RU2818356C1 - Способ оценки резистентности опухоли плоскоклеточного рака горла к радиационной терапии и набор тестов для его реализации - Google Patents
Способ оценки резистентности опухоли плоскоклеточного рака горла к радиационной терапии и набор тестов для его реализации Download PDFInfo
- Publication number
- RU2818356C1 RU2818356C1 RU2022131100A RU2022131100A RU2818356C1 RU 2818356 C1 RU2818356 C1 RU 2818356C1 RU 2022131100 A RU2022131100 A RU 2022131100A RU 2022131100 A RU2022131100 A RU 2022131100A RU 2818356 C1 RU2818356 C1 RU 2818356C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- hsa
- mir
- test tube
- squamous cell
- micrornas
- Prior art date
Links
- 238000012360 testing method Methods 0.000 title claims abstract description 26
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 title claims abstract description 5
- 208000017572 squamous cell neoplasm Diseases 0.000 title description 4
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 claims abstract description 25
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 claims abstract description 17
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 14
- 108091070508 Homo sapiens let-7e stem-loop Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 108091069006 Homo sapiens miR-125b-1 stem-loop Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 108091069087 Homo sapiens miR-125b-2 stem-loop Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 108091069005 Homo sapiens miR-128-1 stem-loop Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 108091065160 Homo sapiens miR-128-2 stem-loop Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 108091066895 Homo sapiens miR-135b stem-loop Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 108091070491 Homo sapiens miR-16-1 stem-loop Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 108091068927 Homo sapiens miR-16-2 stem-loop Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 108091070489 Homo sapiens miR-17 stem-loop Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 108091070496 Homo sapiens miR-20a stem-loop Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 108091070493 Homo sapiens miR-21 stem-loop Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 108091067468 Homo sapiens miR-210 stem-loop Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 108091070492 Homo sapiens miR-23a stem-loop Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 108091065456 Homo sapiens miR-34c stem-loop Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 108091008065 MIR21 Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 7
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 23
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 8
- 206010043515 Throat cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 claims description 6
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 claims description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 claims description 5
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 5
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 claims description 4
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims description 3
- 238000000137 annealing Methods 0.000 claims description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000005855 radiation Effects 0.000 abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 10
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 5
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 2
- 108091031921 Homo sapiens miR-18b stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 108091067269 Homo sapiens miR-371a stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 206010023856 Laryngeal squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 108091008611 Protein Kinase B Proteins 0.000 description 2
- 102100033810 RAC-alpha serine/threonine-protein kinase Human genes 0.000 description 2
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 2
- 208000000102 Squamous Cell Carcinoma of Head and Neck Diseases 0.000 description 2
- 208000036844 Squamous cell carcinoma of the larynx Diseases 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 2
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 102000010400 1-phosphatidylinositol-3-kinase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000033616 DNA repair Effects 0.000 description 1
- 102100027541 GTP-binding protein Rheb Human genes 0.000 description 1
- 101000973157 Homo sapiens NEDD4 family-interacting protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000804728 Homo sapiens Protein Wnt-2b Proteins 0.000 description 1
- 101000785887 Homo sapiens Serine/threonine-protein phosphatase 2A 56 kDa regulatory subunit alpha isoform Proteins 0.000 description 1
- 102100022547 NEDD4 family-interacting protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 1
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 108091007960 PI3Ks Proteins 0.000 description 1
- 102000014160 PTEN Phosphohydrolase Human genes 0.000 description 1
- 108010011536 PTEN Phosphohydrolase Proteins 0.000 description 1
- 102100035289 Protein Wnt-2b Human genes 0.000 description 1
- 101150020518 RHEB gene Proteins 0.000 description 1
- 208000032056 Radiation Fibrosis Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010067953 Radiation fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 102100026282 Serine/threonine-protein phosphatase 2A 56 kDa regulatory subunit alpha isoform Human genes 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 230000025084 cell cycle arrest Effects 0.000 description 1
- 230000007960 cellular response to stress Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000003831 deregulation Effects 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000004049 epigenetic modification Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-O guanidinium Chemical compound NC(N)=[NH2+] ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000012165 high-throughput sequencing Methods 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 230000005865 ionizing radiation Effects 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 238000010837 poor prognosis Methods 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000007859 posttranscriptional regulation of gene expression Effects 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000011127 radiochemotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000006354 stress signaling Effects 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к области молекулярной биологии. Описан способ оценки резистентности опухоли плоскоклеточного рака горла к радиационной терапии. Способ включает метод полимеразной цепной реакции (ПЦР), позволяющий определить уровень экспрессии микроРНК, который описывают протоколами подготовки проведения ПЦР и полученных результатов. Проведение ПЦР включает приготовление раствора с использованием набора, включающего пробирку со смесью лиофилизированных 22 праймеров для 11 микроРНК hsa-miR-128-3р, hsa-miR-20a-5p, hsa-miR-17-5p, hsa-let-7e-5p, hsa-miR-135b-5p, hsa-miR-125b-5p, hsa-miR-21-5p, hsa-miR-16-5p, hsa-miR-210, hsa-miR-23a-3p и hsa-miR-34c-5p. Технический результат заключается в повышении точности и достоверности оценки резистентности опухоли плоскоклеточного рака горла к воздействию облучения. 2 н.п. ф-лы, 1 табл.
