RU2809798C1 - Способ прогнозирования риска развития артериальной гипертензии у женщин с использованием молекулярно-генетических данных - Google Patents
Способ прогнозирования риска развития артериальной гипертензии у женщин с использованием молекулярно-генетических данных Download PDFInfo
- Publication number
- RU2809798C1 RU2809798C1 RU2023118586A RU2023118586A RU2809798C1 RU 2809798 C1 RU2809798 C1 RU 2809798C1 RU 2023118586 A RU2023118586 A RU 2023118586A RU 2023118586 A RU2023118586 A RU 2023118586A RU 2809798 C1 RU2809798 C1 RU 2809798C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- women
- risk
- arterial hypertension
- cers5
- rgl3
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 30
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 title claims description 12
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 title 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 title 1
- 208000037849 arterial hypertension Diseases 0.000 claims abstract description 47
- 101150065637 Hfe gene Proteins 0.000 claims abstract description 26
- 102100035417 Ceramide synthase 5 Human genes 0.000 claims abstract description 18
- 101150004299 Cers5 gene Proteins 0.000 claims abstract description 18
- 102000048988 Hemochromatosis Human genes 0.000 claims abstract description 18
- 101000709129 Homo sapiens Ral guanine nucleotide dissociation stimulator-like 3 Proteins 0.000 claims abstract description 18
- 108010029625 T-Box Domain Protein 2 Proteins 0.000 claims abstract description 18
- 108700022944 Hemochromatosis Proteins 0.000 claims abstract description 17
- 102100032784 Ral guanine nucleotide dissociation stimulator-like 3 Human genes 0.000 claims abstract description 17
- 102100038721 T-box transcription factor TBX2 Human genes 0.000 claims abstract description 17
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 11
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 11
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 10
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 claims description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 abstract description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 20
- 238000011161 development Methods 0.000 description 11
- 101100113045 Homo sapiens CERS5 gene Proteins 0.000 description 9
- 101150073695 RGL3 gene Proteins 0.000 description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 9
- 101150048645 tbx2 gene Proteins 0.000 description 9
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 8
- 208000007530 Essential hypertension Diseases 0.000 description 7
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 7
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 5
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010000684 Matrix Metalloproteinases Proteins 0.000 description 4
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 4
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 3
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 3
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 3
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 3
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 230000000391 smoking effect Effects 0.000 description 3
- VKUYLANQOAKALN-UHFFFAOYSA-N 2-[benzyl-(4-methoxyphenyl)sulfonylamino]-n-hydroxy-4-methylpentanamide Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1S(=O)(=O)N(C(CC(C)C)C(=O)NO)CC1=CC=CC=C1 VKUYLANQOAKALN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000035150 Hypercholesterolemia Diseases 0.000 description 2
- 108010028554 LDL Cholesterol Proteins 0.000 description 2
- 102000000380 Matrix Metalloproteinase 1 Human genes 0.000 description 2
- 108010016113 Matrix Metalloproteinase 1 Proteins 0.000 description 2
- 101710118230 Neutrophil collagenase Proteins 0.000 description 2
- 102100030411 Neutrophil collagenase Human genes 0.000 description 2
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102100030416 Stromelysin-1 Human genes 0.000 description 2
- 101710108790 Stromelysin-1 Proteins 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 2
- 230000035487 diastolic blood pressure Effects 0.000 description 2
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 208000006575 hypertriglyceridemia Diseases 0.000 description 2
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 2
- 238000007477 logistic regression Methods 0.000 description 2
- 238000011328 necessary treatment Methods 0.000 description 2
- 238000001558 permutation test Methods 0.000 description 2
- 230000037081 physical activity Effects 0.000 description 2
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 230000035488 systolic blood pressure Effects 0.000 description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150090724 3 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000004611 Abdominal Obesity Diseases 0.000 description 1
