JPH03504336A - 組換えポックスウイルス及び連鎖球菌ｍタンパク質ワクチン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 組換えポックスウィルス及び連鎖球菌 Ｍタンパク質ワクチン 本発明は、ヒトを含む哺乳類宿主に、Ｍ６タンノ（り質の保存露出領域（ｃｏｎ ｓｅｒｖｅｄ、ｅｘｐｏｓｅｄ　ｒｅｇｉｏｎ）に対応するタンノくり質を発現 させるようなりＮＡ配列（遺伝子）を含むように改変された、ワクシニアウィル ス及びニワトリポックスウィルスのようなウィルス類に関するものである。本発 明は、また、このように改変された生産物の、連鎖球菌性感染防止用ワクチンと しての使用に関するものである。さらには、本発明は、前記のような遺伝子を担 うプラスミツド、あるいはその他のベクターに関するものである。

関連する応用分野 本願は、１９８９年６月２１日出願になる合衆国特許出願第０７／３６９１１８ 号の部分継続出願である。また、本願と並行的に出願されている１９９０年　　 月　　日出願になるＦｉｓｃｈｅｔｔｉの特許出願第　　　　　　　号（代理人 文書番号１８１０６Ｂ）についても言及する。この出願は、１９８９年２月２７ 日出願になる特許出願第０７／３１５，５８８号の部分継続出願であり、このも のはさらに、１９８８年３月２５日出願になる特許出願第１７３．３８０号の部 分継続出願である。以上のそれぞれを引用して本明細書に組み入れるものとする 。

本発明の背景 合衆国では、毎年約３千万件のグループＡ連鎖球菌感染症が見られており、その 最も一般的なものは、主として学齢児童に見られる急性連鎖球菌性咽頭炎である 。治療せずに放置した、あるし１ねくことがあり得る。合衆国では大きな問題と はいえないものの、この連鎖球菌性咽頭炎は、世界の発展途上国では重大な問題 である。例えば、インドでは、約６百万の学齢児童がリューマチ性心臓病に侵さ れているものと推測されている。

グループＡ（Ａ群）連鎖球菌類のＭタンパク質は、これら微生物体の表面から約 ５０ｎｍ伸長したコイル状コイル中に配置されているヘリックス構造の線維状二 量体である。このものは繊維状分子で、８０種以上の血清型のＭが存在する。こ のタンパク質によって、連鎖球菌は非免疫的食細胞活動に抵抗性を持つことにな る。これが、連鎖球菌系バクアリブの主要な有毒要因である。

従って、Ａ群連鎖球菌には８０種以上の血清型が存在することから、型特異性エ ピトープに基くワクチンは実用的とはいえない。

一般に、連鎖球菌感染を防ぐワクチンを目ざして著しい、費用をおしまない努力 が続けられているが、まだ満足すべきものは開発されていない。

Ａ群連鎖球菌に対する安全かつ効果的なワクチンの開発を求める動きは活発であ る。

本発明の概要 驚くべきことに、Ｍタンパク質の保存露出領域（ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ　ｅｘｐｏ ｓｅｄ　ｒｅｇｉｏｎ）に対応するポリペブタイド〔以下、場合によって１Ｍ６ ′　タンパク質」と称する〕が、哺乳動物に投与した場合に、保護免疫反応を誘 発し得る、という事実が見いだされた。このＭ６°ポリペブタイドは、オルソポ ックスウィルス属ワクシニア（ｏｒｔｈｏｐｏｘｖｉｒｕｓ　ｖａｃｃｉｎｉａ ）またはアビポックスウィルス属ニワトリボックス（ａｖｉｐｏｘｖｉｒｕｓ　 ｆｏｗｌｐｏｘ）などのポックスウィルス科（ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ）のウィル スのゲノムを改変して、Ｍ６’　タンパク質発現性の遺伝子操作遺伝子〔すなわ ちＭ６°遺伝子（Ｍ６°ｇｅｎｅ）　）を含ませることによって生産することが できる。このＭ６’タンパク質の哺乳動物への投与は、このタンパク質のための 遺伝情報を指定した遺伝子を含む改変したワクシニアウィルスまたはニワトリポ ックスウィルスをその哺乳動物に投与することによって行うことができる。

従って、本発明は、哺乳動物における連鎖球菌感染症に対して免疫保護反応を誘 発し得るタンパク質を提供するものであり、このタンパク質は、Ｍ６タンパク質 の保存露出領域におけるアミノ酸残基配列と同じ、または実質的に同じアミノ酸 配列を包含するものである。また、本発明は、Ｍ６’　タンパク質を提供するも のである。

さらに、本発明は、哺乳動物における連鎖球菌感染症に対して免疫保護反応を誘 発し得るようなタンパク質のための遺伝情報を指定した遺伝子を提供するもので あり、この場合に、このタンノくり質は、このＭ６タンパク質の保存露出領域に おけるアミノ酸残基配列と同じ、または実質的に同じアミノ酸配列を包含するも のである。本発明はまた、Ｍ６’遺伝子を提供する。

さらにまた、本発明は、哺乳動物における連鎖球菌感染症に対して免疫保護反応 を誘発し得るようなタンノくり質のための遺伝情報を指定した遺伝子を含むプラ スミツドを提供するものであり、ここに、このプラスミツドは、Ｍ６タンパク質 の保存露出領域におけるアミノ酸残基配列と同じ、または実質的に同じアミノ酸 配列を包含するものである。この遺伝子の遺伝情報はＭ６’遺伝子であり得る。

本発明はまた、哺乳動物における連鎖球菌感染症に対して免疫保護反応を誘発し 得るタンパク質のための遺伝情報を含むウィルス、好ましくはポックスウィルス 科に属するウィルスを提供するものであり、このタンパク質は、Ｍ６タンパク質 の保存露出領域におけるアミノ酸残基配列と同じ、または実質的に同じアミノ酸 配列を包含するものである。代表的なポックスウィルス類には、ワクシニア（ｖ ａｃｃｉｎｉａ）及びニワトリボックス（ｆｏｗｌｐｏｘ　）が含まれ、ニワト リボックスが好ましいウィルスの一つである。このウィルスが含むことのできる 遺伝子は、Ｍ６’遺伝子である。

さらに一般的にいえば、本発明は、原核生物の表面抗原、またはその部位のため の遺伝情報を含むウィルスを提供するものであり、この表面抗原またはその部位 は、この原核生物の有毒性の原因をなすものである。代表的なウィルスには、ポ ックスウィルス科に属するもの、特にワクシニア及びニワトリボックスが含まれ 、ニワトリボックスは好ましいウィルスの一つである。表面抗原またはその部位 は、哺乳動物における免疫保護反応を誘発し得るタンパク質であって、Ｍ６タン パク質の保存露出領域におけるアミノ酸残基配列と同じ、または実質的に同じア ミノ酸配列を包含するものであり得る。この原核生物は、バクテリア、特に連鎖 球菌であり得る。このウィルスが含むことのできる遺伝子は、Ｍ６″遺伝子であ る。

同様にして、本発明は、医薬品として容認し得る担体と、ある原核生物の表面抗 原またはその部位のための遺伝情報を含むウィルスとを包含するワクチンを提供 するものであって、この表面抗原またはその部位は、この原核生物の有毒性の原 因となるものであり、また、このウィルスは、この原核生物によって生じる感染 症に対して保護反応を誘発するに十分な、十分な抗原またはその部位に対する量 で存在するものである。この表面抗原またはその部位は、哺乳動物における連鎖 球菌に対して免疫保護反応を誘発し得るタンパク質であって、Ｍ６タンパク質の 保存露出領域におけるアミノ酸残基配列と同じ、または実質的に同じアミノ酸配 列を包含する。また、このウィルスは、連鎖球菌に対して保護反応を誘発するに 十分な、十分なタンパク質に対する量として存在する。この原核生物は、バクテ リア、特に連鎖球菌であり得る。この場合も、代表的なウィルスには、ポックス ウィルス科に属するもの、特にワクシニア及びニワトリボックスが含まれ、ニワ トリボックスは好ましいものである。また、このウィルスか含むことのできる遺 伝子は、Ｍ６’遺伝子である。