Description
Изобретение относится к области медицины, а именно к медицинской генетике и может быть использовано в онкологии для определения чувствительности опухоли к воздействию радиотерапии.
Более 95% случаев злокачественных новообразований головы и шеи приходится на плоскоклеточную форму рака гортани (РГ). Одним из основных методов его лечения является радиационная терапия [Рожнов В.А., Андреев В.Г., Гордон К.Б., Гулидов И.А., Акки Э.Д. Современные методы лечения рецидивного неоперабельного плоскоклеточного рака гортани (Обзор литературы). Сибирский онкологический журнал. 2016; 15(2): С. 90]. Однако при появлении рецидива чувствительность клеток опухоли к осуществляемому лечению существенно снижается. Постлучевой фиброз мягких тканей шеи провоцирует нарушение кровообращения, что негативно влияет на чувствительность опухоли к терапии [Choe K.S., Haraf D.J., Solanki A., Cohen Е.Е., Seiwert T.Y., Stenson K.M., Blair E.A., Portugal L., Villaflor V.M., Witt M.E., Vokes E.E., Salama J.K. Prior chemoradiotherapy adversely impacts outcomes of recurrent and second primary head and neck cancer treated with concurrent chemotherapy and reirradiation // Cancer. 2011. Vol. 117 (20). P. 4672]. Поэтому на результат лучевой терапии большое влияние оказывает первоначальная чувствительность опухолевых клеток. Данные о резистентности опухоли позволят своевременно скорректировать тактику проводимого лечения.
Одним из способов определения чувствительности опухоли основан на гистологическом исследовании биоптата. Как правило, забор пробы осуществляют после проведения четвертого сеанса лучевой терапии, которая проводится дробно-протяженным методом [Патент РФ 2349916 С1, опубликован: 20.03.2009, Бюл. N 8]. Если обнаружен патоморфоз III-IV степени, то опухоль имеет высокую степень чувствительности к облучению. Наличие патоморфоз I-II степени показывает, что опухоль является радиорезистентной. Данный способ делает возможным прогнозирование резистентности опухоли в ранние сроки, что позволяет при обнаружении ее устойчивости к лучевой терапии своевременно прибегнуть к операции. Недостаток данного способа заключается в отсутствие возможности определить чувствительность опухоли к радиотерапии до ее начала.
Известно, что первичные изменения при воздействии облучения приходятся на ДНК клетки. Такие повреждения запускают каскад реакций, которые вызывают апоптоз, остановку клеточного цикла и репарацию ДНК. Данные процессы контролируются работой сотни генов [Menendez D., Inga A., Resnick М.А. 2010. Potentiating the р53 network. Discovery medicine. 10(50): P 94]. Способ по определения чувствительности опухолей к лучевой терапии на основании изменений копийности генов обладает высокой чувствительностью и специфичностью [Патент РФ RU 2728428 C1 по МПК C12Q 1/686, G01N 33/00, опубл. 2020 г.]. Регистрация результатов занимает от 4-5 часов и производится в конце исследования. Недостаток данного способа заключается в том, что основная роль в клеточном ответе на стрессовое воздействие принадлежит эпигенетическим модификациям генома, а именно изменениям экспрессии микроРНК [Mendell J.T., Olson E.N. 2012. MicroRNAs in stress signaling and human disease. Cell. 148(6): P1174.].
