (انظر؛ على سبيل المثال؛ ‎U.S.
Patent Application No.‏ ‎Al‏ 2001/047525)؛ المحفزات الخاصة بالفاكهة (انظرء على سبيل المثال؛ براءة الاختراع
‎٠‏ الأمريكية أرقام 5.947.714 5 ‎Vor. £V0‏ .0(¢ والمحفزات الخاصة بالبذور ‎hail)‏ على سبيل ‎Jl)‏ براءة الاختراع الأمريكية أرقام 4 2.47080.07؛ و2.6000157). فى بعض التجسيمات؛ قد
‏يتم استخدام محفز خاص بالمرحلة التنموية ‎Je) developmental stage‏ سبيل المثال؛ محفز
‏نشط فى مرحلة لاحقة فى التنمية) فى تركيب أو طريقة الاختراع.
‏تتضمن التتابعات التنظيمية الإضافية التى قد تكون مرتبطة فى بعض التجسيمات عملياً
‏10 بجزئ حمض نووى ‎UTRS‏ 57 التى تقع بين تتابع محفز وتتابع ترميز الذى يعمل كتتابع رئيسى للنقل ‎leader sequence‏ 1805181100. يوجد التتابع الرئيسى للنقل فى ‎MRNA‏ المعالجة بالكامل؛ وقد يؤثر على معالجة النسخة الأولية؛ و/أو ثبات ‎RNA‏ تتضمن الأمثلة على التتابعات الرئيسية للنقل التتابعات الرئيسية ‎translation leader sequences‏ لبروتين الصدمة الحرارية ‎shock protein‏ 5681 للذرة و زهر البتونيا ‎petunia‏ (براءة الاختراع الأمريكية رقم
‎plant virus coat protein ‏2.77.825)؛ التتابعات الرئيسية لبروتين غطاء الفيروس النباتى‎ Yo ‏على سبيل‎ «hail ‏وغيرها.‎ » plant rubisco leaders ‏التتابعات الرئيسية لروبيسكو النباتى‎ » ‏يتم توفير‎ Turner and Foster (1995) Molecular Biotech. 3)3(:225-36 ‏المثال»‎
‏الأمثلة غير المحدودة على ‎UTRs‏ 55 من قبل: ‎GmHsp‏ (براءة الاختراع الأمريكية رقم 107 .2)؛ ‎PhDnaK‏ (براءة الاختراع الأمريكية رقم 717.8750.)؛ المخطلذ؛ ‎TEV‏
-4ه- ‎¢(Carrington and Freed (1990) J.
Virol. 64:1590-7)‏ و ‎AGRtunos‏ ‎«GenBank Accession No.
VO0087; and Bevan et al. (1983))‏ أعلاه). تتضمن التتابعات التنظيمية الإضافية التى قد تكون مرتبطة فى بعض التجسيمات عملياً بجزئ حمض نووى ‎Load‏ التتابعات غير المنقولة '3؛ مناطق إنهاء النسخ 37( أو مناطق تذييل © بعديد الأدينيلات ‎.poly—adenylation regions‏ هذه هى العناصر الجينية الواقعة فى نفس اتجاه تتابع ‎cad lS pal)‏ وتتضمن عديدات النيوكليوتيد التى توفر إشارة تذييل بعديد الأدينيلات؛ و/أو الإشارات التنظيمية الأخرى القادرة على التأثير على النسخ أو معالجة ‎(MRNA‏ تعمل إشارة التذييل بعديد الأدينيلات فى النباتات لتسبب إضافة نيوكليوتيدات عديد أدينيلات ‎polyadenylate‏ ‎nucleotides‏ إلى النهاية :3 من نذير ‎mRNA‏ قد يتم اشتقاق تتابع التذييل بعديد الأدينيلات ‎polyadenylation sequence ٠‏ من مجموعة من الجينات النباتية ‎plant genes‏ ؛ أو من جينات ‎T-DNA‏ مثال غير محدود على منطقة نهاية النسخ ”3 هو منطقة سينثاز نوبالين ‎nos 3’; Fraley et al. (1983) Proc.
Natl.
Acad.
Sci. ) 3’ nopaline synthase‏ ‎(USA 80:4803-7‏ يتم تقديم مثال على استخدام مناطق غير منقولة 37 مختلفة فى ‎et al. (1989) Plant Cell 1:671-80‏ 109©108001. تتضمن الأمثلة غير المحدودة على ‎Yo‏ إشارات التذييل بعديد الأدينيلات ‎polyadenylation signals‏ واحد من جين ‎Pisum sativum‏ ‎(Ps.RbcS2-E9; Coruzzi et al. (1984) EMBO J. 3:1671-9( 2‏ و ‎.(GenBank Accession No.
EQ1312) AGRtu.nos‏ يتم وصف معلومات إضافية حول التتابعات التنظيمية التى قد تكون مفيدة فى التجسيمات الخاصة؛ على سبيل المثال؛ فى ‎Goeddel (1990) “Gene Expression Technology,”‏ ‎.Methods Enzymol. 185, Academic Press, San Diego, CA ٠‏ قد يشتمل جزئ حمض نووى معاد الاتحاد أو ناقل للاختراع الحالى على علامة قابلة للاختيار التى تمنح نمط ظاهرى قابل للاختيار على خلية محولة؛ مثل خلية نباتية. قد يتم أيضاً استخدام العلامات القابلة للاختيار لاختيار النباتات أو خلايا النبات التى تشتمل على جزئ حمض نووى للاختراع. قد ترمز العلامة مقاومة المبيد الحيوى ‎biocide resistance‏ ؛ مقاومة المضاد ‎Yo‏ الحيوى ‎antibiotic resistance‏ (على سبيل المثال؛ كاناميسين ‎kanamycin‏ ؛ جينيتيسين qa
‎((G418) Geneticin‏ بليوميسين ‎bleomycin‏ ؛ وهيجروميسين ‎«(hygromycin‏ أو مقاومة مبيدات الأعشاب ‎Je) herbicide resistance‏ سبيل ‎(JBL‏ جليفوسات ‎.(glyphosate‏ ‏تتضمن أمثلة على العلامات القابلة للاختيار» لكنها لا تقتصر على؛ جين حديث الذى يمنح مقاومة الكاناميسين ‎kanamycin resistance‏ وقد يتم اختياره لاستخدام» على سبيل ‎(JB‏ ‏© الكاناميسين و6418 ؛ جين ‎dll bar‏ يمنح مقاومة ‎tbialaphos‏ جين ‎synthase li.‏ ‎EPSP gene‏ طافر الذى يمنح مقاومة الجليفوسات؛ جين نتريلادز ‎nitrilase gene‏ الذى يمنح مقاومة بروموزاينيل ‎bromoxynil‏ ؛ جين سينثاز أسيتولاكتات ‎mutant acetolactate aU.‏ ‎(ALS) synthase gene‏ الذى يمنح مقاومة الإيميدازولينون ‎imidazolinone‏ أو السلفونيل
‏يوريا ‎¢sulfonylurea‏ وجين ‎DHFR‏ لمقاومة الميثوتريكسات ‎.methotrexate-resistant‏ ‎٠‏ العلامات المتعددة القابلة للاختيار تكون متاحة والتى تمنح مقاومة مقاومة للعوامل الكيميائية التى
‏تتضمن؛ على سبيل المثال وبدون حصرء أمبيسلين ‎ampicillin‏ ؛ بليوميسين ‎bleomycin‏ ؛ كلورامفينيكول ‎chloramphenicol‏ ؛ جنتاميسين ‎gentamycin‏ ؛ هيجروميسين ‎hygromycin‏
‏؛ كاناميسين ‎kanamycin‏ ¢ لينكوميسين ‎lincomycin‏ ¢ ميثوتريكسات ‎methotrexate‏ ¢ فوسفينوثريمين ‎Pphosphinothricin‏ ؛ بوروميسين ‎PUFOMYCIN‏ ؛ سبيكتينوميسين
‎spectinomycin Vo‏ ؛ ريفامبيسين ‎rifampicin‏ ؛ ستربتوميسين ‎streptomycin‏ ؛ وتتراسيكلين ©160807006. يتم توضيح أمثلة على هذه العلامات القابلة للاختيار فى؛ على سبيل ‎JE‏
‏براءات الاختراع الأمريكية 5.250.731 7.475 17د ل لاخالاءه ولاك مغ لالت
‏قد يتضمن أيضاً جزئ حمض نووى أو ناقل للاختراع الحالى أو على نحو بديل علامة
‎ALE‏ للفحص. قد يتم استخدام العلامات القابلة للفحص لمراقبة التعبير الجينى. تتضمن العلامات
‎٠‏ . القابلة للفحص التمثيلية م - جلوكورونيداز ‎glucuronidase‏ أو جين ‎(GUS) uidA‏ الذى يرمز إنزيم تكون الركائز المولدة للون ‎chromogenic substrates‏ المختلفة له معروفة ( ‎Jefferson‏ ‎al. (1987) Plant Mol.
Biol.
Rep. 5:387-405‏ ©)؛ جين موضع -+ا؛ الذى ‎Jap‏ منتج الذى ينظم إنتاج أصباغ الأنثوسيانين ‎anthocyanin pigments‏ (اللون الأحمر) فى الأنسجة النباتية ‎Dellaporta et al. )1988(( plant tissues‏ "الاستنساخ الجزيئى ‎Molecular‏ ‎R-nj J¥cloning Yo‏ الذرة بواسطة علامات الينقول مع .86" فى 5 ‎3a] 8th‏ تنشيط التعبير
‎£Y14
-؟١-‎ ler Genetics Symposium, P. Gustafson and R. Appels, eds., Plenum, ‏الجينى‎ ‎Sutcliffe et al. (1978) ) lactamase gene ‏لاكتاماز‎ —f3 ‏جين‎ ¢NY (pp. 263-82) ‏جين الذى يرمز إنزيم ركائز مولدات اللون‎ (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 75:3737-41 chromogenic ‏سيفالوسبورين مولد اللون‎ (PADAC ‏المختلفة له معروفة (على سبيل المثال»‎
Ow et al. (1986) Science ) luciferase gene ‏جين لوسفيراز‎ ¢(cephalosporin © catechol dioxygenase ‏الذى يرمز كاتيكول دى أوكسيجيناز‎ XYIE ‏جين‎ ¢(234:856-9
Zukowski et al. ) chromogenic catechols ‏الذى يحول الكاتيكولات المولدة للون‎ lkatu et al. ) amylase gene Pld ‏جين‎ ¢((1983) Gene 46(2-3):247-55 ‏الذى يرمز إنزيم‎ tyrosinase gene ‏جين تيروزيناز‎ ¢((1990) BiofTechnol. 8:241-2 ‏الذى بدوره‎ « dopaquinone ‏ودوباكوينون‎ DOPA ‏إلى‎ tyrosine ‏على أكسدة التيروزين‎ jE Vs
Katz et al. (1983) J. Gen. Microbiol. 129:2703-( melanin ‏يتكثف إلى ميلانين‎ ‎—ay ¢(14‏ جالاكتوزيداز ‎.galactosidase‏ ‏تتضمن الطرق المناسبة لتحويل الخلايا المضيفة ‎host cells‏ أى طريقة التى بواسطتها يمكن إدخال ‎DNA‏ فى خلية؛ على سبيل ‎JB‏ وبدون حصر: عن طريق تحويل البروتوبلاستات ‎protoplasts Vo‏ (انظرء على سبيل المثال» براءة الاختراع الأمريكية ‎ANAL‏ 0.0( عن طريق امتصاص ‎DNA‏ بوساطة التجفيف/التثبيط (انظر؛ على سبيل ‎Potrykus et al. Judi‏ ‎Mol. Gen. Genet. 199:183-8‏ )1985((¢ عن طريق الصعق الكهربائى ‎electroporation‏ (انظر؛ على سبيل المثال؛ براءة الاختراع الأمريكية 4.707 70.)؟ عن طريق الرج مع ألياف كربيد السيليكون ‎silicon carbide fibers‏ (انظرء على سبيل المثال؛ ‎٠‏ براءات الاختراع الأمريكية 0.307.577 و2.474.715)؛ عن طريق التحويل بوساطة ‎Agrobacterium‏ (انظرء على سبيل ‎(JU)‏ براءات الاختراع الأمريكية 0.071.100( 73 .م كام كتف للاخ تف كف 2.441 و٠0‏ 1.745.7)؟ وعن طريق تسريع الجسيمات المغلفة ب ‎DNA‏ (انظرء على سبيل ‎(JU)‏ براءات الاختراع الأمريكية ...م لت 0000( ااا ف لات تالت ‎ATO 5 CLV ATTY‏ ب 1 ‎YO‏ .من خلال تطبيق ‎Jie‏ هذه التقنيات؛ قد يتم تحويل الخلايا من أى نوع فعلياً بشكل ثابت. فى بعض
١
التجسيمات؛ يتكامل تحويل ‎DNA‏ فى جينوم الخلية المضيفة. فى ‎Alla‏ الأنواع متعددة الخلاياء قد يتم إعادة توليد الخلايا المعدلة وراثياً ‎transgenic cells‏ فى كاثن ‎a‏ معدل جينياً. قد يتم استخدام أى من هذه التقنيات لإنتاج نبات معدل ‎cia‏ على سبيل المثال؛ يشتمل على تتابع
حمض نووى واحد أو أكثر للاختراع فى جينوم النبات المعدل جينياً ‎transgenic plant‏ > تعتمد الطريقة الأكثر استخداماً على نطاق واسع لإدخال ناقل تعبير جينى فى النباتات على نظام التحول الطبيعى ل ‎rhizogenes ;A. tumefaciens .Agrobacterium‏ .ا هى بكتيريا تربة مسببة للأمراض نباتية ‎plant pathogenic soil bacteria‏ التى تحول ‎WIA‏ النبات جينياً. بلازميدات ‎Ti‏ ولا ل ‎A. rhizogenes A. tumefaciens‏ ¢ على التوالى» تحمل الجينات المسئولة عن التحويل الجينى للنبات. تحتوى البلازميدات (المحدثة للورم ‎tumor—‏ ‎Ti (inducing)‏ على جزء كبير؛ معروف باسم ‎(T-DNA‏ الذى يتم تحويله إلى نباتات محولة. هناك جزءِ ‎AT‏ من بلازميد ‎(Ti‏ منطقة ‎vir‏ يكون مسئلاً عن تحويل ‎T-DNA‏ يتم حد منطقة ‎T-DNA‏ بالحدود اليسرى واليمنى التى يتألف كل منها من تتابعات نيوكليوتيد مكررة طرفية. فى بعض النواقل الثنائية ‎binary vectors‏ المعدلة؛ تم حذف الجينات المحدثة للورم ‎tumor—‏ ‎genes‏ 11000109 ويتم استخدام وظائف منطقة ‎vir‏ لتحويل ‎DNA‏ الخارجية التى تحدها ‎Vo‏ تتابعات الحدود ‎T-DNA‏ قد تحتوى منطقة-1 ‎(Lad‏ على سبيل ‎JUN‏ على علامة قابلة للاختيار لإيسترداد النباتات والخلايا المعدلة جينياً بكفاءة؛ وموقع استنساخ متعدد لإدخال التتابعات
لتحويل ‎Jie‏ حمض نووى مرمز لبروتين الدمج للاختراع. وبالتالى؛ فى بعض التجسيمات؛ يتم اشتقاق ناقل نحويل النبات ‎plant transformation‏ ‎vector‏ من بلازميد ‎Ti‏ ل ‎A. tumefaciens‏ (انظر؛ على سبيل المثال براءة الاختراع الأمريكية ‎٠‏ أرقام تمك لالاق تثتك ‎ATY 5 (EL AATLAYY‏ 1 £0.00 وبراءة الاختراع الأوروبية رقم ‎١77 VAY‏ +( أو بلازميد أ ل ‎WA. rhizogenes‏ تتضمن ناقلات تحويل النبات ‎plant‏ ‎transformation vectors‏ الإضافية؛ على سبيل المثال وبدون حصرء تلك الموصوفة بواسطة ‎«Herrera—Estrella et al. (1983) Nature 303:209-13; Bevan et al. (1983)‏ أعلاه؛ 3:637-42 ‎¢Klee et al. (1985) Bio/Technol.‏ وفى براءة الاختراع الأوروبية رقم ‎١٠7١ #١١ 5‏ ؛ وتلك المشتقة من أى مما سبق. البكتيريا الأخرى» ‎Sinorhizobium, (Jie‏ ‎£Y14‏
اس ‎Mesorhizobium (Rhizobium‏ .؛ التى تتفاعل بشكل طبيعى مع النباتات يمكن تعديلها لتتوسط التحويل الجينى إلى عدد من النباتات المتنوعة. يمكن ‎Jaa‏ هذه البكتيريا التكافلية ‎symbiotic bacteria‏ المرتبطة بالنبات مختصة بالتحويل الجينى عن طريق اكتساب كل من بلازميد ‎Ti‏ مجرد وناقل ثنائى مناسب.
0 بعد توفير ‎DNA‏ خارجى المنشاً للخلايا المتلقية ‎recipient cells‏ ؛ يتم تحديد الخلايا المحولة بشكل عام لمزيد من زراعة وتجديد النبات. من أجل تحسين القدرةٍ على تحديد الخلايا المحولة؛ قد يرغب أحد فى استخدام جين علامة قابل للاختيار أو قابل للفحص؛ كما هو مبين سابقاً؛ مع الناقل المستخدم لتوليد كفاءة التحول. فى الحالة حيث يتم استخدام علامة قابلة للاختيار؛ يتم تحديد الخلايا المحولة داخل مجموعة الخلايا المحولة المحتملة من خلال تعريض
‎٠‏ الخلايا إلى عامل انتقائى ‎selective agent‏ أو عوامل انتقائية. فى الحالة حيث يتم استخدام علامة قابلة ‎(asd‏ قد يتم فحص الخلايا للسمة الجينية للعلامة المطلوبة. الخلايا التى تبقى حية عند التعرض للعامل الانتقائى؛ أو الخلايا التى تم تسجيلها ايجابية فى تحليل ‎andl]‏ قد يتم زراعتها فى الأوساط التى تدعم تجديد النباتات. فى بعض التجسيمات؛ قد يتم تعديل أى وسط زراعة نسيج نبات ‎plant tissue culture media‏ مناسب (على سبيل ‎١‏ المثال؛ الأوساط ‎MS‏ و6!ا) عن طريق تضمين مواد أخرى,؛ مثل منظمات النمو | ‎growth‏ ‏635 . قد يتم إبقاء النسيج على أوساط قاعدية ‎basic media‏ مع منظمات النمو حتى يكون يتاح نسيج كافى لبدء جهود تجديد النبات؛ أو اتباع دورات متكررة للاختيار اليدوى» حتى تصبح مورفولوجيا النسيج مناسبة للتجديد (على سبيل المثال؛ على الأقل أسبوعين)؛ ثم نقله إلى أوساط تؤدى إلى تكوين برعم ‎Shoot‏ يتم نقل المزارع دورياً حتى يحدث تكوين براعم كافى. بمجرد ‎٠‏ تتكوين البراعم؛ يتم نقلها إلى أوساط تؤدى إلى تشكيل الجذور. ‎ae‏ تكون الجذور الكافية؛ يمكن نقل النباتات إلى التربة لمزيد من النمو والنضج. للتأكيد على وجود جزئ الحمض النووى موضوع الاهتمام (على سبيل المثال؛ تتابع نيوكليوتيد مرمز لعديد ببتيد يشتمل على بروتين دمج واحد على الأقل للاختراع) فى نبات تجديد؛ قد يتم إجراء العديد من المقايسات. تتضمن هذه المقايسات؛ على سبيل المثال: المقايسات © البيولوجية الجزيئية ‎molecular biological assays‏ ؛ مثل التلطيخ الجنوبى والشمالى ‎£Y14‏
‎(PCR « Southern and Northem blotting‏ وتتابع الحمض النووى؛ المقايسات البيولوجية الكيميائية ‎biochemical assays‏ ؛ مثل الكشف عن وجود منتج بروتين» على سبيل المثال؛ عن طريق الوسائل المناعية ‎ELISA) immunological means‏ و/أو البقع ‎Western ap all‏ ‎(blots‏ أو عن طريق الوظيفة الإنزيمية؛ مقايسات ‎sia‏ النبات؛ ‎Jie‏ مقايسات الأوراق أو الجذور؛ © وتحليل النمط الظاهرى للنبات المجدد بالكامل.
قد يتم تحليل حالات التكامل؛ على سبيل ‎(JU‏ عن طريق تضخيم ‎PCR‏ باستخدام؛ على سبيل المثال؛ بادئات قليل النيوكليوتيد ‎oligonucleotide primers‏ التى تكون محددة لتتابع النيوكليوتيد موضوع الاهتمام. من المفهوم أن التنميط الجينى ‎PCR‏ يتضمن؛ لكنه لا يقتصر على؛ تفاعل سلسلة بوليميراز ‎(PCR) polymerase—chain reaction‏ تضخيم ‎DNA‏ ‎٠‏ الجينومى المشتق من نسيج النبات المضيف ‎host plant tissue‏ المعزول المتوقع أنه يحتوى على جزئ الحمض النووى موضوع الاهتمام المدمج فى الجينوم؛ متبوعاً بالاستنساخ المعيارى وتحليل التتابع لمنتجات تضخيم 4ا00. تم وصف طرق التنميط الجينى ل ‎PCR‏ جيداً (انظرء على سبيل المثال» 32:243-53 .ل ‎(Rios, ©. etal. (2002) Plant‏ وقد يتم تطبيقها على ‎DNA‏ الجينومى المشتق من أى نوع نبات أو نوع نسيج؛ ‎Lay‏ فى ذلك مزارع الخلية ‎cell‏
.cultures ٠ ‏عادةً ما يحتوى نبات معدل جينياً باستخدام طرق التحويل المعتمدة على‎ ‏معاد الاتحاد فردى مدخل فى كروموسوم واحد. يشار إلى‎ DNA ‏على تتابع‎ Agrobacterium ‏أو "حالة تكامل‎ " transgenic event ‏معاد الاتحاد الفردى ب "حالة معدلة جينياً‎ DNA ‏تتابع‎ ‏لتتابع‎ heterozygous ‏هذه النباتات المعدلة جينياً تكون متغايرة الزيجوت‎ "integration event ‏متماثل الزيجوت‎ Lia ‏المدخل. فى بعض التجسيمات؛ قد يتم الحصول على نبات معدل‎ DNA ٠ ‏فيما يتعلق بجين تحوير عن طريق التزاوج الجنسى‎ transgenic plant homozygous ‏لنبات معدل جينياً معزول مستقل الذى يحتوى‎ ) selfing ‏(إخصاب ذاتى‎ sexually mating ‏فردى مع نفسه؛ على سبيل المثال؛ نبات‎ €XOgeENoOUs gene Lad) ‏على تتابع جين خارجى‎ ‏المنتجة سوف يكون متماثل الزيجوت بالنسبة للترانسجين. إنبات‎ FI ‏ربع بذرة‎ Fl ‏لإنتاج بذرة‎ (FO ‏أو‎ SNP ‏باستخدام مقايسة‎ Sale ‏ينتج النباتات التى يمكن اختبارها لتغاير الزيجوت؛‎ FI ‏بذور‎ Yo
£Y14
+ مقايسة تضخيم حرارى ‎thermal amplification‏ التى تسمح بالتمييز بين الزيجوت متغايرة ‎heterozygotes‏ الآلاثل والزيجوت متمائلة ‎homozygotes‏ الآلائل (أى؛ مقايسة تلقيح ‎.(zygosity assay‏ فى تجسيمات خاصة؛ يتم إنتاج نسخ من بروتين دمج منشط نسخى تركيبى واحد على الأقل يشتمل على حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات واحد على الأقل (و/أو حافز ‎Joli‏ نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل) ونطاق رابط ل ‎DNA‏ واحد على الأقل فى خلية؛ التى فيها تم إدخال جزئ حمض نووى واحد على الأقل يشتمل على تتابع نيوكليوتيد لترميز بروتين دمج منشط نسخى تركيبى واحد على الأقل. قد يتم التعبير الجينى لكل بروتين دمج منشط نسخى تركيبى من تتابعات حمض نووى متعددة مدخلة فى حالات تحويل مختلفة؛ أو من تتابع حمض ‎٠‏ نووى واحد مدخل فى ‎Alla‏ تحويل واحدة. فى بعض التجسيمات؛ قد يتم التعبير الجينى للعديد من بروتينات الدمج هذه تحت تحكم محفز واحد. فى تجسيمات ‎(al‏ قد يتم التعبير الجينى للعديد من بروتينات الدمج هذه تحت تحكم محفزات متعددة. بالإضافة إلى التحول المباشر لنبات أو خلية نبات بواسطة جزئ حمض نووى للاختراع؛ قد يتم تحضير النباتات المعدلة جينياً فى بعض التجسيمات عن طريق تهجين نبات أول يحتوى 0 على حالة معدلة جينياً واحدة على الأقل مع نبات ثانى يفتقر إلى هذه الحالة. على سبيل ‎(JE‏ ‏قد يتم إدخال جزئ حمض نووى يشتمل على تتابع نيوكليوتيد مرمز لبروتين دمج منشط نسخى تركيبى يشتمل على حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات واحد على الأقل (و/أو حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل) ونطاق رابط ل ‎DNA‏ واحد على الأقل فى خط نبات أول الذى يكون قابل للتحويل. لإنتاج نبات معدل جينياً؛ قد يتم تهجين هذا النبات المعدل جينياً مع خط ‎ols Yo‏ ثانى للإنجبال الداخلى لتتابع النيوكليوتيد الذى يرمز بروتين الدمج المنشط النسخى التركيبى فى خط النبات الثانى. المواد النباتية التى تشتمل على منشط نسخى لبروتين دمج فى بعض التجسيمات؛ يتم توفير نبات؛ حيث يشتمل النبات على خلية نباتية تشتمل على تتابع نيوكليوتيد مرمز لبروتين دمج منشط نسخى تركيبى يشتمل على حافز تفاعل نطاق تنشيط
التعبير الجينى للنبات واحد على الأقل (و/أو حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل) ونطاق رابط ل ‎DNA‏ واحد على الأقل. فى تجسيمات خاصة؛ قد يتم إنتاج هذا النبات عن طريق تحويل نسيج نبات أو خلية نبات؛ وتجديد النبات كله. فى تجسيمات أخرى؛ قد يتم الحصول على هذا النبات من خلال انجبال داخلى لحمض نووى يشتمل على تتابع نيوكليوتيد الذى يرمز بروتين © دمج منشط نسخى تركيبى فى بلازما جرثومية ‎germplasm‏ يتم ‎Lad‏ توفير المواد النباتية التى تشتمل على خلية النبات هذه. قد يتم الحصول على هذه المادة النباتية من نبات يشتمل على الخلية النباتية.
قد يظهر نبات معدل جينياً أو ‎sale‏ نباتية تشتمل على تتابع نيوكليوتيد مرمز لبروتين دمج منشط نسخى تركيبى الذى يشتمل على حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات واحد على ‎٠‏ الأقل (و/أو حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل) ونطاق رابط ل ‎DNA‏ واحد على الأقل فى بعض التجسيمات واحدة أو أكثر من الخصائص التالية: التعبير الجينى لبروتين الدمج فى خلية النبات؛ التعبير الجينى لبروتين الدمج فى صانعة خلية النبات؛ التعبير الجينى لبروتين الدمج فى نواة خلية النبات؛ توضع بروتين الدمج فى خلية النبات؛ دمج تتابع النيوكليوتيد فى جينوم خلية النبات؛ وجود تتابع النيوكليوتيد فى ‎DNA‏ خارج الصبغى لخلية النبات؛ و/أو وجود نسخة ‎RNA‏ ‎Vo‏ مقابلة لتتابع النيوكليوتيد فى خلية النبات. قد يكون لهذا النبات إضافياً واحدة أو أكثر من السمات المرغوب فيها غير التعبير الجينى لبروتين الدمج المرمز ‎.encoded fusion protein‏ قد تتضمن هذه السمات تلك الناتجة من التعبير الجينى لتتابع نيوكليوتيد داخلى المنشاً أو معدل جينياً يتم تنظيم التعبير الجينى له بواسطة بروتين الدمج فى خلية النبات؛ على سبيل المثال وبدون حصر: مقاومة الحشرات؛ الآفات الأخرىء والعوامل المسببة للمرض؛ تحمل مبيدات الأعشاب؛ ‎٠‏ الثبات المعزز ‎enhanced stability‏ ؛ الإنتاج؛ أو العمر الافتراضى ‎shelf-life‏ ؛ التحملات
البيئية؛ الإنتاج الصيدلى؛ إنتاج المنتج الصناعى؛ والتعزيزات الغذائية. قد يكون النبات المعدل جينياً وفقاً للاختراع هو أى نبات قابل للتحويل بواسطة جزئ حمض نووى للاختراع. وعليه؛ قد يكون النبات ثنائى الفلقة أو أحادى الفلقة. تتضمن الأمثلة غير المحدودة على النباتات ذات الفلقتين ‎dicotyledonous plants‏ القابلة للاستخدام فى الطرق ‎Yo‏ الحالية ‎Arabidopsis‏ البرسيم ‎alfalfa‏ ؛ الفول ‎beans‏ ؛ البروكلى ‎broccoli‏ ؛ الملفوف
‎cabbage‏ « الكانولا ‎canola‏ ؛ الجزر ‎carrot‏ ¢ القرتبيط ‎cauliflower‏ ؛ الكرفس ‎celery‏ ؛ الملفوف الصينى ‎Chinese cabbage‏ ؛ القطن ‎cotton‏ ؛ الخيار ‎cucumber‏ ؛ الباذنجان ‎eggplant‏ ؛ الخس ‎lettuce‏ ؛ البطيخ ‎melon‏ » البازلاء ‎pea‏ ؛ الفلفل ‎pepper‏ ء_الفول السودانى ‎peanut‏ ؛ البطاطا ‎potato‏ ؛ اليقطين ‎pumpkin‏ » الفجل ‎radish‏ اللفت
‎rapeseed ©‏ ؛ السبانخ ‎spinach‏ ؛ فول الصويا ‎soybean‏ ؛ الاسكواش 5001850 ؛ بنجر السكر ‎sugarbeet‏ ؛ عباد الشمس ‎sunflower‏ ؛ التبغ ‎tobacco‏ ؛ الطماطم ‎tomato‏ ؛ والبطيخ الأحمر ‎watermelon‏ تتضمن الأمظلة غير المحدودة على النباتات ذات الفلقة ‎monocotyledonous plants‏ الواحدة القابلة للاستخدام فى الطرق الحالية الذرة ‎corn‏ ؛ البصل 0000 » الأرز ‎«rice‏ السرغوم ‎sorghum‏ ؛ القمح ‎wheat‏ ؛ الجاودار ‎rye‏ ؛ الدخن ‎millet‏ «
‎« switchgrass ‏؛ التبن‎ triticale ‏التريتيكالى‎ ¢ oat ‏؛ الشوفان‎ sugarcane ‏قصب السكر‎ Vo ‏قد يتم استخدام النباتات المعدلة جينياً وفقاً للاختراع أو زراعتها بأى طريقة.‎ turfgrass ‏والمروج‎
‏توفر أيضاً بعض التجسيمات المنتجات السلعية التى تحتوى على تتابع نيوكليوتيد واحد أو
‏أكثر الذى يرمز بروتين دمج منشط نسخى تركيبى يشتمل على حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات واحد على الأقل (و/أو حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل) ونطاق رابط ‎DNAS ١‏ واحد على الأقل؛ على سبيل المثال؛ منتج سلعى منتج من نبات معاد الاتحاد أو بذرة تحتوى على تتابع نيوكليوتيد واحد أو أكثر. تتضمن المنتجات السلعية التى تحتوى على تتابع نيوكليوتيد واحد أو أكثر التى ترمز بروتين دمج منشط نسخى تركيبى يشتمل على حافز تفاعل
‏نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات واحد على الأقل (و/أو حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل) ونطاق رابط ل ‎DNA‏ واحد على الأقل؛ على سبيل المثال وبدون حصر: المنتجات
‎٠‏ الغذائية؛ الوجبات؛ الزيوت؛ أو الحبوب المسحوقة أو الكاملة أو بذور نبات يشتمل على تتابع نيوكليوتيد واحد أو أكثر الذى يرمز بروتين الدمج المنشط النسخى التركيبى هذا. الكشف عن تتابع نيوكليوتيد واحد أو أكثر الذى يرمز بروتين دمج منشط نسخى تركيبى للاختراع فى واحدة أو أكثر
‏من السلع أو المنتجات السلعية هو دليل فعلى على أن السلعة أو المنتج السلعى قد تم إنتاجه على الأقل جزئياً من نبات يشتمل على تتابع نيوكليوتيد واحد أو أكثر الذى يرمز بروتين دمج منشط
‎Yo‏ نسخى تركيبى للاختراع. فى تجسيمات خاصة؛ يشتمل منتج سلعى للاختراع على كمية قابلة
‎£Y14
‎A —‏ أ — ‎Jo lis‏ نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات واحد على الأقل (و/أو حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل) ونطاق رابط ل ‎DNA‏ واحد على الأقل. فى بعض التجسيمات؛ قد يتم إنتاج هذه المنتجات السلعية؛ على سبيل ‎(JB‏ من خلال الحصول على نباتات معدلة جينياً ‎transgenic‏ ‎plants ©‏ وتحضير الطعام أو الغذاء منها. فى بعض التجسيمات, النبات المعدل جينياً أو البذرة التى تشتمل على جين تحوير يشتمل على تتابع النيوكليوتيد الذى يرمز بروتين دمج منشط نسخى تركيبى للاختراع قد يشتمل أيضاً على حالة معدلة جينياً أخرى واحدة على الأقل فى الجينوم الخاص به؛ بما فى ذلك وبدون حصر: حالة معدلة جينياً ‎Ally‏ منها يتم نسخ جزئ ‎(RNA‏ جين مرمز لبروتين مبيد للحشرات ‎insecticidal‏ ‎Je) protein | ٠‏ سبيل ‎(JB‏ البروتين المبيد للحشرات ‎¢(Bacillus thuringiensis‏ جين تحمل مبيد الأعشاب ‎herbicide tolerance gene‏ (على سبيل ‎(JOB‏ جين يوفر تحمل للجلايفوسات ‎¢(glyphosate‏ وجين يساهم فى النمط الظاهرى المرغوب فيه فى النبات المعدل جينياً (على سبيل المثال؛ زيادة الإنتاج؛ استقلاب الحمض الدهنى المعدل | ‎altered fatty acid‏ ‎metabolism‏ ؛ أو شفاء عقم الذكور الهيولى ‎.(cytoplasmic male sterility‏ ‎Ye‏ فى بعض التجسيمات؛ قد يشتمل النبات المعدل جينياً أو البذرة التى تشتمل على جين تحوير يشتمل على تتابع نيوكليوتيد الذى يرمز بروتين دمج منشط نسخى تركيبى للاختراع على جين مستهدف داخلى المنشاً أو أصلى داخل جينوم النبات المعدل جينياً؛ بما فى ذلك وبدون حصر: جين داخلى ‎Land)‏ مستهدف لسمة استقلاب حمض دهنى معدل»؛ جين داخلى المنشأً مستهدف لسمة تحمل الجفاف»؛ جين داخلى ‎Land)‏ مستهدف لسمة كفاءة استخدام النيتروجين ‎cnitrogen Y.‏ أو أى جين آخر داخلى ‎Land)‏ مستهدف يساهم فى النمط الظاهرى المطلوب فى النبات المعدل جينياً (على سبيل المثال؛ زيادة الإنتاج؛ أو شفاء عقم الذكور الهيولى). قد يتم ارتباط الجين داخلى المنشاً أو الأصلى المستهدف عملياً بتتابع نيوكليوتيد الذى يرتبط به بروتين الدمج المنشط النسخى التركيبى على ‎ang‏ التحديد؛ مما يؤثر على نسخ الجين المستهدف. تنظيم التعبير الجينى بواسطة منشط نسخى لبروتين الدمج ‎£Y14‏
فى بعض التجسيمات؛ قد يتم استخدام بروتين دمج منشط نسخى تركيبى يشتمل على حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات واحد على الأقل (و/أو حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل) ونطاق رابط ل ‎DNA‏ واحد على الأقل لزيادة (على سبيل المثال؛ بدء) التعبير الجينى لتتابع النيوكليوتيد موضوع الاهتمام (على سبيل المثال؛ الجين موضوع الاهتمام) فى خلية. © قد يكون تتابع النيوكليوتيد موضوع الاهتمام فى بعض التجسيمات داخلى ‎Land)‏ لجينوم الخلية. فى تجسيمات ‎(ial‏ تم إدخال جزئ حمض نووى خارجى ‎exogenous nucleic acid Lisl‏ ‎molecule‏ واحد على الأقل يشتمل على تتابع النيوكليوتيد موضوع الاهتمام فى الخلية. وبشكل عام؛ سيتم التعرف على تتابع نيوكليوتيد ثانى مرتبط ‎lee‏ بتتابع النيوكليوتيد موضوع الاهتمام بواسطة النطاق الرابط ل ‎DNA‏ لبروتين الدمج؛ بحيث يمكن أن يحدث ارتباط ثابت ومحدد بين ‎٠‏ تتابع النيوكليوتيد ‎SE‏ وبروتين الدمج. فى بعض الأمثلة؛ يشتمل جزئ الحمض النووى الواحد على الأقل الذى يشتمل على تتابع النيوكليوتيد موضوع الاهتمام أيضاً على تتابع النيوكليوتيد الثانى. فى بعض الأمثلة؛ يتم إدخال جزئ الحمض النووى الواحد على الأقل الذى يشتمل على تتابع النيوكليوتيد موضوع الاهتمام فى الخلية المضيفة؛ بحيث يتم ارتباط تتابع النيوكليوتيد موضوع الاهتمام عملياً بتتابع نيوكليوتيد ثانى الذى يكون داخلى ‎Land)‏ للخلية المضيفة. على سبيل المثال؛ ‎VO‏ قد يسهل جزئ الحمض النووى الذى يشتمل على تتابع النيوكليوتيد موضوع الاهتمام إعادة الاتحاد المتجانسة التى تدخل تتابع النيوكليوتيد موضوع الاهتمام فى جينوم الخلية المضيفة؛ بحيث يتم ارتباط تتابع النيوكليوتيد موضوع الاهتمام عملياً بتتابع داخلى المنشاً الذى يتم التعرف عليه بواسطة نطاق رابط ل 8/لا0. فى بعض ‎AEN‏ يكون جزئ الحمض النووى الواحد على الأقل الذى يشتمل على تتابع النيوكليوتيد موضوع الاهتمام داخلى ‎Land‏ أو أصلى داخل الخلية المضيفة؛ بحيث يتم ‎٠‏ ارتباط تتابع النيوكليوتيد موضوع الاهتمام عملياً بتتابع النيوكليوتيد الثانى الذى يكون داخلى ‎Land)‏
للخلية المضيفة ‎host cell‏ قد يتم التعبير الجينى لتتابع (تتابعات) النيوكليوتيد المتعددة موضوع الاهتمام التى يتم إدخالها فى حالات تحويل مختلفة تحت التحكم التنظيمى لبروتين دمج واحد فى بعض الأمثلة. وفى أمثلة ‎og al‏ يتم تنظيم تتابع نيوكليوتيد واحد موضوع الاهتمام (على سبيل المثال؛ ‎Ala‏ دمج ‎Yo‏ واحدة) والتعبير الجينى له. فى بعض التجسيمات؛ قد يتم تنظيم العديد من تتابعات النيوكليوتيد
‎١ «=‏ موضوع الاهتمام عن طريق ارتباط بروتين الدمج للاختراع بموقع ارتباط حمض نووى واحد؛ على سبيل المثال؛ قد يتم ارتباط العديد من تتابعات النيوكليوتيد موضوع الاهتمام عملياً بنفس تتابع النيوكليوتيد ‎nucleotide sequence‏ الثانى الذى يرتبط به النطاق الرابط ل ‎DNA‏ لبروتين الدمج على وجه التحديد. تتابعات النيوكليوتيد موضوع الاهتمام التى تشتمل على هذا التعدد ليست © بالضرورة هى نفسها فى أمثلة معينة. وبالتالى؛ قد يتم التعبير الجينى للعديد من منتجات الجين المختلفة تحت التحكم التنظيمى لبروتين دمج واحد.