さらには、本発明は、哺乳動物における原核生物による感染症に対して治療を要 する場合に、これを治療する方法を提供するものであって、ある原核生物の表面 抗原またはその部位のための遺伝情報を含むウィルスを前記哺乳動物に投与する ことを包含し、この表面抗原またはその部位は前記原核生物の有毒性の原因をな すものであり、また、このウィルスは、この原核生物に起因する感染症に対して 抗体反応を誘発するに十分な、十分な抗原またはその部位に対する量で投与され るものである。表面抗原またはその部位は、哺乳動物における連鎖球菌感染症に 対して免疫保護反応を誘発し得るタンパク質であって、Ｍ６タンパク質の保存露 出領域におけるアミノ酸配列と同じ、または実質的に同じアミノ酸配列を包含し 、このウィルスは、治療効果に十分な抗体反応を誘発するに十分な、このタンパ ク質に対する量で投与されるものであり得る。この原核生物はバクテリア、特に 連鎖球菌であり得る。

この場合も、代表的なウィルスには、ポックスウィルス科に属するもの、特にワ クシニア及びニワトリボックスが含まれ、ニワトリボックスが好ましい。また、 このウィルスが含有し得る遺伝子はＭ６’遺伝子である。

本発明はさらに、原核生物の表面抗原またはその部位の切片のだめの遺伝情報を 指定した遺伝子を提供するものであり、この表面抗原は、この原核生物の有毒性 の原因をなすものであり、また、この表面抗原またはその部位の切片は、哺乳動 物におけるこの原核生物に起因する感染症に対して免疫保護反応を誘発し得るも のである。このものは自然の産物ではない。なぜならば、この遺伝情報は、表面 抗原またはその部位の切片の７だめのものであって、抗原全体のためのものでは ないからである。

本発明は、同じく、原核生物の表面抗原またはその部位の切片のための遺伝情報 を含むプラスミツドを提供するものであり、この表面抗原は、この原核生物の有 毒性の原因をなすものであり、この遺伝情報は、自然界ではこのプラスミツド中 に存在しないものである。

「この遺伝情報は自然界では砕このプラスミツド中に存在しない」という言葉を 用いるのは、自然の産物は本発明の範囲に含まれていないことを明らかにするた めである。例えば、新規なプラスミツドｐＶＶ３　：Ｍ６′中の本発明の新規な Ｍ６’遺伝子は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションに寄託されて いる。この寄託物は、大腸菌（Ｅ、ｃｏｌｉ）のｐＶＶ３：Ｍ６’　プラスミツ ド試料であり、受は入れ番号は第６８００３号であった。このＭ６°遺伝子は大 腸菌のプラスミツド中に、自然界では存在しない。すなわち、「この遺伝情報（ Ｍ６′遺伝子）は自然界ではこのプラスミツド（大腸菌の）中には存在しない」 ものである。

同様に、「表面抗原またはその部位の切片」という言葉を用いる市のは、本発明 の範囲に入る遺伝子及びプラスミツドには、自然の産物、あるいは既知のもの、 例えばＭ６遺伝子またはプラスミツドｐＶＶ３　：Ｍ６は含まれないことをいう 。

同様に、本発明は、医薬品として容認し得る担体と、好ましくは、哺乳動物にお ける連鎖球菌感染症に対する免疫反応を誘発し得るタンパク質のための遺伝情報 を含んだポックスウィルス科に属するウィルスとを包含するワクチンを提供する ものであり、このタンパク質は、Ｍ６タンパク質の保存露出領域におけるアミノ 酸残基配列と同じ、または実質的に同じアミノ酸配列を包含し、また、このウィ ルスは、連鎖球菌感染症に対して保護反応を誘発するに十分な、十分なタンパク 質に対する量で存在するものである。ここでも、代表的なポックスウィルス類に は、ワクシニア及びニワトリボックスが含まれ、ニワトリボックスが好ましい。

また、このウィルスが含むことのできる遺伝子は、Ｍ６’遺伝子である。

本発明はさらに、哺乳動物における連鎖球菌感染症の治療を要する場合にこれを 行う方法を提供するものであって、哺乳動物における連鎖球菌感染症に対して免 疫保護反応を誘発し得るタンパク質のための遺伝情報を含むポックスウィルス科 に属するウィルスをその哺乳動物に投与することを包含し、この場合に、このタ ンパク質は、Ｍ６タンパク質の保存露出領域におけるアミノ酸残基配列と同じ、 または実質的に同じアミノ酸配列を包含し、このウィルスは、十分な治療効果を 上げるような抗体反応を誘発するに十分な、タンパク質に対する量で投与される ものである。ここでも、代表的なポックスウィルス類には、ワクシニア及びニワ トリボックスが含まれ、ニワトリボックスが好ましい。また、このウィルスが含 むことのできる遺伝子は、Ｍ６’遺伝子である。

「同一または実質的同一」という言葉は、本明細書では、本発明のタンパク質に おけるアミノ酸の配列順序が、望ましい活性を存することをいい、すなわち、こ のようなタンパク質が、Ａ群連鎖球菌のＭ６タンパク質の露出保存領域と同一で あるか、あるいは、その切片が同じ活性を育するほど類似しているからである。

Ｍ６タンパク質の保存露出領域と同一であるものと同じ活性を育するほどこの領 域に類似しているタンパク質を決定するには、相当程度を過える実験の遂行を要 するものではない。本技術分野における技量の持ち主なら、本明細書を読むこと によって、Ｍ６タンパク質の露出保存領域と同じ活性を有し、実質的に同じ配列 順序を有する同質のポリペブタイドを調製することができる。例をあげれば、末 端基を伸長して、例えば、タンパク質に結合するだに容易に合成することができ 、その調製に高い費用を要しないかも知れない。このようなタンパク質も本発明 の範囲内にあるものと考えられる。

本明細書に用いる用語をさらに明確にするなら、本発明のタンパク質はＭ？タン パク質の全体ではなく、Ａ群連鎖球菌（またはそのタンパク質）のＭ６タンパク 質の保存露出領域（ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ。

ｅｘｐｏｓｅｄ　ｒｅｇｉｏｎ）と同じ、または実質的に同じアミノ酸配列を育 する。本発明のポリペブタイドは、自然界に存在するとは考えていない。本発明 のタンパク質を得るためには、これらのタンパク質を発現するようにウィルスを 遺伝子操作して改変する。しかし、本明細書では、Ａ群連鎖球菌のＭ６タンパク 質の保存露出領域とその利用について記述しているが、Ｍタンパク質から選択的 な酵素開裂または化学開裂によって、あるいは、固相合成によって〔関連特許出 願に述べられているＦｉｓｃｈｅｔｔｊの応用法を参照〕、タンパク質合成を遂 行することができる。改変ウィルスの遺伝子形質発現によるものであれ、または 、その他の合成法によるものであれ、本明細書に述べるタンパク質は、自然界の 産物ではない。

なぜなら、ここにいうタンパク質はＭタンパク質の全体ではなく、Ｍタンパク質 の一部においてのみ、同じ、または実質的に同じアミノ酸配列のものであるから である。この一部とは、Ｍタンパク質（またはその部分）の保存露出領域を包含 する。