Предполагаемое изобретения направлено на решение задачи повышения точности и достоверности оценки резистентности опухоли плоскоклеточного рака горла к воздействию облучения.
Заявляется способ оценки резистентности опухоли плоскоклеточного рака горла к радиационной терапии, включающий метод полимеразной цепной реакции (ПЦР), позволяющий определить уровень экспрессии микроРНК, который описывают протоколами подготовки проведения ПЦР и полученных результатов, причем проведение ПЦР включает приготовление раствора с использованием набора, включающего пробирку со смесью лиофилизированных 22 праймеров для 11 микроРНК hsa-miR-128-3р, hsa-miR-20a-5p, hsa-miR-17-5p, hsa-let-7e-5p, hsa-miR-135b-5p, hsa-miR-125b-5p, hsa-miR-21-5p, hsa-miR-16-5p, hsa-miR-210, hsa-miR-23a-3p и hsa-miR-34c-5p, пробирку с реакционной смесью, пробирку с MgCl2, пробирку со стерильной водой, пробирку с минеральным маслом, а протокол ПЦР включает в себя программу амплификации: 1 цикл предварительной денатурации ДНК при 95°С, длительностью 300 с; 35 циклов денатурации при 95°С, длительностью 10 с; 35 циклов отжига праймеров при 60°С по 20 с. каждый; 35 циклов элонгации при 72°С длительностью 10 с, протокол полученных результатов включает в себя описание подобранных для 11 микроРНК 11 пар праймеров - прямого и обратного, при этом к указанным 11 микроРНК отнесены hsa-miR-128-3р, hsa-miR-20a-5p, hsa-miR-17-5p, hsa-let-7e-5p, hsa-miR-135b-5p, hsa-miR-125b-5p, hsa-miR-21-5p, hsa-miR-16-5p, hsa-miR-210, hsa-miR-23a-3p и hsa-miR-34c-5p, где вывод о наличии резистентности опухоли плоскоклеточного рака горла к радиационной терапии делается на основе изменений в экспрессии данных микроРНК.
2. Набор реагентов для оценки резистентности опухоли плоскоклеточного рака горла к радиационной терапии, включающий пробирку со смесью лиофилизированных 22 праймеров для 11 микроРНК hsa-miR-128-3р, hsa-miR-20a-5p, hsa-miR-17-5p, hsa-let-7e-5p, hsa-miR-135b-5p, hsa-miR-125b-5p, hsa-miR-21-5p, hsa-miR-16-5p, hsa-miR-210, hsa-miR-23a-3p и hsa-miR-34c-5p, пробирку с реакционной смесью, пробирку с MgCl2, пробирку со смесью random-праймеров пробирку со стерильной водой, пробирку с минеральным маслом.
Проведенный заявителем анализ уровня техники, включающий поиск по патентам и научно-техническим источникам информации и выявление источников, содержащих сведения об аналогах заявленного изобретения, позволил установить, что заявитель не обнаружил аналог, характеризующийся признаками, тождественными всем существенным признакам заявленного изобретения. Определение из перечня выявленных аналогов прототипа, как наиболее близкого по совокупности существенных признаков аналога, позволило выявить совокупность существенных по отношению к усматриваемому заявителем техническому результату отличительных признаков в заявленном изобретении, изложенных в формуле изобретения.
Оценку резистентности злокачественных новообразований к радиационной терапии проводили следующим образом.
Для проведения анализа используем методом полимеразной цепной реакции, который позволяет обеспечить выделение тотальной РНК из биологического материала пациента. Принцип выделения РНК основан на кислой фенольной экстракции по Хомчинскому [Chomczynski, Piotr & Sacchi, Nicoletta. (1987). Single-Step Method Of RNA Isolation By Acid Guanidinium Thiocyanate-Phenol-Chlorform Extraction. Analytical biochemistry. 162. 156-9.10.1006/abio.1987.9999]. Выделенную тотальную РНК используют в качестве матрицы для синтеза комплементарной ДНК (кДНК) в процессе обратной транскрипции по стандартному протоколу.
