RU2780525C1 - Способ прогнозирования риска развития H. pylori-позитивной язвенной болезни желудка - Google Patents
Способ прогнозирования риска развития H. pylori-позитивной язвенной болезни желудка Download PDFInfo
- Publication number
- RU2780525C1 RU2780525C1 RU2022102898A RU2022102898A RU2780525C1 RU 2780525 C1 RU2780525 C1 RU 2780525C1 RU 2022102898 A RU2022102898 A RU 2022102898A RU 2022102898 A RU2022102898 A RU 2022102898A RU 2780525 C1 RU2780525 C1 RU 2780525C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- pylori
- developing
- risk
- positive
- mmp
- Prior art date
Links
- 208000007107 Stomach Ulcer Diseases 0.000 title claims abstract description 22
- 201000005917 gastric ulcer Diseases 0.000 title claims abstract description 21
- 102100006844 MMP9 Human genes 0.000 claims abstract description 23
- 101700067851 MMP9 Proteins 0.000 claims abstract description 23
- 210000004369 Blood Anatomy 0.000 claims abstract description 9
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 9
- 230000002093 peripheral Effects 0.000 claims abstract description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 13
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 7
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 claims description 2
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 claims 1
- 229920003013 deoxyribonucleic acid Polymers 0.000 abstract description 15
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 238000007374 clinical diagnostic method Methods 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 208000008469 Peptic Ulcer Diseases 0.000 description 21
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 13
- 208000000718 Duodenal Ulcer Diseases 0.000 description 12
- 210000001198 Duodenum Anatomy 0.000 description 12
- 230000002068 genetic Effects 0.000 description 12
- 210000002784 Stomach Anatomy 0.000 description 10
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 10
- 210000004051 Gastric Juice Anatomy 0.000 description 7
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N HCl Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 6
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 6
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 6
- 210000004400 Mucous Membrane Anatomy 0.000 description 5
- 201000009910 diseases by infectious agent Diseases 0.000 description 5
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drugs Drugs 0.000 description 5
- 102000002274 Matrix Metalloproteinases Human genes 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 4
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 4
- 230000002496 gastric Effects 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 4
- 208000007882 Gastritis Diseases 0.000 description 3
- 206010071602 Genetic polymorphism Diseases 0.000 description 3
- 241000590002 Helicobacter pylori Species 0.000 description 3
- 229940037467 Helicobacter pylori Drugs 0.000 description 3
- 108009000330 Matrix Metalloproteinases Proteins 0.000 description 3
- 210000004379 Membranes Anatomy 0.000 description 3
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 3
- 201000000432 peptic ulcer disease Diseases 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 210000001156 Gastric Mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 241000589989 Helicobacter Species 0.000 description 2
- 206010019375 Helicobacter infection Diseases 0.000 description 2
- 102100018761 IL37 Human genes 0.000 description 2
- 101700076568 IL37 Proteins 0.000 description 2
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001684 chronic Effects 0.000 description 2
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N edta Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001839 endoscopy Methods 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 2
- -1 hydrogen ions Chemical class 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000003449 preventive Effects 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WDSCBUNMANHPFH-UHFFFAOYSA-N 6-acetamidohexanoic acid Chemical compound CC(=O)NCCCCCC(O)=O WDSCBUNMANHPFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003815 Abdominal Wall Anatomy 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 210000002469 Basement Membrane Anatomy 0.000 description 1
- 108010037464 Cyclooxygenase 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000010906 Cyclooxygenase 1 Human genes 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N D-sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 206010060865 Duodenogastric reflux Diseases 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 229940088598 Enzyme Drugs 0.000 description 1
- 210000002744 Extracellular Matrix Anatomy 0.000 description 1
- 208000008032 Gastrointestinal Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 102100010118 HTRA1 Human genes 0.000 description 1
- 101700061217 HTRA1 Proteins 0.000 description 1
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010054272 Helicobacter gastritis Diseases 0.000 description 1
- 229940088597 Hormone Drugs 0.000 description 1
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- 210000000936 Intestines Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 Lymphocytes Anatomy 0.000 description 1
- 102200094055 MMP9 Q279R Human genes 0.000 description 1
- 102200094057 MMP9 R574P Human genes 0.000 description 1
- 102200094051 MMP9 R668Q Human genes 0.000 description 1
- 210000002540 Macrophages Anatomy 0.000 description 1
- 108010000684 Matrix Metalloproteinases Proteins 0.000 description 1
- 206010054949 Metaplasia Diseases 0.000 description 1
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L MgCl2 Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000736262 Microbiota Species 0.000 description 1
- 210000003097 Mucus Anatomy 0.000 description 1
- 210000003205 Muscles Anatomy 0.000 description 1
- 102000003896 Myeloperoxidases Human genes 0.000 description 1
- 108090000235 Myeloperoxidases Proteins 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 208000006994 Precancerous Condition Diseases 0.000 description 1