さらには、本明細書に述べるタンパク質は任意のＭタンパク質、またはその他自 然界に存在するタンパク質と同一の特性及び育用性を有するものではない。なぜ ならば、Ｍタンパク質は、連鎖球菌のそれぞれの菌株に応じてＭタンパク質の種 変異性があるために、連鎖球菌感染症に対する防護の目的で利用できないからで ある。これに対して、本明細書に述べるタンパク質は、種特異性のない保護作用 を示すワクチンの調製に用いることができる。このようにして、本明細書に述べ るタンパク質は、自然界の産物ではない。すなわち、これは自然界に明確な実体 として存在せず、これまで生産されたことのないものである。従って、自然界の 産物で、このタンパク質と同じ性質を有するものはないからである。

図面の簡単な説明 第１図は、ロックフェラー大学のコレクションのうちのＡ群連鎖球菌カルチャー のＤ４７１菌株からのＭ６タンパク質の完全なアミノ酸配列を示す。

第２図は、Ｄ４７１菌株からの完全なＭ６タンパク質が細胞壁に存在するモデル を図示したものである。

第３図及び第４図は、本発明の生産物を製造するのに用いる戦術を示す。

第５図及び第６図は、それぞれＭ６’　タンパク質及びＭ６″遺伝子の構造を示 す。

第７図は、好ましい保存領域（ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ　ｒｅｇｉｏｎ）ペブタイド の位置関係を示す。

詳細な説明 第２図かられかるように、Ｍタンパク質の一部分、すなわちカルボキシ末端基は 、細胞壁のペプチドグリカン中に、そして細胞質膜中に埋まり込んでいる。Ｍ分 子の一部は、細胞壁の炭水化物によって防護されており、この炭水化物は、ラム ノースの基本骨格（開環状）と、Ｎ−アセチルグリコサミン側鎖（閉環状）とか らなっている。Ｍタンパク質の遠位アミノ末端基（ｄｉｓｔａｌ　ａｍｉｎ。

ｔｅｒｍｉｎｕｓ　）は非ヘリックス状である。炭水化物防護域と非ヘリックス 状領域との間のＭ−分子の大部分は、連鎖球菌の表面に露出している。

第１図は、ある特定の菌株からのＭタンパク質の完全なアミノ酸配列である。別 の菌株からのＭｅタンパク質は、全般的に同じ構造的特徴と空間配置を有するが 、アミノ酸配列が異るだろう。

主要な変化は、アミノ末端基の方で生じる。分子は、カルボキシ゛　末端の方は ど状態が一定（ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ　）となる。従って、血清型のそれぞれ異る Ｍ分子の中では、カルボキシ端に近い、細胞壁に近位の位置はど、次第に均質性 が増してくる。このように状態が一定に保存された露出領域（ｃｏｎｓｅｒｖｅ ｄ　ｅｘｐｏｓｅｄ　ｒｅｇｉｏｎ）は、はぼ１７０位から２９９位に及び、も っと一般的には、２１０位のイソロイシンから始まる領域と見られている。この 保存露出領域は、好ましくは、はぼ２１０位からおおよそ２９８位までである。

この分子の他の部分は状態が一定に保存された非露出領域と考えられる。本発明 は、Ｍタンパク質分子のこのような保存露出領域に関するものである。

Ｍタンパク質の抗原的変異の原因をなすものは、アミノ末端基における変異性で ある。ある血清型に対して保護作用を示す型特異性抗体は、オブソニン食細胞検 定において、他の血清型による感染に効果的に抵抗性を示さない。従って、各個 人が異なる連鎖球菌によって何度も感染を受けることは、理論的にあり得ること であり、それぞれの感染は、免疫系が、Ｍ−分子の型特異的なＮ−末端領域に適 した抗体を生じるまで継続するだろう。

保存状慇がいちじるしく劣るスペーサー配列が間に存在するものと信じられでい る。〔第７図を参照。〕高度に一定状態に保存されているＣＩ及びＣ２繰返しブ ロックは、例えば６覆連鎖球菌では、細胞壁に隣接して位置している。

具体的にいえば、第７図は、Ｍタンパク質のアミノ端は、型特異性〔抗原的に可 変〕なものとして示されている。２９８−４４１位の配列は、一般には細胞に結 合している。保存領域中には、Ｃ１ブロック、スペーサー、Ｃ２ブロックからな る炭素繰返し領域が生じている。種々の程度で他のＭタンパク質血清型に共通な Ｍ６の非型特異性エピトープは、ここに位置する。Ｍ６タンノくり質のＢ繰返し 領域及びペプシン位を写しているモノクローナル抗体及び親和性純化アンチペプ チド抗体は、５０種以上の明確な血清型のうちのわずかＩＯないし１７％につい て共有されているに過ぎない。対照的に、隣接炭素繰返し領域を写した抗体は、 血清型のほぼ６０％ないし７０％にわたって共通されている。本発明のタンパク 質は、広い範囲の保護を目的として、Ｂ５繰返しブロックから、炭素繰返し領域 を通じて、また、Ｂ４繰返しブロックからカルボキシ末端まで、に及ぼすことが できるが、このタンパク質２３５位から２９９位に及ぶ領域、すなわち、高度に 保存された炭素繰返し領域中に完全に含まれる領域と同じ、または実質的に同じ ものであることがさらに好ましい。以下に論じるところでは、ペプチドまたはタ ンパク質またはポリペプチド、その他の言葉の後に括弧で囲って示す数字、例え ば「ペプチド（２４０−２６０）Ｊは、Ｍ６タンパク質中の、最初の数字の位置 から第２の数字の位置までにわたる配列と同じ、または実質的に同じアミノ酸配 列を有するペプチドまたはタンパク質またはポリペプチドのことをい異性ｍＡｂ （１０Ｂ６）は、ペプチド＜２４０−２６０）を写したものであり、別のクラス ニー特異性ｍＡｂ（１０Ｆ５）は、ペプチド（２４０−２６０）及びペプチド（ ２７２−２９２）を写したロット法によって、い（つかのクラスＩ［Ｍタンパク 質の抽出形体と実質的に同じような免疫活性を有する。ただし、ペプチド（２４ ８−２６９）及びペプチド（２５６−２７７）に対する抗ペプチド抗体は、クラ スニー特異性であるかも知れない。このように、Ｍ６タンパク質の炭素繰返し領 域のうちの狭い領域の中に、クラスニー特異性と、共通の抗原決定基とが存在す ものであろう。

従って、炭素繰返し領域に対応する抗原からなるワクチンは、クラスＩ及びクラ ス■の両者の連鎖球菌に対して防護作用を示すであろう。

このように、Ｍ６タンパク質の保存露出領域と同じ、または実質的に同じ配列で あるタンパク質であることに加えて、炭素繰返し領域またはその部分の配列と同 じ、または実質的に同じタンパク質であることが望ましい。同様にして、好まし いタンパク質には、ポリペプチド（２ｉ　６−２３５）　、ポリペプチド（２４ ８−２６９Ｌポリペプチド（２７５−２８４）、ポリペプチド（２４０−２６０ ）、ポリペプチド（２５６−２７７）、及びポリペプチド（２７２−２９２）が 含まれる。〔関連特許出願に述べたＦｉｓｃｈｅｔｔｉの応用法を参照。〕連鎖 球菌感染症に対する防護用のワクチンはこれまでにも提案されている。これらの ワクチンは、分子の超可変アミノ端部からのポリペプチドによって調製されてい る。これらは、対応する血清型に対して型特異性の免疫を与えるという点で、あ る程度の成功を修めている。同じ多価ワクチンにいくつかの型特異性抗原決定基 を導入することによって、これらの性能は改善されている。

しかし、多数のＭ血清型系列が存在することを考えれば、この手法は魅力的なも のとはいえない。

Ａ群連鎖球菌は広く行きわたったヒトの病原体であり、鼻咽腔感染症や膿癲疹の 原因となる。合衆国だけでも、毎年約３千万Ａ群連鎖球菌感染の症例が見られ秤 る。連鎖球菌感染症は抗生物をきたす。連鎖球菌感染症に難まされている個人の 一部は、リューマチ熱や糸球体腎炎などの、もっと重い病気に進展する。発展途 上国では、リューマチ熱は小児における心臓病の主たる原因である。従って、Ａ 群連鎖球菌に対する安全で効果的なワクチンを開発することは強く求められてい る。