‏فى تجسيمات خاصة؛ قد يكون منتج التعبير الجينى لتتابع النيوكليوتيد موضوع الاهتمام الذى يكون تحت التحكم التنظيمى لبروتين الدمج للاختراع هو منتج جين علامة؛ على سبيل المثال وبدون حصر؛ جزئ تألقى. قد توفر الملاحظات الكمية والنوعية فيما يتعلق بالتعبير الجينى ‎aiid ٠‏ التعبير الجينى هذا نظام لتقييم الخواص التنظيمية الخاصة لحافز تفاعل نطاق تنشيط
‏التعبير الجينى خاص أو بديل حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى. قد يتم التعبير الجينى لأى منتج تعبير جينى (على سبيل المثال؛ بروتين؛ بروتين نذير ‎precursor protein‏ وجزئ ‎RNA‏ تثبيطى) تحت التحكم التنظيمى لبروتين دمج منشط نسخى تركيبى يشتمل على حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات واحد على ‎JN‏ (و/أو حافز ‎١‏ تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل) ونطاق رابط ل ‎DNA‏ واحد على الأقل. فى ‎Ad‏ خاصة؛ قد يكون منتج التعبير الجينى تحت التحكم التنظيمى لبروتين دمج منشط نسخى تركيبى؛ بدون حصرء هو عديد ببتيد داخلى المنشأ أو أصلى الذى يتم التعبير الجينى له عادةً فى الخلية المضيفة التى فيها يتم إدخال حمض نووى مرمز لبروتين الدمج. فى أمثلة أخرى؛ قد يكون منتج التعبير الجينى تحت التحكم التنظيمى لبروتين دمج منشط نسخى تركيبى هو عديد ببتيد متغاير ‎heterologous polypeptide ٠‏ الذى لا يتم التعبير الجينى له ‎fale‏ الخلية المضيفة. على سبيل المثال وبدون حصر » قد يكون منتج التعبير الجينى تحت التحكم التنظيمى لبروتين دمج منشط نسخى تركيبى هو عديد ببتيد مشارك فى مقاومة مبيدات الأعشضاب | ‎herbicide‏ ‎resistance‏ ؛ مقاومة الفيروسات ‎virus resistance‏ ؛ مقاومة البكتيريا الممرضة ‎bacterial‏ ‎pathogen resistance‏ ؛ مقاومة الحشرات ‎insect resistance‏ ؛ مقاومة النيماتودا ‎nematode resistance Yo‏ « أو مقاومة الفطريات ‎fungal resistance‏ انظرء على سبيل
‎£Y14
“vy ‏مكف مكاي‎ VY 2.67/70 52214877 ‏المثال» براءة الاختراع الأمريكية‎ ‏قد يكون منتج التعبير الجينى تحت التحكم التنظيمى لبروتين دمج منشط نسخى‎ .1.777.47١و‎ ‏تركيبى على نحو بديل؛ على سبيل المثال وبدون حصر؛ هو عديد ببتيد مشارك فى قوة نمو النبات‎ ‏أو الإنتاج (بما فى ذلك عديدات الببتيد المشاركة فى تحمل درجات الحرارة القصوى» ظروف‎ ‏والبيئة الكيميائية)؛ أو عديد ببتيد الذى قد يتم استخدامه‎ ld ‏التربة؛ مستويات الضوء؛ مستويات‎ 0 ‏كعلامة لتحديد نبات يشتمل على السمة موضوع الاهتمام (على سبيل المثال؛ منتج جين علامة‎
قابل للاختيار؛ وعديد ببتيد مشارك فى لون البذور). تتضمن الأمثلة غير المحدودة على عديدات الببتيد التى قد تكون تحت التحكم التنظيمى لبروتين دمج منشط نسخى تركيبى يشتمل على حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات ‎٠‏ واحد على الأقل (و/أو حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل) ونطاق رابط ل ‎DNA‏ واحد على الأقل فى بعض تجسيمات الاختراع: أسيتولاكتاز ‎acetolactase synthase jt.‏ (5لم)؛ ‎ALS‏ طافرء نذائر ‎ALS precursors‏ (انظرء على سبيل المثال» براءة الاختراع الأمريكية 5..013.7549)؛ ‎EPSPS‏ (انظرء على سبيل ‎(JU‏ براءات الاختراع الأمريكية ‎CP4 EPSPS is f(T.YVO VE 5 50/14١‏ أو ‎EPSPS‏ من الفئة الثالثة؛ الإنزيمات ‎١‏ التى تعدل العملية الفسيولوجية التى تحدث فى الصانعة ‎plastid‏ ؛ متضمنة على سبيل ‎JU‏ ‏وبدون ‎jas‏ ¢ التمثيل الضوئى ‎photosynthesis‏ « وتركيب الأحماض الدهنية ‎fatty acids‏ « الأحماض الأمينية ‎acids‏ 207100 ؛ الزيوت؛ الأروتينويدات ‎arotenoids‏ ؛ التيربينويدات ‎terpenoids‏ ؛ والنشا 518+00. تتضمن ‎AEN)‏ غير المحدودة الأخرى على عديدات الببتيد التى قد تكون تحت التحكم التنظيمى لبروتين دمج منشط نسخى تركيبى فى التجسيمات الخاصة: ‎٠‏ زياكسانثين إيبوكسيداز ‎zeaxanthin epoxidase‏ ؛ كولين أكسيجيناز أحادية ‎choline‏ ‎monooxygenase‏ ؛ فيروكيلاتاز ‎ferrochelatase‏ ؛ نازع تشبع الحمض الدهنى أوميجا -؟ ‎omega-3 fatty acid desaturase‏ » سينثيتاز الجلوتامين ‎glutamine synthetase‏ ؛ إنزيمات تعديل النشا ‎starch modifying enzymes‏ ؛ عديدات الببتيد المشاركة فى تركيب الأحماض الأمينية الأساسية ‎essential amino acids‏ ؛ طليعة فيتامين ‎provitamin A A‏ ¢ ‎Yo‏ الهرمونات» توكسين ‎«Bt toxin‏ والبروتينات. تتابعات النيوكليوتيد التى ترمز الببتيدات السابقة
£Y14
تكون متاحة فى المجال؛ وقد يتم ارتباط تتابعات النيوكليوتيد هذه عملياً بموقع ارتباط محدد للنطاق الرابط ل ‎DNA‏ ليتم التعبير الجينى لها تحت التحكم التنظيمى لبروتين دمج منشط نسخى تركيبى يشتمل على حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى للنبات واحد على الأقل (و/أو حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل) ونطاق رابط ل ‎DNA‏ واحد على الأقل الذى يرتبط على وجه © التحديد بالموقع المرتبط عملياً. علاوة على ذلك؛ قد يتم تحديد تتابع نيوكليوتيد بديل موضوع ا لاهتمام ‎dl)‏ يرمز أى من عديدات الببتيد سابقة الذكر المطلوب وضعه تحت التحكم التنظيمى بواسطة أولئك الخبراء فى المجال (على سبيل ‎(JE)‏ عن طريق استنساخ الجينات عالية التماثل إلى جينات أخرى ترمز عديد الببتيد الخاص؛ أو عن طريق توليد التتابع فى بيئة افتراضية فى ضوء انحلال كودون ‎(DNA)‏ قد تكون هذه البدائل مطلوبة فى التجسيمات الخاصة؛ على سبيل ‎JU‏ لتتوافق مع استخدام الكودون المفضل للكائن الحى المضيف. بمجرد تحديد تتابع النيوكليوتيد البديل موضوع الاهتمام + قد يتم تصميم ‎[gH‏ حمض نووى لتوفير تحكم تنظيمى للتتابع ‎dad gs‏ عديد ‎Ah‏ منشط نسخى تركيبى وفقاً للاختراع» على سبيل ‎JB‏ عن طريق ارتباط تتابع النيوكليوتيد البديل موضوع الاهتمام فى جزئ الحمض النووى عملياً بموقع ارتباط معروف للنطاق الرابط ل ‎DNA‏ الموجود ‎Vo‏ داخل بروتين الدمج المنشط النسخى التركيبى الخاص الذى يتم استخدامه. فى التجسيمات الموصوفة هناء قد يتم ملاحظة زيادة مفاجئة فى التعبير الجينى لتتابع النيوكليوتيد البديل موضوع الاهتمام ‎eo)‏ سبيل ‎(JU‏ فى خلية نباتية مضيفة ‎(host plant cell‏ عندما يوجد جزئ الحمض النووى وأحد بروتينات الدمج المنشطة النسخية التركيبية الخاصة الموصوفة هنا فى خلية مضيفة فى نفس الوقت. ‎Ye‏ يتم توفير المراجع التى تم مناقشتها هنا فقط للوصف الخاص بها قبل تاريخ إيداع التطبيق الحالى. لا يوجد هنا أى شئ يمكن تفسيره بأنه إقرار بأن المخترزعون لا يحق لهم أن يؤرخوا هذا يتم تقديم الأمثلة التالية لتوضيح سمات و/أو تجسيمات خاصة معينة. لا يجب تفسير الأمثلة على أنها تحد من الوصف على السمات الخاصة أو التجسيمات الممثلة.
الأمثلة مثال ‎:١‏ تحديد حوافز تفاعل ‎Interaction Motifs‏ تنشيط تعبير جينى نباتى ‎Plant‏ ‎Transactivation‏ ‏تم تحديد سبعة بروتينات كنظائر لنطاق تنشيط التعبير الجينى 7016 (المتوالية رقم: ‎:)١‏ ‏٠ه ‎GenBank Accession) ERF2 (GenBank Accession No.
ACF57857.1) PTI4‏ ‎«(GenBank Accession No.
NP_567530.4) AtERF1 (No.
NP_199533.1‏ ‎GenBank ) DREBIA (GenBank Accession No.
CAB93940.1) ORCA2‏ ‎GenBank Accession No. )CBF1 «(Accession No.
NP_567720.1‏ 1 طلا 5 ‎.(GenBank Accession No.
NP_001105709.1) DOF1‏ ‎٠‏ شارك تتابع الحمض الأمينى لنطاق تنشيط التعبير الجينى 7016 (المتوالية رقم: ‎)١‏ فى تتابع مماثل مع مناطق منشطات استنساخ النبات المفترضة ‎oda‏ وتم استخدام التتابع 016 لتحديد موقع نطاق تنشيط التعبير الجينى داخل كل منشط. نطاقات تنشيط التعبير الجينى المحددة لبروتينات منشط النبات هذه هى: المتوالية رقم: 114(7)؛_المتوالية رقم: ¥ ‎((ERF2)‏ المتوالية رقم: ؛ ‎((AtERF])‏ المتوالية رقم: © ‎((ORCA2)‏ المتوالية رقم: ‎((DREBLIA)T‏ المتوالية رقم: ‎((CBF1) v ٠‏ و المتوالية رقم: ‎A‏ (0051). ثم؛ تم استخدام حافز التفاعل للنطاق ‎١١ esl)‏ لتنشيط التعبير الجينى ‎١/016‏ (شكل 9؛ المتوالية رقم: 4( لتحديد موقع حافز التفاعل من نطاقات تنشيط التعبير الجينى النباتى. شكل ؟ يبين محاذاة 1/016 مع نطاقات تنشيط التعبير الجينى النباتى» حيث يتم تسليط الضوء على حوافز التفاعل الجديدة. مثال 7: تعديل حوافز التفاعل المحددة لنطاقات تنشيط التعبير الجينى النباتى 7 تم تعديل حوافز تفاعل نطاقات تنشيط التعبير الجينى النباتى المحددة. تم إنتاج بدائل جديدة لحوافز التفاعل ‎Al‏ احتوت على رواسب اتصال الحمض الأمينى ‎amino acid contact‏ لحافز تفاعل النطاق الفرحى ‎١|‏ لنطاق تنشيط التعبير ‎Langlois et .VP16 ual‏ ‎Lal. (2008) J.
Am.
Chem. 506. 06‏ تم اقتراح ست رواسب اتصال حمض أمينى لنطاق تنشيط التعبير الجينى 7/016 لتتفاعل مباشرة مع ‎Tb]‏ وحدة فرعية ‎Jalal‏
لا الاستنساخ ‎TRHH‏ شكل ‎.١‏ تم إدخال أحماض أمينية داخل حوافز التفاعل لنطاقات تنشيط التعبير الجينى النباتى المحددة حديثاً لإنتاج تتابعات بديلة. افترضنا أن تعديل حوافز التفاعل لتحتوى على ست رواسب اتصال حمض أمينى محددة من حافز تفاعل 016/ للنطاق الفرعى ‎١١‏ سينتج حوافز تفاعل معدلة للمنشطات النباتية ‎plant‏ ‎activators ©‏ القادرة على التفاعل مع تنوع أكبر من عوامل الاستنساخ؛ مما يؤدى إلى مستويات أعلى من التعبير الجينى للبروتين. تعديلات ‎ERF2‏ ‏انحازت المنطقة من 5053 فى ‎ERF2‏ للنطاق الفرعى 11 لنطاق تنشيط التعبير الجينى 6 (شكل ١)؛‏ وتم تحديدها كتتابع لنطاق تنشيط التعبير الجينى النباتى ل ‎.ERF2‏ تم إدخال ‎٠‏ تعديلات فى المنطقة التى وجد أنها تقابل حافز تفاعل النطاق الفرعى ‎١|‏ لنطاق تنشيط التعبير الجينى 016/؛ من 05066 إلى 05076. تم تعديل رواسب الحمض الأمينى التى كانت مختلفة عن رواسب الاتصال الست لحافز تفاعل النطاق الفرعى اا لنطاق تنشيط التعبير الجينى ‎VP16‏ ‏أدت هذه التغييرات إلى حافز تفاعل معدل ‎exemplary modified interaction Lic‏ ل ‎of) ERF2‏ تتابع حافز تفاعل بديل) والذى يكون مماثل لذلك الذى للنطاق الفرعى ‎Il‏ لنطاق ‎١‏ تنشيط التعبير الجينى 016/.. شكل ‎JF‏ ‏تعديلات علي حوافز تفاعل 6871 /04581 ‎DOF1 ; 114, AtERF1, ORCA2,‏ تم إدخال تعديلات علي حوافز تفاعل 08571 ‎PTI4, AtERF1, ORCA2, DREBIA,‏ و 0051 المماثلة لتلك المدخلة علي ‎LERF2‏ لقد تم تعديل رواسب الحمض الأمينى للتتابعات الأصلية ‎lly‏ كانت مختلفة عن رواسب الاتصال المباشر الست لحافز التفاعل للنطاق الفرعى ‎II‏ ‎Yo‏ لنطاق تنشيط التعبير الجيني ل 7016 , وبالتالي إنتاج حوافز تفاعل مختلفة تمثيلية. تم إدخال هذه التغييرات لجعل حوافز التفاعل النبات المختلفة متماثلة ‎lo)‏ سبيل المثال؛ مماثلة وظيفياً) لتلك الخاصة بالنطاق الفرعى 1 لنطاق تنشيط التعبير الجيني 016/. التتابعات التمثيلية لحوافز التفاعل البديلة أو المعدلة؛ بالمقارنة بتتابع حافز التفاعل الأصلي للنطاق الفرعى ‎I‏ لنطاق تنشيط التعبير الجينى 016/» واردة فى الأشكال 4 -9.
١ ‏اج‎ مثال ؟ : اختبار حوافز تفاعل نطاقات تنشيط النبات في سلاظة مراسل ‎Saccharomyces‏ cerevisiae
Saccharomyces cerevisiae Reporter Strain ‏سلالة مراسل‎ تم )1 سلالة مراسل ‎Saccharomyces cerevisiae‏ لاختبار نطاقات تنشيط النبات التى © تشتمل إما على حوافز تفاعل أصلية أو بديلة. أسفر إجراء الاستنساخ ثلاثى الخطوات عن بناء ناقل تكامل الخميرة؛ 1 ا/0110-2586-1, (شكل ‎.)٠١‏ أولاً , تم تكبير قطعتين منفصلتين من ناقل مراسل ‎reporter vector‏ الخميرة ‎«SSA yeast‏ ‎«(Doyon et al. (2008) Nat. Biotechnol. 26)6(:702-8( pNorMEL1‏ من خلال ‏04. احتوت القطعة الأولى على كاسيت تعبير جينى للخميرة ‎(KanMX‏ وتم تكبيرها ‎٠‏ من ‎pNorMELT‏ باستخدام البادئات؛ ‎KanMX-For (SEQ ID NO-59)‏ ى ‎KanMX-Rev‏ ‏(المتوالية رقم: 10)» ‎Jy 1 | PY‏ تضيف مواقع التقييد 5 ‎EcoRI ; Spel,BamHI,Nhel,Pacl,Bglll,Kpnl‏ '3« علي التوالي. احتوت القطعة الثانية ‎Voth et al. (2001) Nucleic Acids ) ‏موضع الخميرة‎ J ‏متجهة للخارج‎ Allie ‏علي أذرع‎ ‎(Res. 29(12):E59-9‏ مفصولة بواسطة الأصل البكتيرى ‎bacterial origin‏ للاستنساخ ‎replication Yo‏ ؛ وتم تكبيرها بواسطة البادئات» ‎HO-For‏ (المتوالية رقم )1( ‎HO-Rev‏ ‏(المتوالية رقم: 17). تم هضم القطعتين بواسطة ‎ECORI/Spel‏ وربطهما لتوليد ‏ناقل ‎KanMX‏ يستهدف موقع ‎HO‏ قابل للاختيار. ‏ثم؛ تم تكبير كاسيت التعبير الجينى ‎MELD‏ من ‎Melcher et al. (2000) ( PMEL1&2‏ ‏247(1-2):53-61( بواسطة البادئات +0 +-1ا1/ا (المتوالية رقم: ‎MEL 1-Rev (TV‏ ‎٠‏ (المتوالية رقم: 14), واستنساخه في موقع ال ‎Kpnl‏ الخاص بناقل ‎KanMX‏ المستهدف لل ‎HO‏ القابل للاختيار. ‏أخيرا , يتم تخليق موقع رابط لبروتين إصبع الخارصين ‎(ZFP) Zinc Finger Protein‏ (يشار ‏إليه ب ‎"HAS"‏ للموقع ‎le‏ الألفة) من جديد عن طريق مورد خارجى ‎(DNA2.0,Menlo Park,‏ ‎Zinc-Finger ‏احتوي هذا الموقع علي مواقع ارتباط لبروتينات إصبع الخارصين‎ (CA) ‎£Y14
Yr
Perez et al. (2008) Nat. ) ‏البشرى‎ CCRS ‏التى تستهدف جين‎ (ZEPs) Proteins ‏باستخدام‎ PCR ‏بواسطة‎ HAS ‏تم تكبير قطعة‎ (Biotechnol. 26:808-6 (17 ‏(المتوالية رقم:‎ HAS-For-R1 ‏(المتوالية رقم: 10( و‎ HAS-For-F1 «clad ‏الواقعة ضد‎ (KanMX HO MEL 1 ‏الخاصة بناقل‎ BamHI-Pacl ‏واستنساخها في مواقع ال‎
PHO-zBG— ‏تم تسمية هذا الناقل النهائى‎ .MEL] reporter gene ‏اتجاه الجين المراسل‎ © .)٠١ ‏(شكل‎ 1011-1 ‏لتعريض الأذرع المتماثلة المحيطة لاستهداف‎ Notl ‏خطى مع‎ pHO-ZBG-MEL1 ‏تم جعل‎
Invitrogen, ) 874741 MATq 5. cerevisiae ‏وتحويله إلى سلالة‎ HO ‏موضع الخميرة‎ ‏باستخدام البروتوكول المقترح للشركة المصنعة. باختصار , تم تحبيب ؟ مل‎ (Carlsbad, CA ‏أس‎ Tris HCL ‏مل مولار‎ ٠ ) TEL ‏من مزرعة 874741 للطبقة الفاصلة؛ وغسلها فى منظم‎ Ve ‏تم‎ .(Lithium Acetate ‏مل مولار أسيتات ليثيوم‎ ٠٠١ (EDTA ‏مل مولار‎ ١ 8.٠ ‏هيدروجينى‎ ‏6851لا فى ١٠؟ ميكرو لتر محلول تحويل خميرة‎ cell pellet ‏تعليق كرية خلية الخميرة‎ sale)
Sigma-Aldrich, St. ) 026-3350 %YY.Y) yeast transformation solution 58000 ‏مجم/مل‎ +.Y ‏و‎ (Sigma-Aldrich) ‏آسيتات ليثيوم‎ Nee 00) «(Louis, MO ‏يحتوى على ؟ ميكرو جم من‎ (IX TE ‏فى‎ Stratagene, La Jolla, CA)) Sperm DNA Yo ‏دقيقة عند 57 درجة مثوية. تم تحبيب‎ 5٠0 ‏وصدمها بالحرارة لمدة‎ ¢ ad pHO-ZBG-MEL1 ‏غسلها ونموها فى وسط غنى لمدة ساعتين قبل الاختيار على‎ (Yeast cells ‏الخميرة‎ LDA
Life Technologies, Carlsbad, ) Geneticin® ‏مجم/لتر‎ ١ ‏تحتوى على‎ YPD ‏أطباق‎ ‏وتم استخدامها‎ (Geneticin® + YPD ‏تم إعادة تخطيط نسائل المقاومةعلى أطباق‎ (CA ‏لالتحويلات تالية.‎ ٠ ‏بناء كاسيت التعبير الجينى لمنشط استنساخ-270 للخميرة‎ ‏تحتوى على حافز تفاعل تنشيط التعبير الجينى النباتى لبروتين رابط‎ DNA ‏تم بناء تركيبات‎ ‏فى الإطار (0045-210). تم‎ CCRS5 Zinc Finger Binding Protein ‏لإصبع الخارصين‎ -86 ‏نقل حوافز تفاعل استنساخ النبات الأصلى والبديل الموصوف فى المتواليات أرقام:‎ ‏واستنساخها مباشرة‎ BamHI/Hindlll restriction enzyme fragment ‏كقطعة إنزيم تقييد‎ 17 Yo
١/7 ‏أعلاه).‎ (Perez et al. )2008(( CCR5-ZFP ‏تقوم بترميز نطاقات‎ All ‏في اتجاه التتابعات‎
West et al. ) 61,10 ‏استخدم كاسيت التعبير الجينى لمنشط استنساخ-270 الناتج محفز‎ ‏الخميرة‎ series vector ‏(1987))؛ واعتمد على ناقل سلسلة‎ Genes Dev. 1:1118-31 ‏احتوت الناقلات الناتجة على حوافز تفاعل تنشيط التعبير الجينى النباتى‎ .045315 yeast .CCR5-ZFP ‏الأصلية والبديلة كما هو الحال فى اندماجات الإطار مع‎ oe ‏بالإضافة إلى ذلك؛ تم تضمين ضوابط مختلفة؛ تم استخدام ضابط ناقل فارغ واثنين من‎ ‏(المتوالية‎ 561/0 VP16-CCRS ‏كاسيت التعبير الجينى لمنشط استنساخ 70-16 المختلفين‎ ‏فى الدراسة. تم دفع كل من كاسيتات التعبير الجينى‎ /01672 CCRS5-CCRS5 5 (V4 ‏رقم:‎ ‏عن طريق‎ VP-16 transcription activator ‏لمنشط الاستتساخ‎ expression cassettes ‏وتم الإنهاء بواسطة منهى. احتوى ضابط الناقل الفارغ فقط على النطاقات‎ «GALLLO ‏المحفز‎ ٠ transactivation ‏ولا يحتوى على حافز تفاعل تنشيط التعبير الجينى‎ «CCRS5-ZFP .interaction motif ‏فحص نشاط الخميرة.‎ ‏فى‎ BY4741 reporter line strain ‏تم إنماء مزارع طوال الليل من سلالة المراسل‎ ‏ميكرو جم من ناقل يحتوى على كاسيت تعبير جينى‎ ١ ‏وتم توصيل‎ «Geneticin® + ‏000لا‎ ١٠ ‏باستخدام بروتوكول تحويل خميرة قياسى فى‎ ZFP ‏لمنشط استنساخ‎ expression cassette ‏شكل 96 فتحة. تم مضاعفة كل التحويلات. تم استرداد خلايا الخميرة المتحولة فى وسط‎ (SD-Leu) leucine ‏يفتقر إلى الليوسين‎ Synthetic Dextrose medium ‏ديكستروز تركيبى‎ ‏ساعة؛ تم‎ VY ‏بعد‎ ZFP ‏لاختيار الناقل الذى يحتوى على كاسيت التعبير الجينى لمنشط استنساخ‎
Yi ‏والإنماء لمدة‎ SD-Leu ‏من مواد التحويل فى‎ ٠٠١:١ ‏تخصيب خلايا الخميرة بواسطة تخفيف‎ Yo synthetic raffinose ‏فى وسط رافينوز تركيبى‎ ٠٠١:١ ‏الخميرة‎ LDA ‏ساعة أخرى. ثم»؛ تم تخفيف‎ ‏ساعة؛ تم‎ YE ‏بعد‎ (GALL 10 ‏لإزالة ضغط المحفز‎ (SR-Leu) ‏يفتقر إلى الليوسين‎ 0 synthetic galactose ‏تكوير خلايا الخميرة؛ وتم إعادة التعليق فى وسط جالاكتوز تركيبى‎ ‏يفتقر إلى الليوسين (لا©-ا-56). عند القيم الزمنية صفرء ؟ و١ ساعات بعد حث‎ 0
MELT ‏ميكرو لتر من خلايا الخميرة لفحص‎ ٠١ ‏الجالاكتوز 081801056؛ تم جمع‎ Yo £Y14
“VA ‏ميكرو لتر ماء‎ ٠٠١ ‏ميكرو لتر من خلايا الخميرة فى‎ ٠١ ‏تم تخفيف‎ (MELD ‏فى فحص‎ ‏باستخدام مقياس‎ (OD600) ‏نانو متر‎ ٠0١0 ‏عند‎ optical density ‏وتم قياس الكثافة الضوئية‎ ‏الخميرة فى‎ WIA ‏ميكرو لتر المتبقية من‎ ٠١ ‏طيف ضوئى +50601000010071618. تم تحضين‎ ‏مل مولار حمض سيتريك‎ ١١ (NaZHPO4 ‏مل مولار‎ VV) MELT ‏ميكرو لتر منظم‎ ٠ ‏درجة مئوية. تم‎ 7١ ‏لمدة ساعة عند‎ (Sigma-Aldrich) PNPG ‏؛ ؟ مجم/مل‎ Citric 610 © ‏ميكرو لتر كربونات صوديوم 2182003. تم تقييم نشاط‎ ٠٠١ ‏وقف التفاعل عن طريق إضافة‎ 010504 ‏باستخدام صيغة تعتمد على نسبة قياسات‎ mU ‏عند 000405؛ وتم حساب‎ MEL] .(Doyon et al. (2008) Nat. Biotechnol. 26(6):702-8) ‏و0600‎ ‏الناتج من التنشيط بواسطة حوافز تفاعل‎ Mell ‏مستوى التعبير الجينى لجين المراسل‎ ‏تم مقارنة التعبير الجينى لبروتين‎ .١١ ‏تنشيط التعبير الجينى النباتى المختلفة مبين فى شكل‎ ٠ ‏الناتج من حوافز تفاعل تنشيط التعبير الجينى النباتى المختلفة هذه بضابط الناقل الفارغ‎ MEL] )١ ‏لنطاق تنشيط التعبير الجينى 016 (المتوالية رقم:‎ II ‏من النطاق الفرعى‎ Mell ‏وتنشيط‎ ‎.(SGMO VP16-CCRS5) SGMO VP16 ; (VP16(v2-CCRS) ‏المعدل مستويات تعبير‎ ERF2 (v2) ‏أنتج حافز تفاعل تنشيط التعبير الجينى النباتى‎ ‏بواسطة حافز‎ Mell ‏جحينى عالية على نحو غير متوقع؛ بالإضافة إلى ذلك؛ أدى التعبير الجينى ل‎ VO ‏تفاعل تنشيط التعبير الجينى النباتى البديل هذا إلى زيادة عن النسخة الأصلية من حافز تفاعل‎
ERF2 (v3) ‏تنشيط التعبير الجينى النباتى‎ ‏المعدل بالتعبير الجينى‎ PTI4 (V2) ‏قام حافز تفاعل تنشيط التعبير الجينى النباتى‎ ‏ومع ذلك؛‎ VP16 ‏عند مستويات مماثلة لضابط نطاق تنشيط التعبير الجينى‎ MELT ‏لبروتين‎ ‏أعلى بشكل‎ Mell ‏إلى مستويات تعبير جينى ل‎ PTI4 ‏أدت التعديلات المدخلة إلى حافز تفاعل‎ ٠٠
PTI4 (v3) ‏ملحوظ؛ بالمقارنة بحافز تفاعل تنشيط التعبير الجينى‎
AtERF1(v3), AAERF1(v2), ‏لا تؤدى حوافز تفاعل تنشيط التعبير الجينى النباتى‎
ORCA2(v3), ORCA2(v2), DOFI(v3), DOFI(v2), DREBIA(v3),
Mell ‏إلى مستويات عالية من التعبير الجينى ل‎ CBF1(v2) ; DREB1A(V2), CBF1(v3)
‎q —‏ 7 — فى فحص الخميرة؛ بالمقارنة بضوابط 016/. ومع ذلك لا تدفع حوافز ‎Je ld‏ تنشيط التعبير الجينى النباتى ‎(AtERF1, DREBIA‏ و0871 التعبير الجينى ل ‎Mell‏ فى الخميرة. لا تؤدى حوافز تفاعل تنشيط التعبير الجينى النباتى (73) ‎ORCA2‏ و(2») 0071 فقط إلى أى تعبير جينى ل ‎Mel]‏ فى فحص الخميرة. ‏° مستويات ‎MELT‏ المنتجة بواسطة نطاق تنشيط التعبير الجينى النباتى لحوافر تفاعل تنشيط التعبير الجينى ‎(v2) Stall‏ البديلة المعدلة كانت أعلى بوجه عام بالمقارنة بحوافز تفاعل تنشيط التعبير الجينى النباتى ‎(V3)‏ الأصلية فى فحص الخميرة ‎Mell‏ حافز تفاعل تنشيط التعبير الجينى النباتى المعدل الوحيد الذى لم يدفع التعبير الجينى ل ‎Mell‏ فى فحص الخميرة كان حافز تفاعل ‎(V2)‏ 0071. لا ينتج حافز تفاعل تنشيط التعبير الجينى النباتى هذا أى تعبير جينى ل ‎.yeast assay ‏فحص الخميرة‎ SMELL | ٠ ‏مثال 4: وظيفة حوافز تفاعل نطاقات التنشيط النباتى فى تبغ يحتوى على تركيب مراسل‎ ‏إصبع الخارصين‎ DNA ‏يشتمل على نطاق رابط ل‎ ‏تركيب مراسل 089897ام.‎ ‏(المتوالية‎ 26 DNA ‏تم تخليق ثمان تكرارات ترادفية لتتابع بولى نيوكليوتيد النطاق الرابط ل‎
IDT, ( ‏من جديد‎ (67; Yokoi et al. (2007) Mol Ther. ‏رقم:15)11(:1917-23‎ ٠ ‏المضافة إلى النهايات 70 و؟” لتسهيل الاستنساخ. تم‎ Sacll ‏مع مواضع‎ (Coralsville, ‏ها‎ ‏على التوالى فى ناقل دخول‎ (TA ‏استنساخ نطاق ارتباط 826-26 بالكامل (المتوالية رقم:‎ ‏موجود مسبقاً يحتوى على عناصر التعبير الجينى النباتى المرغوبة. تم نقل مواقع‎ Gateway®
Arabidopsis | ‏على قطعة ١ا©58؛ واستنساخها فوراً عكس اتجاه المحفز‎ 8X-Z6 ‏ارتباط‎ ‎AtAct2 promoter v2; An et al. (1996) Plant J. 10:107-( thaliana actin-2 ‏ا‎ ٠ ‏وعلى التوالى؛ تم‎ backbone vector ‏الوحيد فى الناقل الأساسى‎ Sacll ‏باستخدام موقع‎ )1 ‏فى هذا الناقل‎ (GUS; Jefferson (1989) Nature 342:837-8) gus ‏استنساخ الجين‎ ‏الوحيدة؛ مع‎ Neol [Sac ‏باستخدام مواقع‎ Y— ‏أكتين‎ Al thaliana ‏تحت السيطرة المباشرة للمحفز‎ ‏(إطار-‎ Atu ORF23 37018 ‏مكوناً كودون البدء. تم استخدام‎ Neol ‏للموقع‎ ATG ‏كودون‎
=« - ‎YY‏ مفتوح للقراءة» منطقة غير مترجمة ؟”؛ طلب البراءة الأوربى رقم 777497 أ١) ‎slay‏ ‏الاستنساخ. ‏ناقل التحويل النهائى ‎final transformation vector‏ « 01059897 (شكل ‎«(VY‏ ‏كان النتيجة لربط ‎Gateway®‏ مع ‎Jil‏ تخصيص يحتوى على محفز يوبيويتين - ‎ubiquitin—‏ ‎Promoter v2 (Callis et al. (1990) J.
Biol. ) A. thaliana ٠١10 |‏ 0110لا ‎At‏ ‎1:(Chem. 265:12486-93)‏ جين فوسفينوثريسين آسيتيل ترانسفيراز ‎phosphinothricin‏ ‎pat v3 (Wohlleben et al. (1988) Gene 70:25-( acetyl transferase gene‏ (37):: إطار ‎١-‏ مفتوح للقراءة ‎(A. tumefaciens‏ كاسيت واصم قابل للاختيار لمنطقة غير مترجمة ¥’) ‎AtuORF1 3014 v3 (Huang et al. (1990) J.
Bacteriol.‏ ‎٠‏ 172:1814-22( لاختيار النبات. تم التأكيد على ناقل التحول النهائى من خلال التتابع» وتحويله إلى ‎.(Invitrogen, Carlsbad, CA) LBA4404 (A. tumefaciens abu.‏ ‎J sail‏ المتوسط ب ‎Agrobacterium‏ للتبغ بواسطة ‎.PDAB98IT‏ ‏لإنتاج حالات نبات مراسل معدلة وراثياً ‎transgenic reporter plant‏ تم تحضين أقراص ورقية ‎(Yau ١(‏ مقطوعة من نباتات تبغ ‎Petit Havana tobacco plants‏ فى مزرعة ‎Vo‏ طوال الليل من سلالة ‎(LBA4404 A. tumefaciens‏ إيواء بلازميد 00/859897 النمو إلى ‎٠.١ ~ OD600‏ نانو مترء؛ التلطيخ الجاف ‎blotted dry‏ على ورقة مرشح معقمة ‎sterile filter‏ ‎paper‏ « ثم الوضع على وسط ‎Phytotechnology Labs, Shawnee Mission, ( MS‏ ‎(KS‏ و١٠‏ جم/لتر سكروز 5101058 مع إضافة ‎١‏ مجم/لتر حمض إندول خليك ‎indoleacetic‏ ‏0 و١‏ مجم/لتر بنزيل أمينو بيورين ‎benzyamino purine‏ فى أطباق 60 ‎x‏ 0 مم )2 ‎٠‏ أقراص لكل طبق) مغلقة ب ‎Karlan Research Products Corporation, ) Nescofim®‏ ‎(Cottonwood, AZ‏ بعد 58 ساعة من الزراعة المشتركة؛ تم نقل الأقراص الورقية إلى نفس الوسط مع ‎YOu‏ مجم/لتر سيفوتاكسيم ‎ycephotaxime‏ © مجم/لتر ‎.BASTA®‏ بعد ‎§=Y‏ ‏أسابيع ؛ تم نقل الشتلات إلى وسط ‎MS‏ مع ‎Yor‏ مجم/لتر سيفوتاكسيم و١٠‏ مجم/لتر ‎BASTA®‏ ‏فى ‎sad PhytaTrays™‏ إضافية 7-؟ أسابيع قبل جمع الورق والتحليل الجزيئى ‎molecular‏ ‎.analysis Yo‏ ‎£Y14‏
— \ - تحليل رقم النسخة 5 ‎PTU‏ لحالات المراسل عزل ‎PCR DNA‏ تم جمع نسيج نبات تبغ معدلة ورائياً ‎Transgenic tobacco‏ 1 من شتلات نامية حديثاً ومجمدة بالتجفيد ‎Labconco, Kansas City, ) lyophilized‏ ‎(MO‏ لمدة يومين على الأقل فى أطباق جمع 47 فتحة ‎(Qiagen, Valencia, CA)‏ ثم تم © عزل ‎DNA‏ باستخدام مجموعة استخلاص 46 فتحة ™ ‎DNEasy‏ (918980)؛ وفقاً لتعليمات الشركة المصنعة. تم استخدام طاحن أنسجة ‎Garcia ) Model 2-968 Kleco™‏ ‎(Manufacturing, Visalia, CA‏ لتمزيق الأنسجة ‎tissue disruption‏ عزل ‎DNA‏ الجنوبى. تم جمع نسيج نبات تبغ معدل وراثياً من شتلات حديثة النمو ومجفدة ‎(Labconco, Kansas City, MO)‏ لمدة يومين على الأقل فى أنابيب مخروطية ¥ مل ‎(Eppendorf) ٠‏ ثم تم ‎DNA Jie‏ باستخدام مجموعة استخااص ‎DNEasy™ Plant Mini‏ ‎(Qiagen)‏ وفقاً لتعليمات الشركة المصنعة. تم استخدام طاحن أنسجة ‎Model 2-96A‏ ‎(Garcia Manufacturing) Kleco™ tissue pulverizer‏ لتمزيق النسيج. تحديد كمية ‎DNA‏ تم تحديد كمية ‎DNA‏ الجينومى الناتج باستخدام مجموعة فحص ‎Quant-‏ ‎.(Molecular Probes, Invitrogen, Carlsbad, CA) iT™ PicoGreen® DNA‏ ثم ‎١‏ استخدام خمس معايير ‎DNA‏ محددة الكمية تتراوح من ‎٠١‏ نانو جم/ميكرو لتر إلى ‎٠١7٠©‏ نانو جم/ميكرو لتر (مخففة بالتسلسل) لإنشاء منحنى قياسى. تم أولاً تخفيف العينات بتخفيفات ‎Ven)‏ ‏أو ‎70:١‏ لتكون ضمن النطاق الخطى للفحص؛ وتم تعيين تركيزات ‎DNA‏ الجينومى وفقاً لتعليمات الشركة المصنعة. ثم تم تسجيل الوميض باستخدام قارئ أطباق ‎Biotek, ) Synergy2™‏ ‎(Winooski, VT‏ تم تقدير تركيز ‎DNA‏ الجينومى من منحنى قياسى محسوب من تصحيحات ‎Yo‏ الوميض الأساسية. باستخدام ‎TE‏ أو ‎ele‏ ثم تم تخفيف ‎DNA‏ إلى تركيز مشترك ‎٠١‏ نانو جم/ميكرو لتر ل ‎PCR‏ باستخدام معالج سائل آلى ‎—automated liquid handler‏ ‎.(Qiagen)Biorobot3000™‏ ترك ‎DNA‏ لتحليل ‎Southern‏ غير مخفف. تقدير رقم النسخة. تم تحليل حالات معدلة وراثياً مفترضة للتعقيد المتكامل باستخدام فحص مسبار تحلل مائى ‎DNA hydrolysis probe assay‏ متعدد ‎Jil‏ لفحص ‎Applied ( TagMan®‏ ‎£Y14‏
‎A \ —‏ — ‎(Biosystems, Carlsbad, CA‏ تم تقدير رقم النسخة لمدخل الترانسجين ‎transgene insert‏ باستخدام بادثات محددة التتابع ومسابر لكل من ترانسجين ‎pat‏ وجين مرجعى لتبغ ذاتى ‎pal cendogenous tobacco‏ (فنيل الانين أمونيوم ‎phenylalanine ammonium ju!‏ ‎(GenBank Accesion No. 85008199 ¢ lyase‏ تم تصميم فحوصات لكلا الجينات ٠ه‏ باستخدام 2.0 ‎Roche Applied Science, ) LightCycler® Probe Design Software‏ ‎(Indianapolis, IN‏ تم تقدير ‎PCR‏ الزمن الحقيقى لكلا الجينات باستخدام نظام ‎.(Roche Applied Science) LightCycler®480‏ للتكبير؛ تم تحضير خليط ‎Roche Applied ) LightCycler®480 Probes Master‏ 6 ) بتركيز نهائى 17 فى ‎٠١‏ ميكرو لتر تفاعل متعدد الحجم يحتوى على ‎١.4‏ ميكرو ‎Vo‏ ميلار لكل بادئ و7١‏ ميكرو مولار لكل مسبار. جدول ‎.١‏ تم إجراء تفاعل تكبير من خطوتين بامتداد عند ‎0A‏ درجة مئوية لمدة ‎YA‏ ثانية مع الحصول على الوميض ‎fluorescence‏ تم تشغيل كل العينات فى ثلاث نسخ؛ وتم استخدام قيم ‎Ot‏ المتوسطة لتحليل كل عينة. تم إجراء تحليل بيانات ‎PCR‏ للزمن الحقيقى باستخدام برنامج ‎(LightCycler®‏ من خلال الوحدة الكمية النسبية ‎relative quant module‏ « ويعتمد على طريقة ‎AACE‏ تم تضمين عينة طلاناو من ‎Vo‏ معاير أحادى النسخة لمعايرة النتائج. تم تحديد حالة المعاير أحادى النسخة سابقاً بواسطة تحليل ‎(Southern‏ وتم التأكيد على أنه يحتوى على مدخل واحد للجين ‎pat‏ ‏جدول ‎.١‏ تتابعات البادئات والمسابر المستخدمة فى كل من مقايسات مسبار التحلل ‎pal spat (HP) hydrolysis probe Sl)‏ حاتمة الفلورسنت ‎fluorescent epitope‏ لكل مسبار كانت مختلفة مما سمح بإجراء الفحوصات فى نفس الوقت كتفا عل متعدد . ‎il‏ كع ,| ٍّ ض ,1 ض ‎ACAAGAGTGGATTGATGATCTAGAGAGGT‏ ‎Algal) | TQPATS‏ رقم: 19( ‎teal‏ ‎teal TQPATA‏ ‎١ CTTTGATGCCTATGTGACACGTAAACAGT‏ ‎£Y14‏
‎i ne‏ | | | ا ‎CY5-‏ ‎GGTGTTGTGGCTGGTATTGCTTACGCTGG-‏ ‎BHQ2 TQPATF‏ ‎Q‏ (المتوالية ‎١ tad)‏ 0( مسبار ‎Cy5‏ ‎TACTATGACTTGATGTTGTGTGGTGACTGA‏ ‎TQPALS‏ | (المتوالية رقم: ‎(YY‏ بادئ ‎GAGCGGTCTAAATTCCGACCCTTATTTC‏ ‎TQPALA‏ | (المتوالية رقم: ‎(VY‏ بادئ -الال ]6 ‎AAACGATGGCAGGAGTGCCCTTTTTCTATC‏ ‎AAT-BHQ1‏ مسبار ‎TQPALFQ‏ | (المتوالية رقم: ‎6FAM (Ve‏ ‎PTU PCR.‏ تم فحص حالات منخفضة النسخة على التوالى بواسطة ‎PCR‏ للوحداث النسخية النباتية السليمة ‎plant transcriptional units‏ (ل1). باستخدام البادئات ‎Blu636‏ ‏(المتوالية رقم: ‎BIUG3T 5 (Vo‏ (المتوالية رقم: ‎(VT‏ أدى التكبير الصحيح إلى منتج 3.7 كيلو بايت يتكون من ‎Z6-Act2/GUS/AtORF23 PTU‏ (/لا. 7 60). تم استخدام ‎Phusion®‏ ‎GC Master Mix (New England Biolabs, Beverley, MA) ٠‏ مع ظروف التفاعل التالية: 4 درجة مثوية لمدة ‎Vo‏ ثانية؛ متبوعاً ب ‎٠0‏ دورة عند ‎AA‏ درجة مئوية لمدة ‎٠١‏ ثوانى؛ ‎TV‏ ‏درجة مثوية لمدة ‎Fe‏ ثانية؛ ‎VY‏ درجة مئوية لمدة دقيقتين؛ والتمديد النهائى عند ‎VY‏ درجة مثوية لمدة ‎٠١‏ دقائق. بالإضافة إلى تفاعل ‎PTU PCR‏ المفصل سابقاً؛ تكبير الجين الذاتى» ‎chs‏ ‏(سينثاز كالكون ‎chalcone synthase‏ ؛ ‎«(Genbank Accession No.