- 229940082622 Prostaglandin cardiac therapy preparations Drugs 0.000 description 1
- 229940077717 Prostaglandin drugs for peptic ulcer and gastro-oesophageal reflux disease (GORD) Drugs 0.000 description 1
- 101710023380 S100A8 Proteins 0.000 description 1
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 description 1
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 description 1
- 210000002966 Serum Anatomy 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-GDQSFJPYSA-N Sucrose Natural products O([C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)[C@@]1(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-GDQSFJPYSA-N 0.000 description 1
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 206010044694 Trophic disease Diseases 0.000 description 1
- 206010068760 Ulcers Diseases 0.000 description 1
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 108091006898 Zinc-dependent endopeptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000037028 Zinc-dependent endopeptidases Human genes 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000001154 acute Effects 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000002429 anti-coagulation Effects 0.000 description 1
- 102000004965 antibodies Human genes 0.000 description 1
- 108090001123 antibodies Proteins 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- YTRQFSDWAXHJCC-UHFFFAOYSA-N chloroform;phenol Chemical compound ClC(Cl)Cl.OC1=CC=CC=C1 YTRQFSDWAXHJCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic Effects 0.000 description 1
- 230000000254 damaging Effects 0.000 description 1
- 230000001079 digestive Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 description 1
- 230000002183 duodenal Effects 0.000 description 1
- 238000002848 electrochemical method Methods 0.000 description 1
- 230000004090 etiopathogenesis Effects 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000027119 gastric acid secretion Effects 0.000 description 1
- 231100001045 histological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036732 histological change Effects 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000000367 immunologic factor Substances 0.000 description 1
- 230000001771 impaired Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000003902 lesions Effects 0.000 description 1
- 238000007477 logistic regression Methods 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 239000003771 matrix metalloproteinase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229940121386 matrix metalloproteinase inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000015689 metaplastic ossification Effects 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 230000000051 modifying Effects 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 230000001272 neurogenic Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 1
- 229940094443 oxytocics Prostaglandins Drugs 0.000 description 1
- 238000002559 palpation Methods 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 238000001558 permutation test Methods 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002205 phenol-chloroform extraction Methods 0.000 description 1
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 1
- 230000001681 protective Effects 0.000 description 1
- 230000012846 protein folding Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 101710044770 sll1951 Proteins 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic Effects 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 239000000304 virulence factor Substances 0.000 description 1
Images
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской диагностике, и может быть использовано для прогнозирования риска развития H. pylori-позитивной язвенной болезни желудка (ЯБЖ) у неродственных русских индивидуумов, уроженцев Центрально-Черноземного региона РФ. Осуществляют забор венозной крови, выделение ДНК из периферической венозной крови и анализ полиморфных локусов rs17576-rs3787268-rs2250889-rs17577 гена ММР-9. При выявлении гаплотипа GACG полиморфных локусов rs17576-rs3787268-rs2250889-rs17577 гена ММР-9 прогнозируют высокий риск развития H. pylori-позитивной ЯБЖ. Способ обеспечивает получение новых критериев оценки риска развития H. pylori-позитивной ЯБЖ у индивидуумов русской национальности, уроженцев Центрально-Черноземного региона РФ, на основе данных о полиморфных локусах rs17576-rs3787268-rs2250889-rs17577 гена ММР-9. 4 ил., 4 пр.
Description
Изобретение относится к области медицинской диагностики и предназначено для прогнозирования риска развития H. pylori-позитивной язвенной болезни желудка.
Язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки (ЯБЖ и ДПК) - это хроническое полиэтиологическое рецидивирующее заболевание, в развитие которого вовлечены системные гипоталамо-гипофизарные, гипоталамо- гипофизарно- надпочечниковые и местные гастродуоденальные процессы, приводящие к трофическим нарушениям в слизистой оболочке желудка и 12-ти перстной кишки, в результате которых образуется язвенный дефект (Клинико-генетические особенности язвенной болезни двенадцатиперстной кишки / Л.В. Волевач, А.С. Сарсенбаева, Л.В. Габбасова [и др.] // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. - 2019. - № 9. - С. 45-49).
Язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки является одним из наиболее распространенных многофакторных заболеваний человека, им страдает до 10% жителей стран Европы и США (Schubert, M. L. Stomach and duodenum / M. L. Schubert // Curr. Opin. Gastroenterol. - 2016. - Vol. 32, № 6. - P. 450-451).
ЯБЖ и ДПК служит одной из причин потери трудоспособности у пациентов гастроэнтерологического профиля (на долю ЯБЖ и ДПК приходится около 40% всех случаев потери трудоспособности у больных этой группы, что обусловливает значительные экономические потери (Язвенная болезнь: этиология, патогенез, клиника / С.Н. Стяжкина, А.С. Андреева, М.А. Воложанина, С.Р. Раимова // Modern Science. - 2020. - № 10-2. - С. 310-313).