- 101710124361 Arylamine N-acetyltransferase 2 Proteins 0.000 description 1
- 206010065941 Central obesity Diseases 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000028698 Cognitive impairment Diseases 0.000 description 1
- 108050002014 Cytochrome P450 1B1 Proteins 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 208000032928 Dyslipidaemia Diseases 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 206010019663 Hepatic failure Diseases 0.000 description 1
- 201000001431 Hyperuricemia Diseases 0.000 description 1
- 208000017170 Lipid metabolism disease Diseases 0.000 description 1
- 102000002274 Matrix Metalloproteinases Human genes 0.000 description 1
- 208000001145 Metabolic Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010033307 Overweight Diseases 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000004239 Secondary hypertension Diseases 0.000 description 1
- 101000953909 Streptomyces viridifaciens Isobutylamine N-hydroxylase Proteins 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 201000000690 abdominal obesity-metabolic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 1
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 230000000923 atherogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002555 auscultation Methods 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 238000009530 blood pressure measurement Methods 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- YTRQFSDWAXHJCC-UHFFFAOYSA-N chloroform;phenol Chemical compound ClC(Cl)Cl.OC1=CC=CC=C1 YTRQFSDWAXHJCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000010877 cognitive disease Diseases 0.000 description 1
- 230000008094 contradictory effect Effects 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 235000006694 eating habits Nutrition 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 230000001973 epigenetic effect Effects 0.000 description 1
- 235000021149 fatty food Nutrition 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 235000012907 honey Nutrition 0.000 description 1
- 230000037456 inflammatory mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 208000007903 liver failure Diseases 0.000 description 1
- 231100000835 liver failure Toxicity 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 1
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008816 organ damage Effects 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 238000002205 phenol-chloroform extraction Methods 0.000 description 1
- 201000011461 pre-eclampsia Diseases 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 102200059200 rs1056836 Human genes 0.000 description 1
- 102200094900 rs1799930 Human genes 0.000 description 1
- 235000015598 salt intake Nutrition 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, биотехнологии и медицинской генетике, и может быть использовано для прогнозирования риска развития артериальной гипертензии у женщин. Из периферической венозной крови выделяют ДНК. Проводят анализ полиморфных локусов CERS5, HFE, TBX2 и RGL3. При выявлении комбинации генотипов rs7302981 AA CERS5 × rs1799945 CC HFE × rs8068318 CC TBX2 × rs167479 TG RGL3 прогнозируют высокий риск развития артериальной гипертензии у женщин. Способ обеспечивает получение новых критериев оценки риска развития артериальной гипертензии у женщин русской национальности, являющихся уроженками Центрально-Черноземного региона РФ и не имеющих родства между собой, на основе данных о полиморфных локусах CERS5, HFE, TBX2 и RGL3. 1 табл., 4 пр.
Description
Изобретение относится к области медицины, а именно кардиологии, к биотехнологии, медицинской генетике и может быть использовано для прогнозирования риска развития артериальной гипертензии у женщин.
Артериальная гипертензия (АГ) - хроническое заболевание, при котором артериальное давление повышено и представляет собой основной фактор риска развития сердечно-сосудистых заболеваний [Wermelt JA, Schunkert H. Management der arteriellen Hypertonie [Management of arterial hypertension]. Herz. 2017;42(5):515-526. doi:10.1007/s00059-017-4574-1].
АГ определяется как артериальное давление, равное или превышающее 140/90 мм.рт.ст. и относится к наиболее распространенным заболеваниям, являющимся причиной около 7,5 миллионов смертей в год (около 13% всех смертей) во всем мире [Артериальная гипертензия у взрослых. Клинические рекомендации 2020 // Российский кардиологический журнал. - 2020. - Т. 25(3). - C. 149-218.]. По данным ВОЗ, гипертония является основным фактором риска развития различных заболеваний, включая сердечно-сосудистые заболевания (ССЗ), почечную недостаточность, когнитивные нарушения и т. д. По оценкам, около 22% (около 1 миллиарда человек) взрослого населения старше 25 лет во всем мире страдают от артериальной гипертонии [Bryan, W. 2018 ESC/ESH Guidelines for the management of arterial hypertension/ W. Bryan [et al.] // European Heart Journal. - 2018. - Vol. 39. - P. 3021-3104.].
