RU2776930C1 - Способ выделения изолированных клеток из челюсти - Google Patents
Способ выделения изолированных клеток из челюсти Download PDFInfo
- Publication number
- RU2776930C1 RU2776930C1 RU2021118070A RU2021118070A RU2776930C1 RU 2776930 C1 RU2776930 C1 RU 2776930C1 RU 2021118070 A RU2021118070 A RU 2021118070A RU 2021118070 A RU2021118070 A RU 2021118070A RU 2776930 C1 RU2776930 C1 RU 2776930C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- jaw
- further study
- cells
- isolated cells
- solution
- Prior art date
Links
- 210000001847 Jaw Anatomy 0.000 title claims abstract description 17
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 18
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 11
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims abstract description 6
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims abstract description 6
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N edta Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 229940071106 ethylenediaminetetraacetate Drugs 0.000 claims abstract description 5
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 5
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000003513 alkali Substances 0.000 claims abstract description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 abstract description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 description 10
- 102000020504 Collagenase family Human genes 0.000 description 3
- 108060005980 Collagenase family Proteins 0.000 description 3
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 210000003074 Dental Pulp Anatomy 0.000 description 2
- 210000004207 Dermis Anatomy 0.000 description 2
- 210000003850 cellular structures Anatomy 0.000 description 2
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 229940064005 Antibiotic throat preparations Drugs 0.000 description 1
- 229940083879 Antibiotics FOR TREATMENT OF HEMORRHOIDS AND ANAL FISSURES FOR TOPICAL USE Drugs 0.000 description 1
- 229940042052 Antibiotics for systemic use Drugs 0.000 description 1
- 229940042786 Antitubercular Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 210000004262 Dental Pulp Cavity Anatomy 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 229940110715 ENZYMES FOR TREATMENT OF WOUNDS AND ULCERS Drugs 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 229940093922 Gynecological Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 210000002901 Mesenchymal Stem Cells Anatomy 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 229940024982 Topical Antifungal Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic Effects 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 229940079866 intestinal antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 238000011068 load Methods 0.000 description 1
- 239000002609 media Substances 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000001264 neutralization Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 229940005935 ophthalmologic Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к гистологии, стоматологии и цитологии. Обрабатывают фиксированные в формалине заранее измельченные образцы челюстей при температуре 20°С 50% гидроксидом калия. Затем гомогенизируют материал струей воды из пипетки Пастера, с последующим суспендированием и проведением не менее пяти циклов гомогенизации и центрифугирования материала при 1500 оборотов в минуту в течение 5 минут, до достижения уровня рН надосадочной жидкости 6,0. Переносят материал на стекла для дальнейшего изучения. При этом перед обработкой щелочным раствором челюсть подвергают действию декальцинирующего раствора СофтиДек на основе этилендиаминтетраацетата (ЭДТА), предварительно разбавленного в 2 раза дистиллированной водой, придающего челюстям форму, позволяющую измельчить, провести обработку раствором щелочи и выделить изолированные клетки для дальнейшего изучения. Способ позволяет расширить возможности выделения изолированных клеток челюсти для последующего изучения их морфологии.
Description
Изобретение относится к гистологии, стоматологии, и может быть использовано для выделения изолированных клеток из челюсти.
Известен метод выделения клеток из пульпы зуба ферментативным способом. Для этого зуб помещают в чашку Петри диаметром 60 мм, где проводят предварительное промывание пульпарной камеры зуба 2 мл 0,5% раствора коллагеназы II типа, после чего зуб находится в 2 мл 0,5% раствора коллагеназы II типа в течение 1 часа при 37°С. Затем выделенные клетки в 2 мл раствора коллагеназы II типа собирают в пробирку объемом 15 мл, куда для остановки процесса ферментации было добавляют питательную среду DMEM/F12 (ПанЭко) [1]. Недостатками указанного способа является использование ферментов. Также известен способ культивирования клеток пульпы, полученных путем помещения удаленных зубов в раствор фосфатно-солевого буфера со смесью антибиотиков. После этого равномерной механической нагрузкой зубы раскалывают с помощью молоточка и свинцовой пластинки и в последующем осторожно стерильным пинцетом извлекают цельную пульпу. В стерильных условиях пульпу измельчают и переносят в шестилуночный планшет для дальнейшего культивирования [2]. Недостатками указанного способа является проведение эксперимента в стерильных условиях, а также использование молоточка для равномерного раскола, что является затруднительным.
Прототипом заявленного изобретения является способ получения препаратов изолированных клеток дермы [3]. Положительными в данном способе являются возможность выделения клеточных компонентов из дермы, широкий спектр применения. Недостатком указанного способа является то, что он позволяет выделять клеточные структуры только из мягких тканей.
Задача предлагаемого изобретения: расширение лабораторных возможностей выделения клеток из челюстей. Технический результат предлагаемого изобретения: снижение затрат в ходе выделения изолированных клеток челюсти, возможность получения качественных клеточных структур.
