RU2777061C2 - Живая пробиотическая вакцина для профилактики инфекции, вызванной вирусом гриппа - Google Patents
Живая пробиотическая вакцина для профилактики инфекции, вызванной вирусом гриппа Download PDFInfo
- Publication number
- RU2777061C2 RU2777061C2 RU2019137928A RU2019137928A RU2777061C2 RU 2777061 C2 RU2777061 C2 RU 2777061C2 RU 2019137928 A RU2019137928 A RU 2019137928A RU 2019137928 A RU2019137928 A RU 2019137928A RU 2777061 C2 RU2777061 C2 RU 2777061C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- vaccine
- probiotic
- live
- influenza
- ser
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccines Drugs 0.000 title claims abstract description 61
- 230000000529 probiotic Effects 0.000 title abstract description 38
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 title abstract description 38
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 title abstract description 38
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 title abstract description 23
- 201000009910 diseases by infectious agent Diseases 0.000 title abstract description 21
- 230000002265 prevention Effects 0.000 title abstract description 6
- 241000982579 Enterococcus faecium L3 Species 0.000 claims abstract description 23
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 8
- 229920003013 deoxyribonucleic acid Polymers 0.000 claims description 48
- 229920001850 Nucleic acid sequence Polymers 0.000 claims description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 5
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 102000038129 antigens Human genes 0.000 abstract description 16
- 108091007172 antigens Proteins 0.000 abstract description 16
- 239000000427 antigen Substances 0.000 abstract description 15
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 abstract description 14
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 abstract description 14
- 206010022000 Influenza Diseases 0.000 abstract description 13
- 208000006572 Human Influenza Diseases 0.000 abstract description 11
- 230000028993 immune response Effects 0.000 abstract description 10
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 abstract description 10
- 230000001665 lethal Effects 0.000 abstract description 9
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 abstract description 9
- 230000001681 protective Effects 0.000 abstract description 8
- 108090001123 antibodies Proteins 0.000 abstract description 7
- 102000004965 antibodies Human genes 0.000 abstract description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 5
- 230000002068 genetic Effects 0.000 abstract description 5
- 241000272525 Anas platyrhynchos Species 0.000 abstract description 4
- 210000004369 Blood Anatomy 0.000 abstract description 4
- 241000194031 Enterococcus faecium Species 0.000 abstract description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 abstract description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 3
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 abstract description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 abstract description 2
- 210000000987 Immune System Anatomy 0.000 abstract description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 abstract description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 230000003213 activating Effects 0.000 abstract 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 12
- 230000001717 pathogenic Effects 0.000 description 11
- 230000002759 chromosomal Effects 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 6
- 229960003971 Influenza vaccines Drugs 0.000 description 6
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 6
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 6
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000194033 Enterococcus Species 0.000 description 5
- 241000194035 Lactococcus lactis Species 0.000 description 5
- 240000006394 Sorghum bicolor Species 0.000 description 5
- 230000000890 antigenic Effects 0.000 description 5
- 108010047857 aspartylglycine Proteins 0.000 description 5
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 5
- 235000019713 millet Nutrition 0.000 description 5
- XNSKSTRGQIPTSE-UHFFFAOYSA-N Arginyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCCNC(N)=N XNSKSTRGQIPTSE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- DWBZEJHQQIURML-IMJSIDKUSA-N Asp-Ser Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DWBZEJHQQIURML-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 4
- NTQDELBZOMWXRS-UHFFFAOYSA-N Aspartyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(O)=O NTQDELBZOMWXRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N Erythromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)C[C@@](C)(O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N 0.000 description 4
- BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N Gly-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N 0.000 description 4
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 description 4
- XGDCYUQSFDQISZ-BQBZGAKWSA-N Leu-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XGDCYUQSFDQISZ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- GVRKWABULJAONN-UHFFFAOYSA-N Valyl-Threonine Chemical compound CC(C)C(N)C(=O)NC(C(C)O)C(O)=O GVRKWABULJAONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 4
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 4
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 4
- 229960003276 erythromycin Drugs 0.000 description 4
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 4
- 102000037240 fusion proteins Human genes 0.000 description 4
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 4
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- HXWUJJADFMXNKA-UHFFFAOYSA-N Asparaginyl-Leucine Chemical compound CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(N)=O HXWUJJADFMXNKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VGRHZPNRCLAHQA-UHFFFAOYSA-N Aspartyl-Asparagine Chemical compound OC(=O)CC(N)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O VGRHZPNRCLAHQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000000349 Chromosomes Anatomy 0.000 description 3
- 101700079760 EFCB Proteins 0.000 description 3
- 101710005090 ERVFC1-1 Proteins 0.000 description 3
- 102100014722 ERVS71-1 Human genes 0.000 description 3
- 101710013371 ERVS71-1 Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- OLIFSFOFKGKIRH-WUJLRWPWSA-N Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN OLIFSFOFKGKIRH-WUJLRWPWSA-N 0.000 description 3
- QOOWRKBDDXQRHC-BQBZGAKWSA-N L-lysyl-L-alanine Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN QOOWRKBDDXQRHC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 3
- JPNRPAJITHRXRH-UHFFFAOYSA-N Lysyl-Asparagine Chemical compound NCCCCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC(N)=O JPNRPAJITHRXRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101710043164 Segment-4 Proteins 0.000 description 3
- XZKQVQKUZMAADP-IMJSIDKUSA-N Ser-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XZKQVQKUZMAADP-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 3
- 101700038759 VP1 Proteins 0.000 description 3
- PNVLWFYAPWAQMU-CIUDSAMLSA-N Val-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)C(C)C PNVLWFYAPWAQMU-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- WPSXZFTVLIAPCN-UHFFFAOYSA-N Valyl-Cysteine Chemical compound CC(C)C(N)C(=O)NC(CS)C(O)=O WPSXZFTVLIAPCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000240 adjuvant Effects 0.000 description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 3
- 244000052616 bacterial pathogens Species 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- VPZXBVLAVMBEQI-VKHMYHEASA-N gly ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- 108010037850 glycylvaline Proteins 0.000 description 3
- 101700005460 hemA Proteins 0.000 description 3
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 239000002609 media Substances 0.000 description 3
- 244000052769 pathogens Species 0.000 description 3
- 101700016463 pls Proteins 0.000 description 3
- 108010004914 prolylarginine Proteins 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 230000002194 synthesizing Effects 0.000 description 3
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 3
- IOUPEELXVYPCPG-UHFFFAOYSA-N val-gly Chemical compound CC(C)C(N)C(=O)NCC(O)=O IOUPEELXVYPCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DSTWKJOBKSMVCV-UWVGGRQHSA-N (2S)-2-[[(2R)-2-amino-3-sulfanylpropanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 DSTWKJOBKSMVCV-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- 229920000160 (ribonucleotides)n+m Polymers 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- WUGMRIBZSVSJNP-UFBFGSQYSA-N Ala-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)C)C(O)=O)=CNC2=C1 WUGMRIBZSVSJNP-UFBFGSQYSA-N 0.000 description 2
- JSLGXODUIAFWCF-UHFFFAOYSA-N Arginyl-Asparagine Chemical compound NC(N)=NCCCC(N)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O JSLGXODUIAFWCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HZYFHQOWCFUSOV-IMJSIDKUSA-N Asn-Asp Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O HZYFHQOWCFUSOV-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- KLKHFFMNGWULBN-VKHMYHEASA-N Asn-Gly Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O KLKHFFMNGWULBN-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- SONUFGRSSMFHFN-IMJSIDKUSA-N Asn-Ser Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SONUFGRSSMFHFN-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- JHFNSBBHKSZXKB-VKHMYHEASA-N Asp-Gly Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O JHFNSBBHKSZXKB-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- MQLZLIYPFDIDMZ-UHFFFAOYSA-N Asparaginyl-Isoleucine Chemical compound CCC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(N)=O MQLZLIYPFDIDMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QJMCHPGWFZZRID-UHFFFAOYSA-N Asparaginyl-Lysine Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(N)=O QJMCHPGWFZZRID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VBKIFHUVGLOJKT-UHFFFAOYSA-N Asparaginyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(N)=O VBKIFHUVGLOJKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BSWHERGFUNMWGS-UHFFFAOYSA-N Aspartyl-Isoleucine Chemical compound CCC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(O)=O BSWHERGFUNMWGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000620209 Escherichia coli DH5[alpha] Species 0.000 description 2
- KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N Glu-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- LSPKYLAFTPBWIL-BYPYZUCNSA-N Glu-Gly Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O LSPKYLAFTPBWIL-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- JLXVRFDTDUGQEE-YFKPBYRVSA-N Gly-Arg Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N JLXVRFDTDUGQEE-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- SCCPDJAQCXWPTF-VKHMYHEASA-N Gly-Asp Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O SCCPDJAQCXWPTF-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- IKAIKUBBJHFNBZ-LURJTMIESA-N Gly-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN IKAIKUBBJHFNBZ-LURJTMIESA-N 0.000 description 2
- IDXZDKMBEXLFMB-UHFFFAOYSA-N Histidinyl-Isoleucine Chemical compound CCC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 IDXZDKMBEXLFMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UCGDDTHMMVWVMV-FSPLSTOPSA-N Ile-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O UCGDDTHMMVWVMV-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 2
