CN111334469A - Pbmc体外3d甲基纤维素琼脂糖水凝胶培养基及其制备方法 - Google Patents

Pbmc体外3d甲基纤维素琼脂糖水凝胶培养基及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN111334469A
CN111334469A CN202010227815.9A CN202010227815A CN111334469A CN 111334469 A CN111334469 A CN 111334469A CN 202010227815 A CN202010227815 A CN 202010227815A CN 111334469 A CN111334469 A CN 111334469A
Authority
CN
China
Prior art keywords
agarose
methylcellulose
solution
culture medium
vitro
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202010227815.9A
Other languages
English (en)
Inventor
韩莉
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhengzhou Kunpeng Health Technology Co Ltd
Original Assignee
Zhengzhou Kunpeng Health Technology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zhengzhou Kunpeng Health Technology Co Ltd filed Critical Zhengzhou Kunpeng Health Technology Co Ltd
Priority to CN202010227815.9A priority Critical patent/CN111334469A/zh
Publication of CN111334469A publication Critical patent/CN111334469A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/70—Undefined extracts
    • C12N2500/80—Undefined extracts from animals
    • C12N2500/84—Undefined extracts from animals from mammals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2513/00—3D culture
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
    • C12N2533/70—Polysaccharides
    • C12N2533/76—Agarose, agar-agar
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
    • C12N2533/70—Polysaccharides
    • C12N2533/78—Cellulose

Abstract

本发明公开了一种PBMC体外3D甲基纤维素/琼脂糖水凝胶培养基，所述培养基含有以下组分：1640培养基、胎牛血清、甲基纤维素、琼脂糖；各组分含量如下：1640培养基溶液10mg/mL，胎牛血清10‑20v/v％，甲基纤维素1‑1.5wt％，琼脂糖0.3‑0.5wt％。本发明还公开了其制备方法。本发明提供的PBMC体外3D甲基纤维素/琼脂糖水凝胶培养基配方简单、制备容易、成本可控，有利于大规模、标准化生产，用于体外诊断目的的PBMC培养，可以充分模拟和反映PBMC在体内的生理活性，从而为进一步检测奠定基础。

