RU2458914C1 - Гомо- и гетеро-полиаминокислотные производные фуллерена c60, способ их получения и фармацевтические композиции на их основе - Google Patents

Гомо- и гетеро-полиаминокислотные производные фуллерена c60, способ их получения и фармацевтические композиции на их основе Download PDF

Info

Publication number
RU2458914C1
RU2458914C1 RU2011103574/04A RU2011103574A RU2458914C1 RU 2458914 C1 RU2458914 C1 RU 2458914C1 RU 2011103574/04 A RU2011103574/04 A RU 2011103574/04A RU 2011103574 A RU2011103574 A RU 2011103574A RU 2458914 C1 RU2458914 C1 RU 2458914C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
fullerene
drug
virus
derivatives
amino acids
Prior art date
Application number
RU2011103574/04A
Other languages
English (en)
Inventor
Лев Давидович Раснецов (RU)
Лев Давидович Раснецов
Яков Юделевич Шварцман (RU)
Яков Юделевич Шварцман
Ольга Николаевна Суворова (RU)
Ольга Николаевна Суворова
Original Assignee
Лев Давидович Раснецов
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority to RU2011103574/04A priority Critical patent/RU2458914C1/ru
Application filed by Лев Давидович Раснецов filed Critical Лев Давидович Раснецов
Priority to PCT/RU2012/000062 priority patent/WO2012105872A1/ru
Priority to BR112013012910-7A priority patent/BR112013012910A2/pt
Priority to AP2013007072A priority patent/AP4014A/en
Priority to ES12741829.1T priority patent/ES2582872T3/es
Priority to EP12741829.1A priority patent/EP2674415B1/en
Priority to MX2013008545A priority patent/MX354436B/es
Priority to AU2012212707A priority patent/AU2012212707B2/en
Priority to US13/820,769 priority patent/US9221746B2/en
Priority to EA201201448A priority patent/EA020801B1/ru
Priority to UAA201301251A priority patent/UA110345C2/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2458914C1 publication Critical patent/RU2458914C1/ru
Priority to ZA2013/03447A priority patent/ZA201303447B/en
Priority to IL226736A priority patent/IL226736A/en
Priority to HK14103544.9A priority patent/HK1190386A1/zh

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C229/00—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C229/02—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton
    • C07C229/04—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated
    • C07C229/06—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having only one amino and one carboxyl group bound to the carbon skeleton
    • C07C229/10—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having only one amino and one carboxyl group bound to the carbon skeleton the nitrogen atom of the amino group being further bound to acyclic carbon atoms or to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings
    • C07C229/14—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having only one amino and one carboxyl group bound to the carbon skeleton the nitrogen atom of the amino group being further bound to acyclic carbon atoms or to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings to carbon atoms of carbon skeletons containing rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C227/00—Preparation of compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C227/14—Preparation of compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton from compounds containing already amino and carboxyl groups or derivatives thereof
    • C07C227/18—Preparation of compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton from compounds containing already amino and carboxyl groups or derivatives thereof by reactions involving amino or carboxyl groups, e.g. hydrolysis of esters or amides, by formation of halides, salts or esters
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C229/00—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C229/02—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton
    • C07C229/04—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated
    • C07C229/06—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having only one amino and one carboxyl group bound to the carbon skeleton
    • C07C229/08—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having only one amino and one carboxyl group bound to the carbon skeleton the nitrogen atom of the amino group being further bound to hydrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C229/00—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C229/02—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton
    • C07C229/04—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated
    • C07C229/06—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having only one amino and one carboxyl group bound to the carbon skeleton
    • C07C229/10—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having only one amino and one carboxyl group bound to the carbon skeleton the nitrogen atom of the amino group being further bound to acyclic carbon atoms or to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings
    • C07C229/12—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having only one amino and one carboxyl group bound to the carbon skeleton the nitrogen atom of the amino group being further bound to acyclic carbon atoms or to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings to carbon atoms of acyclic carbon skeletons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C237/00—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups
    • C07C237/02—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atoms of the carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
    • C07C237/04—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atoms of the carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated
    • C07C237/06—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atoms of the carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having the nitrogen atoms of the carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2604/00—Fullerenes, e.g. C60 buckminsterfullerene or C70

Abstract

Изобретение относится к гомо- и гетеро-полиаминокислотным производным фуллерена формулы C60(H)x{NH(CH2)nCOO-}x{NH3 +(L)COOH}x, где n=2-5, х=3, L=-(CH2)m, где m=1-5, либо -СО(CH2)kCH(NH2)-, где k=1-2, которые обладают активностью против вируса герпеса, вируса гепатита С, вирусов гриппа различной природы, ВИЧ, а также противоопухолевой и противопсориатической активностью. Изобретение относится также к способу получения указанных гомо- и гетеро-полиаминокислотных производных фуллерена и фармацевтическим композициям на их основе. 3 н. и 4 з.п. ф-лы, 19 табл., 8 пр.