- BBIXOODYWPFNDT-CIUDSAMLSA-N Ile-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O BBIXOODYWPFNDT-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- MUFXDFWAJSPHIQ-XDTLVQLUSA-N Ile-Tyr Chemical compound CC[C@H](C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CC=C(O)C=C1 MUFXDFWAJSPHIQ-XDTLVQLUSA-N 0.000 description 2
- 241001500351 Influenzavirus A Species 0.000 description 2
- WKXVAXOSIPTXEC-UHFFFAOYSA-N Isoleucyl-Aspartate Chemical compound CCC(C)C(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC(O)=O WKXVAXOSIPTXEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FMIIKPHLJKUXGE-GUBZILKMSA-N Lys-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN FMIIKPHLJKUXGE-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- QCZYYEFXOBKCNQ-STQMWFEESA-N Lys-Phe Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 QCZYYEFXOBKCNQ-STQMWFEESA-N 0.000 description 2
- YQAIUOWPSUOINN-IUCAKERBSA-N Lys-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN YQAIUOWPSUOINN-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 2
- HWMGTNOVUDIKRE-UWVGGRQHSA-N Phe-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 HWMGTNOVUDIKRE-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- 206010061353 Pneumococcal infection Diseases 0.000 description 2
- HMNSRTLZAJHSIK-YUMQZZPRSA-N Pro-Arg Chemical compound NC(=N)NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 HMNSRTLZAJHSIK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- 102000007312 Recombinant Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010033725 Recombinant Proteins Proteins 0.000 description 2
- LTFSLKWFMWZEBD-IMJSIDKUSA-N Ser-Asn Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O LTFSLKWFMWZEBD-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- PPQRSMGDOHLTBE-UWVGGRQHSA-N Ser-Phe Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 PPQRSMGDOHLTBE-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- 241000193998 Streptococcus pneumoniae Species 0.000 description 2
- 229940031000 Streptococcus pneumoniae Drugs 0.000 description 2
- VPZKQTYZIVOJDV-LMVFSUKVSA-N Thr-Ala Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O VPZKQTYZIVOJDV-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 2
- IQHUITKNHOKGFC-MIMYLULJSA-N Thr-Phe Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 IQHUITKNHOKGFC-MIMYLULJSA-N 0.000 description 2
- UQTNIFUCMBFWEJ-UHFFFAOYSA-N Threoninyl-Asparagine Chemical compound CC(O)C(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC(N)=O UQTNIFUCMBFWEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZSXJENBJGRHKIG-UHFFFAOYSA-N Tyrosyl-Serine Chemical compound OCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 ZSXJENBJGRHKIG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010046914 Vaginal infection Diseases 0.000 description 2
- STTYIMSDIYISRG-WDSKDSINSA-N Val-Ser Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O STTYIMSDIYISRG-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 2
- 108010013835 arginine glutamate Proteins 0.000 description 2
- 108010040443 aspartyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 2
- 108010093581 aspartyl-proline Proteins 0.000 description 2
- 230000002238 attenuated Effects 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial Effects 0.000 description 2
- 108091006028 chimera Proteins 0.000 description 2
- 108010069495 cysteinyltyrosine Proteins 0.000 description 2
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 description 2
- 230000000534 elicitor Effects 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 108010078144 glutaminyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 2
- STKYPAFSDFAEPH-LURJTMIESA-N gly-val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN STKYPAFSDFAEPH-LURJTMIESA-N 0.000 description 2
- 108010082286 glycyl-seryl-alanine Proteins 0.000 description 2
- 108010010147 glycylglutamine Proteins 0.000 description 2
- 108010015792 glycyllysine Proteins 0.000 description 2
- 108010044374 isoleucyl-tyrosine Proteins 0.000 description 2
- 108010009298 lysylglutamic acid Proteins 0.000 description 2
- 108010038320 lysylphenylalanine Proteins 0.000 description 2
- 108010017391 lysylvaline Proteins 0.000 description 2
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 230000002633 protecting Effects 0.000 description 2
- 108010026333 seryl-proline Proteins 0.000 description 2
- 230000001131 transforming Effects 0.000 description 2
- 230000003612 virological Effects 0.000 description 2
- JSZMKEYEVLDPDO-ACZMJKKPSA-N (2R)-2-[[(2S,3S)-2-amino-3-methylpentanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoic acid Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O JSZMKEYEVLDPDO-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- LQJAALCCPOTJGB-YUMQZZPRSA-N (2S)-1-[(2S)-2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O LQJAALCCPOTJGB-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- VNYDHJARLHNEGA-RYUDHWBXSA-N (2S)-1-[(2S)-2-azaniumyl-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]pyrrolidine-2-carboxylate Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 VNYDHJARLHNEGA-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- UCXQIIIFOOGYEM-ULQDDVLXSA-N (2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-amino-4-methylpentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 UCXQIIIFOOGYEM-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- FAQVCWVVIYYWRR-WHFBIAKZSA-N (2S)-2-[[(2S)-2,5-diamino-5-oxopentanoyl]amino]propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O FAQVCWVVIYYWRR-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- KTGFOCFYOZQVRJ-UHFFFAOYSA-N 2-[(2-amino-3-methylpentanoyl)amino]pentanedioic acid Chemical compound CCC(C)C(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCC(O)=O KTGFOCFYOZQVRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SNFUTDLOCQQRQD-UHFFFAOYSA-N 2-[(2-amino-4-carboxybutanoyl)amino]-3-methylpentanoic acid Chemical compound CCC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O SNFUTDLOCQQRQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AAKRWBIIGKPOKQ-ONGXEEELSA-N 2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylpentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]acetic acid Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(O)=O AAKRWBIIGKPOKQ-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- RLMISHABBKUNFO-WHFBIAKZSA-N 2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-azaniumylpropanoyl]amino]propanoyl]amino]acetate Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O RLMISHABBKUNFO-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- XAEWTDMGFGHWFK-IMJSIDKUSA-N Ala-Asp Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O XAEWTDMGFGHWFK-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N Ala-Gln Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- XZWXFWBHYRFLEF-FSPLSTOPSA-N Ala-His Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 XZWXFWBHYRFLEF-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 1
- RDIKFPRVLJLMER-BQBZGAKWSA-N Ala-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)N RDIKFPRVLJLMER-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- IPWKGIFRRBGCJO-IMJSIDKUSA-N Ala-Ser Chemical compound C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CO)C([O-])=O IPWKGIFRRBGCJO-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- BUQICHWNXBIBOG-LMVFSUKVSA-N Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)N BUQICHWNXBIBOG-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- IJYZHIOOBGIINM-WDSKDSINSA-N Arg-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N IJYZHIOOBGIINM-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- OSASDIVHOSJVII-UHFFFAOYSA-N Arginyl-Cysteine Chemical compound SCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCCNC(N)=N OSASDIVHOSJVII-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IIFDPDVJAHQFSR-WHFBIAKZSA-N Asn-Glu Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O IIFDPDVJAHQFSR-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- KWBQPGIYEZKDEG-FSPLSTOPSA-N Asn-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O KWBQPGIYEZKDEG-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 1
- DVUFTQLHHHJEMK-IMJSIDKUSA-N Asp-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O DVUFTQLHHHJEMK-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- PSZNHSNIGMJYOZ-WDSKDSINSA-N Asp-Arg Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N PSZNHSNIGMJYOZ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- HSPSXROIMXIJQW-BQBZGAKWSA-N Asp-His Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 HSPSXROIMXIJQW-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- OAMLVOVXNKILLQ-BQBZGAKWSA-N Asp-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O OAMLVOVXNKILLQ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- CPMKYMGGYUFOHS-FSPLSTOPSA-N Asp-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CPMKYMGGYUFOHS-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 1
- IQTUDDBANZYMAR-UHFFFAOYSA-N Asparaginyl-Methionine Chemical compound CSCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(N)=O IQTUDDBANZYMAR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UKGGPJNBONZZCM-WDSKDSINSA-N Aspartyl-L-proline Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O UKGGPJNBONZZCM-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- DYDKXJWQCIVTMR-UHFFFAOYSA-N Aspartyl-Methionine Chemical compound CSCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(O)=O DYDKXJWQCIVTMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 206010064097 Avian influenza Diseases 0.000 description 1
- 229920001822 C-DNA Polymers 0.000 description 1
- 229920001405 Coding region Polymers 0.000 description 1
- YXQDRIRSAHTJKM-IMJSIDKUSA-N Cys-Ser Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YXQDRIRSAHTJKM-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- HAYVTMHUNMMXCV-UHFFFAOYSA-N Cysteinyl-Alanine Chemical compound OC(=O)C(C)NC(=O)C(N)CS HAYVTMHUNMMXCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VBIIZCXWOZDIHS-UHFFFAOYSA-N Cysteinyl-Isoleucine Chemical compound CCC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CS VBIIZCXWOZDIHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OELDIVRKHTYFNG-UHFFFAOYSA-N Cysteinyl-Valine Chemical compound CC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CS OELDIVRKHTYFNG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000805 Cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241001076388 Fimbria Species 0.000 description 1