FJ969391.1‏ & ‎٠‏ تضمينه ‎Load‏ لإثبات جودة قوالب ‎DNA‏ الجينومية. تم تضمين بادئات أمامية 30115 (المتوالية رقم: ‎(VY‏ وعكسية 30115 (المتوالية رقم: ‎(VA‏ فى التفاعل؛ والذى أنتج منتج تكبير ‎Yor‏ زوج
“AE ‏ميكرو لترء؛ بتركيز نهائى 000 ميكرو مولار لبادئات الترانسجين‎ ٠١ ‏قاعدة. تم استخدام تفاعلات‎ endogenous reference ‏ميكرو مولار للجين المرجعى الذاتى‎ ١.” ‏و‎ 118059606 primers .gene
DNA ‏لكل عينة؛ تم هضم © ميكرر جم‎ Southern Analysis ‏التحليل الجنوبى‎
Asel (New England «restriction enzyme ‏جينومى جيداً بواسطة إنزيم التقييد‎ 0 ‏المهضوم بواسطة‎ DNA ‏درجة مئوية طوال الليل. تم تركيز‎ TY ‏بالتحضين عند‎ Biolabs) «Quick Precip ™ Solution (Edge Biosystems, Gaithersburg, MD) ‏الترسيب مع‎ ‏ميكرو لتر‎ Yo ‏الجينومى فى‎ DNA ‏تعليق‎ sale) ‏وفقاً لبروتوكل الشركة المصنعة المقترح. ثم تم‎ ‏ماء عند 15 درجة مئوية لمدة ساعة. تم تحميل العينات معادة التحميل على 960.8 جل آجاروز‎ ‏7؛ وتم معالجتها بالرحلان الكهربائى‎ TAE ‏محضر فى منظم‎ 6 gel ٠ ‏منظم‎ Adal ‏تم غمر‎ .17 TAE ‏فولت/سم فى‎ ٠١١ ‏طوال الليل بمعدل‎ electrophoresed ‏مولار كلوريد‎ +. NaOH ‏مولار هيدروكسيد صوديوم‎ ١١7( denaturation buffer ‏تمسخ‎ ‏لأس‎ Tris—HCl ‏دقيقة؛ متبوعاً بالغمر فى منظم معادلة )0.+ مولار‎ Vo ‏لمدة‎ (NaCl ‏صوديوم‎ ‏دقيقة.‎ Te ‏مولار كلوريد صوديوم) لمدة‎ ٠.5/)7.5 ‏هيدروجينى‎ ‏عن طريق منظم‎ Nylon membranes ‏إلى أغشية نايلون‎ DNA ‏تم إجراء نقل قطع‎ Yo ‏طوال الليل خلال الجل على غشاء‎ 20X SSC passively wicking buffer ‏التفتيل السلبى‎ (Millipore, Billerica, MA) ‏معالج‎ Immobilon ™-NY+ transfer membrane (Js; 48); ‏ومناشف‎ chromatography paper wick ‏باستخدام فتيلة ورقة تحليل كروماتوجرافى‎ ‏تشابكها مع‎ 2X SSC ‏بعد النقل؛ تم غسل الغشاء لفترة وجيزة بواسطة‎ .paper towels ‏درجة مثوية‎ Av ‏والخبر فى فراغ عند‎ (Stratagene, LaJolla, CA) Stratalinker® 1800 ٠ ‏لمدة ؟ ساعات.‎ pre-hybridization solution ‏تم تحضين البقع مع محلول ما قبل التهجين‎ ‏فى زجاجات دوارة‎ Ashe ‏لمدة ساعة عند 15 درجة‎ (PerfectHyb™ plus, Sigma-Aldrich)
Robbins Scientific Model hybridization incubator ‏باستخدام جهاز تحضين للتهجين‎ ‏تحتوى‎ PCR ‏تم تحضير مسابر من قطعة‎ (Robbins Scientific, Sunnyvale, CA) 400 Yo £Y14
—Ao— ‏استخلاص جل‎ de sens ‏باستخدام‎ PCR amplicon ‏على تتابع الترميز ككل. تم تنقية آمبليكون‎
Random RT ‏من خلال مجموعة التوسيم‎ [032P]Dctp ‏وعنونته ب‎ (Qiagen) Qiaex ١١© ‏درجة‎ To ‏تم تهجين البقع طوال الليل عند‎ .)50818906086, La Jolla, CA) Prime-iT® ‏مباشرة إلى المحلول المهجن مسبقاً إلى عدد‎ 060810560 probe ‏مثوية وتم إضافة مسبار مشوب‎ ‏تقريباً. بعد التهجين؛ تم غسل البقع بالتعاقب عند 15 درجة مئوية‎ mde ١-ةعقب ‏؟ مليون‎ 0 ‏تم تعريض البقع لتخزين شاشات‎ yal ‏دقيقة.‎ 5٠ ‏لمدة‎ SDS 960.1١ [SSC Xv.) ‏بواسطة‎ ‏؛ وتصويرها باستخدام نظام‎ storage phosphor imaging screens ‏تصوير الفوسفور‎ ‏تم تأكيد حالات التكامل أحادى النسخة‎ Molecular Dynamics™ Storm™ 860 ‏تصوير‎ ‏الحقيقية عن طريق تحديد نطاق تهجين واحد.‎ ‏توليد نباتات مراسل 12 متماثل الجينات‎ ٠١ ‏نسخة‎ 7-١( ‏منها قليلة التعقيد‎ YE ‏وجد‎ (BASTA® ‏نبات مقاوم ل‎ ©١ ‏تم توليد إجمالى‎ ‏لعدد النسخ. من هذه‎ hydrolysis probe ‏على أساس تحليل مسبار التحلل المائى‎ (pat ‏من‎ ‏سليم؛ كما هو محدد بواسطة تحليل 06. بعد تحليل‎ PTU ١8 ‏الحالات منخفضة التعقيد؛ أظهر‎ ‏سليمة؛ أحادية النسخة‎ PTU ‏؛ تم اختيار حالتى‎ Southern blot analysis ‏البقعة الجنوبية‎ ‏وانمائها للنضج فى الدفيئة؛ حيث تم السماح لها بالتلقيح الذاتى ©5617-0011081. ثم تم جمع بذور‎ yo ‏؛ متبوعاً بعمليتى شطف بماء‎ bleach ‏مادة تبييض‎ 967٠0 ‏تعقيم السطح (لمدة © دقائق فى‎ (T1
Phytotechnology ) MS ‏معقم)؛ وانباتها على وسط‎ « distilled water rinses ‏مقطر‎ ‎PhytaTrays™ ‏فى‎ sucrose ‏جم/لتر سكروز‎ 5١ ‏و‎ (Labs, Shawnee Mission, KS ‏تم اختيار‎ pat ‏بعد فحص التلقيح عن طريق تحليل عدد نسخ‎ (Sigma, St. Louis, MO) ‏؛‎ greenhouse ‏إنمائها حتى النضج فى الدفيئة‎ chomozygous ‏نباتات 11 متماظة الزيجوت‎ Yo ‏والسماح لها بالتلقيح الذ اتى. ثم تم جمع بذور 12 تعقيم السطح. وانباتها كما هو موصوف‎ ‏سابقاً؛ واستخدامها لتوليد نباتات مراسل لاختبار تنشيط التعبير الجينى النباتى 1804م‎ transactivation testing
Transcription ‏لمنشط استتساخ‎ Expression Constructs ‏تركيبات تعبير جينى‎ ‏نبات‎ ZFP ‏نباتى ل‎ Activator Yo £Y14
“AY ‏تم بناء تركيبات منشط استتساخ- 250 نبات تحتوى على حافز تفاعل تنشيط تعبير‎ ‏جينى نباتى بديل أو أصلى. تم تركيب حوافز تفاعل تنشيط تعبير جينى نباتى (سواء بدائل أصلية‎
DNA2.0, Menlo ( ‏للاستتساخ من جديد‎ BamHI /Sacl ‏ومعدلة) محاطة بمواقع إنزيم التقييد‎
BamHI/Sacl Zaki ‏حوافز تفاعل تنشيط التعبير الجينى النباتى على‎ Jo ‏تم‎ (Park, CA 701601 6] ( 26 ‏إصبع الخارصين‎ DNA ‏واستنساخها فى نفس اتجاه النطاق الرابط ل‎ fragment © ‏وحيدة موجودة فى الناقل الأساسى‎ BamHI [Sac] ‏أعلاه) فوراً باستخدام مواقع‎ cal. (2007) ‏الموجود. عند اكتمال هذه الخطوة؛ تم وضع تركيبات منشط استتساخ-210‎ Gateway® Entry ‏مدمج مع حافز تفاعل استتساخ‎ 26 DNA ‏(تحتوى على نطاق رابط لبروتين إصبع الخارصين‎ ‏التأسيسى (محفز /1/ا/ا05 72؛‎ Cassava Vein Mosaic Virus ‏نباتى) تحت سيطرةٍ محفز‎ 04723 ‏والإنهاء ب‎ (Verdaguer et al. (1996) Plant Mol. Biol. 31:1129-39 ٠
Final ‏تم استخدام كاسيت ناقلات التحول النهائى‎ A. tumefaciens ‏من‎ 314
Gateway® ‏إ(جدول ؟)؛ ناتجة من الربط المتوسط ب‎ 00 vectors ‏مع ناقل تخصيص يحتوى على محفز يوبيكويتين-؟‎ (Invitrogen, Carlsbad, CA) ‏72؛ إطار -؛ ؟ القراءة المفتوح‎ At ‏(محفز 013لا‎ A. thaliana ubiquitin-3 promoter
Callis et al. (1995) Genetics, 139(2):921-39))/hygromycin ١ phosphotransferase ١١ (HPTII v1; Gritz et al. (1983) Gene 25(2-3):179- ‏لاختيار‎ (Au 04724 3°UTR v2) °F ‏منطقة غير مترجمة‎ «88)/A. tumefaciens ‏النيات.‎ جدول ‎WY‏ تركيبات منشط استنساخ ‎«ls ZEP transcription activator constructs‏ ‎Yo‏ مختبرة فى تبغ. يوفر معرف التتابع تتابع ‎DNA‏ لحافز تفاعل تنشيط التعبير الجينى النباتى والذى تم دمجه بالبروتين الرابط لإصبع الخارصين 26 ويتم تعبيره الجينى فى الناقل الثنائى. عط سد — ‎£Y14‏
‎A 7 _‏ _ قم التركيب وتتابع حافز تفاعل تنشيط التعبير الجينى النبات حافز تفاعل تنشيط التعيد رقم التركيب وتتابع حافز تفاعل تنشيط التعبير الجينى النباتى ست ‎pDAB10788‏ اشكل ‎٠‏ شكل ‎YY‏ ‎pDAB106274 AtERF1‏ 2 المتوالية رقم: ‎AY‏ المتوالية ‎AQ tad)‏ ‎pDAB10788‏ أاشكل ‎yo‏ شكل ؛٠‏ ‎pDAB106275 ORCA2‏ 3 المتوالية رقم: 8 المتوالية رقم: 960 ‎pDAB10788‏ اشكل ‎٠١‏ شكل ‎Yo‏ ‎pDAB106276 Drebla‏ 4 المتوالية رقم: 4 ‎IN‏ المتوالية ‎١ tad)‏ 9 ‎pDAB10788‏ اشكل ‎Vv‏ شكل ‎٠7‏ ‎pDAB106277 Dof1‏ المتوالية رقم: ‎AT‏ المتوالية ‎tad)‏ 7 9 8 هم اشكل ‎YA‏ شكل ‎YV‏ ‎pDAB106278 ERF2‏ 6 المتوالية رقم: ‎A ٠‏ المتوالية ‎AY tad)‏ 8ه أشكل ‎va‏ شكل ‎YA‏ ‎pDAB106279 Cbfl‏ 7 المتوالية رقم: ‎Ao‏ المتوالية ‎ay tad)‏ ‎pDAB10627‏ شكل ‎A)‏ ‎VP16‏ ‏2 المتوالية رقم: 9 7 ناقل فارخ- إصبع خارصين ‎pDAB10623 EC‏ فقط (بدون حافز تفاعل شكل ‎7١‏ ‏8 ‏تم تأكيد الناقل الثنائى النهائى من خلال تتابع ‎(DNA‏ وتحويله إلى سلالة ‎A.‏ ‎LLBA4404 (Invitrogen) (tumefaciens‏ بالإضافة إلى ذلك؛ تم تضمين ناقل 7ت ‎A p.‏ لم ‎Ua‏ تحكم
—AA— ‏والذى يحتوى على النطاق الرابط لإصبع الخارصين ولا يتضمن‎ (YY ‏ر(شكل‎ 8 ‏منشط يتألف من حافز تفاعل تنشيط التعبير الجينى. فى هذا التركيب» تم وضع النطاق الرابط‎
AtuMas ‏التأسيسى (محفز‎ A. tumefaciens MAS ‏لإصبع الخارصين تحت سيطرة محفز‎ 0823 ‏و4 0.47 79.))» وإنهائها ب‎ 0.0VF.ATY 48.0 Vue ‏البراءة الأمريكية أرقام‎ 4 ‏بالإضافة إلى ذلك؛ يحتوى الناقل على إطار قراءة مفتوح-؛ ؟‎ ./. tumefaciens ‏من‎ 3’UTR © hygromycin phosphotransferase ‏.خراا‎ [A. thaliana Y— ‏محفز يوبيكريتين‎ ‏لاختيار النبات.‎ TY ‏يستخدم كاسيت المنطقة غير المترجمة‎ tumefaciens ‏النبات؛ تم‎ ZEP ‏تحتوى على تركيبات منشطة لاستنساخ‎ Al ‏لإنتاج حالات النبات‎ reporter tobacco plants ‏مقطوعة من نباتات تبغ مراسل‎ (Yau V) ‏تحضين أقراص ورقية‎
Invitrogen, ( LBA4404 ‏طوال الليلء‎ A. tumefaciens ‏فى مزرعة من سلالة‎ 120 ١١ ‏إيواء واحدة من‎ oF ‏بلازميد الواردين فى جدول‎ ١١ ‏إيواء واحدة من‎ (Carlsbad, CA ‏تلطيخها ببقعة جافة على ورقة‎ cae ٠١١ - 00600 ‏إنمائه إلى‎ oF ‏بلازميد الواردين فى جدول‎
Phytotechnology Labs, Shawnee Mission,) MS ‏مرشح معقمة؛ ثم وضعها على روسط‎ ‏مجم/لتر حمض إندول خليك و١ مجم/لتر بنزيل أمينو‎ ١ ‏جم/لتر سكروز مع إضافة‎ ٠١و‎ (KS ‏فى أطباق 70760 مم )0 أقراص لكل طبق) مغلقة ب‎ 56022800100 purine ‏بيورين‎ ٠ ‏بعد‎ .(Karlan Research Products Corporation, Cottonwood, AZ) Nescofim® ‏مجم/لتر‎ You ‏ساعة من الزراعة المشتركة؛ تم نقل أقراص ورقية إلى نفس الوسط مع‎ £A ‏بعد 2-7 أسابيع؛ ثم‎ hygromycin ‏مجم/لتر هيجرومايسين‎ Vo scephotaxime ‏سيفوتاكسيم‎ ‏مجم/لتر سيفوتاكسيم و١٠ مجم/لتر هيجرومايسين فى‎ You ‏مع‎ MS ‏نقل شتلات إلى وسط‎
US ‏أسابيع إضافية؛ متبوعاً بجمع الأوراق وتحليل التعبير الجينى ل‎ 7-7 sad ‏"57لا72 18لا0‎ ٠ ‏من حالات النباتات لكل الست عشر تركيبات المنشطة لاستنساخ‎ 70-7١ ‏تم توليد إجمالى‎ ‏النيات.‎ ‎gus ‏ل‎ Expression Analysis ‏تحليل التعبير الجينى‎
Transgenic tobacco plant ‏تم جمع نسيج نبات تبغ معدلة وراثياً‎ MRNA ‏عزل‎ ‏على‎ flash frozen ‏حديثاً ومجمدة بالوميض‎ growing plantlets ‏من شتلات نامية‎ tissue © £Y14
-04- تلج جاف فى أطباق جمع 16 فتحة ‎(Qiagen)‏ .4 تم ‎RNA Jie‏ باستخدام مجموعة استخلاص 41 فتحة ‎«(Qiagen) RNEasy®‏ وفقاً لتعليمات الشركة المصنعة. تم استخدام طاحن أنسجة ‎(Garcia Manufacturing) Model 2-96A Kleco™‏ لتمزيق الأنسجة. تحديد كمية ‎RNA‏ تم تحديد كمية ‎MRNA‏ الناتجة باستخدام مقياس الطيف الضوئى ‎(Thermo Scientific, Wilmington, DE) ©‏ تم إفراغ كل خلية بواسطة ؛ ميكرو لتر ‎slo‏ ‏خالى من ‎RNase‏ قبل التحميل وتحديد كمية ؛ ميكرو لتر من العينات غير المخففة. تم تقدير تركيز ‎MRNA‏ من برنامج 8000 ‎(NanoDrop™‏ باستخدام طريقة قياس الحمض النووى ‎RNA‏ ‏القياسى. تم تخفيف ‎MRNA‏ يدوياً بواسطة ماء ‎JA‏ من ‎RNase‏ إلى - ‎AY‏ نانو جم/ميكرو لثر. ‎IK‏ تحضير ‎cDNA‏ تم تحضير ‎CDNA‏ من ‎MRNA‏ مخفف باستخدام مجموعة ‎(Qiagen, Carlsbad, CA) Quantitect® RT‏ باتباع تعليمات الشركة المصنعة. تم استخدام ‎١‏ ميكرو جم من إجمالى ‎MRNA‏ فى كل تفاعل. عند اكتمال التفاعل؛ تم تخزين ‎CDNA‏ ‏عند ‎Yeo‏ درجة مثوية حتى تم اكتمال التحليل. ‎RT-PCR.‏ تم تحليل حالات مختارة على هيجرومايسين ‎hygromycin‏ لمستويات نسخة جين ‎gus‏ باستخدام فحصين مسبار تحلل مائى ‎DNA‏ كل منها يكون نظير لفحوصات ©180/80. تم تقدير مستويات حالة الاستقرار ل ‎MRNA‏ 905 لكل من الحالات الفردية باستخدام بادثات خاصة بالتتابع ومسبار. تم معايرة ‎MRNA‏ باستخدام مستوى حالة استقرار ‎MRNA‏ لجين مرجعى لتبغ ذاتى ‎BYEEF « endogenous tobacco reference gene‏ ‎(Genbank Accession No.
GI:927382)‏ تم تصميم فحوصات لكل من الجينات ‎٠‏ باستخدام ‎.LightCycler® Probe Design Software 2.0 (Roche Applied Science)‏ تم تقييم الوقت الحقيقى ‎PCR‏ لكل الجينات باستخدام نظام 480 ‎.LightCycler®‏ لتكبير ‎gus‏ ‏تم تحضير خليط ‎LightCycler® 480 Probes Master‏ عند تركيز نهائى ‎#١‏ فى ‎٠١‏ ميكرو لتر حجم تفاعل متعدد يحتوى على ‎١.4‏ ميكرو مولار لكل بادئ و07 ميكرو مولار مسبار. جدول ؟. ‎£Y14‏
‎q «=‏ — تم إجراء تفاعل تكبير ثنائى الخطوة بامتداد عند 07 درجة مثوية لمدة ‎fv‏ ثانية مع الحصول على ومضان. تم تشغيل كل العينات غير مخففة بثلاث نسخ؛ وتم استخدام قيم ‎Ct‏ ‏المتوسطة لتحليل كل عينة. لتكبير ‎(BYEEF‏ تم تحضير خليط ‎LightCycler® 480 Probes‏ ‎Master‏ بتركيز نهائى ل فى ‎٠١‏ ميكرو لتر تفاعل متعدد الحجم يحتوى على ‎YO‏ ميكرو © مولار من كل بادئ (جدول ؟) و ‎v0)‏ ميكرو مولار ‎UPL‏ مسبار ‎Roche Applied ) ١١9‏ ©6666086). تم إجراء تفاعل تكبير ‎AWE‏ الخطوة بامتداد عند ‎0A‏ درجة مئوية لمدة ‎Ail YO‏ مع الحصول على ومضان. تم تشغيل كل العينات مخففة ‎٠٠١:١‏ بثلاث نسخ؛ وتم استخدام قيم ‎Ct‏ ‏المتوسطة لتحليل كل عينة. تم إجراء تحليل لبيانات ‎POR‏ للزمن الحقيقى باستخدام برنامج ‎LightCycler®‏ باستخدام الوحدة الكمية النسبية؛ ويعتمد على طريقة ‎LAACE‏ ثم تم مقارنة ‎Ye‏ مستويات التعبير الجينى النسبية من بين علاجات منشط الاستنساخ النباتى المختلفة. شكل ‎YA‏ ‏جدول ؟. التتابعات والبادئات والمسابر المستخدمة فى كل من فحوصات مسبار التحليل المائى ‎(HP) hydrolysis probe‏ ل ‎gus‏ و ‎.BYEEF‏ ‎FE il‏ ,| ٍّ ض " ; ‎AGACAGAGTGTGATATCTACCC‏ ‎TQGUSS‏ (المتوالية رقم: ‎(Yo‏ بادئ ‎CCATCAGCACGTTATCGAAT‏ ‎TQGUSA‏ (المتوالية رقم: ‎(YT‏ بادئ ‎6FAM-CACAAACCGTTCTACTTTACTGGCTT-‏ مسبار ‎BHQI TQGUSFQ‏ (المتوالية رقم: ‎6FAM (VY‏ ‎AGGCTCCCACTTCAGGATG‏ ‏8710119 | (المتوالية رقم: ‎(YA‏ بادئ ‎CACGACCAACAGGGACAGTA‏ ‏8710119 | (المتوالية رقم: ‎(V4‏ بادئ ‎£Y14‏
‎q \ —‏ — النتائج. شكل 9؟ يبين النسبة الناتجة لمستويات نسخة ‎gus‏ لحوافز تفاعل تنشيط التعبير الجينى النباتى المختلفة؛. حسب المعايرة بواسطة مستويات التعبير الجينى الذاتى ل +]87. تم مقارنة تنشيط جين 9005 من حوافز تفاعل ‎interaction motifs‏ تنشيط التعبير الجينى النباتى ‎plant‏ ‎o‏ 2007 المختلفة بضابط ‎Jil‏ فارغ ‎cempty vector‏ وحافز تفاعل النطاق الفرعى اا لنطاق تنشيط التعبير الجينى ل ‎WWPL6‏ أظهرت العديد من حوافز تفاعل تنشيط التعبير الجينى النباتى مستويات عالية بشكل غير متوقع للتعبير الجينى بالمقارنة بالنطاق الفرعى ‎Il‏ لمنشط التعبير الجينى 516/. على سبيل ‎(JU‏ قامت حوافز تفاعل تنشيط التعبير الجينى النباتى ‎(PTI4, DREBIA, 2‏ و 6871 بتعبير جينى ل ‎gus MRNA‏ أكثر من النطاق الفرعى ‎١١‏ ‎٠‏ لنطاق تنشيط استنساخ 016/. اختلفت مستويات ‎MRNA‏ المنتجة بواسطة حافز تفاعل تنشيط التعبير الجينى النباتى للبديل المعدل (72) بالمقارنة بالنسخة الأصلية (73) بين حوافز تفاعل تنشيط التعبير الجينى النباتى. النسخة المعدلة لحافز تفاعل تنشيط التعبير الجينى النباتى ‎ERF2‏ أنتجث ‎gus Mra‏ أكثر بشكل ملحوظ عن حافز تفاعل التتابع الأصلى ‎JERF2‏ وبطريقة مماثلة؛ أنتج حافز تفاعل ‎١‏ تنشيط التعبير الجينى النباتى 6811 المعدل ‎MRNA‏ أكثر من حافز تفاعل التتابع الأصلى ‎(Lid) a, .CBF1‏ أدت التعديلات المدخلة فى حافز تفاعل تنشيط التعبير الجينى ‎PTI4‏ ‎DREB14‏ إلى إنتاج مستويات ‎(Ji gus MRNA‏ بالمقارنة بالنسخ الأصلية من حوافز تفاعل تنشيط التعبير الجينى النباتى 0114© , ‎.DREB14‏ ‏مثال #: تفاعل وظيفة حافز فى تبغ يحتوى على تركيب مراسل ‎GALA‏ ‎ADL Y.‏ تبغ تحتوى على تركيب مراسل يتألف من نطاق رابط ل ‎GAL4‏ ‏تركيب المراسلء ‎(pGalGUS‏ يبنى باستخدام الاستراتيجية الموصوفة أدناه. يتم تخليق ست تكرارات ترادفية لتتابع رابط للخميرة 6/814 ومناطق مفساح ‎LS) bp YY spacer regions‏ هو موصوف فى 10:397-401 ‎(Baleja et al. (1997) J.
Biomol.
NMR‏ جديد ‎(IDT)‏ مع إضافة مواقع ‎Sacll‏ لتسهيل الاستنساخ. يتم نقل مواقع ‎6X Gald Lis)‏ على قطعة ‎£Y14‏
‎q \ —‏ — ‎Sacll‏ ويتم استخدامها لاستبدال مواقع ارتباط ‎Z6‏ من ناقل دخول ‎€Ntry vector‏ موجود مسبقاً والذى يتم هضمه أيضاً بواسطة ١ا©58.‏ تضع خطوة الاستنساخ ‎cloning step‏ هذه مواقع ارتباط 4 مباشرة عكس اتجاه محفز 2 ‎Arabidopsis Actin‏ مما يدفع التعبير الجينى لجين 5. ناقل التحول النهائىء ‎pGalGUS‏ (شكل ‎oY ٠‏ ينتج من تفاعل تحويل ‎Gateway®‏ مع 0 ناقل تخصيص يحتوى على كاسيت تعبير جينى لجين 081 محفز ب ‎Arabidopsis‏ ‏0 , والذى يستخدم لاختيار النبات. يتم تأكيد ناقل التحول النهائى من خلال التتابع؛ ويتم تحويله إلى ‎.LBA4404 (Invitrogen) «A. tumefaciens ali.‏ تحول للتبغ متوسط ب ‎Agrobacterium‏ براسطة ‎PGALGUS‏ ‏يتم عمل نباتات مراسلة معدلة وراثياً باستخدام البروتوكول الموصوف سابقاً. انظر "تحول ‎٠‏ التبغ المتوسط ب ‎Agrobacterium‏ بواسطة ‎.'PDAB9897‏ ‏تحليل رقم النسخة 5 ‎PTU‏ لحالات المراسل يتم توليد نباتات معدلة وراثياً مقاومة ل ‎(BASTA®‏ بعدد نسخ منخفض التعقيد وتحديدها على أساس تحليل رقم نسخة ©1801/80. للحالات منخفضة التعقيد؛ تظهر مجموعة فرعية ‎PTU‏ سليم؛ كما هو محدد بواسطة تحليل ‎PCR‏ يتم تحليل هذه الحالات أكثر من خلال تحليل ‎١‏ بقعة جنوبية. بعد تحليل البقعة الجنوبية ‎Southern blot analysis‏ ؛ يتم اختيار حالة ‎PTU‏ ‏سليمة؛ بنسخة مفردة واحدة على الأقل وانماءه حتى النضج فى الدفيئة؛ ويسمح له بالتلقيح الذاتى. يتم جمع بذور 11 ‎PRY‏ سطحهاء وانباتها ‎٠.‏ بعد فحص التلقيح من خلال تحليل رقم نسخة ‎(pat‏ ‏يتم اختيار نباتات 11 متماثلة الزيجوت؛ إنماءها حتى النضج فى الدفيثة؛ والسماح لها بالتلقيح الذاتى. ثم يتم جمع بذور 12؛ تعقيم سطحهاء؛ وانباتها (كما هو موصوف سابقاً)؛ ويتم استخدامها ‎٠‏ _ لتوليد نباتات مراسلة لتنشيط الاختبار. تركيبات تعبير جينى منشطة لاستنساخ ‎GALS‏ النبات يتم بناء تركيبات منشطة لاستنساخ ‎GALS‏ النبات تحتوى على ‎Bla‏ تفاعل تنشيط التعبير الجينى لنبات بديل أو أصلى. يتم تعديل تركيبات التعبير الجينى المنشطة لاستنساخ ‎ZEP‏ النبات الموصوفة فى مثال ؛ (تركيبات التعبير الجينى لمنشط استنساخ نباتى ل ‎ZEP‏ نبات") عن طريق ‎£Y14‏
سمو إدخال تتابع بولى نيوكليوتيد بروتين رابط ل ‎GALA‏ بدلاً من تتابع بولى نيوكليوتيد ‎polynucleotide sequence‏ البروتين الرابط لإصبع الخارصين ‎Zinc Finger Binding‏ ‎Protein‏ يتم إدخال تتابع بولى نيوكليوتيد نطاق رابط ل ‎DNA‏ 614 محسن بنبات أحادى الفلقة ‎(Keegan et al. (1986) Science 231)4739(:699-704( hemicot plant‏ ‎Ya oo‏ من تتابع بولى نيوكليوتيد البروتين الرابط لإصبع الخارصين كقطعة ‎Neol BamHI‏ عند اكتمال هذه الخطوة؛ يتم وضع تركيب منشط لاستتساخ ‎GALS‏ تحت سيطرة محفز ‎Cassava‏ ‎Vein Mosaic Virus‏ التأسيسىء وانهاءه ب 31014 ‎ORF23‏ من ‎A. tumefaciens‏ تكتمل ناقلات التحول الثنائى النهائية ‎Final binary transformation vectors‏ « ناتجة من تحول ‎Gateway®‏ بواسطة ناقل تخصيص يحتوى على كاسيت ‎Arabidopsis —Hptll‏ ‎Ubiquitin)‏ لاختيار النبات. يتم تأكيد ناقل التحول النهائى من خلال التتابع؛ وتحويله إلى سلالة ‎.(Invitrogen) LBA4404 (A. tumefaciens‏ لإنتاج حالات نبات تحتوى على تركيب منشط استنساخ-6/1-4؛ يتم استخدام بروتوكول التحول المؤقت ‎transient transformation protocol‏ الموصوف فى مثال ‎Lf‏ يتم توليد إجمالى ‎0-7٠١‏ ؟ حالة للنبات لكل من تركيبات منشط استنساخ ‎GALS‏ الست ‎de‏ ‎Vo‏ تحليل التعبير الجينى ل ‎gus‏ ‏يتم تحليل حالات مختارة على هيجرومايسين لمستويات نسخة جين 9005 باستخدام فحصين مسبار تحلل مائى ل ‎DNA‏ يتم تقدير مستويات ‎Ala‏ الاستقرار ل ‎MRNA‏ وناو لكل حالة فردية باستخدام بادئات محددة التتابع ومسبار. يتم معايرة ‎MRNA‏ لكل حالة باستخدام مستوى حالة الاستقرار ل ‎MRNA‏ لجين مرجعى لتبغ ذاتى؛ على سبيل المثال؛ ‎BYEEF‏ يتم ‎٠‏ تصميم فحوصات لكل الجينات باستخدام البروتوكول الموصوف فى مثال 4 . يتم إجراء تحليل بيانات ‎PCR‏ للزمن الحقيقى باستخدام برنامج ‎LightCycler®‏ باستخدام وحدة الكمية النسبية ‎relative quant module‏ ؛ ويعتمد على طريقة ‎LAACE‏ يتم مقارنة مستويات التعبير الجينى النسبية لتركيبات المنشط المختلفة. تشير النتائج إلى أن حوافز تفاعل تنشيط التعبير الجينى النباتى والبدائل المصممة لحوافز تفاعل تنشيط التعبير الجينى النباتى هذه يمكن استخدامها كمنشطات © استنساخ؛ ويمكن دمجها مع بروتين ارتباط ‎GALA‏ للتنشيط النسخى للجين. ‎£Y14‏
‎q ¢ —‏ — مثال 27 تفاعل وظيفة حافز فى تبغ يحتوى على تركيب مراسل ‎TAL‏ ‎ADL‏ تبغ تحتوى على تركيب مراسل يتألف من نطاق ارتباط ‎TAL‏ ‏تركيب ‎(pTalGUS (Jubal‏ يبنى باستخدام الاستراتيجية الموصوفة أدناه. يتم تخليق ‎A‏ ‏تتابعات تكرار ترادفى ‎TATATAAACCTNNCCCTCT)‏ (المتوالية رقم: 349)) مأخوذة من © تتابع الارتباط التوافقى لجينات قابلة للتحريض بواسطة 1/4853 ‎ews‏ نطاق ‎UPA DNA‏ ‎(Kay ©] al. (2009) Plant J. 59)6(:859-71(‏ من جديد ‎(IDT)‏ مع إضافة مواقع ‎586١١‏ لتسهيل الاستنساخ. يتم نقل مواقع ارتباط ‎8X UPA‏ على قطعة ١ا580؛‏ ويتم استخدامها لاستبدال مواقع ارتباط 26 من ناقل دخول موجود مسبقاً والذى يتم هضمه أيضاً بواسطة ‎Sach‏ ‏تضع ‎shad‏ الاستتساخ هذه مواقع ارتباط ‎UPA‏ مباشرة عكس اتجاه محفز ‎Arabidopsis Actin‏ ‎2٠‏ مما يدفع التعبير الجينى لجين 9015. ناقل التحول النهائى» ‎pGalGUS‏ (شكل ‎(TY‏ ينتج من تفاعل تحويل ‎Gateway®‏ مع ناقل تخصيص يحتوى على كاسيت تعبير جينى لجين 081/محفز ‎Arabidopsis 00‏ والذى يستخدم لاختيار النبات. يتم تأكيد ناقل التحول النهائى من خلال التتابع؛ ويتم تحويله إلى ‎.LBA4404 (Invitrogen) «A. tumefaciens ali.‏ تحول للتبغ متوسط ب ‎Agrobacterium‏ براسطة ‎PTALGUS‏ ‎yo‏ يتم عمل نباتات مراسلة معدلة وراثياً ‎Transgenic reporter plants‏ باستخدام البروتوكول الموصوف سابقاً. انظر "تحول التبغ المتوسط ب ‎Agrobacterium‏ بواسطة ‎."pDAB9897‏ ‏تحليل رقم النسخة 5 ‎PTU‏ للحالات المراسلة. يتم توليد نباتات معدلة وراثياً» مقاومة ل ‎(BASTA®‏ برقم نسخة منخفض التعقيد وتحديدها ‎٠‏ باستخدام تحليل رقم نسخة ‎Vl.
TagMan®‏ منخفضة التعقيد». تظهر مجموعة فرحية ‎PTU‏ ‏سليم؛ كما هو محدد بواسطة تحليل ‎PCR‏ يتم تحليل هذه الحالات أكثر من خلال تحليل بقعة جنوبية. بعد تحليل البقعة الجنوبية؛ يتم اختيار حالة ‎PTU‏ سليمة؛ بنسخة مفردة واحدة على الأقل وانما ‎ae‏ حتى النضج فى الدفيئة ويسمح لها بالتلقيح الذاتى. يتم جمع بذور 11 تعقيم سطحهاء وانباتها. بعد فحص التلقيح من خلال تحليل رقم نسخة ‎pat‏ يتم اختيار نباتات 11 متماثلة
-ه4- الزيجوت؛ إنماءها حتى النضج فى الدفيئة؛ والسماح لها بالتلقيح الذاتى. ثم يتم جمع بذور 12؛ تعقيم سطحهاء وإنباتها (كما هو موصوف سابقاً)؛ ويتم استخدامها لتوليد نباتات مراسلة لاختبار المنشط. تركيبات تعبير جينى منشطة لاستتنساخ ‎TAL‏ النبات 2 يتم بناء تركيبات منشطة لاستنساخ ‎TAL‏ النبات تحتوى على حافز تفاعل تنشيط التعبير الجينى لنبات بديل أو أصلى. يتم تعديل تركيبات التعبير الجينى لمنشط استنساخ 250 النبات الموصوفة فى مثال ؛ عن طريق إدخال تتابع بولى نيوكليوتيد بروتين ارتباط ‎TAL‏ بدلاً من تتابع بولى نيوكليوتيد البروتين الرابط لإصبع الخارصين. يتم تخليق ‎١7.5‏ تكرار ‎TAL‏ المطلوبة لارتباط ‎DNA‏ من جديد؛ ودمجها مع تتابع تموضع نووى ‎Van ) Zea mays Opaque-2 J‏ ‎et al. (2004) Metabolic Engineering 6:101-8 ٠‏ 806008810). يستخدم تتابع كل نطاق أحماض أمينية ‎amino acids‏ مختلفة عند الرواسب المتغيرة (الموضع ‎(VY 5 ١١‏ لإملاء أمر الارتباط ب ‎(DNA‏ كما هو متوقع للتتابع التوافقى ‎Boch et al. )2009( .UPA-box‏ ‎Science 326(5959):1509-12‏ يتم إدخال تتابع بولى نيوكليوتيد نطاق رابط ل ‎TAL‏ ‎DNA‏ محسن بنبات أحادى الفلقة بدلاً من تتابع بولى نيوكليوتيد البروتين الرابط لإصبع الخارصين ‎١‏ كقطعة ‎.Ncol/BamHI‏ عند اكتمال هذه الخطوة؛ يتم وضع تركيب منشط لاستنساخ ‎TAL‏ تحت سيطرة محفز ‎«ill Cassava Vein Mosaic Virus‏ وانهاءه ب 310114 ‎ORF23‏ من ‎LAL tumefaciens‏ تكتمل ناقلات التحول النهائية؛ من تحول ‎Gateway®‏ بواسطة ناقل تخصيص يحتوى على كاسيت (.51901003-1101ل ‎Arabidopsis‏ لاختيار النبات. يتم تأكيد ناقل التحول النهائى من خلال التتابع؛ وتحويله إلى سلالة ‎LBA4404 (A. tumefaciens‏ ‎.(Invitrogen) ٠‏ لإنتاج حالات نبات تحتوى على تركيب منشط استنساخ-181 نبات؛ يتم استخدام بروتوكول التحول المؤقت الموصوف فى مثال 4. يتم توليد إجمالى ‎Alla 70-7١‏ للنبات لكل من تركيبات منشط استنساخ ‎TAL‏ الست عشر. تحليل التعبير الجينى ‎Expression Analysis‏ ل ‎.gus‏ qe ‏يتم تحليل حالات مختارة على هيجرومايسين لمستويات نسخة جين 9005 باستخدام‎ ‏وناو لكل‎ MRNA ‏يتم تقدير مستويات حالة الاستقرار ل‎ DNA ‏فحصين مسبار تحلل مائى ل‎ ‏باستخدام مستوى حالة‎ MRNA ‏فردية باستخدام بادئات محددة التتابع ومسبار. يتم معايرة‎ ls ‏لجين مرجعى لتبغ ذاتى؛ على سبيل المثال؛ ]]87. يتم تصميم‎ MRNA ‏الاستقرار ل‎ ‏فحوصات لكل الجينات باستخدام البروتوكول الموصوف فى مثال 4 . يتم إجراء تحليل بيانات‎ © ‏باستخدام وحدة الكمية النسبية؛ ويعتمد‎ LightCycler® ‏للزمن الحقيقى باستخدام برنامج‎ PCR ‏على طريقة أل. يتم مقارنة مستويات التعبير الجينى النسبية لتركيبات المنشط المختلفة.‎ ‏قائمة التتابع‎
Dow Agrosciences, LLC >١١١<
Li,Jianquan ٠٠
Petolino, Joseph
Blue, Ryan
Evans, Steve
PLANT ‏تنشيط التعبير الجينى للنبات‎ INTERACTION MOTIFS ‏حوافز لتفاعل‎ <VY o> ‏واستخدامها‎ TRANSACTIVATION ١٠١ (P10810US ‏709ا69643-79)‎ >١3١< ٠١٠ >١ا١<‎
Voge ‏نسخة البراءة‎ >١7.< ١ >7٠<
Ye ‏<ااا>‎ 0 ٠
PRT >؟١١<‎
—qy— herpes simplex virus ‏فيروس الهربس البسيط‎ <YYY> ١ <u>
Gly Met Thr His Asp Pro Val Ser Tyr Gly Ala Leu Asp Val Asp Asp
Vo ٠١ 2 ١ o
Phe Glu Phe Glu ‏ماك‎ Met Phe Thr Asp Ala Leu Gly lle Asp Asp Phe
Yo Yo Ye.
Gly Gly
Y <YY.>
YY ‏<ااا>‎ 0٠
PRT >؟١١<‎
Arabidopsis thaliana >١١ ١<
Y ><
Asn Asp Ser Glu Asp Met Leu Val Tyr Gly Leu Leu Lys Asp Ala Phe
Vo ٠١ 2 ١ ١١
His Phe Asp Thr Ser Ser Ser Asp Leu Ser Cys Leu Phe Asp Phe Pro
Yo Yo Ye.
Ala
Y <Y\V.>
4 A— ؛١‎ <YW\ >
PRT <vyy>
Solanum tuberosum <Y\y> ‎<¢ou> 0‏ ب ‎Cys Leu Thr Glu Thr Trp Gly Asp Leu Pro Leu Lys Val Asp Asp Ser‏ ‎Vo ٠١ 2 ١‏ ‎Glu Asp Met Val lle Tyr Gly Leu Leu Lys Asp Ala Leu Ser Val Gly‏ ‎Yo Yo Ye.
Trp Ser Pro Phe Ser Phe Thr Ala Gly ٠ 2 Yo ¢ <YV.>
YY <YW>
PRT <vyy>
Arabidopsis thaliana >< \o § <u>
Cys Phe Thr Glu Ser Trp Gly Asp Leu Pro Leu Lys Glu Asn Asp Ser
Vo ٠١ 2 ١
Glu Asp Met Leu Val Tyr Gly lle Leu Asn Asp Ala Phe His Gly Gly
‎Yo Yo Ye.‏ ‎<YY.>‏ ه ‎7١ <YW>‏ ‎PRT <vyy>‏ ‎Catharanthus roseus <Y\y> ©‏ <> 0 ‎Phe Asn Glu Asn Cys Glu Glu lle lle Ser Pro Asn Tyr Ala Ser Glu‏ ‎Vo ٠١ 2 ١‏ ‎Asp Leu Ser Asp lle lle Leu Thr Asp lle Phe Lys Asp Gln Asp Asn‏ ‎Yo Yo ١ A‏
Tyr Glu Asp Glu vo 1 <YY.>
YY <YW>
PRT <yyy> ١١
Arabidopsis thaliana <Y\y>
T <g>
Gly Phe Asp Met Glu Glu Thr Leu Val Glu Ala lle Tyr Thr Ala Glu
Vo ٠١ 2 ١
Nam
Gln Ser Glu Asn Ala Phe Tyr Met His Asp Glu Ala Met Phe Glu Met
Yo Yo Ye.
Pro Ser Leu Leu Ala Asn Met Ala Glu Gly Met 2 Yo ‏لا‎ <YY.> ©
YV >”ا١ا<‎
PRT <vyy>
Arabidopsis thaliana <Y\y> ‏<م.ء> لا‎
Glu GIn Ser Glu Gly Ala Phe Tyr Met Asp Glu Glu Thr Met Phe Gly ٠
Vo ٠١ 2 ١
Met Pro Thr Leu Leu Asp Asn Met Ala Glu Gly
Yo ٠١
A <YY.>
YY ‏<ااا>‎ ١
PRT >؟١١<‎
Zea mays >"١7<
A ><
Ser Ala Gly Lys Ala Val Leu Asp Asp Glu Asp Ser Phe Val Trp Pro
-١.١- ١١ oe ° ١
Ala Ala Ser Phe Asp Met Gly Ala Cys Trp Ala Gly Ala Gly Phe Ala
Yo Yo Ye.
Asp 4 <Y\V.> ° ١١ >”١ا١ا<‎
PRT >؟١١<‎ herpes simplex virus ‏فيروس الهربس البسيط‎ >” ١< q <g>
Asp Asp Phe Glu Phe Glu GIn Met Phe Thr Asp ٠ ٠١ 2 ١ ٠١ >7٠<
YY >”١ا١ا<‎
PRT >؟١١<‎
Arabidopsis thaliana >< \o ٠١ <ga>
Asp Ala Phe His Phe Asp Thr Ser Ser Ser Asp ٠١ 2 ١
YY >”٠<
-١ ١,
Ye >”١ا١<‎
PRT >؟١١<‎
Solanum tuberosum <Y\y>
VY >..<
Asp Asp Ser Glu Asp Met Val lle Tyr Gly Leu Leu Lys Asp © ٠١ 2 ١ ١١ >”٠< >”١ا١<‎
PRT >؟١١<‎
Arabidopsis thaliana <y\yy> ٠ ١١ >..<
Glu Asn Asp Ser Glu Asp Met Leu Val ° ١ ٠١ >”7٠<
Yo <YVY> Yo
PRT <vyy>
Catharanthus roseus <Y\y>
VY >..<
Glu Asp Leu Ser Asp lle lle Leu Thr Asp
١, oe ° ١
Ye >”٠<
Yo >”١١<
PRT >؟١١<‎
Arabidopsis thaliana >< ‏م‎ ‎VE >..<
Glu Asn Ala Phe Tyr Met His Asp Glu Ala Met Phe Glu Met Pro
Vo ٠١ 2 ١
Yo <Y\V.> 4 ‏<ااا>‎ 0٠
PRT >؟١١<‎
Arabidopsis thaliana >١١ ١<
Yo ‏<..ء؛>‎ ‎Asp Glu Glu Thr Met Phe Gly Met Pro o ١ ١ ٠1١ >”٠< ١١ >”ا١ا<‎
PRT >؟١١<‎
Zea mays >"١7<
-١ ٠1١ >..<
Glu Asp Ser Phe Val Trp Pro Ala Ala Ser Phe Asp " 2 ١ ‏ود الك د‎ ١١ ‏<اا”ا>‎ 5
PRT >؟١١<‎ ‏اصطناعى‎ >"؟١<‎ <YY.>
VERF2 1 ‏تنشيط التعبير الجينى بديل‎ Glas ‏حافز تفاعل‎ <YYY> >
MISC FEATURE > ١< (£)--(%) <YYY>
His J Glu ‏يمثل‎ Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE >< ١٠١ (V)--(Y) >” 77<
Thr ‏أو‎ Gln Jig Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE <vyy\>
-١.ه-‎ )4(..)4( <YYY>
Ser J Met ‏يمثل‎ Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE <vyy\> )١(..0( <YYY> oo
Ser ‏أو‎ Thr ‏يمثل‎ Xaa <vYY>
VV <¢vn>
Asp Asp Phe Xaa Phe Asp Xaa Xaa Phe Xaa Asp ٠١ 2 ١
YA ‏سن للك‎ Yo
YY >”١ا١ا<‎
PRT >؟١١<‎ ‏اصطناعى‎ >"؟١<‎ <YY.>
VERF2 2 ‏حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل‎ <YYY> <YY.>
MISC FEATURE <vyy\> (Y)--(Y) <YYY>
Ala J Asp ‏يمثل‎ Xaa <YYY> yore <VY.>
MISC FEATURE <YY\> (£)--(%) <YYY>
His J Glu ‏يمثل‎ Xaa <YYY> <YY.> ‏م‎ ‎MISC FEATURE <YY\> )1(..)1( ><
Glu ‏أر‎ Asp ‏يمثل‎ Xaa <YYY> <VY.>
MISC FEATURE <YYy> ٠ )0..00( <YYY>
Thr ‏أو‎ Gln ‏يمثل‎ Xaa <YYY> <VY.>
MISC FEATURE <YY\> )4(..)4( <YYY> ١
Ser ‏أو‎ Met ‏يمثل‎ Xaa >77 7< <VY.>
MISC FEATURE <YY\> (0 0.) ‏ل‎ <YYY>
-١ ‏ل‎ ‎Ser ‏أو‎ Thr ‏يمثل‎ Xaa >” 77 <
YA >.