В структуре причин инвалидизации среди мужчин с гастроэнтерологическими заболеваниями удельный вес ЯБЖ и ДПК максимален и составляет 68,4% (Management of epithelial precancerous conditions and lesions in the stomach (MAPS II): European Society of Gastrointestinal Endoscopy (ESGE), European Helicobacter and Microbiota Study Group (EHMSG), European Society of Pathology (ESP), and Sociedade Portuguesa de Endoscopia Digestiva (SPED) guideline update 2019 / P. Pimentel-Nunes, D. Libânio, R. Marcos-Pinto [et al.] // Endoscopy. - 2019. - Vol. 51, № 4. - P. 365-388). При этом финансовые потери от ЯБЖ и ДПК сопоставим с экономическим ущербом от болезней сосудистой системы.
В развитие и прогрессирование ЯБЖ и ДПК вовлечены разнообразные патогенетические механизмы, как системные, так и местные (Рациональное использование нестероидных противовоспалительных препаратов: клинические рекомендации / А.Е. Каратеев, Е.Л. Насонов, В.Т. Ивашкин [и др.] // Научно-практическая ревматология. - 2018. - Т. 56, № 1, прил. 1. - С. 1-29).
В основе патофизиологии ЯБЖ и ДПК лежит дисбаланс между факторами повреждения слизистой оболочки (нарушение моторно-эвакуаторной функции желудка, воздействие соляной кислоты и пепсина, дуоденогастральный рефлюкс) и мукопротекторными защитными факторами (слизисто-бикарбонатный барьер, адекватный кровоток, регенерация эпителия, простагландины) (Fischbach, W. Helicobacter Pylori infection: when to eradicate, how to diagnose and treat / W. Fischbach, P. Malfertheiner // Dtsch. Ärztebl. Int. - 2018. - Vol. 115, № 25. - P. 429-436).
ЯБЖ и ДПК является многофакторным заболеванием, в развитие которого вовлечены экзогенные (особенности питания, стрессы, вредные привычки и образ жизни, прием нестероидных противовоспалительных препаратов (НПВП), инфицирование H. pylori и др.) и эндогенные (пол, возраст, этническая принадлежность и др.) факторы риска (Lanas-Gimeno, A. Risk of gastrointestinal bleeding during anticoagulant treatment / A. Lanas-Gimeno, A. Lanas // Expert Opin. Drug Saf. - 2017. - Vol. 16, № 6. - P. 673-685).
Значимую роль в формировании заболевания имеют генетические факторы: наследственная отягощенность у больных ЯБЖ и ДПК выявляется у 5,5-50% (Колотилова, М.Л. Нейрогенно-генетические факторы этиологии и патогенеза язвенной болезни / М.Л. Колотилова, Л.Н. Иванов // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. - 2017. - № 12. - С. 89-97).
Согласно данным литературы, важное значение в этиопатогенезе ЯБЖ и ДПК имеют матриксные металлопротеиназы (ММР). Данное семейство внеклеточных цинк-зависимых эндопептидаз играет ключевую роль в расщеплении компонентов экстрацеллюлярного матрикса, базальных мембран и ряда клеточных поверхностных белков (Молекулярно-генетические аспекты язвенной болезни / Э.Х. Шаймарданова, А.Х. Нургалиева, Д.Д. Надыршина, Э.К. Хуснутдинова // Медицинская генетика. - 2014. - Т. 13, № 11. - С. 3-14). Эти медико-биологические эффекты матриксных металлопротеиназ, как свидетельствуют литературные материалы, имеют важное значение в патогенезе ЯБЖ и ДПК (Fields, G.B. The Rebirth of Matrix Metalloproteinase Inhibitors: Moving Beyond the Dogma / G.B. Fields. - DOI: 10.3390/cells8090984 // Cells. - 2019. - Vol. 8, № 9. - 984. - URL: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6769477/pdf/cells-08-00984.pdf (date of the application 02.05.2021)).
Зарубежными и отечественными учеными проводятся исследования по поиску ассоциаций полиморфизма генов-кандидатов с формированием ЯБЖ и ДПК, в результате которых выявлена связь с развитием заболевания полиморфных локусов генов цитокинов и их рецепторов, ферментов пищеварения, белков теплового шока, факторов роста эндотелия сосудов, миелопероксидаз, циклооксигеназы-1, фактора торможения миграции макрофагов и др. (Circulating concentration of interleukin-37 in Helicobacter pylori-infected patients with peptic ulcer: Its association with IL-37 related gene polymorphisms and bacterial virulence factor CagA / E. Davarpanah, A. Jafarzadeh, M. Nemati [et al.]. - DOI: 10.1016/j.cyto.2019.154928. // Cytokine. - 2020. - Vol. 126. - Art. 154928. - URL: https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S1043466619303576?via%3Dihub (date of the application 12.05.2021)).
