RU2782529C1 - Способ создания живого штамма энтерококка L3-SARS на основе биологически активного штамма Е. faecium L3 - Google Patents
Способ создания живого штамма энтерококка L3-SARS на основе биологически активного штамма Е. faecium L3 Download PDFInfo
- Publication number
- RU2782529C1 RU2782529C1 RU2021138939A RU2021138939A RU2782529C1 RU 2782529 C1 RU2782529 C1 RU 2782529C1 RU 2021138939 A RU2021138939 A RU 2021138939A RU 2021138939 A RU2021138939 A RU 2021138939A RU 2782529 C1 RU2782529 C1 RU 2782529C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- sars
- enterococcus
- dna
- strain
- gene
- Prior art date
Links
- 241000982579 Enterococcus faecium L3 Species 0.000 title claims abstract description 31
- 241000194033 Enterococcus Species 0.000 title claims abstract description 17
- 229920003013 deoxyribonucleic acid Polymers 0.000 claims abstract description 68
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 18
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 18
- 229920001850 Nucleic acid sequence Polymers 0.000 claims abstract description 7
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 4
- 229960005486 vaccines Drugs 0.000 abstract description 42
- 241000315672 SARS coronavirus Species 0.000 abstract description 7
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 201000003176 severe acute respiratory syndrome Diseases 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 230000000529 probiotic Effects 0.000 description 31
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 31
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 31
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 21
- 241001678559 COVID-19 virus Species 0.000 description 14
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 14
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 13
- 230000002759 chromosomal Effects 0.000 description 12
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 description 10
- 230000001717 pathogenic Effects 0.000 description 10
- 229920000160 (ribonucleotides)n+m Polymers 0.000 description 9
- 201000009910 diseases by infectious agent Diseases 0.000 description 9
- 108091007172 antigens Proteins 0.000 description 8
- 102000038129 antigens Human genes 0.000 description 8
- 206010053983 Corona virus infection Diseases 0.000 description 7
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 7
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 7
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 7
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- XGDCYUQSFDQISZ-BQBZGAKWSA-N Leu-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XGDCYUQSFDQISZ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 5
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 5
- 108091006028 chimera Proteins 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 108010037850 glycylvaline Proteins 0.000 description 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 5
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 230000001131 transforming Effects 0.000 description 5
- HXWUJJADFMXNKA-UHFFFAOYSA-N Asparaginyl-Leucine Chemical compound CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(N)=O HXWUJJADFMXNKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000008904 Betacoronavirus Species 0.000 description 4
- ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N Erythromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)C[C@@](C)(O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N 0.000 description 4
- JPNRPAJITHRXRH-UHFFFAOYSA-N Lysyl-Asparagine Chemical compound NCCCCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC(N)=O JPNRPAJITHRXRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000193998 Streptococcus pneumoniae Species 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 244000052616 bacterial pathogens Species 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 229960003276 erythromycin Drugs 0.000 description 4
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 230000002194 synthesizing Effects 0.000 description 4
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 4
- 229940064005 Antibiotic throat preparations Drugs 0.000 description 3
- 229940083879 Antibiotics FOR TREATMENT OF HEMORRHOIDS AND ANAL FISSURES FOR TOPICAL USE Drugs 0.000 description 3
- 229940042052 Antibiotics for systemic use Drugs 0.000 description 3
- 229940042786 Antitubercular Antibiotics Drugs 0.000 description 3
- KWBQPGIYEZKDEG-FSPLSTOPSA-N Asn-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O KWBQPGIYEZKDEG-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 3
- NTQDELBZOMWXRS-UHFFFAOYSA-N Aspartyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(O)=O NTQDELBZOMWXRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100019404 CDSN Human genes 0.000 description 3
- 101700062689 CDSN Proteins 0.000 description 3
- 210000000349 Chromosomes Anatomy 0.000 description 3
- 101700079760 EFCB Proteins 0.000 description 3
- 101710005090 ERVFC1-1 Proteins 0.000 description 3
- 102100014722 ERVS71-1 Human genes 0.000 description 3
- 101710013371 ERVS71-1 Proteins 0.000 description 3
- 241000194031 Enterococcus faecium Species 0.000 description 3
- 229940093922 Gynecological Antibiotics Drugs 0.000 description 3
- 101710005864 HI_0216 Proteins 0.000 description 3
- WKXVAXOSIPTXEC-UHFFFAOYSA-N Isoleucyl-Aspartate Chemical compound CCC(C)C(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC(O)=O WKXVAXOSIPTXEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QOOWRKBDDXQRHC-BQBZGAKWSA-N L-lysyl-L-alanine Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN QOOWRKBDDXQRHC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 3
- OTXBNHIUIHNGAO-UWVGGRQHSA-N Leu-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN OTXBNHIUIHNGAO-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 3
- JYOAXOMPIXKMKK-UHFFFAOYSA-N Leucyl-Glutamine Chemical compound CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCC(N)=O JYOAXOMPIXKMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YQAIUOWPSUOINN-IUCAKERBSA-N Lys-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN YQAIUOWPSUOINN-IUCAKERBSA-N 0.000 description 3
- 101710005865 MPN_201 Proteins 0.000 description 3
- 101710005862 MPN_285 Proteins 0.000 description 3
- 101710005861 MPN_289 Proteins 0.000 description 3
- 101710005860 MPN_290 Proteins 0.000 description 3
- 101710029070 MPN_343 Proteins 0.000 description 3
- 101710005841 MPN_365 Proteins 0.000 description 3
- 101710005863 MPN_615 Proteins 0.000 description 3
- 101710005859 MPN_638 Proteins 0.000 description 3
- BXNGIHFNNNSEOS-UWVGGRQHSA-N Phe-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 BXNGIHFNNNSEOS-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 3
- NYQBYASWHVRESG-MIMYLULJSA-N Phe-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 NYQBYASWHVRESG-MIMYLULJSA-N 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- LTFSLKWFMWZEBD-IMJSIDKUSA-N Ser-Asn Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O LTFSLKWFMWZEBD-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 3
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 3
- 229940031000 Streptococcus pneumoniae Drugs 0.000 description 3
- QOLYAJSZHIJCTO-VQVTYTSYSA-N Thr-Pro Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O QOLYAJSZHIJCTO-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 3
- 229940024982 Topical Antifungal Antibiotics Drugs 0.000 description 3
- 101710004211 VTN Proteins 0.000 description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 3
- 108010092854 aspartyllysine Proteins 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial Effects 0.000 description 3
- 230000003115 biocidal Effects 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- STKYPAFSDFAEPH-LURJTMIESA-N gly-val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN STKYPAFSDFAEPH-LURJTMIESA-N 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 229940079866 intestinal antibiotics Drugs 0.000 description 3
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 3
- 108010017391 lysylvaline Proteins 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 200000000016 middle east respiratory syndrome Diseases 0.000 description 3
- 229940005935 ophthalmologic Antibiotics Drugs 0.000 description 3
- 244000052769 pathogens Species 0.000 description 3
- 101700016463 pls Proteins 0.000 description 3
- 101700083974 prrB Proteins 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic Effects 0.000 description 3
- IOUPEELXVYPCPG-UHFFFAOYSA-N val-gly Chemical compound CC(C)C(N)C(=O)NCC(O)=O IOUPEELXVYPCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100017866 ACE2 Human genes 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- BUQICHWNXBIBOG-LMVFSUKVSA-N Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)N BUQICHWNXBIBOG-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 2
- 108090000975 Angiotensin-converting enzyme 2 Proteins 0.000 description 2
- XNSKSTRGQIPTSE-UHFFFAOYSA-N Arginyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCCNC(N)=N XNSKSTRGQIPTSE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HZYFHQOWCFUSOV-IMJSIDKUSA-N Asn-Asp Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O HZYFHQOWCFUSOV-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- SONUFGRSSMFHFN-IMJSIDKUSA-N Asn-Ser Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SONUFGRSSMFHFN-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- FYRVDDJMNISIKJ-UWVGGRQHSA-N Asn-Tyr Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 FYRVDDJMNISIKJ-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- OAMLVOVXNKILLQ-BQBZGAKWSA-N Asp-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O OAMLVOVXNKILLQ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- YZQCXOFQZKCETR-UWVGGRQHSA-N Asp-Phe Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 YZQCXOFQZKCETR-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- VBKIFHUVGLOJKT-UHFFFAOYSA-N Asparaginyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(N)=O VBKIFHUVGLOJKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001405 Coding region Polymers 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 210000000805 Cytoplasm Anatomy 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 241000620209 Escherichia coli DH5[alpha] Species 0.000 description 2
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 2
- YSWHPLCDIMUKFE-QWRGUYRKSA-N Glu-Tyr Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 YSWHPLCDIMUKFE-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N Gly-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- MUFXDFWAJSPHIQ-XDTLVQLUSA-N Ile-Tyr Chemical compound CC[C@H](C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CC=C(O)C=C1 MUFXDFWAJSPHIQ-XDTLVQLUSA-N 0.000 description 2
- HFKJBCPRWWGPEY-BQBZGAKWSA-N L-arginyl-L-glutamic acid Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HFKJBCPRWWGPEY-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- JXNRXNCCROJZFB-RYUDHWBXSA-N L-tyrosyl-L-arginine Chemical compound NC(=N)NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 JXNRXNCCROJZFB-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 2
- 241000880493 Leptailurus serval Species 0.000 description 2
- LRKCBIUDWAXNEG-CSMHCCOUSA-N Leu-Thr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O LRKCBIUDWAXNEG-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 2