Этиология и патогенез артериальной гипертензии активно изучаются как российскими, так и зарубежными исследователями. Известными факторами риска развития АГ являются возраст, половая принадлежность, высокий уровень потребления соли, дислипидемия, абдоминальное ожирение, вредные привычки, частые стрессовые ситуации, низкая физическая активность, а также генетические факторы [Lee HA, Park H. Diet-Related Risk Factors for Incident Hypertension During an 11-Year Follow-Up: The Korean Genome Epidemiology Study. Nutrients. 2018;10(8):1077. Published 2018 Aug 13. doi:10.3390/nu10081077].
Изучению молекулярно-генетических основ АГ на основе анализа ассоциаций однонуклеотидного полиморфизма отдельных генов-кандидатов (или групп генов-кандидатов) с развитием заболевания посвящено значительное количество работ как зарубежных, так и отечественных ученых. При этом следует отметить, что полученные данные неоднозначны, нередко противоречивы и имеют низкую воспроизводимость. Это определяет необходимость продолжения исследований молекулярно-генетических основ артериальной гипертензии, с использованием новых подходов активно развивающихся в настоящее время системной генетики и сетевой медицины.
Нами были специально отобраны полиморфные локусы генов-кандидатов, связанные с развитием артериальной гипертензии по данным полно-геномных исследований (Churnosov M, Abramova M, Reshetnikov E, et al. Polymorphisms of hypertension susceptibility genes as a risk factors of preeclampsia in the Caucasian population of central Russia. Placenta. 2022;129:51-61. doi:10.1016/j.placenta.2022.09.010). В основу отбора полиморфных локусов для данной работы были положены следующие критерии: статистически значимые при уровне p≤5×10-8 связи с АГ (или; встречаемость редкого аллеля 0,05 и более; наличие функциональных эффектов (связь с эпигенетическими характеристиками, транскрипцией генов согласно базы данных HaploReg, версия программы 4.1).
В Российской Федерации исследования вовлеченности данных о полиморфизме генов CERS5, HFE, TBX2 и RGL3 в формирование предрасположенности к артериальной гипертензии у женщин единичны и фрагментарны, а данные о роли комбинации генотипов генов rs7302981 гена CERS5, rs1799945 гена HFE, rs8068318 гена TBX2, rs167479 гена RGL3 в развитие артериальной гипертензии у женщин отсутствуют.
Для оценки сложившейся патентной ситуации был выполнен поиск по охранным документам за период с 1990 по 2023 гг. Анализ документов производился по направлению: способ прогнозирования риска развития артериальной гипертензии у женщин в зависимости от данных о полиморфных локусах CERS5, HFE, TBX2 и RGL3. Источник информации: сайт Федерального института промышленной собственности http://fips.ru.
В изученной научно-медицинской и доступной патентной литературе авторами не было обнаружено способа прогнозирования риска развития артериальной гипертензии у женщин на основе данных о SNP х SNP взаимодействий и на основе данных о полиморфных локусах CERS5, HFE, TBX2 и RGL3.
Из области техники известен патент RU №2456608 (опубл. 20.07.2012) Способ прогнозирования риска возникновения гипертонической болезни у мужчин. Изобретение относится к медицине, конкретно к диагностике в кардиологии, и касается способа прогнозирования риска возникновения гипертонической болезни у мужчин. Выделяют геномную ДНК из периферической венозной крови пациентов и выявляют генотипы полиморфизмов rs2266782 гена флавиновой монооксигеназы 3 типа, rs1056836 гена цитохрома Р-450 1В1 и rs1799930 гена N-ацетилтрансферазы 2 типа. Оценивают характер употребления алкоголя, факт курения и наличие контакта с вредными химическими веществами. Затем каждому из указанных факторов присваивают соответствующие цифровые значения, после чего по уравнению логистической регрессии с рассчитанными для каждого фактора коэффициентами регрессии рассчитывают натуральный логарифм отношения шансов возникновения гипертонической болезни у пациента. Затем рассчитывают вероятность отнесения пациента к группе с низким - от 1 до 10%, средним - от 11 до 19% или высоким - более 20% риском возникновения гипертонической болезни. Способ обеспечивает существенное повышение точности прогнозирования риска возникновения гипертонической болезни у мужчин посредством совместной оценки комплекса генетических и средовых факторов риска заболевания и использования метода логистического регрессионного анализа. Недостаток метода заключается в том, что он рассматривает риск развития гипертонической болезни только у мужчин, а согласно литературным данным гипертоническая болезнь развивается чаще у женщин [Эпидемиология артериальной гипертонии в России. Результаты федерального мониторинга 2003-2010 гг. /Р.Г. Оганов [и др.] //Кардиоваскулярная терапия и профилактика. - 2011. - №1. - С. 9-13], Кроме того, не рассматриваются гены-кандидаты, связанные с воспалительным механизмом развития гипертонической болезни и ее течения и не определяются риски развития ассоциированных клинических состояний, т.е. III стадии. Недостаток указанного способа также в том, что не рассматриваются сочетания полиморфных маркеров генов-кандидатов с риском развития артериальной гипертензии у женщин.
