RU98104087A - Кодируемая ядерной днк система транскрипции в пластидах высших растений - Google Patents

Claims (13)

1. Конструкция ДНК для стабильной трансформации пластид многоклеточных растений, которая включает трансформирующую ДНК, имеющую ориентирующий сегмент, который осуществляет инсерцию этой трансформирующей ДНК в геном пластиды путем гомологичной рекомбинации, селектируемый ген-маркер, придающий селектируемый фенотип растительным клеткам, содержащим трансформированные пластиды, и сайт клонирования для инсерции дополнительной экспрессируемой ДНК, кодирующей представляющий интерес чужеродный ген, причем усовершенствование касается 5'-промоторного элемента, который распознается и транскрибируется кодируемой ядерной пластидной РНК-полимеразой.

2. Конструкция ДНК по п. 1, которую включают в вектор, пригодный для трансформации пластид.

3. Конструкция ДНК по п. 1, где 5'-промоторный элемент распознается и транскрибируется кодируемой пластидной ДНК пластидной РНК-полимеразой.

4. Конструкция ДНК по п. 1, где промоторный элемент выбирают из промоторных элементов пластидных генов, выбранных из группы, включающей Рrrn-62, PORF2280-1577, PatpB-289, PORF1901-41, Prbs2-152, Prbs16-107, PatpI-207, Pclp-511, Pclp-173, Pclp-53 и PaccD-129.

5. Конструкция ДНК по п. 2, где промоторный элемент представляет собой Pclp-95.

6. Конструкция ДНК для стабильной трансформации пластид растительной клетки и для экспрессии по крайней мере одного дополнительного продукта гена, включающая:
а) ориентирующий сегмент, который включает последовательность ДНК, практически гомологичную предварительно установленной последовательности пластидного генома, пластида которого подлежит трансформации, и который способен к гомологичной рекомбинации с предварительно установленной последовательностью пластидного генома,
б) селектируемый ген-маркер, который расположен внутри ориентирующего сегмента и который придает нелетальный селектируемый фенотип клеткам, содержащим пластиды с указанной конструкцией ДНК,
в) дополнительный сегмент ДНК, включающий единицу транскрипции гена, кодирующего протеин или его предшественник, и
г) промоторную последовательность, которая функционально сцеплена с единицей транскрипции и которая распознается полимеразой, кодируемой ядерной ДНК, а экспрессия гена, кодирующего этот протеин, регулируется указанным промотором.

7. Конструкция ДНК по п. 6, где единица транскрипции кодирует селектируемый ген-маркер.

8. Конструкция ДНК по п. 7, где селектируемый ген-маркер регулируется промотором, транскрибируемым кодируемой ядерной ДНК пластидной полимеразой.

9. Конструкция ДНК по п. 6, где единица транскрипции кодирует репортерный ген.

10. Конструкция ДНК по п. 6, которая включена в вектор, пригодный для трансформации пластид.

11. Многоклеточное растение, стабильно трансформированное конструкцией ДНК по п. 1.

12. Многоклеточное растение, стабильно трансформированное конструкцией ДНК по п. 2.

13. Способ получения растительной клетки или многоклеточного растения, пластиды клеток которых были стабильно трасформированы по меньшей мере одним представляющим интерес чужеродным геном, предусматривающий введение в растительную клетку конструкции ДНК, включающей:
а) ориентирующий сегмент, который включает последовательность ДНК, практически гомологичную предварительно установленной последовательности пластидного генома, пластида которого подлежит трансформации, и который способен к гомологичной рекомбинации с предварительно установленной последовательностью пластидного генома,
б) селектируемый ген-маркер, который расположен внутри ориентирующего сегмента и который придает селектируемый пластидный фенотип клеткам, содержащим пластиды с указанной конструкцией ДНК, и
в) чужеродный представляющий интерес ген, который регулируется промотором, распознаваемым кодируемой ядерной ДНК пластидной РНК-полимеразой, и предусматривающий
г) отбор клеток, экспрессирующих указанный фенотип, и
д) регенерацию растения из клетки, содержащей стабильно трансформированные пластиды.