Description

PBMC体外3D甲基纤维素琼脂糖水凝胶培养基及其制备方法
技术领域
本发明涉及体外诊断技术领域，具体涉及一种人外周血单个核细胞体外3D甲基纤维素/琼脂糖水凝胶培养基及其制备方法。
背景技术
体外细胞培养是指通过模拟机体内的生理条件，将从生物机体内取出的器官、组织或细胞等，在体外进行培养，并使其继续生存、生长和繁殖的过程。体外细胞培养已经成为现代生物研究的基本技术之一，广泛应用于现代生物医学和生物科学研究的各个方面。
目前，体外细胞水平的研究很大程度上是在二维培养条件下完成的。当细胞在二维条件下生长时，由于细胞与其基质之间复杂的细胞信号无法再现，细胞逐渐丧失了其体内原有的性状，在形态、结构和功能方面都与其在体内自然生长的状态相去甚远，因此体外实验数据无法完全转化为临床试验。近年来发展的3D(三维，three-dimensional)细胞培养技术则是应对这一挑战，作为一个更好的模型而更准确地体现体内生理条件，因此3D体外细胞培养方法获得的细胞在形态结构、增殖分化、基因表达及细胞的功能活动等方面均与二维培养存在显著不同。3D细胞培养能更好的模拟体内细胞生长的微环境，克服二维细胞培养方式的缺陷，为细胞水平的研究提供了一种更简单、更安全、更可靠的方法。
细胞在体外培养主要呈现悬浮型和贴壁型两种状态。其中贴附型细胞包括1、成纤维细胞型；2、上皮型细胞；3、游走细胞型；4、多型细胞型。悬浮型细胞见于少数特殊的细胞，如PBMC(外周血单个核细胞)、某些类型的癌细胞及白血病细胞。悬浮型细胞胞体呈圆形，不贴于支持物上，呈悬浮生长。与之对应，细胞体外培养也分为两大类如下：
一、贴壁培养法：指细胞贴附在一定的固相表面进行的培养。需要附着于带适量电荷的固体或半固体表面才能生长，大多数动物细胞，包括非淋巴组织细胞和许多异倍体细胞均属于这一类。其基本操作过程是：先将采集到的活体动物组织在无菌条件下采用物理(机械分散法)或化学(酶消化法)的方法分散成细胞悬液，经过滤、离心、纯化、漂洗后接种到加有适宜培养液的培养皿(瓶、板)中，再放入二氧化碳培养箱进行培养。用此法培养的细胞生长良好且易于观察，适于实验室研究。但贴壁生长的细胞有接触抑制的特性，一旦细胞形成单层，生长就会受到抑制，细胞产量有限。如要继续培养，还需将已形成单层的细胞再分散，稀释后重新接种，然后进行传代培养。
二、悬浮培养法：指细胞在反应器中自由悬浮生长的过程，使细胞始终处于分散悬浮于培养液内的培养方法。悬浮培养法是在微生物发酵的基础上发展起来的，主要用于非贴壁依赖型细胞培养，如人外周血单个核细胞(PBMC)、杂交瘤细胞等。该法将采集到的活体动物组织分散、过滤、离心、纯化、漂洗后接种到适宜的培养液中，并置于特定条件下进行自由悬浮培养。便于进行定量研究。适于悬浮培养的动物细胞种类很少，大多数动物细胞属于贴壁依赖性的，因此不能悬浮培养。
甲基纤维素是一种非离子纤维素醚，它是通过醚化在纤维素中引入甲基而制成的。甲基纤维素有4种重要功能:增稠、表面活性、成膜性以及形成热凝胶(冷却时熔化)。甲基纤维素溶液在很宽的pH值(3.0～11.0)范围内是稳定的，它具有独特的热胶凝性质，即在加热时形成凝胶，冷却时熔化，胶凝温度范围为50～70℃。甲基纤维素溶液为黏稠的半固体，便于分装和取用，也利于细胞的收集和转移。所述基质胶在4℃时呈液态，便于取用和混合，在37℃时呈琼脂状的固体，为三维半固体体系提供一定的支撑强度。这种三维骨架材料不被细胞吸收和降解，稳定无毒，可以使细胞在三维框架内生长。胶原是生物体内一种纤维蛋白，由三股缠绕形成多肽链组，主要存在于皮肤、骨、软骨及肌腱等组织中，以纤维形式形成胶原，占人体或其他动物体总蛋白含量的25％-30％。
琼脂糖凝胶是以琼脂糖为支持介质制备的凝胶，分为一般琼脂糖和经化学修饰后熔点降低的低熔点琼脂糖。琼脂糖在水中一般加热到90℃以上溶解，温度下降到35-40℃时形成良好的半固体状的凝胶，这是它具有多种用途的主要特征和基础。低熔点琼脂糖的熔点在62～65℃之间，融化后在37℃下可维持液态数小时，30℃时凝固成胶。标准熔点的琼脂糖凝胶可用于制备适于鉴定小片段DNA，RNA和≦1kb的PCR产物，主要用于分析电泳，以提高跑胶和印迹的速度。低熔点琼脂糖所制凝胶具有更高的筛过特性，更透明，是理想的DNA和RNA电泳产品，也适合组织培养细胞的克隆和病毒空斑分析。
目前细胞3D培养方法多为单独使用甲基纤维素、琼脂糖等可形成水溶性凝胶的物质，尚未见甲基纤维素和琼脂糖体外3D培养PBMC的报道。甲基纤维素与琼脂糖构成的3D细胞培养体系，既可利用甲基纤维素在1-2％g/100mL范围内的黏稠性固定细胞，又可以发挥琼脂糖在37℃(即细胞增殖生理温度)及0.3-1％g/100mL范围内的黏稠性固定细胞下凝结成胶的特性。由甲基纤维素和琼脂糖构成的三维骨架尤其适合PBMC等悬浮细胞的体外培养以及后续实验和检测等操作。
发明内容
PBMC作为悬浮型细胞，更适合于使用3D培养体系进行体外培养，本发明提供了一种均一、稳定的PBMC体外3D甲基纤维素/琼脂糖水凝胶培养基及其制备方法。具体技术方案如下：