Из области техники известен патент RU №2505814 (опубл. 27.01.2014) Способ прогнозирования риска развития артериальной гипертензии у тубаларов- коренных жителей республики Алтай. Изобретение относится к медицине, в частности к способу прогнозирования риска развития артериальной гипертензии (АГ) у тубаларов коренных жителей Республики Алтай. Способ включает учет возраста, образовательного статуса, наличия или отсутствия курения, ожирения (ОЖ), гиперхолестеринемии (ГХС), злоупотребление солью, массы тела по индексу Кетле: нормальная (НМТ), избыточная (ИМТ), окружности талии (ОТ), отношения окружности талии к окружности бедер (ИТБ), уровень холестерина липопротеидов низкой плотности (ХС-ЛПНП) и индекс атерогенности (ИА), наличия гипертриглицеридемии (ГТГ), гиперурикемии, социальные факторы: семейное положение, доход и генетические маркеры: группы крови систем резус и MN. Затем для каждого фактора устанавливают прогностический коэффициент (ПК) в баллах. При значении суммы ПК (+6) баллов и выше прогнозируют предрасположенность к развитию АГ у тубаларов - коренных жителей Республики Алтай. Использование заявленного способа позволяет выявить риск развития АГ в более ранние сроки - до поражения органов-мишеней и формирования стойкой гипертонической болезни. Однако данный способ не является достаточно информативным, так как не включает генетические маркеры и применим только для коренных жителей Республики Алтай (тубаларов).
Известен патент RU № 2624480 (опубл. 04.07.2017) на изобретение Способ прогнозирования риска развития эссенциальной гипертензии на основе комбинаций генов матриксных металлопротеиназ. Изобретение относится к области медицинской диагностики. Предложен способ прогнозирования риска развития эссенциальной гипертензии у индивидуумов русской национальности, уроженцев Центрального Черноземья, включающий выделение ДНК из периферической венозной крови и анализ полиморфизмов генов. При выявлении сочетания генетических вариантов матриксных металлопротеиназ: генотипа АА rs1320632 ММР-8 и аллеля С rs11225395 ММР-8 прогнозируют высокий риск развития эссенциальной гипертензии. Изобретение позволяет на доклиническом этапе формировать среди индивидуумов группы риска и своевременно реализовывать в этих группах необходимые лечебно-профилактические мероприятия по предупреждению развития заболевания.
Известен патент RU №2664428 (опубл. 17.08.2018) Способ прогнозирования риска развития эссенциальной гипертензии у женщин на основе генетических факторов. Изобретение относится к области медицинской диагностики и предназначено для прогнозирования риска развития эссенциальной гипертензии у женщин. Проводят анализ полиморфизмов генов матриксных металлопротеиназ ММР-1 и ММР-3 и прогнозируют высокий риск развития эссенциальной гипертензии у женщин при выявлении сочетания генотипа 1G/1G по локусу rs1799750 ММР-1 и генотипа 6A/6А по локусу rs3025058 ММР-3. Изобретение обеспечивает получение новых критериев оценки риска развития эссенциальной гипертензии у женщин русской национальности, уроженок Центрального Черноземья. Недостатком является ограниченность его применения, т.к. используется только анализ полиморфизмов генов матриксных металлопротеиназ.
Задачей настоящего исследования является расширение арсенала методов диагностики, а именно создание способа прогнозирования риска развития артериальной гипертензии у женщин на основе данных о полиморфных локусах CERS5, HFE, TBX2 и RGL3.