В отдельных исследованиях показаны ассоциации с развитием ЯБЖ и ДПК полиморфизма генов матриксных металлопротеиназ. Однако, следует отметить, что подавляющее большинство этих исследований выполнено зарубежными учеными, тогда как в Российской Федерации подобные исследования единичны. Также, следует отметить, что полученные в разных популяциях результаты нередко отличаются между собой, что может быть обусловлено как этиопатогенетическими особенностями возникновения и течения ЯБЖ и ДПК у индивидуумов из различных этнотерриториальных групп народонаселения, так и разным дизайном исследований.
Эпидемиологические исследования свидетельствуют о значимой связи между инфекцией H. pylori и язвенной болезнью. Однако, при этом, следует отметить, что около половины населения мира имеет хроническую инфекцию H. pylori слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки, но только у 5-15% развиваются язвы. Среди факторов, определяющих будет ли инфекция вызывать заболевание, важное значение имеют следующие: характер гистологических изменений, вызванных гастритом, выраженность нарушений в гомеостазе гормонов желудка и секреции соляной кислоты, наличие метаплазии желудка в двенадцатиперстной кишки, взаимодействие H. pylori со слизистым барьером, иммунные факторы, ульцерогенность штамма H. pylori, генетические факторы, прием НПВП и др. (Chaperone activity of serine protease HtrA of Helicobacter pylori as a crucial survival factor under stress conditions / U. Zarzecka, A. Harrer, A. Zawilak-Pawlik [et al.]. - DOI: 10.1186/s12964-019-0481-9 // Cell Commun. Signal. - 2019. - Vol. 17, № 1. - Art. 161. - URL: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6892219/pdf/12964_2019_Article_481.pdf (date of the application 12.05.2021)).
В настоящее время доказано три этиологических фактора язвенной болезни: гиперсекреция соляной кислоты, имеющая генетическую детерминанту, прием нестероидных противовоспалительных препаратов, обладающих прямым повреждающим действием на слизистую оболочку, и инфекция Helicobacter pylori. Этиологическая роль Helicobacter pylori определяется цитопатическими эффектами, модулирующим действием бактерии на иммунный ответ макроорганизма (Ethnic difference of Helicobacter pylori gastritis: Korean and Japanese gastritis is characterized by male- and antrum-predominant acute foveolitis in comparison with American gastritis / I. Lee, H. Lee, M. Kim [et al.] // World Journal of Gastroenterology. - 2005. - Vol. 11 (1). - P. 94-98).
Одной из важных задач современной гастроэнторологии является изучение причин и механизмов развития H. pylori-позитивной язвенной болезни желудка, среди которых значимую роль играют генетические факторы.
В Российской Федерации исследования вовлеченности гена ММР-9 в формирование предрасположенности к H. pylori-позитивной ЯБ Ж единичны, а данные о роли генетических вариантов rs17576-rs3787268-rs2250889-rs17577 гена в развитии H. pylori-позитивной ЯБ Ж отсутствуют.
Для оценки сложившейся патентной ситуации был выполнен поиск по охранным документам за период с 1990 по 2021 гг. Анализ документов производился по направлению: способ прогнозирования риска развития H. pylori-позитивной язвенной болезни желудка на основе молекулярно-генетических данных в зависимости от полиморфных маркеров гена ММР-9. Источники информации: сайты Федерального института промышленной собственности http://fips.ru.
В изученной научно-медицинской и доступной патентной литературе авторами не было обнаружено способа прогнозирования риска развития H. pylori-позитивной ЯБЖ на основе данных о полиморфных локусах rs17576-rs3787268-rs2250889-rs17577 гена ММР-9.
Известен способ прогнозирования риска развития и прогрессирования язвенной болезни (патент RU №2231794, опубликован 27.06.2004), включающий исследования желудочных проб, основанный на измерении скорости диффузии ионов водорода через слой слизи, покрывающей слизистой оболочки желудка, путем введения в желудок тестового 0,1 H раствора соляной кислоты и исследования динамики проникновения ионов водорода в слизистой оболочки путем эвакуации содержимого желудка, тем самым определяют риск развития язвенной болезни Недостатком этого способа является трудоемкость выполнения, которая заключается в многократной эвакуации содержимого желудка и введении в желудок большого количества соляной кислоты, сложность подсчетов, и кроме того не учитывается роль генетических полиморфизмов.