- 108010000916 Fimbriae Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- LOJYQMFIIJVETK-WDSKDSINSA-N Gln-Gln Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O LOJYQMFIIJVETK-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- OWOFCNWTMWOOJJ-WDSKDSINSA-N Gln-Glu Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O OWOFCNWTMWOOJJ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- JEFZIKRIDLHOIF-BYPYZUCNSA-N Gln-Gly Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O JEFZIKRIDLHOIF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- FYYSIASRLDJUNP-WHFBIAKZSA-N Glu-Asp Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O FYYSIASRLDJUNP-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- YBAFDPFAUTYYRW-YUMQZZPRSA-N Glu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- BBBXWRGITSUJPB-YUMQZZPRSA-N Glu-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O BBBXWRGITSUJPB-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- YSWHPLCDIMUKFE-QWRGUYRKSA-N Glu-Tyr Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 YSWHPLCDIMUKFE-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- ARPVSMCNIDAQBO-UHFFFAOYSA-N Glutaminyl-Leucine Chemical compound CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(N)=O ARPVSMCNIDAQBO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHLZDSUANXBJHW-UHFFFAOYSA-N Glutaminyl-Phenylalanine Chemical compound NC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 VHLZDSUANXBJHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PNMUAGGSDZXTHX-BYPYZUCNSA-N Gly-Gln Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O PNMUAGGSDZXTHX-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- IEFJWDNGDZAYNZ-BYPYZUCNSA-N Gly-Glu Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O IEFJWDNGDZAYNZ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- MDCTVRUPVLZSPG-BQBZGAKWSA-N His-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CNC=N1 MDCTVRUPVLZSPG-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- MMFKFJORZBJVNF-UWVGGRQHSA-N His-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 MMFKFJORZBJVNF-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- CTCFZNBRZBNKAX-UHFFFAOYSA-N Histidinyl-Glutamine Chemical compound NC(=O)CCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 CTCFZNBRZBNKAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940072221 IMMUNOGLOBULINS Drugs 0.000 description 1
- QNBYCZTZNOVDMI-HGNGGELXSA-N Ile-His Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 QNBYCZTZNOVDMI-HGNGGELXSA-N 0.000 description 1
- JWBXCSQZLLIOCI-GUBZILKMSA-N Ile-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(C)C JWBXCSQZLLIOCI-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- WMDZARSFSMZOQO-DRZSPHRISA-N Ile-Phe Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 WMDZARSFSMZOQO-DRZSPHRISA-N 0.000 description 1
- TWVKGYNQQAUNRN-ACZMJKKPSA-N Ile-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CO)C([O-])=O TWVKGYNQQAUNRN-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulins Proteins 0.000 description 1
- 102000018358 Immunoglobulins Human genes 0.000 description 1
- 241000713196 Influenza B virus Species 0.000 description 1
- UWBDLNOCIDGPQE-UHFFFAOYSA-N Isoleucyl-Lysine Chemical compound CCC(C)C(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCCN UWBDLNOCIDGPQE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VYZAGTDAHUIRQA-WHFBIAKZSA-N L-alanyl-L-glutamic acid Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O VYZAGTDAHUIRQA-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- HFKJBCPRWWGPEY-BQBZGAKWSA-N L-arginyl-L-glutamic acid Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HFKJBCPRWWGPEY-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- RNKSNIBMTUYWSH-YFKPBYRVSA-N L-prolylglycine Chemical compound [O-]C(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 RNKSNIBMTUYWSH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- JAQGKXUEKGKTKX-HOTGVXAUSA-N L-tyrosyl-L-tyrosine Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 JAQGKXUEKGKTKX-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 1
- 241000880493 Leptailurus serval Species 0.000 description 1
- MLTRLIITQPXHBJ-BQBZGAKWSA-N Leu-Asn Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O MLTRLIITQPXHBJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- XWOBNBRUDDUEEY-UWVGGRQHSA-N Leu-His Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 XWOBNBRUDDUEEY-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- OTXBNHIUIHNGAO-UWVGGRQHSA-N Leu-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN OTXBNHIUIHNGAO-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- KFKWRHQBZQICHA-STQMWFEESA-N Leu-Phe Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 KFKWRHQBZQICHA-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- LRKCBIUDWAXNEG-CSMHCCOUSA-N Leu-Thr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O LRKCBIUDWAXNEG-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 1
- BQVUABVGYYSDCJ-ZFWWWQNUSA-N Leu-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 BQVUABVGYYSDCJ-ZFWWWQNUSA-N 0.000 description 1
- JYOAXOMPIXKMKK-UHFFFAOYSA-N Leucyl-Glutamine Chemical compound CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCC(N)=O JYOAXOMPIXKMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OAPNERBWQWUPTI-YUMQZZPRSA-N Lys-Gln Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O OAPNERBWQWUPTI-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- XBZOQGHZGQLEQO-IUCAKERBSA-N Lys-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN XBZOQGHZGQLEQO-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- ZOKVLMBYDSIDKG-CSMHCCOUSA-N Lys-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN ZOKVLMBYDSIDKG-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 1
- IGRMTQMIDNDFAA-UHFFFAOYSA-N Lysyl-Histidine Chemical compound NCCCCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CN=CN1 IGRMTQMIDNDFAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UASDAHIAHBRZQV-YUMQZZPRSA-N Met-Arg Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N UASDAHIAHBRZQV-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- OGGRSJFVXREKOR-CIUDSAMLSA-N Met-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCSC OGGRSJFVXREKOR-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- ZYTPOUNUXRBYGW-YUMQZZPRSA-N Met-Met Chemical compound CSCC[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CCSC ZYTPOUNUXRBYGW-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- KAKJTZWHIUWTTD-VQVTYTSYSA-N Met-Thr Chemical compound CSCC[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C([O-])=O KAKJTZWHIUWTTD-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 1
- JMEWFDUAFKVAAT-UHFFFAOYSA-N Methionyl-Asparagine Chemical compound CSCCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC(N)=O JMEWFDUAFKVAAT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282341 Mustela putorius furo Species 0.000 description 1
- 108010002311 N-glycylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 210000001331 Nose Anatomy 0.000 description 1
- BXNGIHFNNNSEOS-UWVGGRQHSA-N Phe-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 BXNGIHFNNNSEOS-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- ROHDXJUFQVRDAV-UWVGGRQHSA-N Phe-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 ROHDXJUFQVRDAV-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- NYQBYASWHVRESG-MIMYLULJSA-N Phe-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 NYQBYASWHVRESG-MIMYLULJSA-N 0.000 description 1
- FELJDCNGZFDUNR-WDSKDSINSA-N Pro-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 FELJDCNGZFDUNR-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- SHAQGFGGJSLLHE-BQBZGAKWSA-N Pro-Gln Chemical compound NC(=O)CC[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 SHAQGFGGJSLLHE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- ZKQOUHVVXABNDG-IUCAKERBSA-N Pro-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 ZKQOUHVVXABNDG-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- IWIANZLCJVYEFX-RYUDHWBXSA-N Pro-Phe Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H]1NCCC1)C1=CC=CC=C1 IWIANZLCJVYEFX-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- AFWBWPCXSWUCLB-WDSKDSINSA-N Pro-Ser Chemical compound OC[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 AFWBWPCXSWUCLB-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 241001215088 Qia Species 0.000 description 1
- 238000010240 RT-PCR analysis Methods 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 108010065789 Secretory Immunoglobulin A Proteins 0.000 description 1
- VBKBDLMWICBSCY-IMJSIDKUSA-N Ser-Asp Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O VBKBDLMWICBSCY-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- LAFKUZYWNCHOHT-WHFBIAKZSA-N Ser-Glu Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O LAFKUZYWNCHOHT-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- WOUIMBGNEUWXQG-VKHMYHEASA-N Ser-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O WOUIMBGNEUWXQG-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- WBAXJMCUFIXCNI-WDSKDSINSA-N Ser-Pro Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O WBAXJMCUFIXCNI-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- ILVGMCVCQBJPSH-WDSKDSINSA-N Ser-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO ILVGMCVCQBJPSH-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- RZEQTVHJZCIUBT-UHFFFAOYSA-N Serinyl-Arginine Chemical compound OCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCNC(N)=N RZEQTVHJZCIUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FFOKMZOAVHEWET-UHFFFAOYSA-N Serinyl-Cysteine Chemical compound OCC(N)C(=O)NC(CS)C(O)=O FFOKMZOAVHEWET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LDEBVRIURYMKQS-UHFFFAOYSA-N Serinyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CO LDEBVRIURYMKQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LZLREEUGSYITMX-UHFFFAOYSA-N Serinyl-Tryptophan Chemical compound C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(CO)N)C(O)=O)=CNC2=C1 LZLREEUGSYITMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002966 Serum Anatomy 0.000 description 1
- 229940043517 Specific immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 229940076185 Staphylococcus aureus Drugs 0.000 description 1
- 241000193985 Streptococcus agalactiae Species 0.000 description 1
- 235000014897 Streptococcus lactis Nutrition 0.000 description 1
- HYLXOQURIOCKIH-VQVTYTSYSA-N Thr-Arg Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N HYLXOQURIOCKIH-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 1
- IOWJRKAVLALBQB-IWGUZYHVSA-N Thr-Asp Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O IOWJRKAVLALBQB-IWGUZYHVSA-N 0.000 description 1
- WXVIGTAUZBUDPZ-DTLFHODZSA-N Thr-His Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 WXVIGTAUZBUDPZ-DTLFHODZSA-N 0.000 description 1
- BQBCIBCLXBKYHW-CSMHCCOUSA-N Thr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]([NH3+])[C@@H](C)O BQBCIBCLXBKYHW-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 1
- APIDTRXFGYOLLH-VQVTYTSYSA-N Thr-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O APIDTRXFGYOLLH-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 1
- QOLYAJSZHIJCTO-VQVTYTSYSA-N Thr-Pro Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O QOLYAJSZHIJCTO-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 1
- GXDLGHLJTHMDII-WISUUJSJSA-N Thr-Ser Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O GXDLGHLJTHMDII-WISUUJSJSA-N 0.000 description 1
- WCRFXRIWBFRZBR-GGVZMXCHSA-N Thr-Tyr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 WCRFXRIWBFRZBR-GGVZMXCHSA-N 0.000 description 1
- CUTPSEKWUPZFLV-UHFFFAOYSA-N Threoninyl-Cysteine Chemical compound CC(O)C(N)C(=O)NC(CS)C(O)=O CUTPSEKWUPZFLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YKRQRPFODDJQTC-UHFFFAOYSA-N Threoninyl-Lysine Chemical compound CC(O)C(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCCN YKRQRPFODDJQTC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CKHWEVXPLJBEOZ-UHFFFAOYSA-N Threoninyl-Valine Chemical compound CC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)C(C)O CKHWEVXPLJBEOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PWIQCLSQVQBOQV-AAEUAGOBSA-N Trp-Glu Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)=CNC2=C1 PWIQCLSQVQBOQV-AAEUAGOBSA-N 0.000 description 1
- DZHDVYLBNKMLMB-ZFWWWQNUSA-N Trp-Lys Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)=CNC2=C1 DZHDVYLBNKMLMB-ZFWWWQNUSA-N 0.000 description 1
- TYYLDKGBCJGJGW-WMZOPIPTSA-N Trp-Tyr Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)N)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 TYYLDKGBCJGJGW-WMZOPIPTSA-N 0.000 description 1