Приготовление раствора для проведения ПЦР проводится в микроцентрифужной пробирке. Количество пробирок рассчитывается из количества исследуемых образцов плюс один положительный и один отрицательный контроль. Лиофилизорованные праймеры предварительно ресуспендируются в 50 мкл очищенной воды. В пробирке смешиваются 4 мкл 2,5 х реакционной смеси, 0,5 мкл смеси праймеров, 0,4 мкл 25 тМ MgCl2, 3 нг исследуемого образца (для положительного контроля добавляется 3 нг образца, для отрицательного контроля в пробирку ничего не добавляется). Раствор доводится до объема 20 мкл очищенной водой после чего добавляют 10 мкл минерального масла. Пробирки с растворами помещаются в ДНК-амплификатор. Для проведения ПЦР разработана следующая программа амплификации: 1 цикл предварительной денатурации ДНК при 95°С, длительностью 300 с; 35 циклов денатурации при 95°С, длительностью 10 с; 35 циклов отжига праймеров при 60°С по 20 с; 35 циклов элонгации при 72°С длительностью 10 с.
МикроРНК отобраны на основе динамики их экспрессии при помощи высокопроизводительной системы секвенирования MiSeq System (Illumina, Сан-Диего, Калифорния, США). Система по завершению работы предоставляла файлы FASTQ, данные которых обрабатывались с использованием сервисов GenXPro omiRas.
Экспрессию микроРНК определяли по log2fc отношению сумм нормализованных экспрессий микроРНК в эксперименте к контрольному значению. Подобран индивидуальный порог, который позволяет определить чувствительность к воздействию облучения ионизирующего излучения. Интервал от -1 до 1 (при p<0.05) идентифицируется, как норма. Остальные значения являются признаком повышенной/заниженной экспрессии.
Доказано, что радиорезистентность является комплексным явлением и связано не только с изменением экспрессии генов и мутациями, но также и с изменениями в посттранскрипционной регуляции экспрессии генов на уровне микроРНКома. У больных плоскоклеточным раком горла с плохим прогнозом течения заболевания обнаружена повышенная концентрация в плазме крови и сверхэкспрессия в образцах ткани следующих микроРНК: hsa-miR-128-3р, hsa-miR-16-5р, hsa-miR-20a-5p, hsa-miR-210, hsa-miR-21-5p, hsa-miR-23a-3p, hsa-miR-34c-5p, hsa-miR-371a-5p; и сниженная концентрация следующих микроРНК: hsa-let-7e-5p, hsa-miR-125b-5p, hsa-miR-135b-5p, hsa-miR-17-5p, hsa-miR-18b-5p, hsa-miR-203a, hsa-miR-24-3р, hsa-miR-324-3р, hsa-miR-93-3р в сравнении с группой здоровых пациентов и группой онкологических больных с благоприятным прогнозом течения заболевания. Нарушения в экспрессии микроРНК hsa-miR-128-3р, hsa-miR-16-5р, hsa-miR-20а-5р, hsa-miR-210, hsa-miR-21-5p, hsa-miR-23a-3p, hsa-miR-34c-5p, hsa-miR-371a-5p, hsa-let-7e-5p, hsa-miR-125b-5p, hsa-miR-135b-5p, hsa-miR-17-5p, hsa-miR-18b-5p, hsa-miR-203a, hsa-miR-24-3р, hsa-miR-324-3р, hsa-miR-93-3р может влиять на радиорезистентность раковых клеток через разрегулированние следующих сигнальных путей: EGFR, PI3K / АКТ, NF-kB, RAS-MAPK, TGF-P и JAK-STAT, ATM, IL8 / АКТ, PTEN, WNT2B, а также отдельных белковых молекул NDFIP1, RHEB и PPP2R5A. На основе полученных данных отобраны ключевые микро-РНК (hsa-miR-128-3р, hsa-miR-20a-5p, hsa-miR-17-5р, hsa-let-7e-5p, hsa-miR-135b-5p, hsa-miR-125b-5p, hsa-miR-21-5p, hsa-miR-16-5p, hsa-miR-210, hsa-miR-23a-3p и hsa-miR-34c-5p).
Нуклеотидные последовательности исследуемых генов взяты из банка данных нуклеотидных последовательностей Американского Национального Центра Биотехнологической Информации (NCBI, www.ncbi.nlm.nih.gov).