Известен способ и устройство для прогнозирования риска развития язвенной болезни (патент RU №2318217, опубликован 27.02.2008). Сущность способа заключается в том, что электрохимическим методом измеряют диффузионный (жидкостной) или мембранный потенциал между желудочным соком и тестовой жидкостью, и при величине потенциала более порогового уровня, установленного для тестовой жидкости, прогнозируют риск развития язвенной болезни. в качестве тестовой жидкости можно использовать воду. В этом случае пороговый уровень составляет 10 мв. одновременно с измерением диффузионного или мембранного потенциала может быть измерен рн желудочного сока, при этом риск развития язвенной болезни прогнозируют при величине диффузионного или мембранного потенциала более порогового уровня, установленного для тестовой жидкости, и рн менее 1,5. Устройство для осуществления способа при исследовании желудочного сока in vitro состоит из двух емкостей, разделенных диафрагмой: с желудочным соком и с тестовой жидкостью. В них опущены электроды сравнения, напряжение между которыми равно диффузионному потенциалу. устройство для исследования желудочного сока in vivo содержит камеру с тестовой жидкостью, через диафрагму, контактирующую с желудочным соком, и два электрода сравнения, один из которых контактирует с желудочным соком, а другой - с тестовой жидкостью. Напряжение между электродами равно диффузионному потенциалу. использование способа позволяет своевременно начать профилактическое лечение язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки. Недостатком этого способа является его трудоемкость, он не учитывает роль генетических полиморфизмов.
Известен способ прогнозирования развития язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки (патент RU №2281037, опубликован 10.08.2006). Сущность способа заключается в том, что осуществляют определение календарного возраста пациента, биологического возраста, соотношение биологического и календарного возрастов, рост, массу тела, показатели качества жизни. Затем рассчитывают вероятность развития язвенной болезни по формуле:
где е - экспонента, число оснований натурального логарифма, равное - 2,71, D1 - сумма показателей, умноженных на коэффициент В дискриминантных функций для больных, D2 - сумма показателей, умноженных на коэффициент А дискриминантных функций для здоровых, при этом значения коэффициентов А и В выбирают из таблицы «Коэффициенты дискриминантных функций» и при P1>Р2 прогнозируют риск развития язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки. Недостатком этого способа является то, что он не учитывает роль генетических полиморфизмов.
Известен способ оценки риска развития язвенной болезни двенадцатиперстной кишки у хакасов на основе генетического анализа (патент RU №2563828, опубликован 20.09.2015). Патент характеризуется тем, что устанавливают факторы риска - определяют полиморфизм интерлейкина IL-8 методом рестрикционного анализа при выделении ДНК из лимфоцитов венозной крови, а также определяют генотип Helicobacter pylori методом ПЦР при выделении ДНК из биоптатов слизистой оболочки желудка у пациентов, относящихся к коренным жителям Республики Хакасия. Факторам риска присваивают числовые значения и затем определяют прогностические коэффициенты P1, Р2. При Р1>Р2 прогнозируют низкий риск, а при Р1<Р2 прогнозируют высокий риск развития язвенной болезни. Недостатком данного метод является трудоемкость подсчета и применим только для коренных жителей Республики Хакасия.
Задачей настоящего исследования является расширение арсенала способов диагностики риска развития H. pylori-позитивной ЯБЖ, а именно создание способа прогнозирования риска развития H. pylori-позитивной ЯБЖ на основе данных о полиморфных локусах rs17576-rs3787268-rs2250889-rs17577 гена ММР-9.
Технический результат использования изобретения - получение критериев оценки риска развития H. pylori-позитивной ЯБЖ у индивидуумов русской национальности, уроженцев Центрально - Черноземного региона РФ, на основе данных о полиморфных локусах rs17576-rs3787268-rs2250889-rs17577 гена ММР-9, включающий:
- забор венозной крови;
- выделение ДНК из периферической венозной крови;
- анализ полиморфизмов rs17576-rs3787268-rs2250889-rs17577 гена ММР-9;
- прогнозирование высокого риска развития H. pylori-позитивной ЯБЖ у индивидуумов при выявлении гаплотипа GACG полиморфных локусов rs17576-rs3787268-rs2250889-rs17577 гена ММР-9.
Новизна и изобретательский уровень заключаются в том, что из уровня техники не известна возможность прогноза развития H. pylori-позитивной ЯБЖ у пациентов на основе данных о гаплотипе GACG полиморфных локусов rs17576-rs3787268-rs2250889-rs17577 гена ММР-9.