Asp Xaa Phe Xaa Phe Xaa Xaa Xaa Phe Xaa Asp ٠١ 2 ١ ٠١ >ا٠<‎ 5
YY >”١ا١ا<‎
PRT >؟١١<‎ ‏اصطناعى‎ >"؟١<‎ <YY.>
VERF2 3 ‏حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل‎ >< ٠ <YY.>
MISC FEATURE <vyy\> (Y)--(Y) <YYY>
Glu ‏أر‎ Asp ‏يمثل‎ Xaa <YYY> <YY.> ١١
MISC FEATURE <vyy\> (£)--(%) <YYY>
His J ,Asp, Glu ‏يمثل‎ Xaa <YY¥> <YY.>
- ١م‎
MISC FEATURE >؟؟١<‎ )1(..)6( <YYY>
Glu ‏أر‎ Asp ‏يمثل‎ Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE <YY\y> ‏ه‎ ‎)0..00( <YYY>
Thr ‏أو‎ Gln Jig Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE <YY\> )4(..)4( <YYY> Ye
Met J Ala, Val, lle, Leu ‏يمثل‎ Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE <YY\> )5(..)5( <YYY> Yo
Tyr ‏أو‎ ,Phe, Trp ‏يمثل‎ Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE <YY\> (0 0.) ‏ل‎ <YYY>
-١.4-
Pro ‏أو‎ ,Ser, Thr, Asn, GIn, Cys, Gly ‏يمثل‎ Xaa ><
V4 >..<
Asp Xaa Phe Xaa Phe Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Asp ٠١ 2 ١
Yo >ا٠<‎ 0 ١١ >”١ا١ا<‎
PRT >؟١١<‎ ‏اصطناعى‎ >"؟١<‎ <YY.>
VERF2 4 ‏حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل‎ >< ٠ <YY.>
MISC FEATURE <vyy\> (Y)--(Y) <YYY>
Glu § ,Asp Jia Xaa <YYY> o <YY.>
MISC FEATURE <vyy\> (£)--(%) <YYY>
Glu ‏أو‎ His, Arg, Lys, Asp ‏يمثل‎ Xaa <YYY> yy. <YY.>
MISC FEATURE <YY\> )1(..)1( <YYY>
Glu ‏أر‎ Asp ‏يمثل‎ Xaa <YYY> <YY.> ©
MISC FEATURE <YY\> (V)--(Y) >” 77<
Pro J ,Ser, Thr, Asn, Gln, Cys, Gly, Tyr ‏يمثل‎ Xaa >١7 3< <YY.>
MISC FEATURE <YYy> ٠ (A)--(A) <YYY>
Trp ‏أو‎ ,Ala, Val, lle, Leu, Met, Phe, Tyr ‏يمثل‎ Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE <YY\> 0 0 <TYY> Ye
Trp ‏أو‎ ,Ala, Val, lle, Leu, Met, Phe, Tyr ‏يمثل‎ Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE <YY\> (Ye).o(Y +) >< £Y14
-١١١-
Pro J ,Ser, Thr, Asn, Gln, Cys, Gly, Tyr ‏يمثل‎ Xaa >77 3<
Yo ><
Asp Xaa Phe Xaa Phe Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Asp a ° ١
YY >ا٠<‎ © ١١ >”١ا١ا<‎
PRT >< ‏اصطناعى‎ >"؟١<‎ >
VERF2 5 ‏حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل‎ <YYY> <YY.>
MISC FEATURE <vyy\> (Y)--(Y) <YYY>
Glu § Ala, Asp Jia Xaa <YYY> Yo <YY.>
MISC FEATURE <vyy\> (£)--(%) <YYY> amino acid ‏أى حمض أمينى‎ Jia Xaa <YYY> £Y14
-١١"- <YY.>
MISC FEATURE <vyy\> )1(..)1( <YYY>
Glu ‏أر‎ Asp ‏يمثل‎ Xaa <YYY> <YY.> ©
MISC FEATURE <vyy\> (V)--(Y) >” 77< amino acid ‏أى حمض أمينى‎ Jia Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE <YY\> 1. (A).-(M) <YYY>
Ser ‏أو‎ Ala, Val, lle, Leu, Met, Phe, Tyr, Trp ‏يمتل‎ Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ )5(..)5( <YYY> ١
Ser ‏أو‎ Ala, Val, lle, Leu, Met, Phe, Tyr, Trp ‏يمتل‎ Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (0 ..)١ ‏ل‎ <YYY> amino acid ‏يمثل أى حمض أمينى‎ Xaa <YYY>
YY >..<
Asp Xaa Phe Xaa Phe Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Asp
Yo ° ١
YY >ا"٠١<‎ oo
VY >”١ا١ا<‎
PRT >< ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.>
VERF2 6 ‏تنشيط التعبير الجينى بديل‎ Glas ‏_حافز تفاعل‎ <YYY> ٠
YY >..<
Asp Asp Phe His Phe Glu Thr Met Phe Ser Asp
Yo ° ١
YY <Y\V.>
Ye ‏<ااا>‎ ١
PRT >< ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.>
VPTL 1 ‏حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل‎ <YYY>
-١١6- <VY.>
MISC FEATURE >؟١<‎ (Y)..(Y) ><
Ser J Phe ‏يمتثل‎ Xaa <YYY> <YY.> ‏م‎ ‎MISC FEATURE <vy\> (°).-(°) ><
Glu J Asp Jie Xaa <YYY> <VY.>
MISC FEATURE >< ٠ )1(..)1( ><
Met J Gln ‏يمثل‎ Xaa >77 7< <VY.>
MISC FEATURE <vy\> )0..00( <YYY> ‏م‎ ‎Val J Met Jig Xaa >77 7< <VY.>
MISC FEATURE <vy\> )5(..)5( <YYY>
-١١-
Tyr ‏يمثل 008 أو‎ Xaa >77 7< <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (0 ١(..)١ ( <YYY>
Leu ‏أر‎ Thr Jig Xaa <YYY> o©
YY >..<
Asp Asp Xaa Glu Xaa Xaa Xaa lle Xaa Gly Xaa Leu Lys Asp a ° ١
Y¢ >”٠<
Ye ‏<ااا>‎ 0٠
PRT >< <2١؟١>‏ اصطناعى <YY.>
VPTI4 2 ‏حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل‎ <YYY> <YY.> ١١
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (7)--(Y) <YYV> amino acid ‏أى حمض أمينى‎ Jig Xaa >777< <YY.>
-١١1-
MISC FEATURE >؟١<‎ (°).-(°) ><
Glu J Asp Jie Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE <yvy> ‏ه‎ ‎)1(..)1( <YYY> amino acid ‏أى حمض أمينى‎ Jig Xaa >777< <YY.>
MISC FEATURE <vy\> (V)oo(Y) <YYY> OY.
Met J ,Ala, Val, lle, Leu ‏يمثل‎ Xaa <YY¥> <YY.>
MISC FEATURE <vy\> (A).-(M) <YYY> amino acid ‏يمثل أى حمض أمينى‎ Xaa <YYY> Vo <YY.>
MISC FEATURE <vy\> )5(..)5( <YYY>
Tyr ‏أو‎ ,Phe, Trp ‏يمثل‎ Xaa <YYY>
-١١/- <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (0 ..)١ ‏ل‎ <YYY> amino acid ‏أى حمض أمينى‎ Jig Xaa >777< <YY.> ©
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (0 ١(..)١ ( <YYY> ‏أى حمض أمينى‎ Jig Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE <YY\> 1. (\Y)--("Y) <YYY> amino acid ‏أى حمض أمينى‎ Jig Xaa >777< <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (Y¥)..(\Y) >< ٠١ ‏أى حمض أمينى‎ Jig Xaa <YYY> ‏<م.> ءا‎
Asp Asp Xaa Glu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Asp a ° ١
-١١ ‏م‎ ‎Yo <Y\.>
VY >”١ا١ا<‎
PRT <vyy> ‏اصطناعى‎ <YVY> <YY.> ©
VPTIA 3 ‏حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل‎ <YYY> <YY.>
MISC FEATURE <vy\> (Y)..(Y) ><
Ser JPhe ‏يمتل‎ Xaa <YY¥> ٠ <YY.>
MISC FEATURE <vy\> )1(..)1( ><
Glu J Asp ‏يمثل‎ Xaa <YYY> <YY.> Yo
MISC FEATURE <vy\> (V)--(Y) <YYY>
Met J 60 Jig Xaa <YYY> <YY.>
-١١4-
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (A).-(M) <YYY>
Val J Met ‏يمثل‎ Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE <YYy> o (3)-.(3) <vYY>
Tyr ‏يمثل 008 أو‎ Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (0 ..)١ ‏ل‎ >< 0٠
Leu J Thr ‏يمثل‎ Xaa >١7 77<
Yo ><
Asp Asp Xaa Glu Phe Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Asp
Yo ° ١ 2١ >ا٠ا<‎ Yo
VY >”١ا١ا<‎
PRT >< ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.> yt
VPTIA 4 ‏حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل‎ <YYY> <YY.>
MISC FEATURE <vy\> (Y)..(Y) >< amino acid ‏يمثل أى حمض أمينى‎ Xaa <YYY> © <YY.>
MISC FEATURE <vy\> (°).-(°) ><
Tyr ‏أو‎ ,Phe, Trp ‏يمثل‎ Xaa <YYY> <YY.> ٠
MISC FEATURE <vy\> )1(..)1( ><
Glu J Asp ‏يمثل‎ Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE >؟١«‎ ١٠ (V)--(Y) <YYY> amino acid ‏أى حمض أمينى‎ Jig Xaa >777< <YY.>
MISC FEATURE <vy\>
-١؟١-‎ (A).-(M) <YYY>
Met J ,Ala, Val, lle, Leu ‏يمثل‎ Xaa <YY¥> <YY.>
MISC FEATURE <vy\> )5(..)5( <YYY> ©
Tyr ‏أو‎ ,Phe, Trp ‏يمثل‎ Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE <vy\> (0 ..)١ ‏ل‎ <YYY> amino acid ‏يمثل أى حمض أمينى‎ Xaa <YYY> ٠ ١ <¢4>
Asp Asp Xaa Glu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Asp a ° ١
YV <YV).>
YY <YYY> Yo
PRT <Yy\yvy> ‏اصطناعى‎ <YIT> <YY.>
VPTI4 5 ‏حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل‎ <YYY>
-١77- <YY.>
MISC FEATURE <vy\> (7)--(Y) <YYV> ‏أى حمض أمينى‎ Jig Xaa <YYY> <YY.> ©
MISC FEATURE <vy\> (©).-(°) <YYY>
Trp ‏أو‎ Ala, Val, lle, Leu, Met, Phe, Tyr ‏يمثل‎ Xaa <YY¥> <YY.>
MISC FEATURE >< ٠ )1(..)1( ><
Glu J Asp ‏يمثل‎ Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE <vy\> (V)--(Y) >< ١٠١ amino acid ‏أى حمض أمينى‎ Jig Xaa >777< <YY.>
MISC FEATURE <vy\> (A)-o(A) <YYY> £Y14
ضف ‎Ala, Val, lle, Leu, Met, Phe, Tyr (iy Xaa <YVvY>‏ أو ‎Trp‏ ‎<YY.>‏ ‏<١؟؟> ‎MISC FEATURE‏ ‎<YYY>‏ (5(..)5) ‎Xaa <YYY> ٠‏ يمثل ‎Ala, Val, lle, Leu, Met, Phe, Tyr‏ أو ‎Trp‏ <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (0 ..)١ ‏ل‎ <YYY> amino acid ‏أى حمض أمينى‎ Jig Xaa >777<
YV >»... Yo
Asp Asp Xaa Glu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Asp a 2 ١
YA > ٠<
VY >”١ا١ا<‎
PRT ‏ج<د>‎ ١١ ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.>
VPTI4 6 ‏تنشيط التعبير الجينى بديل‎ Glas ‏حافز تفاعل‎ <YYY>
YA ><
-١4-
Asp Asp Phe Glu Phe Glu Met Met Phe Thr Asp a ° ١ ١ >”٠< >”١١<
PRT >< ‏م‎ ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.>
VALERF1 1 ‏حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل‎ <YYY> <YY.>
MISC FEATURE <YY\> 1. )١(..)( <YYY>
Glu J Asp Jie Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (£).-(%) <YYY> ١
Ser J Phe ‏يمتثل‎ Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ )1(..)1( ><
—\Yo-
Glu J Asp Jie Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (A).-(M) <YYY>
Leu §Phe Jig Xaa <YYY> o© <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (3)-.(3) <vYY>
Val J Thr Jig Xaa <yYy> ١ <¢ve> Yo
Xaa Asn Asp Xaa Glu Xaa Met Xaa Xaa 2 ١
Ye >”7٠٠< >”١١<
PRT ‏ج<د>‎ ١١ ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.>
VALERF1 2 ‏تنشيط التعبير الجينى بديل‎ Glas ‏حافز تفاعل‎ <YYY> <YY.>
-١؟-‎
MISC FEATURE >؟١<‎ )١(..)( <YYY> amino acid ‏أى حمض أمينى‎ Jig Xaa >777< <YY.>
MISC FEATURE <yvy> ‏ه‎ ‎(Y)--(Y) <YYY> ‏أى حمض أمينى‎ Jig Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE <vy\> (£).-(%) >< 0٠ ‏أى حمض أمينى‎ Jig Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE <vy\> )1(..)1( ><
Glu J Asp ‏يمثل‎ Xaa <YY¥> Yo <YY.>
MISC FEATURE <vy\> (A).-(M) <YYY>
Trp ‏أو‎ Ala, Val, lle, Leu, Met, Phe, Tyr (iy Xaa <YVvY> £Y14
-١ /- <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ )5(..)5( <YYY> amino acid ‏أى حمض أمينى‎ Jig Xaa >777<
Ye <gvu> 0
Xaa Xaa Asp Xaa Glu Xaa Met Xaa Xaa 2 ١
YY >”٠<
VY >”١ا١ا<‎
PRT <yyv> ٠ ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.>
VALERF1 3 ‏حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل‎ <YYY> <YY.>
MISC FEATURE >< ١٠١ )١(..)( <YYY>
Glu J Asp Jie Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎
-١ ‏م‎ ‎)0..)0( <YYY>
Ser ‏أو‎ 008 (iy Xaa >77 7< <YY.>
MISC FEATURE <vY\> (1)--(1) <YYY> ‏م‎
Glu J Asp Jie Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE <vY\> (3)--(3) <YYY>
Leu JPhe Jig Xaa <YY¥> 1. <YY.>
MISC FEATURE <vy\> (0 ..)١ ‏ل‎ <YYY>
Val J Thr ‏يمثل‎ Xaa <Yyv>
YY <g> Yo
Xaa Asp Xaa Glu Phe Xaa GIn Met Xaa Xaa Asp
Ye 2 ١
YY >١٠٠<
YY >”١ا١<‎
Ave
PRT <Yy\yvy> ‎<YVY>‏ اصطناعى ‎<YY.> ‎VAERF1 4 ‏حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل‎ <YYY> <YY.> ‏م‎ ‎MISC FEATURE >؟١<‎ ‎)١(..)( <YYY> ‎Glu J Asp Jie Xaa <YYY> ‎<YY.> ‎MISC FEATURE >< ٠ ‎(Y).-(Y) <YYY> ‎amino acid ‏أى حمض أمينى‎ Jig Xaa >777< ‎<YY.> ‎MISC FEATURE <vy\> (°).-(°) >< ١ ‎Tyr ‏أو‎ ,Phe, Trp ‏يمثل‎ Xaa <YYY> ‎<YY.> ‎MISC FEATURE <vy\> ‎)1(..)1( <YYY>
CA
Glu J Asp Jie Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (V)--(Y) <YYV>
Pro J ,Ser, Thr, Asn, GIn, Cys, Gly, Tyr ‏يمثل‎ Xaa <YY¥> o© <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ )5(..)5( <YYY>
Trp ‏أو‎ Ala, Val, lle, Leu, Met, Phe, Tyr (iy Xaa <YVvY> >
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (0 ..)١ ‏ل‎ <YYY> amino acid ‏أى حمض أمينى‎ Jig Xaa >777< <YY.>
MISC FEATURE >< ١٠١ (0 ١ ٠.) ( <YYY>
Glu J Asp Jie Xaa <YYY>
YY <¢ve>
Xaa Asp Xaa Glu Xaa Xaa Xaa Met Xaa Xaa Xaa
-١1- " 2 ١
YY <vY.>
VY >”١ا١ا<‎
PRT >< ‏اصطناعى‎ >؟١<‎ oo <YY.>
VALERF1 5 ‏حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل‎ <YYY> <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ )١(..)( <YYY> 0٠ amino acid ‏أى حمض أمينى‎ Jig Xaa >777< <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (7)--(Y) <YYV> amino acid ‏يمثل أى حمض أمينى‎ Xaa <YYY> Vo <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (°).-(°) ><
Trp ‏أو‎ Ala, Val, lle, Leu, Met, Phe, Tyr (iy Xaa <YVvY>
-١©7- <YY.>
MISC FEATURE <YY\> )1(..)1( <YYY>
Lys J ,Asp, Glu, His, Arg ‏يمتل‎ Xaa <YYY> <YY.> ©
MISC FEATURE <YY\> (V)--(¥) ><
Pro ‏أو‎ ,Ser, Thr, Asn, GIn, Cys, Gly, Tyr ‏يمثل‎ Xaa <YY¥> <YY.>
MISC FEATURE <Yy\y> ٠ )5(..)5( <YYY>
Trp ‏أو‎ Ala, Val, lle, Leu, Met, Phe, Tyr (iy Xaa <YVvY> <YY.>
MISC FEATURE <YY\> )١(..0( <YYY> ٠١ amino acid ‏أى حمض أمينى‎ Jig Xaa >777< <YY.>
MISC FEATURE <YY\> (0 ١ ٠.) ( <YYY>
فضا ‎Xaa <YYY>‏ يمثل ‎Glu J Asp‏ ‎YY <¢ve>‏ ‎Xaa Asp Xaa Glu Xaa Xaa Xaa Met Xaa Xaa Xaa‏ ‎Yo ° ١‏ © <١٠ا>‏ +
VY >”١ا١ا<‎
PRT >< ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.>
VAERF1 6 ‏حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل‎ <YYY> ٠
YE ‏<.م.>‎ ‎Glu Asn Asp Phe Glu Phe Glu Met Phe Thr Asp
Yo ° ١
Yo <YVY).> ٠١ <YVY> ١
PRT >< ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.>
VORCA2 1 ‏حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل‎ <YYY>
١6 <VY.>
MISC FEATURE <vy\> )١(..)( <YYY>
Glu J Asp Jie Xaa <YYY> <YY.> ‏م‎ ‎MISC FEATURE >؟١<‎ (Y)..(Y) ><
Leu §Phe ‏يمثل‎ Xaa <vYYY> <VY.>
MISC FEATURE >< ٠ (£).-(%) <YYY>
Ser ‏أو‎ Glu Jig Xaa >” 77 < <VY.>
MISC FEATURE <vy\> (°).-(°) >< ١
Asp ‏28ل يمثل 006 أر‎ >77 7< <VY.>
MISC FEATURE <vy\> )1(..)1( ><
—\yo- lle § Glu ‏يمثل‎ Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (V)--(Y) <YYV> lle J Met Jig Xaa <YYY> o© <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (A).-(M) <YYY>
Leu §Phe ‏يمثل‎ Xaa <vYYY>
Yo ‏د‎ Vo
Xaa Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Thr Asp a ° ١ 7١ >”٠٠< ٠١ <YVYV>
PRT ‏ج<د>‎ ١١ ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.>
VORCA2 2 ‏حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل‎ <YYY> <YY.>
١ 1-
MISC FEATURE >؟١<‎ )١(..)( <YYY> amino acid ‏أى حمض أمينى‎ Jig Xaa >777< <YY.>
MISC FEATURE <yvy> ‏ه‎ ‎(Y).-(Y) <YYY> ‏أى حمض أمينى‎ Jig Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE <vy\> (£).-(%) <YYY> Ye amino acid ‏أى حمض أمينى‎ Jig Xaa >777< <YY.>
MISC FEATURE <vy\> (°).-(°) ><
Trp ‏أو‎ Ala, Val, lle, Leu, Met, Phe, Tyr Jiu Xaa <YYY> ١٠١ <YY.>
MISC FEATURE <vy\> )1(..)1( <YYY>
Glu J Asp Jie Xaa <YYY> £Y14
١ ‏لام‎ ‎<YY.> ‎MISC FEATURE >؟١<‎ (¥)--(¥) <YYY>
Trp ‏أو‎ Ala, Val, lle, Leu, Met, Phe, Tyr ‏يمثل‎ Xaa <YYY> o© <YY.>
MISC FEATURE <vy\> (A).-(M) <YYY>
Trp ‏أو‎ Ala, Val, lle, Leu, Met, Phe, Tyr ‏يمثل‎ Xaa <YY¥> 7١ <g> ١١
Xaa Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Thr Asp ٠٠١ 2 ١ 7 >"٠<
YY >”١ا١<‎
PRT <vyy> ١١ ‏اصطناعى‎ <YIT> <YY.> 7080823 ‏حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل‎ <YYY>
١م‎ <VY.>
MISC FEATURE <vy\> )١(..)( <YYY>
Glu J Asp Jie Xaa <YYY> <YY.> ‏م‎ ‎MISC FEATURE <vy\> (Y)..(Y) ><
Leu §Phe ‏يمثل‎ Xaa <vYYY> <VY.>
MISC FEATURE >< ٠ (£).-(%) <YYY>
Ser ‏أو‎ Glu Jig Xaa >” 77 < <VY.>
MISC FEATURE <vy\> (°).-(°) >< ١
Asp ‏28ل يمثل 006 أر‎ >77 7< <VY.>
MISC FEATURE <vy\> )1(..)1( ><
-١؟4-‎ lle § Glu ‏يمثل‎ Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (A).-(M) <YYY> lle ‏أو‎ Met ‏يمثل‎ Xaa <YYY> © <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (3)-.(3) <vYY>
Leu §Phe ‏يمثل‎ Xaa <vYYY>
YY <¢ve> Yo
Xaa Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Gln Xaa Xaa Thr Asp a ° ١
YA > ٠<
VY >”١ا١ا<‎
PRT ‏ج<د>‎ ١١ ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.>
VORCA2 4 ‏حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل‎ <YYY> <YY.>
-١م2-‎
MISC FEATURE <YY\> )١(..)( <YYY>
Glu 4 His, Arg, Lys, Asp ‏يمثل‎ Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE <yy\y> oo (Y)--(Y) ><
Trp ‏أو‎ Ala, Val, lle, Leu, Met, Phe, Tyr (iy Xaa <YVvY> <YY.>
MISC FEATURE <YY\> (£).-(%) >< 0٠ ‏أو‎ ,Ser, Thr, Asn, Gin, Cys, Gly, Pro, Arg, His, Lys, Asp ‏يمثل‎ Xaa ><
Glu <YY.>
MISC FEATURE <YY\> (°).-(°) >< ١
Tyr ‏أو‎ ,Phe, Trp ‏يمثل‎ Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE <YY\> )1(..)1( <YYY> kA
Glu J Asp Jie Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (V)--(Y) <YYV> ‏أو‎ ,Ser, Thr, Asn, Gin, Cys, Gly, Pro, Arg, His, Lys, Asp ‏يمثل‎ Xaa <YYY> ٠
Glu <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (A).-(M) <YYY>
Met J,Ala, Val, lle, Leu ‏يمثل‎ Xaa <YYY> ©. <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ )5(..)5( <YYY>
Tyr ‏أو‎ ,Phe, Trp ‏يمثل‎ Xaa <YYY>
YA <¢ve> ١
Xaa Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Thr Asp
Yo ° ١ 7 >"”٠٠<
-١67-
VY >”١ا١ا<‎
PRT >؟١7<‎ ‎<YVY>‏ اصطناعى ‎<vY.> ‎VORCA2 5 ‏تنشيط التعبير الجينى بديل‎ Glas ‏حافز تفاعل‎ <YYY> 0 ‎<vY.> ‎MISC FEATURE <vy\> ‎)١(..)( <YYY> ‎amino acid ‏أى حمض أمينى‎ Jig Xaa >777< <YY.> 0٠ ‎MISC FEATURE <vy\> ‎(Y)..(Y) >< ‎Jig Xaa <YYY>‏ أى حمض أمينى ‎<vY.> ‎MISC FEATURE >؟١«‎ ١٠ ‎(£).-(%) <YYY> ‎Jig Xaa <YYY>‏ أى حمض أمينى ‎<vY.> ‎MISC FEATURE <vy\> ‎£Y14 ns (©).-(°) <YYY>
Trp ‏أو‎ Ala, Val, lle, Leu, Met, Phe, Tyr ‏يمثل‎ Xaa <YY¥> <YY.>
MISC FEATURE <vy\> )1(..)1( >< ©
Glu J Asp ‏يمثل‎ Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE <vy\> (V)--(Y) <YYV> amino acid ‏يمثل أى حمض أمينى‎ Xaa <YYY> ٠ <YY.>
MISC FEATURE <vy\> (A)-o(A) <YYY>
Trp ‏أو‎ Ala, Val, lle, Leu, Met, Phe, Tyr ‏يمثل‎ Xaa <YY¥> <YY.> yo
MISC FEATURE <vy\> (2)--(3) <YYV>
Trp ‏أو‎ Ala, Val, lle, Leu, Met, Phe, Tyr ‏يمثل‎ Xaa <YY¥> 71 <¢ve> £Y14
-١66-
Xaa Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Thr Asp a 2 ١
Ev >١7٠< ٠١ <YVYV>
PRT <vyy> ‏مه‎ ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.>
VORCA2 6 ‏حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل‎ <YYY> $v ><
Glu Asp Phe Asp Leu Glu Met Leu Thr ‏م658‎ ٠ a 2 ١ ١ <YV.>
Yo <Y\V\>
PRT <vyy> ‏اصطناعى‎ >؟١<‎ Yo <YY.>
VDREBIA 1 ‏حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل‎ >< <YY.>
MISC FEATURE <vy\>
-١68- )١(..)( <YYY>
Glu J Asp Jie Xaa <YYY> <VY.>
MISC FEATURE <vy\> (Y)--(Y) <YYY> oo
Glu J Asp Jie Xaa <YYY> <VY.>
MISC FEATURE <vy\> (°).-(°) ><
Tyr JPhe ‏يمثل‎ Xaa <YYY> 1. <VY.>
MISC FEATURE <vy\> (0 ..)١ ‏ل‎ <YYY>
Ala § GIn ‏يمتل‎ Xaa <YYY> <YY.> Vo
MISC FEATURE <vy\> (0 £)..() 3 <YYY>
Met J Thr ‏يمثل‎ Xaa <vyYY> <VY.>
EA
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (Yo)..(Yo) ><
Glu J Asp Jie Xaa <YYY> £Y ‏<..ء>‎ ‎Xaa Xaa Ala Phe Xaa Met His Asp Glu Xaa Met Phe Glu Xaa Xaa ©
Yo Yo ‏هت‎ ١
EY <YV.>
Yo <Y\V\>
PRT >< ‏اصطناعى‎ >؟١3<‎ ٠ <YY.>
VDREBIA 2 ‏حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل‎ >< <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ )١(..)( <YYY> ١ amino acid ‏أى حمض أمينى‎ Jig Xaa >777< <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (Y)--(Y) <YYY>
-١/-
Glu J ,Asn, His, Arg, Lys, Asp Ji Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE <vy\> (Y).-(Y) <YYY> amino acid ‏يمثل أى حمض أمينى‎ Xaa <YYY> © <YY.>
MISC FEATURE <vy\> (°).-(°) ><
Trp ‏أو‎ , 9028, Tyr ‏يمثل‎ Xaa <YYY> <YY> ٠
MISC FEATURE <vy\> )1(..)1( <YYY> ‏أى حمض أمينى‎ Jig Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE >؟١«‎ ١٠ (V)--(Y) <YYY> amino acid ‏أى حمض أمينى‎ Jig Xaa >777< <YY.>
MISC FEATURE >؟١<‎ £Y14
-١6/- (A).-(M) <YYY> ‏أى حمض أمينى‎ Jig Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE <vy\> )0(..0( <YYY> © ‏أى حمض أمينى‎ Jig Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE <vy\> (\¥)--('Y) <YYY> ‏أى حمض أمينى‎ Jig Xaa <YYY> ٠ <YY.>
MISC FEATURE <vy\> (0 £)..() 3 <YYY> ‏أى حمض أمينى‎ Jig Xaa <YYY> <YY.> yo
MISC FEATURE <vy\> (Yo)..(Yo) ><
Glu J ,Pro, His, Arg, Lys, Asp ‏يمثل‎ Xaa <YYY>
EY ‏<*ء؛>‎ ‎£Y14
-١؟4-‎ 788 Xaa Xaa Phe Xaa Xaa Xaa Xaa Glu Xaa Met Phe Xaa Xaa 38
Yo Yo ‏هت‎ ١
YY <vY.>
VY >”١ا١ا<‎
PRT >< oo ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.>
VDREBIA 3 ‏حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل‎ >< >
MISC FEATURE >؟؟١<‎ )١(..)( <YYY>
Glu J Asp Jie Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE >< ١٠١ (Y)--(Y) <YYY>
Glu J Asp Jie Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎
“Nom (°).-(°) ><
Tyr ‏يمثل 008 أو‎ Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (V)--(Y) >< ©
Ala J Gln ‏يمتل‎ Xaa <YY¥> <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (0 ..)١ ‏ل‎ <YYY>
Met J Thr Jia Xaa <YYY> ©. <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (0 ١(..)١ ( <YYY>
Glu J Asp Jie Xaa <YYY> £Y ‏<..؛>‎ Yo
Xaa Xaa Phe Glu Xaa Glu Xaa Met Phe Xaa Xaa
Yo ° ١ ‏؛‎ <YV.>
VY >”١ا١ا<‎ yoy
PRT <Yy\yvy> ‎<YVY>‏ اصطناعى ‎<YY.> ‎VDREBIA 4 ‏حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل‎ <YYY> <YY.> ‏م‎ ‎MISC FEATURE >؟١<‎ ‎)١(..)( <YYY> ‎Glu 4 His, Arg, Lys, Asp ‏يمثل‎ Xaa <YYY> ‎<YY.> ‎MISC FEATURE >< ٠ ‎(Y)--(Y) <YYY> ‎Glu J Asp Jie Xaa <YYY> ‎<YY.> ‎MISC FEATURE <vy\> (£).-(%) <YYY> Yo ‎Glu J Asp Jie Xaa <YYY> ‎<YY.> ‎MISC FEATURE <vy\> ‎(°).-(°) >< ‎£Y14
-١ ‏م‎ ‎Tyr ‏يمثل 008 أو‎ Xaa >77 7< <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (V)--(Y) <YYV> ,Ser, Thr, Asn, Gin, Cys, Gly, Pro, Ala, Val, Leu, lle ‏يمثل‎ Xaa <YYY> o
Met J Phe, Tyr, Trp <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (0 ..)١ ‏ل‎ <YYY> ,Ser, Thr, Asn, Gln, Cys, Gly, Pro, Ala, Val, Leu, lle ‏يمثل‎ Xaa <YYY> ©.
Met J Phe, Tyr, Trp <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (0 ١ ٠.) ( <YYY>
Glu J Asp Jie Xaa <YY¥> Yo £¢ ‏<مء>‎ ‎Xaa Xaa Phe Xaa Xaa Glu Xaa Met Phe Xaa Xaa
Yo ° ١ to <Y\V.> yey
YY >”١ا١<‎
PRT <yyv> ‏اصطناعى‎ <YVY> <YY.>
VDREBIA 5 ‏تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل‎ ila <YYY> ٠ <YY.>
MISC FEATURE <vy\> )١(..)( <YYY> amino acid ‏أى حمض أمينى‎ Jig Xaa >777< ‏جالاا>‎ 0٠
MISC FEATURE >؟١<‎ (Y)--(Y) <YYY>
Asn J Asp, Glu ‏يمثل‎ Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE >؟١«‎ ١٠ (£).-(%) <YYY> amino acid ‏أى حمض أمينى‎ Jig Xaa >777< <YY.>
MISC FEATURE <vy\> voi (°).-(°) ><
Trp ‏أو‎ , 9028, Tyr ‏يمثل‎ Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE <vy\> (V)--(Y) <YYY> ‏م‎ ‎Jig Xaa <YYY>‏ أى حمض أمينى ‎<YY.>‏ ‎MISC FEATURE <vy\>‏ ‎<YYY>‏ ل ‎..)١‏ 0( ‎amino acid ‏يمثل أى حمض أمينى‎ Xaa <YYY> ٠ <YY.>
MISC FEATURE <vy\> (0 ١ ٠.) ( <YYY>
Pro J Asp, Glu Jie Xaa <YY¥> ‎$0 <tt> Yo
Xaa Xaa Phe Xaa Xaa Glu Xaa Met Phe Xaa Xaa
Ye 2 ١ £71 >”7٠<
YY >”١ا١<‎
—Voo—
PRT >< <2١؟١>‏ اصطناعى <YY.> <> حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل 7 ‎VDREBIA‏ ‎<g> 0‏ ¢1
Glu Asp Phe Glu Phe Glu Ala Met Phe Met Asp a ° ١
EY <Y\V.> 4 <YVYV>
PRT <yyv> ٠ <2١؟١>‏ اصطناعى <YY.>
VCBF1 1 ‏حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل‎ <YYY> <YY.>
MISC FEATURE >< ١٠١ (£).-(%) <YYY>
Thr J Gln Jig Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎
-١ه1-‎ (A).-(M) <YYY>
Met J Thr ‏يمثل‎ Xaa <vYY> <YY.>
MISC FEATURE <vy\> )5(..)5( <YYY> oo
Glu J Asp Jie Xaa <YYY>
EY <¢ve>
Asp Glu Glu Xaa Met Phe Gly Xaa Xaa 2 ١
EA ‏لس الل‎ Yo >؟”7١ا١ا<‎
PRT >؟١<‎ ‏اصطناعى‎ <YIT> <YY.>
VCBF1 2 ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل‎ Je lad ‏حافز‎ <YYY> Vo <YY.>
MISC FEATURE <vy\> (£).-(%) <YYY> amino acid ‏يمثل أى حمض أمينى‎ Xaa <YYY> £Y14
-١ ‏لاع‎ ‎<YY.> ‎MISC FEATURE <vy\> (¥)--(¥) <YYY> ‏أى حمض أمينى‎ Jig Xaa <YYY> <YY.> ‏م‎ ‎MISC FEATURE <vy\> (A).-(M) <YYY> amino acid ‏أى حمض أمينى‎ Jig Xaa >777< <YY.>
MISC FEATURE >< ٠ )5(..)5( <YYY>
Pro J Asp, Glu Jie Xaa <YY¥>
EA ><
Asp Glu Glu Xaa Met Phe Xaa Xaa Xaa o ١ ١ £4 <YV.>
YY <YYY>
PRT <Yy\yvy> ‏اصطناعى‎ <YIT> £Y14
-١ ‏مه‎ ‎<YY.> ‎VCBF1 3 ‏حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل‎ <YYY> <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (V)--(Y) >< ©
Thr J Gln Jig Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (0 ..)١ ‏ل‎ <YYY>
Met J Thr Jia Xaa <YYY> ©. <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (0 ١(..)١ ( <YYY>
Glu J Asp Jie Xaa <YYY> ¢4 ‏<..؛>‎ Vo
Asp Asp Phe Glu Phe Glu Xaa Met Phe Xaa Xaa a ° ١ ‏.هه‎ >7ا١٠١<‎
VY >”١ا١ا<‎
-١ه4-‎
PRT >١7< ‎<YVY>‏ اصطناعى ‎<YY.> ‎7081-4 ‏حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل‎ <YYY> <YY.> ‏م‎ ‎MISC FEATURE >؟١<‎ ‎(Y)--(Y) <YYY> ‎Glu J Asp Jie Xaa <YYY> ‎<YY.> ‎MISC FEATURE >< ٠ ‎(Y).-(Y) <YYY> ‎Tyr ‏أو‎ ,Phe, Trp ‏يمثل‎ Xaa <YYY> ‎<YY.> ‎MISC FEATURE <vy\> (°).-(°) >< ١ ‎Tyr ‏أو‎ ,Phe, Trp ‏يمثل‎ Xaa <YYY> ‎<YY.> ‎MISC FEATURE <vy\> ‎(V)--(Y) <YYY>
Ate
Tyr ‏أو‎ ,Ser, Thr, Asn, GIn, Cys, Gly Jie Xaa <YY¥> <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (0 ..)١ ‏ل‎ <YYY> ,Ser, Thr, Asn, Gin, Cys, Gly, Pro, Ala, Val, Leu, lle ‏يمثل‎ Xaa <YYY> o
Met J Phe, Trp, Tyr <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (0 ١ ٠.) ( <YYY>
Glu J Asp Jie Xaa <YY¥> V.
Ov <§au>
Asp Xaa Xaa Glu Xaa Glu Xaa Met Phe Xaa Xaa a 2 ١ ه١‎ >ا”٠ء<‎ Yo
VY >”١ا١ا<‎
PRT >< ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.>
-١١1- 708] 5 ‏تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل‎ Bla <YYT> <YY.>
MISC FEATURE <vy\> (Y)--(Y) <YYY>
Glu ‏أر‎ Asp ‏يمثل‎ Xaa <YYY> o© <YY.>
MISC FEATURE <vy\> (Y)..(Y) >< amino acid ‏أى حمض أمينى‎ Jig Xaa >777< <YY.> ٠
MISC FEATURE <vy\> (°).-(°) ><
Tyr ‏أو‎ ,Phe, Trp ‏يمثل‎ Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE >؟١«‎ ١٠ (V)--(Y) <YYY> ‎Jig Xaa <YYY>‏ أى حمض أمينى ‎<YY.> ‎MISC FEATURE <vy\>
-١؟7-‎ (0 ..)١ ‏ل‎ <YYY> amino acid ‏يمثل أى حمض أمينى‎ Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (0 ١(..)١ ( <YYY> oo
Pro J Asp, Glu Jie Xaa <YY¥> ه١‎ <g>
Asp Xaa Xaa Glu Xaa Glu Xaa Met Phe Xaa Xaa
Yo ° ١ oY <YY.> ٠
VY >”١ا١ا<‎
PRT >< ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.>
VCBF1 6 ‏حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل‎ <YYY> Vo
OY <g>
Asp Asp Phe Glu Phe Glu Thr Met Phe Met Asp
Yo ° ١ or >ا١٠١<‎
-١©- ١١ ‏<اا”>‎ ‎PRT >؟١<‎ ‏اصطناعى‎ <YVY> <YY.>
VDOF1 1 ‏حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل‎ <YYY> © <YY.>
MISC FEATURE <vy\> )١(..)( <YYY>
Glu J Asp Jie Xaa <YYY> <YY.> ٠
MISC FEATURE <vy\> (°).-(°) ><
Val J Glu ‏يمثل‎ Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE >؟١«‎ ١٠ )1(..)1( ><
Trp ‏يمثل 006 أو‎ Xaa >” 77< <YY.>
MISC FEATURE <vy\> £Y14
)7(..)( <YYV>
Glu J Asp ‏يمثل‎ Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (A).-(M) <YYY> oo
Ala J Gln ‏يمتل‎ Xaa <YY¥> <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (3)-.(3) <vYY>
Ala J Met Jig Xaa > <٠
OF ‏<ءء؛>‎ ‎Xaa Asp Ser Phe Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Ser Phe Asp
Yo ° ١ 0¢ >ا”٠ء<‎ Yo ١١ >”ا١ا<‎
PRT >< ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.>
-١؟8-‎ 7001-2 ‏حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل‎ <YYT> <YY.>
MISC FEATURE <vy\> )١(..)( <YYY> ‏أى حمض أمينى‎ Jig Xaa <yYY> © <YY.>
MISC FEATURE <vy\> (Y)..(Y) >< amino acid ‏أى حمض أمينى‎ Jig Xaa >777< <YY.> ٠
MISC FEATURE <vy\> (°).-(°) >< ‎Jig Xaa <YYY>‏ أى حمض أمينى ‎<YY.> ‎MISC FEATURE >؟١«‎ ١٠ ‎)1(..)1( >< ‎Tyr ‏أو‎ ,Phe, Trp ‏يمثل‎ Xaa <YYY> ‎<YY.> ‎MISC FEATURE <vy\>
-١11- )7(..)( <YYV>
Pro J Asp, Glu Jie Xaa >77 7< <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (A).-(M) <YYY> oo amino acid ‏أى حمض أمينى‎ Jig Xaa >777< <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ )5(..)5( <YYY>
Trp ‏أو‎ Ala, Val, lle, Leu, Met, Phe, Tyr Jiu Xaa <YYY> 1. <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (0 ..)١ ‏ل‎ <YYY> ‏أى حمض أمينى‎ Jig Xaa <YYY> 0¢ >... Vo
Xaa Asp Xaa Phe Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Phe Asp a 2 ١ ‏هده‎ <YY.>
VY >”١ا١ا<‎
-١/-
PRT >١7< ‎<YVY>‏ اصطناعى ‎<YY.> ‎VDOF1 3 ‏تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل‎ ola <YYT> <YY.> ‏م‎ ‎MISC FEATURE >؟١<‎ ‎)١(..)( <YYY> ‎Glu J Asp Jie Xaa <YYY> ‎<YY.> ‎MISC FEATURE >< ٠ ‎(£).-(%) <YYY> ‎Val J Glu ‏يمثل‎ Xaa <YYY> ‎<YY.> ‎MISC FEATURE <vy\> (°).-(°) >< ١ ‎Trp ‏يمثل 006 أو‎ Xaa >” 77< ‎<YY.> ‎MISC_FEATURE <YY)> ‎(1)--(3) <YYY>
-١60-
Glu J Asp ‏يمثل‎ Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (V)--(Y) <YYV>
Ala ‏أى‎ GIn ‏يمتل‎ Xaa <YYY> © <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (A).-(M) <YYY>
Ala J Met ‏يمثل‎ Xaa <YYY> 00 >. ‏ف‎ ‎Xaa Asp Phe Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Phe Thr Asp a ° ١ 07 >7ا7١٠١<‎
VY >”١ا١ا<‎
PRT ‏ج<د>‎ ١١ ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.>
VDOF1 4 ‏حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل‎ <YYY> <YY.>
-١8-
MISC FEATURE >؟١<‎ )١(..)( <YYY>
Glu 4 His, Arg, Lys, Asp ‏يمثل‎ Xaa <YYY> <VY.>
MISC FEATURE <yvy> ‏ه‎ ‎(£).-(%) <YYY> amino acid ‏أى حمض أمينى‎ Jig Xaa >777< <VY.>
MISC FEATURE <vy\> (°).(°) >< 1.
Tyr ‏أو‎ ,Phe, Trp ‏يمثل‎ Xaa <YYY> <VY.>
MISC FEATURE <vy\> )1(..)1( ><
Glu J Asp ‏يمثل‎ Xaa <YY¥> Yo <VY.>
MISC FEATURE <vy\> (V)--(Y) <YYY> amino acid ‏أى حمض أمينى‎ Jig Xaa >777<
SAV
<YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (A).-(M) <YYY>
Met J ,Ala, Val, lle, Leu ‏يمثل‎ Xaa <YY¥> <YY.> ©
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (0 ..)١ ‏ل‎ <YYY>
Tyr ‏أو‎ ,Ser, Thr, Asn, 60, Cys, Gly, Pro ‏يمتل‎ Xaa <YYY> 07 <g>
Xaa Asp Phe Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Phe Xaa Asp - ٠ a 2 ١ oy >7ا١١<‎
YY >اا١ا<‎
PRT >< ‎١‏ <3١؟>‏ اصطناعى ‎<YY.>‏ ‎<YYY>‏ حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل 5 ‎VDOF1‏ ‎<YY.>‏ ‏<١؟؟> ‎MISC FEATURE‏
-١9/1- )١(..)( <YYY> amino acid ‏أى حمض أمينى‎ Jig Xaa >777< <YY.>
MISC FEATURE <vy\> (£).-(%) >< © ‏أى حمض أمينى‎ Jig Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE <vy\> (°).-(°) ><
Tyr ‏أو‎ ,Phe, Trp ‏يمثل‎ Xaa <YYY> ©. <YY.>
MISC FEATURE <vy\> )1(..)1( <YYY>
Pro J Asp, Glu Jie Xaa <YY¥> <YY.> yo
MISC FEATURE <vy\> (V)--(Y) <YYY> amino acid ‏أى حمض أمينى‎ Jig Xaa >777< <YY.> £Y14
—\VY-
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (A).-(M) <YYY>
Trp ‏أو‎ Ala, Val, lle, Leu, Met, Phe, Tyr (iy Xaa <YVvY> <YY.>
MISC FEATURE <YYy> o (0 ..)١ ‏ل‎ <YYY> ‏أى حمض أمينى‎ Jig Xaa <YYY> oF <g>
Xaa Asp Phe Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Phe Xaa Asp
Yo ° ١ A
OA <YY.>
VY >”١ا١ا<‎
PRT >< ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.> ١١
VDOF1 6 ‏حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل‎ <YYY>
OA <g>
Glu Asp Phe Glu Phe Glu Ala Met Phe Thr Asp a 2 ١
—\VY- 04 <YYy.> ٠١ <YVWYV>
DNA <Y\Y> ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.> ©
KanMX-For ‏بادئ‎ <YYY> 04 <g> aagaaactag tggatccgct agcttaatta aagatctggt accgtttagc ttgectegtc 0
Te >”٠<
Yeo <YVY> 0٠
DNA <Y\Y> ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.>
KanMX-Rev ‏بادئ‎ <YYY>
Te >... Yo aagaaggaat tcagagctcg ttttcgacac 30 1١ >”7٠<
Yo <Y\V\>
DNA <Y\Y>
AN
‏اصطناعى‎ >١؟١؟<‎ <YY.>
HO-For ‏بادئ‎ <YYY>
TY <g> ttgcccgaat tectg 15 ‏هه‎ ‎17 >”٠<
YY ‏<اا”>‎ ‎DNA ‏؟>‎ ١ < ‏اصطناعى‎ >١؟١؟<‎ <YY.> Y.