- HGNRJCINZYHNOU-LURJTMIESA-N Lys-Gly Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O HGNRJCINZYHNOU-LURJTMIESA-N 0.000 description 2
- ATIPDCIQTUXABX-UWVGGRQHSA-N Lys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN ATIPDCIQTUXABX-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- 108020004999 Messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241000736262 Microbiota Species 0.000 description 2
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 2
- HWMGTNOVUDIKRE-UWVGGRQHSA-N Phe-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 HWMGTNOVUDIKRE-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- JXWLMUIXUXLIJR-QWRGUYRKSA-N Phe-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 JXWLMUIXUXLIJR-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- 206010061353 Pneumococcal infection Diseases 0.000 description 2
- SSJMZMUVNKEENT-IMJSIDKUSA-N Ser-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CO SSJMZMUVNKEENT-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- LAFKUZYWNCHOHT-WHFBIAKZSA-N Ser-Glu Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O LAFKUZYWNCHOHT-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- PPQRSMGDOHLTBE-UWVGGRQHSA-N Ser-Phe Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 PPQRSMGDOHLTBE-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- ILVGMCVCQBJPSH-WDSKDSINSA-N Ser-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO ILVGMCVCQBJPSH-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- LDEBVRIURYMKQS-UHFFFAOYSA-N Serinyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CO LDEBVRIURYMKQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IOWJRKAVLALBQB-IWGUZYHVSA-N Thr-Asp Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O IOWJRKAVLALBQB-IWGUZYHVSA-N 0.000 description 2
- BIYXEUAFGLTAEM-WUJLRWPWSA-N Thr-Gly Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O BIYXEUAFGLTAEM-WUJLRWPWSA-N 0.000 description 2
- IQHUITKNHOKGFC-MIMYLULJSA-N Thr-Phe Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 IQHUITKNHOKGFC-MIMYLULJSA-N 0.000 description 2
- PDSLRCZINIDLMU-QWRGUYRKSA-N Tyr-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 PDSLRCZINIDLMU-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- ONWMQORSVZYVNH-UHFFFAOYSA-N Tyrosyl-Asparagine Chemical compound NC(=O)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 ONWMQORSVZYVNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- STTYIMSDIYISRG-WDSKDSINSA-N Val-Ser Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O STTYIMSDIYISRG-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- GVRKWABULJAONN-UHFFFAOYSA-N Valyl-Threonine Chemical compound CC(C)C(N)C(=O)NC(C(C)O)C(O)=O GVRKWABULJAONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000016350 Viral Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 2
- 210000002845 Virion Anatomy 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 230000003042 antagnostic Effects 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic Effects 0.000 description 2
- 108010013835 arginine glutamate Proteins 0.000 description 2
- 108010069205 aspartyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 2
- 108010047857 aspartylglycine Proteins 0.000 description 2
- 230000001413 cellular Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000000875 corresponding Effects 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 230000002068 genetic Effects 0.000 description 2
- 108010078144 glutaminyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- VPZXBVLAVMBEQI-VKHMYHEASA-N gly ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 108010044374 isoleucyl-tyrosine Proteins 0.000 description 2
- 108010053037 kyotorphin Proteins 0.000 description 2
- 230000001665 lethal Effects 0.000 description 2
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 2
- 108010057821 leucylproline Proteins 0.000 description 2
- 108010064235 lysylglycine Proteins 0.000 description 2
- 239000002609 media Substances 0.000 description 2
- 229920002106 messenger RNA Polymers 0.000 description 2
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 108010012581 phenylalanylglutamate Proteins 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 108091007521 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 108010026333 seryl-proline Proteins 0.000 description 2
- 108010051110 tyrosyl-lysine Proteins 0.000 description 2
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- 230000003612 virological Effects 0.000 description 2
- NJMYZEJORPYOTO-UHFFFAOYSA-N γ-glutamyl-Proline Chemical compound NC(=O)CCC(N)C(=O)N1CCCC1C(O)=O NJMYZEJORPYOTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DSTWKJOBKSMVCV-UWVGGRQHSA-N (2S)-2-[[(2R)-2-amino-3-sulfanylpropanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 DSTWKJOBKSMVCV-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- UCXQIIIFOOGYEM-ULQDDVLXSA-N (2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-amino-4-methylpentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 UCXQIIIFOOGYEM-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- FAQVCWVVIYYWRR-WHFBIAKZSA-N (2S)-2-[[(2S)-2,5-diamino-5-oxopentanoyl]amino]propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O FAQVCWVVIYYWRR-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- QXRNAOYBCYVZCD-BQBZGAKWSA-N (2S)-6-amino-2-[[(2S)-2-aminopropanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN QXRNAOYBCYVZCD-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- ULXYQAJWJGLCNR-YUMQZZPRSA-N (3S)-3-[[(2S)-2-amino-4-methylpentanoyl]amino]-4-(carboxymethylamino)-4-oxobutanoic acid Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O ULXYQAJWJGLCNR-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- PVMPDMIKUVNOBD-CIUDSAMLSA-N (3S)-3-[[(2S)-2-amino-4-methylpentanoyl]amino]-4-[[(1S)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O PVMPDMIKUVNOBD-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- KTGFOCFYOZQVRJ-UHFFFAOYSA-N 2-[(2-amino-3-methylpentanoyl)amino]pentanedioic acid Chemical compound CCC(C)C(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCC(O)=O KTGFOCFYOZQVRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RLMISHABBKUNFO-WHFBIAKZSA-N 2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-azaniumylpropanoyl]amino]propanoyl]amino]acetate Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O RLMISHABBKUNFO-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N 4-amino-5-[(1-carboxy-2-phenylethyl)amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XAEWTDMGFGHWFK-IMJSIDKUSA-N Ala-Asp Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O XAEWTDMGFGHWFK-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- XZWXFWBHYRFLEF-FSPLSTOPSA-N Ala-His Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 XZWXFWBHYRFLEF-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 1
- WPWUFUBLGADILS-WDSKDSINSA-N Ala-Pro Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O WPWUFUBLGADILS-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- IPWKGIFRRBGCJO-IMJSIDKUSA-N Ala-Ser Chemical compound C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CO)C([O-])=O IPWKGIFRRBGCJO-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- WUGMRIBZSVSJNP-UFBFGSQYSA-N Ala-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)C)C(O)=O)=CNC2=C1 WUGMRIBZSVSJNP-UFBFGSQYSA-N 0.000 description 1
- SIFXMYAHXJGAFC-WDSKDSINSA-N Arg-Asp Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O SIFXMYAHXJGAFC-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- IJYZHIOOBGIINM-WDSKDSINSA-N Arg-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N IJYZHIOOBGIINM-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- DAQIJMOLTMGJLO-YUMQZZPRSA-N Arg-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N DAQIJMOLTMGJLO-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- JSLGXODUIAFWCF-UHFFFAOYSA-N Arginyl-Asparagine Chemical compound NC(N)=NCCCC(N)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O JSLGXODUIAFWCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RJUHZPRQRQLCFL-IMJSIDKUSA-N Asn-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O RJUHZPRQRQLCFL-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- QCWJKJLNCFEVPQ-WHFBIAKZSA-N Asn-Gln Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O QCWJKJLNCFEVPQ-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- IIFDPDVJAHQFSR-WHFBIAKZSA-N Asn-Glu Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O IIFDPDVJAHQFSR-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- KLKHFFMNGWULBN-VKHMYHEASA-N Asn-Gly Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O KLKHFFMNGWULBN-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- DVUFTQLHHHJEMK-IMJSIDKUSA-N Asp-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O DVUFTQLHHHJEMK-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- HSPSXROIMXIJQW-BQBZGAKWSA-N Asp-His Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 HSPSXROIMXIJQW-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- DWBZEJHQQIURML-IMJSIDKUSA-N Asp-Ser Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DWBZEJHQQIURML-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- NALWOULWGHTVDA-UWVGGRQHSA-N Asp-Tyr Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 NALWOULWGHTVDA-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- CPMKYMGGYUFOHS-FSPLSTOPSA-N Asp-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CPMKYMGGYUFOHS-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 1
- MQLZLIYPFDIDMZ-UHFFFAOYSA-N Asparaginyl-Isoleucine Chemical compound CCC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(N)=O MQLZLIYPFDIDMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QJMCHPGWFZZRID-UHFFFAOYSA-N Asparaginyl-Lysine Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC(N)=O QJMCHPGWFZZRID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UKGGPJNBONZZCM-WDSKDSINSA-N Aspartyl-L-proline Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O UKGGPJNBONZZCM-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 241000288673 Chiroptera Species 0.000 description 1
- HAYVTMHUNMMXCV-UHFFFAOYSA-N Cysteinyl-Alanine Chemical compound OC(=O)C(C)NC(=O)C(N)CS HAYVTMHUNMMXCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AYKQJQVWUYEZNU-UHFFFAOYSA-N Cysteinyl-Asparagine Chemical compound SCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC(N)=O AYKQJQVWUYEZNU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OELDIVRKHTYFNG-UHFFFAOYSA-N Cysteinyl-Valine Chemical compound CC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CS OELDIVRKHTYFNG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020001019 DNA Primers Proteins 0.000 description 1
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 210000002472 Endoplasmic Reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 208000010227 Enterocolitis Diseases 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 210000003608 Feces Anatomy 0.000 description 1
- 241001076388 Fimbria Species 0.000 description 1
- 108010000916 Fimbriae Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229960000304 Folic Acid Drugs 0.000 description 1