Description

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и медицине, а именно к новым гомо- и гетеро-полиаминокислотным производным фуллерена С60 формулы (I), а также к способу их получения и созданию фармацевтических композиций на их основе.
Figure 00000001
где n=2-5, х=3, L=-(CH2)m или -CO(CH2)kCH(NH2)-, при m=2-5, где k=1-2.
Применение производных фуллерена в медицине основано на липофильных свойствах фуллеренового ядра, позволяющих фуллереновым производным проникать через клеточные мембраны, и способности фуллерена с высоким квантовым выходом генерировать синглетный кислород, расщепляющий ДНК. Эти свойства обеспечивают функциональным производным фуллерена проявление цитотоксических, антивирусных и других свойств (Bedrov D., Smith G.D., Davande H., "Passive transport of fullerenes through a lipid membrane." J. Phys. Chem., B, 2008, v.112., p.2078-84, Qiao R., Roberts A.E., "Translocation of fullerene and its derivatives across a lipid bilayer", Nano Lett., 2007, v.7, p.614-9. Nelsen G.D., и др., "In vivo biology and toxicology of fullerenes and their derivatives". Basic and Clinical Pharmacology and Toxicology, 2008, v.103, p.197-208, Pat. US 6204391, 2005, "Water soluble fullerenes with antiviral activity").
Основной проблемой, затрудняющей биологические исследования производных фуллеренов и создания лечебных препаратов на их основе, является нерастворимость фуллеренов в воде, что затрудняет их прямое введение в организм человека. Одним из возможных вариантов преодоления этих трудностей является введение молекул фуллерена в солюбилизирующие матрицы. Известны способы получения водорастворимых форм фуллерена за счет образования аддукта с поливинилпирролидоном (Kiselev O.I. et al. // Mol. Materials. 1998. V.11. P.121; Piotrovsky L.B. et al. // Ibidem. 2000. V.13. P.41). Показана его эффективность против вируса гриппа А- и В-типа.
Известен также способ получения фуллеренов, включающий смешивание предварительно растворенных в органическом растворителе фуллеренов с полимерной матрицей в хлороформе, выпаривание смеси под вакуумом до полного удаления растворителей, растворение полученного комплекса в фосфатно-солевом буфере (рН 7,4-7,6) с последующей обработкой продукта ультразвуком (RU №2162819, 02.10.01). При этом в качестве водорастворимой полимерной матрицы используют мембранные кефалины. Продукты, полученные в результате таких модификаций, являются нестабильными композициями с ограниченными возможностями хранения.
Перспективным методом получения водорастворимых фуллереновых композиций является химическая модификация сферы фуллерена введением гидрофильных солюбилизирующих лигандов. В международной заявке WO 2005/070827 представлена серия аминокислотных производных фуллерена, полученных по реакции циклоприсоединения аминокислотных фрагментов к фуллерену, и продуктов их внедрения в биологически-активные органические субстраты. Представленные в данном техническом решении методы синтеза многостадийны и нетехнологичны. Полученные соединения имеют низкую растворимость в воде.
В настоящее время получен большой ряд функционализированных фуллеренов, содержащих гидрофильные фрагменты как в боковой цепи присоединенных к фуллерену лигандов (детергентный тип комплексов), так и сферический тип производных, когда имеются полярные группы, распределенные по фуллереновой сфере (такой тип включает фуллеренолы, аминоаддукты).
Наиболее перспективными для использования являются аминокислотные производные фуллерена.
Аналогами настоящего изобретения являются соединения и способы их получения, описанные в международной заявке WO 2009/00203, а также патенте РФ №2236852.
В международной заявке WO 2009/00203 описаны полифункциональные аминокислотные производные фуллерена формулы
Figure 00000002
, где R=Н, моно- или дигидроксиалкил, галоидалкил, моно- или динитроксиалкил, малеинимид; N-Z представляет собой фрагмент α, β, γ, ω-аминокислоты общей формулы -NH-CmH2m-COOM или C4H8N-COOM, где m=2-5, а М представляет собой нитроксиалкильную группу, алкильную группу или соль щелочного металла, или дипептид. Данные соединения получены по реакции эквимолярного присоединения аминокислот к фуллерену с последующим замещением активного водорода органическим биологически активным лигадом с образованием соединений типа. Полученные соединения, обладают ингибирующей активностью в отношении метастазов опухоли, усиливают антилейкемическую активность циклофосфамида, и могут быть пригодны в качестве доноров монооксида азота или в качестве вазодилататоров быстрого действия для антигипертинезивной терапии.
Основным недостатком соединений по данной заявке является то, что они являются продуктами ковалентного присоединения, содержат малое количество полярных групп и имеют низкую растворимость в воде.
Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату является средство для ингибирования репродукции оболочечных вирусов и способ его получения (патент РФ №2236852). В результате взаимодействия фуллерена с солью аминокислоты в среде органического растворителя в присутствии полиалкиленоксида получены фуллеренполикарбоновые анионы общей формулы
C60Hn[NH(СН2)mC(O)O-]n,
где С60 - фуллереновое ядро, NH(CH2)mC(O)O- - аминокарбоновый анион; m равно целому числу от 1 до 5, п равно целому числу от 2 до 12.
Для получения этих соединений к раствору фуллерена в о-дихлорбензоле (толуоле или любом другом органическом растворителе) вносят аминокислоту в виде соли (калиевой или натриевой), затем добавляют солюбилизатор. Порядок внесения в реакционную среду аминокислоты и солюбилизатора не важен, можно вносить их в виде комплекса, предварительно смешав. В качестве солюбилизатора используют различные полиалкиленоксиды: полиэтиленгликоли мол. массы от 150 до 400, и выше 400 (например, ПЭГ-1500), а также диметиловый эфир полиэтиленгликоля мол. массы 500. Для увеличения скорости реакции добавляют любой сильный восстановитель (щелочные металлы).
Соотношение фуллерена и аминокислоты увеличено более чем в 50 раз. Превращение в желаемую фармацевтически приемлемую соль, особенно натриевую или калиевую, выполнялось путем обработки кислоты подходящим основанием или путем добавления соли слабой летучей кислоты. В частности, не растворимая в воде фуллеренполикарбоновая кислота превращается в более предпочтительные фармацевтически приемлемые соли, такие как натриевая соль, которые растворимы в воде. Добавление соли слабой летучей кислоты происходит путем обработки раствора солью щелочного металла и слабой летучей кислоты. При концентрировании раствора путем выпаривания или лиофилизации слабая кислота удаляется, а фуллеренполикарбоновые кислоты выделяются в виде их солей щелочных металлов. Целевой продукт по данному изобретению характеризуется постоянством состава, содержание в целевом продукте основного вещества составляет всего 87,8%. В описании отсутствуют технологические регламенты, связанные с определением оптимальных количеств исходных соединений, соотношений количеств используемых растворителей и, особенно, описания методов выделения искомых соединений.
Основными недостатками фуллеренаминокислотных производных, полученных представленным в патенте методом получения является то, что данным способом получают смесь фуллеренкарбоксилатных анионов, как солевых, так и кислотных форм. Получить индивидуальное соединение способом, описанным в патенте, не представляется возможным. Также фуллерен-полиаминокислоты, полученные запатентованным способом, в кислотной форме практически нерастворимы в воде. Получить стабильную фармацевтическую композицию с фуллеренполикарбоновыми анионами не удалось, т.к. в процессе хранения соединения выпадают в осадок.
Применение в синтезе большого избытка калиевой или натриевой солей аминокислот и больших избытков растворителей приводит к возникновению экологических проблем, связанных с утилизацией отходов производства, а также к удорожанию процесса производства. Использование щелочных металлов для увеличения скорости реакции является технологически невозможным при использовании хлорированных ароматических растворителей.
Однако представленные в патенте уникальные биохимические свойства препаратов на основе соединений фуллерена с аминокислотными фрагментами ставят задачу получения новых производных фуллерена, разработки высокотехнологичного способа их промышленного получения, отличающегося простотой и эффективностью процесса, чистотой, экологичностью и доступностью исходных реагентов.
Для решения данной задачи предлагается группа изобретений, объединенных единым изобретательским замыслом, а именно: гомо- и гетеро-полиаминокислотные производные фуллерена, способ получения производных фуллерена и фармацевтические композиции, включающие гомо- и гетеро-полиаминокислотные производные фуллерена в качестве действующего вещества. Варьируя соотношение реагентов и условия проведения процесса, по заявляемому способу можно получать различные производные фуллерена.
Указанная задача решается гомо- и гетеро-полиаминокислотными производными фуллерена общей формулы (II):
Figure 00000003
В случае, когда m=n получают гомо-полиаминокислотные производные фуллерена, при m≠n - гетеро-полиаминокислотные производные фуллерена.
Указанная задача решается способом получения гомо- и гетеро-полиаминокислотные производных фуллерена, образующихся при взаимодействии фуллерена с 10-кратным мольным избытком безводных калиевых солей аминокислот в среде органического ароматического растворителя при добавлении к полученной суспензии межфазного катализатора при перемешивании и нагревании до температуры не выше 60°С до полного обесцвечивания раствора и формирования твердого осадка, который затем выделяют, растворяют в воде, после чего осуществляют обработку водных растворов калиевых солей фуллеренполиаминокислот 1Н раствором органических или минеральных кислот с последующим добавлением растворов аминокислот в полярных растворителях. В способе используют свежеприготовленные безводные калиевые соли аминокислот в мелкодисперсном состоянии, а выделение твердого осадка калиевых солей фуллеренполиаминокислот осуществляют фильтрованием, промывкой этиловым спиртом и высушиванием. В процессе экспериментов было выявлено, что фуллеренполиаминокислоты указанного состава могут быть получены только при использовании свежеприготовленных безводных калиевых солей аминокислот. В качестве межфазного катализатора используют метиловые эфиры полиэтиленоксидов молекулярной массы 200, 400, 500.
Указанная задача решается также созданием фармацевтических композиций, содержащих в качестве активного вещества гомо- и гетеро-полиаминокислотные производные фуллерена формулы (II), обладающих активностью против вируса герпеса, вируса гепатита С, вирусов гриппа различной природы, ВИЧ, а также противоопухолевой и противопсориатической активностью. Фармацевтические композиции могут быть выполнены в форме таблеток, капсул, мазей, эмульсий, суппозиториев, растворов, спреев.
Фармацевтические композиции по предложенному техническому решению содержат соединение общей формулы (II) в количестве, эффективном для достижения желаемого результата, и могут быть введены в виде стандартных лекарственных форм (например, в твердой, полутвердой или жидкой формах), содержащих соединения предложенного технического решения в качестве активного ингредиента в смеси с носителем или наполнителем, пригодным для внутримышечного, внутривенного, перорального, сублингвального, ингаляционного, местного, назального, ректального и вагинального введения. Активный ингредиент может быть включен в композицию вместе с обычно используемыми нетоксичными фармацевтически приемлемыми носителями, пригодными для изготовления растворов, таблеток, пилюль, капсул, драже, суппозиториев, эмульсий, суспензий, мазей, гелей и любых других лекарственных форм.
Конкретный уровень дозировок и частота приема лекарства для каждого конкретного пациента будет зависеть от большого числа факторов, включая активность конкретного производного фуллерена, метаболическую стабильность и длительность действия, скорость выделения, возраст пациента, вес тела, общее состояние здоровья, пол, лекарственные комбинации, а также тяжесть заболевания у индивида, подвергаемого лечению.
