RU2820633C1 - Производное индол-3-карбоновой кислоты, обладающее противовирусной активностью в отношении sars-cov-2 - Google Patents
Производное индол-3-карбоновой кислоты, обладающее противовирусной активностью в отношении sars-cov-2 Download PDFInfo
- Publication number
- RU2820633C1 RU2820633C1 RU2022133152A RU2022133152A RU2820633C1 RU 2820633 C1 RU2820633 C1 RU 2820633C1 RU 2022133152 A RU2022133152 A RU 2022133152A RU 2022133152 A RU2022133152 A RU 2022133152A RU 2820633 C1 RU2820633 C1 RU 2820633C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cov
- sars
- compound
- activity
- methoxy
- Prior art date
Links
- 241001678559 COVID-19 virus Species 0.000 title claims abstract description 28
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 title abstract description 19
- KMAKOBLIOCQGJP-UHFFFAOYSA-N indole-3-carboxylic acid Chemical class C1=CC=C2C(C(=O)O)=CNC2=C1 KMAKOBLIOCQGJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 title description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 15
- -1 6-bromo-1-methyl-5-methoxy-2-(1-piperidinomethyl)-3-(2-diethylaminoethoxy)carbonylindole Chemical compound 0.000 claims abstract description 13
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims abstract description 7
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 claims abstract description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 32
- HTSGKJQDMSTCGS-UHFFFAOYSA-N 1,4-bis(4-chlorophenyl)-2-(4-methylphenyl)sulfonylbutane-1,4-dione Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1S(=O)(=O)C(C(=O)C=1C=CC(Cl)=CC=1)CC(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 HTSGKJQDMSTCGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 18
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 15
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 7
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 abstract description 6
- 101710167605 Spike glycoprotein Proteins 0.000 abstract description 5
- 208000001528 Coronaviridae Infections Diseases 0.000 abstract description 4
- 230000017960 syncytium formation Effects 0.000 abstract description 4
- 201000003176 Severe Acute Respiratory Syndrome Diseases 0.000 abstract description 3
- 241000008910 Severe acute respiratory syndrome-related coronavirus Species 0.000 abstract description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 abstract description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 21
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 16
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 14
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 13
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 13
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 13
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 13
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 11
- 229960004626 umifenovir Drugs 0.000 description 11
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 10
- KCFYEAOKVJSACF-UHFFFAOYSA-N umifenovir Chemical compound CN1C2=CC(Br)=C(O)C(CN(C)C)=C2C(C(=O)OCC)=C1CSC1=CC=CC=C1 KCFYEAOKVJSACF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 9
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 9
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 7
- 230000036541 health Effects 0.000 description 7
- XXSMGPRMXLTPCZ-UHFFFAOYSA-N hydroxychloroquine Chemical compound ClC1=CC=C2C(NC(C)CCCN(CCO)CC)=CC=NC2=C1 XXSMGPRMXLTPCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 229960004171 hydroxychloroquine Drugs 0.000 description 7
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 7
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 6
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 230000009471 action Effects 0.000 description 6
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 5
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 5
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 5
- 206010052015 cytokine release syndrome Diseases 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 5
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 4
- VWUZPMIHHYWEQB-UHFFFAOYSA-N ethyl 5-methoxy-1,2-dimethylindole-3-carboxylate Chemical compound C1=C(OC)C=C2C(C(=O)OCC)=C(C)N(C)C2=C1 VWUZPMIHHYWEQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WITVCGMVZQKKIW-UHFFFAOYSA-N ethyl 6-bromo-5-methoxy-1,2-dimethylindole-3-carboxylate Chemical compound BrC1=C(OC)C=C2C(C(=O)OCC)=C(C)N(C)C2=C1 WITVCGMVZQKKIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- MTUAPGDJRRQAHE-UHFFFAOYSA-N ethyl 6-bromo-5-methoxy-1-methyl-2-(piperidin-1-ylmethyl)indole-3-carboxylate Chemical compound CN1C2=CC(Br)=C(OC)C=C2C(C(=O)OCC)=C1CN1CCCCC1 MTUAPGDJRRQAHE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 4
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 4
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N succinimide Chemical compound O=C1CCC(=O)N1 KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N tetrachloromethane Chemical compound ClC(Cl)(Cl)Cl VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 4
- FCSKOFQQCWLGMV-UHFFFAOYSA-N 5-{5-[2-chloro-4-(4,5-dihydro-1,3-oxazol-2-yl)phenoxy]pentyl}-3-methylisoxazole Chemical compound O1N=C(C)C=C1CCCCCOC1=CC=C(C=2OCCN=2)C=C1Cl FCSKOFQQCWLGMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LQKGTSQZQTUDLT-UHFFFAOYSA-N 6-bromo-5-methoxy-1-methyl-2-(piperidin-1-ylmethyl)indole-3-carboxylic acid;hydrochloride Chemical compound Cl.CN1C=2C=C(Br)C(OC)=CC=2C(C(O)=O)=C1CN1CCCCC1 LQKGTSQZQTUDLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 3
- 150000001793 charged compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 229960003989 tocilizumab Drugs 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- WHTVZRBIWZFKQO-AWEZNQCLSA-N (S)-chloroquine Chemical compound ClC1=CC=C2C(N[C@@H](C)CCCN(CC)CC)=CC=NC2=C1 WHTVZRBIWZFKQO-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 2
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBWRJAOOMGASJP-UHFFFAOYSA-N 2-(3,5-diphenyl-1h-tetrazol-1-ium-2-yl)-4,5-dimethyl-1,3-thiazole;bromide Chemical compound [Br-].S1C(C)=C(C)N=C1N1N(C=2C=CC=CC=2)N=C(C=2C=CC=CC=2)[NH2+]1 NBWRJAOOMGASJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RVVSEZGJCOAUED-UHFFFAOYSA-N 5-methoxy-1h-indole-3-carboxylic acid Chemical compound COC1=CC=C2NC=C(C(O)=O)C2=C1 RVVSEZGJCOAUED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000025721 COVID-19 Diseases 0.000 description 2
- FKLJPTJMIBLJAV-UHFFFAOYSA-N Compound IV Chemical compound O1N=C(C)C=C1CCCCCCCOC1=CC=C(C=2OCCN=2)C=C1 FKLJPTJMIBLJAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 2
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000629318 Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 Spike glycoprotein Proteins 0.000 description 2