経験の示すところでは、連鎖球菌感染症、特に咽頭炎は、一般に小児に限られる 。感染症例は６オないし８才でピークに達する。

成人はこのような感染症に対して比較的抵抗性があるよって、これは恐らく、は とんどの血清型に対して効果のある免疫を構築しているためであろう。それゆえ 、すべてでないにしても、はとんどの連鎖球菌血清型のエピトープを認識する抗 体を生産していて、連鎖球菌感染に対する免疫反応が存在するであろう。このよ うなエピトープは、細胞壁の近位によって保護されていない、Ｍタンパク質の保 存領域、すなわち、Ｍタンパク質の保存露出領域中に存在することが見いだされ た。

この領域におけるアミノ酸の同一性は、血清型の間で多少異なるが、一般には、 Ｍタンパク質分子のアミノ酸位約１７０から２９９位まで、好ましくは２１０位 から２９８または２９９位まで、さらに好ましくは、約２３５位から約２９９位 までに及ぶ。

この領域からのポリペプチドまたはタンパク質は、連鎖球菌感染症防護の必要の ある場合に哺乳動物に投与すれば、免疫保護反応を誘発し得るし、また現に誘発 している。

の一つは適応系であり、これによって、侵入微生物に対する免疫反応が、［ｇＧ 抗体の生産を招来し、この抗体が、補体を介して、オブソニン作用及び食細胞活 動を起こさせることによって機能する。もう一つは、ＩｇＡの生産または活動化 であり、これは、唾液、気管気管支分泌物、初乳、乳汁なと性尿器分泌物、など の粘液分泌物の主要な免疫グロブリンである。これらの分泌物には［ｇＧも見い だされるが、その濃度は低い。分泌１ｇＡ　　（ｓ［ｇＡ）は、分泌成分によっ てタンパク質分解から保護されている［ｇＡの二量体形式のものである。ＩｇＡ の一つの機能は、感染性微生物の付着、集落形成、及び粘液組織への侵入を阻止 することにある。

本発明を実施するための現在好まれている操作手順は、主として、鼻内投与また は経口投与によって、分泌免疫系、特にｓｌｇＡを刺激することを含む。そこに は、付随的なＩｇＧの生産もあろうし、両者が免疫法に寄与するであろう。本発 明は、主としてこの操作手順に適用するものとして記述するつもりである。本発 明のポリペプチドは、また、低レベルのＩｇへの付随的生産を伴う非経口投与に よって、主要な反応としての【ｇＡを刺激するために用いることができる。

ワクシニアウィルス及びニワトリポックスウィルスは、ポックスウィルス科に属 するものである。ポックスウィルス科の中には、オルソポックスウィルス属、及 びアビポックスウィルス属、などがある。ポックスウィルス科には２０種以上の ウィルスがあり、天然痘（ｓｍａｌｌ　ＰＯＸ　）　、牛痘（ｃｏｗｐｏｘ）　 、伝染性上皮腫（ｆｏｗｌｐ。

Ｘ）及び種々の哺乳動物疾患の原図となるウィルスが含まれる。

ニワトリボックス（ｆｏｗｌｐｏｘ　）はアビポックスウィルス（Ａｖｉｐｏｘ ｖｉｓｕｓ　）　ｒｌに属するが、ワクシニア（ｖａｃｃｉｎｉａ）及びスモー ルボックス（ｓｍａｌ　１ｐｏｘ）はオルソポックスウィルス（Ｏｒｔｈｏ　ｐ ｏｘｖｉｒＵＳ）属に属する。アビポックスウィルス属には、カナリーボックス （ｃａｎａｒｙ　ＰＯＸ）　、ジャンコボックス（ｊｕｎｃｏ　ｐｏｘ　）　、 ビジョンボックス（ｐｉｇｅｏｎ　ｐｏｘ）　、スバロウボックス（ｓｐａｒｒ ｏｗ　ｌｌ０Ｘ　）　Ｓスターリングボックス（ｓｔａｒｌｉｎｇ　ｐｏｘ）。

ターキーボックス（ｔｕｒｋｅｙ　ｐｏｘ）が含まれる。ポックスウィルス類の 特性には、ピロンが大きく、レンガ状（パラポックスウィルス属の場合は卵形） で、大きさはおよそ３００−４５０対１ｌ７０−２６０ｎで、外部にエンヴエロ ープを有し、管状構造物におおわれ、内部構造はＤＮＡを含存するコア（ｃｏｒ ｅ）と、一つまたは二つのラテラルボディ（ｌａｔｅｒａｌ　ｂｏｄｙ）とから なる。ゲノムは、１３０−２８０ｋｐｐの大きさの、共有結合による閉鎖端（ヘ アピン型）を有するｄｓＤＮＡの単一分子からなる。このウィルスは、１００以 上のタンパク質と、いくつかの酵素を有する。［ＤＮＡ依存ＲＮＡポリメラーゼ 、グアニルメチルトランスフェラーゼ、及びポリ（Ａ）ポリメラーゼを含む。〕 最初の転写は、ウィルスのコア内で起こり、初期タンパク質の合成に導かれ、そ の一部は、ウィルスＤＮＡの脱外皮に導き、その後の転写及びＤＮＡ複製を行わ せる。複製及び集合は、ビロブラズＦ（ウィルスファクトリーズ）中のサイトプ ラズム中で起きる。発芽（細胞外エンベローブトビリオン）または細胞崩壊（細 胞内エンベローブトビリオン）によって、ピリオンを放出する。ポックスウィル ス群に共通の抗原（ヌクレオプロティン抗原）が存在し、オルソポックスウィル ス属のウィルスは、非ピリオン性の赤血球凝集素を生産する。

本発明は、ワクシニア及びニワトリボックスを、Ｍタンパク質つィルス科に属す るもの）も用いることができる。同様に、原核生物の存寄性の原因である原核生 物抗原のために他の遺伝子を用いることも可能である。ニワトリボックスは好ま しいベクターである。なぜならば、ワクシニアに暴露された約１０万人に１人が 存寄作用（例えば脳炎）を受けるが、ニワトリボックスに暴露された場合にはそ のような作用は知られていない。加えて、ニワトリポックスウィルスの自然界に おける宿主の範囲は鳥類に限られている。（Ｖａｃｃｉｎｅ、第６巻、１９８８ 年１２月号５０４頁、Ｔａｙｌｏｒ等による「ニワトリポックスウィルス組換え 体によって誘発される鳥インフルエンザに対する保護免疫性」を参照。これを引 用して明細書に加えるものとする。〕ここでＦＰ−１と名付けるニワトリボック ス株は、ふ化１日後のひよこにワクチンとして使用するように改変したＤｕＶｅ ｔｔｅ株である。この株は、ＯＤＣＥＰ２５／ＣＥ６７／２３０９０ｃｔｏｂｅ ｒｌ　９８０と名付けられた市販の株で、ｒｎｓｔｉｔｕｔｅ　ＭｅｒｉＱ、　 Ｉｎｃ、から入手することかできる・ワクシニア及びニワトリボックスは、真核 ウィルスであって、宿主細胞の細胞質中でそれぞれの増殖サイクルのほとんどの 段階を完了している。これらは非トランスフォーミングウィルスである。すなわ ち、ウィルスＤＮＡは、宿主ゲノム中で組込みが行われず、ウィルス遺伝子生産 物は形質転換を起こさない。これらのウィルスは非ガン性であると考えられる。