Для орального применения в виде суспензий композиции готовят согласно методам, широко известным в области приготовления фармацевтических рецептур, и они могут содержать микрокристаллическую целлюлозу или ее производные для обеспечения массы, альгиновую кислоту или альгинат натрия в качестве суспендирующего агента, метилцеллюлозу в качестве усилителя вязкости и подслащивающие агенты и/или отдушки, известные в этой области. В форме таблеток такие композиции могут содержать микрокристаллическую целлюлозу, кальций фосфат, крахмал, стеарат магния и лактозу и/или другие эксципиенты, связующие вещества, расширители, дезинтеграторы, разбавители и смазывающие вещества, известные в данной области.
При применении в виде назальных аэрозолей или путем ингаляции такие композиции готовят методами, хорошо известными в области фармацевтических рецептур, и они могут выпускаться в виде растворов на физиологическом растворе, с использованием бензойной кислоты или других подходящих консервантов, промоторов адсорбции для усиления биоприменимости, и/или других солюбилизирующих или диспергирующих агентов, известных в данной области.
Растворы или суспензии для инъекций могут формироваться согласно известным методам, с использованием нетоксичных, парентерально применимых разбавителей или растворителей, таких как маннит, 1,3-бутандиол, вода, раствор Рингера или изотонический раствор хлористого натрия или подходящих диспергирующих или смачивающих и суспендирующих агентов, таких как стерильные, мягкие, устойчивые масла, включая синтетические моно- или диглицериды, или жирные кислоты, включая олеиновую кислоту.
При ректальном или вагинальном применении в виде свечей такие композиции могут готовиться путем смешивания лекарства с таким нераздражающим эксципиентом, как масло какао, синтетические глицеридные сложные эфиры или полиэтиленгликоли, которые являются твердыми веществами при обычных температурах, но сжижаются и/или растворяются в полости тела с выделением лекарства.
При местном применении в виде мазей, гелей, кремов, линиментов и т.д. такие композиции могут готовиться путем смешивания активных ингредиентов с приемлемой мазевой основой.
В качестве мазевой основы могут быть использованы жировые, углеводородные или гидрофильные основы, например вазелин, вазелиновое масло, парафин, воск, ланолин, полиэтиленгликоль и др.
В качестве основы для гелей могут быть использованы метилцеллюлоза, натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы, оксипропилцеллюлоза, полиэтиленгликоль или полиэтиленоксид, карбопол, поливинилпирролидон, поливиниловый спирт и т.д.
Технический результат изобретения состоит в том, что получены новые гомо- и гетеро-полиаминокислотные производные фуллерена формулы: где n=2-5, х=3, L=-(СН2)m, где m=1-5, либо -CO(CH2)kCH(NH2)-, где k=1-2, характеризующиеся тем, что соединения содержат ковалентно-связанные аминокислотные группы и полярные ионные формы аминокислот, разработан новый промышленный способ получения аминокислотных производных фуллерена С60 с различным соотношением компонентов с использованием реакции нуклеофильного присоединения к фуллерену аминокислоты с образованием продуктов полиприсоединения. Предложены фармацевтические композиции, содержащие в качестве активного вещества гомо- и гетеро-полиаминокислотные производные фуллерена формулы (II), обладающие активностью против вируса герпеса, вируса гепатита С, вирусов гриппа различной природы, ВИЧ, а также противоопухолевой и противопсориатической активностью. Фармацевтические композиции выполнены в форме таблеток, капсул, мазей, суппозиториев, растворов, спреев.
Соединения обладают новыми свойствами:
- растворимостью в смеси диметилсульфоксид - вода (1:100, 1:200);
- высокой биодоступностью;
- высокой эффективностью воздействия на инфицированные клетки;
- низкой токсичностью.
Заявляемый способ позволяет получить различные гомо- и гетеро-полиаминокислотные производные фуллерена в зависимости от соотношения реагентов и условий проведения процесса. Способ основан на использовании в стадии синтеза оптимальных соотношений исходных реагентов (1:10), минимальных количеств органического растворителя и межфазного катализатора, с последующем выделением заявляемых композиций с использованием концентрированных растворов органических и минеральных кислот, с последующим введением аминокислот ряда NH2LCOOH, где L=-(СН2)m, либо -CO(CH2)kCH(NH2), что приводит к количественному получению фуллеренаминокислотных композиций определенного состава и возможности применения заявляемого способа для их промышленного синтеза, отличающегося эффективностью и экологичностью.
Заявляемое изобретение иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1. Получение фуллеренполиаминокапроновой кислоты формулы
Figure 00000005
К раствору 7,2 г (0,01 моля) фуллерена С60 в 400 мл о-дихлорбензола добавляют 17 г (0,1 моля) свежеполученной тонкоизмельченной безводной калийной соли ε-аминокапроновой кислоты. К полученной суспензии при перемешивании и нагревании не выше 80°С прибавляют в течение 2-х часов смесь о-дихлобензола и метилового эфира полиэтиленгликоля 400 в соотношении 2,5:1. Реакционную смесь перемешивают при температуре не выше 60°С в течение 2-3 часов до полного обесцвечивания раствора и формирования твердого осадка. Затем смесь фильтруют, осадок на фильтре промывают несколькими порциями этилового спирта и высушивают в вакууме при температуре не выше 60°С. Выделенную калиевую соль фуллеренаминокислоты растворяют в 2 л дистиллированной воды. В раствор медленно при перемешивании добавляют 1Н раствор соляной кислоты до рН 5,1. Смесь отстаивают до полного высаживания продукта. Затем водный слой декантируют. К осадку, представляющему собой тонкую взвесь твердого продукта в воде, медленно при перемешивании добавляют раствор аминокапроновой кислоты в смеси диметилсульфоксида с водой (1:10). Смесь перемешивают до полного растворения. Затем растворители удаляют отгонкой в вакууме. Твердый остаток высушивают при температуре не выше 60°С в вакуумном сушильном шкафу.
Выход целевого продукта количественный по отношению к исходному фуллерену. Соединение представляет собой темно-коричневое твердое вещество, растворимое в смеси диметилсульфоксид: вода - 1:200, ограниченно растворимое в смесях CH3CN:H2O - 1:1 и ДМФА - Н2О.
Термогравиметрический анализ продукта показывает наличие в комплексе 3 молей слабосвязанной аминокапроновой кислоты, отщепляющейся с разложением при температуре 200°С. Термическое разложение фуллеренполиаминокислоты проходит при температуре 345°С с выделением фуллерена и продуктов его окисления. Количество твердого остатка после разложения соединения, представляющего собой по данным дифракционного анализа незамещенный фуллерен, соответствует соотношению С60:аминокислотный фрагмент как 1:6.
Кислотный гидролиз соединения 0,1 молярным раствором HCl приводит к выделению гидрохлорида аминокапроновой кислоты в количестве 3 молей на моль исходного вещества.
Адсорбция соединения на поверхности силикагеля приводит к расщеплению ионных связей и выделению свободной аминокапроновой кислоты. Последующим фотометрическим анализом продуктов реакции аминокапроновой кислоты с нингидрином определено количество ионносвязанных аминокислотных групп. Их количество соответствует составу заявляемых соединений.
Электронный спектр поглощения продукта не содержит полос поглощения свободного фуллерена.
ИК-спектр продукта содержит полосы поглощения, характерные для N-замещенных аминокислот: группа -СООН - 1704 см-1, 1658 см-1, группы
Figure 00000006
- 3100, 2550, 2000 см-1, -N-H-валентные колебания 3300 см-1, N-H-деформационные 1552 см-1, полосы поглощения С60-NH-R - 1104 см-1, 930 см-1, 830 см-1.
Элементный анализ продукта показывает следующие соотношения элементов: %С=76,84; %Н=4,80; %N=5,15, для брутто-формулы C96H75N6O12 (молекулярная масса 1503) рассчитано: %С=76,49, %Н=4,90, %N=5,57.
Пример 2. Получение N-фуллерен-γ-аминомасляной кислоты с β-аланином формулы:
Figure 00000007
К раствору 7,2 г (0,01 моля) фуллерена С60 в 400 мл о-дихлорбензола добавляют 14 г (0,1 моля) свежеполученной безводной калиевой соли γ-аминомасляной кислоты. К полученной суспензии при перемешивании и нагревании не выше 60°С прибавляют в течение 2-х часов смесь о-дихлобензола и метилового эфира полиэтиленгликоля 400 в соотношении 3:1. Реакционную смесь перемешивают при температуре не выше 60°С в течение 2-3 часов до полного обесцвечивания раствора и формирования твердого осадка. Затем смесь фильтруют, осадок на фильтре промывают несколькими порциями этилового спирта и высушивают в вакууме при температуре не выше 60°С. Выделенный продукт растворяют в дистиллированной воде. В раствор медленно при перемешивании добавляют 1Н раствор соляной кислоты до рН 5,1. Смесь отстаивают до полного высаживания продукта. Затем водный слой декантируют. К осадку, представляющему собой тонкую взвесь твердого продукта в воде, медленно при перемешивании добавляют спиртовой раствор 2,7 г (0,03 моля) β-аланина. Смесь перемешивают в течение 2 часов до полного растворения осадка. После удаления растворителя выделено 12 г продукта.
Соединение представляет собой темно-коричневое твердое вещество, растворимое в смеси диметилсульфоксид:вода - 1:200, ограниченно растворимое в смесях CH3CN:H2O - 1:1 и ДМФА - H2O.
Термогравиметрический анализ продукта показывает наличие в комплексе 3 молей слабосвязанного β-аланина, отщепляющегося при температуре 210°С. Термическое разложение всего комплекса проходит при температуре 335°С с выделением фуллерена в количестве соответствующем соотношению С60: аминокислотные фрагменты как 1:6.
Кислотный гидролиз полученного соединения 0,01 молярным раствором HCl приводит к образованию гидрохлорида β-аланина в количестве 3 молей на моль исходного вещества.
Спектры продукта в растворах в диметилсульфоксиде и в 0,1 Н водном растворе NaOH содержат полосы поглощения в области 217, 260, 335 нм, характерные для производных фуллерена и не содержат полос поглощения свободного фуллерена.
ИК-спектр соединения содержит полосы поглощения, характерные для N-замещенных аминокислот и катионных форм аминокислот: группы -СООН- 1717 см-1, 1710 см-1, 1658 см-1, группы
Figure 00000008
3100, 2550, 2000 см-1, N-H-валентные колебания 3400 см-1, N-H-валентные колебания - 3400 см-1, N-H-деформационные - 1552 см-1, полосы поглощения С60-NH-R - 1104 см-1, 930 см-1, 830 см-1.
Элементный анализ продукта показывает следующие соотношения элементов: %С=75,24; %Н=3,80; %N=6,25, для брутто-формулы C81H48N6O12 (молекулярная масса 1296) рассчитано: %С=75,00, %Н=3,70, %N=6,48.
Пример 3. Получение N-фуллерен-ε-аминокапроновой кислоты с глутамином формулы:
Figure 00000009
Процесс проводят так же, как в примере 1. Только на стадии обработки осадка после осаждения кислой формы фуллерен-аминокапроновой кислоты добавляют раствор 4,5 г глутамина в смеси диметилсульфоксид - вода. Растворители удаляют отгонкой в вакууме.
Элементный анализ твердого продукта показывает следующие соотношения элементов: %С=71,34; %H=4,80; %N=8,25, для брутто-формулы C93H69N9O15 (молекулярная масса 1551) рассчитано: %С=71,95, %Н=4,50, %N=8,12.
ИК-спектр соединения содержит полосы поглощения, характерные для N-замещенных аминокислот и катионных форм аминокислот: группы -СООН - 1714 см-1, 1707 см-1, -С=O(NH-С60) 1658 см-1, группы
Figure 00000008
3000, 2550, 2000 см-1, N-H-валентные колебания 3400 см-1, N-H-деформационные 1552 см-1, полосы поглощения С60-NH-R - 1104 см-1, 930 см-1, 830 см-1.
Кислотный гидролиз соединения приводит к выделению глутамин гидрохлорида в количестве 3 молей на моль исходного вещества.
Была изучена противовирусная активность соединений в отношении ВИЧ, ВПГ, вируса гриппа, а также противоопухолевая активность. В приведенных ниже примерах препарат, полученный способом, описанным в примере 1, назван по тексту препарат №1 (фуллеренполиаминокапроновая кислота).
Пример 4. Исследование активности препарата фуллеренполиаминокапроновой кислоты в отношении вируса иммунодефицита человека.
Исследования проводились в лаборатории вирусов иммунодефицита с испытательным Центром по экспертной оценке противовирусных и дезинфекционных средств (ГУ НИИ вирусологии им. Д.И.Ивановского РАМН).
К клеткам добавляли исследуемый препарат и инфицировали вирусом в дозе 0,01 ТЦИД50/клетка. Инкубировали культуры клеток при 37°С в атмосфере с 5% CO2 и 98% влажности 4-5 дней. Учет результатов проводили окрашиванием клеток с помощью красителя и световой микроскопии: исследование цитопатического эффекта вируса (ЦПД) и вирусиндуцируемого синци-тийобразования (синцитий - конгломерат нескольких клеток с общей клеточной оболочкой, образовавшейся в результате слияния их мембран).