- 206010042938 Systemic candida Diseases 0.000 description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 208000017773 candidemia Diseases 0.000 description 2
- 229960003677 chloroquine Drugs 0.000 description 2
- WHTVZRBIWZFKQO-UHFFFAOYSA-N chloroquine Natural products ClC1=CC=C2C(NC(C)CCCN(CC)CC)=CC=NC2=C1 WHTVZRBIWZFKQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- YTBNTDMBGXAOCG-UHFFFAOYSA-N ethyl 5-hydroxy-1,2-dimethylindole-3-carboxylate Chemical compound C1=C(O)C=C2C(C(=O)OCC)=C(C)N(C)C2=C1 YTBNTDMBGXAOCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZCGNOVWYSGBHAU-UHFFFAOYSA-N favipiravir Chemical compound NC(=O)C1=NC(F)=CNC1=O ZCGNOVWYSGBHAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229950008454 favipiravir Drugs 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 229960002317 succinimide Drugs 0.000 description 2
- FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N thionyl chloride Chemical compound ClS(Cl)=O FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 2
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 2
- UBCHPRBFMUDMNC-UHFFFAOYSA-N 1-(1-adamantyl)ethanamine Chemical compound C1C(C2)CC3CC2CC1(C(N)C)C3 UBCHPRBFMUDMNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RRQGZMDHLIAOLY-UHFFFAOYSA-N 1-bromopiperidine Chemical compound BrN1CCCCC1 RRQGZMDHLIAOLY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IIJFYTVJRDKVCI-UHFFFAOYSA-N 1h-indole-3-carbonyl chloride Chemical compound C1=CC=C2C(C(=O)Cl)=CNC2=C1 IIJFYTVJRDKVCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000004998 Abdominal Pain Diseases 0.000 description 1
- 206010001052 Acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 241000867607 Chlorocebus sabaeus Species 0.000 description 1
- 208000002881 Colic Diseases 0.000 description 1
- 208000003606 Congenital Rubella Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010050685 Cytokine storm Diseases 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 208000000059 Dyspnea Diseases 0.000 description 1
- 206010013975 Dyspnoeas Diseases 0.000 description 1
- 241000710188 Encephalomyocarditis virus Species 0.000 description 1
- 208000010201 Exanthema Diseases 0.000 description 1
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 description 1
- 241001272178 Glires Species 0.000 description 1
- 206010061192 Haemorrhagic fever Diseases 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- 206010023232 Joint swelling Diseases 0.000 description 1
- OFFWOVJBSQMVPI-RMLGOCCBSA-N Kaletra Chemical compound N1([C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C[C@H](O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)COC=2C(=CC=CC=2C)C)CC=2C=CC=CC=2)CCCNC1=O.N([C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C[C@H](O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)OCC=1SC=NC=1)CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N(C)CC1=CSC(C(C)C)=N1 OFFWOVJBSQMVPI-RMLGOCCBSA-N 0.000 description 1
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 description 1
- PCLIMKBDDGJMGD-UHFFFAOYSA-N N-bromosuccinimide Chemical compound BrN1C(=O)CCC1=O PCLIMKBDDGJMGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 229940096437 Protein S Drugs 0.000 description 1
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 1
- 241000725643 Respiratory syncytial virus Species 0.000 description 1
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 description 1
- IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N Ribavirin Chemical compound N1=C(C(=O)N)N=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N 0.000 description 1
- 241000315672 SARS coronavirus Species 0.000 description 1
- 101710198474 Spike protein Proteins 0.000 description 1
- 208000024780 Urticaria Diseases 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010047513 Vision blurred Diseases 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- DKNWSYNQZKUICI-UHFFFAOYSA-N amantadine Chemical compound C1C(C2)CC3CC2CC1(N)C3 DKNWSYNQZKUICI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003805 amantadine Drugs 0.000 description 1
- 125000004103 aminoalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical group [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004099 azithromycin Drugs 0.000 description 1
- MQTOSJVFKKJCRP-BICOPXKESA-N azithromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)N(C)C[C@H](C)C[C@@](C)(O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 MQTOSJVFKKJCRP-BICOPXKESA-N 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- KQNZLOUWXSAZGD-UHFFFAOYSA-N benzylperoxymethylbenzene Chemical compound C=1C=CC=CC=1COOCC1=CC=CC=C1 KQNZLOUWXSAZGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 210000000748 cardiovascular system Anatomy 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- VAYGXNSJCAHWJZ-UHFFFAOYSA-N dimethyl sulfate Chemical compound COS(=O)(=O)OC VAYGXNSJCAHWJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 208000002173 dizziness Diseases 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 238000009511 drug repositioning Methods 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 201000005884 exanthem Diseases 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 description 1
- 210000000777 hematopoietic system Anatomy 0.000 description 1
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 1
- 125000000592 heterocycloalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 231100000086 high toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 230000007803 itching Effects 0.000 description 1
- 208000010729 leg swelling Diseases 0.000 description 1
- 201000002364 leukopenia Diseases 0.000 description 1
- 231100001022 leukopenia Toxicity 0.000 description 1
- 229940113983 lopinavir / ritonavir Drugs 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 1
- 210000004779 membrane envelope Anatomy 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 1
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 208000004235 neutropenia Diseases 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N nitrogen Substances N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000028 nontoxic concentration Toxicity 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- VSZGPKBBMSAYNT-RRFJBIMHSA-N oseltamivir Chemical compound CCOC(=O)C1=C[C@@H](OC(CC)CC)[C@H](NC(C)=O)[C@@H](N)C1 VSZGPKBBMSAYNT-RRFJBIMHSA-N 0.000 description 1
- 229960003752 oseltamivir Drugs 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Chemical group 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Chemical group 0.000 description 1
- 206010033675 panniculitis Diseases 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 1
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 1