Способ осуществляют следующим образом:
Выделение геномной ДНК из периферической крови осуществляют методом фенольно-хлороформной экстракции (Miller, S.A. A simple salting out procedure for extracting DNA from human nucleated cells / S.A. Miller, D.D. Dykes, H.F. Polesky // Nucleic. Acids. Res. - 1988. - Vol. 16, № 3. - P. 1215) в два этапа. На первом этапе к 4 мл крови с ЭДТА добавляют 25 мл лизирующего буфера, содержащего 320 мМ сахарозы, 1% тритон Х-100, 5 мМ MgCl2, 10 мМ трис-HCl (pH=7,6). Полученную смесь перемешивают и центрифугируют при 4°С, 4000 об./мин. в течение 20 минут. После центрифугирования надосадочную жидкость сливают, к осадку добавляют 4 мл раствора, содержащего 25 мМ ЭДТА (рН=8,0) и 75 мМ NaCl, ресуспензируют. Затем прибавляют 0,4 мл 10% SDS, 35 мкл протеиназы К (10мг/мл) и инкубируют образец при 37°С в течение 16 часов.
На втором этапе из полученного лизата последовательно проводят экстракцию ДНК равными объемами фенола, фенол-хлороформа (1:1) и хлороформа с центрифугированием при 4000 об./мин. в течение 10 минут. После каждого центрифугирования производят отбор водной фазы. ДНК осаждают из раствора двумя объемами охлажденного 96% этанола. После лиофилизации полученную ДНК растворяют в бидистиллированной, деионизованной воде и хранят при -20°С.
Анализ полиморфных маркеров rs17576-rs3787268-rs2250889-rs17577 гена ММР-9 осуществлялся методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) на термоциклере CFX-96 Real-Time System (Bio-Rad) c использованием стандартных олигонуклеотидных праймеров и зондов (синтезированы в ООО «Тест - Ген» (Ульяновск)).
Амплификация геномной ДНК производилась в реакционной смеси, суммарным объемом 10 мкл, включающей смесь для ПЦР ММР-9 - 4 мкл, Taq-полимеразу - 2 мкл, исследуемый образец (~30 нг ДНК/мкл) - 1 мкл, деионизированная вода - 3мкл.
Генотипирование исследуемых образцов осуществлялось с использованием программного обеспечения «CFX-Manager™» методом дискриминации аллелей по величинам относительных единиц флуоресценции (ОЕФ) (фиг. 1, фиг. 2, фиг. 3, фиг. 4)
Изобретение характеризуется фигурами:
Фигура 1 - Дискриминации аллелей методом детекции TaqMan зондов по данным величин ОЕФ (относительные единицы флуоресценции) каждого зонда на амплификаторе CFX96 c детектирующей системой в режиме реального времени полиморфизма rs17576 ММР-9 ( - AA, - GG, - AG, ■ - отриц. контр.)
Фигура 2 - Дискриминации аллелей методом детекции TaqMan зондов по данным величин ОЕФ (относительные единицы флуоресценции) каждого зонда на амплификаторе CFX96 c детектирующей системой в режиме реального времени полиморфизма rs3787268 ММР-9 ( - AA, - GG, - GA, ■ - отриц. контр.)
Фигура 3 - Дискриминации аллелей методом детекции TaqMan зондов по данным величин ОЕФ (относительные единицы флуоресценции) каждого зонда на амплификаторе CFX96 c детектирующей системой в режиме реального времени полиморфизма rs2250889 ММР-9 ( - CC, - GG, -CG, ■ - отриц. контр.)
Фигура 4 - Дискриминации аллелей методом детекции TaqMan зондов по данным величин ОЕФ (относительные единицы флуоресценции) каждого зонда на амплификаторе CFX96 c детектирующей системой в режиме реального времени полиморфизма rs17577 ММР-9 ( - AA, - GG, - GA, ■ - отриц. контр.)
Определение частот гаплотипов и анализ ассоциаций гаплотипов с развитием H. pylori-позитивной ЯБ Ж проводились с помощью логистического регрессионного анализа в программе PLINK v. 2.050 (http://zzz.bwh.harvard.edu/plink/). При необходимости в исследование включали ковариаты (возраст, пол, индекс массы тела). После проведения пермутационного теста (выполнялось 1000 пермутаций) за статистически значимый уровень принимали pperm<0,05.
Возможность использования предложенного способа для оценки прогнозирования риска развития H. pylori-позитивной ЯБ Ж у индивидуумов подтверждает анализ результатов наблюдений 445 пациентов, из них 98 больных с H. pylori-позитивной язвенной болезнью желудка и 347 индивидуумов контрольной группы. Среди больных средний возраст-48,86±13,13, в контрольной группе средний возраст-48,47±13,69 лет. В выборки для исследования включались (критерии включения): 1) индивидуумы русской национальности, родившиеся в Центральном Черноземье России и проживающие в Белгородской области (Чурносов М.И., Сорокина И.Н., Балановская Е.В. Генофонд населения Белгородской области. Динамика индекса эндогамии в районных популяциях // Генетика. 2008. Т. 44. № 8. С. 1117-1125), не имеющие родства между собой, добровольно согласившиеся на проведение исследования; 2) в группу больных включались пациенты с язвенной болезнью желудка, после установления диагноза заболевания, подтвержденного с помощью клинических, клинико-инструментальных и клинико-лабораторных методов исследования. Диагноз язвенной болезни желудка устанавливался на основании: анамнестических данных (характерные жалобы, собирался анамнез заболевания), физикального обследования (обнаружение болезненности и резистентности мыщц брюшной стенки при пальпации), инструментального обследования (обнаружение язвенного дефекта при эндоскопическом исследовании желудка и двенадцатиперстной кишки). (Клинические рекомендации, 2019). Для выявления инфекции H. pylori использовались два метода:
- иммуноферментный (выявление антител к H. pylori в сыворотке крови)
- гистологический (определялось наличие H. pylori в биоптате слизистой оболочки гастродуоденальной зоны).