- LOJYQMFIIJVETK-WDSKDSINSA-N Gln-Gln Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O LOJYQMFIIJVETK-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- JEFZIKRIDLHOIF-BYPYZUCNSA-N Gln-Gly Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O JEFZIKRIDLHOIF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N Glu-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- HHSJMSCOLJVTCX-UHFFFAOYSA-N Glutaminyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(N)=O HHSJMSCOLJVTCX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FUESBOMYALLFNI-VKHMYHEASA-N Gly-Asn Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O FUESBOMYALLFNI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- IEFJWDNGDZAYNZ-BYPYZUCNSA-N Gly-Glu Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O IEFJWDNGDZAYNZ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- JBCLFWXMTIKCCB-VIFPVBQESA-N Gly-Phe Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JBCLFWXMTIKCCB-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OLIFSFOFKGKIRH-WUJLRWPWSA-N Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN OLIFSFOFKGKIRH-WUJLRWPWSA-N 0.000 description 1
- XBGGUPMXALFZOT-VIFPVBQESA-N Gly-Tyr Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XBGGUPMXALFZOT-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 210000002288 Golgi Apparatus Anatomy 0.000 description 1
- CTCFZNBRZBNKAX-UHFFFAOYSA-N Histidinyl-Glutamine Chemical compound NC(=O)CCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 CTCFZNBRZBNKAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IDXZDKMBEXLFMB-UHFFFAOYSA-N Histidinyl-Isoleucine Chemical compound CCC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 IDXZDKMBEXLFMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 208000006572 Human Influenza Diseases 0.000 description 1
- CNPNWGHRMBQHBZ-ZKWXMUAHSA-N Ile-Gln Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O CNPNWGHRMBQHBZ-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- UCGDDTHMMVWVMV-FSPLSTOPSA-N Ile-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O UCGDDTHMMVWVMV-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 1
- BBIXOODYWPFNDT-CIUDSAMLSA-N Ile-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O BBIXOODYWPFNDT-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- TWVKGYNQQAUNRN-ACZMJKKPSA-N Ile-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CO)C([O-])=O TWVKGYNQQAUNRN-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- 210000000987 Immune System Anatomy 0.000 description 1
- 206010022000 Influenza Diseases 0.000 description 1
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 description 1
- DRCKHKZYDLJYFQ-UHFFFAOYSA-N Isoleucyl-Threonine Chemical compound CCC(C)C(N)C(=O)NC(C(C)O)C(O)=O DRCKHKZYDLJYFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VYZAGTDAHUIRQA-WHFBIAKZSA-N L-alanyl-L-glutamic acid Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O VYZAGTDAHUIRQA-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- RNKSNIBMTUYWSH-YFKPBYRVSA-N L-prolylglycine Chemical compound [O-]C(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 RNKSNIBMTUYWSH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- JAQGKXUEKGKTKX-HOTGVXAUSA-N L-tyrosyl-L-tyrosine Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 JAQGKXUEKGKTKX-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 1
- 241000194035 Lactococcus lactis Species 0.000 description 1
- MLTRLIITQPXHBJ-BQBZGAKWSA-N Leu-Asn Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O MLTRLIITQPXHBJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- HIZYETOZLYFUFF-BQBZGAKWSA-N Leu-Cys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O HIZYETOZLYFUFF-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- XWOBNBRUDDUEEY-UWVGGRQHSA-N Leu-His Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 XWOBNBRUDDUEEY-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- VTJUNIYRYIAIHF-IUCAKERBSA-N Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O VTJUNIYRYIAIHF-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- BQVUABVGYYSDCJ-ZFWWWQNUSA-N Leu-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 BQVUABVGYYSDCJ-ZFWWWQNUSA-N 0.000 description 1
- CIOWSLJGLSUOME-BQBZGAKWSA-N Lys-Asp Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O CIOWSLJGLSUOME-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- FMIIKPHLJKUXGE-GUBZILKMSA-N Lys-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN FMIIKPHLJKUXGE-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- NVGBPTNZLWRQSY-UWVGGRQHSA-N Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN NVGBPTNZLWRQSY-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- XBZOQGHZGQLEQO-IUCAKERBSA-N Lys-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN XBZOQGHZGQLEQO-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- QCZYYEFXOBKCNQ-STQMWFEESA-N Lys-Phe Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 QCZYYEFXOBKCNQ-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- YSZNURNVYFUEHC-BQBZGAKWSA-N Lys-Ser Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YSZNURNVYFUEHC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- ZOKVLMBYDSIDKG-CSMHCCOUSA-N Lys-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN ZOKVLMBYDSIDKG-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- UASDAHIAHBRZQV-YUMQZZPRSA-N Met-Arg Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N UASDAHIAHBRZQV-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- OGGRSJFVXREKOR-CIUDSAMLSA-N Met-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCSC OGGRSJFVXREKOR-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- ZYTPOUNUXRBYGW-YUMQZZPRSA-N Met-Met Chemical compound CSCC[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CCSC ZYTPOUNUXRBYGW-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- WEDDFMCSUNNZJR-WDSKDSINSA-N Met-Ser Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WEDDFMCSUNNZJR-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 241000127282 Middle East respiratory syndrome-related coronavirus Species 0.000 description 1
- 108010002311 N-glycylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 101700062818 NP Proteins 0.000 description 1
- 210000001989 Nasopharynx Anatomy 0.000 description 1
- OZILORBBPKKGRI-RYUDHWBXSA-N Phe-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 OZILORBBPKKGRI-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- WEQJQNWXCSUVMA-RYUDHWBXSA-N Phe-Pro Chemical compound C([C@H]([NH3+])C(=O)N1[C@@H](CCC1)C([O-])=O)C1=CC=CC=C1 WEQJQNWXCSUVMA-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- ROHDXJUFQVRDAV-UWVGGRQHSA-N Phe-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 ROHDXJUFQVRDAV-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N Phenylalanyl-Lysine Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010076039 Polyproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000011587 Polyproteins Human genes 0.000 description 1
- FELJDCNGZFDUNR-WDSKDSINSA-N Pro-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 FELJDCNGZFDUNR-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- SHAQGFGGJSLLHE-BQBZGAKWSA-N Pro-Gln Chemical compound NC(=O)CC[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 SHAQGFGGJSLLHE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- AFWBWPCXSWUCLB-WDSKDSINSA-N Pro-Ser Chemical compound OC[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 AFWBWPCXSWUCLB-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- GVUVRRPYYDHHGK-UHFFFAOYSA-N Prolyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C1CCCN1 GVUVRRPYYDHHGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010001267 Protein Subunits Proteins 0.000 description 1
- 102000002067 Protein Subunits Human genes 0.000 description 1
- 108010033725 Recombinant Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007312 Recombinant Proteins Human genes 0.000 description 1
- 206010039083 Rhinitis Diseases 0.000 description 1
- 108091005599 SARS-CoV-2 Spike protein Proteins 0.000 description 1
- VBKBDLMWICBSCY-IMJSIDKUSA-N Ser-Asp Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O VBKBDLMWICBSCY-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO NFDYGNFETJVMSE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- WBAXJMCUFIXCNI-WDSKDSINSA-N Ser-Pro Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O WBAXJMCUFIXCNI-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 229940043517 Specific immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 229940076185 Staphylococcus aureus Drugs 0.000 description 1
- 241000193985 Streptococcus agalactiae Species 0.000 description 1
- 201000005010 Streptococcus pneumonia Diseases 0.000 description 1
- NHUHCSRWZMLRLA-UHFFFAOYSA-N Sulfizole Chemical compound CC1=NOC(NS(=O)(=O)C=2C=CC(N)=CC=2)=C1C NHUHCSRWZMLRLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VPZKQTYZIVOJDV-LMVFSUKVSA-N Thr-Ala Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O VPZKQTYZIVOJDV-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- BECPPKYKPSRKCP-ZDLURKLDSA-N Thr-Glu Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O BECPPKYKPSRKCP-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 1
- APIDTRXFGYOLLH-VQVTYTSYSA-N Thr-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O APIDTRXFGYOLLH-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 1
- WCRFXRIWBFRZBR-GGVZMXCHSA-N Thr-Tyr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 WCRFXRIWBFRZBR-GGVZMXCHSA-N 0.000 description 1
- UQTNIFUCMBFWEJ-UHFFFAOYSA-N Threoninyl-Asparagine Chemical compound CC(O)C(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC(N)=O UQTNIFUCMBFWEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YKRQRPFODDJQTC-UHFFFAOYSA-N Threoninyl-Lysine Chemical compound CC(O)C(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCCN YKRQRPFODDJQTC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PWIQCLSQVQBOQV-AAEUAGOBSA-N Trp-Glu Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)=CNC2=C1 PWIQCLSQVQBOQV-AAEUAGOBSA-N 0.000 description 1
- TYYLDKGBCJGJGW-WMZOPIPTSA-N Trp-Tyr Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)N)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 TYYLDKGBCJGJGW-WMZOPIPTSA-N 0.000 description 1
- HPYDSVWYXXKHRD-VIFPVBQESA-N Tyr-Gly Chemical compound [O-]C(=O)CNC(=O)[C@@H]([NH3+])CC1=CC=C(O)C=C1 HPYDSVWYXXKHRD-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- ZQOOYCZQENFIMC-STQMWFEESA-N Tyr-His Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZQOOYCZQENFIMC-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- AOLHUMAVONBBEZ-STQMWFEESA-N Tyr-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 AOLHUMAVONBBEZ-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- OYOQKMOWUDVWCR-RYUDHWBXSA-N Tyr-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OYOQKMOWUDVWCR-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- QZOSVNLXLSNHQK-UHFFFAOYSA-N Tyrosyl-Aspartate Chemical compound OC(=O)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 QZOSVNLXLSNHQK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZSXJENBJGRHKIG-UHFFFAOYSA-N Tyrosyl-Serine Chemical compound OCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 ZSXJENBJGRHKIG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MFEVVAXTBZELLL-UHFFFAOYSA-N Tyrosyl-Threonine Chemical compound CC(O)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 MFEVVAXTBZELLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010046914 Vaginal infection Diseases 0.000 description 1
- WITCOKQIPFWQQD-FSPLSTOPSA-N Val-Asn Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O WITCOKQIPFWQQD-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 1