- 229940124606 potential therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 206010037844 rash Diseases 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- RWWYLEGWBNMMLJ-YSOARWBDSA-N remdesivir Chemical compound NC1=NC=NN2C1=CC=C2[C@]1([C@@H]([C@@H]([C@H](O1)CO[P@](=O)(OC1=CC=CC=C1)N[C@H](C(=O)OCC(CC)CC)C)O)O)C#N RWWYLEGWBNMMLJ-YSOARWBDSA-N 0.000 description 1
- RWWYLEGWBNMMLJ-MEUHYHILSA-N remdesivir Drugs C([C@@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@@](C#N)(O1)C=1N2N=CN=C(N)C2=CC=1)O)OP(=O)(N[C@@H](C)C(=O)OCC(CC)CC)OC1=CC=CC=C1 RWWYLEGWBNMMLJ-MEUHYHILSA-N 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 229960000329 ribavirin Drugs 0.000 description 1
- HZCAHMRRMINHDJ-DBRKOABJSA-N ribavirin Natural products O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1N=CN=C1 HZCAHMRRMINHDJ-DBRKOABJSA-N 0.000 description 1
- 229960000888 rimantadine Drugs 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 208000013220 shortness of breath Diseases 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 210000004304 subcutaneous tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 1
- ILWRPSCZWQJDMK-UHFFFAOYSA-N triethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN(CC)CC ILWRPSCZWQJDMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 229960001028 zanamivir Drugs 0.000 description 1
- ARAIBEBZBOPLMB-UFGQHTETSA-N zanamivir Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](N=C(N)N)C=C(C(O)=O)O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)CO ARAIBEBZBOPLMB-UFGQHTETSA-N 0.000 description 1
Images
Abstract
Изобретение относится к вирусологии и медицине, а именно к соединению, обладающему высокой противовирусной анти-SARS-CoV-2 (Severe acute respiratory syndrome-related coronavirus 2, ранее 2019-nCoV) активностью. Раскрывается применение водорастворимого соединения дигидрохлорида 6-бром-1-метил-5-метокси-2-(1-пиперидинометил)-3-(2-диэтиламиноэтокси) карбонилиндола общей формулы (II), обладающего in vitro дозозависимой активностью в отношении SARS-CoV-2, которое при концентрации 30 мкг/мл полностью ингибирует коронавирусную инфекцию SARS-CoV-2. Соединение II обладает ИФН-индуцирующей активностью и ингибирует синцитиеобразование, опосредованное шиповидным белком (S-гликопротеином) SARS-CoV-2, а также обладает высокой активностью (IC50=1,06 мкг/мл) и селективностью (индекс селективности SI=78,6). Применение изобретения позволяет эффективно подавлять репродукцию SARS-CoV-2. 1 ил., 3 табл., 4 пр.
Description
Изобретение относится к органической химии, вирусологии и медицине, а именно к соединению: дигидрохлориду 6-бром-1-метил-5-метокси-2-(1-пиперидинометил-3-(2-диэтиламиноэтокси) карбонилиндола, обладающему высокой противовирусной анти-SARS-CoV-2 (Severe acute respiratory syndrome-related coronavirus 2, ранее 2019-nCoV) активностью и способу его получения, с целью создания эффективного этиотропного противовирусного лекарственного средства для расширения возможностей терапии коронавирусных заболеваний человека и животных, вызванных современными пандемическими штаммами SARS-CoV-2, в том числе, как самостоятельное средство, так и в составе композиции для терапии COVID-19.
Коронавирус (CoV), открытый в 1960 г. D. Tyrrell, а затем описанный J. Almeida и соавт.в Nature в 1968 г., долгие годы был лишь причиной острых респираторных инфекций легкого течения. Однако пандемия коронавирусной инфекции COVID-19 изменила отношение к коронавирусам и привела к поиску эффективных противовирусных средств в отношении SARS-CoV-2. Одновременно были предложены несколько стратегий разработки эффективных и безопасных лекарственных средств для лечения и профилактики коронавирусной инфекции COVID-19. Первая стратегия - это продолжение тестирования уже зарегистрированных противовирусных препаратов, активность которых в отношении РНК-вирусов была показана ранее в клинических исследованиях разного качества и дизайна: интерферон альфа (вирус гепатита С), рибавирин (вирус гепатита С, респираторно-синцитиальный вирус, возбудитель геморрагической лихорадки), лопинавир/ритонавир (ВИЧ), фавипиравир (вирус гриппа). Вторая стратегия - это использование существующих молекулярных баз данных для скрининга молекул с различным механизмом действия, которые могут оказывать действие на коронавирус: хлорохин и гидроксихлорохин, ремдесивир, умифеновир и др. Третья стратегия предполагает целевую разработку новых противовирусных препаратов на основе изучения геномной информации и патогенных свойств различных коронавирусов (The Lancet Digital Health, https://www.covid-trials.org/).
При этом, для разработки методов лечения и профилактики COVID-19 выделяют три горизонта, которые включают в себя не только этиотропное действие на SARS-CoV-2, но и лечение острого респираторного дистресс-синдрома (ОРДС), синдрома высвобождения цитокинов или цитокинового шторма (cytokine release syndrome, CRS), сопутствующих бактериальных и грибковых инфекций (der Graaf Р, Giacomini K. COVID-19: a defining moment for clinical pharmacology? PharmacolTher 2020; 108(1): 11-5).
Однако несмотря на беспрецедентное увеличение числа клинических исследований лекарственных средств для лечения данной инфекции, остается высокой частота применения лекарственных средств off label, что, безусловно, свидетельствует об острой необходимости в разработке новых эффективных подходов к профилактике и лечению COVID-19 (https://www.euro.who.int/ru/health-topics/health-emergencies/coronavirus-covid-19/news/news/2020/3/who-announces-covid-19-outbreak-a-pandemic).
Известно лекарственное средство гидроксихлорохин, испытанное для лечения COVID-19. По данным исследований in vitro гидроксихлорохин подавлял действие вируса SARS-CoV-2, вызывающего COVID-19. По данным клинических исследований на 6-й день лечения среди пациентов, которым давали гидроксихлорохин, в сравнение с теми, кому его не давали, было меньше вирусположительных (по данным ПЦР тестов) (Р. Gautret et al., "Hydroxychloroquine and azithromycin as a treatment of COVID-19: results of an open-label non-randomized clinical trial," Int. J. Antimicrob. Agents, p.105949, Mar. 2020).
Недостатком гидроксихлорохина является его высокая токсичность и большое количество нежелательных эффектов, включая помутнение зрения, тошноту, рвоту, спазмы в животе, головную боль, диарею, отек ног/лодыжек, одышку (Chatre С, Roubille F, Vernhet Н, et al. Cardiac complications attributed to chloroquine and hydroxychloroquine: a systematic review of the literature. Drug Saf 2018;41(10):919-31).
Известно лекарственное средство - тоцилизумаб, применяемое для лечения вирусной инфекции SARS-CoV-2 (AntinoriS, BonazzettiC, GubertiniG, et al. Tocilizumab for cytokine storm syndrome in COVID-19 pneumonia: an increased risk for candidemia? Autoimmun Rev 2020; 19(7): 102564).