Обследование больных H. pylori-позитивной ЯБ Ж проводилось на базе гастроэнтерологического отделения Белгородской областной клинической больницы Святителя Иоасафа; 3) в контрольную группу входили пациенты, не имеющие клинических и эндоскопических признаков H. pylori-позитивной ЯБ Ж. Контрольная группа формировалась при профилактических осмотрах (обследовании) населения, проводимого в Белгородской областной клинической больнице Святителя Иоасафа.
Все исследования проводились под контролем этического комитета ОГБУЗ БОКБ Святителя Иоасафа (протокол № 15 от 21.12.2016) с информированного согласия пациентов на использование материалов лечебно-диагностических мероприятий, связанных с заболеванием, для научно-исследовательских целей и протоколировались по стандартам этического комитета Российской Федерации.
Типирование молекулярно-генетических маркеров осуществлялось на кафедре медико-биологических дисциплин медицинского института НИУ «БелГУ».
При расчете частот гаплотипов и анализе их ассоциаций у индивидуумов установлена связь с формированием H. pylori-позитивной ЯБЖ гаплотипа GACG полиморфных локусов rs17576-rs3787268-rs2250889-rs17577 гена ММР-9. Гаплотип GACG полиморфных локусов rs17576-rs3787268-rs2250889-rs17577 гена ММР-9 является фактором риска развития H. pylori-позитивной ЯБЖ у индивидуумов (OR=2,00, pperm=0,010).
В качестве примеров конкретного применения разработанного способа приведено обследование русских пациентов, уроженцев Центрально-Черноземного региона РФ и не являющихся родственниками между собой: проведено генетическое исследование по полиморфным локусам rs17576-rs3787268-rs2250889-rs17577 гена ММР-9.
У пациента Б. была взята венозная кровь, при генотипировании ДНК-маркеров был выявлен гаплотип GACG полиморфных локусов rs17576-rs3787268-rs2250889-rs17577 гена ММР-9, что позволило отнести пациента в группу больных с высоким риском развития H. pylori-позитивной ЯБЖ. Дальнейшее наблюдение подтвердило диагноз H. pylori-позитивной язвенной болезни желудка у пациента.
У пациента О. была взята венозная кровь, при генотипировании ДНК-маркеров был выявлен гаплотип AACA полиморфных локусов rs17576-rs3787268-rs2250889-rs17577 гена ММР-9, что позволило отнести пациента в группу индувидуумов с низким риском развития H. pylori-позитивной ЯБЖ. Дальнейшее наблюдение не подтвердило диагноз H. pylori-позитивной язвенной болезни желудка у пациента О.
У пациента Л. была взята венозная кровь, при генотипировании ДНК-маркеров был выявлен гаплотип AACG полиморфных локусов rs17576-rs3787268-rs2250889-rs17577 гена ММР-9, что позволило отнести пациента в группу больных с низким риском развития H. pylori-позитивной ЯБЖ. Дальнейшее наблюдение не подтвердило диагноз H. pylori-позитивной язвенной болезни желудка у пациента.
У пациентки П. была взята венозная кровь, при генотипировании ДНК-маркеров был выявлен гаплотип GGCG полиморфных локусов rs17576-rs3787268-rs2250889-rs17577 гена ММР-9, что позволило отнести пациентку в группу индувидуумов с низким риском развития H. pylori-позитивной ЯБЖ. При дальнейшем наблюдении диагноз H. pylori-позитивной язвенной болезни желудка у пациентки П. не подтвердился.
Применение данного способа позволит на доклиническом этапе формировать среди пациентов группы риска и своевременно реализовывать в этих группах необходимые лечебно-профилактические мероприятия по предупреждению развития H. pylori-позитивной ЯБЖ.