- PDSLRCZINIDLMU-QWRGUYRKSA-N Tyr-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 PDSLRCZINIDLMU-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- ZQOOYCZQENFIMC-STQMWFEESA-N Tyr-His Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZQOOYCZQENFIMC-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- QZOSVNLXLSNHQK-UHFFFAOYSA-N Tyrosyl-Aspartate Chemical compound OC(=O)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 QZOSVNLXLSNHQK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MFEVVAXTBZELLL-UHFFFAOYSA-N Tyrosyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 MFEVVAXTBZELLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WITCOKQIPFWQQD-FSPLSTOPSA-N Val-Asn Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O WITCOKQIPFWQQD-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 1
- UPJONISHZRADBH-XPUUQOCRSA-N Val-Glu Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O UPJONISHZRADBH-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- BNQVUHQWZGTIBX-IUCAKERBSA-N Val-His Chemical compound CC(C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CN=CN1 BNQVUHQWZGTIBX-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- GIAZPLMMQOERPN-YUMQZZPRSA-N Val-Pro Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O GIAZPLMMQOERPN-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- 208000001756 Virus Disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 108010086434 alanyl-seryl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010041407 alanylaspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010070944 alanylhistidine Proteins 0.000 description 1
- 108010087924 alanylproline Proteins 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral Effects 0.000 description 1
- 108010060035 arginylproline Proteins 0.000 description 1
- 108010092854 aspartyllysine Proteins 0.000 description 1
- 108010068265 aspartyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable Effects 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- KGNSGRRALVIRGR-UHFFFAOYSA-N gln-tyr Chemical compound NC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 KGNSGRRALVIRGR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010049041 glutamylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010062266 glycyl-glycyl-argininal Proteins 0.000 description 1
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 1
- 108010025306 histidylleucine Proteins 0.000 description 1
- 108010092114 histidylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010018006 histidylserine Proteins 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory Effects 0.000 description 1
- 200000000003 influenza A Diseases 0.000 description 1
- 200000000013 influenza A (H1N1) Diseases 0.000 description 1
- 200000000012 influenza A (H3N2) Diseases 0.000 description 1
- 200000000004 influenza B Diseases 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 108010013842 interleukin 1beta (193-195) Proteins 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal Effects 0.000 description 1
- 108010027338 isoleucylcysteine Proteins 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 230000002045 lasting Effects 0.000 description 1
- 231100000636 lethal dose Toxicity 0.000 description 1
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 108010044056 leucyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010057821 leucylproline Proteins 0.000 description 1
- 108010045397 lysyl-tyrosyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 108010064235 lysylglycine Proteins 0.000 description 1
- 201000011442 metachromatic leukodystrophy Diseases 0.000 description 1
- 108010056582 methionylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010005942 methionylglycine Proteins 0.000 description 1
- 108010068488 methionylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000006011 modification reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003287 optical Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 108010024607 phenylalanylalanine Proteins 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 235000013406 prebiotics Nutrition 0.000 description 1
- 108010031719 prolyl-serine Proteins 0.000 description 1
- 108010090894 prolylleucine Proteins 0.000 description 1
- 230000000069 prophylaxis Effects 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 239000004576 sand Substances 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 108010071207 serylmethionine Proteins 0.000 description 1
- 230000000699 topical Effects 0.000 description 1
- 230000002588 toxic Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 108010080629 tryptophan-leucine Proteins 0.000 description 1
- 108010044292 tryptophyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 108010051110 tyrosyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 108010020532 tyrosyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010003137 tyrosyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 201000008100 vaginitis Diseases 0.000 description 1
- SITLTJHOQZFJGG-XPUUQOCRSA-N α-Glu-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O SITLTJHOQZFJGG-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- DXJZITDUDUPINW-UHFFFAOYSA-N γ-glutamyl-Asparagine Chemical compound NC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O DXJZITDUDUPINW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UKKNTTCNGZLJEX-UHFFFAOYSA-N γ-glutamyl-Serine Chemical compound NC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CO)C(O)=O UKKNTTCNGZLJEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Abstract
Изобретение относится к области медицины, вирусологии, микробиологии, молекулярной генетики и биотехнологии и может быть использовано в медицинской промышленности при производстве живых вакцин для профилактики и лечения инфекций, вызванных вирусами гриппа. Создана живая вакцина на основе пробиотического биологически активного штамма Еnterococcus faecium L3 за счет включения в структуру его пилей фрагмента гена нейраминидазы вируса гриппа. В качестве вакцинного антигена использован один из двух поверхностных антигенов вакцинного вируса гриппа A17/утка/Потсдам/86/92(H5N2) - гликопротеин NA . Для оценки протективной эффективности полученной вакцины проводили пероральную вакцинацию мышей живой пробиотической вакциной и определяли специфические к нейраминидазе антитела в крови и вагинальных смывах мышей. Пероральное введение вакцины Еnterococcus faecium L3- NA стимулировало развитие специфического системного и местного иммунного ответа. На модели интраназальной летальной гриппозной инфекции у мышей было показано, что трехкратная пероральная вакцинация созданной живой пробиотической вакциной повышала защиту от летальной гриппозной инфекции. Конструирование живой вакцины на основе биологически активного пробиотического штамма Еnterococcus faecium L3 за счет включения в его пили антигена NA позволило объединить в одном препарате эффективность полезных свойств пробиотика и специфического антигенного стимула. Созданный вакцинный препарат проявил выраженный иммуногенный и протективный эффекты в отношении вируса гриппа, активируя все компоненты иммунной системы и вызывая сбалансированный прочный иммунный ответ. 6 ил., 1 табл., 3 пр.
Description
Изобретение относится к области медицины, вирусологии, микробиологии, молекулярной генетики и биотехнологии и может быть использовано в медицинской промышленности при производстве живых вакцин для профилактики и лечения инфекций, вызванных вирусами гриппа.
На рубеже второго и третьего тысячелетий произошли кардинальные изменения эпидемического процесса при гриппе. Более 30 лет в мире наблюдается одновременная циркуляция двух штаммов вирусов подтипа А. Усилилась активность вирусов гриппа типа В. Кроме эпидемических штаммов вируса гриппа A подтипов A(H1N1) и A(H3N2), которые циркулируют в человеческой популяции, большую угрозу людям создают вирусы гриппа птиц, способные преодолевать межвидовой барьер - это высокопатогенные штаммы A(H5N1) и A(H7N9) [Bui C. et al. Transbound Emerg Dis.12327(10):102-111, (2015)].С каждым годом появляется все больше новых лекарственных препаратов, обладающих противовирусными и другими свойствами, способными предупреждать заболевания гриппом. Но, несмотря на значительные успехи медицинской науки, грипп по-прежнему остается мало контролируемой инфекцией, способной вызывать ежегодные эпидемии, а при появлении нового варианта возбудителя - и пандемии [Ерофеева М.К., Никоноров И.Ю., Terra medica nova. 2 (2009)].
Заболевания, вызванные вирусами гриппа A, по распространению, показателям заболеваемости и смертности, относятся к социально значимым для населения Российской Федерации. Ежегодно от гриппа умирает от 291 000 до 646 000 человек во всем мире.
Основные антигены вируса гриппа - это поверхностные гликопротеины - гемагглютинин ( HA ) и нейраминидаза ( NA ). Антитела против HA являются вируснейтрализующими, антитела, специфичные к NA облегчают протекание инфекции, но они также являются защитными, как показали еще в 70-е годы А. Н. Слепушкин и соавт. [Slepushkin A. N. et al. Journal of Hygiene. 69(4): 571-578, (1971)].
Ранее было показано наличие у части людей перекрестно реагирующих антител к минорному антигенному компоненту вируса гриппа - NA подтипа N1 в результате контактов с ранее циркулирующими вариантами [Hancock K. et al. New England Journal of Medicine. 361(20): 1945-1952, (2009)]. В условиях появления в циркуляции антигенных вариантов вирусов гриппа с новым подтипом НА антитела к NA могут сыграть решающую роль в защите от тяжелых форм инфекции в период, пока не будет развернута вакцинация новым антигенным вариантом.
В настоящее время активная иммунопрофилактика инфекции вирусами гриппа осуществляется путем вакцинации населения. Из-за высокой изменчивости гемагглютинина вирусов гриппа штаммовый состав гриппозных вакцин необходимо обновлять почти ежегодно. Активно ведутся исследования в направлении создания универсальной противогриппозной вакцины. Р. де Врис с соавт. [de Vries R.D. et al. Expert Review of Vaccines. 1299-1301, (2015)] в своей статье суммируют имеющиеся данные по некоторым направлениям создания универсальной противогриппозной вакцины, включая возможность создания вакцины, которая индуцирует перекрестно-реагирующие антитела против NA вируса гриппа. Т. Готтлиб с соавт. [Gottlieb T., Ben-Yedidia T. Journal of autoimmunity. 54: 15-20, (2014)] в своем обзоре освещает возможности создания универсальной противогриппозной вакцины, которая вызывала бы иммунный ответ против консервативных эпитопов вируса гриппа, включая NA . Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) рассматривает NA как один из целевых антигенов для создания гриппозной вакцины с наиболее широким спектром перекрестной реактивности.
Для специфической профилактики гриппа применяются инактивированные (убитые) или живые аттенуированные (ослабленные) гриппозные вакцины [Sridhar, S., K.A. Brokstad and R.J. Cox, Vaccines (Basel), 3(2): 373-89, (2015)]. Инактивированные вакцины - цельновирионные вакцины из инактивированных цельных вирусов; расщепленные вакцины, или сплит-вакцины; субъединичные вакцины - вакцины, содержащие вирусные субъединицы или виросомальные [Rajao D.S. and D.R. Perez, Front Microbiol, 9: 123 (2018)]. Живые гриппозные вакцины, содержащие аттенуированные вирусы, полученные методом генетической реассортации, разработаны в России и США [Belshe, R.B., et al.. N Engl J Med, 356(7): 685-96, (2007), Rudenko L. In proceedings of the international conference on options for the control of influenza VI, Toronto, Ontario, Canada. Jun 17-23, 122-124 (2007)].