Недостатками тоцилизумаба являются сложность его применения - в виде раствора для подкожного введения или в виде концентрата для приготовления раствора для инфузий, а также побочные эффекты (со стороны кожи и подкожной клетчатки: часто - сыпь, зуд, крапивница; со стороны нервной системы: часто - головная боль, головокружение; со стороны сердечно-сосудистой системы: часто - повышение АД; со стороны системы кроветворения: часто - лейкопения, нейтропения, повышенный риск кандидемии).
Известно производные индол-3-карбоновой кислоты (RU 2782931 С1), со структурными формулами (1), (2), (3) в качестве водорастворимых иммуномодулирующих противоопухолевых средств:
Однако, противовирусные свойства этих производных индол-3-карбоновой кислоты в отношении вирусной инфекции SARS-CoV-2 не изучались.
Известны производные индол-3-карбоновой кислоты, обладающие противовирусной активностью (RU 2552422 С2). Данное изобретение относится к аминоалкиловым эфирам 5-метоксииндол-3-карбоновой кислоты и их фармакологически приемлемым солям общей формулы (I),
где R1 представляет собой циклогексил, С1-3 алкил; R2 представляет собой фенилтио, фенилокси, в которых фенильная группа может иметь 1-2 заместителя галогена или С1-4 алкоксигруппу, или R2 представляет собой 5-6-членный гетероциклоалкил, содержащий 1-2 гетероатома, выбранных из азота и кислорода; n равно 1, 2, 3, 4; каждый из R независимо выбирается из С1-4 алкила; за исключением соединения, указанного в формуле изобретения.
Однако, противовирусные свойства этих производных индол-3-карбоновой кислоты в отношении вирусной инфекции SARS-CoV-2 не изучались.
Самым близким (прототипом) является средство - умифеновир (арбидол, международное наименование Umifenovirum (WHO Drug Information // 2001, 25(1), 91), включенный в методические рекомендации по профилактике и лечению COVID-19 (Временные методические рекомендации. Профилактика, диагностика и лечение новой короновирусной инфекции (COVID-19). Версия 1. 29 января 2020, МЗ РФ). Умифеновир - гидрохлорид моногидрата 1-метил-2-фенилтиометил-3-карбэтокси-4-диметиламинометил-5-окси-6-броминдола (см., например, RU 2033156;) - отличается по механизму действия от многих препаратов, применяемых в лечении вирусных инфекций, таких как амантадин, ремантадин, занамивир и осельтамивир. Умифеновир оказывает специфическое противовирусное действие, ингибируя слияние вирусной оболочки с клеточными мембранами, что предотвращает проникновение вируса внутрь клеток и нарушает его репродукцию (Leneva I.A. et al. Characteristics of arbidol-resistant mutants of influenza virus: implications for the mechanism of anti-influenza action of arbidol // Antiviral Res. 2009, 81(2), 132-140). Исследования противовирусной активности in vitro в отношении нового коронавируса SARS-CoV-2 показали, что, по сравнению с контрольной группой, умифеновир может ингибировать репликацию до 60 раз в концентрации 10-30 мкМ и значительно снижать патологическое воздействие вируса на клетки. На клетках Vero Е6 показано, что умифеновир ингибирует репликацию SARS-CoV-2 на 21,73% при 3 мкМ и на 98,93% - при 30 мкМ (Ge Y, Tian Т, Huang S, et al. An integrative drug repositioning framework discovered a potential therapeutic agent targeting COVID-19. Signal Transduct Target Ther. 2021 Apr 24; 6(1): 165. doi: 10.1038/s41392-021-00568-6. PMID: 33895786; PMCID: PMC8065335.
Недостатком прототипа является его ограниченная терапевтическая эффективность, обусловленная низкой биодоступностью и нерастворимостью в воде (Chen С, Zhang Y, Huang J, et al., Favipiravir Versus Arbidol for Clinical Recovery Rate in Moderate and Severe Adult COVID-19 Patients: A Prospective, Multicenter, Open-Label, Randomized Controlled Clinical Trial. Front Pharmacol. 2021 Sep 2; 12:683296. doi: 10.3389/fphar.2021.683296; PCT/WO2010128889A1 "Фармацевтическая композиция, включающая Арбидол в составе фосфолипидных частиц»).
Для преодоления указанного недостатка необходимо синтезировать обладающее противовирусной эффективностью водорастворимое соединение, и близкое по химической структуре к умифеновиру.
Задачей настоящего изобретения является создание нового низкомолекулярного соединения, обладающего высокой противовирусной анти-SARS-CoV-2 активностью, которое может быть использовано для создания эффективного лекарственного средства, необходимого для расширения возможностей терапии COVID-19 и других коронавирусных заболеваний.
Техническая задача решается тем, что представляет собой дигидрохлорид 6-бром-1-метил-5-метокси-2-(1-пиперидинометил)-3-(2-диэтиламиноэтокси)карбонилиндол общей формулы (II):
Соединение обладает дозо-зависимой противовирусной активностью в отношении SARS-CoV-2, концентрационные зависимости которого свидетельствуют о специфичности действия этого соединения и в концентрации 30 мкг/мл полностью ингибирует коронавирусную инфекцию SARS-CoV-2 с инфекционной активностью 106 ТЦИД50/мл, обладает ИФН-индуцирующей активностью и ингибирует синцитиеобразование, опосредованное шиповидным белком (S-гликопротеином) SARS-CoV-2. Данное соединение включает следующие этапы:
- получение 1,2-диметил-5-метокси-3-этоксикарбонилиндола, температура плавления (Тпл.) 113°С из 1,2-диметил-5-гидрокси-3-этоксикарбонилиндола;
- получение 6-бром-1,2-диметил-5-метокси-3-этоксикарбонилиндола, Тпл. 156°С, из 1,2-диметил-5-метокси-3-этоксикарбонилиндола;
- получение 6-бром-2-бромметил-1-метил-5-метокси-3-этоксикарбонилиндола, Тпл. 142°С, из 6-бром-1,2-диметил-5-метокси-3-этоксикарбонилиндола;
- получение 6-бром-1-метил-5-метокси-2-(1-пиперидинометил)-3-этоксикарбонилиндола, Тпл. 124-125°С из 6-бром-2-бромметил-1-метил-5-метокси-3-этоксикарбонилиндола;
- получение гидрохлорида 6-бром-1-метил-5-метокси-2-(1-пиперидинометил)индол-3-карбоновой кислоты, Тпл. 236-238°С, из 6-бром-1-метил-5-метокси-2-(1-пиперидинометил)-3-этоксикарбонилиндола,
- получение дигидрохлорида 6-бром-1-метил-5-метокси-2-(1-пиперидинометил)-3-(2-диэтиламиноэтокси)карбонилиндола - соединения II, Тпл. 237-240°С, с характеристическими сигналами на масс-спектрометре m/z 480 - молекулярный ион, m/z 241 - двухзарядный вариант молекулярного иона, m/z 410 (M-N(C2H5)2, m/z 122,5 неидентифицированный.