Claims (1)
- Способ прогнозирования риска развития H. pylori–позитивной язвенной болезни желудка у неродственных русских индивидуумов, уроженцев Центрально-Черноземного региона РФ, включающий забор венозной крови, выделение ДНК из периферической венозной крови, анализ полиморфных локусов rs17576-rs3787268-rs2250889-rs17577 гена ММР-9 и прогнозирование высокого риска развития H. pylori–позитивной язвенной болезни желудка у индивидуумов при выявлении гаплотипа GACG полиморфных локусов rs17576-rs3787268-rs2250889-rs17577 гена ММР-9.
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2780525C1 true RU2780525C1 (ru) | 2022-09-26 |
Family
ID=
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2281037C2 (ru) * | 2003-11-06 | 2006-08-10 | Ольга Степановна Малышенко | Способ прогнозирования развития язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки |
RU2563828C1 (ru) * | 2014-10-01 | 2015-09-20 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Хакасский государственный университет им. Н.Ф. Катанова" (ФГБОУ ВПО ХГУ им. Н.Ф. Катанова) | Способ оценки риска развития язвенной болезни двенадцатиперстной кишки у хакасов на основе генетического анализа |
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2281037C2 (ru) * | 2003-11-06 | 2006-08-10 | Ольга Степановна Малышенко | Способ прогнозирования развития язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки |
RU2563828C1 (ru) * | 2014-10-01 | 2015-09-20 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Хакасский государственный университет им. Н.Ф. Катанова" (ФГБОУ ВПО ХГУ им. Н.Ф. Катанова) | Способ оценки риска развития язвенной болезни двенадцатиперстной кишки у хакасов на основе генетического анализа |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
МИНЯЙЛО О.Н. и др. Гендерные особенности ассоциаций полиморфизма генов матриксных металлопротеиназ с развитием язвенной болезни у населения Центрального Черноземья России. Генетика. 2021; 57(10): 1185-1193. Принята к публикации 11.02.2021. МИНЯЙЛО О.Н. Распределение аллелей и гаплоблочная структура полиморфизма генов матриксных металлопротеиназ у больных Н.pylori-негативной язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки. Научные результаты биомедицинских исследований. 2020; 4: 488-502. MINYAYLO O. et al. Functionally significant polymorphisms of the MMP‑9 gene are associated with peptic ulcer disease in the Caucasian population of Central Russia. Sci Rep. 2021; 11: 13515. Published: 29 June 2021. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20220119886A1 (en) | Means for diagnosing, predicting or monitoring pneumocystis pneumonia | |
US9902998B2 (en) | Non-invasive diagnostic method for diagnosing bladder cancer | |
JP6997709B2 (ja) | 全身性炎症反応症候群(sirs)患者における合併症リスクを評価する方法 | |
RU2287158C1 (ru) | Способ прогнозирования развития гипертонической болезни по генетическим факторам риска | |
RU2780525C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития H. pylori-позитивной язвенной болезни желудка | |
RU2786314C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития язвенной болезни у женщин по генетическим данным | |
RU2780505C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития язвенной болезни желудка на основе генетического анализа | |
RU2782496C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития H. pylori-позитивной язвенной болезни двенадцатиперстной кишки с использованием данных о полиморфизме гена ММР-9 | |
RU2782304C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития язвенной болезни двенадцатиперстной кишки на основе молекулярно-генетического тестирования | |
RU2819776C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития Н. pylori-позитивной язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки на основе молекулярно-генетического тестирования | |
EP3359682B1 (en) | Method for diagnosing hepatic fibrosis based on bacterial profile and diversity | |
US8445208B2 (en) | Multivariate analysis involving genetic polymorphisms related to mediators of inflammatory response for prediction of outcome of critcally ill patients | |
RU2821471C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития Н. pylori-негативной язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки | |
RU2819282C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки у мужчин на основе молекулярно-генетического тестирования | |
RU2816514C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки на основе молекулярно-генетического тестирования | |
RU2811577C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки у женщин на основе молекулярно-генетического тестирования | |
RU2816519C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития язвенной болезни двенадцатиперстной кишки на основе молекулярно-генетического тестирования | |
RU2779085C1 (ru) | Способ выявления предрасположенности к развитию метаболического синдрома в виде ожирения у школьников 7-10 лет | |
RU2809912C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития гипертонической болезни у мужчин по результатам генетического тестирования | |
RU2795720C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития люминального подтипа рака молочной железы | |
RU2811257C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития тройного негативного подтипа рака молочной железы | |
WO2023020638A1 (en) | Method for predicting a severity of an infectious disease and biomarker for use in carrying out the method and monitoring a therapy of an infectious disease | |
RU2825056C1 (ru) | Способ прогнозирования развития легочной гипертензии при эмпиеме плевры | |
RU2809911C1 (ru) | Способ прогнозирования риска развития гипертонической болезни на основе данных о межгенных взаимодействиях | |
RU2743453C1 (ru) | Способ прогнозирования инфекционных осложнений критических состояний |