Современные трехвалентные гриппозные вакцины включают штаммы вирусов гриппа A(H1N1), A(H3N2) и В. В последние несколько лет появились четырехвалентные гриппозные вакцины, включающие два вируса гриппа В - В/Виктория и В/Ямагата [Desheva YA, Smolonogina TA, Doroshenko EM, Rudenko LG. Vopr Virusol, 61(1): 16-20, (2016)].
Живые вакцины обеспечивают не только общий гуморальный, но и местный иммунитет за счет синтеза секреторных IgА. Эти вакцины вводятся естественным путем - через нос или через рот, что в значительной мере облегчает их применение.
Традиционные инактивированные гриппозные вакцины содержат поверхностные вирусные гликопротеины, однако в отличие от НА , количество NA в составе вакцин не стандартизировано. Большим преимуществом NA является ее медленная эволюция и способность вызывать длительный иммунитет и перекрестную защиту. Используя технологию вирусоподобных частиц, Smith et al. изучили экспериментальную вакцину на основе NA на хорьковой модели гриппозной инфекции H5N1; вакцина оказалась способной обеспечить эффективную защиту [Smith GE., et al, Virology, 509: 90-97 (2017)].
Другой подход к созданию вакцин на основе NA - встраивание консервативных последовательностей NA в пробиотические векторы. То есть, альтернативой использованию химических адъювантов для вакцинации является применение так называемых живых вакцин на основе пробиотиков. Живые вакцины применяют, как правило, однократно, вводят подкожно, накожно или внутримышечно, а некоторые вакцины перорально и ингаляционно. Главным преимуществом живых вакцин является то, что они активируют все компоненты иммунной системы, вызывая сбалансированный прочный иммунный ответ.
Пробиотики - препараты, оказывающие общее благотворное влияние на организм человека (чаще всего молочнокислые бактерии). Установлено, что некоторые пробиотики являются эффективными неспецифическими стимуляторами выработки специфических иммуноглобулинов против различных инфекций [Vintini EO., Medina MS., BMC Immunol., 12: 46 (2011), Bermudez-Hurnarun LG., Kharrat P., Chatel JM., Microb. Cell. Fact., 10: 17-24 (2011)]. Пробиотики стали использоваться в качестве векторов, в часть из которых успешно внесены плазмидные конструкции, обеспечивающие зкспрессию антигенов патогенных бактерий [Me Y., Luo Y., Huang X., Song F., Liu G. Microbiology, 158: 498-504 (2012), De Azevedo M., Karczzewski J., Lefeure F. еt al. BMC Microbiol. 12: 299 (2011)].
Персистенция подобных вариантов пробиотиков в организме способна не только стимулировать выработку протективных иммуноглобулинов, специфичных в отношении целевых антигенов возбудителя, но и обеспечить благоприятный фон для борьбы с инфекцией за счет усиления защитных реакций врожденного иммунитета.
Пробиотические микроорганизмы рассматриваются в настоящее время как хорошая основа для получения рекомбинантных живых вакцин, экспрессирующих вакцинные антигены возбудителей актуальных инфекций [Vintini E.O., Medina M.S., BMC Immunol., 12: 46 (2011); Bermudez-Hurnarun L.G., Kharrat P., Chatel J.M., Microb. Cell. Fact., 10: 17-24 (2011); Mе Y., Luo Y., Huang X., Song F., Liu G. Microbiology, 158: 498-504 (2012), De Azevedo M., Karczzewski J., Lefeure F. еt al. BMC Microbiol. 12: 299 (2011), Lei H. et al. Virology. Т. 476: 189-195 (2015)].
В 2015 г. Хан Л. со своими коллегами создали химерную конструкцию на основе бактерии Lactococcus lactis, содержащую на своей поверхности нейраминидазу вируса гриппа А, и доказали, что она способна защищать мышей от инфекции вирусами гриппа [Lei H. et al. Virology. Т. 476: 189-195, (2015)]. Такая химерная конструкция может быть кандидатом для создания универсальной противогриппозной вакцины.
Существующие вакцины против гриппа А преимущественно сосредоточены на гемагглютинине и формируют штаммо-специфическую защиту. Нейраминидаза намного меньше изучена в контексте гуморального иммунитета против вирусов гриппа. Целью исследования в работе Хан Л. является оценка перекрестного защитного иммунитета NA , представленного на поверхности Lactococcus lactis (L. lactis), против гомологичных и гетерологичных вирусов гриппа А в мышиной модели. Важно отметить, что L. lactis / pNZ8110-pgsA- NA обеспечил защиту на 80% против H5N1, на 60% - защиту против H3N2 и H1N1, соответственно. Эти выводы свидетельствуют о том, что рекомбинантный L. lactis / pNZ110-pgs A NA при отсутствии адъюванта через пероральное введение может быть подан в качестве эффективной вакцины против различных штаммов вирусов гриппа.
Известен способ создания живой вакцины на основе штамма пробиотика Еnterococcus faecium L3 для профилактики вагинальной инфекции, вызванной Streptococcus agalactiae (СГВ). На основе штамма пробиотика Еnterococcus faecium L3 сконструирована первая генно-инженерная живая вакцина со встроенным в хромосому участком гена белка патогенного СГВ [Гупалова Т.В., c соавт., 2013).
Также описано создание живой вакцины против СГВ, в которой использовался подход, основанный на введении bac гена патогенных СГВ в хромосомную ДНК пробиотического штамма Enterococcus faecium L3 при экспрессии в пилях. Пили из энтерококков являются идеальными кандидатами для вакцин из-за их экспозиции на клеточной поверхности. Они выступают за пределы бактериальных клеток и способны проникать сквозь капсулу, которая экранирует большинство белков-антигенов. Пили состоят из мономеров, способных к агрегации, за счет чего увеличивается доза антигена, и повышаются титры антител, специфичных к встраиваемому в структуру поверхностного белка энтерококка полипептидного фрагмента штамма патогенного СГВ. Поэтому способ введения гена патогенных стрептококков в пили пробиотического штамма Enterococcus faecium L3 выгодно отличается тем, что рекомбинантный белок экспрессируется не в цитоплазме, а на поверхности бактерии [Суворов А.Н., с соавт., патент RU № 2640250].
Обычный подход к работе с живыми вакцинами на основе пробиотиков состоит в том, что пробиотики используют в качестве природных адъювантов иммунного ответа, а антиген вводится отдельно.
Принципиальное отличие заявляемого решения заключается в интеграции участка ДНК, кодирующего антигенный фрагмент белка патогенного микроорганизма, в структуру хромосомной ДНК энтерококка. Соответственно, задача генетической части работы состоит в осуществлении интеграции гетерологичного участка ДНК в структуру гена поверхностного белка пробиотика без нарушения открытой рамки считывания и повреждения участков кодирования компонентов, участвующих в процессинге поверхностного белка PilF.
В качестве бактерии-реципиента использовали хорошо изученный пробиотический штамм Enterococcus faecium L3, обладающий целым рядом уникальных биологических свойств. Штамм Еnterococcus faecium L3 обладает выраженной антагонистической активностью в отношении грамположительных и грамотрицательных бактерий, способностью восстанавливать микробиоценоз кишечника на фоне дисбиотических состояний [Yermolenko E., Suvorov A., Chernush A., et al. International Congress Series, 1289: 363-366 (2006)], а также оказывать иммуномодулирующее действие на организм хозяина [Tarasova E., et al, 2010].
Осуществлено физическое картирование штамма Еnterococcus faecium L3 [Suvorov A., Simanenkov V., Gromova L. et al. Prebiotic sand probiotic s potencial for human health, 104-112, (2011)]. В экспериментах на здоровых самках мышей показано, что интравагинальное введение высоких доз штамма Еnterococcus faecium L3 не только не оказывает токсического действия на организм, но и не влияет на состояние слизистой оболочки влагалища [Суворов А., Алехина Г.Г., Пигаревский П.В. и др. Гастробюллетень, 4: 29-31, (2001)], а также способствует экспрессии IL-10 клетками слизистой оболочки влагалища крыс с экспериментальным вагинитом, вызванном S.agalactiae и Staphylococcu aureus [Tarasova E., Yermolenko E., Donets V. et al. Beneficial Microbs, 1: 265-270, (2010)].
В штамме Еnterococcus faecium L3, как и у других грамположительных бактерий, были найдены пили, которые представляют собой фимбрии длиной 0,3-3 μm и диаметром 2-10 nm [Telford JL, Barocchi MA, Margarit I et al. Nature Reviews Microbiology 4: 509-519, (2006)]. Это длинные белок-подобные полимеры, тянущиеся на поверхности бактерий, которые представляют собой субъединицы белка пилина, соединенные ковалентной связью. Они играют большую роль в адгезии колонизации хозяина. Пили являются высокоиммуногенными структурами, которые находятся под селективным давлением иммунных реакций хозяина [Camille Danne, Shaynoor Dramsi. Researchin Microbiology, 163: 645-658, (2012)]. Принцип модификации пилей энтерококков вакцинными антигенами является эффективным решением при создании живых вакцин благодаря экспозиции целевого антигена на поверхности энтерококка.
Этот принцип введения генов патогенных стрептококков в хромосомную ДНК пробиотического штамма Enterococcus faecium L3 для экспрессии в пилях был использован при создании живой вакцины для профилактики инфекции, вызванной Streptococcus pneumonie [Суворов А.Н., Гупалова Т.В., с соавт. Патент RU № 2701733 (14.12.2018)]. Авторами данного изобретения сконструирована генно-инженерная живая вакцина на основе штамма пробиотика Еnterococcus faecium L3, содержащего пили на своей поверхности, со встроенным в хромосому участком гена pspf патогенного Streptococcus pneumoniae.