Настоящее изобретение поясняется подробным описанием, примерами биологической активности соединения II, подтверждающими пригодность полученного соединения для предполагаемого применения, а также таблицами и иллюстрацией, на которой изображено:
Фиг. 1. - схема многоступенчатого получения соединения II.
Синтез производного индол-3-карбоновой кислоты (II), обладающего противовирусной активностью в отношении SARS-CoV-2 in vitro, осуществляют следующим образом.
Этапы выполнения.
1 этап.
Получение 1,2-диметил-5-метокси-3-этоксикарбонилиндола (соединения IV).
К раствору 4,66 г (0,02 моля) 1,2-диметил-5 гидрокси-3-этоксикарбонилиндола - соединения, обозначенного III, в 40,0 мл диоксана добавляют в 40,0 мл 10%-го раствора едкого натрия, затем при комнатной температуре капельно добавляют 4,0 мл диметилсульфата и перемешивают в течение 2 часов. Реакционную массу выливают в дистиллированную воду, охлаждают, выпавший осадок отфильтровывают, промывают дистиллированной водой. Выход вещества 4,65 г (94%). Температура плавления (Тпл.). 113°С.
2 этап.
Получение 6-бром-1,2-диметил-5-метокси-3-этоксикарбонилиндола (соединения V).
Смесь 4,65 г (0,0188 моля) 1,2-диметил-5-метокси-3-этоксикарбонилиндола (соединение IV), 3,36 г (0,0188 моля) бромсукцинимида в 75,0 мл четыреххлористого углерода кипятят 5 часов. Отфильтровывают осадок сукцинимида в горячем виде. Маточник слегка упаривают и охлаждают.Отфильтровывают осадок. Выход 3,3 г (54%). Тпл. 156°С.
3 этап.
Получение 6-бром-2-бромметил-1 -метил-5-метокси-3-этоксикарбонилиндола (соединения VI).
Смесь 3,3 г (0,0101 моля) 6-бром-1,2-диметил-5-метокси-3-этоксикарбонилиндола (соединение V), 1,81 г (0,0101 моля бромсукцилимида, 0,1 г перекиси бензолила в 30,0 мл четыреххлористого углерода кипятят при освещении 5 часов. После отделения сукцинимида в горячем виде и охлаждения осадок отфильтровывают. Выход 3,16 г (78%). Тпл. 142°С.
4 этап.
Получение 6-бром-1-метил-5-метокси-2-(1-пиперидинометил)-3-этоксикарбонилиндола (соединения VII).
Раствор 4,0 г (0,01 моля) 6-бром-2-бромметил-1-метил-5-метокси-3-этоксикарбонилиндола (соединение VI) и 1,7 г (0,02 моля) пиперидина в 50,0 мл бензола выдерживают 10-12 часов при комнатной температуре. Отфильтровывают полученный осадок бромгидрата пиперидина. Из фильтрата выделяют соединение VII. Выход 1,7 г (82,9%). Тпл. 124-125°С.
Вычислено: % С 55,75, Н 6,16, N 6,84. C19H25N2O3.
Найдено: % С 55,72, Н 6,20, N 7,02. М 417,7.
5 этап.
Получение гидрохлорида 6-бром-1-метил-5-метокси-2-(1-пиперидинометил)индол-3-карбоновой кислоты (соединения VIII).
Раствор 6,0 г едкого натрия, 4,1 г (0,01 моль) 6-бром-1-метил-5-метокси-2-(1-пиперидинометил)-3-этоксикарбонилиндола (соединение VII), 3,0 мл воды и 60,0 мл этилового спирта кипятят 3 часа. После охлаждения добавляют 10,0 мл дистиллированной воды, подкисляют концентрированной HCl, осадок отфильтровывают. Выход 4,1 г (98%). Тпл. 236-238°С
Вычислено: % С 48,88; Н 5,31; N 6,71 C17H26BrN2O3. HCl М 417,73
Найдено: % С 48,68; Н 5,32; N 6,65
6 этап.
Получение дигидрохлорида 6-бром-1-метил-5-метокси-2-(1-пиперидинометил)-3-(2-диэтиламиноэтокси)карбонилиндола (соединения II).
1,67 г (0,004 моля) гидрохлорида 6-бром-1-метил-5-метокси-2-(1-пиперидинометил)индол-3-карбоновой кислоты (соединение VIII), 3,0 мл хлористого тионила, 2 капли диметилформамида в 30,0 мл диоксана греют при 60°С 3 часа. После упаривания в вакууме осадок промывают эфиром. К полученному осадку хлорангидрида 6-бром-1-метил-5-метокси-2-(1-пиперидино)индол-3-карбоновой кислоты (соединение IX) добавляют 25,0 мл бензола и смесь 1,2 мл (0,008 моля) диэтиламиноэтанола и 1,12 мл триэтиламина в 5,0 мл бензола, греют на водяной бане 2 часа, отфильтровывают осадок гидрохлорида триэтиламина, промывают горячим бензолом. После упаривания бензола в вакууме отфильтровывают осадок основания, промывают гексаном. Дигидрохлорид получают добавлением к раствору основания в ацетоне эфира, насыщенного HCl. Получено соединение II 1,9 г (85,2%) из изопропилового спирта. Тпл. 237-240°С
ЯМР 1Н (200 MHz, ДМСО) δ 10.76 (уш с, 1Н), 10.23 (уш с, 1H), 8.03 (с, 1Н), 7.65 (с, 1H), 4.87 (д, J=4.8 Hz, 2Н), 4.76 (т, J=5.1 Hz, 2Н), 3.95 (с, 3Н), 3.93 (с, 3Н), 3.61 (м, 2Н), 3.50-3.06 (м, 8Н), 2.15-1.33 (м, 6Н), 1.26 (т, J=7.2 Hz, 6Н).
ИК (KBr, см-1): 859, 1041, 1114, 1148, 1197, 1303, 1393, 1426, 1449, 1483, 1650, 1694 (С=O), 2354-2700, 2942, 3397, 3588.