Технический результат использования изобретения - получение критериев оценки риска развития артериальной гипертензии у женщин русской национальности, являющихся уроженками Центрально-Черноземного региона РФ и не имеющих родства между собой, на основе данных о полиморфных локусах CERS5, HFE, TBX2 и RGL3, включающий:
- выделение ДНК из периферической венозной крови;
- анализ полиморфных локусов rs7302981 гена CERS5, rs1799945 гена HFE, rs8068318 гена TBX2, rs167479 гена RGL3;
- прогнозирование высокого риска развития артериальной гипертензии у женщин при выявлении комбинации генотипов rs7302981 AA CERS5 × rs1799945 CC HFE × rs8068318 CC TBX2 × rs167479 TG RGL3.
Новизна и изобретательский уровень заключаются в том, что из уровня техники не известна возможность прогнозирования развития артериальной гипертензии у женщин на основе данных о комбинации генотипов rs7302981 AA CERS5 × rs1799945 CC HFE × rs8068318 CC TBX2 × rs167479 TG RGL3.
Способ осуществляют следующим образом:
Выделение геномной ДНК из периферической крови осуществляют методом фенольно-хлороформной экстракции [Miller, S.A. A simple salting out procedure for extracting DNA from human nucleated cells / S.A. Miller, D.D. Dykes, H.F. Polesky // Nucleic. Acids. Res. - 1988. - Vol. 16, № 3. - P. 1215] в два этапа. На первом этапе к 4 мл крови с ЭДТА добавляют 25 мл лизирующего буфера, содержащего 320мМ сахарозы, 1% тритон Х-100, 5мМ MgCl2, 10мМ трис-HCl (pH=7,6). Полученную смесь перемешивают и центрифугируют при 4°С, 4000 об./мин. в течение 20 минут. После центрифугирования надосадочную жидкость сливают, к осадку добавляют 4 мл раствора, содержащего 25 мМ ЭДТА (рН=8,0) и 75 мМ NaCl, ресуспензируют. Затем прибавляют 0,4 мл 10% SDS, 35 мкл протеиназы К (10мг/мл) и инкубируют образец при 37°С в течение 16 часов.
На втором этапе из полученного лизата последовательно проводят экстракцию ДНК равными объемами фенола, фенол-хлороформа (1:1) и хлороформа с центрифугированием при 4000 об./мин. в течение 10 минут. После каждого центрифугирования производят отбор водной фазы. ДНК осаждают из раствора двумя объемами охлажденного 96% этанола. После лиофилизации полученную ДНК растворяют в бидистиллированной, деионизованной воде и хранят при -20°С.
Анализ полиморфных локусов rs7302981 гена CERS5, rs1799945 гена HFE, rs8068318 гена TBX2, rs167479 гена RGL3 осуществлялся методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) на термоциклере CFX-96 Real-Time System (Bio-Rad) c использованием стандартных олигонуклеотидных праймеров и зондов.
Генотипирование исследуемых образцов осуществлялось с использованием программного обеспечения «CFX-Manager™» методом дискриминации аллелей по величинам относительных единиц флуоресценции (ОЕФ).
Метод MDR в его модификации MB-MDR [Mbmdr: an R package for exploring gene-gene interactions associated with binary or quantitative traits / M.L. Calle, V. Urrea, N. Malats, K. Van Steen // Bioinformatics. - 2010. - Vol. 26, № 17. - P. 2198-2199] применялся для изучения интерлокусных взаимодействий, ассоциированных с артериальной гипертензии ом. Рассматривались двух-, трех-, четырех-, пяти- и шестилокусные модели. Расчеты проводили с ковариатами в программе MB-MDR (версия 2.6) в программной среде R. Наиболее значимые модели интерлокусных взаимодействий, связанных с артериальной гипертензии ом, отбирались на основе поправки Бонферрони (при этом рассматривалось число возможных комбинаций изучаемых SNPs генов CERS5, HFE, TBX2 и RGL3 при 2-, 3-, 4- , 5- и 6-локусных моделях). В дальнейший анализ (валидация моделей с помощью пермутационного теста) включались модели межлокусных взаимодействий, соответствующие следующим критериям: 2-х локусные модели - p<1,78*10-3 (<0,05/28), 3-х локусные модели - p<8,92*10-4 (<0,05/56), 4-х локусные модели - p<7,14*10-4 (<0,05/70), 5-ти локусные модели - p<8,92*10-4 (<0,05/56), 6-ти локусные модели - p<1,78*10-3 (<0,05/28). Для отобранных в соответствии с вышеуказанными критериями наиболее значимых моделей SNP×SNP взаимодействий, ассоциированных с артериальной гипертензии у женщин, выполнялся пермутационный тест (проводилось 1000 пермутаций). Статистически значимым считали pperm≤0,001. Отдельные комбинации генотипов, связанные с риском развития артериальной гипертензии у женщин определялись методом MB-MDR при p<0,05.