Интраназальное введение вакцины Еnterococcus faecium L3-PSPF+ стимулировало развитие специфического системного и местного иммунного ответа. На модели интравазальной летальной пневмококковой инфекции инфекции у мышей СВА было показано, что трехкратная интравазальная вакцинация созданной живой пробиотической вакциной повышала защиту от летальной пневмококковой инфекции.
Эта живая вакцина принята в качестве прототипа заявляемого изобретения.
Задачей настоящего изобретения явилось создание живой вакцины на основе пробиотического биологически активного штамма Еnterococcus faecium L3 путем включения в структуру его пилей фрагмента гена нейраминидазы вируса гриппа.
Авторами сконструирована генно-инженерная живая вакцина на основе штамма пробиотика Еnterococcus faecium L3, содержащего пили на своей поверхности. В качестве антигена использовали один из двух поверхностных антигенов вакцинного вируса гриппа A17/утка/Потсдам/86/92(H5N2) - гликопротеин NA за счет встраивания в хромосому участка гена нейраминидазы.
Задачу введения гена нейраминидазы (na) вируса гриппа в хромосомную ДНК пробиотического штамма Еnterococcus faecium L3 для экспрессии в пилях решали следующим образом:
а) получали слитый ген entF-na и клонировали его;
б) выявляли бактериальные клоны, экспрессирущие ген слитого белка NA в пилях.
Для оценки протективной эффективности полученной вакцины проводили пероральную вакцинацию мышей живой пробиотической вакциной и определяли специфические к нейраминидазе антитела в крови и вагинальных смывах мышей. Пероральное введение вакцины Еnterococcus faecium L3- NA стимулировало развитие специфического системного и местного иммунного ответа. На модели интраназальной летальной гриппозной инфекции у мышей было показано, что трехкратная пероральная вакцинация созданной живой пробиотической вакциной повышала защиту от летальной гриппозной инфекции.
Конструирование живой вакцины на основе биологически активного пробиотического штамма Еnterococcus faecium L3 за счет включения в его пили антигена NA позволило объединить в одном препарате эффективность полезных свойств пробиотика и специфического антигенного стимула.
Для получения слитого гена entF-na были сконструированы уникальные праймеры, представленные в таблице.
Таблица. Олигонуклеотидные праймеры
| Название | Ориентация | Нуклеотидная последовательность от 5' к 3' |
| EV | прямой | GCATATGGCGATCCTGGCAAGTGTTAT |
| FV | обратный | GGAATTCCTAGAGCTGTCGTCGTTCC |
| A1 | прямой | GCTCTAGAGCCGATGAGAGCAGCTGGTATTG |
| D1 | обратный | CAACAGGATCCAAAGCATCGTTGG |
| B1 | прямой | TGAGTGAACCACAGCCAGAA |
| Seq F | прямой | GGACACCACAACCATCGAAG |
| Seq R | обратный | AGCTGGACCATGCTACACA |
Подчеркнутые звенья нуклеотидной последовательности указывают на сайты рестрикции.
Рекомбинантная плазмидная ДНК pentF-pspf, представляющая собой плазмидную ДНК, полученную в результате вставки суммарного фрагмента ДНК, состоящего из двух отдельных фрагментов гена пробиотика Enterococcus faecium L3 и фрагмента гена pspf, описанная нами ранее [Суворов А.Н., Гупалова Т.В., с соавт. Патент RU № 2701733 (14.12.2018)], была использована для настоящей конструкции. Для этого из плазмидной ДНК pentF-pspf удаляли вставку гена пневмококка pspf и заменяли ее на вставку гена na. Для этого плазмидную ДНК pentF-pspf гидролизовали ферментами NdEI и EcoRI, сайты для которых ограничивают последовательность гена pspf (фиг. 1). Такие же сайты рестрикции были заложены в праймеры EV и FV для амплификации фрагмента гена na. Полученный верхний фрагмент после гидролиза был использован для дальнейшего клонирования.
РНК вируса гриппа A17/утка/Потсдам/86/92(H5N2) была выделена из вируссодержащей аллантоисной жидкости с помощью Viral RNA Mini Kit (QIAGEN, Германия). ДНК на матрице вирусной РНК была получена с помощью одношаговой обратно-транскриптазной полимеразной цепной реакции (ПЦР) с праймерами EV и FV с помощью набора OneStep RT-PCR Kit (Qiagen, Германия). После электрофореза в 1.5% агарозном геле полученный ПЦР-продукт был вырезан из агарозного геля и гидролизован ферментами NdEI и EcoRI. Клонирование рестрицированного фрагмента после амплификации фрагмента ДНК, кодирующего фрагмент NA, осуществляли, используя верхний фрагмент после гидролиза плазмиды pentF-pspf. Продукты рестрикции разделяли с помощью электрофореза в 1% агарозном геле. ДНК рестрикты выделяли из агарозы с помощью набора «QIA quick Gel Extraction Kit» (Qiagen, USA), лигировали и трансформировали в гетерологичную систему E.coli DH5α. Среда для отбора содержала 500 мкг/мл эритромицина. Из полученных 17 клонов после трансформации были выделены ДНК, которые были проверены в реакции ПЦР с праймерами EV и FV и со специально сконструированными праймерами SeqF и SeqR. Положительный ответ дали 8 трансформантов. Из двух из них были выделены плазмиды, которые содержали ожидаемую вставку. Наличие вставки подтверждалось гидролизом плазмиды ферментами NdEI и EcoRI (фиг. 2).
Таким образом, в результате клонирования были получена плазмида pentF-na с ожидаемой вставкой и геном устойчивости к эритромицину.
В результате электропорации энтерококков созданной интегративной плазмидой было получено 13 трансформантов. Они были проверены в реакции ПЦР с праймерами EV и FV. Для этого из трансформантов выделяли ДНК, используя набор ДНК-экспресс (Литех, Россия). Положительный ответ дали 12 трансформантов (фиг. 3).
Из них выбрали один и обозначили его как NA+ клон. Была проведена амплификация ДНК, выделенной из этого клона с праймерами В1 и FV и B1 и SeqR для проведения секвенирования. Секвенирование ДНК, выделенной из NA + клона, было проведено с праймерами, соответствующими последовательности гена na (праймер SeqR) и последовательности хромосомной ДНК энтерококков (праймер В1) для подтверждения интеграции плазмидной ДНК pentF-na в хромосомную ДНК энтерококка (фиг. 4).
Этот клон энтерококков, экспрессирующий ген NA белка, выбран в качестве вакцинного препарата для дальнейшего исследования. Вакцинацию выбранным клоном энтерококков, экспрессирующим ген NA белка, проводили перорально путем кормления мышей. Корм был получен на основе пшена, обработанного культурой E. faecium L3, содержащей рекомбинантный белок в структуре пилей. Один грамм сухого корма содержал (4-8)х106 КОЕ модифицированного E. faecium L3. Для контрольной группы мышей готовили корм на основе той же партии пшена, обработав его исходным вариантом E. faecium L3.
Вакцинацию проводили тремя курсами по пять дней с интервалом в две недели между курсами. Каждый вечер у мышей убирали традиционный комбикорм и в кормушки насыпали пшено, содержащее вакцинный препарат E. faecium. Утром пшено заменяли комбикормом. В среднем за ночь мыши съедали по 2 г модифицированного энтерококком пшена. Режим кормления в контрольной и опытной группах был одинаковым.
Для оценки гуморального и местного специфического иммунного ответа через 4 дня после окончания второго и третьего курса вакцинации у контрольных и вакцинированных мышей забирали кровь. В сыворотке крови определяли уровень специфических IgG.
Было показано, что пероральная иммунизация мышей пробиотическим вектором, содержащим нейраминидазу подтипа N2, не только вызывала иммунный ответ к рекомбинантной нейраминидазе N1, но и защищала 67% иммунизированных животных от летальной инфекции вирусом пандемического гриппа A/Южная Африка/3626/13(H1N1) pdm.
Пример 1. Получение слитого гена
entF-na
и его клонирование.
Рекомбинантная плазмидная ДНК pentF-pspf, представляющая собой плазмидную ДНК, полученную в результате вставки суммарного фрагмента ДНК, состоящего из двух отдельных фрагментов гена пробиотика Enterococcus faecium L3 и фрагмента гена pspf, описанная нами ранее [Суворов А.Н., Гупалова Т.В., с соавт. Патент RU № 2701733 (14.12.2018)], была использована для создания слитого гена entF-na. Для этого из плазмидной ДНК pentF-pspf вырезали вставку гена пневмококка pspf, проведя гидролиз плазмидной ДНК pentF-pspf ферментами NdEI и EcoRI. Полученный верхний фрагмент после гидролиза был использован для дальнейшего клонирования.
На фиг. 1 представлена электрофореграмма рестрицированной плазмидной ДНК pentF-psp f ферментами NdEI и EcoRI, где цифрами обозначены:
1 - плазмида pentF-pspf - исходная;
2 - плазмида pentF-pspf рестрицированная;
3 - 100 п.н. ДНК-маркер (сверху вниз: 3000, 2000, 1000, 900, 800, 700, 600, 500, 400, 300, 200 и 100 нуклеотидных пар).