HO-Rev ‏بادئ‎ <YYY>
IY ‏<.ء؛>‎ ‎aagaagacta gtcgtacgac gccattt 27 17 >٠<
YY ‏<اا">‎ ١
DNA ‏؟>‎ ١ < ‏اصطناعى‎ >١؟١؟<‎ <YY.>
MEL1-For ‏بادئ‎ ><
-١ 8
TY <g> acggaacggg taccaagaag aaaggaagac atg 33 1¢ >”7٠<
YA ><
DNA <Y\Y> ‏د‎ ‏اصطناعى‎ <YYYT> <YY.>
MEL]1-Rev ‏بادئ‎ <YYY> 1 <g> ctaaagggaa caaaagct 18 ٠
To >؟٠٠١<‎
YA <YVV>
DNA <Y\Y> ‏اصطناعى‎ <YYYT> <YY.> ١١
HAS-For-F1 ‏<؟؟؟> بادئ‎ >). tagattggga 1]--1999990 0009336 28 11 >”٠< £Y14
-١716-
YY <Yy\>
DNA <Y\Y> ‏اصطناعى‎ >؟١؟<‎ <YY.>
HAS-For-R1 ‏بادئى‎ <YYY> © 17 <g> tagattgtta attaatggtc atcctcatcc tgc 33 ‏7ر1‎ <¥YY.>
YY >اا١ا<‎
DNA > ‏جر‎ 1. ‏اصطناعى‎ >؟١؟<‎ <YY.>
Z6 ‏تتابع‎ <YYY>
TY <g> tgtggtggga gaggaggatg g 21 ١٠
TA > ٠١<
Yo) ‏<اا>‎ ‎DNA <Y\Y> ‏اصطناعى‎ >؟١؟<‎ £Y14
-YVYV- <YY.> 26 ‏تتابع متكرر‎ XA <YYY>
TA <¢4> ggtatggtag gagaggaggg 1999391919 gtgggagagg agggtggcte tgtggtggga 60 ه٠‎ gaggagggtg gagatgtggt gggagaggag 991991-09 9919993939 9 120 gatgtggtag gagaggaggg tggcecttgty gtgggagagg agggtggagg tgtggtggga 180 gaggagggtg gcttaagecg c 201 ٠ 14 <YY.>
Ya <yy\>
DNA ‏؟>‎ ١ ‏<؟‎ ‏اصطناعى‎ >"؟١<‎ <YY.> Yo
TQPATS ‏<؟ ؟> بادئى‎ 14 ‏<..ء؛>‎ ‎acaagagtgg attgatgatc tagagaggt 29
Ye >7١٠١<
Ya ‏<ااا>‎ Y.
-١١//0-
DNA ‏؟>‎ ١ < ‎<YYYT>‏ اصطناعى ‎<YY.> ‏<؟ ؟> بادىئى ‎TQPATA‏ ‏م <> إل ‎ctttgatgcc tatgtgacac gtaaacagt 29 ‎YY <Y).> ‎١ ‏<ااا>‎ ‎DNA ‏؟>‎ ١ < ‏اصطناعى‎ >؟١3<‎ 0٠ ‎<YY.> ‎TQPATFQ ‏بادئ‎ <YYY> ‎YY <¢ve> ‎ggtgttgtgg ctggtattge ttacgctgg 29
YY <YY.> Yo ‎Ye <YVYV> ‎DNA ‏؟>‎ ١ < ‎<YYYT>‏ اصطناعى ‎<YY.>
-١١ل4-‎
TQPALS gab ‏<؟ ؟>‎
YY <¢ve> tactatgact tgatgttgtg tggtgactga 30
YY <Y\.>
YA <YVY> oo
DNA <Y\Y> ‏اصطناعى‎ >؟١؟<‎ <YY.>
TQPALA ‏<؟ ؟> بادئى‎
YY <g> Yo gagcggtcta aattccgacc cttatttc 28 ‏كلا‎ <YY.>
YY <Yy\>
DNA <Y\Y> ‎<YV¥> 5‏ اصطناعى ‎<YY.>‏ ‎FAMT <yYY>‏ منبار ‎TQPALFQ‏ ‎Ye <¢ve>‏ ‎aaacgatggc aggagtgccc tttttctatc aat 33‏ ‎£Y14
CA A—
Yo <Y\).> ٠١ >اا١<‎
DNA >؟١<‎ ‏اصطناعى‎ >؟١١3<‎ <YY.> o
Blu636 ‏بادئ‎ <YYY>
Yo <¢ve> 9898998999 tggagatgt 19 ‏خلا‎ <Y\).> ٠١ ‏<ااا>‎ 0٠
DNA >؟١<‎ ‏اصطناعى‎ >؟١١3<‎ <YY.>
Blu637 ‏بادئ‎ <YYY>
Yi >... Yo accttggact cccatgttg 19
YY <Y\).>
YY >اا١ا<‎
DNA >؟١<‎ £Y14
-١81- ‏اصطناعى‎ >؟١؟<‎ <YY.> ‏أمامى‎ CHS'Y ‏بادئ‎ <vYY>
YY <¢ve> ctgatccaat tccagaggtc g 21 oo
YA <Y).>
Y¢ <¥VV\Y>
DNA ‏؟>‎ ١ < ‏اصطناعى‎ >؟١؟<‎ <YY.> Y. ‏عكسى‎ CHS'Y ‏<؟؟؟> بادئ‎
YA >). ‏<م‎ ‎acacacaagc actagacatg ttgc 24
Ya <Y\).> ٠١١ <YYY> ١
DNA ‏؟>‎ ١ < ‏اصطناعى‎ >؟١؟<‎ <YY.>
-١87- ‏نطاق تنشيط التعبير‎ interaction motif ‏<؟؟>_تتابع تركيبى يقوم بترميز حافز تفاعل‎
Z6 DNA binding motif ‏مدمج بحافز ارتباط‎ VP16 ‏الجينى‎ ‎Va <¢ve> ggcatgaccc atgatcctgt gtcttatgga gccttggatg ttgatgactt tgagtttgag 0 cagatgttca cagatgcact gggcatcgat gactttggtg ga 102 ه٠‎
Av >< 44 >؟”١١ا<‎
DNA <Y\Y> ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ > interaction motif ‏يقوم بترميز حافز تفاعل‎ Synthetic sequence ‏تتابع تركيبى‎ <YYY>
Z6 DNA binding motif ‏مدمج بحافز ارتباط‎ ERF2 ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى‎ ‏لم‎ >< aatgactctg aggacatgct ggtgtatggt ttgctcaagg atgcctttca ctttgacacc 0 yo tccagctcag acctctectg cctetttgac ttcccagece 99
AY ><
YYY >"١١٠<
DNA <Y\Y>
م 1- <2١؟١>‏ اصطناعى ‎<YY.>‏ ‎<YYY>‏ تتابع تركيبى ‎Synthetic sequence‏ يقوم بترميز حافز تفاعل ‎interaction motif‏ نطاق تنشيط التعبير الجينى 0114 مدمج بحافز ارتباط ‎Z6 DNA binding motif‏ 0 7<..؛> ‎AY‏ tgcctgacag aaacttgggg agacttgect ctcaaggttg atgactctga ggacatggtg 0 atctatggtc tgttgaagga tgcactctca gtggggtggt ccccattete tttcacgget 0 ggt 123
AY <Y\V.>
AT ‏<ااا>‎ 0٠
DNA > ١١< ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.> interaction motif ‏يقوم بترميز حافز تفاعل‎ Synthetic sequence ‏تتابع تركيبى‎ <YYY>
Z6 DNA binding motif ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى 811471 مدمج بحافز ارتباط‎ ١
AY ‏<م.>‎ ‎tgcttcacgg aatcctgggg agaccttcct ttgaaggaga atgactctga ggacatgttg 60 gtgtacggaa tcctcaatga tgcttttcat ggtggce 96
AY >7٠<
—\AE—
Ye A ><
DNA <Y\Y> ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.> interaction motif ‏يقوم بترميز حافز تفاعل‎ Synthetic sequence ‏تتابع تركيبى‎ <YYY> ©
Z6 DNA binding motif ‏مدمج بحافز ارتباط‎ ORCA2 ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى‎
AY >..< ttcaatgaga attgtgaaga aatcatctct ccaaactacg catcagagga cttgtctgac 0 atcatcttga cggacatctt caaggaccaa gacaactatg aggatgag 108
AE ‏ل الل‎ Yo ١١ <YVYV>
DNA <Y\Y> ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.> interaction motif ‏يقوم بترميز حافز تفاعل‎ Synthetic sequence ‏تتابع تركيبى‎ <YYY> Yo
Z6 DNA binding motif ‏مدمج بحافز ارتباط‎ DREBIA ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى‎
AE ‏<م.>‎ ‎ggctttgaca tggaagaaac attggtggag gccatctaca ctgctgaaca gagcgagaat 60 gccttctaca tgcatgatga ggcaatgttt gagatgccat ctettctgge caacatgget 120 ٠
—\Ao— gagggaatg 129 ‏عدم‎ >< ‏لم‎ >”١١<
DNA > ١١< ‏اصطناعى‎ >؟١<‎ oo <YY.> interaction motif ‏يقوم بترميز حافز تفاعل‎ Synthetic sequence ‏تتابع تركيبى‎ <YYY>
Z6 DNA binding motif ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى 0871 مدمج بحافز ارتباط‎
AO >< gaacagtcag aaggtgcttt ctacatggat gaagagacca tgtttgggat gccaaccctt 60 ٠٠ ctggataaca tggcagaggg a 81
AT >< 44 >؟”١١ا<‎
DNA <Y\Y> ‏اصطناعى‎ >؟١3<‎ ١ <YY.> interaction motif ‏يقوم بترميز حافز تفاعل‎ Synthetic sequence ‏تتابع تركيبى‎ <YYY>
Z6 DNA binding motif ‏مدمج بحافز ارتباط‎ DOF] ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى‎
AT >.
-١81- tcagctggga aggcagtctt ggatgatgag gacagctttg tttggcctge tgcatecttt 60 gacatgggtg cctgctggge tggagcetggc tttgctgac 99
AY > ٠١< 44 >؟”١١ا<‎
DNA > ‏د | <؟‎ <2١؟١>‏ اصطناعى ‎<YY.>‏ ‎<VYY>‏ تتابع تركيبى ‎Synthetic sequence‏ يقوم بترميز حافز تفاعل ‎interaction motif‏ نطاق تنشيط التعبير الجينى ‎ERF2‏ بديل تمثيلى مدمج بحافز ارتباط ‎Z6 binding motif‏
DNA ٠
AY >. aatgactctg aggacatgct ggtgtatggt ttgctcaagg atgatttcca ctttgagaca 0 atgttctcag acctgtcctg cctcetttgac ttcccagcece 99
AN ><
YYe ‏<ااا>‎ ١
DNA > ١١< ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.>
-١ ‏لام‎ ‎interaction motif ‏يقوم بترميز حافز تفاعل‎ Synthetic sequence ‏تتابع تركيبى‎ <YYY>
Z6 binding motif ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى 0114 بديل تمثيلى مدمج فى حافز ارتباط‎
DNA
AN >. tgcctgacag aaacttgggg agacttgcct ctcaaggttg atgactttga gtttgagatg 60 ه٠‎ atgttcacag atgcactctc agtggggtgg tccccattct ctttcacggce tggt 114 ‏كم‎ ><
YoY <YVYV>
DNA <Y\Y> ‎٠‏ <3١؟>‏ اصطناعى ‎<YY.>‏ ‎<VYY>‏ تتابع تركيبى ‎Synthetic sequence‏ يقوم بترميز حافز تفاعل ‎interaction motif‏ نطاق تنشيط التعبير الجينى 81471 بديل تمثيلى مدمج بحافز ارتباط ‎Z6 binding motif‏ ‎DNA‏ ‎Yo‏ ...> كم ‎tgcttcacgg aatcctgggg agaccticct ttgaaggaga atgactttga gtttgaaatg 0‏ ‎ttcacagatt acggaatcct caatgatgct tttcatggtg gc 102‏ ‎Ar <YYV >‏ ‎Ye A ><‏ ‎DNA >< Y.
-١ ‏حم‎ ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.> interaction motif ‏يقوم بترميز حافز تفاعل‎ Synthetic sequence ‏تتابع تركيبى‎ <YYY>
Z6 binding motif ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى 0140/82 بديل تمثيلى مدمج بحافز ارتباط‎
DNA ‏ه‎ ‎1. ‏<ءء؛>‎ ‎ttcaatgaga attgtgaaga aatcatctct ccaaactacg catcagagga ctttgatctt 60 gagatgttga cggacatctt caaggaccaa gacaactatg aggatgag 108 ١ >؟7٠<‎
IY ‏<اا>‎ 0 0٠
DNA > ١١< ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.> interaction motif ‏يقوم بترميز حافز تفاعل‎ Synthetic sequence ‏تتابع تركيبى‎ <YYY>
Z6 binding motif ‏بديل تمثيلى مدمج بحافز ارتباط‎ DREBIA all ‏نطاق تنشيط التعبير‎ ١
DNA
١ <g> ggctttgaca tggaagaaac attggtggag gccatctaca ctgctgaaca gagcgaggac 60 tttgagtttg aagcaatgtt catggattct cttctggcca acatggctga gggaatg 117 ٠
-١م4-‎ ay ><
AY > ١<
DNA > ١١< ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.> © interaction motif ‏يقوم بترميز حافز تفاعل‎ Synthetic sequence ‏تتابع تركيبى‎ <YYY>
Z6 DNA binding motif ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى 1 +08 مدمج بحافز ارتباط‎
AY <g> gaacagtcag aaggtgcttt ctacatggat gactttgagt tcgagacaat gttcatggac 0 acccttctgg ataacatggc agaggga 87 ٠
AY <YV.> 47 ‏<اا”؟>‎ ‎DNA <Y\Y> ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.> ١١ interaction motif ‏يقوم بترميز حافز تفاعل‎ Synthetic sequence ‏تتابع تركيبى‎ <YYY>
Z6 binding motif ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى 10071 بديل تمثيلى مدمج بحافز ارتباط‎
DNA
7 ‏<..؛>‎ ‎tcagctggga aggcagtctt ggatgatgag gactttgagt ttgaagccat ‏عدووماو‎ 60 ٠
Ng. atgggtgcct gctgggetgg agcetggcttt gectgac 96 1: <Y).>
YY ‏<ااا>‎
DNA <Y\Y> ‏اصطناعى‎ >؟١<‎ oo <YY.>
TQGUSS ‏بادئ‎ <YYY> <.ء؛> :1 agacagagtg tgatatctac cc 22 <YY.> ٠
Yo <YVY>
DNA <Y\Y> <؟١؟>‏ اصطناعى <YY.>
TQGUSA ‏بادئى‎ <YYY> ٠٠١ <..؛> 90 ccatcagcac gttatcgaat 20 76 <YY).>
Yi ‏<ااا>‎ £Y14
-١41-
DNA ‏؟>‎ ١ < <؟١؟>‏ اصطناعى <YY.>
TQGUSFQ jus FAM <YYY> 7 ‏م <..؛>‎ cacaaaccgt tctactttac tggctt 26 ay <YY).> ٠١ >اا١<‎
DNA ‏؟>‎ ١ < ‏اصطناعى‎ >؟١3<‎ 0٠ <YY.>
BYEEFU119F ‏بادئ‎ <YYY>
AY >) ‏<.مء‎ aggctcccac ttcaggatg 19
AN >< Yo
Yo <YVY>
DNA ‏؟>‎ ١ < <؟١؟>‏ اصطناعى <YY.>
-١7-
BYEEFU119R ‏<؟؟> بادئ‎
AN ‏<.ء؛>‎ ‎cacgaccaac agggacagta 20 49 <Y).> ٠١ ‏<ااا>‎ 5
DNA <Y\Y> ‏اصطناعى‎ >؟١؟<‎ <YY.>
UPA DNA ‏نطاق ارتباط‎ <VYY> <YY.> Y. misc feature <YY\> (\¥)--("Y) <YYY> t ‏أو‎ ,8, ©, 9 ian <yyr> ‏<.ء؛> ؟‎ tatataaacc tnnccctct 19 ١٠
Yeo <YVe>
Ye <Y\\>
PRT >< ‏اصطناعى‎ >؟١؟<‎ £Y14
-6©- <YY.> interaction ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى تركيبى تمثيلى يشتمل على حافز تفاعل‎ <YYY> motif
ERF2 ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى لنبات‎
Yoo >... ‏م‎ ‎Gly Met Thr His Asp Pro Val Ser Tyr Gly Ala Leu Asp Val Asp Ala
Yo Yo ° ١
Phe His Phe Asp Thr Ser Ser Ser Asp Ala Leu Gly lle Asp Asp Phe
Yo Yo Ye.
Gly Gly ٠ ٠١١ <YVY.>
YY ><
PRT >< ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.> ١١ interaction ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى تركيبى تمثيلى يشتمل على حافز تفاعل‎ <YYY> motif
PTI4 ‏تنشيط التعبير الجينى لنبات‎ Glas ٠١١٠ >..<
Gly Met Thr His Asp Pro Val Ser Tyr Gly Ala Leu Asp Val Asp Asp
Yo Yo ° ١
Ser Glu Asp Met Val lle Tyr Gly Leu Leu Lys Asp Ala Leu Gly lle
Yo Yo Ye.
Asp Asp Phe Gly Gly © vo ٠١١ <YVY.>
YY >"١<
PRT >< ‎٠‏ <3١؟>‏ اصطناعى ‎<YY.>‏ ‎Glas <YYY>‏ تنشيط التعبير الجينى تركيبى تمثيلى يشتمل على حافز ‎interaction Jel&‏ ‎motif‏ ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى لنبات ‎AtERFT‏ ‎YoY ‏<..؛>‎ No
Gly Met Thr His Asp Pro Val Ser Tyr Gly Ala Leu Asp Val Glu Asn
Yo Yo ° ١
Asp Ser Glu Asp Met Leu Val Ala Leu Gly lle Asp Asp Phe Gly Gly ‎Yo Yo Ye.
—V40- ٠١١ <VY.>
YY >"١٠<
PRT >< ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.> © interaction ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى تركيبى تمثيلى يشتمل على حافز تفاعل‎ <YYY> motif
ORCA2 ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى لنبات‎ ٠١١ <g>
Gly Met Thr His Asp Pro Val Ser Tyr Gly Ala Leu Asp Val Glu Asp ٠
Yo Yo ° ١
Leu Ser Asp lle lle Leu Thr Asp Ala Leu Gly lle Asp Asp Phe Gly
Yo Yo Ye.
Gly
Yet <YYe> Vo
YA ><
PRT >< ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.>
-١41- interaction ‏تركيبى تمثيلى يشتمل على حافز تفاعل‎ <YYY> motif
DREBIA ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى لنبات‎
Yet >..<
Gly Met Thr His Asp Pro Val Ser Tyr Gly Ala Leu Asp Val Glu Asn ©
Yo Yo ° ١
Ala Phe Tyr Met His Asp Glu Ala Met Phe Glu Met Pro Ala Leu Gly
Yo Yo Ye. lle Asp Asp Phe Gly Gly
Yo Yo
Yeo >7”١٠<
YY >"١<
PRT >< ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.> ١١ interaction ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى تركيبى تمثيلى يشتمل على حافز تفاعل‎ <YYY> motif
CBF1 ‏تنشيط التعبير الجينى لنبات‎ Glas ٠.٠١ ‏<..؛>‎
-١4-
Gly Met Thr His Asp Pro Val Ser Tyr Gly Ala Leu Asp Val Asp Glu
Yo Yo ° ١
Glu Thr Met Phe Gly Met Pro Ala Leu Gly lle Asp Asp Phe Gly Gly
Yo Yo Ye. ٠١١ <YYe> ©
Yo >؟١١<‎
PRT >< ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.> interaction Jel& ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى تركيبى تمثيلى يشتمل على حافز‎ <YYY> ٠ motif
DOF1 ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى نبات‎ ٠١١ >..<
Gly Met Thr His Asp Pro Val Ser Tyr Gly Ala Leu Asp Val Glu Asp
Yo Yo ° ١ ١١
Ser Phe Val Trp Pro Ala Ala Ser Phe Asp Ala Leu Gly lle Asp Asp
Yo Yo Ye.
Phe Gly Gly vo
-١48- ٠١ال‎ >7١٠١<
Ye >"”١<
PRT >< ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.> © interaction Jel& ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى تركيبى تمثيلى يشتمل على حافز‎ <YYY> motif ‏-انطاق تنشيط التعبير الجينى بديل‎ 2
YoV ‏<م.>‎
Gly Met Thr His Asp Pro Val Ser Tyr Gly Ala Leu Asp Val Asp Asp ٠
Yo Yo ° ١
Phe His Phe Glu Thr Met Phe Ser Asp Ala Leu Gly lle Asp Asp Phe
Yo Yo Ye.
Gly Gly
YeA <YYe> Vo
YY >"١٠<
PRT >< ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.>
-١44- interaction ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى تركيبى تمثيلى يشتمل على حافز تفاعل‎ <YYY> motif ‏-انطاق تنشيط التعبير الجينى بديل‎ 2
Ye A ><
Asn Asp Ser Glu Asp Met Leu Val Tyr Gly Leu Leu Lys Asp Asp Phe ©
Yo Yo ° ١
His Phe Glu Thr Met Phe Ser Asp Leu Ser Cys Leu Phe Asp Phe Pro
Yo Yo Ye.
Ala ٠١١ <YV.> Yo
Ye <YYY\>
PRT >< ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.> interaction ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى تركيبى تمثيلى يشتمل على حافز تفاعل‎ <YYY> ١ motif 4 انطاق تنشيط التعبير الجينى بديل <م.> ‎٠١١‏ ‎Gly Met Thr His Asp Pro Val Ser Tyr Gly Ala Leu Asp Val Asp Asp‏
Yam
Yo Yo ° ١
Phe Glu Phe Glu Met Met Phe Thr Asp Ala Leu Gly lle Asp Asp Phe
Yo Yo Ye.
Gly Gly ١٠١ <YVYe> 0
YA ><
PRT >< ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.> interaction Jel& ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى تركيبى تمثيلى يشتمل على حافز‎ <YYY> ٠ motif ‏بديل‎ PTI4 ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى‎
ARIES
Cys Leu Thr Glu Thr Trp Gly Asp Leu Pro Leu Lys Val Asp Asp Phe
Yo Yo ° ١ ١١
Glu Phe Glu Met Met Phe Thr Asp Ala Leu Ser Val Gly Trp Ser Pro
Yo Yo Ye.
Phe Ser Phe Thr Ala Gly vo
-٠*.١- ١١١ <YY.>
Ye >"”١<
PRT >< ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.> © interaction Jel& ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى تركيبى تمثيلى يشتمل على حافز‎ <YYY> motif ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى 8151471 بديل‎ ١١١ >..<
Gly Met Thr His Asp Pro Val Ser Tyr Gly Ala Leu Asp Val Glu Asn ٠
Yo Yo ° ١
Asp Phe Glu Phe Glu Met Phe Thr Asp Ala Leu Gly lle Asp Asp Phe
Yo Yo Ye.
Gly Gly
IY <YY.> Yo
Ye <YYY\>
PRT >< ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.>
د ‎<YYY>‏ نطاق تنشيط التعبير الجينى تركيبى تمثيلى يشتمل على حافز تفاعل ‎interaction‏ ‎motif‏ ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى 8151471 بديل ‎IY >..<‏ ‎Cys Phe Thr Glu Ser Trp Gly Asp Leu Pro Leu Lys Glu Asn Asp Phe ©‏ ‎Yo Yo ° ١‏ ‎Glu Phe Glu Met Phe Thr Asp Tyr Gly lle Leu Asn Asp Ala Phe His‏ ‎Yo Yo Ye.‏
Gly Gly
IY <YYe> 0 0٠
YY >"١٠<
PRT >< ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.> interaction ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى تركيبى تمثيلى يشتمل على حافز تفاعل‎ <YYY> ١ motif ‏بديل‎ ORCA2 ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى‎
IY <g>
ا ‎Gly Met Thr His Asp Pro Val Ser Tyr Gly Ala Leu Asp Val Glu Asp‏ ‎Yo Yo ° ١‏ ‎Phe Asp Leu Glu Met Leu Thr Asp Ala Leu Gly lle Asp Asp Phe Gly‏ ‎Yo Yo Ye.‏ ‎Gly o‏ ‎Ye <YVY.>‏ ‎7١ >"”١<‏ ‎PRT ><‏ <2١؟١>‏ اصطناعى > ‎<YYY>‏ نطاق تنشيط التعبير الجينى تركيبى تمثيلى يشتمل على حافز تفاعل ‎interaction‏ ‎motif‏ ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى ‎ORCA2‏ بديل ‎YVYE >..<‏ ‎Phe Asn Glu Asn Cys Glu Glu lle lle Ser Pro Asn Tyr Ala Ser Glu ١٠‏ ‎Yo Yo ° ١‏ ‎Asp Phe Asp Leu Glu Met Leu Thr Asp lle Phe Lys Asp Gln Asp Asn‏ ‎Yo Yo Ye.‏ ‎Tyr Glu Asp Glu‏
VIP vo
YYo ><
Ye <YYY\>
PRT >< ‎oo‏ <١؟>‏ اصطناعى ‎<YY.>‏ ‎<YYY>‏ نطاق تنشيط التعبير الجينى تركيبى تمثيلى يشتمل على حافز ‎interaction Jel&‏ ‎motif‏ ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى ‎DREBIA‏ بديل ‎YYo <€ve> Vo
Gly Met Thr His Asp Pro Val Ser Tyr Gly Ala Leu Asp Val Glu Asp
Yo Yo ° ١
Phe Glu Phe Glu Ala Met Phe Met Asp Ala Leu Gly lle Asp Asp Phe ‎Yo Yo Ye. ‎Gly Gly ٠١
YT <YY.e> 7 >"١١<
PRT >< ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎
٠, <YY.> interaction Jel& ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى تركيبى تمثيلى يشتمل على حافز‎ <YYY> motif ‏بديل‎ DREBIA ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى‎
WT <¢ee> 0
Gly Phe Asp Met Glu Glu Thr Leu Val Glu Ala lle Tyr Thr Ala Glu
Yo Yo ° ١
Gln Ser Glu Asp Phe Glu Phe Glu Ala Met Phe Met Asp Ser Leu Leu
Yo Yo Ye.
Ala Asn Met Ala Glu Gly Met ٠ vo
YY <YY.>
Ye <YYY\>
PRT >< ‏اصطناعى‎ >؟١3<‎ ١ <YY.> interaction Jel& ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى تركيبى تمثيلى يشتمل على حافز‎ <YYY> motif ‏بديل‎ CBF1 ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى‎
RVI
١٠٠ <¢ve>
Gly Met Thr His Asp Pro Val Ser Tyr Gly Ala Leu Asp Val Asp Asp
Yo Yo ° ١
Phe Glu Phe Glu Thr Met Phe Met Asp Ala Leu Gly lle Asp Asp Phe
Yo Yo ١ 2
Gly Gly ‏مالا‎ >< ١ >”ا١ا<‎
PRT >< ‎٠‏ <3١؟>‏ اصطناعى ‎<YY.>‏ ‎<YYY>‏ نطاق تنشيط التعبير الجينى تركيبى تمثيلى يشتمل على حافز ‎interaction Jel&‏ ‎motif‏ ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى ‎CBF1‏ بديل ‎No‏ لسن ا را ‎Glu GIn Ser Glu Gly Ala Phe Tyr Met Asp Asp Phe Glu Phe Glu Thr‏ ‎Yo Yo ° ١‏ ‎Met Phe Met Asp Thr Leu Leu Asp Asn Met Ala Glu Gly‏ ‎Yo ٠١
"١ ‏ل,‎ ‎١٠١ <YY.>
Ye >"”١<
PRT >< ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.> © interaction Jel& ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى تركيبى تمثيلى يشتمل على حافز‎ <YYY> motif ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى 0071 بديل‎ ١٠١ ><
Gly Met Thr His Asp Pro Val Ser Tyr Gly Ala Leu Asp Val Glu Asp ٠
Yo Yo ° ١
Phe Glu Phe Glu Ala Met Phe Thr Asp Ala Leu Gly lle Asp Asp Phe
Yo Yo Ye.
Gly Gly
YY. <YYe> Vo
YY >"١<
PRT >< ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.>
- ‏م‎ ‎interaction ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى تركيبى تمثيلى يشتمل على حافز تفاعل‎ <YYY> motif ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى 0071 بديل‎ ١7١ ‏<م.)>‎ ‎Ser Ala Gly Lys Ala Val Leu Asp Asp Glu Asp Phe Glu Phe Glu Ala ©
Yo Yo ° ١
Met Phe Thr Asp Met Gly Ala Cys Trp Ala Gly Ala Gly Phe Ala Asp
Yo Yo Ye. ١١7١ <YVY.>
YY ‏<ااا>‎ 0٠
PRT >< ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.>
VERF2 7 ‏حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل‎ <YYY> <YY.> ١١
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (Y)--(Y) <YYY>
Glu J Asp Jie Xaa <YYY> <YY.> v4
MISC FEATURE <vy\> )1(..)1( <YYY>
Glu J Asp Jie Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE <yvy> ‏ه‎ ‎(A).-(M) <YYY>
Met J ,Ala, Val, lle, Leu ‏يمثل‎ Xaa <YY¥> <YY.>
MISC FEATURE <vy\> )5(..)5( <YYY> Ye
Tyr ‏أو‎ ,Phe, Trp ‏يمثل‎ Xaa <YYY>
YYY <g>
Asp Xaa Phe His Phe Xaa Thr Xaa Xaa Ser Asp a ° ١
YYY >١٠< Yo
YY <YYY>
PRT <Yy\yvy> ‏اصطناعى‎ <YIT> <YY.> £Y14 yy.
VPTIA 7 ‏حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل‎ <YYY> <YY.>
MISC FEATURE <vy\> (Y).-(Y) <YYY>
Ser JPhe ‏يمتل‎ Xaa <YY¥> © <YY.>
MISC FEATURE <vy\> (°).-(°) ><
Tyr ‏أو‎ ,Phe, Trp ‏يمثل‎ Xaa <YYY> <YY> ٠
MISC FEATURE <vy\> )1(..)1( <YYY>
Glu J Asp Jie Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE >؟١«‎ ١٠ (A).-(M) <YYY>
Met J ,Ala, Val, lle, Leu ‏يمثل‎ Xaa <YY¥> <YY.>
MISC FEATURE <vy\> £Y14
-؟١١-‎ )5(..)5( <YYY>
Tyr ‏أو‎ ,Phe, Trp ‏يمثل‎ Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ )0(..0( <YYY> ©
Leu J Thr ‏يمثل‎ Xaa <YYY>
YYY >..<
Asp Asp Xaa Glu Xaa Xaa Met Xaa Xaa Xaa Asp
Yo ° ١
YYY <YYe> 0٠
VY >”١ا١ا<‎
PRT >< ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.>
VAERF1 7 ‏حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل‎ <YYY> Vo <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (£).-(%) <YYY>
Ser J Phe ‏يمتثل‎ Xaa <YYY>
<YY.>
MISC FEATURE <vy\> )1(..)1( <YYY>
Tyr ‏أو‎ ,Phe, Trp ‏يمثل‎ Xaa <YYY> <YY.> ‏م‎
MISC FEATURE <vy\> (V)--(Y) <YYY>
Glu J Asp Jie Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE >< ٠ )5(..)5( <YYY>
Leu J ,Phe, Trp, Tyr Jie Xaa <YY¥> <YY.>
MISC FEATURE <vy\> )١(..0( <YYY> ٠١
Val J Thr Jig Xaa >١7 77< <YY.>
MISC FEATURE <vy\> (0 ١(..)١ ( <YYY>
١١+
Glu J Asp ‏يمثل‎ Xaa <YYY>
YYY >..<
Glu Asn Asp Xaa Glu Xaa Xaa Met Xaa Xaa Xaa
Yo ° ١ ‏ا‎ >اا٠ا<‎ © ٠١ <YVYV>
PRT >< ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.>
VORCA2 7 ‏حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل‎ <YYY> ٠ <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (7)--(Y) <YYV>
Leu §Phe ‏يمثل‎ Xaa <vYYY> <YY.> ١١
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (£).-(%) <YYY>
Asp J ,Phe, Tyr, Trp ‏يمثل‎ Xaa <YYY> <YY.>
—Yy¢-
MISC FEATURE <vy\> (°).-(°) ><
Leu J,Asp, Glu, lle Jie Xaa <YY¥> <YY.>
MISC FEATURE <yvy> ‏ه‎ ‎)1(..)1( <YYY> ‏و‎ <YYY> <YY.>
MISC FEATURE <vy\> (V)--(Y) <YYY> ٠
Met J ,Ala, Val, lle, Leu ‏يمثل‎ Xaa <YY¥> <YY.>
MISC FEATURE <vy\> (A).-(M) <YYY>
Leu J ,Phe, Tyr, Trp ‏يمثل‎ Xaa <YYY> ‏د‎ ‎YYE <g>
Glu Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Thr Asp a 2 ١
YYo >١7 ٠١<
—Yyo-
YY <YYY>
PRT <Yy\yvy> ‏اصطناعى‎ <YIT> <YY.>
VDREBIA 7 ‏تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل‎ ila <YYY> © <YY.>
MISC FEATURE <vy\> (Y)--(Y) <YYY>
Asn J Asp, Glu ‏يمثل‎ Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE <vy\> (°).-(°) ><
Trp ‏أو‎ , 9028, Tyr ‏يمثل‎ Xaa <YYY> <YY.>
MISC_FEATURE <YYy> ‏مد‎ ‎)1(..)11( <vYY>
Pro J Asp, Glu Jie Xaa <YY¥>
Yo <t..>
Glu Xaa Phe Glu Xaa Glu Ala Met Phe Met Xaa £Y14
-؟١7-‎ ve ° ١ ١7101 >١7٠<
YY >”١ا١<‎
PRT >١7< ‏اصطناعى‎ >؟١<‎ oo <YY.>
VCBF1 7 ‏حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل‎ >< <YY.>
MISC FEATURE <vy\> (Y)--(Y) <YYY> 0 ٠١
Glu J Asp ‏يمثل‎ Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE <vy\> (°)--(°) <YYY>
Tyr J ,Phe, Trp ‏يمثل‎ Xaa <YYY> Yo <YY.>
MISC FEATURE <vy\> )11(..)11( <YYY>
Pro J Asp, Glu Jie Xaa <YY¥> £Y14
-؟1١١/-‎ ٠7021 >..<
Asp Xaa Phe Glu Xaa Glu Thr Met Phe Met 38 a ° ١ ٠١١ <YY.>
VY ‏<ااا>‎ 5
PRT >< ‏اصطناعى‎ >١؟١2<‎ <YY.>
VDOF1 7 ‏حافز تفاعل نطاق تنشيط التعبير الجينى بديل‎ <YYY> >
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (£).-(%) <YYY>
Val J Glu ‏يمثل‎ Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE >< ١٠١ (°).-(°) ><
Tyr ‏أو‎ ,Phe, Trp ‏يمثل‎ Xaa <YYY> <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎
)1(..)1( ><
Pro J Asp, Glu Jie Xaa >77 7< <YY.>
MISC FEATURE >؟؟١<‎ (A).-(M) <YYY> oo
Met J ,Ala, Val, lle, Leu ‏يمثل‎ Xaa <YY¥>
YYV <¢ve>
Glu Asp Phe Xaa Xaa Xaa Ala Xaa Phe Thr Asp a 2 ١
Ye

Claims (8)

  1. -؟١؟-‏ عناصر الحماية ‎١‏ بروتين اندماج ‎fusion protein‏ لمنشط نسخى تركيبى ‎synthetic transcriptional‏ ‎activator‏ يشتمل على: عديد ببتيد رابط ل ‎DNA-binding polypeptide DNA‏ ؛ و © عديد ببتيد حافز تفاعل ‎interaction motif polypeptide‏ نطاق تنشيط التعبير الجينى ‎transactivation domain‏ مختار من المجموعة التى تتكون من المتواليات أرقام: ‎NYSAR‏
    ‏". بروتين اندماج ‎fusion protein‏ المنشط النسخى التركيبى ‎synthetic transcriptional‏ ‎activator‏ وفقاً لعنصر ‎١‏ حيث يتم اختيار عديد الببتيد الرابط ل ‎DNA-binding DNA‏ ‎polypeptide | ٠‏ من المجموعة ‎Al‏ تتكون من نطاق رابط ل ‎DNA-binding domain DNA‏ أصبع الخارصين ‎ezine finger‏ تتابع ارتباط توافقى ‎consensus binding sequence‏ من جين ‎LE‏ للتحريض ‎inducible gene‏ بواسطة ‎AVRBS3‏ أو تتابع ارتباط تركيبى ‎synthetic‏ ‎binding sequence‏ مصمم مته؛ ‎¢«GAL4; TAL; LexA‏ كاظم ‎tLacR ¢Tet repressor‏ ومستقبل هرمون ستيرويد ‎.steroid hormone receptor‏ ‎yo‏
    ‏". بروتين اندماج ‎fusion protein‏ المنشط النسخى التركيبى ‎synthetic transcriptional‏ ‎activator‏ وفقاً لعنصر ‎dua ١‏ يشتمل بروتين الاندماج ‎fusion protein‏ على ‎we‏ ببتيد رابط ل ‎DNA-binding polypeptide DNA‏ إضافى ‎aly‏ على الأقل. ‎Yo‏ 0 ؟. بروتين اندماج ‎fusion protein‏ المنشط النسخى التركيبى ‎synthetic transcriptional‏ ‎la, activator‏ لعنصر )¢ ‎dus‏ يشتمل بروتين اندماج ‎fusion protein‏ المنشط النسخى ‎transcriptional activator‏ على تتابع حمض أمينى ‎amino acid sequence‏ مختار من المجموعة التى تتكون من المتواليات أرقام: ‎AY‏ والمتواليات أرقام: ‎AY =v‏ ‎Yo‏ © . بروتين اندماج ‎fusion protein‏ المنشط النسخى التركيبى ‎synthetic transcriptional‏ ‎activator‏ وفقاً لعنصر ١؛‏ حيث يتم اختيار عديد ببتيد حافز تفاعل ‎interaction motif‏ نطاق ‎£Y14‏
    ‏تتكون من‎ Al ‏من المجموعة‎ transactivation domain polypeptide ‏تنشيط التعبير الجينى‎ ‏المتوالية‎ (VE ‏المتوالية رقم:‎ YA ‏المتوالية رقم:‎ YY ‏المتوالية رقم:‎ 16-٠١ nal ‏المتواليات‎ ‎OA ‏والمتوالية رقم:‎ OF ‏رقم: 460؛ المتوالية رقم: £7 المتوالية رقم:‎ synthetic transcriptional ‏المنشط النسخى التركيبى‎ fusion protein ‏بروتين اندماج‎ .١ © ‏نطاق‎ interaction motif ‏وفقاً لعنصر ١؛ حيث يتم اختيار عديد ببتيد حافز تفاعل‎ activator ‏تتكون من‎ Al ‏من المجموعة‎ transactivation domain polypeptide ‏تنشيط التعبير الجينى‎ ١ ‏المتوالية رقم:‎ (Yo ‏المتوالية رقم:‎ (YA ‏المتوالية رقم: 7 المتوالية رقم:‎ VV ‏المتوالية رقم:‎ OV ‏المتوالية رقم: 49 ؛ والمتوالية رقم:‎ ye synthetic transcriptional activator fusion ‏بروتين اندماج المنشط التسخى التركيبى‎ WY interaction motif ‏وفقاً لعنصر ١؛ حيث يتم اختيار عديد ببتيد حافز تفاعل‎ protein ‏من المجموعة التى‎ transactivation domain ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى‎ polypeptide ‏المتوالية‎ (VT ‏المتوالية رقم:‎ ٠0 ‏المتوالية رقم:‎ (VE ‏المتوالية رقم:‎ OA ‏تتكون من المتوالية رقم:‎ Of ‏والمتوالية رقم:‎ (EA ‏المتوالية رقم:‎ (EF ‏رقم:‎ Vo synthetic transcriptional ‏المنشط النسخى التركيبى‎ fusion protein ‏بروتين اندماج‎ A interaction motif ‏وفقاً لعنصر ١؛ حيث يتم اختيار عديد ببتيد حافز تفاعل‎ activator ‏من المجموعة التى‎ transactivation domain ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى‎ polypeptide ‏المتوالية‎ (VV ‏المتوالية رقم:‎ FY ‏المتوالية رقم:‎ (Vo ‏المتوالية رقم:‎ VA ‏تتكون من المتوالية رقم:‎ ٠ .505 ‏رقم: 47؛ المتوالية رقم: £9( والمتوالية رقم:‎ synthetic transcriptional ‏المنشط النسخى التركيبى‎ fusion protein ‏بروتين اندماج‎ .4 interaction motif ‏وفقاً لعنصر ١؛ حيث يتم اختيار عديد ببتيد حافز تفاعل‎ activator ‏من المجموعة التى‎ transactivation domain ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى‎ polypeptide Yo £Y14
    -١7؟-‏ تتكون من المتوالية رقم: ‎(Fo‏ المتوالية رقم: ‎(VT‏ المتوالية رقم: ‎(YY‏ المتوالية رقم: ‎(VA‏ المتوالية رقم: 44؛ المتوالية رقم: ‎٠‏ ؛ والمتوالية رقم: ‎OT‏
    ‏. بروتين اندماج ‎fusion protein‏ المنشط النسخى التركيبى ‎synthetic transcriptional‏ ‎activator o‏ وفقاً لعنصر ١؛‏ حيث يتم اختيار عديد ببتيد حافز تفاعل ‎interaction motif‏ ‎polypeptide‏ نطاق تنشيط التعبير الجينى ‎transactivation domain‏ من المجموعة التى تتكون من المتوالية رقم: ‎oY)‏ المتوالية رقم: ‎YY‏ المتوالية رقم: ‎FY‏ المتوالية رقم: ‎(FA‏ المتوالية رقم: £0 المتوالية رقم: )0 والمتوالية رقم: ‎OV‏
    ‎.١١ Ve‏ بروتين اندماج ‎fusion protein‏ المنشط النسخى التركيبى ‎synthetic transcriptional‏ ‎activator‏ وفقاً لعنصر ١؛‏ حيث يشتمل بروتين الاندماج ‎fusion protein‏ على عديد ببتيد حافز تفاعل ‎interaction motif polypeptide‏ نطاق تنشيط تعبير جينى ‎transactivation‏ ‎ale) domain‏ واحد على الأقل. ‎NY | ٠5‏ بروتين اندماج ‎fusion protein‏ منشط نسخى تركيبى ‎synthetic transcriptional‏ ‎activator‏ والذى_يزيد التعبير الجينى ‎expression‏ _لتتابع النيوكليوتيد ‎nucleotide‏ ‏906 موضوع الاهتمام عندما يكون تتابع النيوكليوتيد ‎NUCleotide sequence‏ موضوع الاهتمام مرتبط بشكل ‎Je‏ بتتابع نيوكليوتيد ‎nucleotide sequence‏ ثانى؛ يشتمل بروتين الاتدماج ‎fusion protein‏ على: ‎٠‏ عديد ببتيد رابط ل ‎DNA-binding polypeptide DNA‏ والذى يرتبط على وجه التحديد بتتابع النيوكليوتيد ‎nucleotide sequence Gl‏ ؛ و عديد ببتيد حافز تفاعل ‎interaction motif polypeptide‏ نطاق تنشيط التعبير الجينى لبروتين ‎protein transactivation domain‏ مختار من المجموعة التى تتكون من المتواليات أرقام: ‎1-٠‏ المتوالية رقم: ‎(YY‏ المتوالية رقم: ‎YA‏ المتوالية رقم: ‎(VE‏ المتوالية رقم: ‎٠‏ 4؛ المتوالية ‎Yo‏ رقم: £7( المتوالية رقم: ‎OY‏ والمتوالية رقم: ‎OA‏ ‎£Y14‏
    -؟؟؟- ‎VY‏ بروتين اندماج ‎fusion protein‏ منشط نسخى تركيبى ‎synthetic transcriptional‏ ‎activator‏ يشتمل على: عديد ‎ain‏ رابط ل ‎DNA-binding polypeptide DNA‏ ؛ و ‎axe‏ ببتد حافز تفاعل ‎interaction motif polypeptide‏ نطاق تنشيط التعبير الجينى ‎transactivation 0000810 ©‏ يحتوى على ‎%A‏ تطابق تتابع ‎sequence identity‏ مع تتابع حمض أمينى ‎amino acid sequence‏ مختار من المجموعة التى تتكون من المتواليات أرقام: ‎1-٠‏ المتوالية رقم: ‎(YY‏ المتوالية رقم: ‎YA‏ المتوالية رقم: ‎(VE‏ المتوالية رقم: ‎٠‏ 4؛ المتوالية رقم: 476 ؛ المتوالية رقم: ‎OY‏ والمتوالية رقم: ‎OA‏ ‎NE Ve‏ بروتين اندماج ‎fusion protein‏ المنشط النسخى التركيبى ‎synthetic transcriptional‏ ‎activator‏ وفقاً لعنصر ‎(VY‏ حيث يحتوى عديد ببتد تفاعل ‎interaction polypeptide‏ نطاق تنشيط التعبير الجينى 0000810 ‎transactivation‏ على 70685 تطابق تتابع مع تتابع حمض أمينى ‎amino acid sequence‏ مختار من المجموعة التى تتكون من المتواليات أرقام:؛ ‎-٠١‏ ‎VT‏ المتوالية رقم: ‎(YY‏ المتوالية رقم: ‎VA‏ المتوالية رقم: ‎(VE‏ المتوالية رقم: 560 المتوالية رقم: ‎Vo‏ 46؛ المتوالية رقم: ‎oY‏ والمتوالية رقم: ‎OA‏ ‎Vo‏ بروتين اندماج ‎fusion protein‏ المنشط النسخى التركيبى ‎synthetic transcriptional‏ ‎activator‏ وفقاً لعنصر ‎(VY‏ حيث يحتوى عديد ببتد تفاعل ‎interaction polypeptide‏ نطاق تنشيط التعبير الجينى 0000810 ‎transactivation‏ على 706960 تطابق تتابع مع تتابع حمض ‎٠‏ أمينى ‎amino acid sequence‏ مختار من المجموعة ‎Al‏ تتكون من المتواليات أرقام: ‎-٠‏ ‎VT‏ المتوالية رقم: ‎(YY‏ المتوالية رقم: ‎VA‏ المتوالية رقم: ‎(VE‏ المتوالية رقم: 560 المتوالية رقم: 7 المتوالية رقم: ‎OY‏ والمتوالية رقم: ‎OA‏
    ‏. بروتين اندماج ‎fusion protein‏ المنشط ‎Ail‏ التركيبى ‎synthetic transcriptional‏ ‎activator ٠٠‏ وفقاً لعنصر ‎(VY‏ حيث يحتوى عديد ببتد تفاعل ‎interaction polypeptide‏ نطاق تنشيط التعبير الجينى ‎transactivation domain‏ على 9098 تطابق تتابع ‎sequence‏ ‎£Y14‏
    AAA ‏تتكون‎ Al ‏مختار من المجموعة‎ amino acid sequence ‏مع تتابع حمض أمينى‎ identity ‏المتوالية رقم: 34 المتوالية‎ YA ‏المتوالية رقم:‎ YY ‏المتوالية رقم:‎ ١6-٠١ ‏من المتواليات أرقام:‎ OA ‏والمتوالية رقم:‎ oY ‏المتوالية رقم:‎ a ‏المتوالية رقم:‎ ١ ‏رقم:‎ ‎fusion protein ‏بروتين اندماج‎ encoding ‏يقوم بترميز‎ nucleic acid ‏حمض نووى‎ .١١7 0 ‏_يشتمل الحمض النووى‎ synthetic transcriptional activator ‏تركيبى‎ Aw ‏منشط‎ ‏على:‎ nucleic acid ‏عديد الببتيد‎ encoding ‏أول يقوم بترميز‎ polynucleotide sequence ‏تتابع عديد نيوكليوتيد‎ ‏و‎ {DNA-binding polypeptide DNA ‏الرابط ل‎ ‏عديد ببتيد‎ encoding ‏يقوم بترميز‎ AG polynucleotide sequence ‏تتابع عديد نيوكليوتيد‎ - transactivation ‏نطاق تنشيط تعبير جينى‎ interaction motif polypeptide ‏حافز تفاعل‎ WAY + ‏مختار من المجموعة التى تتكون من المتواليات أرقام:‎ 0 ‏الأول‎ polynucleotide sequences ‏حيث يتم التعبير الجينى لتتابعات عديد النيوكليوتيد‎ .single transcript ‏فى إطار وفى نسخة أحادية‎ nucleic acid ‏والثانى من الحمض النووى‎ Vo nucleic ‏حيث يشتمل الحمض النووى‎ (VY ‏وفقاً لعنصر‎ nucleic acid ‏الحمض النووى‎ VA ‏إضافى واحد على الأقل يقوم‎ polynucleotide sequence ‏على تتابع عديد نيوكليوتيد‎ 0 .DNA-binding polypeptide DNA ‏عديد ببتيد رابط ل‎ encoding ‏بترميز‎ ‎nucleic ‏حيث يشتمل الحمض النووى‎ (VY ‏وفقاً لعنصر‎ nucleic acid ‏الحمض النووى‎ .١19 Yo ‏إضافى واحد على الأقل يقوم‎ polynucleotide sequence ‏على تتابع عديد نيوكليوتيد‎ 0 ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى‎ interaction polypeptide ‏عديد ببتيد تفاعل‎ encoding ‏بترميز‎ ‎NYSAR ‏مختار من المجموعة التى تتكون من المتواليات أرقام:‎ transactivation domain £Y14
    ‎LY‏ الحمض النووى ‎acid‏ ©61ا000 وفقاً لعنصر ‎(VY‏ حيث ترتبط تتابعات عديد النيوكليوتيد ‎polynucleotide sequences‏ الأول والثانى عملياً بعنصر تنظيمى جينى ‎gene regulatory‏
    ‎.element‏ ‏0 ١؟.‏ الحمض النووى ‎acid‏ 01101616 من عنصر ‎VY‏ حيث يتم فصل تتابعات عديد النيوكليوتيد ‎polynucleotide sequences‏ الأول ‎All‏ عن طريق ‎AB‏ عديد نيوكليوتيد ‎polynucleotide sequence‏ ثالث.