Степень цитодеструкции оценивали под микроскопом по общепринятой четырехкрестовой системе знаками + или - соответственно количеству погибших клеток в каждой из четырех лунок, соответствующих одному исследуемому показателю.
++++ - 100%ая гибель клеток в четырех лунках, использованных в опыте на одно разведение
+++ - 75%ая гибель клеток в каждой из четырех лунок,
++ - 50%ая гибель клеток в каждой из четырех лунок,
+ - 25%ая гибель клеток в каждой из четырех лунок,
+- - начало дегенерации,
- - отсутствие цитодеструкции.
Результаты исследования представлены в таблицах 1-2.
Полученные данные (таблица 1, 2) показали, что исследованные препараты фуллеренполиаминокапроновой кислоты обладали противовирусной активностью в отношении вируса иммунодефицита человека типа 1. ЭК50 (50%-эффективная концентрация) препарата 0,9 мкг/мл. Препарат в концентрациях 0,5-10 мкг/мл не обладал цитотоксическим действием на клетки.
Пример 5. Исследование противогерпетической активности препарата фуллеренполиаминокапроновой кислоты в экспериментах in vitro. Исследование выполнялось ГУ НИИ вирусологии им. Д.И.Ивановского РАМН, г.Москва.
В процессе исследования были изучены цитотоксическая и противогерпетическая активность препарата в клеточных культурах Vero.
В исследовании были использованы: перевиваемая культура клеток почки обезьян (VERO), полученная из коллекции культур тканей Института вирусологии им. И.Д.Ивановского РАМН; вирус герпеса простого (Herpes simplex virus), тип 1, штамм Л2, размноженный в клетках Vero. Клетки инфицировали вирусом в дозе 100 ТЦИД50/0,2 мл и 1000 ТЦИД50/0,2 мл.
Для исследования представлен образец субстанции в виде порошка темного цвета.
Препарат первоначально растворяли в диметилсульфоксиде (ДМСО) в соотношении 1:20, а затем готовили рабочие концентрации на среде ИГЛА MEM. Оценку активности испытанных образцов проводили по степени защиты клеток от вирусиндуцированного цитотоксического действия ВПГ микроскопическим методом и методом МТТ по оптической плотности.
Результаты исследования. Исследована токсичность веществ в использованных концентрациях, а также растворителя (1,5 мл ДМСО в 50 мл воды).
Препарат в конечных концентрациях от 50 до 1000 мкг/мл добавляли к монослою клеточной культуры VERO и инкубировали в атмосфере 5,0% CO2 при 37°С в течение 24-48 часов. Монослой клеток окрашивали 0,4% раствором трипанового синего и исследовали под микроскопом.
Образец в концентрации до 100 мкг/мл не оказывал токсического действия на культуру клеток VERO, при концентрации 200 мкг/мл появляются признаки токсического действия - отмечается гибель 25% клеток. Концентрации в 500 мкг/мл и более уже токсичны для Vero клеток (табл.3).
Исследование защитных свойств образца проводили при одной схеме введения - за час до инфицирования, и при двух дозах вируса - 100 ТЦИД50 и 1000 ТЦИД50.
Результаты представлены в таблицах 3-7.
Проведенные исследования показали, что введение за 60 минут образца препарата до инфицирования клеточной культуры вирусом герпеса простого в дозе 100 ТЦИД50 полностью защищает клетки от цитодеструктивного действия вируса при всех испытанных концентрациях - от 5,0 мкг/мл и выше (см. табл.4 и 5).
При увеличении инфицирующей дозы вируса герпеса до 1000 ТЦИД50/0,2 мл (см. табл.6 и 7), образец препарата обеспечивает полную защиту чувствительной культуры клеток от цитодеструктивного действия вируса при данной схеме испытания (инфицирование клеток вирусом через 60 минут после внесения препарата в культуральную среду).
Пример 6. Изучение активности фуллеренполиаминокапроновой кислоты (препарат №1) в отношении вируса гриппа A/IIV-Moscow/01/2009 (H1N1)swl.
Исследования проводились в ГУ НИИ вирусологии им. Д.И.Ивановского РАМН, г.Москва. В задачу исследований входило изучение противовирусной активности этих препаратов в культуре клеток MDCK в отношении вируса гриппа A/IIV-Moscow/01/2009 (H1N1)swl.
Препарат разводили в ДМСО (5 мг субстанции + 0,5 мл ДМСО) с последующим добавлением 4,5 мл среды для культур клеток MEM, получая, таким образом, сток в концентрации 1,0 мг/мл. В последующем проводили разведения стоков средой MEM до рабочих концентраций 6,5 мкг/мл - 12,5-25,0-50,0-100 мкг/мл.
Определение противовирусной активности веществ проводили по снижению репродукции вируса гриппа в культуре клеток MDCK, выявляемой ИФА.
С этой целью клетки МДСК выращивали в 96-луночных планшетах до полного монослоя, отмывали от ростовой среды и вносили вещества в двукратной концентрации в 100 мкл среды MEM. Инфицирование вирусом в рабочей дозе 100-1000 ТЦИД50 проводили в двух режимах: через 2 часа после внесения веществ и одномоментно. Планшеты инкубировали в термостате с CO2 в течение 24 часов при 37°С. После инкубации среду удаляли и клетки фиксировали 80% ацетоном в PBS в течение 15 минут, хорошо высушивали и осуществляли постановку ИФА, проводя последовательно адсорбцию специфических реагентов - моноклональных антител, конъюгата и субстрата (ортофенилендиамин). Реакцию учитывали по оптической плотности при 492 нМ на спектрофотометре фирмы «Биоком». Каждое разведения вируса исследовали в 3-х повторах, для которых вычисляли среднее значение оптической плотности (ОП). Процент ингибирования определяли, как отношение между разницей ОП опыта и ОП клеточного контроля, разделенное на разницу ОП вирусного контроля и ОП клеточного контроля, умноженное на 100%. На основании полученных данных определены значения минимальной концентрации вещества, вызывающей 50,0% ингибирование вирусной репродукции (МИК50).
Оценку подавления репродукции вируса гриппа A(H1N1) проводили в 3-х опытах при разной множественности заражения. Результаты представлены в табл.8 (протоколы 3 опытов) и табл.9 (средние значения полученных результатов 3 опытов).
Как видно из таблицы 9, четко прослеживается зависимость степени репродукции и концентрации препарата: с повышением концентрации - снижается репродукция вируса. Кроме того, значительных отличий в показателях при разных режимах инфицирования (через 2 часа после внесения препарата или одномоментно) не отмечено.
Таким образом, полученные результаты изучения активности разных разведении препарата в отношении вируса гриппа A/IIV-Moscow/01/2009 (H1N1)swl выявили высокую активность подавления его репродукции в культуре клеток MDCK. При этом режимы внесения препаратов за 2 часа до инфицирования или одновременно с инфицированием не влияли на их активность в культуре клеток MDCK.
Пример 7. Изучение противовирусной активности фуллеренполиа-минокапроновой кислоты (препарат №1) на модели гриппозной пневмонии мышей.
Исследования выполнялись в центре химии лекарственных средств (ЦХЛС-ВНИХФИ), г.Москва.
В работе использовали препарат в виде темно-коричневого кристаллического порошка. Для перорального применения готовили необходимые дозы препарата, растворяя навески в 1% растворе крахмала, сваренного на воде. Для внутрибришинного и внутримышечного применения навески препарата растворяли в 1,5% растворе ДМСО.
В работе был использован вирус гриппа А/Аичи/2/69 (H3N2), адаптированный к мышам. Данный вирус широко используется для определения эффективности противовирусных препаратов на модели гриппозной пневмонии мышей и был получен из музея вирусных штаммов и клеточных культур ГУ НИИ вирусологии РАМН. Для подготовки инфицирующего материала мышей заражали интраназально аллантоисным вирусом, после проявления признаков болезни их забивали и в стерильных условиях получали гомогенат легочной ткани. Далее этот гомогенат использовали для заражения 10-дневных куриных эмбрионов, из которых получали аллантоисный вирус и после титрования на его мышах использовали для инфицирования животных.
Белых беспородных мышей (самки) массой 12-14 г получали из питомника «Андреевка» (Московская обл.) и содержали на стандартном рационе в регламентированных условиях вивария.
Предварительно взвешенные мыши (самки нелинейные, средний вес 12-14 г) инфицировались интраназально под легким эфирным наркозом вирусом гриппа А/Аичи/2/69 (H3N2) (10ЛД50 в 100 мкл). В предварительном опыте было проведено определение ЛД50 путем титрования аллантоисного вируса на таких же мышах, которые затем использовались в основном опыте. Была использована следующая схема лечения исследуемым препаратом: за 24 часа до инфицирования, за 1 час до инфицирования, через 24 часа и далее 1 раз в день через 24 часа в течение 5 дней. Для перорального введения использовали одноразовый инсулиновый шприц со специальной иглой (лаваж), каждую дозу вводили в объеме 100 мкл. Для внутрибрюшинного и внутримышечного лечения также каждую дозу вводили в объеме 100 мкл. Группа вирусного контроля представляла собой 10 мышей, инфицированных вирусом, но не леченных препаратами. Также в опыте было две группы по 10 неинфицированных мышей, которым вводили внутрибрюшинно и внутримышечно по 100 мкл 1,5% ДМСО, который использовался в качестве растворителя препаратов. В остальных группах также изначально было по 10 животных. За леченными и контрольными животными велось ежедневное наблюдение, в первые 5 дней после инфицирования мыши взвешивались каждый день, далее - через день. Химиотерапевтическую активность препарата на модели гриппозной пневмонии мышей оценивали по трем критериям: показатель защиты от смертельной вирусной инфекции, увеличение средней продолжительности жизни и уменьшение снижение веса в группах животных, леченных препаратом по сравнению с контрольной группой.
Лечение фуллеренаминокапроновой кислотой было эффективно, уменьшая смертность мышей от гриппозной пневмонии и потерю их веса и увеличивая среднюю продолжительность жизни по сравнению с вирусным контролем. Эффективность данного лечения зависела от дозы препарата и способа лечения. Результаты представлены в таблицах 10-11.
Наиболее эффективным по всем трем параметрам (показатель защиты от смертности, средняя продолжительность жизни и потеря веса) было лечение фуллеренполиаминокапроновой кислотой внутримышечно, которое в дозах 100 и 200 мг/кг/день предотвращало гибель 60-70% зараженных животных и потерю их веса, а также увеличивало продолжительность их жизни почти в 2 раза. Внутрибрюшинное лечение фуллеренполиаминокапроновой кислотой было эффективно только в дозах 50 и 100 мг/кг/день. Гибель животных, значительное снижение средней продолжительности жизни и веса мышей при внутрибрюшинном лечении их фуллеренполиаминокапроновой кислотой в дозе 200 мг/кг/день дают основание полагать, что данная доза при этом способе введения является токсичной для инфицированных мышей.
Пример 8. Изучение противоопухолевого действия фуллеренполиаминокапроновой кислоты (препарат №1) при перевиваемых опухолях лейкоза L 1210, аденокарциномы молочной железы Са-755 и карциномы Льюиса.
Исследования выполнялись в Институте токсикологии, г.Санкт-Петербург, 2006 г. в соответствии с «Методическими указаниями по изучению противоопухолевой активности фармакологических веществ» («Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ», Минздрав РФ, Ремедиум. М., 2000 г., с.319-325).
Штаммы опухолевых клеток лейкемии L1210, аденокарциномы молочной железы Са-755, а также штамм опухолевых клеток карциномы Льюиса (3LL) получены из НИИ онкологии им. проф. Н.Н.Петрова МЗ РФ (г.Санкт-Петербург).
В исследовании использованы следующие тест- системы:
Мыши линии DBA/2 с перевитыми клетками лейкемии L1210. Возраст мышей 6-8 недель, масса 19-25 г.
Мыши самцы линии С 57 BL/6j с перевитыми клетками Са-755. Возраст мышей 6-8 недель, масса 19-25 г.
Мыши самцы линии С 57 BL/6j с перевитыми клетками 3LL. Возраст мышей 6-8 недель, масса 18-24 г.
Оценка противоопухолевого действия проводилась на основании:
- оценки накопления асцита по регистрации прибавки веса животных;
- оценки продолжительности жизни животных;
- оценки опухолевого роста. Проводили измерение большего размера опухоли (длина) и перпендикулярного ему меньшего размера (ширина). Рассчитывали объем опухоли и торможение опухолевого роста рассчитывали по формуле. Оценочным критерием являлся день достижения каждой индивидуальной опухолью объема 500 мм3.
Результаты влияния препарата на развитие лейкемии L1210 представлены в таблице 12.
В таблице 13 приведена средняя продолжительность жизни животных с перевиваемыми опухолями лейкемии L1210 и контрольной группы, а также данные увеличения продолжительности жизни по сравнению с контрольной группой в %.