Возможность использования предложенного способа для оценки прогнозирования риска развития артериальной гипертензии у женщин подтверждает анализ результатов наблюдений 584 пациенток (таблица 1).
Изучаемые группы включали индивидуумов русской национальности, являющихся уроженками Центрального Черноземья РФ и не имеющих родства между собой. Выборки формировались в соответствии с критериями включения и исключения. Критерии включения в группу больных ГБ: 1. Наличие артериальной гипертензии; 2. Русская национальность; 3. Уроженцы Центрально-Черноземного региона РФ. Критерии исключения: 1. Наличие симптоматических или вторичных гипертензий, печеночная недостаточность, почечная недостаточность; 2. Родство с лицами, включенными в исследование; 3. Отказ от участия в исследовании. Критерии включения в контрольную группу: 1. Русская национальность; 2. Уроженцы Центрально-Черноземного региона РФ; 3. Уровень систолического артериального давления <140 мм.рт.ст. и диастолического АД <90 мм.рт.ст. Критерии исключения: 1. Наличие у индивидуума метаболического синдрома, сердечно-сосудистых, аутоиммунных, онкологических заболеваний; 2. Родство с лицами, включенными в исследование; 3. Отказ от участия в исследовании.
Диагноз артериальной гипертензии устанавливался в соответствии с рекомендациями Всероссийского научного общества кардиологов, на основании результатов клинического и лабораторно-инструментального обследования [Диагностика и лечение артериальной гипертензии [Текст]: рос. рекомендации (четвертый пересмотр) / Рос. мед. о-во по артериальной гипертонии, Всерос. науч. о-во кардиологов; Е.И. Чазова, Л.Г. Ратова, С.А. Бойцов [и др.]. - Москва, 2010. - 34 с.]. Общеклиническое, лабораторное, клинико-инструментальное обследование пациентов проводилось в неврологическом и кардиологическом отделениях областной клинической больницы Святителя Иоасафа г. Белгорода. В контрольную группу включались лица, проходившие профилактический осмотр в поликлинике областной клинической больницы Святителя Иоасафа г. Белгорода. Все пациентки включались в исследование после подписания информированного согласия на использование полученных данных для научно-исследовательских целей. Протокол исследования одобрен этическим комитетом медицинского института Белгородского государственного национального исследовательского университета.
В группу больных включались индивидуумы с уровнем систолического артериального давления ≥140 мм.рт.ст. и/или диастолического АД ≥90 мм.рт.ст. Измерение показателей АД проводилось аускультативным методом по Короткову, результатом считали среднее значение трех последовательных измерений. При нахождении на стационарном лечении измерение уровня артериального давления осуществлялось ежедневно.
Для всех пациентов, включенных в исследование, заполнялась специальная анкета-опросник, разработанная профессором Полониковым А.В. (Курский государственный медицинский университет). Анкета включала анамнестические, лабораторные и инструментальные данные, сведения об образе жизни пациента, наличии у него профессиональных вредностей. Кроме того, в анкетах регистрировались данные о наличии у пациентов таких средовых факторов риска артериальной гипертензии, как ожирение, высокий уровень употребления алкоголя, курение, особенности питания (в том числе, употребление жирной пищи, «солевой аппетит», регулярность употребления овощей и фруктов), подверженность стрессам и уровень физических нагрузок.
Все исследования проводились под контролем этического комитета медицинского факультета Белгородского государственного университета с информированного согласия пациенток на использование материалов лечебно-диагностических мероприятий, связанных с заболеванием, для научно-исследовательских целей и протоколировались по стандартам этического комитета Российской Федерации.