- UPJONISHZRADBH-XPUUQOCRSA-N Val-Glu Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O UPJONISHZRADBH-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- PNVLWFYAPWAQMU-CIUDSAMLSA-N Val-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)C(C)C PNVLWFYAPWAQMU-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- GIAZPLMMQOERPN-YUMQZZPRSA-N Val-Pro Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O GIAZPLMMQOERPN-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- WPSXZFTVLIAPCN-UHFFFAOYSA-N Valyl-Cysteine Chemical compound CC(C)C(N)C(=O)NC(CS)C(O)=O WPSXZFTVLIAPCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000001756 Virus Disease Diseases 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000000240 adjuvant Effects 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 108010041407 alanylaspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010070944 alanylhistidine Proteins 0.000 description 1
- 108010087924 alanylproline Proteins 0.000 description 1
- 102000004965 antibodies Human genes 0.000 description 1
- 108090001123 antibodies Proteins 0.000 description 1
- 108010036533 arginylvaline Proteins 0.000 description 1
- 108010093581 aspartyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010068265 aspartyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 201000009230 common cold Diseases 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 108010016616 cysteinylglycine Proteins 0.000 description 1
- 108010069495 cysteinyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 description 1
- 108060000716 entF Proteins 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cells Anatomy 0.000 description 1
- 230000028023 exocytosis Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037240 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- KGNSGRRALVIRGR-UHFFFAOYSA-N gln-tyr Chemical compound NC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 KGNSGRRALVIRGR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010049041 glutamylalanine Proteins 0.000 description 1
- KZNQNBZMBZJQJO-YFKPBYRVSA-N gly pro Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 108010062266 glycyl-glycyl-argininal Proteins 0.000 description 1
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 description 1
- 108010010147 glycylglutamine Proteins 0.000 description 1
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine zwitterion Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010081551 glycylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010087823 glycyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 108010040030 histidinoalanine Proteins 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 108010013842 interleukin 1beta (193-195) Proteins 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal Effects 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 108010090333 leucyl-lysyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010045397 lysyl-tyrosyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 108010009298 lysylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010054155 lysyllysine Proteins 0.000 description 1
- 108010038320 lysylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010005942 methionylglycine Proteins 0.000 description 1
- 108010068488 methionylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000006011 modification reaction Methods 0.000 description 1
- 101710003863 oad Proteins 0.000 description 1
- 230000003287 optical Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organs Anatomy 0.000 description 1
- 108010018625 phenylalanylarginine Proteins 0.000 description 1
- 108010051242 phenylalanylserine Proteins 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 235000013406 prebiotics Nutrition 0.000 description 1
- 108010031719 prolyl-serine Proteins 0.000 description 1
- 108010004914 prolylarginine Proteins 0.000 description 1
- 108010029020 prolylglycine Proteins 0.000 description 1
- 108010090894 prolylleucine Proteins 0.000 description 1
- 101700011261 rbp Proteins 0.000 description 1
- 230000003362 replicative Effects 0.000 description 1
- 230000004202 respiratory function Effects 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 108010071207 serylmethionine Proteins 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating Effects 0.000 description 1
- 230000000699 topical Effects 0.000 description 1
- 230000002588 toxic Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 108010044292 tryptophyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 108010078580 tyrosylleucine Proteins 0.000 description 1
- 108010003137 tyrosyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 241000007181 unidentified human coronavirus Species 0.000 description 1
- 201000008100 vaginitis Diseases 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 235000019156 vitamin B Nutrition 0.000 description 1
- 239000011720 vitamin B Substances 0.000 description 1
- SITLTJHOQZFJGG-XPUUQOCRSA-N α-Glu-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O SITLTJHOQZFJGG-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
Images
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии. Описан способ создания рекомбинантного штамма энтерококка L3-SARS на основе биологически активного штамма Е. faecium L3, отличается тем, что проводят электропорацию культуры энтерококков Enterococcus faecium L3 рекомбинантной плазмидной ДНК pentF-sarsS, имеющей SEQ ID No: 1, и выбирают клон энтерококка L3-SARS, экспрессирующий белок, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID No: 2. Представлена рекомбинантная плазмида pentF-sarsS, имеющая нуклеотидную последовательность SEQ ID No: 1, предназначенная для получения клона энтерококка L3-SARS, экспрессирующего белок, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID No: 2. Изобретение решает задачу расширения арсенал технических средств для создания вакцин. 2 н.п. ф-лы, 4 ил., 1 табл., 3 пр.
Description
Изобретение относится к области медицины, вирусологии, микробиологии, молекулярной генетики и биотехнологии и может быть использовано в медицинской промышленности при производстве живых вакцин для профилактики и лечения инфекций, вызванных коронавирусом.
В настоящий момент разработку вакцины для профилактики и терапии инфекции, вызванной SARS-CoV-2 ведут по всему миру вследствие лавинообразного развития эпидемического процесса, вызванного принципиально новым вариантом коронавируса SARS-CoV-2. Переход эпидемии в разряд глобальной пандемии, ограниченные знания относительно биологии и эволюционного потенциала нового варианта коронавируса приводит к необходимости разрабатывать множественные варианты средств профилактики и лечения нового вирусного заболевания.
Успехи биоинформатики, молекулярной биологии позволяют за рекордно короткие сроки определить перспективные с точки зрения индукции иммунного ответа антигены возбудителя, достижения генной инженерии и биотехнологии - создать разнообразные вакцинные препараты. Необходимость быстрой разработки средств борьбы ускоряет процедуру лицензирования и облегчает введение в практику принципиально новых вакцинных платформ, как это происходит, например, с РНК, ДНК вакцинами или вакцинами на основе ослабленных вирусов.
Коронавирусы (Coronaviridae) - семейство вирусов, включающее на январь 2020 года более 60 видов РНК-содержащих патогенных вирусов, объединенных в четыре подсемейства, которые поражают человека и животных. Название связано со строением вируса, который имеет шиловидные отростки. Они напоминают солнечную корону и содержат рецептор-связывающие белки, на которые реагируют трансмембранные рецепторы клеток. Коронавирусы имеют сходную организацию генома, представленного цепочкой из положительной цепи однонитевой РНК из 25-30 тысяч нуклеотидов.
Коронавирус человека впервые был выделен в 1965 году от больных ОРВИ Д. Тиррелом из носоглотки при остром рините, позже в 1975 году Э. Каул и С. Кларк выделили коронавирус из испражнений при детском энтероколите. В последующее время коронавирусы почти не привлекали внимание исследователей, пока в Китае в 2002-2003 годах не была зафиксирована вспышка атипичной пневмонии или тяжелого острого респираторного синдрома (ТОРС, SARS). Заболевание было вызвано вирусом SARS-CoV, бета-коронавирусом В.
В результате болезнь распространилась на другие страны, всего заболело 8273 человека, 775 умерло (летальность 9,6%). Вирус MERS-CoV, бета-коронавирус С, является возбудителем ближневосточного респираторного синдрома (MERS), первые случаи которого были зарегистрированы в 2012 году [Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. - СПб: Спец Лит, 2008]. В 2015 году в Южной Корее произошла вспышка ближневосточного респираторного синдрома, в ходе которой заболело 183 человека, умерло 33.
В декабре 2019 года в Китае началась вспышка пневмонии, вызванная ранее неизвестным бета-коронавирусом, обозначенным как SARS-CoV-2. Вскоре данная вспышка преобразовалась в эпидемию, которая распространилась и на другие страны мира, превратившись в пандемию, приведшую к заболеванию более 20 миллионов человек в мире и смерти миллиона человек.
Источниками коронавирусных инфекций может быть как больной человек, так и различные животные, как промежуточные хозяева. Наиболее вероятным исходным хозяином SARS-CoV-2 были летучие мыши. Возможные механизмы передачи: воздушно-капельный, воздушно-пылевой, фекально-оральный, контактный. Заболеваемость растет зимой и ранней весной. В структуре ОРВИ госпитализированных больных коронавирусная инфекция составляет в среднем 12%. Бета-коронавирусы, разрушая клетки эпителия различных органов, провоцируют возникновение заболеваний, наиболее характерным и тяжелым вариантом которых является развитие двухсторонней пневмонии, блокирующей функцию дыхания, том числе со смертельным исходом.
SARS-CoV-2 использует поверхностный S-белок для прикрепления к своему рецептору - ангиотензинпревращающему ферменту 2 (АСЕ2), как и вирус SARS-CoV (атипичной пневмонии) [Xintian Xu, Ping Chen, Jingfang Wang, Jiannan Feng, Hui Zhou. // SCIENCE CHINA Life Sciences, 2020].
РНК вируса имеет 5'-метилированное начало и 3'-полиаденилированное окончание. Это позволяет вирусу инициировать сборки своих белков и копий в рибосоме клетки, которая не в состоянии отличить РНК вируса от РНК для белков самой клетки.
РНК коронавирусов состоят из 26-30 тысяч пар оснований. Это означает, что коронавирусы обладают крупнейшей несегментированной РНК, то есть являются сложнейшими по структуре среди всех известных вирусов. Геном вируса состоит из 30000 нуклеотидов и кодирует два репликативных полипротеина ppla и pplab, из которых в следующий проход репликации/трансляции формируется копия РНК вируса, а также 8 отдельных мРНК-шаблонов для белков вирусов, которые бесконечно их генерируют [Thiel V. Coronaviruses: Molecular and Cellular Biology. Caister Academic Press (2007); King, Andrew M.Q.; Adams, Michael J.; Carstens, Eric В.; Lefkowitz, Elliot J, Virus Taxonomy, 2012]. Генерация белков вируса из мРНК происходит в эндоплазматическом ретикулуме и аппарате Гольджи. После получения РНК вируса и необходимых его белков вирусные нуклеокапсиды собираются из геномной РНК вируса и N-белка в цитоплазме. Вирионы затем высвобождаются из инфицированной клетки через экзоцитоз. После выхода вирионов из клетки она погибает.