Как видно из таблицы 13 средняя продолжительность жизни мышей контрольной группы с перевитыми опухолевыми клетками лейкемии L1210 составила 6,0±0,21 дней. Введение препарата достоверно увеличило продолжительность жизни мышей до 10,7±0,37 дней и 10,60±0,37 дней, процент увеличения продолжительности жизни по сравнению с контролем составил 78,33% и 76,67% для доз препарата 100 мг/кг и 200 мг/кг соответственно, однако различия между опытными группами оказались статистически недостоверными.
В процессе эксперимента проводилось ежедневное взвешивание животных с целью оценки накопления асцита и изучения сравниваемых препаратов на данный процесс.
Результаты оценки прибавки веса представлены в таблице 14.
Как видно из таблицы 14, препарат достоверно уменьшал накопление асцита у мышей с перевитыми опухолями лейкемии L1210. Прибавка веса тела у мышей, получавших исследуемый препарат, была достоверно меньше, чем в контрольной группе, причем у животных, получавших исследуемый препарат в дозе 250 мг/кг, средняя прибавка веса была достоверно ниже (в 1,5 раза) по сравнению с таковым показателем у животных, получавших препарат в дозе 100 мг/кг.
Таким образом, полученные результаты позволяют сделать заключение о том, что препарат проявляет выраженное противоопухолевое действие и тормозит рост опухолевых клеток лейкемии L1210 у мышей, что проявилось в достоверном увеличении продолжительности жизни (78,33% и 76,67%) для доз 100 и 250 мг/кг и достоверном торможении накопления асцита экспериментальных животных (78-43%). Признаков интоксикации на фоне введения исследуемого препарата не зарегистрировано. Анализ полученных данных выявил достоверные различия между дозой препарата 100 мг/кг и дозой 250 мг/кг - увеличение дозы препарата приводит к достоверному уменьшению накопления асцита у экспериментальных животных.
По другим показателям контраст (отличие средних для групп, получавших разные дозы исследуемого препарата) был на уровне ошибок, вызванных естественным разбросом данных.
Результаты влияния препарата на развитие аденокарциномы молочной железы Са-755 представлены в таблице 15.
В таблице 16 приведена средняя продолжительность жизни животных с перевиваемыми опухолями аденокарциномы молочной железы Са-755 и контрольной группы, а также данные увеличения продолжительности жизни по сравнению с контрольной группой в %.
Как видно из таблицы 16 средняя продолжительность жизни мышей контрольной группы с перевитыми опухолевыми клетками опухолями аденокарциномы молочной железы Са-755 составила 37,9±0,74 дней. Введение препарата достоверно увеличило продолжительность жизни мышей до 71,9±2,58 дней и 73,4±0,92 дней, процент увеличения продолжительности жизни по сравнению с контролем составил 89,71% и 93,67% для доз препарата 100 мг/кг и 200 мг/кг соответственно, однако различия между опытными группами оказались статистически недостоверными.
Таким образом, полученные результаты позволяют сделать заключение о том, что препарат проявляет выраженное противоопухолевое действие и тормозит рост опухолевых клеток аденокарциномы молочной железы Са-755 у мышей, что проявилось в достоверном увеличении продолжительности жизни (89,71% и 93,67%) для доз 100 и 250 мг/кг. Признаков интоксикации на фоне введения исследуемого препарата не зарегистрировано.
Проведена оценка влияния препарата на средние величины объема опухолей карциномы Льюиса в различные дни после перевивки. В контрольной группе опухоли развились у 21 из 26 мышей (80,8%), первые опухоли были зарегистрированы на 7 день после перевивки и регистрировались до 40 дня. Первые опухоли в группе с воздействием препарата в дозе 100 мг/кг были зарегистрированы на 7 день после перевивки и регистрировались до 60 дня; в группе с воздействием препарата в дозе 250 мг/кг были зарегистрированы на 8 день после перевивки и регистрировались до 60 дня. Препарат оказывал выраженный противоопухолевый эффект на развитие карциномы легких Льюиса; процент торможения в группе препарата - 100 мг/кг по сравнению с контрольной группой на 10-17 дни достоверно составлял 71,77% и 58,5%, в группе препарата - 250 мг/кг по сравнению с контрольной группой на 10-17 дни - 84,37% и 54,2% соответственно.
В таблице 17 представлено влияние препарата на рост карциномы Льюиса, анализировались сроки достижения опухолью размера 500 мм3; в контрольной группе данный показатель колебался от 12 до 20 дней, а в экспериментальных группах - от 17 до 28 дней. Как видно из данной таблицы, препарат достоверно увеличивал этот показатель на 22-27% по сравнению с контролем.
Гибель мышей контрольной группы наступала в результате прогрессирования опухолевого роста основного очага, а также вследствие обширного метастатического поражения легких. Индивидуальная продолжительность жизни мышей в контрольной группе колебалась от 28 до 39 дней, в группах с препаратом от 51 до 60 дней. В таблице 18 представлено влияние препарата на среднюю продолжительность жизни мышей после перевивки опухоли. Как видно из таблицы 18 препарат достоверно увеличивал среднюю продолжительность жизни примерно на 70% по сравнению с контрольной группой, разница между опытными группами статистически недостоверна.
Индивидуальные вес легких и количество метастазов в легких у мышей контрольной группы и опытных групп с воздействием сравниваемых препаратов представлены в таблице 19.
Как видно из таблицы 19 препарат достоверно уменьшал вес легких и количество метастазов в легких в 1,5-2 раза. Разница между опытными группами статистически недостоверна.
Таблица 1
Исследование цитотоксичности препарата на модели лимфобластоидных клеток человека
Условия опыта, концентрация, мкг/мл Жизнеспособность клеток, % Количество клеток ×103/мл
Контроль клеток 98 800
Препарат №1 0,5 95 833
1,0 94 833
5,0 98 799
10,0 94 767
100 95 600
Таблица 2
Исследование противовирусной активности препарата на модели клеток человека, инфицированных ВИЧ-1
Условия опыта Концентрация, мкг/мл Жизнеспособность клеток, % Кол-во клеток ×103/мл ЦПЭ/синцитии (+)
Контроль клеток 0 98 800 0
Контроль вируса 0 20 66 4,0
Препарат №1 0,5 18 33 4,0
1,0 26 495 4,0
5,0 98 633 0
10 98 600 0
Таблица 3
Изучение цитотоксического действия образца фуллеренполиаминокапроновой кислоты на культуру клеток Vero
Концентрация вещества, мкг/мл Цитотоксическое действие на клетки, %
50 0,0
100 0,0
200 25,0
500 100,0
1000 100,0
Примечание: ДМСО в концентрации, применяемой для растворения, не оказывает цитотоксического действия на клетки
Таблица 4
Противогерпетическая активность образца фуллеренполиаминокапроновой кислоты в культуре клеток Vero при инфицирующей дозе вируса герпеса - 100 ТЦИД50/0,2 мл
Концентрация вещества, мкг/мл Защита клеток от цитопатического действия вируса герпеса, %
5,0 81,25±12,5
10,0 100±0,0
50,0 100±0,0
100,0 100±0,0
Примечание: клетки инфицировали через час после введения образцов.
Таблица 5
Защитное действие препарата от цитодеструктивного действия вируса герпеса, тип 1 при инфицирующей дозе вируса 100 ТЦИД50
Концентрация препарата, мкг/мл Препарат №1
Оптическая плотность Отличия от контроля достоверны при р
0 0,403±0,02  
5,0 1,110±0,08 <0,01
10,0 1,015±0,07 <0,01
50,0 1,153±0,06 <0,01
100,0 1,79±0,05 <0,01
Контроль клеток 1,133±0,07 <0,01
Таблица 6
Противогерпетическая активность образца фуллеренполиаминокапроновой кислоты в культуре клеток Vero при инфицирующей дозе вируса герпеса - 1000 ТЦИД50/0,2 мл
Концентрация вещества, мкг/мл Защита клеток от цитопатического действия вируса герпеса, %
5,0 100±0,0
10,0 100±0,0
50,0 100±0,0
100,0 100±0,0
Примечание: клетки инфицировали через час после введения образцов
Таблица 7
Защитное действие препарата от цитопатического действия вируса герпеса, тип 1 при инфицирующей дозе вируса 1000 ТЦИД50
Концентрация препарата, мкг/мл Оптическая плотность Отличия от контроля достоверны при Р
0 0,796±0,06  
5,0 1,027±0,04 <0,01
10,0 1,021±0,04 <0,01
50,0 1,033±0,03 <0,01
100,0 1,083±0,01 <0,01
Контроль клеток 1,133±0,07  
Таблица 8
Результаты изучения активности препарата №1 в отношении вируса гриппа A/IIV-Moscow/01/2009 (H1N1)swl
Концентра-
ции препаратов (мкг/мл)		 Внесение препарата Снижение (%) репродукции вируса гриппа в культуре клеток MDCK по отношению к контролю в присутствии серий препарата №1
6,25 за 2 часа до инфицирования 27,0-28,0-0
одномоментно с инфицированием 18,0-0-0
12,5 за 2 часа до инфицирования 47,0-74,0-9,5
одномоментно с инфицированием 39,0-13,0-0
25,0 за 2 часа до инфицирования 41,0-79,0-12
одномоментно с инфицированием 40,0-0
50,0 за 2 часа до инфицирования 28,0-72,0-31,0
одномоментно с инфицированием 33,0-10,0
100,0 за 2 часа до инфицирования 4,0-0-20,0
одномоментно с инфицированием 29,0-28,0
Различия в показателях 2-х опытов зависели от множественности заражения вирусом культуры клеток MDCK.
Таблица 9
Результаты изучения активности препаратов в отношении вируса гриппа A/IIV-Moscow/01/2009 (H1N1)swl, средние показатели
Концентра-
ции препаратов (мкг/мл)		 Внесение препарата Снижение (%) репродукции вируса гриппа в культуре клеток MDCK по отношению к контролю в присутствии серий препарата №1
6,25 за 2 часа до инфицирования 18,0
одномоментно с инфицированием 6,0
12,5 за 2 часа до инфицирования 44,0
одномоментно с инфицированием 26
25,0 за 2 часа до инфицирования 44,0
одномоментно с инфицированием 20,0
50,0 за 2 часа до инфицирования 44,0
одномоментно с инфицированием 22,0
100,0 за 2 часа до инфицирования 8
одномоментно с инфицированием 29,0
Figure 00000010
Figure 00000011
Таблица 12
Влияние препарата на продолжительность жизни мышей с перевиваемой опухолью лейкемии L1210
Название № животного и его продолжительность жизни в днях
группы 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Контроль 6 7 7 6 6 5 6 6 5 6
Препарат №1 100 мг/кг 9 11 13 11 12 10 11 10 10 10
Препарат №1 250 мг/кг 10 10 10 9 10 11 13 10 11 12
Таблица 13
Влияние препарата на среднюю продолжительность жизни животных с перевиваемой опухолью лейкемии L1210
Название группы СПЖ в днях, М±ь УПЖ, %
Контроль 6,0±0,21  
Препарат №1, 100 мг/кг 10,7±0,37* 78,33
Препарат №1, 250 мг/кг 10,6010,37* 76,67
Примечание: * - достоверные отличия от контроля (при р<0,05)
Таблица 14
Влияние препарата на развитие асцита у мышей с перевиваемой опухолью лейкемии L 1210
День Контрольная группа Препарат 100 мг/кг Препарат 250 мг/кг
Средняя прибавка веса, М±m Средняя прибавка веса, М±m % торможения по сравнению с контролем Средняя прибавка веса, M±m % торможения по сравнению с контролем
1 0,4±0,2 0,3±0,2   0,3±0,1  
2 0,9±0,3 0,8±0,4   0,5±0,3  
3 5,0±0,8 2,5±0,5 50,0%* 1,1±0,4 78,0%*
4 11,4±1,1 4,2±1,0 63,2%* 2,8±0,9 75,4%*
5 16,3±2,0 8,4±1,2 48,5%* 4,7±1,2 71,2%*
6 21,2±2,1 12,1±2,1 42,9%* 8,4±1,6 60,4%*
7 26,3±1,7 14,2±2,2 46,0%* 10,0±1,3 62,0%*
Примечание: * - достоверные отличия от контроля (при р<0,05)
Таблица 15
Влияние препарата на продолжительность жизни мышей с перевиваемой опухолью лейкемии СА-755
Название группы N животного и его продолжительность жизни в днях
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Контроль 36 39 41 34 35 40 39 38 40 37
Препарат №1, 100 мг/кг 79 81 73 82 80 66 63 60 67 68
Препарат №1, 250 мг/кг 77 72 70 78 76 71 73 70 72 75
Таблица 16
Влияние препарата на среднюю продолжительность жизни животных с перевиваемой опухолью аденокарциномы молочной железы Са-755
Название группы СПЖ в днях, М±m УПЖ, %
Контроль 37,9±0,74  
Препарат №1, 100 мг/кг 71,9±2,58* 89,71
Препарат №1, 250 мг/кг 73,40±0,92* 93,67
Примечание: * - достоверные отличия от контроля (при р<0,05)
Таблица 17
Влияние препарата на размеры карциномы Льюиса (достижение V=500 мм3)
  День достижения опухолью объема 500 мм3
Группа М±m % увеличения, статистическая значимость
Контроль 16,7±0,65  
Препарат №1, 100 мг/кг 21,3±1,21 27,3% *
Препарат №1, 250 мг/кг 20,5±1,20 22,9%*
Примечание: * - достоверные отличия от контроля (при р<0,05)
Таблица 18
Влияние препарата на продолжительность жизни мышей после перевивки карциномы Льюиса
  Продолжительность жизни
Группа М±m % увеличения Статистическая значимость
Контроль 32,81±0,86  
Препарат 100 мг/кг 55,92±0,98 70,42%*
Препарат 250 мг/кг 56,38±0,68 71,85%*
Примечание: * - достоверные отличия от контроля (при р<0,05)
Таблица 19
Влияние препарата на метастазирование карциномы Льюиса у мышей
Группа № (число животных) Вес легких, мг М±m Количество метастазов в легких, M±m Количество крупных (≥3 мм) метастазов в легких, M±m
Контроль (n=21) 1486,7±64,08 70,5±5,50 13,4±2,05
Препарат №1, 100 мг/кг (n=12) 491,9±63,72* 53,5±11,23* 5,8±1,91*
Препарат №1, 250 мг/кг (n=13) 505,4±68,82* 55,8±11,60* 5,7±1,54*
Примечание: * - достоверные отличия от контроля (при р<0,05)