    ". الحمض النووى ‎nucleic acid‏ وفقاً لعنصر ‎VV‏ حيث يتم دمج الحمض النووى ‎nucleic‏ ‎host cell ‏خلية مضيفة‎ genome ‏فى جينوم‎ 8610 ٠ host cell ‏حيث تكون الخلية المضيفة‎ (YY ‏وفقاً لعنصر‎ nucleic acid ‏الحمض النووى‎ YY plant cell ‏خلية نباتية‎ ‎YE No‏ الحمض النووى ‎nucleic acid‏ وفقاً لعنصر ‎OY‏ حيث يتم اختيار عديد الببتيد الرابط ل ‎DNA-binding polypeptide DNA‏ من المجموعة التى تتكون من ‎Glas‏ رابط ل ‎DNA-‏ ‎binding domain DNA‏ أصبع الخارصين ‎ezine finger‏ تتابع ارتباط توافقى ‎consensus‏ ‎binding sequence‏ من جين قابل للتحريض ‎inducible gene‏ عن طريق ‎AVRBS3‏ § تتابع ارتباط تركيبى ‎synthetic binding sequence‏ مصمم منه؛ ‎tLexA (TAL ¢GAL4‏
    ‎.steroid hormone receptor ‏ومستقبل هرمون ستيرويد‎ tLacR ¢Tet repressor ‏كاظم‎ ٠ DNA ‏حيث يرتبط عديد الببتيد الرابط ل‎ (VE ‏وفقاً لعنصر‎ nucleic acid ‏الحمض النووى‎ Yo ‏على وجه التحديد بتتابع 5601160086 مختار من المجموعة التى‎ DNA-binding polypeptide A ‏والمتوالية رقم:‎ TA ‏المتوالية رقم:‎ CTY ‏تتكون من المتواليات أرقام:‎ ‎Yo ‎AY ‏وفقاً لعنصر‎ nucleic acid ‏يشتمل على حمض نووى‎ vector ‏ناقل‎ . ‎£Y14
    ه9١١"‏
    ‎.١‏ الناقل ‎vector‏ وفقاً لعنصر ‎(YT‏ حيث يشتمل الناقل ‎vector‏ على محدد قابل للاختيار ‎selectable marker‏ أو محدد قابل للفحص ‎.screenable marker‏
    ‎.YA ©‏ الناقل ‎vector‏ وفقاً لعنصر ‎(YT‏ حيث يكون الناقل ‎vector‏ ناقل تعبير جينى نباتى ‎plant‏
    .expression vector fusion protein ‏بروتين اندماج‎ encoding ‏يقوم بترميز‎ Nucleic acid ‏حمض نووى‎ .4 ‏يشتمل الحمض النووى‎ synthetic transcriptional activator ‏منشط نسخى تركيبى‎ ‏على:‎ nucleic acid ‎٠‏ تتابع عديد نيوكليوتيد ‎polynucleotide sequence‏ أول يقوم بترميز ‎encoding‏ عديد ببتيد رابط ل ‎DNA-binding polypeptide DNA‏ ؛ و تتابع عديد نيوكليوتيد ‎SG polynucleotide sequence‏ يقوم بترميز عديد ببتيد حافز تفاعل ‎interaction motif polypeptide‏ نطاق تنشيط التعبير الجينى ‎transactivation domain‏ يحتوى على ‎%A‏ تطابق تتابع مع تتابع حمض أمينى ‎amino acid sequence‏ مختار من ‎YY ‏المتوالية رقم:‎ ١6-٠١ ‏والمتواليات أرقام:‎ AY ‏المجموعة التى تتكون من المتواليات أرقام:‎ Vo OF ‏المتوالية رقم: 560؛ المتوالية رقم: £7( المتوالية رقم:‎ (VE ‏المتوالية رقم:‎ YA ‏المتوالية رقم:‎ 170-1٠١ ‏والمتوالية رقم: 8©؛ والمتواليات أرقام:‎ ‏الأول والثانى‎ polynucleotide sequences ‏حيث يتم التعبير الجينى لتتابعات عديد نيوكليوتيد‎ ‏6ا5/09.‎ transcript ‏فى إطار وفى نسخة أحادية‎ nucleic acid ‏من الحمض النووى‎ ‎٠ ‎nucleic ‏حيث يشتمل الحمض النووى‎ (VA ‏وفقاً لعنصر‎ nucleic acid ‏الحمض النووى‎ .©٠ ‏مع‎ JN ‏تطابق على‎ 9068٠0 ‏يحتوى على‎ nucleotide sequence ‏على تتابع نيوكليوتيد‎ 0 ‏تتكون من المتوالية رقم:‎ Al ‏مختار من المجموعة‎ Nucleotide sequence ‏تتابع نيوكليوتيد‎ 1-٠ ‎Yo ‎£Y14
    ‎YY‏ الحمض النووى ‎nucleic acid‏ وفقاً لعنصر ‎(VA‏ حيث يشتمل الحمض النووى ‎nucleic‏ ‏0 على تتابع نيوكليوتيد ‎nucleotide sequence‏ يحتوى على 90685 تطابق على ‎JN‏ مع تتابع نيوكليوتيد ‎sequence‏ 010160106 مختار من المجموعة ‎Al‏ تتكون من المتوالية رقم: ‎1-٠‏ ‎lo}‏ ‎YY‏ الحمض النووى ‎nucleic acid‏ وفقاً لعنصر ‎(VA‏ حيث يشتمل الحمض النووى ‎nucleic‏ ‏0 على تتابع نيوكليوتيد ‎nucleotide sequence‏ يحتوى على 96960 تطابق على ‎JN‏ مع تتابع نيوكليوتيد ‎sequence‏ 0101601106 مختار من المجموعة ‎Al‏ تتكون من المتوالية رقم: ‎1-٠‏ ‏0 ‎YY‏ الحمض النووى ‎nucleic acid‏ وفقاً لعنصر ‎(VA‏ حيث يشتمل الحمض النووى ‎nucleic‏ ‏0 على تتابع نيوكليوتيد ‎nucleotide sequence‏ يحتوى على 90695 تطابق على ‎JN‏ مع تتابع نيوكليوتيد ‎sequence‏ 010160106 مختار من المجموعة ‎Al‏ تتكون من المتوالية رقم: ‎1-٠‏ ‎Vo‏
    ‏؛؟. الحمض النووى ‎nucleic acid‏ وفقاً لعنصر ‎(VA‏ حيث يشتمل الحمض النووى ‎nucleic‏ ‏0 على تتابع نيوكليوتيد ‎nucleotide sequence‏ يحتوى على 96997 تطابق على ‎JN‏ مع تتابع نيوكليوتيد ‎sequence‏ 010160106 مختار من المجموعة ‎Al‏ تتكون من المتوالية رقم: ‎1-٠‏
    ‎Y.‏ ‎Yo‏ الحمض النووى ‎nucleic acid‏ وفقاً لعنصر ‎(VA‏ حيث يشتمل الحمض النووى ‎nucleic‏ ‎acid‏ تتابع ذ تيد ‎hucleotide sequence‏ يحتوى 6 تطاية الأقل م بع نيوكليوتي يحنو: بق & تتابع نيوكليوتيد ‎sequence‏ 010160106 مختار من المجموعة ‎Al‏ تتكون من المتوالية رقم: ‎1-٠‏ ‎Yo‏ ‎£Y14‏
    —YYV- nucleic ‏حيث يشتمل الحمض النووى‎ (VA ‏وفقاً لعنصر‎ nucleic acid ‏الحمض النووى‎ LY ‏تتكون من‎ A ‏مختار من المجموعة‎ nucleotide sequence ‏على تتابع نيوكليوتيد‎ 0 AY=A ‏المتوالية رقم:‎ DNA ‏وفقاً لعنصر ١؛ حيث يتم اختيار عديد الببتيد الرابط ل‎ nucleic acid ‏الحمض النووى‎ .7١7 © DNA- DNA ‏من المجموعة التى تتكون من نطاق رابط ل‎ DNA-binding polypeptide consensus ‏؛ تتابع ارتباط توافقى‎ zine finger ‏أصبع الخارصين‎ binding domain ‏أو تتابع‎ AVRBS3 ‏بواسطة‎ inducible gene ‏للتحريض‎ LE ‏من جين‎ binding sequence ‏كاظم‎ ¢GAL4; TAL; LexA ‏مصمم منه؛‎ synthetic binding sequence ‏ارتباط تركيبى‎ .steroid hormone receptor ‏ومستقبل هرمون ستيرويد‎ tack ¢Tet repressor ٠ ‏منشط نسخى‎ fusion protein ‏يقوم بترميز بروتين اندماج‎ Nucleic acid ‏حمض نووى‎ LFA ‏الذى يشتمل‎ nucleic acid ‏الحمض النووى‎ csynthetic transcriptional activator ‏تركيبى‎ ‏واحد على الأقل مختار من المجموعة التى‎ nucleotide sequence ‏على تتابع نيوكليوتيد‎ ‏تشتمل على:‎ ١ EV 6 ‏المتواليات أرقام:‎ ‏والذى يكون مطابق إلى حد كبير لأحد من المتواليات‎ nucleotide sequence ‏تتابع نيوكليوتيد‎ ‏أرقام: 86/-17؛‎ ‏الذى يكون قابل للتهجين على نحو‎ polynucleotide ‏عديد النيوكليوتيد‎ complement ‏مكمل‎ ‏لواحد على الأقل من المتواليات أرقام: -17؛و‎ specifically hybridizable ‏قابل للتحديد‎ ٠ ‏والذى‎ nucleotide sequence ‏لعديد النيوكليوتيد‎ reverse complement ‏المكمل العكسى‎ ‏لواحد على الأقل من‎ specifically hybridizable ‏يكون قابل للتهجين على وجه التحديد‎ ATA ‏المتواليات أرقام:‎ NY ‏لعنصر‎ nucleic acid ‏تشتمل على حمض نووى‎ cell ‏خلية‎ .©* Yo £Y14
    —YYA- ‏أو خلية خميرة‎ plant cell ‏خلية نباتية‎ cell ‏حيث تكون الخلية‎ (Fa ‏وفقاً لعنصر‎ cell ‏الخلية‎ .٠ .yeast cell YA ‏وفقاً لعنصر‎ nucleic acid ‏تشتمل على الحمض النووى‎ cell 44a.) lo} ‏أو خلية خميرة‎ plant cell ‏خلية نباتية‎ cell ‏وفقاً لعنصر )8( حيث تكون الخلية‎ cell ‏الخلية‎ . 7 .yeast cell expression of ‏لتتابع النيوكليوتيد‎ expression ‏لزيادة التعبير الجينى‎ method ‏طريقة‎ . ¥ method ‏تشتمل الطريقة‎ « host cell ‏ذو الأهمية فى خلية مضيفة‎ nucleotide 56008008 ٠ ‏على:‎ ‏تشتمل على‎ host cell ‏فى خلية مضيفة‎ ١١7 ‏وفقاً لعنصر‎ 01001616 acid ‏إدخال الحمض النووى‎ ‏ذو الأهمية؛ حيث يرتبط تتابع النيوكليوتيد‎ nucleotide sequence ‏تتابع النيوكليوتيد‎ iG nucleotide sequence ‏ذو الأهمية عملياً بتتابع نيوكليوتيد‎ nucleotide sequence « DNA-binding polypeptide DNA ‏والذى يرتبط على وجه التحديد بعديد الببتيد الرابط ل‎ Vo > nucleotide sequence ‏لتتابع النيوكليوتيد‎ expression ‏وبالتالى زيادة التعبير الجينى‎ host cell ‏الأهمية فى الخلية المضيفة‎ ‏فى‎ nucleic acid ‏وفقاً لعنصر £7( حيث يشتمل إدخال الحمض النووى‎ method ‏؛؟. الطريقة‎ nucleic acid ‏يشتمل على الحمض النووى‎ vector Jib ‏على إدخال‎ host cell ‏الخلية المضيفة‎ . ٠ host cell ‏فى الخلية المضيفة‎ ‏بثبات‎ nucleic acid ‏يتم دمج الحمض النووى‎ Cua ‏وفقاً لعنصر 7؛؛‎ method ‏الطريقة‎ to host cell ‏الخلية المضيفة‎ genome ‏فى جينوم‎ Yo £Y14
    . الطريقة ‎method‏ وفقاً لعنصر ‎(fF‏ حيث يكون تتابع النيوكليوتيد ‎nucleotide‏ ‎sequence‏ ذو الأهمية تتابع نيوكليوتيد خارجى ‎exogenous nucleotide lawl‏
    ‎.sequence‏ ‎LEV ©‏ الطريقة ‎method‏ وفقاً لعنصر 47 ‎Ss Gua‏ تتابع النيوكليوتيد ‎nucleotide‏
    .endogenous nucleotide sequence ‏ذو الأهمية تتابع نيوكليوتيد داخلى‎ sequence ‏فى‎ nucleic acid ‏الطريقة 011000 وفقاً لعنصر £7( حيث يشتمل إدخال الحمض النووى‎ LEA nucleic ‏على تهجين 02055179 نبات يشتمل على الحمض النووى‎ host cell ‏الخلية المضيفة‎ host cell ‏مع نبات يشتمل على الخلية المضيفة‎ 800 Ve nucleotide ‏لتتابع النيوكليوتيد‎ expression ‏لزيادة التعبير الجينى‎ method ‏طريقة‎ .4 ‏على:‎ method ‏؛ تشتمل الطريقة‎ host cell ‏الأهمية فى خلية مضيفة‎ 3 sequence AY ‏وفقاً لعنصر‎ 01001616 acid ‏تشتمل على الحمض النووى‎ host cell ‏إدخال فى خلية مضيفة‎ ‎Ve‏ تتابع النيوكليوتيد ‎nucleotide sequence‏ ذو الأهمية؛ حيث يرتبط تتابع النيوكليوتيد ‎sequence‏ 700160106 ذو الأهمية عملياً مع تتابع نيوكليوتيد ‎nucleotide sequence‏ ثانى والذى يرتبط على ‎aay‏ التحديد بعديد الببتيد الرابط ‎binding polypeptide‏ ل ‎«DNA‏ ‏وبالتالى زيادة التعبير الجينى ‎expression‏ لعديد النيوكليوتيد ‎nucleotide sequence‏ ذو الأهمية فى الخلية المضيفة ‎host cell‏
    ‎Y. ‎nucleotide ‏وفقاً لعنصر £9 حيث يشتمل إدخال تتابع النيوكليوتيد‎ method ‏الطريقة‎ Lo. ‏يشتمل على‎ vector ‏على إدخال ناقل‎ host cell ‏ذو الأهمية فى الخلية المضيفة‎ sequence host cell ‏ذو الأهمية فى الخلية المضيفة‎ nucleotide sequence ‏تتابع النيوكليوتيد‎ ‎Yo‏ ١د.‏ الطريقة ‎method‏ وفقاً لعنصر £9( حيث يتم دمج الحمض النووى ‎nucleic acid‏ بثبات فى جينوم ‎genome‏ الخلية المضيفة ‎host cell‏ ‎£Y14
    A nucleotide ‏وفقاً لعنصر £9( حيث يتم دمج تتابع النيوكليوتيد‎ method ‏الطريقة‎ oY ‏الثانى بثبات‎ nucleotide sequence ‏ذو الأهمية المرتبط عملياً بتتابع النيوكليوتيد‎ 5©00600©© host cell ‏الخلية المضيفة‎ genome ‏فى جينوم‎ nucleotide ‏وفقاً لعنصر £3( حيث يشتمل إدخال تتابع النيوكليوتيد‎ method ‏الطريقة‎ Lov © ‏نبات يشتمل‎ crossing ‏على تهجين‎ host cell ‏ذو الأهمية فى الخلية المضيفة‎ sequence ‏ذو الأهمية مع نبات يشتمل على الخلية‎ nucleotide sequence ‏على تتابع النيوكليوتيد‎ host cell ‏المضيفة‎ ‎nucleotide ‏لتتابع النيوكليوتيد‎ expression ‏لزيادة التعبير الجينى‎ method ‏طريقة‎ .4 00٠ ‏على:‎ method ‏؛ تشتمل الطريقة‎ host cell ‏ذو الأهمية فى خلية مضيفة‎ sequence ‏تشتمل على‎ host cell ‏فى خلية مضيفة‎ ١١7 ‏وفقاً لعنصر‎ 01001616 acid ‏إدخال الحمض النووى‎ ‏ذو الأهمية؛ حيث يرتبط تتابع النيوكليوتيد‎ nucleotide sequence ‏تتابع النيوكليوتيد‎ iG nucleotide sequence ‏ذو الأهمية عملياً بتتابع نيوكليوتيد‎ nucleotide sequence « DNA-binding polypeptide DNA ‏والذى يرتبط على وجه التحديد بعديد الببتيد الرابط ل‎ Vo ‏ذو الأهمية فى الخلية‎ nucleotide sequence ‏وبالتالى زيادة التعبير الجينى لتتابع النيوكليوتيد‎ host cell ‏المضيفة‎ ‏يقوم‎ Nucleotide sequence ‏يشتمل على تتابع نيوكليوتيد‎ nucleic acid ‏حمض نووى‎ 00 ‏نطاق تعبير‎ interaction motif polypeptide ‏عديد ببتيد حافز تفاعل‎ encoding ‏بترميز‎ Yo ‏مختار من المجموعة التى تتكون من المتواليات أرقام:‎ transactivation domain ‏جينى‎ ‎7-١١١ ‏للتهجين‎ (LE ‏والذى يكون‎ nucleic acid ‏الحمض النووى‎ complement Js . ‏على وجه التحديد مع الحمض النووى 0106166680610 وفقاً لعنصر‎ specifically hybridizable Yo
    ‏ده.‎ ‎£Y14
    -١1؟‏ ‎Lov‏ المكمل العكسى ‎complement‏ 6176156 لحمض نووى ‎nucleic acid‏ والذى يكون قابل للتهجين على وجه التحديد ‎specifically hybridizable‏ مع الحمض النووى ‎nucleic acid‏ ‎la,‏ لعنصر 00 ‎0A 0‏ الحمض النووى ‎nucleic acid‏ لعنصر 00 حيث يتم اختيار عديد ببتيد حافز تفاعل
    نطاق ‎interaction motif polypeptide‏ تنشيط التعبير الجينى ‎transactivation domain‏ من المجموعة التى تتكون من المتوالية رقم: ‎YY‏ المتوالية رقم: ‎«YA‏ المتوالية رقم: رز المتوالية رقم: 2 المتوالية رقم: 1 المتوالية رقم: الح والمتوالية رقم: ‎OA‏ interaction motif ‏يشتمل على عديد ببتيد حافز تفاعل‎ polypeptide ‏عديد ببتيد‎ .4 000 ٠ ‏مختار من المجموعة‎ transactivation domain ‏نطاق تنشيط تعبير جينى‎ polypeptide AYY = ١7١ ‏التى تتكون من المتواليات أرقام:‎ ‏حافز تفاعل‎ afin ‏وفقاً لعنصر 09 حيث يتم اختيار عديد‎ polypeptide ‏عديد الببتيد‎ .
    transactivation domain ‏نطاق تنشيط التعبير الجينى‎ interaction motif polypeptide Yo ‏المتوالية رقم: رز المتوالية‎ «YA ‏المتوالية رقم:‎ YY ‏من المجموعة التى تتكون من المتوالية رقم:‎ OA ‏رقم: 2 المتوالية رقم: 1 المتوالية رقم: الح والمتوالية رقم:‎
    473 480 VPI6TAD: DDFEFEQMFTD * C3 *ج*‎ 0#
    SAAR GMTHD-PVSYG-A-LDV- ‏تخا تش ان د و ل‎ GIDD (0: ib ‏مت‎ VPIE 2005-0311 2-01 ‏ا ا ا‎ 15017 )7 af 4 ‏زو‎ ERF2 170-11 ‏كفم عاو يا دع ا ووو‎ SVG ‏[ستوائية رقي‎ PTH 71-25-03 ‏(موالية رقي 4) 01737 ها و ا ل‎ 1 0-11 ‏(ستوائية رقب 3( 0و‎ ORCAZ 015 ‏إمترالية رق 1( ادم تكو ماوت لام لوا ااا دو عا لف7175‎ 05 1 EQS~EGAFYM-. ‏اثوالية رق 7 11174و كد لك‎ 1 ‏ا ا ا ا ا ا‎ DDS ‏ات‎ MN CATA (8 ‏(متوالية رقم‎ 001 ‏و7‎ ‏ع1‎ ‎SPFSFTAG ‎DAFHGG- ‏معاي‎ ‏تاقد‎ ‏ساعد‎ ‎{FAGFAD- ‘ ‏شكل‎
    Eps Lod ‏مك‎
    ‎— . 2 ‏حرا : ا الا لا اا‎ ‏جا اا د ل لاما انيد الما اقم يا ىا - اه مص اج الج‎ ‏ا بداب كلاد‎ I ‏ب‎ 2 a ER 5 ‏ا قم‎ Sei ont ‏تاحت‎ WELD .. i 2 : . ‏الها تج اج‎ ad 5 1 8 ‏انب‎ rE 0 ‏وو‎ a ot CES SE \ IERIE et tf seb 1 = NR 1 vy FR : mE Ig Th ONE TO BOB 3 {hr aS pea ‏م‎ {Asi BREE
    NN . I : : ‏ااي‎ a 1 THR ‏ال‎ BER ‏ا ا‎ lB FEAR ‏ازا يتا الوح الما‎ A Lgl Ay pRB ‏له لايم اد‎ hg LHF pe ‏سر ل‎ Where ‏ا‎ ‎CRE Ti: BG No BEN BY ov 73 ‏دق‎ Ad Gal ERED LENA TE ‏ا ليخ‎ CL OR ‏اا كاد كاي رالوس ويا راون 1 ند دحي ذا‎ JL ‏ا و‎ | ER SERA, Sk So) erm ‏حوب‎ © ‏ا ل و‎ IY RR TE eRe TS (RI ly Sh and EEN THRE TT, Res ‏ب‎ 5 Wands WT ‏كو اذا‎ SEEN I SN ere ‏م‎ ‎EE 1 ‏اا ال رد لد د اللا ا‎ TA Hes XY ‏كم ل‎ pnt ound SRR Ta ‏يه ال‎ a EI a ‏ا اا اي‎ A ١ ah Snr ‏ل ا‎ wir ER ‏جا خضب محلب الل حي از ااا اللا‎ ‏ا الات ا‎ © JO ‏لل ماود او‎ (YY ‏(لمتوالية دق‎ SERED 5 a ‏ارد ات‎ El > ‏ا‎ 1: LS Fate ‏ب‎ ‏ا ا دجي لب‎ = : PY ar ala ‏احج ورج‎ 8 Ii PH OR ISR ‏ل أي ا ا ا‎ OO ad ‏اج‎ Raat RR ERT SRT J ‏الخ رحب لكأم الا قا‎ 8 ‏ا لاا‎ aR ‏الاح‎ rp ‏اواج حا ا‎ : ERE ‏ا ا باط الي ب‎ 0 1: Hag Flay ‏هم‎ Hay A Krad fal 13 ‏يب راك‎ he wn ‏ف‎ ‎RRC ‎pe 3 ee TE 7 Eom oe ir Pom ‏مال‎ ‏ذا ا اجا ال لا تي اله‎ = Mz ‏ليج الى‎ Fy =o ) 8 So : 2 5 ‏لك‎ = [SR 5 i Thom Waa = VOR = Ye 0 TT ‏ع‎ Ea LETS Xa at +e TT ‏ل لض‎ La 3 = ‏ال اس‎ ed ‏ا ب‎ Sel ‏ا سي‎ c ‏جا‎ i = ‏تمد ل يج ؟‎ LE Ty ‏لذ ل‎ 7 ORT ‏حي انبا‎ ‏ذا يط << لذ لق ان‎ ois ‏اع يذ لجو © ا اح‎ dg ‏وح 8 كول بح = ل‎ 5 FT =H ‏ال‎ Wom Rid -< 2 Med ‏يلي اه اا ا اص(‎ in = ‏ينض‎ ‎7 0 Tod T ER ‏حا ابا ان اا ا 5 = 8ج عا‎ Nig sw ‏لخ ا ليفط‎ oF ow ‏»لق‎ A = As 5 ‏اد ب ل ا‎ ‏ا >> لا اح‎ Wa = TOM = Wa ) xX 1 ‏تن اا ا £8 تي الا‎ 2 = Xz a ‏ال‎ ay ¥ rar i nT k ‏يب ذا الب بج‎ ‏توا مكعم الوا‎ RRS ‏الى‎ DY ‏ىا‎ WE ‏الو‎ ed TE Na ir Fo ‏ا ل‎ ‏ادا احا‎ TY ‏راب ا‎ ‏جيك -- نملا لجا نض‎ = ‏حم‎ ‏ب‎ i = < or x : x ce wi = Ty I : ‏الم سب الخ‎ ‏وه الل ةا أو مد« أ عط‎ 5 a ‏الا اج لخداو‎ TUE ITE ‏ا‎ Wak ‏ات تي لي‎ ‏م اال 0 م 8 > 8 ع‎ = 2 0 8 FE ‏اب يه‎ EL ‏ب ا ل ل ا 1 لج نماةا لأ ةي ا 1و جاء الع خا .و تت‎ Ha be J OT SI ‏يم‎ od ‏بن ا‎ TUE ‏الخد اه‎ om . TF N OR 0 : x T x 3 0 8 2 ‏جاح م حب‎ ‏!زر االدءج التو د‎ NE ‏لا لخ‎ BE ERI J Sh ‏ال طاءا‎ «* 3 ad = os = Wool a LT UE TA Lb eT JF LT ‏أن‎ RF ul ‏هد‎ = Wan RY un ‏شا‎ i ny Lt BE 2 ‏مدا ؟‎ at Eas 3 i x ¥ 5 EF ed = =n x = 3 = 3 Ne ‏دا‎ wm UE Ge ‏ا 3 يج‎ J, OY AY EE ‏ما البد كاء لبر‎ gt ‏ا 3 اند‎ El gh eal <-- ‏يلحك‎ ‎hou ¥ Ty 3 Tem AT ‏ا‎ FER SLA JE ‏ايا‎ bd a EA RE TE TR ET: pe ‏الماع‎ gg = SEE 2 51 sid = Pile) 3 5 Bl ol 8 ‏ا‎ _- Was ‏لين مشتخهة‎ << Sms = © ‏مك ا[ =[ كلخد ارد دخا‎ [I : TOF ‏تمك‎ Ld B= Wan ‏!و الاجم الوا‎ Bd gE GF sD ‏الو‎ ed ‏لج‎ ed gb ‏اذى‎ gd WBF Hes i : 5 3 ‏ال لحب‎ ip H ‏لد‎ Pow H = : Lo 3 EEL ‏الج نت‎ Wy ‏لوو‎ A SE ‏م‎ opt ad ‏تج‎ SS J ‏د ل ا ل‎ Ce Kan : i ‏ح داق متقهة‎ ATT ‏اتثى اط‎ om Han ‏اخ ذا التي اي‎ Has ‏الجن أ امج‎ SE SRP ‏بام اس ليه امد جد‎ ‏اا ا ال‎ gl ow i 3 ed gd og SF AES 8 ; 3 . 1 ‏يواج لع‎ Wa
    I. oad gt BF SRE : 0 ‏ا‎ ‎: ‏ا"‎ IE) 1 8 HY
    وم ل اسيم .اج ماب ‎Sa 3 -‏ ب 0 5 ‎oT 2 x‏ الحا ل ا ا ااا بم ‎poy oc Ra FL‏ ا ‎om‏ ‎Jw bs‏ ادي ‎THRE CAGES ml - = T= = 3 {7s faba}‏
    ‎RR. 2a a NT > x‏ . ‎mmr A‏ الا جم الغ قد ‎SU‏ 4 جب هم الك با ‎rhc EE nr‏ ‎EOLA‏ استيى ‎I EK oases all gy‏ هل ‎I Mc‏ 5 نان ‎SHES‏ ‎A‏ أبن نبال حي 0 ل ‎SI‏ د ل دا الا ا اج كيام | -- ‎BET BE‏ ا ا ‎BEEF A eS SR‏ بيخ :سيا قم 8 { ‎Es Ng den Fo‏ = بد أكاي ‎Ha LECH‏ هدم ل ب ‎Se} wITTE 2‏ اللا ‎Ny a EN SER‏ ا را اد ار ‎TERE SC.‏ ا ‎LEME RY KHER AT EEE A 1 TREE REN LER DN SIE i RIE I‏ ‎PREY js‏ اا ‎JR el‏ ‎fed‏ اح ‎ood tls wr TTY‏ هنا ‎Tr TE a Woo‏ ل 72 1 ‎an] To:‏ الي ‎hat‏ ‎wETIE 3‏ ا ا 1 3 ‎ll‏ 3 ا 1 ل ‎TTT‏ هي 1 ا ‎wr J To x — — Air SRR‏ ار .نه لوك لدان ا ا ‎WET a‏ شيع الب كم 10506 ‎Kay Hag‏ اد لا ل تح ‎RR‏ ‎Lae: ae LL‏ . 2% ل ركنا ون ‎et‏ ا اا د ‎AVE GETTY 5‏ قي م ا ‎ra I EGU‏ وا ‎RR fot Sag Vhs arenes WoL as Jo‏ يا لاما ل ا ‎LEE‏ ‎SEAN "٠7‏ . : 8 8 8 & الات ميت ‎Al Ree‏ من 1 اكد كد ‎To 3 NE RE Ex om‏ ال ال ‎joo‏ ‏8 الج اللاي ‎IRF FIDE MH ¥ 85 : HE Noa Adi sie}‏ ‎TR THY TL‏ اب . 3 1 2 ‎oT OT‏ ازيم الم قوم ام 1 لا لات ‎DN. PE‏ ب من ما ارايت ‎TEE‏ ‏ب ‎phi ged wETIL‏ يم 137 ‎Xs Hyp‏ الاو ‎cs‏ جد ‎El TaN‏ ‎To‏ ‏نت + ‎i= © ُ = To‏ اا 1 ‎ot aim =e‏ اي 0 ‎SEE me‏ = ‎EAT RE TE‏ لب ‎=A gil‏ لذ ‎Seog‏ ‎Rs‏ جع 1 & ادي يح 1 اج حا الا كب الج ‎Toad Ty a=W‏ ‎ERT‏ انمه أ الل ‎a= LR‏ حاط و ا ‎LF‏ و ااي 1 + 8 مض ا 7 نم تبصا لدجم للا ا ا ا ‎fe TERE‏ ! 2 8 217 ماكح الا ل الك ‎SE 5% SL CE‏ مج ‎oF + H 7. 3 Tm NT‏ = 2 جا لاما م ب ‎og HE CR ¥ as Fly a BY = i bia) =k‏ بذع ‎oi LEY‏ يقح 8 8 ب ‎ft Tow =‏ = ٍ ل : مج اج © 0 اي ‎Xx & ! xr‏ 21 ارح : ‎LE J aaa gd of‏ ل < 0 0 مب > : ب اتاج 5 ‎mmr > 1 oT‏ \ ~~ ‎=i‏ ل للج اب ل خا طن ‎JW gd‏ ل ال ‎EES‏ لذ 35 لمن ‎Leila‏ ‏دوج أ ‎Ladies‏ ‎a‏ اا الت ‎—T‏ 3 الا 21 ‎ig pi =e‏ ‎gl fwd ON LEE‏ ‎Saag‏ لذي ‎bpd‏ ‎ge 8 b‏
    ‎i .‏ . € = حر أ ال اااي اا ‎a= on‏ ليع ‎Pea‏ ‎REG BE a IE AEF‏ بن ‎Leg‏ ‎RE 3 - : nT oT‏ § © مدخ ‎Er 8 TY‏ : - لاخ الس 1 3 ‎by‏ 3 ا ا خط لج م 3 2 ا تل 03 لاج 1 5 3 5 ‎RS Tr E -‏ بج ‎bs‏ ب 8 ميخ ا ‎KVL og H iE‏ لو ‎Died ade goa‏ ‎ey oS for] TRE UE‏ اج = ‎=e‏ +ة ؟ = مد ترج ‎Bon Dio‏ ‎Tigra SEE‏ ا ا ‎RS‏ قد ‎nN 1 7‏ . ل لاا ال د ‎TAS‏ تامع تهنا بن ‎iT 0 + HE RI SC.‏ : جح كبا اله 8 ا + + ‎T‏ ‏7 دارج ‎HS FP‏ لك مكاعم ‎IS‏ 3 بل 8 ‎OE‏ ملام ‎™M gd‏ ناج لخر ‎5h‏ = ا ما ‎ais og Fn a3‏ يج ‎H‏ = 1 7 8 يخ ‎oad FEL‏ كع !قا ‎Ed NG‏ ‎ph 8 4‏ : 08 ا تج ا ‎WE OEE‏ نوا تا ا اد ع“ 1 7 ب حي دي لج للا لو ات 5 ‎=Es‏ اط ‎og!‏ لاجر الدج § = 1 3 3 : 3 8 3 ‎IF : 1‏ جّ ب 2 ‎A ¥ fi‏ ‎Fix‏ عا الج 3 لي شثاءا قث مج اتن ا < ا ا أ ‎a HRT CREE‏ الك كيبن متها > ذى متها ‎FEAT‏ ا ل ام ‎i oT H TEL‏ > عط ‎UR BO‏ لد اد الج كا الج اد اي اس ا ‎SAVE E+ SVE SE SN pt‏ + جا اخ اخ خا ‎sik‏ لو ‎Floogfs ai gt wd gb ee‏ للا ال 8 ‎es 3 THF‏ د كن ‎ar‏ ا + ل مرحي للا لج اط ‎SEES‏ ~ 3 .= 3 1 & ‎ER eet‏
    الو سر ل ‎ETEREEL‏ ‎FRY TR‏ 5 ال“ + له 8 3 ‎Sm‏ سيج اا ا ا اح 0 دي يدج ‎Fant‏ 5 الإ يدم ‎TT J.‏ ‎Dp Ls‏ 216 لسو اليه رقم £7 ل ‎FREER Yt‏ 8 1 ‎ES PEE. we a : =‏ ل د 8 اند دون ايم :1 ‎WT Tr y y ra RE ER‏ _— 8 ات ‎WT Tn ITE‏ = ‎DATE E £37 aly Selael ei ALERFL‏ ا ا لط - 2 ب 5 = ‎ag Ty‏ : : : ب 1 5 ‎ol | N ١‏ ‎al ae FREEREL A‏ قو ‎Wi N Be. IESE hg 1 PER‏ ‎i Nam cal = FALSE OL‏ :اد أن : ‎BN BRST SU‏ زلا