Ученые из Китая расшифровали и опубликовали 12 января 2020 года в международной базе данных геном нового коронавируса. Сейчас разработка вакцины идет в инициативном порядке. В настоящий момент разработку вакцины от коронавируса SARS-CoV-2 ведут по всему миру.
Одним из альтернативных подходов к созданию вакцин как против вирусов гриппа, так и против коронавирусов, является встраивание консервативных последовательностей вирусных белков в пробиотические векторы. То есть, альтернативой использованию химических адъювантов для вакцинации является применение так называемых живых вакцин на основе пробиотиков. Живые вакцины применяют, как правило, однократно, вводят подкожно, накожно или внутримышечно, а некоторые вакцины перорально и ингаляционно. Главным преимуществом живых вакцин является то, что они активируют все компоненты иммунной системы, вызывая сбалансированный прочный иммунный ответ.
Пробиотики - препараты, оказывающие общее благотворное влияние на организм человека (чаще всего молочнокислые бактерии). Установлено, что некоторые пробиотики являются эффективными неспецифическими стимуляторами выработки специфических иммуноглобулинов против различных инфекций [Vintini Е.О., Medina M.S., ВМС Immunol. 12: 46 (2011), Bermudez-Hurnarun L.G., Kharrat P., Chatel J.M., Microb. Cell. Fact. 10: 17-24 (2011)]. Пробиотики стали использоваться в качестве векторов, в часть из которых успешно внесены плазмидные конструкции, обеспечивающие экспрессию антигенов патогенных бактерий ME Y., Luo Y., Huang X., Song F., LiuG. Microbiology, 158: 498-504 (2012), DeAzevedoM., Karczzewski J., Lefeure F. Et al. BMC Microbiol. 12: 299 (2011)].
Пробиотические микроорганизмы рассматриваются в настоящее время как хорошая основа для получения рекомбинантных живых вакцин, экспрессирующих вакцинные антигены возбудителей актуальных инфекций Vintini Е.О., Medina M.S., ВМС Immunol., 12: 46 (2011); Bermudez-Hurnarun L.G., Kharrat P., Chatel J.M., Microb. Cell. Fact. 10: 17-24 (2011); ME Y., Luo Y., Huang X., Song F., Liu G. Microbiology, 158: 498-504 (2012), De Azevedo M., Karczzewski J., Lefeure F. Et al. BMC Microbiol. 12: 299 (2011), [Lei H. et al. Virology. T. 476: 189-195 (2015)].
В 2015 г. Хан Л. со своими коллегами создали химерную конструкцию на основе бактерии Lactococcus lactis, содержащую на своей поверхности NA вируса гриппа А, и показали, что она способна защищать мышей от инфекции вирусами гриппа [Lei Н. et al. Virology. Т. 476: 189-195, (2015)]. Таким образом, они показали, что такая химерная конструкция может быть кандидатом для создания универсальной противогриппозной вакцины.
Известен пробиотический штамм Enterococcus faecium L3 ND-79 ВНИИСХМ, предназначенный для изготовления лечебно-профилактических средств и продуктов питания лечебно-профилактического назначения, обладающий устойчивостью к широкому спектру антибиотиков, более выраженным антагонизмом к патогенным бактериям, высокой жизнеспособностью и высоким уровнем продукции витаминов группы "В" и фолиевой кислоты; известный штамм положен в основу заявляемого изобретения [патент РФ №2220199 на штамм энтерококков Enterococcus faecium L3 для изготовления лечебно-профилактических средств].
Известен способ, основанный на введении bac гена патогенных СГВ в хромосомную ДНК в области кодирования белков пилей пробиотического штамма Enterococcus faecium L3 с последующей экспрессией в пилях белка Вас, кодируемого этим геном. Пили энтерококков выступают за пределы бактериальных клеток и способны проникать сквозь капсулу, которая экранирует большинство бактериальных белков-антигенов. Пили состоят из белковых мономеров, способных к агрегации. За счет этого процесса может увеличиваться доза чужеродного антигена, встроенного в белок пилей. Последнее должно способствовать увеличению титров антител, специфичных к встраиваемому в структуру поверхностного белка энтерококка полипептидного фрагмента штамма патогенного СГВ.
Способ введения гена патогенных стрептококков в пили пробиотического штамма Enterococcus faecium L3 интересен тем, что рекомбинантный белок экспрессируется не в цитоплазме, а на поверхности бактерии [патент РФ №2640250 «Способ введения генов патогенных стрептококков в хромосомную ДНК пробиотического штамма Enterococcus faecium L3 для экспрессии в пилях», авторы - Суворов А.Н. и др.].
Известно, что штамм Enterococcus faecium L3 обладает выраженной антагонистической активностью в отношении грамположительных и грамотрицательных бактерий, способностью восстанавливать микробиоценоз кишечника на фоне дисбиотических состояний [Yermolenko Е., Suvorov А., Chernush A., et al. International Congress Series, 1289: 363-366 (2006)], а также оказывать иммуномодулирующее действие на организм хозяина [Tarasova Е., Yermolenko Е., Donets V., Sundukova Z., Bochkareva A., Borschev I., Suvorova M., Ilyasov. I., Simanenkov V., Suvorov A. The influence of probiotic enetrococci on the microbiota and cytokines expression in rats with dysbiosis induced by antibiotics// Beneficial Microbes. -2010 - Т. 1. - №3. - C. 265-270].
Осуществлено физическое картирование штамма Enterococcus faecium L3 [Suvorov A., Simanenkov V., Gromova L. et al. Prebiotics and probiotics potential for human health, 104-112, (2011)].
В экспериментах на здоровых самках мышей показано, что интравагинальное введение высоких доз штамма Enterococcus faecium L3 не только не оказывает токсического действия на организм, но не влияет на состояние слизистой оболочки влагалища [Суворов А., Алехина Г., Пигаревский П. и др. Гастробюллетень, 4: 29-31, (2001)] и способствует экспрессии IL-10 клетками слизистой оболочки влагалища крыс с экспериментальным вагинитом, вызванном S.agalactiae и Staphylococcus aureus [Tarasova Е., Yermolenko Е., Donets V., Sundukova Z., Bochkareva A., Borschev I., Suvorova M., Ilyasov I., Simanenkov V., Suvorov A. The influence of probiotic enetrococci on the microbiota and cytokines expression in rats with dysbiosis induced by antibiotics // Beneficial Microbes. - 2010. - Т. 1. - №3. - C. 265-270].
В штамме Enterococcus faecium L3, как и у других грамположительных бактерий, имеются пили, которые представляют собой фимбрии длиной 0,3-3 μm и диаметром 2-10 nm [Telford JL, Barocchi MA, Margarit I, Rappuoli R, Grandi G. Pili in gram-positive pathogens. Nat Rev Microbiol. -2006- T.4, №7-C. 509-519. doi: 10.1038/nrmicro1443. PMID: 16778837]. Это длинные белок-подобные полимеры, тянущиеся на поверхности бактерий, представляют собой субъединицы белка пилина, соединенные ковалентной связью. Они играют большую роль в адгезии колонизации хозяина. Пили являются высокоиммуногенными структурами, которые находятся под селективным давлением иммунных реакций хозяина [Danne С, Dramsi S. Pili of gram-positive bacteria: roles in host colonization. Res Microbiol. 2012 Nov-Dec; 163(9-10):645-58. doi: 10.1016/j.resmic.2012.10.012. Epub 2012 Oct 29. PMID: 23116627].
Принцип модификации пилей энтерококков вакцинными антигенами является приоритетным подходом при создании эффективных живых вакцин благодаря экспозиции целевого антигена на поверхности энтерококка.
Известен способ создания живой вакцины за счет введения генов патогенных стрептококков в хромосомную ДНК пробиотического штамма Enterococcus faecium L3 для экспрессии в пилях, и живая вакцина на основе модифицированного штамма пробиотиков Enterococcus faecium L3 для профилактики инфекции, вызванной Streptococcus pneumonie [Суворов А.Н., Гупалова Т.В., Кулешевич Е.В., Леонтьева Г.Ф., Крамская Т.А, Патент РФ №2701733]. Недостатком указанного способа является сложность конструирования такой вакцины за счет большого количества стадий, необходимых для создания суммарного фрагмента ДНК, состоящего из двух отдельных фрагментов гена пробиотика Enterococcus faecium L3 и химерного гена Streptococcus pneumonie - pspf.
Упомянутый недостаток устраняется в заявляемом способе создания живой вакцины за счет замены химерного гена Streptococcus pneumoniae - pspf на фрагмент гена sarsS методом клонирования, что сокращает получение вакцины в отличие от прототипа, а также позволяет создавать любые другие вакцинные кандидаты на этой платформе.
Существенно, что созданный вакцинный кандидат в отличие от вакцины-прототипа, предназначен для обеспечения специфической профилактики заболеваний, вызванных вирусом SARS-Cov-2, а не Streptococcus pneumoniae.
Ближайшим аналогом (прототипом) настоящего изобретения является способ создания живой вакцины L3-COVID-19 против коронавирусной инфекции SARS-Cov-2 на основе пробиотического штамма Enterococcus faecium L3 [Суворов А.Н., Гупалова Т.В., Бормотова Е.А., Леонтьева Г.Ф., Крамская Т.А., Дешева Ю.А., 2021].
Настоящее изобретение отличается тем, что был синтезирован другой фрагмент гена, кодирующего S-белок коронавируса SARS-Cov-2, в связи с появлением новых штаммов коронавируса.
Заявляемый способ реализуется следующим образом. Выбирают последовательности второго фрагмента гена S-белка коронавируса SARS-Cov-2-sars, как показано ниже:
В выбранной последовательности были изменены аминокислоты:
• K417N (лизин-аспарагин), G на С
• Е484К (глут-лизин), G на А,
• N5 01Y (аспарагин-тирозин) А на Т.