МС исследован на масс-спектрометре SHIMADZU LCMS-8040 методом прямого ввода образца в режиме сканирования при положительной ионизации (Q3+Scan). На спектрах присутствуют характеристические сигналы: m/z 480 (молекулярный ион), m/z 241, (двухзарядный вариант молекулярного иона), m/z 410 (M-N(C2H5)2, m/z 122,5 неидентифицированный.
Вычислено: % С 49,92; Н 6,56; N 7,59 С23Н36 BrCl2N3O3 М 553,37
Найдено: % С 49,89; Н 6,76; N 7,48
Определение растворимости предлагаемого соединения II.
Растворимость дигидрохлорида 6-бром-1-метил-5-метокси-2-(1-пиперидинометил)-3-(2-диэтиламиноэтокси)карбонилиндола определяли по методике, описанной в Общей Фармакопейной статье (ОФС.1.2.1.0005.15 Растворимость. Фармакопея. РФ. https://pharmacopoeia.ru/ofs-1-2-1-0005-15-rastvorimost/).
К навескам 10,0 мг, 20,0 мг, 50,0 мг, 100,0 мг и 1,0 г растертого в тонкий порошок исследуемого соединения добавляют постепенно отмеренное количество растворителя (в данном случае дистиллированной воды) до полного растворения и непрерывно встряхивают в течение 10 мин при (20±2)°С.
Навески 10,0 мг и 20,0 мг дигидрохлорида 6-бром-1-метил-5-метокси-2-(1-пиперидинометил)-3-(2-диэтиламиноэтокси)карбонилиндола полностью растворились в 0,2 мл воды; навеска 50,0 мг растворилась в 0,5 мл; навеска 100,0 мг растворилась в 1,0 мл; 1,0 г соединения растворился в 8,0 мл воды.
Исследуемое соединение относится к легко растворимым, что подтверждается в таблице 1.
Экспериментальная часть.
Пример 1 - Определение цитотоксичности разработанного соединения II.
В работе использована перевиваемая клеточная линия почки зеленой мартышки (Chlorocebus aethiops) Vero Е6, предоставленная Всероссийской коллекцией клеточных культур федерального государственного бюджетного учреждения «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи» Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ «НИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России). Данная клеточная линия чувствительна к заражению вирусом SARS-CoV-2 и успешно применяется для получения вируссодержащего материала (вирусного стока), титрования инфекционной активности вируса и изучения противовирусных свойств веществ различной природы. Культивирование клеток осуществлялось в питательной среде DMEM (Gibco) с добавлением 5% эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС) (5 об.%), L-глутамина (2 mM) и смеси антибиотиков: (150 ед/мл пенициллина и 150 ед/мл стрептомицина).
Цитотоксичность исследуемого соединения оценивали по снижению жизнеспособности клеток в МТТ-тесте (Mossman, Т.
Rapidcolorimetricassayforcellulargrowthandsurvival:
applicationtoproliferationandcytotoxicityassays // J. Immunol. Meth. - 1983. - Vol. 65. - P. 55-6). Монослой клеток культивировали в присутствии исследуемого вещества, добавляемого в различных концентрациях, в течение 72 часов при 37°С. Затем клетки дважды отмывали средой, не содержащей сыворотки, добавляли 10,0-20,0 мкл раствора МТТ (6,0-10,0 мг/мл) и инкубировали в течение 4 часов при 37°С. Далее содержимое лунок удаляли и добавляли по 100,0 мкл диметилсульфоксида (DMSO) для растворения формазана, образующегося внутри живых клеток. Суть МТТ-теста заключается в измерении способности клеток превращать хорошо растворимый желтый бромид 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия (МТТ) в нерастворимые внутриклеточные кристаллы МТТ-формазана. Эффективность такого превращения отражает общий уровень дегидрогеназной активности клеток. Количество определяемого фотометрически (при 595/630 нм) формазана прямо пропорционально количеству живых клеток. На основании данных по оптической плотности рассчитывали 50% цитотоксическую концентрацию (СС50) соединения, т.е., ту концентрацию соединения, в присутствии которой наблюдалась гибель 50% клеток по сравнению с контролем.
Для изучаемого соединения СС50 составила 144,30 мкмоль. (83,32 мкг/мл).
Пример 2 - Определение антивирусной активности соединения II.
В эксперименте использовали перевиваемую линию клеток почки африканской зеленой мартышки (Chlorocebus aethiops) Vero Е6, которая была предоставлена Всероссийской Коллекцией клеточных культур при ФГБУ «НИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России.
Исследования выполняли с использованием пандемического штамма коронавируса человека SARS-CoV-2 с инфекционной активностью 106 ТЦИД50/МЛ (50% тканевая цитопатическая инфекционная доза) для клеток Vero Е6 (клинический изолят: hCoV-19/Russia/Moscow-PMVL-12/2020 (EPI_ISL_572398). Получен из Государственной коллекции вирусов Института вирусологии им. Д.И. Ивановского ФГБУ «НИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России.
Клетки Vero Е6 (2×105 кл./мл) помещали в 96-луночный планшет (100 мкл/лунку) и культивировали в полной питательной среде (ППС) при 37°С в атмосфере 5% СО2 в течение 24 часов до образования полного монослоя. Используя среду поддержки с 2% эмбриональной телячьей сывороткой (ЭТС), готовили 3 нетоксичные концентрации исследуемого вещества с равномерным понижением концентрации в 2 (или 3) раза и разливали в лунки с монослоем клеток Vero Е6 в объеме 100,0 мкл, занимая по 3 вертикальных ряда для каждой из 3-х концентраций (соблюдение трехкратного повтора). Далее в лунки первого горизонтального ряда «А» планшета вносили по 10,0 мкл вирусного стока и, используя многоканальную автоматическую микропипетку, проводили титрование вируса непосредственно в лунках, перенося по 10,0 мкл из горизонтального ряда «А» в ряд «В», затем из ряда «В» в ряд «С» и т.д. до ряда «G», получая, таким образом, разведения вируса от 10-1 до 10-7. Зараженные клетки инкубировали в CO2 - термостате в течение 96 часов в атмосфере 5% СО2. Контролем служил вирус в тех же разведениях без добавления разработанного средства. По истечении срока инкубации результаты реакции учитывали, просматривая лунки планшета в инвертируемом микроскопе. Титр вируса определяли в каждом вертикальном ряду. За титр вируса принимали величину, обратную последнему разведению, в котором развивалось цитопатогенное действие (ЦПД) (гибель клеток). 50%-е тканевые цитопатические инфекционные дозы (ТЦИД50) (TCID50- Median Tissue Culture Infectious Dose) рассчитывали по методу Рида-Менча для каждого разведения препарата и контрольного титрования вируса.