ワクシニアは、天然痘に対する接種用ワクチンとして約２００年間使用されてき ており、専門医は、ワクチンとして使用した場合のこのウィルスの性質をよく知 っている。ワクシニアの接種に危険がなしとはしないが、この危険は全般的によ く知られ、よく定義されていて、このウィルスは比較的良性のものと考えられて いる。

Ｐａｏｌｅｔｔｉ等は、米国特許第４．６０３．１１２号、第４．７２２．８４ ８号、第４，７６９．３３０号で、ワタシニア株を生産する手順について述べて おり、そこでは、例えば自然界に存在しない遺伝子を導入することによって、ワ クシニアゲノムを改変している。これらの特許の手順は、本発明生産物の調製に 一般的に応用し得る。

また、米国特許第４，６０３．１１２号、第４，７２２．８４８号、及び第４． ７６９．３３０号のそれぞれを、本明細書に引用してその一部０．７１１号、第 １１０，３３５号、第１８６．０５４号及び２３４．３９０号、それぞれ、１９ ８７年８月２７日、１９８７年１０月２０日、１９８８年４月２５日、及び１９ ８９年８月２３日出願〕〔これを本明細書に引用して加える〕では、Ｐａｏｌｅ ｔｔｉは、ニワト自然界に存在しない遺伝子を導入することによって、ニワトリ ボックスのゲノムを改変している。しかし、この公告も、また前記のＰａｏ）ｅ ｔｔｉの特許も、原核生物の有毒性の原因をなす原核生物表面抗原（またはその 部分）のための遺伝子を、ウィルス、特にワクシニアまたはニワトリボックスに 導入することを教示も示唆もしていない。また、特に、前述のＰａｏｌｅｔｔｉ の公告も特許も、Ｍタンパク質の保存露出領域（またはその一部）のための遺伝 子を、ウィルス、特にワクシニアウィルスまたはニワトリポックスウィルスに導 入することを教示も示唆もしていない。さらに、ＷＯ３９１０３４２９号におけ るＰａｏｌｅｔｔｉは、原核生物Ｄ　Ｎ　Ａをウィルスに挿入することについて の実際上の音用性を提示していない。

すなわち、原核生物ＤＮＡについてのＰａｏｌｅｔｔｉの唯一の用途は、事実上 あらゆる系にベーターガラクトシダーゼを発現させるＬａｃ＊遺伝子についての もので、一般に単なる発色マーカーとして用いるものである。ウィルス中にＬａ ｃｉ遺伝子を導入することによってベーターガラクトシダーゼの発現は、ウィル ス中に抗体のための原核生物ＤＮＡ　（またはその部分）を挿入することによる 、原核生物の有毒性の原因をなす抗体（またはその部分）をウィルスに発現させ ることを教示するものでも、示唆するものでもない。

原核生物の有毒性の原因をなす抗体を発現する遺伝子操作遺伝子、好ましくは、 Ｍ６°遺伝子または、Ｍ６タンパク質の保存露出領域を発現する遺伝子（Ｍ６′ タンパク質）をゲノム中に含む改変ウィルス、好ましくは、ニワトリポックスウ ィルスまたはワクシニアウィルスが、哺乳動物宿主において、その原核生物によ って生じる感染症、例えば、連鎖球菌性咽頭炎などの連鎖球菌感染症に対して宿 主を保護するに十分な免疫反応を効果的に発生させるために使用することができ る、ということがここで発見されＭ６°遺伝子を含有し、Ｍ６°タンパク質を発 現する適切なウィルス組換え体を組み立て、単離するための戦略を第３図及び第 ４図に示す。新規なウィルスの生産には、Ｈｒｕｂｙ等がＰｒｏｃ、　Ｎａｔｌ 。

Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　Ｕ　Ｓ　Ａ第８５巻５７１４−５７１７頁、１９８８年 ８月Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　（これを本明細書に引用して加える〕に述べて いるようにして調製した既知のプラスミツドｐＶＶ３：Ｍ６を用いて、新規なプ ラスミツドｐＶＶ３　：Ｍ６’　を生産し、これを用いて、キメラＭ６’遺伝子 をワクシニアまたは、好ましくはニワトリポックスウィルスゲノムに導入して、 組換えウィルスＶＶ：Ｍ６°　またはＦＰＶ：Ｍ６’　を生産する。

Ｍ６タンパク質の完全な保存領域遺伝子切片を含有する、すなわち、先端を切断 したＭ６タンパク質（本明細書ではＭ６’　タンパク質と称する）を表現するた めのＭ６’遺伝子を含有する新規なワクシニアウィルスまたはニワトリポックス ウィルスは、原核生物ワクチンとして用いるとき、バクテリアの粘膜増殖を顕著 に保護する作用を授けるものであることが見いだされた。便宜上、この新規なワ クシニアウィルスを、ここではＶＶ：Ｍ６°　ウィルスと称し、新規なニワトリ ポックスウィルスを、ここではＦＰＶ：Ｍ６′　ウィルスと称することにする。

以下に示す実施例は単なる例示による非限定的なものであり、本発明を限定する ものとして考えるべきではなく、これらの自明な改変を本発明の精神又は範囲か ら逸脱することなく行い得る。

実施例 実施例１：ウィルスの組立て（ＶＶ：Ｍ６’）図３にＶＶ：Ｍ６’組換えウィル スの構造を示す。この図の上部は、Ｍ６オーブンリーデイングフレームによって コードされる蛋白の主要な構造的特徴を図示の各種Ｍ血清型中での保存及び可変 領域とともに概略的に示したものである。Ｈｏｌｌｉｎｇｓｈｅａｄ等、Ｊ。

Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、　２６１．１６７７　（１９８６）参照。Ａ、Ｂ、Ｃ及 びＤアミノ酸に富んだ領域及び膜アンカー（Ｍアンカー）を示しである。図示の Ｆｏｋ　Ｉ部位を用いて、後述のようにして、Ｍ６遺伝子の保存された３′側半 分をプラスミドベクターにサブクローンした。ｖｖ：Ｍ６°組換え体のゲノム構 造を該図の下部に示しである。このＭ６’挿入部分は７．６　ｋＤａの構成性の ウィルス性チミジンキナーゼ遺伝子（太線矢印）に接続されている。初期（Ｐε ）及び後期（Ｐγ）転写開始部位とともに、初期転写物（Ｔγ）の停止に使用し た部位の概略位置を示しである。ＶＶ：Ｍ６’組換え体の構造、結合領域の配列 、及び、キメラ転写ユニットの発現をＤＮＡシークエンシング、ノーザンブロッ トハイプリダイゼーション、及び、ヌクレアーゼＳｌマツピング法により確かめ た。

図４に示すように、ＶＶ：Ｍ６’構築の第１段階において、ｐＶＭ６遺伝子の３ ′側半分に対応する断片を単離し、その口端部をＤＮＡポリメラーゼＩのフレノ ウ断片を用いて埋め込み、この平滑端化された断片をＭ１３ｍＰ　１９　ＲＦ　 ＤＮＡのＳｍａ　Ｉ部位にクローン化した。組換えファージがこの挿入断片を正 しい方向に含んでいることを、ストランド特異的オリゴヌクレオチドプローブを 用いたハイブリダイゼーションによって特定した。−重鎖ＤＮＡ要件を基質とし て調製して用い、挿入断片の７６９と７７０との間に一個のＧを導入するオリゴ ヌクレオチド部位特異的突然変異誘発を行った。この変異をＳａｎｇｅｒのジデ オキシヌクレ才チドシークエンス法によって確かめたところ、Ｍ６オーブンリー デイングのＬｙｓ−２０９のコドンがアニンフレーム（ａｎｉｎ−ｆｒａｍｅ） 　ＡＧＴ　）トンに変換されていることがわかった。この突然変異誘発された挿 入断片（Ｍ６’）を、Ｍ６°挿入断片の５′及び３°末端をそれぞれ°　切出す ＥｃｏＲＩ及びＢａｍＨＩを用いてファージＤＮＡから切出した。