Указанная задача в предлагаемом способе достигается тем, что фиксированную в формалине челюсть переносят в декальцинирующую жидкость на 10 суток, затем переносят в пробирку, заливают 1 мл 50% раствора гидроксида калия, через час челюсть достают, нарезают микротомным лезвием на мелкие фрагменты, переносят в свежий 50% раствор гидроксида калия в количестве 1 мл на 15 часов при температуре 20°С, промывают дистиллированной водой пятикратно при температуре 20°С, гомогенизируют материал струей воды из пипетки Пастера, с последующим суспендированием, с проведением не менее пяти циклов гомогенизации и центрифугирования материала при 1500 оборотов в минуту в течение 5 минут до достижения уровня рН надосадочной жидкости 6,0, доводят объем образца до 1 мл и переносят на предметное стекло.
Указанный способ осуществляется следующим образом. Фиксированную в гистологическом забуференном 10% нейтральном формалине челюсть, полученную от лабораторного животного, или ее фрагмент помещают в декальцинирующий раствор СофтиДек на основе этилендиаминтетраацетата (ЭДТА), предварительно разбавленный в 2 раза дистиллированной водой, на 10 суток с периодическим перемешиванием (можно использовать шейкер или любые другие перемешивающие устройства) при комнатной температуре. По истечении времени, образец переносят в емкость с 1 мл 50% раствора гидроксида калия, через 1 час челюсть или ее фрагмент достают и нарезают микротомным лезвием на мелкие фрагменты толщиной не более 3 мм, помещают полученные фрагменты в емкость со свежим раствором 50% раствора гидроксида калия в объеме 1 мл и оставляют при комнатной температуре на 24 часа. После этого удаляют раствор щелочи путем аспирации пипеткой Пастера и наливают дистиллированную воду при температуре 20°С в объеме 5 мл. Гомогенизируют материал при помощи струи воды из пипетки Пастера объемом 2 мл в течение 3 минут, доводят объем воды в пробирке до 10 мл и центрифугируют в течение 5 минут при 1500 оборотах в минуту. После центрифугирования аспирируют воду из пробирки таким образом, чтобы осадок на дне пробирки находился в объеме жидкости, не превышающем 0,5 мл, измеряют рН при помощи универсальной индикаторной бумаги, добавляют дистиллированную воду до объема 5 мл и повторно гомогенизируют материал способом, описанным выше. Цикл гомогенизации и центрифугирования повторяют до достижения уровня рН надосадочной жидкости 6,0, но не менее пяти раз. После достижения целевого уровня рН 6,0 в надосадочной жидкости суспендируют полученный материал путем многократного пассажа содержимого пробирки пипеткой Пастера, полученную суспензию переносят на предметное стекло для последующего изучения.
Способ позволяет расширить возможности выделения изолированных клеток челюсти для последующего изучения их морфологии.
ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ
1. Лямина, С.В., Калиш, С.В., Рунова, Г.С., Малышев, И.Ю. Выделение мезенхимальных стволовых клеток из пульпы зуба и их характеристика // Современные проблемы науки и образования. - 2017. - Т. 5, С. 189-189.
2. Сагитов И.И., Шафигуллина А.К., Салеева Г.Т., Гомзикова М.О., Ризванов А.А., Киясов А.П. Получение популяции эктомезенхимных клеток со свойствами стволовых и прогениторных клеток из пульпы постоянных зубов // Гены и клетки. - 2014. - Т. 9. - №3.
3. Кашутин С.Л., Журавлёв Л.М., Вилова К.Г., Мизгирёв Д.В., Зашихин А.Л. Способ получения препаратов изолированных клеток дермы. Патент №2617237, заявка 2015124695, 23.06.2015, Бюллетень №12.
Claims (1)
- Способ выделения изолированных клеток из челюсти, заключающийся в обработке фиксированных в формалине заранее измельченных образцов челюстей при температуре 20°С 50% гидроксидом калия, гомогенизации материала струей воды из пипетки Пастера, с последующим суспендированием, проведением не менее пяти циклов гомогенизации и центрифугирования материала при 1500 оборотов в минуту в течение 5 минут, проведением циклов гомогенизации и центрифугирования до достижения уровня рН надосадочной жидкости 6,0, с переносом материала на стекла для дальнейшего изучения, отличающийся тем, что перед обработкой щелочным раствором челюсть подвергают действию декальцинирующего раствора СофтиДек на основе этилендиаминтетраацетата (ЭДТА), предварительно разбавленного в 2 раза дистиллированной водой, придающего челюстям форму, позволяющую измельчить, провести обработку раствором щелочи и выделить изолированные клетки для дальнейшего изучения.