Таким образом, оценку противовирусной активности соединения II учитывали по снижению инфекционного титра вируса в культуре клеток Vero Е6 по цитопатическому действию (таблица 2).
Как видно из таблицы 2, исследуемое соединение обладает достоверной дозо-зависимой антивирусной активностью in vitro, что указывает на специфический характер действия соединения, и полностью подавляет репродукцию вируса SARS-CoV-2 при концентрации 52,0 мкмоль (30 мкг/мл), то есть на 6 lg TCID50. В вирусологических исследованиях принято считать удовлетворительным противовирусный эффект при действии лекарственных средств, если Δlg TCID50 ≥2,0. (см. «Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств.» под ред. Миронова А.Н. Часть первая. - М.: Гриф и К, 2012. - с. 527-551).
Значение IC50 для изучаемого соединения, рассчитанное с помощью программного обеспечения GraphPadPrism 5.0, составило 1,84 мкмоль (1,06 мкг/мл). Δlgmax TCID50 равен 6,0 при концентрации соединения 52,0 мкмоль (30 мкг/мл). Значение индекса селективности (SI), рассчитанное как отношение СС50 к IC50 (SI=CC50/IC50), составило 78,6.
Пример 3 - Исследования эффективности ингибирования синцитиеобразования, индуцированного шиловидным белком (S-гликопротеином) вируса SARS-CoV-2.
Клетки 293Т котрансфицировали в течение 48 часов плазмидой, содержащей полноразмерный S-гликопротеин (pVAX-1-S-glycoprotein; Евроген, Россия), и плазмидой, кодирующей GFP (pUCHR-IRES-GFP), с помощью Transporter™ 5 transfection reagent. Далее, к выращенному в 96-луночных планшетах монослою клеток Vero Е6 добавляли различные концентрации исследуемого соединения II, после чего в лунки вносили суспензию эффекторных клеток 293T-S-GFP (соотношение клеток 3:1). Через два часа количество образовавшихся синцитиев оценивали с помощью флуоресцентной микроскопии. Эффективность подавления слияния клеток, индуцированного S-гликопротеином SARS-CoV-2, оценивали с помощью программного обеспечения GraphPadPrism 5.0 по сравнению с контролем (без внесения соединения) и выражали в процентах. Обнаружено подавление синцитиеобразования, индуцированного шиповидным белком (S-гликопротеином) SARS-CoV-2, на 89%.
Пример 4 - Определение интерферон (ИФН)-индуцирующего действия соединения II.
Эксперименты на животных проводились с соблюдением правовых и этических норм обращения с животными в соответствии с правилами, принятыми Европейской Конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей: European Convention for the Protection of Vertebrate Animals Used for Experimental and other Scientific Purposes (ETS 123). Strasbourg, 1986.
Беспородные белые мыши, самцы, весом 12,0-14,0 г, были получены из Питомника ООО «НЭО Маркет» (вет. свид-во 250 №0679392). Лабораторные животные до начала исследования содержались 5 дней для адаптации при групповом содержании в клетках. Во время этого периода у животных каждый день контролировали клиническое состояние путем визуального осмотра. Животные с обнаруженными в ходе осмотра отклонениями в экспериментальные группы включены не были. Перед началом исследования животные, отвечающие критериям включения в эксперимент, были распределены на группы. Подбор животных в группы опыта проводили методом случайной выборки. Маркировка клетки кодировала пол животных, породу, дату введения препаратов, название группы.
Содержание, питание, уход за животными и выведение их из эксперимента осуществляли в соответствии с Правилами лабораторной практики, принятыми в Российской Федерации: ГОСТ 33215-2014 от 07.01.2016 г. «Руководство по содержанию и уходу за лабораторными животными. Правила оборудования помещений и организации процедур»; ГОСТ 33044-2014 Принципы надлежащей лабораторной практики.» утвержден Приказом Федерального агентства по тех. Регулированию и метрологии №1700-ст от 20.11.2014 г.), вступил в силу 01.08.2015 г.; ГОСТ 33216-2014 «Правила работы с лабораторными грызунами и кроликами»; Директива 2010/63/EU Европейского Парламента и Совета Европейского Союза от 22 сентября 2010 года по охране животных, используемых в научных целях (Соответствует требованиям Европейской экономической зоны); Протокол исследования был рассмотрен и одобрен этическим комитетом Центра.
Вирус энцефаломиокардита мышей (ВЭМК), штамм «Колумбия SK-Col-SK» с титром 107 ТЦД50/мл получен из Государственной коллекции вирусов Института вирусологии им. Д.И. Ивановского ФГБУ «НИЦЭМ им.Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России.
Проведение определения ИФН-индуцирующей активности соединения II.
Забор крови у животных проводили через 2, 24, 48, 72 часа после однократного внутрибрюшинного введения соединения II в дозе 121,2 мкмоль/мышь (70 мкт/мышь) или дистиллированной воды (0,2 мл) (Плацебо, контроль без препарата) (по 3 мыши на каждый срок). Определение активности ИФН в сыворотке крови мышей проводили на клеточной линии мышиных фибробластов L-929, полученной из Всероссийской Коллекции клеточных культур при ФГБУ «НИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России. В работе использовали 3-х дневный монослой перевиваемой клеточной линии L-929, выращенный на среде 199 и Игла MEM (1:1) с добавлением 7% эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС), L-глутамина и антибиотиков: 150 ед/мл пенициллина и 150 ед/мл стрептомицина. Циркулирующий ИФН в сыворотке крови определяли при титровании проб в культуре мышиных фибробластов L-929 с использованием в качестве индикаторного вируса ВЭМК мышей, находя конечное разведение ИФН, которое защищало 50% клеток от цитопатогенного действия 100 ТЦД50 вируса.
Результаты титрования представлены в таблице 3. Показано, что соединение II обладало ИФН-индуцирующей активностью. Продукция ИФН у мышей обнаружена через 2, 24, 48 и 72 часов после введения соединения II. При этом через 2 часа после введения исследуемого вещества ИФН выявлен в сыворотке крови мышей в титре 1:40, через 24, 48 и 72 часа - в титрах 1:20.