この凹末端をフレノウ断片を用いて平滑断片とし、この断片を同様にフレノウ断 片で平滑末端化されたｐＶＶ３挿入プラスミドのＢａｍ８１部位に平滑末端ライ ゲーションした。制限酵素地図及びヌクレオチドシーフェンス法を使用して、Ｍ ６″挿入断片がＶＶ７．５ｋＤａプロモータ要素に対して正しい位置に含まれて いる組換えプラスミドを選択した。このｐＶＶ３　：　Ｍ　６組換えプラスミド を使用して標準のマーカートランスファー技術によってこのキメラ遺伝子をＶ■ ゲノムに導入した。この組換えウィルス（ＶＶ：Ｍ６°）を成育させ、精製し、 その後、注意深（分析することによりウィルス感染細胞中にこのＭ６°挿入断片 が存在し、健全であり、活動的に転写されていることを確かめた。

Ｍ６’遺伝子及びＭ６°プロティンの構造を構成要素の標準記号を使用して図５ 及び６に示す。

実施例２：ウィルスの効能（ＶＶ：Ｍ６’　”）マウス群（スイスＣＤ１．　Ｊ ａｃｋｓｏｎ　Ｌａｂｓ　）を投与量１０７〜Ｉ　Ｏ”スに鼻孔内及び口内の両 方から２００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンに耐性とされたＭ６グループＡス トレプトコッカス（ロックフェラーユニバーシティの３４３／１９２株）を抗原 投与した。試験中、すべての動物を１籠あたり４−５匹ずつ収容した。上記抗原 投与した株は、　Ｉｎｆｅｃｔ、　Ｉｍｍｕｎ、　５６．２６６６　（１９８８ ）に記載のＢｅ５ｓｅｎ及びＦｉｓｃｈｅｔｔｉの方法にしたがって調製した。

別個の２回の試験を、ストレプトコッカスの投与量を違えて（６Ｘ１０ｇ又はｌ ×１０７コロニー形成ユニット（ＣＦＵ／マウス））行った。どちらの場合も、 ストレプトコッカス懸濁液を２０μｍ鼻孔から投与しさらに１０μｍ口から投与 した。抗原投与後２４時間目、及びその後ｌＯ日日間２４〜７２時間間隔で、喉 を拭き（Ｃａｌｇｉｓｗａｂ　ｔｙｐｅ４、　Ｓｐｅｃｔｒｕｍ）　、スワップ を２０１ｚｇ／ｍｌのストレプトマイシンを含む血液アガープレート上で培養し 、投与されたストレプトコッカスと普通のフロラ生物との成育の競争を区分及び 防止した。３７℃で一昼夜培養し、ベーター溶血性ストレプトコッカスの存在を 記録した。抗原投与の後に死んだマウスは検死解剖し、その牌臓を無菌状態で切 除し、ストレプトマイシン下で培養し投与されたストレプトコッカスと普通のフ ロラ生物との成育の競争を区分及び防止した。３７℃で一昼夜培養し、ベーター 溶血性ストレプトコッカスの存在を記録した。試験の後死んだマウスは検死解剖 し、その牌臓を無菌状態で切除し、ストレプトマイシン含有血液アガー上で培養 した。

この研究の結果を表Ｉに示す。

表−１ 声　は組　えワクチニアウィルスによって１　　ワクチン１　されたマウスのｗ Ｌ　　びロ　ル仄没与後Φ喉墳貢物Ａ、実験１’ 野生型■■ワクチン二　　　　　　　　　　　　組換えＶＶ　：　Ｍ６°ワクチ ン：喉培養物のＣＦＵ”　　　　　　　　　　　　　　　喉培養物のＣＦＵｌ　 　＞１００　＞１００　＞１００　　　　本　　　　　　　　　　１　　０　　 ０＞１００　　　傘２　＞１００＞１００＞１００　　＊　　　　　２　０　０ 　寧３　　＞１００　＞１００　＞１００　　　　傘　　　　　　　　　　３　 　０　　０　　１＞１００　　　率４　　＞１００　　９２＞１００　　　　本 　　　　　　　　　４０５４　　　０３０５　　　６３　＞１００　＞１００　 　　　率　　　　　　　　　　５０３３　　　１１０６　　０　１５　　寧　　 　　　　　　　　　　　　６０９０　　　０００７　　４３＞１００　　８２　 　３　　４　　０　　７　　０　　１　　０　　０　　０　　０８　　３５　　 １　　１７　　２＞１００　　２０　　８　　０　　０　　０　　１　　０　　 ０９　　　１　　１　　１　　２＞１００　　５９０００　　０００１０　　　 ０　　０　　０＞１００＞１００＞１００　１０　　０　　０　　０　　０　　 ０　　０１１００００６５　　　本　　１１　　０　　０　　０　　　０　　０ 　　０１５　　　４　　０　　０　　０　　２’０１５０００　　０００Ｂ、実 験■ 野生型■ｖワクチン：　　　　　　　　　　　　組換えＶＶ　：　Ｍ６’　ワク チン：１　　＞１００　＞１００　　　寧１　＞１００　＞１．００　　　＊２ 　　＞１００＞１００＞１００　　　＊　　　　　　　　　２＞１００＞１００ ＞１００　　　＊３　　＞１００＞１００　　１３　　　＊　　　　　　　　　 ３　　１４＞１００　　０　５０＞１００＞１００４＞１００＞１００＞１００ ＞１００率４０６１００００５３６８６６７傘５０３００００ ６＞１００＞１００　　５＞１００＞１００＞１００　６　　０　　０　　０　 　０　　０　　０７＞１００　　３７　　２＞１００＞１００＞１００　７　　 ０　　０　　０　　０　　０　　０８　　１６４９３２＞１００　　６８５８　 　０　　０　　０００　　０＊＝死亡、検死解剖の後、ストレプトマイシン含有 血液アガー上で牌臓を培養したところβ−溶溶血性ストジブトコ、カスを検出。

ｌ　ストレプトコッカス抗原投与量は、実験Ｉでは６Ｘ１０’ＣＦＲであり、実 験■では１ｘｌＯ’ＣＦＲであった。

２　グループＡストレプトコッカスを抗原投与されたマウスから採取した喉スワ ップのストレプトマイシン含有血液アガー上頭コロナイゼーションはＶＶ：Ｍ６ ′組換え体によって免疫され型ライスルで免疫された動物の〉７０％が、抗原投 与の後１ｏ日までどのスワップの培養においてもグループＡストレプトコッカス 陽性を示した。このことは、ＶＶ：Ｍ６°　ライスルで免疫され同し時間だけ培 養したマウスの＜３０％コロナイゼーションからもわかる。これらの数値は表■ にまとめられている。

野生型　　　　　　１９／２５　１８／２５　１９／２５　　＋８／２５　２１ ／２５　１９／２５［７６）　　　［７２］　　［７６］　　［７２］　　［８ ４］　　［７６］組換え型（ＶＶ：Ｍ６’）　　３／２８　９／２８　　７／２ ８　８／２８　８／２８　８／２８［１１３［３２］　　　［２５］　　［２９ ］　　［２９］　　［２９］１　表■から編集。

２　カイ２乗法による野生型ワクチン投与マウスと組換え型ワクチン投与マウス との間の全時間点における有意差（１）＞、００５）。

３　グループＡストレプトコッカスに対して陽性又はストレプト６゛　ワクチン の何れかで処理した後抗原投与したマウス群の２回６５％がストレプトコッカス 抗原投与の後１日目にコロニーを形成するか、実質的にこれと同様であるか、あ るいは実験の期間中に死んでしまった。第２の８匹の群では、１００％のマウス が１日目にコロニーを形成し、その半分以上が８日目までに死亡した。