Для клонирования использовали синтезированную последовательность фрагмента гена sarsS2, приведенную ниже:
Техническим результатом заявляемого изобретения является значительное упрощение способа получения живой вакцины против коронавирусной инфекции. Указанный технический результат достигается тем, что в способе создания живой вакцины против коронавирусной инфекции SARS-Cov-2 на основе пробиотического штамма Enterococcus faecium L3 (по патенту РФ №2220199), модифицированного в результате электропорации культуры энтерококков штамма Enterococcus faecium L3 рекомбинантной плазмидной ДНК pentF-pspf SEQ ID No: l (по патенту РФ №2701733), в соответствии с заявленным изобретением, в плазмиде pentF-sarsS, участок pspf заменен на фрагмент гена шиловидного белка SARS-CoV-2, при этом ДНК pentF-sarsS кодирует аминокислотную последовательность SEQ ID No: 2, которая выполняет функцию шиловидного белка вируса SARS-CoV-2, способного осуществлять стимуляцию гуморального и клеточного иммунитета в отношении вируса SARS-CoV-2.
При этом задача генетической части работы состояла в осуществлении интеграции участка ДНК вируса в структуру гена поверхностного белка пробиотика без нарушения открытой рамки считывания и повреждения участков кодирования компонентов, участвующих в процессинге поверхностного белка PilF.
В изобретении, использованном в качестве прототипа, согласно известному способу на основе штамма пробиотика Enterococcus faecium L3, была сконструирована генно-инженерная живая вакцина со встроенным в хромосому, в области, кодирующей ген пилей, участком химерного гена pspf, сконструированного на основе генов патогенности Streptococcus pneumoniae. Штамм Enterococcus faecium L3-PSPF+ был получен в результате трансформации плазмидой pentF-pspf штамма Enterococcus faecium L3.
Интраназальное введение вакцины Enterococcus faecium L3-PSPF+стимулировало развитие специфического системного и местного иммунного ответа. На модели интраназальной летальной пневмококковой инфекции у мышей линии СВА было показано, что трехкратная интраназальная вакцинация созданной живой пробиотической вакциной повышала защиту от летальной пневмококковой инфекции.
В изобретении, использованном в качестве второго прототипа согласно известному способу на основе штамма пробиотика Enterococcus faecium L3 была сконструирована генно-инженерная живая вакцина со встроенным в хромосому, в области, кодирующей ген пилей, участком фрагмента гена SARS-CoV-2. Штамм Enterococcus faecium L3- COVID 19, был получен в результате трансформации плазмидой pentF-covid19 штамма Enterococcus faecium L3.
При реализации заявленного способа создания живой вакцины на основе пробиотического штамма Enterococcus faecium L3 был использован другой синтезированный фрагмент ДНК шиловидного белка коронавируса, который был смоделирован авторами патента, а затем синтезирован компанией Евроген. При этом в плазмиде pentF-pspf участок гена pspf был заменен на фрагмент гена шиловидного белка.
Таким образом, конечной технической задачей заявленного изобретения является создание живой вакцины на основе биологически активного штамма Enterococcus faecium L3 за счет замещения в структуре его гена пилей на участок гена коронавируса SARS-CoV-2. Создание такой вакцины против инфекции, вызываемой коронавирусом, основано на введении участка ДНК, кодирующего антигенный фрагмент иммуногенных эпитопов вируса SARS-CoV-2, в структуру гена пилей пробиотика.
Реализация указанной технической задачи поясняется конкретными примерами введения гена sarsS коронавируса в хромосомную ДНК в области, кодирующей ген пилей, пробиотического штамма Enterococcus faecium L3 для экспрессии в пилях иммуногенного участка шиповидного белка SARS-CoV-2:
а) получение слитого гена entF - sarsS и его клонирование
б) выявление бактериальных клонов, содержащих ген слитого белка L3-SARS хромосоме
Конструирование живой вакцины на основе биологически активного пробиотического штамма Enterococcus faecium L3 за счет включения в его пили антигена SARS-CoV-2 позволило объединить в одном препарате эффективность полезных свойств пробиотика и специфического антигенного стимула.
Для получения слитого гена entF-sarsS и его клонирования были сконструированы ДНК-праймеры, представленные в таблице 1, в которой в графе 1 приведены названия праймеров, в графе 2 приведена их ориентация по отношению к положительной цепочке ДНК, а в графе 3 приведены нуклеотидные последовательности, которые были сконструированы в соответствии с направлением цепочки ДНК последовательность от 5' к 3'.
Нуклеотидные последовательности в графе 3 с названиями (в графе 1), с участками, выделенными подчеркиванием, указывают на соответствующие им сайты гидролиза рестрикционными эндонуклеазами.
Фрагмент гена sarsS был синтезирован с последующим клонированием в векторную плазмидную ДНК pAL2-T, фирмой Евроген. Для удобства последующего клонирования сайты рестрикции для NdEI и EcoRI были вставлены во фрагмент гена sarsS при его синтезе.
Для настоящей конструкции была использована рекомбинантная плазмидная ДНК pentF-pspf представляющая собой плазмидную ДНК, полученную в результате вставки суммарного фрагмента ДНК, состоящего из двух отдельных фрагментов гена пробиотика Enterococcus faecium L3 и фрагмента гена pspf описанная в предыдущей заявке на изобретение [патент РФ 2701733 «Создание живой вакцины на основе штамма пробиотиков Enterococcus faecium L3 для профилактики инфекции, вызванной Streptococcus pneumonie», (2018)].
Из плазмидной ДНК pentF-pspf удаляли вставку гена пневмококка pspf и заменяли ее на вставку гена sarsS. Для этого плазмидную ДНК pentF-pspf гидролизовали ферментами NdEI и EcoRI, сайты для которых ограничивают последовательность гена pspf. Такие же сайты рестрикции были заложены в синтезированный фрагмент гена sarsS. Полученный верхний фрагмент после гидролиза был использован для дальнейшего клонирования. Плазмидная ДНК pAL2-T, содержащая фрагмент гена sarsS, была гидролизована ферментами NdEI и EcoRI. Клонирование рестрицированного фрагмента, кодирующего SARS-Cov-2, осуществляли, используя верхний фрагмент после гидролиза плазмиды pentF-pspf. Продукты рестрикции разделяли с помощью электрофореза в 1% агарозном геле. ДНК рестрикты выделяли из агарозы с помощью набора «QIAquick Gel Extraction Kit» (Qiagen, USA), лигировали и трансформировали в гетерологичную систему E.coli DH5α. Среда для отбора содержала 500 мкг/мл эритромицина. В результате трансформации было получено 5 клонов. Из этих клонов были выделены плазмидные ДНК. Наличие вставки подтверждалось гидролизом плазмиды ферментами NdEI и EcoRI (фиг. 1).
Продукты ПЦР плазмидной ДНК, полученные с праймерами CS1 и CS2, и SeqF и CS2 были просеквенированы. Результаты сиквенса показали правильность последовательности плазмидной ДНК, которая содержала нужные фрагменты ДНК энтерококка и ДНК коронавируса (перечень последовательностей SEQ ID No: 1).
Таким образом, в результате клонирования были получена плазмида pentF-sarsS с прогнозируемой вставкой и геном устойчивости к эритромицину.
В результате электропорации энтерококков созданной интегративной плазмидой было получено 2 трансформанта. Они были проверены в реакции ПЦР с праймерами CS1 и CS2. Для этого из трансформантов выделяли ДНК, используя набор ДНК-экспресс (Литех, Россия). Положительный ответ дали оба трансформанта (фиг. 2).
Для определения интеграции плазмидной ДНК pentF-sarsS в хромосомную ДНК энтерококка была проведена амплификация ДНК, выделенных из 2 клонов с праймерами В1 и CS2. Интеграция плазмидной ДНК pentF-sarsS в хромосомную ДНК энтерококка была обнаружена у обоих трансформантов (фиг. 3). Секвенирование ДНК, выделенной из одного из положительных клонов, обозначенного, как L3-SARS, было проведено с праймерами, соответствующими последовательности гена sarsS (праймер CS2) и последовательности хромосомной ДНК энтерококков (праймер В1) для подтверждения интеграции плазмидной ДНК pentF-sarsS в хромосомную ДНК энтерококка (перечень последовательностей SEQ ID No: 1).
Клон L3-SARS, экспрессирующий ген L3-SARS белка, выбран в качестве вакцинного препарата для дальнейшего исследования.
Ниже приведены конкретные примеры, подтверждающие экспериментально проведение стадий получения живой вакцины против коронавирусной инфекции
Пример 1. Синтез фрагмента ДНК коронавируса и его клонирование в плазмидный вектор pAL2-T
Синтез фрагмента ДНК коронавируса и его клонирование в плазмидный вектор pAL2-T было проведено фирмой Евроген. Для удобства последующего клонирования сайты рестрикции для NdEI и EcoRI были вставлены во фрагмент гена sarsS при его синтезе.
Пример 2. Получение слитого гена entF- sarsS и его клонирование.
Рекомбинантная плазмидная ДНК pentF-pspf, представляющая собой плазмидную ДНК, полученную в результате вставки суммарного фрагмента ДНК, состоящего из двух отдельных фрагментов гена пробиотика Enterococcus faecium L3 и фрагмента гена pspf описанная в предыдущей заявке на патент RU 2701733(13) С1 «Создание живой вакцины на основе штамма пробиотиков Enterococcus faecium L3 для профилактики инфекции, вызванной Streptococcus pneumonie», (2018)] была использована для создания слитого гена entF-sarsS. Для этого из плазмидной ДНК pentF-pspf вырезали вставку гена пневмококка pspf проведя гидролиз плазмидной ДНК pentF-pspf ферментами NdEI и EcoRI. Полученный верхний фрагмент после гидролиза был использован для дальнейшего клонирования.