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2776930C1 true RU2776930C1 (ru) | 2022-07-28 |
Family
ID=
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2241994C1 (ru) * | 2003-09-30 | 2004-12-10 | ГОУ ВПО Красноярская государственная медицинская академия | Способ подготовки костных образцов к морфологической диагностике |
| WO2006125991A1 (en) * | 2005-05-26 | 2006-11-30 | Intercytex Limited | Tissue repair using allogenic dermal fibroblasts |
| RU2500104C2 (ru) * | 2012-03-05 | 2013-12-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр реконструктивной и восстановительной хирургии" Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (ФГБУ "НЦРВХ" СО РАМН) | Способ приготовления препарата костной ткани и набор для его осуществления |
| RU2617237C2 (ru) * | 2015-06-23 | 2017-04-24 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Северный государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ получения препаратов изолированных клеток дермы |
| RU2620544C1 (ru) * | 2016-05-23 | 2017-05-26 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Тюменский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО Тюменский ГМУ Минздрава России) | Способ приготовления препаратов костной ткани для проведения диагностики патологических процессов |
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2241994C1 (ru) * | 2003-09-30 | 2004-12-10 | ГОУ ВПО Красноярская государственная медицинская академия | Способ подготовки костных образцов к морфологической диагностике |
| WO2006125991A1 (en) * | 2005-05-26 | 2006-11-30 | Intercytex Limited | Tissue repair using allogenic dermal fibroblasts |
| RU2500104C2 (ru) * | 2012-03-05 | 2013-12-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр реконструктивной и восстановительной хирургии" Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (ФГБУ "НЦРВХ" СО РАМН) | Способ приготовления препарата костной ткани и набор для его осуществления |
| RU2617237C2 (ru) * | 2015-06-23 | 2017-04-24 | Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Северный государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ получения препаратов изолированных клеток дермы |
| RU2620544C1 (ru) * | 2016-05-23 | 2017-05-26 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Тюменский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО Тюменский ГМУ Минздрава России) | Способ приготовления препаратов костной ткани для проведения диагностики патологических процессов |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Кулаков А.А. и др. Устранение критических костных дефектов с помощью биоинженерной конструкции на нерезорбируемой полимерной основе с использованием аутогенных мультипотентных стромальных клеток из жировой ткани. Стоматология 2010; 3: 9—12;. Yoon E. et al. In vivo osteogenic potential of human adiposederived stem cells/ polylactide-coglycolic acid constructs for bone regeneration in a rat critical-sized calvarial defect model. Tissue Eng 2007; 13: 3: 619—627. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107007541A (zh) | 外泌体在皮肤美白制剂中的应用 | |
| CN111671772B (zh) | 一种外泌体在制备修复皮肤损伤的药品或化妆品中的应用 | |
| CN107921182B (zh) | 用于分离基质血管部分的机械仪器和方法 | |
| Grimm et al. | Isolation of skeletal muscle-derived cells modeling Neural Crest-derived Stem Cells for Therapeutic Use in Regenerative Periodontology | |
| CN110475855A (zh) | 用于从牙髓组织衍生的细胞制备牙髓干细胞的方法 | |
| CN109430252A (zh) | 一种干细胞冻存液及其制作方法 | |
| WO2021135073A1 (zh) | 一种yap1基因修饰的间充质干细胞及其制备方法 | |
| CN111334469A (zh) | Pbmc体外3d甲基纤维素琼脂糖水凝胶培养基及其制备方法 | |
| CN107354130B (zh) | 一种人胎盘绒毛膜间充质干细胞分离方法 | |
| RU2776930C1 (ru) | Способ выделения изолированных клеток из челюсти | |
| CN106399235A (zh) | 一种人脐带间充质干细胞的分离方法 | |
| US20180274005A1 (en) | Cord blood therapy to treat chronic disease caused by l-form bacteria | |
| CN109439617A (zh) | 一种干细胞无血清培养基及其制作方法 | |
| Fujishima et al. | An early step in initiation of fertilization in Paramecium: Early micronuclear migration | |
| WO2019031500A1 (ja) | 不死化汗腺筋上皮細胞 | |
| RU2609657C1 (ru) | Способ выделения мезенхимных стволовых клеток из орбитальной жировой ткани | |
| CN108410796A (zh) | 一种诱导人间充质干细胞向血管内皮细胞分化的方法 | |
| WO2021012718A1 (zh) | 用于牙髓再生的多能干细胞MDPSCs及其分离培养方法和应用 | |
| CN112574943A (zh) | 一种体外模拟皮肤癣菌感染的模型及其建立方法和应用 | |
| RU2400746C2 (ru) | Способ определения количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов в пищевых продуктах | |
| CN105462928A (zh) | 一种中国人口腔黑色素瘤细胞系comm-1及其建立方法 | |
| CN112662621B (zh) | 一种逆转间充质干细胞衰老的方法及应用 | |
| RU2742054C1 (ru) | Способ получения нуклеината натрия из биомассы микроводоросли Chlorella vulgaris Beijerink | |
| RU2749986C1 (ru) | Способ выделения кардиомиоцитов из ткани сердца человека | |
| CN114854671B (zh) | 一种子宫内膜异位症侵袭血管化3d细胞模型的制备方法及其应用 |