ＶＶ：Ｍ６°で免疫されたマウスの場合は、抗原投与の後１日目に喉培養物が陽 性を示したのは、実験■では０／２０　（０％）であり、実験■ではたった３／ ８（３８％）に過ぎなかった。ＶＶ：Ｍ６’は全体の４８％も死んでしまった。

死んだ動物から採取された牌臓を培養したところ、ベーター溶血性ストレプトコ ッカスが検出Ｆｉｓｃｈｅｔｔｉ　、　Ｊ、　［ｍｍｕｎｏｌ、　１４１．３５ ９２　（１９８８）　（両方とも参考として本明細書に引用する）に記載のよう にカイネティックＥＬＩＳＡ法を適用して、これを用いて抗体の存在を確認した 。ストレプトコッカスで抗原投与した時点で（免疫から４週後）、ＶＶ：Ｍウィ ルスによって免疫された動物とＶＶ：Ｍ６’　によって免疫された動物のどちら からもワクチニアウィルスに対する抗体が同様の高レベルで観測された。

実施例３　ビールス集合（ＦＰＶ：Ｍ６°）（ＦＰ−１菌株）のゲノムの不必須 部位に挿入する。その遺伝子を約ａｏｂｐの連続欠失を有するＦＰ−］ゲノムの ９００ｂｐＰＶｕチンビールスの他の方法。例えば上記ティラー等の方法、ｉｅ ニカリ等の方法（クロニングベクターとしての痘ビールスの構成コ「チミジンキ ナーゼ遺伝子ブロムヘルペス単式ビールスを感染ワクチンビールスのＤＮＡ中に 保護挿入Ｊ　　（Ｐｒｏｃ、　ＮａｔｌＡｃａｄ、Ｓｃｉ。

−ザン、プロット、ハイブリッド形成及びヌークレアーゼＳ、マツピング法で確 認される。組換え体ビールス（ＦＰＶ：Ｍ６’　）は生長し、純化され、注意深 く分析された結果、Ｍ６’挿入がビールス感染セル中に存在し、無傷のまま、有 効に転写されている□　ことが判った。

Ｍ６’遺伝子及びＭ６’蛋白の構造を第５及び６図に示す（成分の標準記号使用 ） 実施例４ビールス効力（ＦＰＶ：Ｍ６’　）マウス群をＦＰＶ：Ｍ６’　　ビー ルスまたは、野生株のいづれかで免疫した後、実施例２の方法でＭ６群Ａストレ プト球菌で誘発する。同様に抗体の存在を実施例２に示したようにして確認する 。

結果は実施例２と略同様である。

哺乳類のストレプト球菌の転移増殖を防止することを示している。

記載した新規製品はＭ６’遺伝子、該遺伝子合音プラスミドＰＶＶ３：Ｍ６°、 Ｍ６’！白、及び組換え体ヒ−／１，７．ＶＶ　：　Ｍ　６　’及びＦＰＶ：Ｍ ６°を含む。寄託の必要の許可はないが、Ｅ、ｃｏｌ〆中のＰＶＶ３　：Ｍ６’ 　プラスミドのサンプルはＡＴＣＣに寄託番号６８００３として、組換え体ワク チンビールスＶＶ：Ｍ６’　は寄託番号ＡＴＣＣＶＲ２２４２として寄託しであ る。

本発明を特別な製品について説明したが、当業者は本発明がそれに限定されない ことは理解するであろう。本発明の概念は同様な活性を有する製品を使用して実 施出来、化学合成、遺伝子工学又は他の技術によって上記製品を製造出来る。例 えば、Ｍ６’遺伝子は１つまたは数コドンを加入又は削除することによって変更 に対する同様又は略同様の保護的能力を有する修飾Ｍ６’蛋白の発現を起させる ことも出来る。以上、保存発現部位について記述したが、すべてのストレプト球 菌株に見られる総ての同様な部位は同一ではなく、またそそを生産する遺伝子も 同一ではないことは明らかである。併しそれらは略同様な活性を存するから、遺 伝子はＭ＃蛋白の同様な一般部位を有する蛋白を生産するし、該蛋白は、ストレ プト球菌感染に対して保護するものである。本発明の新規製品のかかる修飾の総 ては本件発明の範囲に含まれる。

本発明のワクチンは製薬業界で公知の標準技術により経鼻、経口、非経口投与剤 に製剤される。それを例示すると、カプセル、ダブレット、ビル、等の経口用固 体製剤、シロップエリキシル等の経口投与用液体製剤、殺菌懸濁剤エマルジョン 等の非経口製剤の如きである。

これらの組成物の多くは空気または他のガス圧で放出できる容器を使用する経鼻 投与用にも出来る。また殺菌水、生理食塩水、またはグルコース中に懸濁させ得 る殺菌固形剤にも出来る。

これら組成物には使用前に宿主または他の注射、経口または経提供できる。

哺乳宿主に対する最適投与量は、当業者により容易に決定できる。医師及び獣医 師に公知の多くの要素、例えば年令、体重並びに投与方法を考慮する。他のワク チンに適用される補助注射方式も使用出来る。以上本発明の好ましい態様につい て記述したが、特許請求の範囲に記述の発明は、本発明の精神または範囲を離れ ることなく幾多の変更をなし得ることに鑑み、以上記載したところに限定される ものではない。

ｉ、ｒｇ　ｒ７ｊ、　Ｐ；Ａ、ｅ　ｆ；ｒｏ　Ａｒ５）　６／ｙ　ｒｈｒＦＩＧ 、２ 、ｏＶＶ３．’Ｍ６Δ′ ＦＩＧ、４ 手続補正書帽釦 平成３年令月　１２日 特許庁長官　　植　松　　　敏　　殿 、事件の表示 ＰＣＴ／ＵＳ　９０１０３５３１ 発明の名称 組換えポックスウィルス及び連鎖球菌Ｍタンパク質ワクチン 補正をする者 事件との関係　　特許出願人 名称　　　ザ　ロックフェラー　ユニバーシティ、゛

Claims (30)