К-ДНК, полученная на матрице РНК вируса гриппа A17/утка/Потсдам/86/92(H5N2), была амплифицирована с праймерами EV и FV. Программа ПЦР состояла из: а) денатурации при 94°С в течение 30 сек, б) отжига праймеров при 55°С в течение 1 мин и в) синтеза при 72°С в течение 2 мин. Этот цикл повторяли 30 раз, после чего смесь инкубировали при 72°С на 10 мин. Полученный ПЦР продукт был вырезан из геля и также гидролизован ферментами NdEI и EcoRI. Клонирование рестрицированного фрагмента после амплификации ДНК, кодирующего фрагмент NA, осуществляли, используя верхний фрагмент после гидролиза плазмиды pentF-pspf. Продукты рестрикции разделяли с помощью электрофореза в 1% агарозном геле. ДНК-рестрикты выделяли из агарозы с помощью набора «QIAquick Gel Extraction Kit» (Qiagen, USA), лигировали и трансформировали в гетерологичную систему E. coli DH5α. Среда для отбора содержала 500 мкг/мл эритромицина. Из полученных 17 клонов после трансформации были выделены ДНК, которые были проверены в реакции ПЦР с праймерами EV и FV, а также со специально сконструированными праймерами SeqF и SeqR. Положительный ответ дали 8 трансформантов. Из двух из них были выделены плазмиды, которые содержали ожидаемую вставку. На фиг. 2 показана электрофореграмма рестрицированных плазмид NdEI и EcoRI), где цифрами обозначены: 1 - плазмида 1; 2 - плазмида 2; 3 - 100 п.н. ДНК - маркер (сверху вниз: 3000, 2000, 1000, 900, 800, 700, 600, 500, 400, 300, 200 и 100 нуклеотидных пар).
Для дальнейшей работы выбрали плазмиду, выделенную из клона 1, характеризующуюся нуклеотидной последовательностью SEQ ID No:1 и обозначенную как pentF-na, которая кодирует слитый белок NA, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID No:2.
Пример 2. Электропорация энтерококков.
Для электропорации энтерококков культуру Еnterococcus faecium L3 сеяли в 3 мл бульона Tood-Hewitt (THB) («Hi Media», Индия) и выращивали в течение ночи при 37°С, затем пересевали в 50 мл бульона THB 1 мл ночной культуры и выращивали ее до оптической плотности 0.3 при длине волны 650 нм. После этого культуру помещали в лед и затем отмывали трижды в 20 мл 10% глицерина при температуре 4°С. Полученный осадок суспендировали в 0.5 мл стерильного раствора глицерола, переосаждали, конечный осадок ресуспендировали в 0.3 мл того же раствора, разлили в пробирки по 50 мкл и проводили электропорацию в кювете с расстоянием между электродами 1 мм при напряжении 2100 В. Во льду к клеткам добавили полученную интегративную плазмиду pentF-na, 300 нг. Оптимальная продолжительность импульса составила 4-5 миллисекунд. После проведения разряда тока в кювету добавляли 1 мл THB, инкубировали 1 час и высевали на чашки с селективной средой, которая содержала 10 мкг/мл эритромицина. Затем ожидали появления трансформантов через 24 часа.
В результате электропорации энтерококков созданной интегративной плазмидой было получено 13 трансформантов. Они были проверены в реакции ПЦР с праймерами EV и FV. Для этого из трансформантов выделяли ДНК, используя набор ДНК-экспресс (Литех, Россия). Положительный ответ дали 12 трансформантов. На фиг. 3 приведена электрофореграмма амплифицированных ДНК-фрагментов, где цифрами обозначены:
1 - 8 - продукты ПЦР ДНК из полученных клонов (1-8);
9 - 100 п.н. ДНК-маркер (сверху вниз: 3000, 2000, 1000, 900, 800, 700, 600, 500, 400, 300, 200 и 100 нуклеотидных пар);
10 - продукт ПЦР плазмидной ДНК pentF-na;
11-15 - продукты ПЦР ДНК из полученных клонов (9-13);
16- 100 п.н. ДНК - маркер (сверху вниз: 3000, 2000, 1000, 900, 800, 700, 600, 500, 400, 300, 200 и 100 нуклеотидных пар);
17 - продукт ПЦР плазмидной ДНК pentF-na;
18-19 - продукт ПЦР без добавления ДНК.
Из них выбрали один и обозначили его как NA+ клон. Была проведена амплификация ДНК, выделенной из этого клона, с праймерами EV и FV и SeqF и SeqR. Для подтверждения интеграции плазмидной ДНК pentF-na в хромосомную ДНК энтерококка было проведено секвенирование ДНК, выделенной из NA+ клона, с праймерами, соответствующими последовательности гена na (праймер SeqR) и последовательности хромосомной ДНК энтерококков (праймер В1).
На фиг. 4 показан фрагмент нуклеотидной последовательности, SEQ ID No:1, отражающий интеграцию плазмидной ДНК pentF-na в хромосомную ДНК энтерококка. Жирным шрифтом выделены последовательности праймеров В1 и SeqR.
Клон энтерококков NA+ , экспрессирующий ген слитого NA белка, выбран в качестве вакцинного препарата для дальнейшего исследования.
Пример 3. Живая пробиотическая вакцина с включением
NA
при пероральном введении защищала мышей от летальной инфекции вирусом гриппа.
Мыши линии СВА были иммунизированы перорально (по 10 животных в группе). Сыворотки крови были собраны через 4 дня после окончания второго и третьего цикла кормления для определения IgG антител к NA подтипа N1 . Результаты изучения иммуногенности представлены на фиг. 5, IgG к рекомбинантной NA подтипа N1 , в сыворотках иммунизированных животных после пероральной иммунизации (ИФА)).
Через 10дней после окончания третьего цикла вакцинации мыши были интраназально инфицированы вирусом пандемического гриппа A/Южная Африка/3626/13(H1N1)pdm09, десять 50 процентных мышиных летальных доз (МЛД50). Результаты изучения защитной эффективности представлены на фиг. 6, где показана летальность (а) и динамика изменения веса (б) после инфицирования мышей вирусом A/Южная Африка/3626/13(H1N1)pdm09).
Показано, что пероральная иммунизация мышей пробиотическим вектором, содержащим нейраминидазу подтипа N2, не только вызывала иммунный ответ к рекомбинантной нейраминидазе N1, но и защищала 67% иммунизированных животных от летальной инфекции вирусом пандемического гриппа A/Южная Африка/3626/13 (H1N1) pdm.
--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> ФГБНУ "ИЭМ"
<120> Живая пробиотическая вакцина для профилактики инфекции, вызванной
вирусом гриппа
<140>
<141>
<150>
<151>
<160> 1
<170>
<210> 1
<211> 1692
<212> Нуклеотидная последовательность
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Нуклеотидная последовательность гена нейраминидазы вируса гриппа,
экспрессированная в системе Escherichia coli
<400> 1
atgagagcag ctggtattga gttgaatgat acatttctat ctatttacag tttaaatgga 60
cagtatcagc aacgtgtgtc ttggtataat gacaataatg aatctgtcgg tgaacgtaat 120
attgatatga gagaatttgt tgggtatgaa aaaatgggta gcttacctta ttttgtcaca 180
acagatacag catgtgcaga atacaaagct cctgcgttat caacaaacaa tttaacttca 240
aaagtagtgg gaggacgtgc agaaaaggct tatagctcga atgatcattt caccgatgtt 300
gtaggagctg atacttatca cagaagtggt gtaacgtata cgcttcaagg cgcttcccca 360
acattcatga ttggcgcaaa tacgaatagt atgatgttta gctttgatac tgcattgcta 420
tggacaccac aaccatcgaa gcctacaaaa gaagtgttta acaaagctaa tactgaagag 480
gcagcacaca atattgacaa aaaagtgatt ccacaaggat cagatgttta ctatcatatt 540
catcaaaagt ttgatgcatt aacagtcaac acaatgaaca aatacaaatc atttaaaatc 600
actgatacct ttgacagcaa aaattttgat atggtatcgg atgggaaaaa ctatgatggc 660
gcattggcat atggcgatcc tggcaagtgt tatcaatttg cactcgggca ggggaccaca 720
ctagacaaca aacattcaaa tggcacaata catgatagaa tccctcatcg aaccctatta 780
atgaatgagt tgggtgttcc atttcattta ggaaccaaac aagtgtgtgt agcatggtcc 840
agctcaagtt gtcacgatgg aaaagcatgg ttgcatgttt gtgtcactgg ggatgataga 900
aatgcaactg ctagcttcat ttatgacggg aggcttgtgg acagtattgg ttcatggtct 960
caaaatatcc tcaggaccca ggagtcggaa tgcgtttgta tcaatgggac ttgcacagta 1020
gtaatgactg atggaagtgc atcaggaaga gccgatacta gaatactatt cattaaagag 1080
gggaaaattg tccatattag cccattgtca ggaagtgctc agcatataga ggagtgttcc 1140
tgttaccctc gatatcctga cgtcagatgt atctgcagag acaactggaa aggctctaat 1200
aggcccgtta tagacataaa tatggaagat tatagcattg attccagtta tgtgtgctca 1260
gggcttgttg gcgacacacc caggaacgac gacagctcta ggaattccgg ttctgcgcga 1320
gtgatagata tgagtacagg aaaagatatt acttcagaag gtacactaac ctatgatagc 1380
aatttaagaa cgctgaaatg ggaagcttcc gctgatttct taagtaaaaa tcttttagat 1440
ggacgagaaa ttcaactgat atttacagct aaaactccac tacagtcaga aaaaaatatt 1500