Claims (7)

1. Гомо- и гетеро-полиаминокислотные производные фуллерена общей формулы
Figure 00000012
, где n=2-5, х=3, L=-(CH2)m, где m=1-5, либо -CO(CH2)kCH(NH2)-, где k=1-2, характеризующиеся тем, что соединения содержат ковалентно-связанные аминокислотные группы и полярные ионные формы аминокислот.
2. Производные фуллерена по п.1, характеризующиеся тем, что в качестве аминокислотных групп используют фрагменты аминокислот алифатического ряда общей формулы NH(CH2)nCOOH, где n=2-5.
3. Производные фуллерена по п.1, характеризующиеся тем, что в качестве полярных ионных форм аминокислот используют фрагменты амидов дикарбоновых аминокислот общей формулы NH2(CO)(CH2)kCH(NH2)COOH, где k=1-2.
4. Способ получения производных фуллерена по п.1, характеризующийся тем, что они образуются при взаимодействии фуллерена с 10-кратным мольным избытком свежеприготовленных безводных калиевых солей аминокислот общей формулы NH2(CH2)nCOOK, где n=2-5, в среде органического ароматического растворителя при добавлении к полученной суспензии межфазного катализатора при перемешивании и нагревании до температуры не выше 60-80°С до полного обесцвечивания раствора и формирования твердого осадка, который затем выделяют, после чего осуществляют обработку водных растворов калиевых солей фуллеренполиаминокислот 1Н раствором органических или минеральных кислот с последующим введением раствора аминокислоты общей формулы NH2(L)COOH, где L=-(CH2)m, где m=1-5, либо -CO(CH2)kCH(NH2)-, где k=1-2 в полярных растворителях, перемешиванием, удалением растворителей, промывкой и высушиванием осадка.
5. Способ по п.4, отличающийся тем, что используют безводные калиевые соли аминокислот в мелкодисперсном состоянии, а выделение твердого осадка калиевых солей фуллеренполиаминокислот осуществляют фильтрованием, промывкой этиловым спиртом и высушиванием.
6. Способ по любому из пп.4 и 5, отличающийся тем, что в качестве межфазного катализатора используют метиловые эфиры полиэтиленоксидов молекулярной массы 200, 400, 500.
7. Фармацевтическая композиция, обладающая активностью против вируса герпеса, вируса гепатита С, вирусов гриппа различной природы, ВИЧ, а также противоопухолевой и противопсориатической активностью, содержащая в качестве активного вещества производное фуллерена по п.1 в эффективном количестве.
RU2011103574/04A 2011-02-01 2011-02-01 Гомо- и гетеро-полиаминокислотные производные фуллерена c60, способ их получения и фармацевтические композиции на их основе RU2458914C1 (ru)