При изучении SNP х SNP взаимодействий наиболее значимой четырехлокусной моделью, вовлеченную в формирование артериальной гипертензии у женщин, является rs7302981 гена CERS5, rs1799945 гена HFE, rs8068318 гена TBX2, rs167479 гена RGL3 (pperm≤0,001). С развитием заболевания наиболее значимая ассоциация выявлена для комбинации генотипов rs7302981 AA CERS5 × rs1799945 CC HFE × rs8068318 CC TBX2 × rs167479 TG RGL3 (beta =1,13, p=0,025), имеющей рисковую направленность.
В качестве примеров конкретного применения разработанного способа проведено генетическое обследование женщин русской национальности, являющихся уроженками Центрального Черноземья РФ и не имеющих родства между собой: проведено генетическое исследование по локусам rs7302981 гена CERS5, rs1799945 гена HFE, rs8068318 гена TBX2, rs167479 гена RGL3.
У пациентки С. была взята венозная кровь, проведено генотипирование ДНК-маркеров, при анализе вовлеченности полиморфных локусов rs7302981 гена CERS5, rs1799945 гена HFE, rs8068318 гена TBX2, rs167479 гена RGL3, была выявлена комбинации генотипов rs7302981 AA CERS5 × rs1799945 CC HFE × rs8068318 CC TBX2 × rs167479 TG RGL3, что позволило отнести пациентку в группу больных с повышенным риском развития артериальной гипертензии. Дальнейшее наблюдение подтвердило диагноз артериальной гипертензии у пациентки.
У пациентки Ф. была взята венозная кровь, проведено генотипирование ДНК-маркеров, при анализе вовлеченности полиморфных локусов rs7302981 гена CERS5, rs1799945 гена HFE, rs8068318 гена TBX2, rs167479 гена RGL3, была выявлена комбинации генотипов rs7302981 GA CERS5 × rs1799945 CG HFE × rs8068318 TT TBX2 × rs167479 TG RGL3, что позволило отнести пациентку в группу пациенток с низким риском развития артериальной гипертензии. Дальнейшее наблюдение не подтвердило диагноз у пациентки.
У пациентки И. была взята венозная кровь, проведено генотипирование ДНК-маркеров, при анализе вовлеченности полиморфных локусов rs7302981 гена CERS5, rs1799945 гена HFE, rs8068318 гена TBX2, rs167479 гена RGL3 была выявлена комбинации генотипов rs7302981 AA CERS5 × rs1799945 GG HFE × rs8068318 CC TBX2 × rs167479 TT RGL3 , что позволило отнести пациентку в группу больных с низким риском развития артериальной гипертензии. Дальнейшее наблюдение не подтвердило диагноз артериальной гипертензии у пациентки.
У пациентки Я. была взята венозная кровь, проведено генотипирование ДНК-маркеров, при анализе вовлеченности полиморфных локусов rs7302981 гена CERS5, rs1799945 гена HFE, rs8068318 гена TBX2, rs167479 гена RGL3 была выявлена комбинации генотипов rs7302981 GG CERS5 × rs1799945 CC HFE × rs8068318 TT TBX2 × rs167479 TG RGL3, что позволило отнести пациентку в группу индивидуумов с низким риском развития артериальной гипертензии. При дальнейшем наблюдении диагноз артериальной гипертензии у пациентки Я. не подтвердился.
Применение данного способа позволит на доклиническом этапе формировать среди женщин группы риска и своевременно реализовывать в этих группах необходимые лечебно-профилактические мероприятия по предупреждению развития артериальной гипертензии.
Claims (1)
- Способ прогнозирования риска развития артериальной гипертензии у женщин с использованием молекулярно-генетических данных, включающий выделение ДНК из периферической венозной крови, анализ полиморфных локусов CERS5, HFE, TBX2 и RGL3, прогнозирование высокого риска развития артериальной гипертензии у женщин при выявлении комбинации генотипов rs7302981 AA CERS5 × rs1799945 CC HFE × rs8068318 CC TBX2 × rs167479 TG RGL3.