    ‎I. kN 3 7 REE TI NUR‏ 1 = :0 ‎Co Wn Hs TEES nel cw NAY rene ET EY. a‏ دا عله ‎Set wii WOT EEE‏ د قم 4:57 ‎Ng KT MEER I le IE 1 RE‏ ‎ey‏ ال ‎J. _—. RECS SS STR‏ - ‎x‏ الول الج ايو ‎Co To‏ + 4 9 ل 0 و ب > 7 4 ‎of‏ ب ‎a‏ ‎tora Fema} 3 7 0 2‏ : ال ا ل ا م ‎i‏ ‏3 لج كي سم انيار كس 1107 | ‎cE‏ ا 7 الا 1 تي ‎lt Na FE ER ns‏ ل 1 :0 ‎i‏ 1 8 :1 ‎Sa FETA TITTY 2‏ الذ ياي كا ‎Ld TR x > EL Folk lk‏ _— ب الل لاحك د ‎JOBE HE (TY ad yaaa‏ - حت ا ال ‎SLT IE‏ ‎Ba St‏ را لها الام ‎(LRA 3h‏ £1 ا اع 1 ‎SN 8 ye‏ الا الا ‎0S : Swe‏ ٍ الاي م ‎gay‏ ‏0 دايح ‎i 5 FEA TET‏ 8 الجا ا 7 ل ا ل ا ماي ‎srl‏ ‏5 الما تح يدي ‎EOE bs hE ITT Arle‏ ا اذ ‎om‏ الود ‎TE ERT‏ ا ‎SE‏ اا اج ~ 0 ‎rt‏ 8 لح .ب جح ال ‎LER aes) TAT RE RL on‏ م 1 ‎BE ON BF Fhe - aE‏ ‎ERED 7‏ دي ‎ge)‏ الف ‎Co ICS 2 FREY GR‏ و ‎EN‏ ‎yo SEAT py VAL ERD LF‏ ا وت و قا اا ا لاا ‎By I‏ ‎No‏ ‏ححت: ‏تدرا 10 ب انا اث ا ‎wi =Hg Eat =H‏ متها ‎x‏ + ‎=a Sout Foray‏ 1ج ‎Pua‏ ‎aad‏ 9 ا ‎Ee ane AS FE‏ ‎B iS CE 8 =‏ حا الل 1:0 = ‎yon FREE‏ ا ‎TAR Ae oat Lo‏ لى ‎Lag dnd‏ ال 7 حك بير اد ا الحا ‎Ly 8 F =Xa‏ مي خلا الى ع الات م 1 ‎ped 0 SIS Sk o 8 <> 0 ™ B I. i T= . wy‏ ‎ey‏ ل ‎rt Loo‏ > ااا لقا 8 ذال 0 الدج ‎I‏ لوا ‎JRE SNE SRE‏ 5 لخد ‎[IEE CT DER‏ 8 ‎=H‏ أت متها جين الا قد اج جد الح ان ايا مرت ‎EA‏ 35 ان ‎oo pt Id =A‏ ‎a ET‏ = ع © : ‎R‏ ‏ديا ا ‎So‏ مي ا نه ‎Co‏ ‏ا ‎we CT‏ د ‎om‏ “جا ل 8 ‎a oT‏ ‎ir SUS‏ + ال ج دبا اا 7 ‎RE I‏ ‎os : LF 3 grt‏ 3 ح باح ا ‎oy) FOOTY = Waa T FE‏ خيوش اذا لل اقم اح ذا لج ‎Tr‏ ‎R Fon 4 a iE Fons ] AT H oT 3 FAT vz Bom nT‏ = ¥ وا ميا ‎t sod gd i EA Woy LA‏ ل ‎SANS‏ تج ‎SRE NO‏ ما ‎gd‏ تمك 3 ‎A‏ اا 1 2 ‎To : 1 : H ki 1‏ نال .»م ٍ اااي ‎Fon 0 T o‏ ب 3 جاع ‎HIE. +.) HEE‏ ا ا ل ‎ey gn‏ لد ‎RE‏ لجو سكع ‎gt‏ الى لثلة لج ‎fi shad‏ ‎Rd Sand‏ منهة ‎wT‏ ‏اللا ‎wn COTY‏ سي ا ‎I‏ اس ‎wt‏ 5 : ‎as‏ الا ‎omy on RS‏ ‎ede? FY TIE‏ ‎Lo FY‏ ‎fa CE =A‏ ‎T B bra‏ 3 ب > ‎=F‏ = ب ‎TE 0 Nw kd NE i‏ ‎od = a‏ "0 آم الك 8 0 8 8 ا ات“ 5 . ‎T‏ ‎FSET SEU SL Sh SF RET SS PR BE A CORN Ch Be 5 wd ad Fade end‏ ‎ey 4 = [ET ‘ w= pi NT‏ ‎LE) Ba. N 0 + 2 i] = 3 SP heme OP‏ ‎oat EELS‏ ال 82 ‎FCT ES CE‏ ‎H Sys‏ حجر £3 ‎ad i = 5 wT‏ ¥ لحن ¥ ‎=r 83 haa‏ ‎DTS‏ »م الى ‎SE ES AN RAN SUI IS NE SC‏ تلو ‎Y FORTE‏ دا لكي 0 ‎T‏ رز 1 ا ا ا دا ا ادق ال ‎SR ST SE eS Ty]‏ تذة الج ‎SCN BE CN BS SU‏ المرائظة أن ‎ELST SS‏ ‎N i‏ ا 5 5 . : ‎Paha wat Ean‏ ‎INCH‏ ىع ‎LEE‏ ‎FS 5‏ = ‎pad SIR ri =E ne‏ ‎ood 2 ART‏ ‎=a‏ اح ‎Dg‏ ‎al 5‏ لقال كاه ‎Be He‏ ا ‎wd EER a = Sa.‏ للاخ 4 ‎x‏ ‏ع ‎=a‏ ل ا ‎Tv‏ ‎SEAT‏ 3 تل م ال ل لاج م ب :8 ‎I‏ ‏يراط ا ‎SS RE‏ أآلج عد ناملالا ل > ‎=F‏ ‏الب ذا ١ل‏ ال ‎St‏ لج 3 ام ‎Booed Id 5‏ 3% 3 . ‎iN fet &‏ لل 3 أل ree Foon RS RE oS) Bis 8 ‏ب‎ 0 RR wy 8 . RE ‏اكد ا 1 ا‎ 1 THR FR ‏الا قد‎ ana} WRITE Sie Ls [EEN © RT Ei BVO BYE 7 ‏أي را‎ RY ARR he Sd R ’ 1 ‏ا اا ا الات‎ = ١ on TE ‏ا بط‎ of ‏ا ا مو ا أل + ا امل‎ RR PRY <a SANTINI ‏اد‎ pL ‏انا‎ FREER 1 4 RE 1 ‏ا‎ AR 1 ‏اللي‎ RSLS Lo "22 0 ‏اا : "8 ا ا ل ا‎ ree wi eed ‏ال ال‎ a i ‏ا ا ا‎ Th ‏لمعاو المت الا لي اما‎ ‏ا ا جد واس ايا‎ THE {78 ad ‏لاماي مايا‎ § SR Si ou 1 IS 8 00 5 ‏ال‎ a ae Wa . ‏ع‎ ‎ae ‏ل ف الوا‎ x 5 Ry bs “a EE A UAE ‏الخ‎ RE ‏جحي‎ wr Wa We WIRE ‏الا‎ Waa RET TO Ak ‏الف‎ Es) EEA = Sy BN ‏امد ل 33 ار‎ FEO TALE ‏ال‎ NIONGRA Neel OER RRL iy SON aE ‏ا اله وج كي مان الك‎ ER jE: ‏ال الا ا‎ 1 Le eT es LER RIS Rain. ool 1 ‏للد ا‎ ‏ا ا 6 5 ل > 8 5 : :ل ل ا ا و5‎ a, : PR 5 8 ‏امسا‎ 5 A Qh nay ‏جا ل‎ en ‏الي ما‎ SHEER a ety ‏تج‎ = EES CORR ‏حا ان‎ El Mn Mai {Tal hab gay ‏الام راي‎ @ 3 3 0 1 ER ll WN ‏ب‎ ‏اا‎ SERN or SEER BR ‏لاون لان كينا فا‎ a TE ‏ا ا الا‎ 3 ya BE X oe ln) 1 ated Ne} RIAD 8 } a Bo - po 3 7. ian ‏اند‎ ‏ا جح‎ 2 ve ES i ov JES TH ‏اتويت الا كوا‎ wan 2 hart BS a RoR 7: : ‏و ] 2 ا ا‎ ey RANK FER ‏ال‎ C 7 TRE {300 AR CARE NEST ENE Ex 5 x FEE ‏ب‎ ‏نل اك او احج‎ SNL ‏ل‎ LER ‏اوت ترات كما ينع ايد ال‎ re SRS ‏جم‎ ‏التاق لا ع اتا :كي ا 5 ا ا‎ ‏ا‎ ‏حت‎ ‎5: ٍ 5 27 ‏و‎ ‎Le wv ‏الا د الاج‎ me ‏ال‎ ‎Bh ‏ا ا اد‎ E Lb bor mE 3 Si . wl 0 ad ‏ا حب‎ ‏ل‎ ER TaN ga +: FEA ‏ال‎ bor =H TEI ‏كيدا‎ IE EN tnt + 58 ‏اليب اا‎ a Ee REL ‏تتية‎ SIE wie ‏دح اين ا‎ : 34 a aa EE ‏ا‎ bs rod ‏الع ام‎ wa + W 7 + 8 ‏الها مجع‎ Nay Ww ‏عا‎ x ‏داقع‎ MM ‏الى‎ REE SE I NE SL CEN. yt 0 i REC boon = ETRE FRE SEE J x Fe en ge 8 ‏بد ا ال ع‎ SEAR ‏ب«‎ a ‏ب‎ 2 7 > 1 - x pars 5 ‏اا > ا‎ 5 a x wv 2 ‏الج‎ 4 a 5 NN a POY ‏ايا‎ ‎BORING SEE I RI IN SE EOE ‏ا ا م لات‎ Pao 22 ‏مت 33د اق‎ ‏ب‎ & BER 3 5 ‏ا‎ : nd H 1% x Catt : : X 5 : 8 . : 5 8 < ce Ee 5X ar Toa ‏اا الج 0ن داج‎ x 0 wo LAGAN ‏ال ل د‎ 1 FS ‏ل الا ل ا‎ FE 3 EY AE EEE PET RCI ‏ناد‎ TNs EOI 2 ‏اتج‎ ‏لجا كىن لخد ات انع‎ ST UE. JE SE ERT LG ‏ال‎ ‎Svat ow gh wept ‏لوكت‎ gE OFS ‏ل ا‎ LF ‏ع‎
    ‎. 8 Rh 5 Ty Ty 0: 2 ET AR ‏ذا نهد بجا ا احج الله الها كنا هد‎ RL wo ‏اخ > اليا اا‎ EL Wg ‏ذا‎ X ‏لمعا ل‎ TE (EC SI Papal Pad ‏اذ الخ م‎ << Bi 5 FS ‏ان لان ا‎ SUN Co SUE SHE ‏تخ دج > اح ا لدي ا‎ ‏لس ا‎ eed ‏ا لد رخ‎ wd og ‏اي لم با نا اسل لخن لل ال ا‎ I aN Ey ER 3 EH 3 3 SNe 3 ‏سي‎ 3 : 3 Eo] 3 [Ra 3 x 6 va bl = 5 3 oa 8 SHEE CI 3 = Zo ‏اااي‎ wes gh ow = EEE 04 ST SE oe aE & ‏ا‎ ph AM NY ‏ا الحم ا الح اال‎ Yor ‏لوزن لكا‎ Fees ‏ل‎ ‎a AER fo 3 3 w x 3 ne Ww ‏ل مجع اع‎ Bog ‏ار ايند الى ل ار ل‎ ad ‏يح الس‎ = i ‏ال ا ¥ جا خا اماد اذا لعجرد كنا ل‎ ‏لخد اعد اا‎ RAT ‏تكد لا‎ pd ‏الى اناعد‎ REN ‏لد‎ BUA ‏لاع ذا الاو‎ Apt BL BEARD a TE + ‏اللا الج ان‎ Tae ay ّ ‏وراضط‎ bd ‏مات ب‎ MeV ‏بك الوا‎ : 0 ‏ب‎ ‏لاد لان الل لعن اا > اع‎ SF ‏الا ا © > بام الا‎ Bol ‏الج د‎ IN gy ‏تداج للا لقا‎ Iv ogy ‏تدع اذ‎ ‏ا‎ & S 3 ZF AE ne a 8 ‏ال اي ال "م رمد‎ ‏جل !| الخو الا ىن ا‎ F © i Sad ‏كت‎ aE ‏سير وا الي ا‎ Nin 8 5 x TR 2 awa Eee GE TEAR ‏اجا اي ا‎ ost Ris end ‏ا يا‎ ‏خا الها الات لهل لخن اانه جا لوحا 0 الحجن اذ لهج‎ > 5 Tra ‏اج غضم لج الام اليد للا‎ RU ‏جمد لد خكة‎ CY ‏حي ذا ل متا‎ 3 1 E 2 £ ‏يي‎ EH ‏دم‎ ‎EE ‎Boog Delay
    I. 5 Sed 3 5 bl LE PETES ‏لاج ل لان ات‎ ِ ٍ : Ee ‏ا‎ SARE ea En ‏ا ايت اذ الا 2 2 0 ا ب ا الح هال ححا‎ ‏اي‎ od x PN : ‏ااا الي‎ : FE y aE ‏لج ماد ل ا‎ Rt SSR ‏الاي تخد لثامم‎ LT SHR ‏ذا‎ ES ! ‏الغ‎ CRESS : 8 : Ey “a oT ‏ع‎ 1 5 : : ay By CoE Tal i ea i: hy 3 ry 3 aq ‏جديا اليا الج ا‎ 18 ‏عا لسن‎ pi A RE ‏ا‎ dw F0 ‏ال ! انا 3 # كيم لجا ال‎ ESN Se Seat BORER 0 0 1: ‏ا‎ N PI ‏ام يا‎ Eg i RE Bog LWT ‏ل اال الا‎ Ts Ee 30 ‏بان ليد اتج 5 مب‎ ‏ل د ا لاي‎ gs Uh SE + 1 SS = = SRE ‏مان تاجيا جم اا الس‎ ‏ا الل‎ Ro FEL a 2 = of So Po ¥ Fp BE Boat ‏أو ءا‎ wide ‏لج‎ wl pd ow WN + 3 “TI {vag 5 ‏ا‎ NS : : ‏ان الاج ان الخ لي اللا‎ ‏ا أ ا الجاع انق الا ام‎ Tat EE ‏م ا‎ 4 SASL
    اي احج دري و ا ‎DRE: Fai =‏ 0 ا ‎TRIE de‏ زفق ‎TT be £5 aL AR‏ لوق ‎SU‏ = = ل ‎TF fH‏ ات 1 ‎IL SO Uh‏ ااا 3 أو اويا اله 1 ‎EXE EY Eb‏ ا الس : 1 ‎Ea : 3‏ 8 . يه لخ ججح ‎OY‏ امن اله دا ‎E CE TE‏ م ‎iT Re‏ جا يج ‎Nw =. Ae wa‏ = د العامة ليطي ( مت ! نب ‎I EEE RT EE ts aR‏ 0 ل نج لق قا ال ‎wom Hm Lo :‏ ا 8 ع 5 : 8 ارا أي لاست ساي جا زا أ له ‎CER‏ الي 7 ا .7 ‎a‏ ثم + ليا سان ‎I Jo‏ ب 1 لد نع لزنا ‎ited gad‏ كمد اخ ‎HOO FEW FENCE‏ 21 لخ ‎XE‏ ا ‎a 04 0 0 EE Eat a RE ~ 8‏ 1 ‎Bs‏ الجا دي ا ا 2 ل ا ال 5 = اا حا اا اد ات ا د اتج إلا 2 ‎dy Sh ka) WORSE LA LS‏ نت ووو £3 )1 2 اا 3 1 ‎Xa ba Sogn Fos‏ 3 قوع جا ‎dah as)‏ قي ا ‎Ae‏ ا = ل الهج دج للا << ذه دح اا ا و ا الدب الجا ال 2 3 ‎Ji Nghe SND TENOR‏ ال ‎Fa‏ اماد الا اا ‎aE RUE‏ 2 ا ا أ اج ‎On 3‏ مايا ااا > ‎ATE aR ag)‏ ااه > ‎rR‏ اا ‎LX? bd Lo =r 7... a‏ 4 ا الا ا ‎i SR CEE ale)‏ ا 5 ‎KoA Eolas Eh Er Eg 7 EN Selita Mz‏ ‎I‏ الا لاوج اج حب لمرو الت ‎FEE aR‏ م لوي اد ب بدا ‎“CTS A.‏ ‎YREERLR 3‏ (صلم لبر 3%( ‎Hah EEE 5 : Machol@— Soop‏ ما ا وي 1 ل 1 ‎AZ)‏ ونا ‎fe‏ 2 لوه ‎Oa‏ ‎eng -‏ الف ‎WE‏ اا ب , ‎Say 84 1 : k‏ 7 ‎o‏ جا ا ‎ad LE TE Tn‏ ¥ مع = —— أيه & ال ل خط اناد (إسوالية قد 5 8 34 -قياب] 93ة ‎EB - FE — - om‏ 1 : ل ‎SR‏ وم 1 0 : ‎A‏ 1 = اح ص اج الل الا ا الي اي ا لاج = ‎OL:‏ ~~ ب = ا - لقا قرع دزي ‎NN nn EN 7 : B= hbil— BD EEN (YT Ocal addi pa}‏ ‎fe‏ ‎RATT‏ ‏: 3 3 . امك الي = ‎N SERS A‏ ّ ارج اذا ‎SE‏ اي ‎TAT‏ الى ‎Lod‏ ‏كينا ‎TS‏ ال تج ‎i fi ¥ > he x Ct‏ + 5 = اي اا ا ال لح د م عدا نا نا نان ذم ‎SUR‏ ال ‎Et‏ ‎RE JR‏ بر اميا ان ‎B R‏ بارج عا ‎EE‏ ¥ لضم :ان ‎I‏ ‎x = 7 5‏ دما ا ب 5 ا 5< 3 7 ;¥= ليا ‎boy F dha Howl‏ لاة ‎og‏ ‎١ 8 1 5‏ ‎Si SE ALT ma‏ ياج ‎TE‏ ‏اجاح ال لالد 1ح لجز هيه ‎SN Ea ١‏ % ‎a >‏ ايت ‎Ty‏ 0070 اخ براك ال انر ان : ) ات بد الجخ اط ‎TALE‏ لخن ‎ge‏ ‏د لاج 1 لقع ة ‎Ha 2‏ ان ال ‎Ts ©‏ ا ‎Vala ont =X Fos:‏ اا ‎ir‏ : 5 = 3 الب ااي ديا ‎af‏ ‎a :‏ : 5 والح ‎Tyo‏ تي ال ‎HEE.
    PE ER oe‏ ااي ا ا ا 24 ‎er‏ الل تلخ ام وح ‎IF‏ د ‎mies‏ ال ‎EARS‏ ال الج ال ‎FATE‏ :من ‎Ladd‏ ‎ES Sh EE Cant Tre‏ "0 ب . ب 8 0 = اال ‎oy‏ مج \ 33 1 ع : 3 : ب ‎i‏ = ‎FAS‏ اا لي لك اح ‎A LP > SRR‏ جالع ءا لو اناء أ اال ‎Ea] Pe wl A‏ - أي ‎ad‏ ب ‎BM gi TT =e‏ ‎lo = SE‏ ‎N‏ - % تجح ا ‎Boyt‏ ‎i‏ < 3 8 ‎Th 3 J‏ 3 * يحب : 0 ‎ky‏ اح دج ‎KE A wd md‏ د خا نع ‎E a‏ ‎pa POT =a‏ ال سس ‎Fay PE Lr‏ ايل ‎H SE‏ = ‎fol] 0 oD —&28‏ ‎AE 0 ro RRL J‏ 7 5ج 2 ‎s 8 2 3‏ 3 $ + 3 5 كحت ته : ‎SAY 3 mT‏ 3 ا : ا : ب : = 8 5 << : ‎T‏ ‏ما ارت ‎al Pa 1 * 0 SL H SAE ed Ca 8 RE ot vw‏ ا 7 و 01 ل ‎CAN Ee : ATE‏ ا ا ا ‎mds oy‏ للج ما« بجء ‎SN‏ ل كذةء الو عاط ‎H Eo 3 : 2‏ ‎TL Td 7 8‏ 0 50 ايخ ‎gd‏ ا ل ال ‎ed gd‏ لج #*#هء الج ل“ 0 م - 8 8 ‎i x 2 x‏ ‎wd <> H OE‏ اي“ ‎or IY egy‏ الم 3 = 23 = 3 ‎fb Tr‏ : لس ‎iN § FER RE‏ ا الاي ‎PIRI‏ و رك اي لاج أي ‎x i TL‏ اتاج 1 تدا ‎z‏ قال 60 $ ‎k J i pe‏ ِ ما 3 < “ < تاج لى ‎UF‏ ال ال ‎EF SI rs SE‏ ‎go [IS 207‏ م اح اداج ‎a fo FY Pa‏ ‎=A‏ 1:0 لا = ‎IE 3‏ اي كاك ‎FOI‏ الحا : > 3 ‎aE‏ ‎TAI‏ ايد مهيا موتح 5 د نضا تح تخ 7ج جا 8 اا ‎koa i = iE T=‏ ا اماج 8 ب : 7 ‎GbE‏ أو ‎bE‏ أو ل معط ‎wT pb‏ ل لل ‎Cy J‏ ا لاي اا ‎TY 3 = 3 En‏ ‎be PERN © SEH £0 FRRCEENS (EEN =X IE‏ ‎ne‏ اج ب ا ‎heed I Rr : op Jt‏ ‎wh a oy h] MOIS Meng‏ ‎AT‏ دا ‎SE SR A‏ ‎Ld 0‏ متك ‎Logie cel‏ ‎Lae Rn gk te STAER‏ اكات 3 5 : : الو 7 انها ‎$i 5 3‏ اج" 58 ‎RR‏ ‎omar‏ ل غضاء ‎Foogd‏ ‎ax‏ ! ا ‎bh SAE i 5‏
    ل د مطل ‎oR‏ اا ‎tt‏ الك كرا ‎km Tite hrs bm FR.
    PEE‏ ابر اعت راي تمك المغر ‎hdd— TB {Nal‏ الت داح © يا ا ‎ee‏ حا ل 1 ‎BS J‏ 1 ابر ‎Adi gat‏ رفس ‎RC oi‏ ست اذام - اا ‎i : : 5 E | TT Fos‏ الوا اا اي 8 ‎RE 1 Lo‏ ا ‎seem‏ ليق ‎ec EN PERLE ea‏ ليا ‎FRc‏ جا ل لش ‎JR i‏ لخر ‎RE Els BEES BE EE‏ حجن رحد اي لزع لاي 8 ما ‎FOR TE‏ ال ‎Ex 1 RR TT‏ ‎SOREL ©‏ الم انيار قم ص ‎RCE‏ ل ‎BE — BER‏ ‎Tq 3 ed] RI OR i —_‏ ‎NT TN -‏ ال ‎a RR rr ِ wr Ee En I‏ ‎la ily {3% ad x ER TOBREL 3‏ لدبا ‎TEE © ThE‏ ل اسه رح يب الا 8 حي اج مام ‎ERC‏ -— ل اا اي ام ‎F‏ ا 4 ل ل ‎wal‏ لي قم ={ حا و ال كا يجي حي الا انا الام م ارا ود اخ ‎WIERD 5‏ متو لير قم ‎{RY‏ بجوي دج — ‎ER‏ لامو شاد الس فو اب بام ارو ا ا الا < ل ل جنا ‎SRY AVES seme‏ نم اليم !الاح دا = 5 ‎OBE ©‏ لمؤانية رقم ّ 1 ‎ok BON‏ الس در © ‎Ii‏ ‏_ ُ ا اجا ‎E go‏ ب ‎x‏ ‎rat As |‏ ا ‎ERIE Se RE‏ ويا كرا الت ‎AY ha]‏ حا ‎To.‏ ‎RGR IRS lid 11 Kaas {VY a debe OBERT‏ ب ‎“Diam‏ ‏اا يس الى = سم ال ل لامكا ‎TEN‏ ب ا ايج 2 مذ أل متها حك ا ادو ل ال ‎H - UN RE TE‏ ف وذ ؟ ‎Ba‏ ‏مرج ل ال ل اود اي منهة ود 1 أو ل[ ‎i : : 5 Eh‏ اااي ‎o TH em‏ كي ليم 00+ ‎Gey‏ محا ‎wo TH‏ ‎Lom‏ لات قا ‎wt‏ متها ‎Boat LF =X‏ ‎x 1‏ = ال ‎J Ty‏ 2 } = ‎rei ar ead, TENT‏ ال ‎i‏ ‎go‏ 5 ‎fe OE EY‏ ايا آذ الجن ا & اي اك : ا 8 ‎bed‏ ‏مي اط لا .ا ‎Toph‏ ‏با 2 ‎ow : kee‏ 8 ب ‎aN ug « L =¥is‏ 1 3 ‎ws CTE - :‏ 3 ٍ 0 6 0 ‎wie 3 : : o : Ey - : or : = i‏ ‎og py gb dN Fb JT gb GE gr po ® gt iE =X‏ ‎Pa 3 La‏ ب = ‎wR‏ = بم ‎SH‏ = — + 0 0 - % £ - 1 = £ ‎Ey 4 * 1 Joi ol 3 Bak 1 5 = Rag 1 bred 1 a) B SU ama NE‏ جلا جاه 5 :ب لج ‎SPR‏ 0 5ح ناءا تلج اذا أل نجاة ‎PO EE‏ الى اللء ‎SE BE CR OR‏ هذى ‎rT p‏ : ا ‎b = az =X ~ oF po oF TTL‏ 1 . ص ‎od H Sm 3 fred 5 ke) * x +‏ 1 ديا لج ‎uF‏ لج ‎oe W‏ ل ‎eB‏ الى لل ‎١ = Tom ne‏ ‎Bown bd oT‏ ‎r‏ ا 5 — حبذ لق اط ‎x‏ = :2 رجحب 1 - ‎N‏ ‏رمد اى متهية ا ‎H Sr E Teme‏ قنخ له ال ‎Tog a‏ ‎=n‏ مين ‎Vo ha‏ ‎SEG‏ بن ‎eft‏ ‎EIS DRO x‏ ‎Sa oe CR Ln‏ ‎SE 5 2 -— a‏ 3 دي ‎E Fwy‏ لق ا 05 ‎Lo ad‏ ب ا اح ا اج = ‎L RS‏ 3 ال الح ‎fo‏ 3 ص ‎A i‏ اد لد ا الال ‎POR‏ 2 لذن الها ‎GE‏ :و ط 2 خش 38 & لفل ‎A 0: ١‏
    =« ¢ \ _ ‎Pa‏ ‎EL‏ ‎FE OEE OO — BT $8 Ld ana Uns fa‏ و ‎Oo‏ ‏لحت لتحي لك ا ا لبي ‎pel‏ لو الى ال ‎ac‏ 7 بلا ادا المي ‎ER‏ ‎EE RN x 8‏ اا . 8 ع . ‎x 3 oT)‏ ررغ لتنا . اشوا ا لالس اح > + ‎ba TT i‏ بج نا ‎at‏ لسو انيع قم ‎(rv‏ ةا 5 1 2 ‎RBS FV BY‏ £ ‎Ad‏ التجورححي ليق لمق لب حا ‎Em—‏ بت ‎BE‏ ب ‎Ti. pad‏ احا ‎vo‏ ‏ارا [سوالةء ‎RK PAAR‏ لد دده ‎Wo‏ لخم ‎Fo‏ خم لد ‎TR ٍ :‏ ل ا اا 8 ‎TRE J‏ = ‎i} = TN TE =‏ مالا ا الات لظ وا 7 ل كشي و ‎TTL Fo‏ الاي با ‎Hes Ths BODREE eERI, 12+ ad yh eet wD I‏ اي ال 3 ‎DT 1 BEAR 7 3 TERRE‏ 3 3 ; ‎N -‏ ا ا 5 يي اب ا ا 1 ‎rT >‏ الله الما كما خا 1 ‎Er rata ESE Beh‏ ال اح 3 ةرت اناجة ‎PRS ek phi pel‏ اا اله 656 سا ‎Flash TH‏ 0 لاج يح جه الور الما ‎TER SE‏ كحت ‎hE SE - BEd SI‏ ايت ‎SEI‏ ‏له ‎(RR ak yay get THEE‏ 7 7 7 ا ل ا ا الا ار ‎ER 8 —‏ انا الما 4 ‎fet El‏ عنما ‎hy‏ ا وات ات ل ب لح عي حي كم ‎ENNN- | Told Sek 8 a‏ ا ‎k nr‏ .= ‎yo 3 EEN ae y‏ يخاي لل — ‎F ne, er RE‏ — م ‎ee} TINIEL OD‏ اليد ركم 55 ‎es Sl = BE‏ ود واج ‎aE 1) Rt‏ 1 : مع ع ل ا دا ال ‎an 1 : a‏ ‎wie AR EY gy LETTERS ca‏ ب_ م ‎R T‏ 7 الا 5ه بج م ‎Alta) wDOFL‏ قم فت ‎E B- rr © oN Fi‏ ‎EE‏ اي الوا اناج اام م - . ‎ch CW rr SE nd FRED Cah aE 2 rT TR‏ الام + لكاي ؤضنع الي خب ‎EI” ٍ {VEY‏ الم الجا ا ‎EE‏ ‏ا ‏كن ‏بج ‎vo FEAT = TOT ERE‏ ‎Ad TAL‏ 5 داك ‎pa =X‏ انها ‎sm =‏ لك أ ‎Coe‏
    ‎Aa.‏ = 2 ا 2 ب ا تي #نها
    ‎i. & .‏ ع ‎K‏ ‎Vos ra] = Ta FF =.‏ ا ‎Won!‏ ادج ‎I SE ST I‏ ‎i = £2 3‏ 3 = ا 1 ايا راجا = ب م ني ‎Tag‏ الم ل انل ا ال ا اا ‎EE at 2‏ 5 ‎Lr‏ الح = ‎TAT‏ 3 = د = ‎=ds‏ لما ‎TAY Aon tb‏ قاد ان ‎ES‏ ‏ا ممح ‎Tomy‏ = ل 0 ‎OM =‏ ل لد ديارج 5ج تنقيا ‎is oF‏ 5 8 : = © 2 3 3 ‎w 1 ne 3 7 : TT i 7 i Br ==,‏ 23 ليلج 5ج لأ ل ا لح اس !2 ‎EL‏ ‎i 2 :‏ = = 5 رج : = ‎ha ox 52‏ با 2 = ل ‎p‏ ‏ل : = ‎Loa A oo TL‏ ‎1X‏ ا ا نل ان ‎=X Ta‏ ححا مهد ايكيا انح 1ن ‎Ea‏ ‏ازاك قد ا الها : > ب ع 2 1 % . 5 با تكد اج :ل الج املاح كا ا : 5 : ا : = ‎C2 = Bad PBs! =n ome £ = 7‏ ود ‎١‏ وا خاي £7 ‎fad)‏ ‏+ ® للا ال ‎TT‏ عام كك ين ‎Poo‏ ‎FALE‏ بل ل ان ‎=X‏ ا يمتها ل دكا الكت اث ال رد ا ‎Tr‏ ب ‎Te py TC‏ ا ب 1 3 = تارق م : ‎PRY A‏ 3 حت طرخ ان ال2 اج ا اا ‎o EE‏ ‎=a‏ قا ل ال خخخ دق ألا بط ا 2 £4 ‎<٠‏
    ‏. # ‎he‏ = - ع ‎Poon‏ ‏5 2 أي متها ماج اللي ا كت : ماكح ل 0 7< ‎T 5 T i‏ 3 8 8 :ىن ‎gag‏ ارح لضا ل“ ‎KE * ads gt sad AEN)‏ 8 ٍ ‎BN 8 3 £3 ES 5 . < 7‏ 5 امالك لأسا اتيك سب متا ل ا 1 ‎H hes‏ ب ا ا 1 ‎Fo‏ ‏الحو ‎EE‏ ريسي ‎wD 3 : LEE CE wd 41 ERAS 5 ERE 3 Ss‏ ‎EOE SE SI‏ ‎a 2‏ اا ام الي ‎eB Ean‏ ا 7 2 5 2 ل عا ‎HE‏ = د ‎JR‏ الوالط. لل © ساي كمض ا ا ‎TARE‏ لين ‎Egan‏ : 8 = 13 © 2 2< 3 وال الج 8 = داتع :5 ‎o i aE‏ خا اي 8 1 ‎i SB TERE‏ اتاج :4 بش ‎gid‏ بط ا 1 ل“ 8 ا جا اللا ‎oF od 3 pd 3 eR : Ra‏ 2 : ‎=iag‏ الى انعا ب رج ‎IF RE‏ ‎Wout LE =Ess‏ : 3 1 4 . ا تخ > ب : ‎AF‏ ‏ا أ اللا #7 2 ‎x 3 2%‏ ‎H x kK} . 0‏ ‎oy =n 7‏ أل 2 ‎Boyd 0 Fe‏ 1 . ب - = ‎Ty‏ 39 ‎ka oh IT 3 FR ta‏ 1 ب 8 جرح وات ال 1 2 ما ل اشام 1 ‎FH‏ مت 4 ‎fbx‏ اا ¥ ‎F ¢ 5 E‏ ٍِ ها ] ا ام
    المت ‎SINE‏ § ‎N HLM‏ ‎iia i‏ 1 3 لممحا ل ‎XC HEIN £2 :‏ اا 5 8 : ‎HR SY Eh Sei‏ ‎TSR 88 HN EE SEEN‏
    ‎RE. ES FEE a‏ ‎oy EE aE‏ ال ‎aa ER en, DER‏ ‎a, EB} 3‏ يي ‎a : RE‏ 8 ا ‎a ANE‏ ‎SER rer }‏ ‎LS 5:‏ = الس ‎AER‏ ‎Ne ee‏ ل ‎al 0 § BEY :‏ ال ا اا ا اا ل الا ا جا ‎go‏ ‎TEE LGA N : PE RRR‏ ‎RT -‏ ل ا ‎et‏ اهراج الحم 8 د لس ‎BF shad 3 A Vi‏ ا ا 8 ‎Mi‏ ا ‎BREE‏ 3 0% اح لض ته لقي اي ااا اا ا اا تع ما واج ‎Bt‏ اب ‎WL‏ ٍ ا اا 0 ‎REC TE a SEER LTT‏ اد ‎TE Soca‏ ا لي ل 4 رع ‎a BSE‏ بلس ‎be EEF BARR‏ 1 ا م ع ا > ‎TR SE‏ ‎Lh‏ ا ا ‎Rn Sa NE 8‏ ‎TER SE Chadd aad‏ ‎JR en pa‏ ‎oo ER we 4‏ ‎RR NN ce‏ ال ال ا ا 3 ‎ah‏ ‎aw LEA‏ احا 88 ‎Ran‏ ‏ا ل ا 7 ‎RE . SEE ao‏ ‎Eo 3 aE 8#‏ ‎CART B=‏ 1 0 ‎So 3 aR Th‏ لا ‎BE 1 a FS Rn‏ ‎hy SR .‏ ‎Sha emia Mek‏ ‎PRES EY a‏ ‎BE‏ 5 لا و ا ارك 5 | 3 ممت ‎TEE‏ ‎Sarasa i‏ الالح ‎Ae‏ ‎ARISE E‏ اتح ‎EOE‏ ‎FEE‏ ‏ع ‎Te‏ & ‎EW‏ | * ]
    VP16 ‏مجالات نفاط مق‎ BE FIA ‏ض‎ \ fo 1 N ‏ال‎ 8 N . wl 1 N cd i N <n \ oe i = \ = i T \ ‏ا‎ i a N oF 1 8 \
  2. 2 . fron ‏إٍْ‎ \ Rae \ ‏ض‎ ِ a \ N 8 0 mr ] 1 ‏ا ا‎ 9 1 . on \ YN . | ul ‏ا‎ ‎F ‏وا بلج ع‎ EE ‏ان ٍِ ب‎ fo NUD ‏من‎ ND ‏وب بت وا و‎ mow ‏ديج‎ mom wom aon ERE ‏ا د د ةد امات‎ + « ‏ذة د ات ذه © اذ ا‎ "as TT OST ‏هدو ؟؟‎ 2% o%3 © © Eg $f £32 ‏لي £2 8 3:5 3ة[(‎ SY £8 §& &§& FF OBE FF 83 3 gout Ls ‏ل‎ = = 3 E ٠١ ‏كا‎
    A AIRES SUTRA 8 ‏مب المسر‎ ‏مل تت‎ UTR at ALR el 3 TRY all ‏واد‎ ‎DET: 5 =a Hi Rh wt dao] deal ataning a ‏ا : م"‎ : Mk Ce ERE OF we Ny FAT & a y 4 TEL ain J i! sles WTR sel Atte12 off SABE : | 1 wo ‏قل المدة‎ NA YE alata | PLATES ‏بشلا امد‎ : weld ‏افا‎ 8 § 3 3 = x “ee on
    IN . 0 i Pel TDNA ‏»عراف اليناف‎ 87 4 Sha Bids ER HER : 8 : & J wad! TONA © ‏ا‎ $ Oo ‏يتيج‎ ‎de pti lis ‏ا‎ A Vn Reg AN Fn SEER Sy ©" 881 Eo VY ‏شكل‎ i ‏المج نب‎ 1+7 NA y sold ‏متاطة‎ ES 3 SE 2 8 ‏الا‎ ‏ا د اا إل مشاه اث ع‎ speck 4 CS EN Ew wan ‏انس‎ ST UR Said N ‏اتا‎ RN : Sey AR % Fa ‏ا ا‎ aw Ek 2 es THR a Ea 0-1 ‏م م‎ 8843 ‏ا 0 رٍ‎ . oF Nevo . 4 : ‏سوال الا جد 3 ا‎ / ‏ب‎ 0823 3 UTR v1 i 3 1 0 00 َ 107 ‏ا‎ ‎0 pDAB107881 Ln 1 0 ‏ا‎ i FN SE 3 0 ‏ل + 1# زرح فاصم الا‎ Nos ‏ا ل‎ . ‏ال‎ ‎8 ‏اننا‎ ‎1 i ‏ض‎ = Eo Sak 5 ‏ا ل‎ 0 a ‏ض ب‎ "ل١‎ 1 Eh oN ay % Ori Re Malt E 0 ‏ا‎ wn F 8 Ren 8 8 ‏ا‎ ES RENIN Mg Saw a ; ‏ا يي‎ 8 NN Lid Sw 0 8 TH 8 i” ‏ب ل الا‎ 811 vi ‏الاق‎ 1 "© 0 1 808243 ‏انا‎ TONA ‏سي وبا‎ ram 183 0 Vind Th NA 3 ‏ل ا ل“‎ Ted TONS ١٠؟ ‏شكل‎ ‏يح‎ { 3 build
    _ \ ¢ ‏اج‎ ‏عاسم‎ 3 TR wi AE rity ; t 28 oo ‏مي لاقم خأ‎ : hai a Eo 8 ¥ 2 oe ‏ايالخ‎ 1 ‏ا‎ Ji 0 ‏ا‎ de 0 0 ‏الا ا م ا‎ ) A 3 Zo ol A {Lib 8 CeVIMVE'UTR | ‏ال ل الى‎ ‏ن" اذا‎ EN 3 1: 8 ‏الل‎ TREN . uk N v2 ‏المستر‎ © 1 IN visas : a a a ei TNA i - ‏رانس ا اليش الي اا‎ ‏ا 8 ف الحم يا لكا احا‎ 1 — ER EE EN Ne ‏جا‎ HPT wi 0 ‏ل‎ ‏كه‎ CHS ‏ام لم‎ '/ ‏لحت انا = ا‎ RN BR AR PRES el] ‏رةه ل‎ spesR TY te ALON yoo i ‏لرسقاعة‎ VIER 1 : : ‏ل‎ 8 ARTY Li STTTTTTAMORFIE 2 UTR v2 3 ‏قلام تان إل‎ ES Sw ha RE rR in re i iS Erland TON A
    AE. ‏اا ال ا ال‎ 8 0 ‏اال‎ he ‏الي‎ Fad 8 ‏ا حي‎ 8 x Sn : iA a NON ori i. ES No Ori Rep 5 ; aril vo IRE H a i 3 8 2
    ‎edad 1‏ 1 : : ترز بناوج المسرغلا ‎natal,‏ ‏: ا وي ‎Ce Sk S$‏ ‎LTR‏ ! 5 بق ¥ ‎R 8 0" HC eo ions © g‏ & 58 ‎EN Ser 3 TTT‏ الا ا حي ‎RE‏ ‏السو ‎i A i‏ ا د © ‎i TTR 3‏ #ش ‎ST EE WEA‏ ٍ لب ا : 3 3 ‎pr + EN‏ 1 00823318 مسية 2 لمعن اح ‎i EN‏ ‎EL No ai‏ ةا ©“ 0 ‎pe Wh‏ ‎ta‏ 2 ‎Ga‏ ‎HER‏ سم ‎Co‏ ب ‎BATTER‏ : ا 3 ‎i‏ ‎ay‏ : ل ‎ta‏ ‎SEE oh 2 Pee EEE‏ ‎Ma‏ حي ‎Yo SER Fix‏ . 0 | | لانت ‎SR EN‏ مج ‎veh‏ لبنس بدأ ‎La‏ ‎LOE RURI‏ الاب ا ‎Wa SY‏ ‎i Sy‏ ‎a Te RR‏ ‎Ee ) Sin : ay‏ ‎a‏ ال ‎ori ae Nae EES‏ الخد ‎ne Eee SRR wae‏ ‎maT 0 STN EE Seen‏ ‎Ori Rep Nii CBR HF TH v1‏ لخ نب ‎Le‏ ‎Pas‏ ال ا ا ‎een‏ ‏ل : ع م ين ا اذا سا ا 8 ‎ee‏ ‎UTR v2‏ لل عونم 2 ‎oriV i‏ ا ل ‎a Ve en‏ ‎EH age amg: p.
  3. 3 Fd 3 { 4 7‏ ‎Fal TONA ١ atone‏ 3[ ‎i dad | THNA‏ > شك ى| ل & 0
  4. —Yiv- StuORF2I UM wi Orebid v3 1 3 0 = 7 EN 1 ‏لاا الا ا ا ا الا‎ 25 Se Xe 3 ‏الح‎ dein EI EE ae SHEE Fa NE ‏اد‎ Ri CoVMY 8 UM ams 3 REN : PEN SEER ese SEE ‏ان‎ : 0 i He 2 Lu i YE re JCEM Lg L ei de oF Ne 0 ‏انا‎ ٠ ‏ا‎ ‎lit RE ‏ا‎ ‎A el RG ae Ny LL HPT a 0... ‏اا‎ ‎«8 0 1 ‏ا‎ ‏قفا ل اع‎ 0788s ‏ل“‎ ‏اال ال‎ fg 0: 0 sls Ts § 5 wa Roba A a} Toba § i Ee en 8 0 ‏فقوو ل‎ TUM v2 \ ‏بج‎ ‎nn NN ‏رج‎ ER Eo se Tel BONA i : Ny ES Ee am aR NR %, sons Tal TONE go sama al ES Tit EE NE eR ‏قلات الما ا ا اا‎ ‏ان ا‎ EN Lon ‏احج‎ 7 SERRE TIE TR 8 i Ll ‏فت‎ TE Non eri : Nm vp iY ari 8 ‏ضع‎ ‎oo ‎01 ‏ا بن الله وا ا‎ ٠١ ‏شكل‎
  5. -0م؟1- و 3178 ثثعث0وة ‎A‏ ب و00 :0 3 :0 > 2 الي اج الوا ا ‎nT‏ ا 3 ‎BN‏ ا ‎VE ell 8‏ ال | ا“ 20.20 ‎a : ARNE‏ ابكا الا 1 ‎a Sal‏ ‎SEERA SE‏ در ‎SRE‏ ‎Cs ¥ Mh 3 u nm Fy 0 J.