Priority Applications (14)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2011103574/04A RU2458914C1 (ru) 2011-02-01 2011-02-01 Гомо- и гетеро-полиаминокислотные производные фуллерена c60, способ их получения и фармацевтические композиции на их основе
US13/820,769 US9221746B2 (en) 2011-02-01 2012-02-06 Homo- and hetero-polyamino-acid derivatives of fullerene C60, method for producing same, and pharmaceutical compositions based on said derivatives
AP2013007072A AP4014A (en) 2011-02-01 2012-02-06 Homo- and hetero-polyamino-acid derivatives of fullerene c60, method for producing same, and pharmaceutical compositions based on said derivatives c60
ES12741829.1T ES2582872T3 (es) 2011-02-01 2012-02-06 Derivados homo- y hetero-poliaminoácidos de fullereno C60, método para la producción de los mismos, y composiciones farmacéuticas basadas en dichos derivados
EP12741829.1A EP2674415B1 (en) 2011-02-01 2012-02-06 Homo- and hetero-polyamino-acid derivatives of fullerene c60, method for producing same, and pharmaceutical compositions based on said derivatives
MX2013008545A MX354436B (es) 2011-02-01 2012-02-06 Derivados de homo- y hetero-poliaminoácidos de fulereno c60, método para producir los mismos, y composiciones farmacéuticas con base en dichos derivados.
PCT/RU2012/000062 WO2012105872A1 (ru) 2011-02-01 2012-02-06 Гомо- и гетеро-полиаминокислотные производные фуллерена с60, способ их получения и фармацевтические композиции на их основе
BR112013012910-7A BR112013012910A2 (pt) 2011-02-01 2012-02-06 Derivados de fulereno de homo e heteropoli aminoácidos c60, método para a produção dos mesmos e composições famacêuticas com base nos referidos derivados
EA201201448A EA020801B1 (ru) 2011-02-01 2012-02-06 Гомо- и гетерополиаминокислотные производные фуллерена с, способ их получения и фармацевтические композиции на их основе
AU2012212707A AU2012212707B2 (en) 2011-02-01 2012-02-06 Homo- and hetero-polyamino-acid derivatives of fullerene C60, method for producing same, and pharmaceutical compositions based on said derivatives
UAA201301251A UA110345C2 (en) 2011-02-01 2012-06-02 Homo- and heteropolyaminoacid derivatives of fullerene c60, and method for their pharmaceutical compositions on their basis
ZA2013/03447A ZA201303447B (en) 2011-02-01 2013-05-13 Homo-and hetero-polyamino-acid derivatives of fullerene c60, method for producing same, and pharmaceutical compositions on said derivatives
IL226736A IL226736A (en) 2011-02-01 2013-06-04 Homo- and hetero derivatives of Fullerene Polyamino Acids 60c, Methods of Preparation and Pharmaceutical Preparations Containing These Derivatives
HK14103544.9A HK1190386A1 (zh) 2011-02-01 2014-04-14 富勒烯 的均聚和雜聚氨基酸衍生物，其生產方法以及基於該衍生物的藥物組合物