【特許請求の範囲】
1. １．哺乳動物における連鎖球菌感染症に対して免疫保護反応を誘発し得るタンパ ク質であって、Ｍ６タンパク質の保存露出領域のアミノ酸配列と同じ、または実 質的に同じアミノ酸配列を包含するタンパク質。
2. ２．Ｍ６′タンパク質
3. ３．原核生物の表面抗原またはその部分の切片のための遺伝情報を指定した遺伝 子であって、この表面抗原が、その原核生物の有毒性の原因をなすものであり、 その表面抗原またはその部分の切片が、哺乳動物において、この原核生物に起因 する感染症に対して免疫保護反応を誘発し得るものであるような遺伝子。
4. ４．哺乳動物における連鎖球菌感染症に対して免疫保護反応を誘発し得るタンパ ク質のための遺伝情報を指定した遺伝子であって、このタンパク質が、Ｍ６タン パク質の保存露出領域におけるアミノ酸配列と同じ、または実質的に同じである アミノ酸配列を包含するものであるような遺伝子。
5. ５．請求の範囲第４項の遺伝情報を指定した遺伝子であって、そのタンパク質が 、Ｍ６タンパク質の保存露出領域と同じ、または実質的に同じアミノ酸配列であ るアミノ酸配列を包含するものであるような遺伝子。
6. ６．Ｍ６′遺伝子。
7. ７．原核生物の表面抗原またはその部分の切片のための遺伝情報を指定した遺伝 子を含むプラスミッドであって、その表面抗原が、前記原核生物の有毒性の原因 をなすものであり、その表面抗原またはその部分の切片が、哺乳動物において、 前記原核生物に起因する感染症に対して免疫保護反応を誘発し得るものであり、 前記の遺伝情報を指定した遺伝子が、自然界では前記のプラスミッド中に存在し ないものであるようなプラスミッド。
8. ８．哺乳動物において、連鎖球菌感染病に対する免疫保護反応を誘発し得るタン パク質のための遺伝情報を指定した遺伝子を含むプラスミッドであって、このタ ンパク質が、Ｍ６タンパク質の保存露出領域におけるアミノ酸配列と同じ、また は実質的に同じであるアミノ酸配列を包含するものであるようなプラスミッド。
9. ９．請求の範囲第８項のプラスミッドであって、前記のタンパク質が、Ｍ６タン パク質の保存露出領域におけると同じ、または実質的に同じアミノ酸配列である アミノ酸配列を包含するものであるようなプラスミッド。
10. １０．遺伝子がＭ６′遺伝子であるような、請求の範囲第８項に記載のプラスミ ッド。
11. １１．原核生物の表面抗原またはその部分のための遺伝情報を指定した遺伝子を 含むウイルス。
12. １２．哺乳動物において、連鎖球菌感染症に対する免疫保護反応を誘発し得るタ ンパク質のための遺伝情報を指定した遺伝子を含むワクシニアウイルスを包含す るウイルスであって、この蛋白質が、Ｍ６タンパク質の保存露出領域におけるア ミノ酸配列と同じ、または実質的に同じであるアミノ酸配列を包含するものであ るようなウイルス。
13. １３．哺乳動物において、連鎖球菌感染症に対する免疫保護反応を誘発し得るタ ンパク質のための遺伝情報を指定した遺伝子を含むニワトリポックスウイルスを 包含するウイルスであって、このタンパク質が、Ｍ６タンパク質の保存露出領域 におけるアミノ酸配列と同じ、または実質的に同じであるアミノ酸配列を包含す るものであるウイルス。
14. １４．請求の範囲第１２項または第１３項のいずれかのウイルスであって、その タンパク質が、Ｍ６タンパク質の保存露出領域と同一、または実質的に同一のア ミノ酸残基配列であるようなアミノ酸配列を包含するものであるウイルス。
15. １５．請求の範囲第１２項または第１３項のいずれかのウイルスであって、その タンパク質が、Ｍ６タンパク質の保存露出領域における炭素繰返し領域のアミノ 酸配列と同じ、または実質的に同じようなアミノ酸配列を包含するものであるよ うなウイルス。
16. １６．請求の範囲第１５項のウイルスであって、そのタンパク質が、Ｃｌ操返し 領域におけると同じ、または実質的に同じアミノ酸配列であるようなアミノ酸配 列を包含するものであるウイルス。
17. １７．請求の範囲第１５項のウイルスであって、そのタンパク質が、Ｃ２繰返し 領域におけると同じ、または実質的に同じアミノ酸配列であるようなアミノ酸配 列を包含するものであるウイルス。
18. １８．請求の範囲第１５項のウイルスであって、そのタンパク質が、炭素繰返し 領域と同じ、または実質的に同じであるアミノ酸配列を包含するものであるウイ ルス。
19. １９．請求の範囲第１５項のウイルスであって、そのタンパク質が、スペーサー 領域と同じ、または実質的に同じアミノ酸配列を包含するものであるウイルス。
20. ２０．請求の範囲第１２項または第１３項のいずれかのウイルスであって、その 遺伝子がＭ６′遺伝子であるようなウイルス。
21. ２１．医薬品として容認し得る担体と、原核生物の表面抗原またはその部分のた めの遺伝情報を指定した遺伝子を含むウイルスとを包含するワクチンであって、 この表面抗原またはその部分が、前記原核生物の有毒性の原因をなすものであり 、その表面抗原またはその一部分が、前記原核生物に起因する感染症に対して、 哺乳動物において免疫保護反応を誘発し得るものであり、前記ウイルスが、前記 原核生物に起因する感染症に対して保護反応を誘発するに十分な、十分な抗原ま たはその部分に対する量で存在するものであるようなワクチン。
22. ２２．医薬品として容認し得る担体と、哺乳動物における連鎖球菌感染症に対す る免疫保護反応を誘発し得るタンパク質のための遺伝情報を指定した遺伝子を含 む改変ワクシニアウイルスとを包含するワクチンであって、このタンパク質が、 Ｍ６タンパク質の保存露出傾城におけるアミノ酸残基配列と同じ、または実質的 に同じであるアミノ酸配列を包含し、また、このウイルスが、連鎖球菌感染症に 対する保護反応を誘発するに十分な、十分なタンパク質のための量で存在するも のであるようなワクチン。
23. ２３．医薬品として容認し得る担体と、哺乳動物における連鎖球菌感染症に対す る免疫保護反応を誘発し得るタンパク質のための遺伝情報を指定した遺伝子を含 む改変ニワトリポックスウイルスとを包含するワクチンであって、このタンパク 質が、Ｍ６タンパク質の保存露出領域におけるアミノ酸残基配列と同じ、または 実質的に同じであるアミノ酸配列を包含し、また、このウイルスが、連鎖球菌感 染症に対する保護反応を誘発するに十分な、十分なタンパク質のための量で存在 するものであるようなワクチン。
24. ２４．請求の範囲第２２項または第２３項のいずれかのワクチンであって、その タンパク質が、Ｍ６タンパク質の保存露出領域と同じ、または実質的に同じアミ ノ酸残基配列であるようなアミノ酸配列を包含するものであるようなワクチン。
25. ２５．請求の範囲第２２項または第２３項のいずれかのワクチンであって、その 遺伝子がＭ６′遺伝子であるようなワクチン。
26. ２６．哺乳動物における原核生物感染症の治療を要する場合のその治療方法にお いて、原核生物の表面抗原またはその部分のための遺伝情報を指定した遺伝子を 含むウイルスをその哺乳動物に投与することを包含し、その表面抗原またはその 部分が、前記原核生物の有毒性の原因をなすものであり、その表面抗原またはそ の部分が、前記原核生物に起因する感染症に対して哺乳動物中で免疫保護反応を 誘発し得るものであり、また、このウイルスが、前記原核生物に起因する感染症 に対して保護反応を誘発するに十分な、十分な抗原またはその部分に対する量で 存在するものであるような治療方法。
27. ２７．哺乳動物における連鎖球菌感染症の治療を要する場合のその治療方法にお いて、哺乳動物における連鎖球菌感染症に対して免疫保護を誘発し得るタンパク 質のための遺伝情報を指定した遺伝子を含む改変ワクシニアウイルスをその哺乳 動物に投与することを包含し、そのタンパク質が、Ｍ６タンパク質の保存露出領 域におけるアミノ酸残基配列と同じ、または実質的に同じであるアミノ酸配列を 包含し、また、そのウイルスが、十分な、治療効果をあげる抗体反応を誘発する に十分な、十分なタンパク質のための量で存在するものであるような治療方法。
28. ２８．哺乳動物における連鎖球菌感染症の治療を要する場合のその治療方法にお いて、前記哺乳動物における免疫保護反応を誘発し得るタンパク質のための遺伝 情報を指定した遺伝子を含む改変ニワトリポックスウイルスを前記哺乳動物に投 与することを包含し、このタンパク質が、Ｍ６タンパク質の保存露出領域におけ るアミノ酸配列と同じ、または実質的に同じであるアミノ酸配列を包含し、また 、このウイルスが、十分な治療効果をあげる抗体反応を誘発するに十分な、十分 なタンパク質のための量で存在するものであるような治療方法。
29. ２９．請求の範囲第２７項または第２８項のいずれかの方法であって、前記のタ ンパク質が、Ｍ６タンパク質の保存露出領域と同じ、または実質的に同じアミノ 酸残基配列を包含するような方法。
30. ３０．請求の範囲第２７項または第２８項のいずれかの方法であって、その遺伝 子がＭ６′遺伝子であるような方法。