  6. Eq 3‏ ‎Sr HE fe or‏ ‎Ba on IRR RD” HI NE RE‏ 1 . ‎AUER‏ الم 23 >3 ا ‎V2 al COVE of‏ مور > “نا التي وذ ا جنا ‎Saal TORA = We‏ ‎ile RRS RCE - NaN‏ ‎NN | WN‏ المشاطة ‎pel‏ ‎o Ea‏ ‎Na SHAR ITER 0‏ جه 05 [قفطاط لب ا ‎spec | Co‏ ‎a sand ar pd
  7. 7 Lo‏ ‎Ne § AORFI 3" UTR 7‏ ‎RK IS )‏ )5 بل ب ااا وروي اوت الا نحا الا ا > قلاط ‎SCN Tal‏ 0 ‎BTN Mum‏ ,5 بل الا أ الثمم التي ‎Tr‏ ‏ا اال اا ا ‎an‏ ‏ال الأ ا ‎Vi‏ ‏قلا ‎Ili‏ ا ا ال ال ججح حي ادا اخ ‎TE‏ الالح ‎PC‏ 4 0 الأو ا ‎rik yo BIE‏ الما 1 ‎Qri Rap‏ 0 الل 8:1 ‎I< Be‏ ٍ ب 0
    ‎wi‏ 3*7 بصي ‎i‏ ل 1 مضع ‎SEER‏ ل ‎N \ i‏ : ‎Anh‏ الما ¥ ‎x bY = i So i RY‏ ‎Moy ANE 0 WERE 1 an‏ در ال ا ‎RE Re‏ ‎ov A TR,‏ لاي ‎CSM‏ ‏ل ا ‎og NEE > ١‏ ‎THER vial diag‏ ف" ‎vod APRA‏ سس د & ‎V2 jl ar‏ م : ‎ay‏ : ا : ال ا ‎pe a LH hic ENR‏ ا ‎saat TENA a Ny EL‏ ‎GER CL‏ ا ا ‎VT‏ دا ا جا ‎edd AQ as‏ 4 ‎i a‏ ‎a NE‏ ‎E AB 07888 Ll‏ ‎ike‏ اناب با ‎cc EE pos‏ ‎REE Xr‏ 2 : 0 سي | ‎speck‏ ‎ERY do 0‏ ريج فاججة ‎Ei‏ ‎Wa TRA Se 0‏ وب ‎UTR‏ د ‎AMOREZE‏ 1 0 ‎Me Ee :‏ ب ‎tad 1018‏ ل 3 ‎Se ANG Ng‏ ل ‎pes ERR 5 : SR eg‏ ‎Ft ! SEER EY Tad TNs‏ ‎oie x, kik‏ اال ‎RN‏ ‎pi a 0 ey‏ لدي 3 1 ‎Wii, fay‏ 8 ل ‎Nine - Raw Lah‏ ‎SES EN‏ تم % ‎ia‏ 8 ا ‎POE SEE‏ ‎SY -‏ ا - ‎HA 8 Voy wy‏ ‎Yiu‏ ‎١ OriRep‏ ‎i :‏ 177 شكل ‎VA‏ ‎Be‏ “ا
    _ \ OW — AnQRF23 3" UR 1 eft wd \ : 8 1 BY Lo EE TREE 2 : A No ‏الم 2ل‎ BBG Ly : ET a CSVMNETUR ‏حا الل خاي‎ i ‏ل‎ aw EEN Gd al Raa VE God CoV ml ‏ال‎ ER Chass Rib Cees AF a ai all TOBA : fe Seta Aaa diode a E HFT 3 ‏سي‎ ‎St ‏ا اي‎ a lend RE LE Fr ERE OTERT SEN spe 8 0 ‏م ا أن الا قح‎ 8 5 : Es J SEA EO UE § i a blip x VEER NE a M8 ” NE AgORFM FUR v2 = 8 1 3 ‏جل‎ 1 i RR: ‏ل ا‎ 1 = ‏ملام ساس‎ 0 ‏ا‎ ene wn ‏الث الي‎ Tal ‏علاطا‎ ‏ميق > ل ا ا‎ WRAY Wine BS han ‏اا اذا‎ ‏اللاي ات لق‎ Fadi TENA 0 ‏ك5 سا ا نا اا ا مي‎ ES 8 ‏خش‎ fi. oN 7 3 6 3 ~ J % OriRep 3 813 ARE
    — \ o \ — ALORFES FUR v 0 ‏م20‎ YPIE 3 4 : . hy : 3 1 3 ik 2 ky Bi Ga RY i
  8. 8 . No ‏ب ل ل‎ x JRE 2 ‏التي‎ TSE ‏بن‎ ‎SEV B' UTR SEER 4 SRR WR IAN ‏جد‎ TERE 0 8 8 ‏اماي‎ an, WZ ‏لمحت‎ | Ce = a 3 bh a ¥ 4 ‏ا‎ B 8 ‏اميا @ ي«#0 لدب‎ ‏د ا ان‎ “EN ‏ا اما‎ BES a a SR EE 3 ‏اليا‎ ‎Ae peal ‏المستراططة‎ we E HPT ed > ‏الخ‎ ‎a Sy ‏ا‎ Ea Caen ABI O8RT2 : 3 Lo NER Ra speech RET Pr {0 ia EE ‏وج‎ BEER NE: He ‏ال‎ SORES 3 UTR ‏تدب‎ ‎NG 4 fy TR CE Sg 0 se. ON [ai FDNA Ug, sm SE ‏ب اا‎ : ٍ ON 0 Ie A ‏ب‎ STR] ‏اي ا‎ XB Er ‏الا المي‎ IaBTDHRA TER ; Ro RE SSR 5, Rada SRE ‏ا ل ل‎ TNE Tao Fadl TO NA 5 Sq ETRY : ‏ل ا د ال‎ ‏سس ا اي‎ NTN ‏ا‎ ‎18 34 ‏حو‎ 7 VN + OriRep 3 17 11 *#* ‏ار“‎
    _ \ o \ —_ AWMORFEIZI UM wt 0 Bot 3 ‏و‎ He VR & & a : y A ‏ا‎ re 0 RR salt Atlld 18 ‏ا الل‎ ُ EE ‏من‎ ‏ا م 0 ل اللي‎ 188 ‏ا حب‎ : wi pe Eh 8 ‏ا‎ Ei SEER IEE che ‘ Vo Ras ol n whoo 3 ‏ان الج اا ا ب‎ 7 " 1 ‏ا ا‎ i RE wal ToNe OW ‏ا‎ ‎: ‏ا‎ > Sa do dbo iss TN 0 HPT we i ‏ا‎ ‎Sh ‏ب‎ ‏م‎ LEE ‏سم سرس‎ a ‏له 8 تققطمع الا‎ ‏الا الح‎ 7 WE 4a 1 oe 3 i SE she od Fle Nd $i } = SES 7 wR ‏ا 0 صل أ ا 9و سس‎ : : : 0 = ‏أ + سوبي‎ TUM vE EY Mee Wl gn PT 3 ‏بذ لل‎ tel 0 iE Si SN ‏ب‎ 0 ‏ب‎ oi Ri - ‏ا ا‎ ‏الي‎ Pr ‏اا ل ل‎ ay cole am ‏ب‎ ‏ا‎ aa RE REE Nb, Fe ‏د‎ Laat TH 8 TORRE RENN NG 8 ‏تت با أ‎ Bu N en 7 ‏غت‎ TR be Yo ¥ X No X Dei Rep 117 0 A 0 5 ! +١ 4 ‏لل‎
    _ \ o Ad —_ AORFEZ 3 UTR v1 " bY ‏الام‎ EY . TE CELTS + Er RR a Pid ¥ 2. ‏ا‎ Se Lo ry ERE ‏عل‎ Sed ‏5ق‎ ‎0 ‏ع ل مج ا‎ WA ‏ا‎ a ‏لدج‎ ١1 ١7 ‏حو‎ ‎ْ ‏لي ان‎ SRE, : SE > ‏ا‎ i es ‏ي‎ i EEN gd SURE RR va eV a ‏د م اال‎ ‏ل‎ ' - = ‏الدب‎ 8 ba Neti : “nl pi ‏يا‎ ‎TINE SER 8 ny 3 Th LL MPT ve i | = ah 1 os ‏ا د‎ : EEN a. ‏قم‎ 3 I spesR TTL so TERY : SE 3 8 vi aol pad ‏م‎ J Ta : & AMORF24 3 URv2 7 ‏بد‎ ‎3 ‏ل‎ ‎: 0 ‏مي ا لا‎ 1 Cael ‏ا‎ Noe 1 ‏ا‎ ‎, a" 5 LH TRUK aml gl ee EY SEE EERE LEE So i Nl, ‏قلاط الا ا‎ ‏ا الس‎ BEN or A - SRE 0 ke 7 il LS % Ye sri ‏ب‎ Cri Ray 4 oriT YY 8 RS 3 KI 2
    _ \ o ¢ —_ 2022 BUR v1 i a } KS AEE v2 A A i ‏ا‎ ‏ا لا 1 8 ل‎ 2 ‏ا ين يج ا‎ ‏ند اا‎ - ‏مااع‎ 5 UTR ‏يي‎ A ‏ا‎ ‏نا نت‎ - de Nin eon Chon : ١ ‏ال ا ال‎ PN ‏الوا الا ل ا اد‎ ‏ا‎ a LY wd deen Albi ir Sige I ‏ا‎ ns BF NER oui ‏الاق‎ f XU 1: ‏جا‎ 0 oT ovr Nn ‏توا لوي ل‎ Eaten EEN LER ‏ااا‎ ‎de elt ‏مضاعية‎ ™ Ny ‏خا‎ 1 i FS ‏ام‎ ‎a Ha Sa TT i Cor ba va ‏قتاع لين‎ 74 4# 1 NEAR : LEE spRER | ck yo Wl slg YI 3 Sri ‏اه‎ Ai Li 8 SE $d ARIORFI "UTR v2 0 : ‏ل‎ ‏ا ان اح الا ا ب‎ 0 «> ‏الاي‎ TONS i Si SH BN ep ‏اوهو‎ ‏ب‎ cls ‏8ل 0 اليد اذ ا‎ ‏مم ا 3 ا ا ل‎ ‏الكل جطاز‎ | < ‏ا‎ EE LUNES Rk 9 Ta BR ‏الحا‎ FO NA aie SEER iene N i.
    TR ‏ا‎ ‏مسو لاا ا‎ ESN . AE ‏؟ + لفط‎ ٠ ory ‏الل‎ ‎A hi 3 Ca ١ LiRep ‏اال‎ ‎11 ‏ان‎ , a Y vr 0 ! 4 oo £Y14
    _ \ 00 — SteORF2I UM wi Oreav? No tem ‏المسر لل‎ 5 ‏ل‎ - 0 Cali SEE i d a: es a ‏د ا‎ The SH Sn 3 : > wn fe = ‏ا ا ال اال‎ ‏باتك حا‎ . ovis lading RE a Ase Ce PE Cf ER oy ER EN TONA EF oR 5 : ‏حي‎ ‎5 aN Eo TT ‏السرحة‎ nha ™ Ny ‏_ذا‎ 1 3 0 Sh Wa ‏حم م‎ ABR ESTE LL ie. ‏ا‎ 5 0 ‏ا | لمع‎ 2 ‏مها زوج قاض ب‎ I ‏ا‎ ‏تح‎ § 0 0 4004343078 «2 wn > wh 3 = 3 >< ‏مع الح ب‎ : Ci % 0 «> Bk \ anal 011 Ha on : SNE i TN . 5 ‏ع الا‎ RE wn pe a ‏ب‎ i all TENA hE. wl ay No We Te ad Bh hh. TW ’ [ Ey tall TOMA nN 0 ‏اا ال ا‎ tif 38 ‏ا‎ ‎: x KS ‏ا ااا ا‎ ْ 0 07 ‏اا‎ ‎#1 ‏اا الي‎ ¥, " », ١ Sl at
    — \ o ‏أ‎ — ARKRRII UTR v1 4 : Te 21] 3 0: ‏"م ال ل‎ Drab) 8 # 2[ٍ ‏ا 1 الخ‎ so NG =: 7 2 ‏ل محش‎ At Hh 8 ‏ير ا ا‎ PETTY hE 4 oy ‏ل‎ i RAR aE mT = TEN OE EERIE FR VE gaat ae 4 So ‏8س‎ ‎| Pil NEE eT FETE i a EE CA : 7 ‏ا‎ ‎wal TOHR ‏اا‎ ‎2 ‏ال اا ع‎ HEN Ag wah ‏ما‎ Nw f 43 v1 a BSE an ry SEN fo ER AER ETERS HR 0 ‏ل‎ DARL OBITS ) speck - 0 .' $0 LL SEM ap HEEL J ‏سس‎ ‎we FT AMOR UTR ve ‏ا ل‎ ne 3 WO Tad 8
    Ee . Th ‏يذ‎ J “i ‏ادا د أب‎ 4 Sa Ja ht Wd Prt Eo Se a Pl 8 NE RR Sink REE a > ae EE 8 ‏بهذ‎ ‎8 38 Ne ‏لذن‎ ‏اال‎ ‎17 ‎Yo ‏شرك‎
    _ \ o 7 _ ‏ممععفيعد‎ I UTR vi 7 1 fi 0 ‏بن ا‎ 2 weal Sx 0: 8 SRT TRE EET TT Gy VE ICV gd ‏أ‎ A ‏نا ليه الأ‎ ‏ا الس‎ 7 Re 1 ‏للدت‎ TORA = pe Li aad H To NA 5 8 ‏نا‎ EE Gein TEL eR TN 1 ‏بل مشتانة السرعة‎ | WN i SER ‏لذ‎ 0] ‏ل‎ pe wm ‏انا 7 ااا الك ا‎ speck - ia ‏لوستاعة‎ SHER 1 1 ‏سس مس ا‎ : : Ce La TTT AOR + UTR ‏وب‎ ‎8 8 a 3 hb REET ‏لا ل‎ 3 ‏الحد ا‎ 8 EE im Ny Ck Go a 0 Isl TDNA i = ‏ل‎ 5 Sa ” ER : . ial "x CR
    A. TTT Fl TONA BE RE NEN 5 Le aa II NE EN EN wR ‏ا‎ 5, SFR 3 ‏ل‎ cd 5 i Ori Rep 217 ‏جا" ¥ 3 ب‎ ‏أ‎ ١ ‏اا ا‎
    _ \ o A —_ ‏لت اقم‎ I UTR v1 x 2 : 8 ‏الما 2+ جع ا‎ 8 ‏و نات » مما‎ ْ RR spe RY a 28 Se a Sin ee ‏ا : ا ال‎ : ‏ا ,أ ال 7 ع2‎ ‏ا 0 ال‎ ‏الدب‎ TOHA ‏ا‎ 3 oo EY ha ‏ا‎ 0 Ae allt ‏لاي ا بجا << مسا عه‎ v1 : ‏قرا‎ ‎EY hai ‏دا‎ eck Soo ‏جب أربي جيردت‎ VER Co a. plas DEITE bens speck © Sa ‏ام‎ ‏ب‎ sale HEAT J AE TE rsh ‏ب‎ § + 38044301 2 0 bh ‏اال‎ ‏الا ا‎ Tad DNA ES 8 LE : ‏م‎ ik % 8 0 ; : : Co” ‏ان ااي‎ NC ‏الها‎ 208 ‏الما © 0س اتا ى|‎ T-DNA ‏رض 5 3 1 + ررح‎ ¥ 1 N a \ OriRep % #171 YV ‏شكل‎ ‎0 AS 3 4
    _ \ o q — AORFIISTUR vi : KS “8 > 1 ‏اج ا 0 : اي‎ ee hs Wy 28 [SO EE ‏ا‎ bi } ki Sia ‏ا اللا تحب‎ ¥2 ‏ا ب د الي ال‎ Ey wi aot RtUbiR ? Basin) : «5 ‏اا ا يي‎ By 3 Chae od 1 B 0 SRR ‏ب‎ SEER Eee RE se ERR ‏ا نحت تبي‎ SE Nu REE 3 ‏ا ال 088 الاب‎ FRE el Sha ‏حا‎ HET vd i ‏ال‎ ‎a ee J ‏اودجي‎ SER speck ‏أتغفنام‎ 95 4# ‏م"‎ | wale mad 3 i. ‏سل‎ ‎0 = + 401243 UTR w2 = 9 a 8 0 So ‏اليا‎ 8 ‏ا : ب‎ re a ES i 1 ‏الم‎ Th Ha i ales RR 0 : NE COR aaa > 3 Nn ‏ال ل الل‎ 8 BE Sh ِ Se SER NG ) : NEES ‏ل‎ Ni > > ‏ب‎ ‎iA TE ooo eri 2 Yo 01 ‏و‎ ‎5 ‎2 ‏نر ا أ‎ Te ‏ل‎ 0 { Sd é
    ٠
    EE — EE EE ER ER EER ER ee) H bE pas = HE HEE 3 3 Wd Ty 1 5 won Ty 1 0 Ty 1 0 Ty 1 0 Ty 1 0 Ty 1 0 Ty 1 0 Ty 1 0 Ty 1 0 Ty wn 0 Ty As 0 ‏تك ؟::‎ : HEH Vo : id RR : 5 HE Ty 1 ‏ب‎ won Ty 1 0 Ty 1 0 won Ty 1 0 0 Ty 1 0 Ty 1 0 Ty 1 0 Ty 1 0 Ty 1 0 Vd 3 : HH Ty NY 0 Ty EE 0 Ty 1 0 Ty 1 0 Ty 1 0 Ty 1 0 Ty 1 0 Ty 1 0 Ty 1 0 Ty 1 0 Ty 1 0 won Ty 1 5 won :: : HEH
    3 8 3 HEE i id bE] 2) ¥ wo Ty 1 0 Ty 1 0 Ty 1 0 Ty 1 0 Ty 1 0 Ty 1 0 bE] 2) ha won Ty 1 0 Ty 1 0 Ty 1 0 Ty ‏بم‎ : FR VE ‏م‎ : id Ty 1 0 Ty 1 0 1d 3 : * wl bE 1 : EN HE Ty 1 0 Ty 1 0 Ty 1 0 0: : ‏م ا‎ 0: : ad HE bE] 2) 1 FR PERI 1 HE : ‏ب ا ا 5 اح‎ Tia 8 ‏م‎ ‎NEES : a HE voy 1 Rs: HE Via od + 1 HH : : ‏د نا ا‎ ::* i HH VEY 3 fe 5 8 . id IY FS Re FR Ting I Li has od ‏ب ا‎ 8 Sol En FR HE 3 : fr a HE HEE 3 3 : EAE Wd HE : 8 - a HH HEE 3 N 3 : pd a Wd 13 : es i : he ¥ HE HE 3 3 : 3 H i 23 HE HE 3 8 : i > i ‏ا‎ H HE
    : 3 3 E 3 : 8 : HER 8 3 i 3 2: 3 FR oad iS i il : bY FR LE 0) H : bases x 8 FR bE 1 i 03 Ry : ‏ا‎ 3 2 wool 1d : 8 : 8 kb: 3 8 od Ty 3 age : mn 5 ‏ا‎ hd w HEH bE] 2) 5 8 0: on wn 2 : 2 HE HE 3 2 bs : Td wy joss 8 8 8 Wd bE] 2} B = Re) Tan ETL = ey a 2 HE 1d 3 : 3 ‏دي‎ WEE 20 ‏ا ا‎ Ty 8 Lng RASA ‏حت‎ i: Tay ‏م لمحي‎ 8 ‏ا‎ agent 1 cE ed a 2: AN pa wl bE] 8 £3 ad IRR REY TITTY a So ‏ا اد هت رت اا‎ wo 1d 3 : ‏امك‎ RE TIE ‏ا‎ i EN ‏ام‎ 8
    : : AR ‏ب ا 2 ا‎ any ‏ال ا‎ av ne 3 + RB: RY 1 -. Sy h rnd Rte ne ENE rN eT RENE won 1d 3 : ‏ال‎ - LE Rn 0 BR SR ‏الت‎ DI HE 3 SE BSI J : ‏ص ل‎ TE NL 1d »ضغاة_>'|ادا7©و7وىو7]وواو٠7ال+ف٠>©ض_>7لل>ل”7”دو©إ7ص7وإإاإواا#؛ل(ى“ ‏ااا = بت لبظادد5ا'ا6”ا”ل,”‎ a ‏ال‎ ‎HEE 3 RETIRE ‏المت‎ 68 7 ee rN ) 1 ‏ا ا‎ a N Y EY TRH BREESE 1 3 EE RE Te AE Poo aE 1: on 5: 8 ‏الله الل‎ 3 3 1 SREY
    H 3 : ‏بم ل الا« العا ا ا ا‎ Te 3 ae R SN TE 3 i 1d 3 NL, pecan 3 ‏ا لات تا 2 الوا مه واج ل ا ا الا‎ HR 8 ‏الل‎ HE Ty BRL eee RRR 00) ‏“الم اكب‎ RRA ae ‏اناا ا ال اعم أب‎ = a od 0 B ARERR SRS ‏ا ا ا سمس ا او الل‎ Wo i 3 5 1 0 ‏اا‎ Ee a a FR vo nv RK a wo TR 3 wor 1d 3 Hh 1d 3 Hh TR 3 wor 1d 3 Hh 1d 3 Hh TR 3 wor 1d 3 Hh 1d 3 Hh VE ola id vo [RE Ha 1d 3 Hh TR 3 wor 1d 3 Hh 1d 3 Hh TR 3 wor 1d 3 Hh 1d 3 Hh TR 3 wor TR 3 wor TR 3 wor HE i HEN Ty indy Civ TTT TT TT ‏ا :د جالعل هلول عله وتلل للع لعل لوتوتوتلاعله لعلعلهللولولللعلتوتعللعلللللللوتوتعلهلللللللوتوتوتعلهلهلولللوت لعلعلعللولللوتتوتعلعلعللولولاحللوتول لعلهللوللللعلهلوتوتوتهلولللللعلعلوتوتهل للللعل لع لعلهللولولللعل لع‎ RS ‏تحت تتح‎ 8 HH HEE H & ‏ب‎ wo GE 58 5 8 HE
    BN 1 he « 1 ‏يم نج 2 ام‎ 8 0 * x E iw HE 3 = 8 2S 8 ‏يداك الوا يج‎ XL Daw Bd 8 BR Fos 5 Fas HEH
    N EN 8 on ba ‏الي حا ا ا الجا‎ 3 Woe aR 0 5 “3 ; Wn bE] 3 NF ig 80 8 Nak ER NE RR HE EARS Ww RS BY 5 8 a FEE Ty 1 po Ra wa FEE oS ‏بح‎ My ‏ان‎ SOR RN pn 2 ‏ا‎ 5 4 0: bE 1 ‏بم ب ب‎ ~ Hy Ny ‏الوا ير ع الا‎ pn ‏ب ا ب ا‎ ey x wg TR H ‏ار الات احج تحب ا ا الم 8 اا 5 ب‎ 3 ov WY =~ 8 = FEE HE H Gr = 4 > ‏اليه‎ Rw RE ‏ا ال‎ <5 & BA 2 2 5 FR By ‏م ث5‎ 3} RS RN Eas 3. 8 I wos HE H 0 ES ‏ساق ب ةا‎ : H HN H H H SERS
    ‎RAR‏ ا ‎arr r RRA R RRA RR AAA RRA RRA RRR A‏ ل ل لل ل > 4ه ‎ak‏ 2 3 بن 2 1
    CAS ‏مااي اا ل الما د‎ SX ‏كاوق‎ das ‏رقع‎ ‏ا‎ ‎1 ‎0 ‏ا‎ > i Fd ‏محف‎ SES i ‏محف‎ oR, i AN NE ‏د‎ 3 0 : EY i NL i Cradle 5 UTR ‏كم فق محف‎ 3 i a RESTS LTR ‏مخف‎ Andes 3 be JE ‏مسد‎ ww Hoey 9 xX NEE ‏تت ل‎ i ee : am ‏ال‎ Rs ‏يي‎ ‎vend Red 5 ‏ا‎ { pT RE RS CE NS Sear Lo a LAN SO AIA i iN Tel, REED dame No HE SHER TST EEE SER Ca Hn Sm 5 > 1 SEE ‏ال الل‎ en SEE Jo 1 ‏ا ا‎ a Lis 0" & 3 ‏أ‎ 0 ‏ا‎ ES aan Er SHEN ER SiN Sy iS So Sa ~ Sy mag RINE SEER Jy SRE Shy JEN SEI Rm SREY Sr 4 ‏ب‎ oy Labi aR 3 ; RE ok TREE, TEES By $ EY Ro ¥ Rt VEEN 8 FE FO.
    E . . LE 14 8 i x ‏اا ا حا‎ WN LEE ERE ] 3 1 ‏ا قا‎ HERR : SECT EYRE NITR wi cen > C—O or HEY ‏لت ا‎ ¢1 TR 1 ‏ب‎ ES ny FES x oan - 8 1 7 ‏ا‎ 0 EE Si ii pa Say on Ny Sma oY wat Se ET 1 Fas oi 1 ‏ا‎ : oy EERE SHEE ; ® + ‏ممت‎ Sri 1 & ‏ان‎ EE ER SE i aia, Sal EEE po TON ‏جك‎ Wate NRG > i > ‏الي ا‎ SER ‏ا‎ IE gE sid . RS aE EE rsd Neg 7 Hi ‏م‎ 3 PEA Ee pene Lona es SLR vise fd bin dl, Tate NER - 17 ‏الدج ا‎ od SEEN, : Five ‏م الل‎ ead ‏لسراو الا‎ EEE RN ‏إل الح‎ ge 8) ‏اب سس مود ا ا‎ > he TARR NEES 3 EE SE ‏ال‎ ‎NEE | rE 5 Ot ‏ضع‎ ‎re NEE ee 5, : ‏لويم‎ mT ‏ا ا ا‎ pT ‏ب‎ ‎FAT 3 0 ei] N IY § LAT EN k Sn 3 3 ‏ا ا‎ SE Ey ' ‏نايلم‎ FAR 3
    ٠23.2 ‏شكل‎ ‎1 3 Fe ‏خا‎
    حضتا ال ا ‎Disa Kets Bes Rs‏ 1 ‎x SR AE A sn 0 -‏ عا 5 0 ال ‎al TD‏ ب 1 ف ‎es‏ 2 ‎J RN : :‏ 8 6 § 0 ‎yf i 0 - 0 - To TH‏ ~~ اله ‎vr‏ ‎i nd 8 wR‏ اللا الا اام ‎us‏ ا لات اريت ‎١‏ الس ‎Ea‏ § ل ‎١ = Te : 5 RR‏ ةل ا 0 ‎PER‏ ‎X Neen‏ 1 الل ‎ERE SE hE Sel SEEN‏ ا ‎Cw fe Re‏ ب لمح ا لت اي ‎Safad‏ ا ال ل ال ‎SE‏ مك اا ‎SET ee SR‏ ‎LEER FO > >‏ ‎any # Ce wg‏ ‎SEE Eat Re‏ ‎Fp SR a‏ ب 0 ‎GUS, aa‏ ب لح "ع ل 0 ل ‎Say E‏ مت ‎Ss‏ ‎RE‏ ل ‎SEE RE‏ ‎Ry TREN‏ ا 0 ‎boy‏ ‎AE‏ نالحد 9 ‎pe pTALG Us Han‏ ‎VEER ay‏ بخ م 8 فا ااا ‎i‏ ‎I 3 HR‏ ‎si 3 J ER ta EE‏ ‎FEY‏ مت لا ‎DAR A a 3A‏ ال ل ; : ‎i‏ . ا ‎SUEZ INR wi‏ ‎THEY‏ َ 1 ‎an i‏ ‎RY Eo‏ ‎RE Sh 2‏ اك ‎fy aan‏ “ا ‎SE Sel‏ ‎a : aE a‏ ا 5 ‎ced‏ ‏الت م ‎Baki‏ محر ث2 ‎Sa Tg ee‏ إل ‎SHES ON 1‏ ا ا ‎SEER vo SR‏ ‎ho SRE a ai‏ مالالا محف ‎STUTR I‏ ا ‎NINE EY SRR‏ ‎ST TERE TIN She Sa . :‏ 3 8 ل ‎ON Wine‏ لبج 0 ‎Tina‏ اطلام مطل ‎Wha‏ ‏4 ال ‎[ey‏ و "م ا 0 5 ‎TES pal in 4 A AN BR‏ انين ‎ES FY‏ 8 م تم ع ‎XY EN‏ § 2 ‎tS) y 5 >‏ ‎DES 8 Nine fis‏ الل رت المج ب ل وا ا حك را اا كير الما ‎ATETEEL URS HE‏ ‎ON‏ 8 ‎RY‏ ‏اح ا 3 1 بلا 8 3 المح 1 % : ; ا : 3 ‎rs‏ < ‎Ladi Dn‏ ‎Led 3 < ES‏ للا ‎LEE TN‏
    مدة سريان هذه البراءة عشرون سنة من تاريخ إيداع الطلب وذلك بشرط تسديد المقابل المالي السنوي للبراءة وعدم بطلانها أو سقوطها لمخالفتها لأي من أحكام نظام براءات الاختراع والتصميمات التخطيطية للدارات المتكاملة والأصناف النباتية والنماذج الصناعية أو لائحته التنفيذية صادرة عن مدينة الملك عبدالعزيز للعلوم والتقنية ؛ مكتب البراءات السعودي ص ب ‎TAT‏ الرياض 57؟؟١١‏ ¢ المملكة العربية السعودية بريد الكتروني: ‎patents @kacst.edu.sa‏
SA113340251A 2012-02-02 2013-02-02 حوافز لتفاعل تنشيط التعبير الجينى للنبات واستخدامها SA113340251B1 (ar)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261594245P 2012-02-02 2012-02-02

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SA113340251B1 true SA113340251B1 (ar) 2015-08-16

Family

ID=48904103

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SA113340251A SA113340251B1 (ar) 2012-02-02 2013-02-02 حوافز لتفاعل تنشيط التعبير الجينى للنبات واستخدامها

Country Status (18)

Country Link
US (4) US10351610B2 (ar)
EP (1) EP2809146B1 (ar)
JP (7) JP6208692B2 (ar)
KR (5) KR102076728B1 (ar)
CN (2) CN107556389B (ar)
AR (1) AR089877A1 (ar)
AU (1) AU2013214814B2 (ar)
BR (1) BR102013002576B1 (ar)
CA (2) CA2863664C (ar)
HK (1) HK1204751A1 (ar)
IL (1) IL233806B (ar)
RU (1) RU2662672C2 (ar)
SA (1) SA113340251B1 (ar)
TW (2) TWI664193B (ar)
UA (1) UA117452C2 (ar)
UY (1) UY34609A (ar)
WO (1) WO2013116731A1 (ar)
ZA (1) ZA201406234B (ar)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1662005A1 (en) * 2004-11-26 2006-05-31 FrankGen Biotechnologie AG Enhancer-containing gene trap vectors for random and targeted gene trapping
CA2863664C (en) * 2012-02-02 2022-07-05 Dow Agrosciences Llc Plant transactivation interaction motifs and uses thereof
EP3128119A1 (en) 2015-08-05 2017-02-08 Hydril Company Threaded tubular connection
NL2018298B1 (en) 2017-02-03 2018-08-28 Hydril Co Threaded tubular connection
EP3578658A1 (en) * 2018-06-08 2019-12-11 Johann Wolfgang Goethe-Universität Frankfurt Method for generating a gene editing vector with fixed guide rna pairs
US20210062206A1 (en) * 2019-07-08 2021-03-04 The Regents Of The University Of California Synthetic transcription factors

Family Cites Families (85)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4693977A (en) 1982-08-23 1987-09-15 Queen's University At Kingston Enzyme immobilization for producing cephalosporin antibiotics
US4536475A (en) 1982-10-05 1985-08-20 Phytogen Plant vector
US5352605A (en) 1983-01-17 1994-10-04 Monsanto Company Chimeric genes for transforming plant cells using viral promoters
NL8300698A (nl) 1983-02-24 1984-09-17 Univ Leiden Werkwijze voor het inbouwen van vreemd dna in het genoom van tweezaadlobbige planten; agrobacterium tumefaciens bacterien en werkwijze voor het produceren daarvan; planten en plantecellen met gewijzigde genetische eigenschappen; werkwijze voor het bereiden van chemische en/of farmaceutische produkten.
NZ207765A (en) 1983-04-15 1987-03-06 Lubrizol Genetics Inc Plant expression of transferred dna(t-dna)from plasmids associated with agrobacterium sp
US5420034A (en) 1986-07-31 1995-05-30 Calgene, Inc. Seed-specific transcriptional regulation
US4943674A (en) 1987-05-26 1990-07-24 Calgene, Inc. Fruit specific transcriptional factors
US5753475A (en) 1985-01-17 1998-05-19 Calgene, Inc. Methods and compositions for regulated transcription and expression of heterologous genes
US4886937A (en) 1985-05-20 1989-12-12 North Carolina State University Method for transforming pine
EP0222493A1 (en) 1985-10-04 1987-05-20 Lubrizol Genetics Inc. TR-based sub-TI plasmids
US5013659A (en) 1987-07-27 1991-05-07 E. I. Du Pont De Nemours And Company Nucleic acid fragment encoding herbicide resistant plant acetolactate synthase
DE3784860D1 (de) 1986-12-05 1993-04-22 Ciba Geigy Ag Verbessertes verfahren zur transformation von pflanzlichen protoplasten.
US5015580A (en) 1987-07-29 1991-05-14 Agracetus Particle-mediated transformation of soybean plants and lines
US5322938A (en) 1987-01-13 1994-06-21 Monsanto Company DNA sequence for enhancing the efficiency of transcription
US5359142A (en) 1987-01-13 1994-10-25 Monsanto Company Method for enhanced expression of a protein
US5290924A (en) 1987-02-06 1994-03-01 Last David I Recombinant promoter for gene expression in monocotyledonous plants
ZA88319B (en) 1987-02-06 1988-08-12 Lubrizol Enterprises, Inc. Ocs enhancer
US5001060A (en) 1987-02-06 1991-03-19 Lubrizol Enterprises, Inc. Plant anaerobic regulatory element
TR27832A (tr) 1987-04-29 1995-08-31 Monsanto Co Zararli ucucu hasarata mukavim bitkiler.
US4971908A (en) 1987-05-26 1990-11-20 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthase
US5416011A (en) 1988-07-22 1995-05-16 Monsanto Company Method for soybean transformation and regeneration
US5302523A (en) 1989-06-21 1994-04-12 Zeneca Limited Transformation of plant cells
US5501967A (en) 1989-07-26 1996-03-26 Mogen International, N.V./Rijksuniversiteit Te Leiden Process for the site-directed integration of DNA into the genome of plants
US5550318A (en) 1990-04-17 1996-08-27 Dekalb Genetics Corporation Methods and compositions for the production of stably transformed, fertile monocot plants and cells thereof
US7705215B1 (en) 1990-04-17 2010-04-27 Dekalb Genetics Corporation Methods and compositions for the production of stably transformed, fertile monocot plants and cells thereof
US6051753A (en) 1989-09-07 2000-04-18 Calgene, Inc. Figwort mosaic virus promoter and uses
EP0426641B1 (en) 1989-10-31 2000-09-13 Monsanto Company Promoter for transgenic plants
US5641876A (en) 1990-01-05 1997-06-24 Cornell Research Foundation, Inc. Rice actin gene and promoter
HU220773B1 (hu) 1990-01-22 2002-05-28 Dekalb Genetics Corporation Eljárás termő transzgenikus kukoricanövények előállítására
US5484956A (en) 1990-01-22 1996-01-16 Dekalb Genetics Corporation Fertile transgenic Zea mays plant comprising heterologous DNA encoding Bacillus thuringiensis endotoxin
US6403865B1 (en) 1990-08-24 2002-06-11 Syngenta Investment Corp. Method of producing transgenic maize using direct transformation of commercially important genotypes
US5633435A (en) 1990-08-31 1997-05-27 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthases
US5866775A (en) 1990-09-28 1999-02-02 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthases
US5384253A (en) 1990-12-28 1995-01-24 Dekalb Genetics Corporation Genetic transformation of maize cells by electroporation of cells pretreated with pectin degrading enzymes
US5304730A (en) 1991-09-03 1994-04-19 Monsanto Company Virus resistant plants and method therefore
WO1994000977A1 (en) 1992-07-07 1994-01-20 Japan Tobacco Inc. Method of transforming monocotyledon
EP0652965A1 (en) 1992-07-27 1995-05-17 Pioneer Hi-Bred International, Inc. An improved method of agrobacterium-mediated transformation of cultured soybean cells
DE4317845A1 (de) 1993-05-28 1994-12-01 Bayer Ag Desoxyribonukleinsäuren
US6118047A (en) 1993-08-25 2000-09-12 Dekalb Genetic Corporation Anthranilate synthase gene and method of use thereof for conferring tryptophan overproduction
US5362865A (en) 1993-09-02 1994-11-08 Monsanto Company Enhanced expression in plants using non-translated leader sequences
US5623054A (en) * 1994-06-23 1997-04-22 The General Hospital Corporation Crucifer AFT proteins and uses thereof
ES2289743T3 (es) 1994-12-30 2008-02-01 Seminis Vegetable Seeds, Inc. Plantas transgenicas expresando construcciones de adn comprendiendo una pluralidad de genes para impartir una resistencia viral.
US6127606A (en) 1995-02-08 2000-10-03 University Of Warwick Method of using transactivation proteins to control expression in transgenic plants
AU703124B2 (en) 1995-03-03 1999-03-18 Syngenta Participations Ag Control of gene expression in plants by receptor mediated transactivation in the presence of a chemical ligand
US5659026A (en) 1995-03-24 1997-08-19 Pioneer Hi-Bred International ALS3 promoter
US5767379A (en) 1995-11-06 1998-06-16 John Howard Commercial production of avidin in plants
US5693512A (en) 1996-03-01 1997-12-02 The Ohio State Research Foundation Method for transforming plant tissue by sonication
EP0823480A1 (en) 1996-08-06 1998-02-11 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Controlled gene expression in plants
US5850019A (en) 1996-08-06 1998-12-15 University Of Kentucky Research Foundation Promoter (FLt) for the full-length transcript of peanut chlorotic streak caulimovirus (PCLSV) and expression of chimeric genes in plants
US6706866B1 (en) * 1996-09-04 2004-03-16 Michigan State University Plant having altered environmental stress tolerance
WO1998010080A1 (en) 1996-09-05 1998-03-12 Unilever N.V. Salt-inducible promoter derivable from a lactic acid bacterium, and its use in a lactic acid bacterium for production of a desired protein
US6121436A (en) 1996-12-13 2000-09-19 Monsanto Company Antifungal polypeptide and methods for controlling plant pathogenic fungi
HUP0000922A3 (en) 1997-01-20 2002-03-28 Plant Genetic Systems Nv Pathogen-induced plant promoters
US5981840A (en) 1997-01-24 1999-11-09 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods for agrobacterium-mediated transformation
US5922564A (en) 1997-02-24 1999-07-13 Performance Plants, Inc. Phosphate-deficiency inducible promoter
GB9713023D0 (en) 1997-06-20 1997-08-27 Reckitt & Colmann Prod Ltd Improvements in or relating to the cleansing of surfaces
US5968793A (en) 1997-06-24 1999-10-19 E. I. Du Pont De Nemours And Company Specific gene activation by chimeric Gal4 transcription factors in stable transgenic plants
US6087166A (en) 1997-07-03 2000-07-11 Basf Aktiengesellschaft Transcriptional activators with graded transactivation potential
EP1034267A1 (en) 1997-12-04 2000-09-13 Genzyme Corporation Compositions and methods for inducing gene expression
CN1301300A (zh) 1998-02-20 2001-06-27 曾尼卡有限公司 花粉特异性启动子
CA2315549A1 (en) 1998-02-26 1999-09-02 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Family of maize pr-1 genes and promoters
AU762993C (en) 1998-02-26 2004-06-10 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Constitutive maize promoters
US6635806B1 (en) 1998-05-14 2003-10-21 Dekalb Genetics Corporation Methods and compositions for expression of transgenes in plants
US6307123B1 (en) 1998-05-18 2001-10-23 Dekalb Genetics Corporation Methods and compositions for transgene identification
JP2000083680A (ja) 1998-07-16 2000-03-28 Nippon Paper Industries Co Ltd 光誘導型プロモ―タ―の制御下に置かれた不定芽再分化遺伝子を選抜マ―カ―遺伝子とする植物への遺伝子導入方法及びこれに用いる植物への遺伝子導入用ベクタ―
EP1144665A1 (en) 1998-11-25 2001-10-17 Calgene LLC Methods for transforming plastids
EP1141346A2 (en) 1999-01-14 2001-10-10 Monsanto Co. Soybean transformation method
US7393946B1 (en) * 1999-02-05 2008-07-01 Rijksuniversiteit Leiden Method of modulating metabolite biosynthesis in recombinant cells
US6232526B1 (en) 1999-05-14 2001-05-15 Dekalb Genetics Corp. Maize A3 promoter and methods for use thereof
US6194636B1 (en) 1999-05-14 2001-02-27 Dekalb Genetics Corp. Maize RS324 promoter and methods for use thereof
US6207879B1 (en) 1999-05-14 2001-03-27 Dekalb Genetics Corporation Maize RS81 promoter and methods for use thereof
US6429357B1 (en) 1999-05-14 2002-08-06 Dekalb Genetics Corp. Rice actin 2 promoter and intron and methods for use thereof
US6677503B1 (en) 1999-06-23 2004-01-13 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Sunflower anti-pathogene proteins and genes and their uses
US7329728B1 (en) * 1999-10-25 2008-02-12 The Scripps Research Institute Ligand activated transcriptional regulator proteins
WO2001053502A2 (en) 2000-01-21 2001-07-26 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Root-preferred promoter elements and methods of use
US6388170B1 (en) 2000-04-07 2002-05-14 University Of Kentucky Research Foundation Bidirectional promoters and methods related thereto
US7273923B2 (en) * 2001-01-22 2007-09-25 Sangamo Biosciences, Inc. Zinc finger proteins for DNA binding and gene regulation in plants
KR100537955B1 (ko) 2003-10-29 2005-12-20 학교법인고려중앙학원 꽃가루 특이적 유전자 발현 프로모터
WO2006033859A2 (en) * 2004-09-16 2006-03-30 Sangamo Biosciences, Inc. Compositions and methods for protein production
US20080104726A1 (en) * 2006-10-05 2008-05-01 Ceres, Inc. Fruit regulatory regions
BRPI0720048A8 (pt) 2006-12-14 2023-02-07 Dow Agrosciences Llc Proteínas de dedo de zinco não-canônicas otimizadas
CN101932701A (zh) 2008-02-01 2010-12-29 阿森尼克斯公司 Grg31和grg36 epsp合酶的定向进化
CA2722797A1 (en) * 2008-04-28 2009-11-05 Precision Biosciences, Inc. Fusion molecules of rationally-designed dna-binding proteins and effector domains
NZ599351A (en) 2009-10-22 2014-02-28 Dow Agrosciences Llc Engineered zinc finger proteins targeting plant genes involved in fatty acid biosynthesis
CA2863664C (en) * 2012-02-02 2022-07-05 Dow Agrosciences Llc Plant transactivation interaction motifs and uses thereof

Also Published As

Publication number Publication date
CA3151103C (en) 2024-02-13
AU2013214814B2 (en) 2018-07-12
CA3151103A1 (en) 2013-08-08
JP6483184B2 (ja) 2019-03-13
UY34609A (es) 2013-09-02
KR102076719B1 (ko) 2020-02-12
BR102013002576A2 (pt) 2015-09-01
KR20190101479A (ko) 2019-08-30
KR20190099541A (ko) 2019-08-27
JP2017176184A (ja) 2017-10-05
CN104202966B (zh) 2017-11-10
TW201809014A (zh) 2018-03-16
TW201336867A (zh) 2013-09-16
US20210087241A1 (en) 2021-03-25
TWI664193B (zh) 2019-07-01
CN104202966A (zh) 2014-12-10
AU2013214814A1 (en) 2014-09-18
JP2017176185A (ja) 2017-10-05
ZA201406234B (en) 2017-06-28
EP2809146A4 (en) 2015-12-09
EP2809146A1 (en) 2014-12-10
JP6483185B2 (ja) 2019-03-13
US10836804B2 (en) 2020-11-17
RU2014135518A (ru) 2016-03-27
AR089877A1 (es) 2014-09-24
KR102076716B1 (ko) 2020-02-13
JP6208692B2 (ja) 2017-10-04
HK1204751A1 (en) 2015-12-04
US20130205421A1 (en) 2013-08-08
JP2017193545A (ja) 2017-10-26
UA117452C2 (uk) 2018-08-10
KR20140127848A (ko) 2014-11-04
KR20190100433A (ko) 2019-08-28
JP2017193544A (ja) 2017-10-26
CN107556389B (zh) 2021-10-26
JP2017176183A (ja) 2017-10-05
US20190330292A1 (en) 2019-10-31
KR102076728B1 (ko) 2020-02-12
RU2662672C2 (ru) 2018-07-26
JP2015506700A (ja) 2015-03-05
JP6470787B2 (ja) 2019-02-13
IL233806B (en) 2019-03-31
CA2863664C (en) 2022-07-05
CN107556389A (zh) 2018-01-09
CA2863664A1 (en) 2013-08-08
KR20190101480A (ko) 2019-08-30
US20230272410A1 (en) 2023-08-31
BR102013002576B1 (pt) 2022-06-21
US11603535B2 (en) 2023-03-14
KR102076725B1 (ko) 2020-02-12
WO2013116731A1 (en) 2013-08-08
TWI666222B (zh) 2019-07-21
JP2017193546A (ja) 2017-10-26
JP6615149B2 (ja) 2019-12-04
JP6473477B2 (ja) 2019-02-20
KR102076726B1 (ko) 2020-02-12
US10351610B2 (en) 2019-07-16
EP2809146B1 (en) 2021-04-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2020110150A (ja) Ｆａｄ２性能座および標的化切断を誘導することができる対応する標的部位特異的結合タンパク質
JP6505599B2 (ja) 遺伝子標的化および形質スタッキングのための特別設計の導入遺伝子組み込みプラットフォーム（ｅｔｉｐ）
JP2018171074A (ja) Ｆａｄ３性能座および標的化切断を誘導可能である対応する標的部位特異的結合タンパク質
CN111263810A (zh) 使用多核苷酸指导的核酸内切酶的细胞器基因组修饰
SA113340251B1 (ar) حوافز لتفاعل تنشيط التعبير الجينى للنبات واستخدامها
CN102843904A (zh) 在经遗传修饰的生物体中切除转基因
CN101490267A (zh) 人工植物微染色体
US20170247711A1 (en) Zea mays regulatory elements and uses thereof
AU2015375393B2 (en) Brassica napus seed specific promoters identified by microarray analysis
US10428337B2 (en) Brassica napus ACC OX promoter identified by microarray analysis
US20150101083A1 (en) Zea mays metallothionein-like regulatory elements and uses thereof
CA3073050A1 (en) Compositions and methods for expressing transgenes using regulatory elements from chlorophyll binding ab genes
AU2015375394B2 (en) Brassica napus seed specific promoters identified by microarray analysis
CA2939112C (en) Root specific expression conferred by chimeric gene regulatory elements
AU2014373771B2 (en) Novel maize ubiquitin promoters
US20170137834A1 (en) Zea mays regulatory elements and uses thereof
Palucki The role of homologous recombination in the production of debilitating mitochondrial DNA rearrangements in plants