Плазмидная ДНК pAL2-T, содержащая фрагмент гена sarsS, была гидролизована ферментами NdEI и EcoRI (фиг. 1). Клонирование рестрицированного фрагмента гена, кодирующего L3-SARS, осуществляли, используя верхний фрагмент после гидролиза плазмиды pentF-pspf. Продукты гидролиза рестрикионными эндонуклеазами были разделены с помощью электрофореза в 1% агарозном геле. ДНК гидролизаты выделяли из агарозы с помощью набора «QIAquick Gel Extraction Kit» (Qiagen, USA), лигировали и трансформировали в гетерологичную систему E.coli DH5α. Среда для отбора клонов E.coli с плазмидой содержала 500 мкг/мл эритромицина. В результате трансформации было получено 5 клонов. Из этих клонов были выделены плазмидные ДНК. Наличие вставки подтверждалось гидролизом плазмиды ферментами NdEI и EcoRI (фиг. 1).
На фиг. 1 представлена электрофореграмма рестрицированных плазмид NdEI и EcoRI. На указанной иллюстрации цифрами обозначены:
1 - плазмидная ДНК pAL2-T, содержащая фрагмент гена sarsS
2 - плазмидная ДНК pentF- sarsS
3 - 100 п. н. ДНК - маркер (сверху вниз: 3000, 2000, 1000, 900, 800, 700, 600, 500, 400, 300, 200 и 100 нуклеотидных пар).
Пример 3. Трансформация энтерококков методом электропорации.
Для электропорации энтерококков культуру Enterococcus faecium L3 сеяли в 3 мл бульона Tood-Hewitt (ТНВ) («HiMedia», Индия) и выращивали в течение ночи при 37°С, затем пересевали в 50 мл бульона ТНВ 1 мл ночной культуры и выращивали ее до оптической плотности при длине волны 650 нм 0.3. После этого культуру помещали в лед и затем отмывали трижды в 20 мл 10% глицерола при температуре 4°С, полученный осадок суспендировали в 0.5 мл стерильного раствора глицерола, переосаждали и конечный осадок ресуспендировали в 0.3 мл того же раствора, разлили по 50 мкл в пробирки и проводили электропорацию в кювете с расстоянием между электродами 1 мм при напряжении 2100 В. Во льду к клеткам добавляли ДНК (полученную интегративную плазмиду pentF-sarsS плазмиду, 300 нг). Оптимальная продолжительность импульса составила 4-5 миллисекунд. После проведения разряда тока в кювету добавляли 1 мл ТНВ, инкубировали 1 час и высевали на чашки с селективной средой, которая содержала 10 мкг/мл эритромицина. Затем ожидали появления трансформантов через 24 часа.
В результате электропорации энтерококков созданной интегративной плазмидой было получено 3 трансформанта. Они были проверены в реакции ПНР с праймерами CS1 и CS2. Для этого из трансформантов выделяли ДНК, используя набор ДНК-экспресс (Литех, Россия). Положительный ответ дали два трансформанта (фиг. 2).
На фиг. 2 показана электрофореграмма амплифицированных ДНК-фрагментов с праймерами CS1 и CS2
1, 2, 3 - продукты ПЦР ДНК из полученных 2 клонов.
4 - продукт ПЦР плазмидной ДНК pentF-sarsS
5 - 100 п. н. ДНК - маркер (сверху вниз: 3000, 2000, 1000, 900, 800, 700, 600, 500, 400, 300, 200 и 100 нуклеотидных пар).
Была проведена амплификация ДНК, выделенных из 2 клонов для определения интеграции плазмидной ДНК pentF-sarsS в хромосомную ДНК энтерококка с праймерами В1 и CS2. Интеграция плазмидной ДНК pentF-sarsS в хромосомную ДНК энтерококка была обнаружена у обоих трансформантов (фиг. 3).
На фиг. 3, представлена электрофореграмма амплифицированных ДНК-фрагментов с праймерами В1 и К2, где цифрами обозначены:
1, 2 - продукты ПЦР ДНК из полученных 2 клонов.
3 - 100 п. н. ДНК - маркер (сверху вниз: 3000, 2000, 1000, 900, 800, 700, 600, 500, 400, 300, 200 и 100 нуклеотидных пар).
Секвенирование ДНК, выделенной из одного из положительных клонов, обозначенного, как L3-SARS, было проведено с праймерами, соответствующими последовательности гена sarsS (праймер CS2) и последовательности хромосомной ДНК энтерококков (праймер В1) для подтверждения интеграции плазмидной ДНК pentF-sarsS в хромосомную ДНК энтерококка (перечень последовательностей SEQ ID No: 1).
На фиг. 4 показана нуклеотидная последовательность, показывающая интеграцию плазмидной ДНК pentF-sarsS в хромосомную ДНК энтерококка. Жирным шрифтом выделены последовательности праймеров В1 и CS2.
Этот клон энтерококков, L3-SARS экспрессирующий ген L3-SARS белка, выбран в качестве вакцинного препарата для дальнейшего исследования.
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
| <110> | ФГБНУ "ИЭМ" |
| <120> | Живая вакцина Enterococcus faecium L3-SARS против коронавирусной инфекции SARS-CoV-2 на основе пробиотического штамма Enterococcus faecium L3 |
| <140> | |
| <141> | |
| <150> | |
| <151> | |
| <160> | 1 |
| <170> | |
| <210> | 1 |
| <211> | 1620 |
| <212> | Нуклеотидная последовательность |
| <213> | Искусственная последовательность |
| <220> | |
| <223> | Нуклеотидная последовательность, экспрессированная в системе |
| <400> | 1 |
Atgagagcag ctggtattga gttgaatgat acatttctat ctatttacag tttaaatgga 60
cagtatcagc aacgtgtgtc ttggtataat gacaataatg aatctgtcgg tgaacgtaat 120
attgatatga gagaatttgt tgggtatgaa aaaatgggta gcttacctta ttttgtcaca 180
acagatacag catgtgcaga atacaaagct cctgcgttat caacaaacaa tttaacttca 240
aaagtagtgg gaggacgtgc agaaaaggct tatagctcga atgatcattt caccgatgtt 300
gtaggagctg atacttatca cagaagtggt gtaacgtata cgcttcaagg cgcttcccca 360
acattcatga ttggcgcaaa tacgaatagt atgatgttta gctttgatac tgcattgcta 420
tggacaccac aaccatcgaa gcctacaaaa gaagtgttta acaaagctaa tactgaagag 480
gcagcacaca atattgacaa aaaagtgatt ccacaaggat cagatgttta ctatcatatt 540
catcaaaagt ttgatgcatt aacagtcaac acaatgaaca aatacaaatc atttaaaatc 600
actgatacct ttgacagcaa aaattttgat atggtatcgg atgggaaaaa ctatgatggc 660
gcattg cata tggattattc tgtcctatat aattccgcat cattttccac ttttaagtgt 720
tatggagtgt ctcctactaa attaaatgat ctctgcttta ctaatgtcta tgcagattca 780
tttgtaatta gaggtgatga agtcagacaa atcgctccag ggcaaactgg aaacattgct 840
gattataatt ataaattacc agatgatttt acaggctgcg ttatagcttg gaactctaac 900
aatcttgatt ctaaggttgg tggtaattat aattacctgt atagattgtt taggaagtct 960
aatctcaaac cttttgagag agatatttca actgaaatct atcaggccgg tagcacacct 1020
tgtaatggtg ttaaaggttt taattgttac tttcctttac aatcgtatgg tttccaaccc 1080
acttatggtg ttggttacca accatacaga gtagtagtac tttcttttga acttctacat 1140
gcaccagcaa ctgtttgtgg acctaaaaag tctactaatt tggaattcta cgaaaaaaac 1200
ctgaaagaat acaccgacaa gctggataaa ctcgagaaag gttctgcgcg agtgatagat 1260
atgagtacag gaaaagatat tacttcagaa ggtacactaa cctatgatag caatttaaga 1320
acgctgaaat gggaagcttc cgctgatttc ttaagtaaaa atcttttaga tggacgagaa 1380
attcaactga tatttacagc taaaactcca ctacagtcag aaaaaaatat tgataaccaa 1440
gccgtagcag cagtagagaa tgtttctaat aaaacgaatg ttgtaacaat tggtgttgat 1500
cctaacttac cacaagtcat tgttcctaga acaggttcta cacatttagt aacaatttta 1560
gtggttagct tagtattact tgtgttagct actcttagtt atgtggctct gaagttcaat 1620
| <210> | 2 |
| <211> | 540 |
| <212> | Аминокислотная последовательность |
| <213> | Искусственная последовательность |
| <220> | |
| <223> | Аминокислотная последовательность |
| <400> | 2 |
Met Arg Ala Ala Gly Ile Glu Leu Asn Asp Thr Phe Leu Ser Ile Tyr
5 10 15
Ser Leu Asn Gly Gln Tyr Gln Gln Arg Val Ser Trp Tyr Asn Asp Asn
20 25 30
Asn Glu Ser Val Gly Glu Arg Asn Ile Asp Met Arg Glu Phe Val Gly
35 40 45
Tyr Glu Lys Met Gly Ser Leu Pro Tyr Phe Val Thr Thr Asp Thr Ala
50 55 60
Cys Ala Glu Tyr Lys Ala Pro Ala Leu Ser Thr Asn Asn Leu Thr Ser
65 70 75 80
Lys Val Val Gly Gly Arg Ala Glu Lys Ala Tyr Ser Ser Asn Asp His
85 90 95
Phe Thr Asp Val Val Gly Ala Asp Thr Tyr His Arg Ser Gly Val Thr
100 105 110
Tyr Thr Leu Gln Gly Ala Ser Pro Thr Phe Met Ile Gly Ala Asn Thr
115 120 125
Asn Ser Met Met Phe Ser Phe Asp Thr Ala Leu Leu Trp Thr Pro Gln
130 135 140
Pro Ser Lys Pro Thr Lys Glu Val Phe Asn Lys Ala Asn Thr Glu Glu
145 150 155 160
Ala Ala His Asn Ile Asp Lys Lys Val Ile Pro Gln Gly Ser Asp Val
165 170 175
Tyr Tyr His Ile His Gln Lys Phe Asp Ala Leu Thr Val Asn Thr Met
180 185 190
Asn Lys Tyr Lys Ser Phe Lys Ile Thr Asp Thr Phe Asp Ser Lys Asn
195 200 205
Phe Asp Met Val Ser Asp Gly Lys Asn Tyr Asp Gly Ala Leu His Met
210 215 220
Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys
225 230 235 240
Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val
245 250 255
Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala
260 265 270
Pro Gly Gln Thr Gly Asn Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp
275 280 285
Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser
290 295 300
Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser
305 310 315 320
Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala
325 330 335
Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val Lys Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro
340 345 350
Leu Gln Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Tyr Gly Val Gly Tyr Gln Pro
355 360 365
Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr
370 375 380
Val Cys Gly Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Glu Phe Tyr Glu Lys Asn
385 390 395 400
Leu Lys Glu Tyr Thr Asp Lys Leu Asp Lys Leu Glu Lys Gly Ser Ala
405 410 415
Arg Val Ile Asp Met Ser Thr Gly Lys Asp Ile Thr Ser Glu Gly Thr
420 425 430
Leu Thr Tyr Asp Ser Asn Leu Arg Thr Leu Lys Trp Glu Ala Ser Ala
435 440 445
Asp Phe Leu Ser Lys Asn Leu Leu Asp Gly Arg Glu Ile Gln Leu Ile
450 455 460
Phe Thr Ala Lys Thr Pro Leu Gln Ser Glu Lys Asn Ile Asp Asn Gln
465 470 475 480
Ala Val Ala Ala Val Glu Asn Val Ser Asn Lys Thr Asn Val Val Thr
485 490 495
Ile Gly Val Asp Pro Asn Leu Pro Gln Val Ile Val Pro Arg Thr Gly
500 505 510
Ser Thr His Leu Val Thr Ile Leu Val Val Ser Leu Val Leu Leu Val
515 520 525
Leu Ala Thr Leu Ser Tyr Val Ala Leu Lys Phe Asn
530 535 540
Claims (2)
1. Способ создания рекомбинантного штамма энтерококка L3-SARS на основе биологически активного штамма Е. faecium L3, отличающийся тем, что проводят электропорацию культуры энтерококков Enterococcus faecium L3 рекомбинантной плазмидной ДНК pentF-sarsS, имеющей SEQ ID No: 1, и выбирают клон энтерококка L3-SARS, экспрессирующий белок, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID No: 2.