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2011103574/04A RU2458914C1 (ru) 2011-02-01 2011-02-01 Гомо- и гетеро-полиаминокислотные производные фуллерена c60, способ их получения и фармацевтические композиции на их основе

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2458914C1 true RU2458914C1 (ru) 2012-08-20

Family

ID=46602956

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2011103574/04A RU2458914C1 (ru) 2011-02-01 2011-02-01 Гомо- и гетеро-полиаминокислотные производные фуллерена c60, способ их получения и фармацевтические композиции на их основе

Country Status (14)

Country Link
US (1) US9221746B2 (ru)
EP (1) EP2674415B1 (ru)
AP (1) AP4014A (ru)
AU (1) AU2012212707B2 (ru)
BR (1) BR112013012910A2 (ru)
EA (1) EA020801B1 (ru)
ES (1) ES2582872T3 (ru)
HK (1) HK1190386A1 (ru)
IL (1) IL226736A (ru)
MX (1) MX354436B (ru)
RU (1) RU2458914C1 (ru)
UA (1) UA110345C2 (ru)
WO (1) WO2012105872A1 (ru)
ZA (1) ZA201303447B (ru)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103450486B (zh) * 2013-05-14 2016-09-14 成立 双亲有机聚富勒烯树状分子交联的聚阳离子聚合物凝胶物质及其制备方法
CN104478886A (zh) * 2014-12-30 2015-04-01 郑州大学 一种富勒烯双加成氨基酸及其合成方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5811460A (en) * 1994-01-24 1998-09-22 The Regents Of The University Of California Water soluble fullerenes with antiviral activity
RU2196602C1 (ru) * 2002-01-22 2003-01-20 Закрытое акционерное общество "ДЕСКО" Средство для ингибирования вич и цмв-инфекций и способ их ингибирования
US20030027870A1 (en) * 2001-05-15 2003-02-06 Wilson Stephen R. Fullerene derivatives that modulate nitric oxide synthase and clamodulin activity
RU2236852C1 (ru) * 2003-06-23 2004-09-27 Закрытое акционерное общество "ДЕСКО" Средство для ингибирования репродукции оболоченных вирусов, способ его получения, фармацевтическая композиция и способ ингибирования вирусных инфекций
RU2316320C1 (ru) * 2006-06-19 2008-02-10 Лев Давидович Раснецов Противовирусное средство

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2162819C2 (ru) 1999-01-05 2001-02-10 Тверской государственный технический университет Способ получения водорастворимых производных фуллеренов
RU2213049C1 (ru) * 2002-07-08 2003-09-27 Закрытое акционерное общество "ДЕСКО" Способ получения водорастворимых аминокислотных производных фуллерена
RU2213048C1 (ru) * 2002-07-08 2003-09-27 Закрытое акционерное общество "ДЕСКО" Способ получения водорастворимых солей аминокислотных производных фуллерена
WO2005070827A2 (en) 2004-01-14 2005-08-04 William Marsh Rice University Fullerene based amino acids
WO2009002203A1 (fr) 2007-06-19 2008-12-31 Institut Problem Khimicheskoi Fiziki Rossiiskoi Akademii Nauk (Ipkhf Ran) Dérivés d'acides aminés polyfonctionnels du fullerène c60
CN101335691B (zh) 2007-06-28 2012-09-12 华为技术有限公司 一种数据传输方法、交织器和通信装置

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5811460A (en) * 1994-01-24 1998-09-22 The Regents Of The University Of California Water soluble fullerenes with antiviral activity
US20030027870A1 (en) * 2001-05-15 2003-02-06 Wilson Stephen R. Fullerene derivatives that modulate nitric oxide synthase and clamodulin activity
RU2196602C1 (ru) * 2002-01-22 2003-01-20 Закрытое акционерное общество "ДЕСКО" Средство для ингибирования вич и цмв-инфекций и способ их ингибирования
RU2236852C1 (ru) * 2003-06-23 2004-09-27 Закрытое акционерное общество "ДЕСКО" Средство для ингибирования репродукции оболоченных вирусов, способ его получения, фармацевтическая композиция и способ ингибирования вирусных инфекций
RU2316320C1 (ru) * 2006-06-19 2008-02-10 Лев Давидович Раснецов Противовирусное средство

Also Published As

Publication number Publication date
ES2582872T3 (es) 2016-09-15
EP2674415A1 (en) 2013-12-18
WO2012105872A1 (ru) 2012-08-09
EP2674415B1 (en) 2016-04-20
AP2013007072A0 (en) 2013-08-31
US20130165691A1 (en) 2013-06-27
IL226736A (en) 2016-05-31
EP2674415A4 (en) 2014-09-10
HK1190386A1 (zh) 2014-07-04
UA110345C2 (en) 2015-12-25
MX354436B (es) 2018-03-06
MX2013008545A (es) 2016-09-08
ZA201303447B (en) 2014-01-29
EA201201448A1 (ru) 2013-03-29
BR112013012910A2 (pt) 2020-03-31
AU2012212707B2 (en) 2014-03-20
US9221746B2 (en) 2015-12-29
AP4014A (en) 2017-01-25
EA020801B1 (ru) 2015-01-30
AU2012212707A1 (en) 2013-03-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7030093B2 (ja) オキサチアジン様化合物を作製する方法
CA2810507A1 (en) Homo- and hetero-polyamino-acid derivatives of fullerene c60, method for producing same, and pharmaceutical compositions based on said derivatives
US8450318B2 (en) Method to treat infections using anti-infective agents
RU2458914C1 (ru) Гомо- и гетеро-полиаминокислотные производные фуллерена c60, способ их получения и фармацевтические композиции на их основе
EP2599783B1 (en) N6-(ferrocenmethyl)quinazolin-2,4,6-triamin (h2) and the derivatives and prodrugs thereof as antileishmanial, antiprotozoal, antiparasitic and antimicrobial agents
CA2810515C (en) Hydrated n-fullerene amino acids, method for producing the latter, and pharmaceutical compositions on the basis thereof
US20090054391A1 (en) Biologically active complex
RU2458046C1 (ru) Гидратированные n-фуллерен-аминокислоты, способ их получения и фармацевтические композиции на их основе
US6613793B2 (en) Anticancer activity of imino acid conjugates or methylglyoxal
ES2476240T3 (es) Agente antibacteriano para el tratamiento de enfermedades infecciosas de origen bacteriano
EP0762878B1 (en) Use of a naphthalenesulfonic acid compound for inhibiting retroviral infection
WO1993015607A1 (en) Ion pairs of hypericin compounds having antiviral activity
OA16420A (en) Homo-andhetero-polyamino-acid derivatives of fullerence C60, method for producing same, and pharmaceutical compositions based on said derivatives.
WO2017151836A1 (en) J-series prostaglandin-ethanolamides as novel therapeutics for skin and/or oral disorders
CN101019861A (zh) 去甲斑蝥素及其衍生物在预防和治疗艾滋病中的新用途
NL8204372A (nl) Nieuw chemotherapeuticum, werkwijze voor de bereiding daarvan en farmaceutica met dit chemotherapeuticum daarin.
OA16498A (en) Hydrated N-fullerene amino acids, method for producing the latter, and pharmaceutical compositions on the basis thereof.