Таким образом, предложенное изобретение обеспечивает возможность проведения анализа резистентности опухоли плоскоклеточного РГ по уровню экспрессии 11 микроРНК (hsa-miR-128-3р, hsa-miR-20a-5p, hsa-miR-17-5р. hsa-let-7e-5p, hsa-miR-135b-5p, hsa-miR-125b-5p, hsa-miR-21-5p, hsa-miR-16-5p, hsa-miR-210, hsa-miR-23a-3p и hsa-miR-34c-5p), используя любой доступный метод регистрации результата. Используя тест можно зарегистрировать интенсивность экспрессии ключевых микроРНК, что позволит сказать о наличии/отсутствии устойчивости опухоли РГ к радиотерапии. Тем самым повышается точность и достоверность оценки резистентности опухоли плоскоклеточного РГ к воздействию облучения.
Вышеизложенное описание свидетельствует о выполнении при использовании заявленного изобретения следующей совокупности условий:
- средство, воплощающее заявленное изобретение, при его осуществлении относится к медицине, а именно к медицинской генетике, и может быть использовано в онкологии;
- для заявленного генетического теста в том виде, как он охарактеризован в изложенной формуле изобретения, подтверждена возможность его осуществления с помощью описанных в заявке средств и методов;
- средство, воплощающее заявленное изобретение при осуществлении, способно обеспечить повышение точности и достоверности оценки резистентности опухоли плоскоклеточного РГ к воздействию облучения.
Claims (2)
1. Способ оценки резистентности опухоли плоскоклеточного рака горла к радиационной терапии, включающий метод полимеразной цепной реакции (ПЦР), позволяющий определить уровень экспрессии микроРНК, который описывают протоколами подготовки проведения ПЦР и полученных результатов, причем проведение ПЦР включает приготовление раствора с использованием набора, включающего пробирку со смесью лиофилизированных 22 праймеров для 11 микроРНК hsa-miR-128-3р, hsa-miR-20a-5p, hsa-miR-17-5p, hsa-let-7e-5p, hsa-miR-135b-5p, hsa-miR-125b-5p, hsa-miR-21-5p, hsa-miR-16-5p, hsa-miR-210, hsa-miR-23a-3p и hsa-miR-34c-5p, пробирку с реакционной смесью, пробирку с MgCl2, пробирку со стерильной водой, пробирку с минеральным маслом, а протокол ПЦР включает в себя программу амплификации: 1 цикл предварительной денатурации ДНК при 95°С, длительностью 300 с; 35 циклов денатурации при 95°С, длительностью 10 с; 35 циклов отжига праймеров при 60°С по 20 с. каждый; 35 циклов элонгации при 72°С длительностью 10 с, протокол полученных результатов включает в себя описание подобранных для 11 микроРНК 11 пар праймеров - прямого и обратного, при этом к указанным 11 микроРНК отнесены hsa-miR-128-3р, hsa-miR-20a-5p, hsa-miR-17-5p, hsa-let-7e-5p, hsa-miR-135b-5p, hsa-miR-125b-5p, hsa-miR-21-5p, hsa-miR-16-5p, hsa-miR-210, hsa-miR-23a-3p и hsa-miR-34c-5p, где вывод о наличии резистентности опухоли плоскоклеточного рака горла к радиационной терапии делается на основе изменений в экспрессии данных микроРНК.
2. Набор реагентов для оценки резистентности опухоли плоскоклеточного рака горла к радиационной терапии, включающий пробирку со смесью лиофилизированных 22 праймеров для 11 микроРНК hsa-miR-128-3р, hsa-miR-20a-5p, hsa-miR-17-5p, hsa-let-7e-5p, hsa-miR-135b-5p, hsa-miR-125b-5p, hsa-miR-21-5p, hsa-miR-16-5p, hsa-miR-210, hsa-miR-23a-3p и hsa-miR-34c-5p, пробирку с реакционной смесью, пробирку с MgCl2, пробирку со стерильной водой, пробирку с минеральным маслом.