2. Рекомбинантная плазмида pentF-sarsS, имеющая нуклеотидную последовательность SEQ ID No: 1, предназначенная для получения клона энтерококка L3-SARS, экспрессирующего белок, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID No: 2.
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2782529C1 true RU2782529C1 (ru) | 2022-10-28 |
Family
ID=
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP3000473A1 (en) * | 2014-09-23 | 2016-03-30 | Velleja Research SRL | Probiotic composition for use in the prevention of birth-acquired bacterial and fungal infections in newborns |
| RU2640250C2 (ru) * | 2015-10-23 | 2017-12-27 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Институт экспериментальной медицины" (ФГБНУ "ИЭМ") | Способ введения генов патогенных стрептококков в хромосомную днк пробиотического штамма enterococcus faecium l3 для экспрессии в пилях |
| RU2701733C1 (ru) * | 2018-12-14 | 2019-10-01 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Институт экспериментальной медицины" (ФГБНУ "ИЭМ") | Живая вакцина на основе штамма пробиотиков ENTEROCOCCUS FAECIUM L3 для профилактики инфекции, вызванной STREPTOCOCCUS PNEUMONIE |
| RU2745626C1 (ru) * | 2020-12-05 | 2021-03-29 | Суворов Александр Николаевич | Способ создания живой вакцины против коронавирусной инфекции COVID-19 на основе пробиотического штамма Enterococcus faecium L3 и живая вакцина Enterococcus faecium L3-pentF-covid-19 |
| RU2019137928A (ru) * | 2019-11-22 | 2021-05-24 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Институт экспериментальной медицины" (ФГБНУ "ИЭМ") | Живая пробиотическая вакцина для профилактики инфекции, вызванной вирусом гриппа |
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP3000473A1 (en) * | 2014-09-23 | 2016-03-30 | Velleja Research SRL | Probiotic composition for use in the prevention of birth-acquired bacterial and fungal infections in newborns |
| RU2640250C2 (ru) * | 2015-10-23 | 2017-12-27 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Институт экспериментальной медицины" (ФГБНУ "ИЭМ") | Способ введения генов патогенных стрептококков в хромосомную днк пробиотического штамма enterococcus faecium l3 для экспрессии в пилях |
| RU2701733C1 (ru) * | 2018-12-14 | 2019-10-01 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Институт экспериментальной медицины" (ФГБНУ "ИЭМ") | Живая вакцина на основе штамма пробиотиков ENTEROCOCCUS FAECIUM L3 для профилактики инфекции, вызванной STREPTOCOCCUS PNEUMONIE |
| RU2019137928A (ru) * | 2019-11-22 | 2021-05-24 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Институт экспериментальной медицины" (ФГБНУ "ИЭМ") | Живая пробиотическая вакцина для профилактики инфекции, вызванной вирусом гриппа |
| RU2745626C1 (ru) * | 2020-12-05 | 2021-03-29 | Суворов Александр Николаевич | Способ создания живой вакцины против коронавирусной инфекции COVID-19 на основе пробиотического штамма Enterococcus faecium L3 и живая вакцина Enterococcus faecium L3-pentF-covid-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH07508649A (ja) | マイコバクテリアの膜−関連免疫原 | |
| CN110317278B (zh) | Svv和fmdv的融合蛋白及其编码基因、表达载体、细胞系、工程菌和疫苗与应用 | |
| CN102811734B (zh) | 增强免疫应答的疫苗载体和方法 | |
| CN104593397B (zh) | 一种优化的产肠毒素性大肠杆菌多价抗原基因序列及其在预防断奶仔猪腹泻中的应用 | |
| Huang et al. | Construction and immunogenicity analysis of Lactobacillus plantarum expressing a porcine epidemic diarrhea virus S gene fused to a DC-targeting peptide | |
| RU2332457C2 (ru) | Вектор, обеспечивающий экспрессию антигена вируса sars на поверхности клеток, и микроорганизмы, трансформированные этим вектором | |
| KR20050073865A (ko) | 비브리오 패혈증균 편모 구성인자 플라젤린을유효성분으로 함유하는 백신 보조제 | |
| JPH03504336A (ja) | 組換えポックスウイルス及び連鎖球菌ｍタンパク質ワクチン | |
| Hajam et al. | Incorporation of membrane-anchored flagellin into Salmonella Gallinarum bacterial ghosts induces early immune responses and protection against fowl typhoid in young layer chickens | |
| CN106434728B (zh) | 表达高致病性禽流感h5n1血凝素ha蛋白的重组枯草芽孢杆菌 | |
| JP2007503845A (ja) | 細菌における生物学的に活性なタンパク質の表面発現 | |
| BRPI1003750A2 (pt) | microrganismos recombinantes, métodos de preparação de linhagens vacinais, antìgenos, composições vacinais vetorizadas, seus usos, anticorpos, kit de diagnóstico e métodos de tratamento e/ou profilaxia | |
| CN106987548B (zh) | 一种同时表达产气荚膜梭菌α、β2、ε、β1外毒素的重组乳酸杆菌及其构建方法和应用 | |
| KR101919002B1 (ko) | 구제역 바이러스의 가용성 다가 항원단백질 및 이의 용도 | |
| RU2782529C1 (ru) | Способ создания живого штамма энтерококка L3-SARS на основе биологически активного штамма Е. faecium L3 | |
| CN110746496B (zh) | 一种鲍曼不动杆菌的pal重组蛋白及其编码基因和它们的应用 | |
| KR101765394B1 (ko) | 돼지 유행성설사 바이러스의 에피토프 단백질, 이를 암호화하는 유전자를 포함하는 재조합 벡터, 이를 발현하는 형질전환체 및 이를 포함하는 돼지 유행성설사 바이러스 예방 또는 치료용 조성물 | |
| CN108410784B (zh) | 猪链球菌△CPS/SsnA-mSly(P353L)-SC19工程菌及在疫苗中应用 | |
| RU2640250C2 (ru) | Способ введения генов патогенных стрептококков в хромосомную днк пробиотического штамма enterococcus faecium l3 для экспрессии в пилях | |
| WO2004073736A1 (es) | Cepas atenuadas de vibrio cholerae y vacunas liofilizadas que las contienen | |
| CN111620954B (zh) | 一种抗非洲猪瘟病毒的融合蛋白及其制备方法和应用 | |
| RU2745626C1 (ru) | Способ создания живой вакцины против коронавирусной инфекции COVID-19 на основе пробиотического штамма Enterococcus faecium L3 и живая вакцина Enterococcus faecium L3-pentF-covid-19 | |
| RU2776479C1 (ru) | Живая пробиотическая вакцина, содержащая консервативные эпитопы вируса гриппа А (LAH+4M2e), для профилактики гриппозной инфекции | |
| CN113943376A (zh) | 一种融合基因、其编码蛋白及其在抗非洲猪瘟中的应用 | |
| CN110229234B (zh) | 一种具有免疫保护性的副猪嗜血杆菌融合蛋白CdtB-OppA |