gataaccaag ccgtagcagc agtagagaat gtttctaata aaacgaatgt tgtaacaatt 1560
ggtgttgatc ctaacttacc acaagtcatt gttcctagaa caggttctac acatttagta 1620
acaattttag tggttagctt agtattactt gtgttagcta ctcttagtta tgtggctctg 1680
aagttcaatt aa 1692
<210> 2
<211> 563
<212> Аминокислотная последовательность
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность гена слитого белка NA, способного
вызывать синтез анти-NA IgG антител, обладающих протективными свойствами в
отношении вируса гриппа
<400> 2
Met Arg Ala Ala Gly Ile Glu Leu Asn Asp Thr Phe Leu Ser Ile Tyr
1 5 10 15
Ser Leu Asn Gly Gln Tyr Gln Gln Arg Val Ser Trp Tyr Asn Asp Asn
20 25 30
Asn Glu Ser Val Gly Glu Arg Asn Ile Asp Met Arg Glu Phe Val Gly
35 40 45
Tyr Glu Lys Met Gly Ser Leu Pro Tyr Phe Val Thr Thr Asp Thr Ala
50 55 60
Cys Ala Glu Tyr Lys Ala Pro Ala Leu Ser Thr Asn Asn Leu Thr Ser
65 70 75 80
Lys Val Val Gly Gly Arg Ala Glu Lys Ala Tyr Ser Ser Asn Asp His
85 90 95
Phe Thr Asp Val Val Gly Ala Asp Thr Tyr His Arg Ser Gly Val Thr
100 105 110
Tyr Thr Leu Gln Gly Ala Ser Pro Thr Phe Met Ile Gly Ala Asn Thr
115 120 125
Asn Ser Met Met Phe Ser Phe Asp Thr Ala Leu Leu Trp Thr Pro Gln
130 135 140
Pro Ser Lys Pro Thr Lys Glu Val Phe Asn Lys Ala Asn Thr Glu Glu
145 150 155 160
Ala Ala His Asn Ile Asp Lys Lys Val Ile Pro Gln Gly Ser Asp Val
165 170 175
Tyr Tyr His Ile His Gln Lys Phe Asp Ala Leu Thr Val Asn Thr Met
180 185 190
Asn Lys Tyr Lys Ser Phe Lys Ile Thr Asp Thr Phe Asp Ser Lys Asn
195 200 205
Phe Asp Met Val Ser Asp Gly Lys Asn Tyr Asp Gly Ala Leu Ala Tyr
210 215 220
Gly Asp Pro Gly Lys Cys Tyr Gln Phe Ala Leu Gly Gln Gly Thr Thr
225 230 235 240
Leu Asp Asn Lys His Ser Asn Gly Thr Ile His Asp Arg Ile Pro His
245 250 255
Arg Thr Leu Leu Met Asn Glu Leu Gly Val Pro Phe His Leu Gly Thr
260 265 270
Lys Gln Val Cys Val Ala Trp Ser Ser Ser Ser Cys His Asp Gly Lys
275 280 285
Ala Trp Leu His Val Cys Val Thr Gly Asp Asp Arg Asn Ala Thr Ala
290 295 300
Ser Phe Ile Tyr Asp Gly Arg Leu Val Asp Ser Ile Gly Ser Trp Ser
305 310 315 320
Gln Asn Ile Leu Arg Thr Gln Glu Ser Glu Cys Val Cys Ile Asn Gly
325 330 335
Thr Cys Thr Val Val Met Thr Asp Gly Ser Ala Ser Gly Arg Ala Asp
340 345 350
Thr Arg Ile Leu Phe Ile Lys Glu Gly Lys Ile Val His Ile Ser Pro
355 360 365
Leu Ser Gly Ser Ala Gln His Ile Glu Glu Cys Ser Cys Tyr Pro Arg
370 375 380
Tyr Pro Asp Val Arg Cys Ile Cys Arg Asp Asn Trp Lys Gly Ser Asn
385 390 395 400
Arg Pro Val Ile Asp Ile Asn Met Glu Asp Tyr Ser Ile Asp Ser Ser
405 410 415
Tyr Val Cys Ser Gly Leu Val Gly Asp Thr Pro Arg Asn Asp Asp Ser
420 425 430
Ser Arg Asn Ser Gly Ser Ala Arg Val Ile Asp Met Ser Thr Gly Lys
435 440 445
Asp Ile Thr Ser Glu Gly Thr Leu Thr Tyr Asp Ser Asn Leu Arg Thr
450 455 460
Leu Lys Trp Glu Ala Ser Ala Asp Phe Leu Ser Lys Asn Leu Leu Asp
465 470 475 480
Gly Arg Glu Ile Gln Leu Ile Phe Thr Ala Lys Thr Pro Leu Gln Ser
485 490 495
Glu Lys Asn Ile Asp Asn Gln Ala Val Ala Ala Val Glu Asn Val Ser
500 505 510
Asn Lys Thr Asn Val Val Thr Ile Gly Val Asp Pro Asn Leu Pro Gln
515 520 525
Val Ile Val Pro Arg Thr Gly Ser Thr His Leu Val Thr Ile Leu Val
530 535 540
Val Ser Leu Val Leu Leu Val Leu Ala Thr Leu Ser Tyr Val Ala Leu
545 550 555 560
Lys Phe Asn
563
<---
Claims (1)
- Способ создания живого вакцинного препарата на основе биологически активного штамма E. faecium L3, заключающийся в том, что проводят электропорацию культуры энтерококков Enterococcus faecium L3 c рекомбинантной плазмидой ДНК entF-na, имеющей нуклеотидную последовательность SEQ ID NO:1, и выбирают клон энтерококков NA+, экспрессирующий белок, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019137928A RU2777061C2 (ru) | 2019-11-22 | Живая пробиотическая вакцина для профилактики инфекции, вызванной вирусом гриппа |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019137928A RU2777061C2 (ru) | 2019-11-22 | Живая пробиотическая вакцина для профилактики инфекции, вызванной вирусом гриппа |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2019137928A RU2019137928A (ru) | 2021-05-24 |
| RU2019137928A3 RU2019137928A3 (ru) | 2021-05-24 |
| RU2777061C2 true RU2777061C2 (ru) | 2022-08-01 |
Family
ID=
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP3000473B1 (en) * | 2014-09-23 | 2017-07-05 | Velleja Research SRL | Probiotic composition for use in the prevention of birth-acquired bacterial and fungal infections in newborns |
| RU2640250C2 (ru) * | 2015-10-23 | 2017-12-27 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Институт экспериментальной медицины" (ФГБНУ "ИЭМ") | Способ введения генов патогенных стрептококков в хромосомную днк пробиотического штамма enterococcus faecium l3 для экспрессии в пилях |
| RU2701733C1 (ru) * | 2018-12-14 | 2019-10-01 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Институт экспериментальной медицины" (ФГБНУ "ИЭМ") | Живая вакцина на основе штамма пробиотиков ENTEROCOCCUS FAECIUM L3 для профилактики инфекции, вызванной STREPTOCOCCUS PNEUMONIE |
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP3000473B1 (en) * | 2014-09-23 | 2017-07-05 | Velleja Research SRL | Probiotic composition for use in the prevention of birth-acquired bacterial and fungal infections in newborns |
| RU2640250C2 (ru) * | 2015-10-23 | 2017-12-27 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Институт экспериментальной медицины" (ФГБНУ "ИЭМ") | Способ введения генов патогенных стрептококков в хромосомную днк пробиотического штамма enterococcus faecium l3 для экспрессии в пилях |
| RU2701733C1 (ru) * | 2018-12-14 | 2019-10-01 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Институт экспериментальной медицины" (ФГБНУ "ИЭМ") | Живая вакцина на основе штамма пробиотиков ENTEROCOCCUS FAECIUM L3 для профилактики инфекции, вызванной STREPTOCOCCUS PNEUMONIE |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5992337B2 (ja) | インフルエンザ核酸分子及びそれから作製したワクチン | |
| CN113186173B (zh) | 一种基于减毒流感病毒载体的新型冠状病毒肺炎疫苗 | |
| US9598462B2 (en) | Composite antigenic sequences and vaccines | |
| JP5551774B2 (ja) | インフルエンザワクチン、組成物、および使用方法 | |
| JP2022538673A (ja) | アフリカ豚熱ワクチン | |
| TW201701900A (zh) | 二價豬流感病毒疫苗 | |
| JP2016517414A (ja) | インフルエンザ核酸分子及びそれから作製したワクチン | |
| US9963490B2 (en) | Influenza nucleoprotein vaccines | |
| MX2012008506A (es) | Vectores para vacunas y metodos para potenciar respuestas inmunes. | |
| US11866463B2 (en) | Immunogenic compositions to treat and prevent microbial infections | |
| CN106434728B (zh) | 表达高致病性禽流感h5n1血凝素ha蛋白的重组枯草芽孢杆菌 | |
| US20200268874A1 (en) | Methods of Treating and Preventing Infections | |
| EP4126026A1 (en) | Influenza vaccines | |
| RU2777061C2 (ru) | Живая пробиотическая вакцина для профилактики инфекции, вызванной вирусом гриппа | |
| RU2776479C1 (ru) | Живая пробиотическая вакцина, содержащая консервативные эпитопы вируса гриппа А (LAH+4M2e), для профилактики гриппозной инфекции | |
| KR101525180B1 (ko) | 인플루엔자 바이러스 항원의 세포표면 발현벡터 및 이에 의해 형질전환된 미생물 | |
| KR102211077B1 (ko) | 바이러스 유사 입자를 이용한 슈도-타입 광견병 백신 | |
| KR20180073067A (ko) | 인플루엔자 바이러스의 h9 및 h5의 다중 아형에 대한 교차 면역반응을 형성하는 신규한 재조합 인플루엔자 바이러스 및 이를 포함하는 백신 | |
| RU2782529C1 (ru) | Способ создания живого штамма энтерококка L3-SARS на основе биологически активного штамма Е. faecium L3 | |
| Oh et al. | The B subunits of cholera and Escherichia coli heat-labile toxins enhance the immune responses in mice orally immunised with a recombinant live P-fimbrial vaccine for avian pathogenic E. coli | |
| KR20150118400A (ko) | 인플루엔자 바이러스의 다중 아형에 대한 교차 면역반응을 형성하는 신규한 재조합 바이러스 백신 | |
| WO2016013824A1 (ko) | 바이러스 중화항원 단백질 발현을 위한 보르데텔라 백일해 균주 및 이를 이용한 면역원성 조성물 | |
| Chen et al. | Influenza H7N9 Virus Hemagglutinin With T169A Mutation Possesses Enhanced Thermostability and Shows Improved Immune Protection Against Lethal H7N9 Virus Challenge in Chickens | |
| JP2016172779A (ja) | インフルエンザワクチン、組成物、および使用方法 | |
| Thapa | Protective mucosal immunity elicited by intranasal DNA vaccination expressing HA1 of equine-2 influenza virus |