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2818356C1 true RU2818356C1 (ru) | 2024-05-02 |
Family
ID=
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2688169C9 (ru) * | 2018-08-14 | 2019-07-08 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Количественная оценка hsa-miR-16-5p, hsa-miR-425-5p, hsa-miR-17-5p, hsa-miR-20a-5p, hsa-miR-101-3p, hsa-miR-30d-5p и hsa-miR-93-5p в плазме периферической крови женщин как способ неинвазивной диагностики серозных пограничных цистаденом и цистаденокарценом яичника |
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2688169C9 (ru) * | 2018-08-14 | 2019-07-08 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Количественная оценка hsa-miR-16-5p, hsa-miR-425-5p, hsa-miR-17-5p, hsa-miR-20a-5p, hsa-miR-101-3p, hsa-miR-30d-5p и hsa-miR-93-5p в плазме периферической крови женщин как способ неинвазивной диагностики серозных пограничных цистаденом и цистаденокарценом яичника |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Maia, Danielle & de Carvalho, Ana Carolina & Horst, Maria & Carvalho, Andre & Scapulatempo-Neto, Cristovam & Vettore, André. (2015). Expression of miR-296-5p as predictive marker for radiotherapy resistance in early-stage laryngeal carcinoma. Journal of translational medicine. 13. 262. 10.1186/s12967-015-0621-y. Yamazaki H., Suzuki G., Nakamura S., Yoshida K., Konishi K., Teshima T., Ogawa K. Radiotherapy for laryngeal cancer-technical aspects and alternate fractionation. J Radiat Res. 2017 Jul 1;58(4):495-508. doi: 10.1093/jrr/rrx023. PMID: 28898958; PMCID: PMC5569999. Рожнов В.А., Андреев В.Г., Гулидов И.А., Панкратов В.А., Барышев В.В., Буякова М. Е., Подлесных Н.И. Повторная лучевая терапия ограниченного рецидивного рака гортани // Сибирский онкологический журнал. 2007. N3. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20230366034A1 (en) | Compositions and methods for diagnosing lung cancers using gene expression profiles | |
| WO2010069129A1 (zh) | 非小细胞肺癌标记物及其检测方法、试剂盒和生物芯片 | |
| AU2009234444A1 (en) | Methods, agents and kits for the detection of cancer | |
| WO2011012074A1 (zh) | 肝癌检测标记物及其检测方法、试剂盒和生物芯片 | |
| EP2977467A2 (en) | Method, use of marker, and determination device for obtaining information on plural types of cancers | |
| CN112646888B (zh) | 乳腺肿瘤特异性甲基化检测的试剂盒 | |
| CN114150066B (zh) | 外泌体cda、hmgn1等在肺癌诊断中的应用 | |
| KR102096498B1 (ko) | 대장암 진단 또는 재발 예측을 위한 마이크로RNA-4732-5p 및 이의 용도 | |
| RU2012121874A (ru) | Диагностические способы для определения прогноза немелкоклеточного рака легкого | |
| EP4144859A1 (en) | Tumor detection reagent and kit | |
| CN111424085B (zh) | tRNA来源片段在制备乳腺癌诊断试剂中的应用 | |
| RU2818356C1 (ru) | Способ оценки резистентности опухоли плоскоклеточного рака горла к радиационной терапии и набор тестов для его реализации | |
| CN111304305A (zh) | 一种用于检测egfr基因甲基化的试剂盒及方法 | |
| US20210214799A1 (en) | Method and kit for the classification of thyroid nodules | |
| CN104694534B (zh) | 非小细胞肺癌标记物，其检测方法及应用 | |
| KR102096499B1 (ko) | 대장암 진단 또는 재발 예측을 위한 마이크로rna-3960 및 이의 용도 | |
| RU2818352C1 (ru) | Способ оценки резистентности злокачественных новообразований к радиационной терапии и набор тестов для его реализации | |
| WO2023106415A1 (ja) | リンパ腫に罹患したイヌの化学療法後の予後予測方法 | |
| WO2022188776A1 (zh) | 可用于胃癌her2伴随诊断的基因甲基化标记物或其组合和应用 | |
| CN111455057B (zh) | 用于肺癌诊断的试剂盒、装置及方法 | |
| US20220042107A1 (en) | Systems and methods of scoring risk and residual disease from passenger mutations | |
| US20130203623A1 (en) | Method and kit for classifying a patient | |
| ZG | PB1697 ANALYSIS OF MICRO-RNAS EXPRESSION PROFILE IN EXOSOMES DERIVED FROM ACUTE MYELOID LEUKEMIA BY KNOCKDOWN P62 AND THE EFFECT ON ANGIOGENESIS | |
| Michel et al. | Non-invasive multi-cancer diagnosis using DNA hypomethylation of LINE-1 retrotransposons | |
| KR20230055393A (ko) | 자궁경부암의 전이 진단을 위한 정보 제공 방법 |