Результаты проведенного исследования показали, что соединение II обладало ИФН-индуцирующей активностью при введении его одноразово внутрибрюшинно в дозе 121,2 мкмоль/мышь (70 мкт/мышь), причем через 2 часа после введения титр ИФН составил 40 Ед/мл, и в течение 24 - 72 часов активность ИФН определялась в титре 20 Ед/мл.
Заключение.
Полученные результаты демонстрируют наличие противовирусного эффекта в отношении SARS-CoV-2 у синтезированного соединения II в исследованиях in vitro. В концентрации 52,0 мкмоль данное соединение полностью ингибирует репродукцию вируса SARS-CoV-2 с инфекционной активностью 106 ТЦИД50/мл (50% тканевая цитопатогенная инфекционная доза). Концентрационные зависимости свидетельствуют о специфичности действия исследуемого соединения и указывают на перспективность разработанного соединения и возможность дальнейшего его изучения in vivo на экспериментальных животных.
Предлагаемое соединение II в виду его высокой активности (IC50=1,06 мкг/мл) и высокого индекса селективности (SI=78,6), а также экономической и синтетической доступности может быть рекомендовано в качестве кандидата для создания эффективного этиотропного противовирусного лекарственного средства для расширения возможностей терапии коронавирусных заболеваний человека и животных, вызванных современными пандемическими штаммами SARS-CoV-2, в том числе, как самостоятельное средство, так и в составе композиции для терапии COVID-19.
Claims (3)
- Применение водорастворимого соединения дигидрохлорида 6-бром-1-метил-5-метокси-2-(1-пиперидинометил)-3-(2-диэтиламиноэтокси) карбонилиндола общей формулы (II):
-
- обладающего in vitro дозозависимой активностью в отношении SARS-CoV-2 и при концентрации 30 мкг/мл подавляющего репродукцию вируса SARS-CoV-2 полностью.
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2820633C1 true RU2820633C1 (ru) | 2024-06-06 |
Family
ID=
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2330018C2 (ru) * | 2006-04-18 | 2008-07-27 | Общество с ограниченной ответственностью "МБФ" | Производные 4-аминометил-6-бром-5-гидроксииндол-3-карбоксилатов, способы их получения (варианты) и применение |
RU2552422C2 (ru) * | 2013-07-17 | 2015-06-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Медицинский радиологический научный центр " Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ МРНЦ Минздрава России) | Производные индол-3-карбоновой кислоты, обладающие противовирусной активностью |
RU2022112249A (ru) * | 2022-05-05 | 2022-06-23 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр радиологии"Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ радиологии" Минздрава России) | Производные индол-з-карбоновой кислоты, обладающие противоопухолевой активностью |
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2330018C2 (ru) * | 2006-04-18 | 2008-07-27 | Общество с ограниченной ответственностью "МБФ" | Производные 4-аминометил-6-бром-5-гидроксииндол-3-карбоксилатов, способы их получения (варианты) и применение |
RU2552422C2 (ru) * | 2013-07-17 | 2015-06-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Медицинский радиологический научный центр " Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ МРНЦ Минздрава России) | Производные индол-3-карбоновой кислоты, обладающие противовирусной активностью |
RU2022112249A (ru) * | 2022-05-05 | 2022-06-23 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр радиологии"Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ радиологии" Минздрава России) | Производные индол-з-карбоновой кислоты, обладающие противоопухолевой активностью |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Киселёв Ю.Ю. и др. Возможность и перспективы применения препарата умифеновир у пациентов с COVID-19. Качественная клиническая практика, 2020, номер S4, с.75-80. Ершов Ф. И. и др. От чего зависят эффекты индукторов интерферона? ИНТЕРФЕРОН-2011. Сборник научных статей, 2012, с.80-106. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2009512716A (ja) | Hiv−1キャプシド構築の低分子阻害剤 | |
JP2011518124A (ja) | 小胞体ターゲッティングリポソーム | |
EA028026B1 (ru) | Противовирусное соединение, содержащая его фармацевтическая композиция и способ лечения | |
US20110098261A1 (en) | Triterpenoid-based compounds useful as virus inhibitors | |
KR20160079109A (ko) | 새로운 조성물 | |
Sissoko et al. | A chemically stable fluorescent mimic of dihydroartemisinin, artemether, and arteether with conserved bioactivity and specificity shows high pharmacological relevance to the antimalarial drugs | |
US8664384B2 (en) | N6-(ferrocenmethyl)quinazolin-2,4,6-triamina (H2) and the derivatives and prodrugs thereof as antileishmanial, antiprotozoal, antiparasitic and antimicrobial agents | |
RU2820633C1 (ru) | Производное индол-3-карбоновой кислоты, обладающее противовирусной активностью в отношении sars-cov-2 | |
CN114401738A (zh) | 作为疫苗佐剂的tlr4和tlr7配体制剂 | |
WO2022166748A1 (zh) | 治疗或预防波形蛋白介导的疾病的化合物 | |
KR101717280B1 (ko) | 게르마늄의 착체 화합물, 이를 제조하는 방법, 및 약물 | |
RU2666727C1 (ru) | Ингибитор вируса гепатита В (ВГВ) | |
WO2021182597A1 (ja) | ウイルス感染症治療薬 | |
US8404857B2 (en) | α-crystalline form of carbabenzpyride | |
RU2458914C1 (ru) | Гомо- и гетеро-полиаминокислотные производные фуллерена c60, способ их получения и фармацевтические композиции на их основе | |
EP3750904A1 (en) | Therapeutic drug for neurodegenerative disease and application thereof | |
KR101653677B1 (ko) | 클로로퀸 기반 α,β-불포화아미드 유도체 화합물을 유효성분으로 함유하는 말라리아 감염 질환의 예방 또는 치료용 조성물 | |
KR20200049912A (ko) | 허혈-재관류계 질환의 치료 화합물 | |
JP2016509000A (ja) | 抗ウイルス化合物 | |
US20170239200A1 (en) | Small molecule inhibitors of rna binding motif (rbm) proteins for the treatment of acute cellular injury | |
CN112979705B (zh) | 核苷酸类似物化合物及其盐、制备方法及其药物用途 | |
CN1607953A (zh) | 作为细胞增殖拮抗剂和细胞分化诱导剂的逆转录酶非核苷抑制剂 | |
US20230174464A1 (en) | Myristoyl derivatives of 9-amino-doxycycline for targeting cancer stem cells and preventing metastasis | |
JPH02124818A (ja) | 後天性免疫不全症侯群予防治療剤 | |
US7704957B2 (en) | Composition for inhibiting HIV activity extracted from Paecilomyces sp. (Tochu-kaso) J300 |