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2809798C1 true RU2809798C1 (ru) | 2023-12-18 |
Family
ID=
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2458144C1 (ru) * | 2011-03-15 | 2012-08-10 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Курский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации" | Способ прогнозирования риска развития эссенциальной гипертензии у женщин |
| CN105002286B (zh) * | 2015-07-30 | 2018-04-10 | 中国医学科学院阜外心血管病医院 | 与高血压和/或心血管疾病发病风险相关的多个单核苷酸多态性位点及相关应用 |
| RU2664428C1 (ru) * | 2017-12-12 | 2018-08-17 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") | Способ прогнозирования риска развития эссенциальной гипертензии у женщин на основе генетических факторов |
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2458144C1 (ru) * | 2011-03-15 | 2012-08-10 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Курский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации" | Способ прогнозирования риска развития эссенциальной гипертензии у женщин |
| CN105002286B (zh) * | 2015-07-30 | 2018-04-10 | 中国医学科学院阜外心血管病医院 | 与高血压和/或心血管疾病发病风险相关的多个单核苷酸多态性位点及相关应用 |
| RU2664428C1 (ru) * | 2017-12-12 | 2018-08-17 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") | Способ прогнозирования риска развития эссенциальной гипертензии у женщин на основе генетических факторов |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| АБРАМОВА М.Ю. Эпигенетические эффекты полиморфизма генов-кандидатов, ассоциированных с развитием артериальной гипертензии, по данным полногеномных исследований. Медицинская генетика. 2020; 19 (5): 62-63. CHURNOSOV M. et al. Polymorphisms of hypertension susceptibility genes as a risk factors of preeclampsia in the Caucasian population of central Russia. Placenta. 2022 Nov; 129: 51-61. Epub 2022 Sep 20. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Lagou et al. | Sex-dimorphic genetic effects and novel loci for fasting glucose and insulin variability | |
| AU2021203359B2 (en) | Analysis of cell-free DNA in urine and other samples | |
| Georges et al. | Genetic investigation of fibromuscular dysplasia identifies risk loci and shared genetics with common cardiovascular diseases | |
| Elmore et al. | Identification of a genetic variant associated with abdominal aortic aneurysms on chromosome 3p12. 3 by genome wide association | |
| CN107254531B (zh) | 早发性结直肠癌辅助诊断的遗传生物标志物及其应用 | |
| CN110283908A (zh) | 一种结直肠癌辅助诊断snp标志物及其应用 | |
| AU2016351311B9 (en) | SCAP gene mutant and the application thereof | |
| Goharrizi et al. | Non-invasive STEMI-related biomarkers based on meta-analysis and gene prioritization | |
| RU2809798C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития артериальной гипертензии у женщин с использованием молекулярно-генетических данных | |
| RU2642939C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития преэклампсии | |
| RU2809911C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития гипертонической болезни на основе данных о межгенных взаимодействиях | |
| RU2809912C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития гипертонической болезни у мужчин по результатам генетического тестирования | |
| RU2661604C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития эссенциальной гипертензии | |
| US20200232031A1 (en) | Method of diagnosing and treating acute rejection in kidney transplant patients | |
| RU2798666C1 (ru) | Способ прогнозирования низкого риска развития рака молочной железы у женщин с высокопенетратными мутациями в генах BRCA1 и CHEK2 | |
| CN112266955A (zh) | 一种强直性脊柱炎诊断标志物及应用 | |
| RU2828525C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития рака молочной железы у женщин без ожирения по результатам генетического тестирования | |
| RU2795720C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития люминального подтипа рака молочной железы | |
| RU2795897C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития рака молочной железы у женщин с использованием молекулярно-генетических данных | |
| RU2796897C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития остеоартроза коленного сустава у женщин на основе молекулярно-генетического тестирования | |
| RU2795726C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития рака молочной железы у женщин без ожирения | |
| RU2565407C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития iii стадии гипертонической болезни | |
| RU2786314C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития язвенной болезни у женщин по генетическим данным | |
| RU2819776C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития Н. pylori-позитивной язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки на основе молекулярно-генетического тестирования | |
| RU2828523C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития люминального подтипа рака молочной железы у женщин |