一种PBMC体外3D甲基纤维素/琼脂糖水凝胶培养基，所述培养基含有以下组分：1640培养基、胎牛血清、甲基纤维素、琼脂糖；各组分含量如下：1640培养基溶液10mg/mL，胎牛血清10-20v/v％，甲基纤维素1-1.5wt％，琼脂糖0.3-0.5wt％。
一种PBMC体外3D甲基纤维素/琼脂糖水凝胶培养基的制备方法，包括以下步骤：
步骤一、配制4％甲基纤维素溶液：(1)取10mL三蒸水加到250mL的三角瓶中，放入90℃水浴锅加热10min至80-90℃；(2)称量1.2g甲基纤维素粉末，在晃动下慢慢地加入到上述三角瓶中，持续晃动，直至所有甲基纤维素粉末润湿且分散均匀；(3)加入4℃的三蒸水20mL在冰水浴中持续搅拌至少30min；(4)采用高温高压灭菌锅进行灭菌，灭菌结束后，室温下降温后加适量三蒸水定容到30mL；冷却后置于冰箱内4℃保存过夜待用；
步骤二、配制3％甲基纤维素溶液：取上述配制4％纤维素溶液30mL，依次加入8×1640培养液5mL、胎牛血清5mL，混匀后放置冰箱4℃保存待用；
步骤三、配制3％琼脂糖溶液：称取0.6g琼脂糖溶液，准备100mL试剂瓶加入20mL三蒸水，将称取完成的琼脂糖溶液缓慢撒入三蒸水溶液内，进行溶解；采用高温高压灭菌锅灭菌，灭菌结束后，取出放入50℃水浴箱60min，冷却至50℃，待用；
步骤四、配制1.5％琼脂糖溶液：取步骤三配制的3％琼脂糖溶液20mL，依次加入经过滤灭菌的4×1640培养液10mL、三蒸水5mL、含胎牛血清的1640培养液5mL；
步骤五、配制3D甲基纤维素/琼脂糖水凝胶培养基：将按上述步骤二配制得到的3％甲基纤维素溶液和步骤四配制得到的1.5％琼脂糖溶液按体积比分别加入至新容器并充分混合，即得3D甲基纤维素/琼脂糖水凝胶培养基。
进一步地，所述PBMC体外3D甲基纤维素/琼脂糖水凝胶培养基实施培养的具体操作为：将3D甲基纤维素/琼脂糖水凝胶培养基与已经配制好的淋巴细胞培养液按适当比例混合，充分混合后25-30℃下30-45分钟形成水凝胶，然后放入二氧化碳培养箱(37℃，5％CO2)培养。
进一步地，步骤一和步骤三中高温高压灭菌锅灭菌条件为120℃，20min。
进一步地，步骤三中琼脂糖溶液溶解操作为微波炉低火2min。
本发明通过将甲基纤维素、琼脂糖及其他适合的培养基物质结合，通过对各组分配比进行优化，配制成稳定的人外周血单核细胞(PBMC)体外3D培养基，由甲基纤维素和琼脂糖构成的三维骨架尤其适合PBMC等悬浮细胞的体外培养以及后续实验和检测等操作，对PBMC细胞培养能够达到较高的扩增倍数及细胞纯度，在细胞形态、增殖分化、功能活性方面与体内接近，可用于体外诊断目的的PBMC培养，从而为进一步的检测奠定了基础。
本发明提供的PBMC体外3D甲基纤维素/琼脂糖水凝胶培养基及其制备方法，与现有技术相比具有以下有益效果：
1.本发明提供的PBMC体外3D甲基纤维素/琼脂糖水凝胶培养基配方简单、制备容易、成本可控，有利于大规模、标准化生产；
2.本发明提供的PBMC体外3D甲基纤维素/琼脂糖水凝胶培养基用于体外诊断目的的PBMC培养，可以充分模拟和反映PBMC在体内的生理活性，从而为进一步检测奠定基础。
附图说明
图1为不同供体样本的PBMC体外3D甲基纤维素/琼脂糖水凝胶培养基PBMC细胞培养刃天青染色结果。
图2为不同供体样本的PBMC体外3D甲基纤维素/琼脂糖水凝胶培养基PBMC细胞培养活性细胞荧光结果。
具体实施方式
为更进一步阐述本发明所采取的技术手段及其效果，以下结合本发明的优选实施例进行详细描述。
实施例1
一种PBMC体外3D甲基纤维素/琼脂糖水凝胶培养基，所述培养基含有以下组分：1640培养基、胎牛血清、甲基纤维素、琼脂糖；各组分含量如下：1640培养基溶液10mg/mL，胎牛血清12.5v/v％，甲基纤维素1.4wt％，琼脂糖0.35wt％。
一种PBMC体外3D甲基纤维素/琼脂糖水凝胶培养基的制备方法，包括以下步骤：
步骤一、配制4％甲基纤维素溶液：(1)取10mL三蒸水加到250mL的三角瓶中，放入90℃水浴锅加热10min至80-90℃；(2)称量1.2g甲基纤维素粉末，在晃动下慢慢地加入到上述三角瓶中，持续晃动，直至所有甲基纤维素粉末润湿且分散均匀；(3)加入4℃的三蒸水20mL在冰水浴中持续搅拌至少30min；(4)采用高温高压灭菌锅进行灭菌，灭菌结束后，室温下降温后加适量三蒸水定容到30mL；冷却后置于冰箱内4℃保存过夜待用；
步骤二、配制3％甲基纤维素溶液：取上述配制4％纤维素溶液30mL，依次加入8×1640培养液5mL、胎牛血清5mL，混匀后放置冰箱4℃保存待用；
步骤三、配制3％琼脂糖溶液：称取0.6g琼脂糖溶液，准备100mL试剂瓶加入20mL三蒸水，将称取完成的琼脂糖溶液缓慢撒入三蒸水溶液内，进行溶解；采用高温高压灭菌锅灭菌，灭菌结束后，取出放入50℃水浴箱60min，冷却至50℃，待用(其中，1640培养液终浓度约为10mg/mL，胎牛血清的浓度为12.5％)；
步骤四、配制1.5％琼脂糖溶液：取步骤三配制的3％琼脂糖溶液20mL，依次加入经过滤灭菌的4×1640培养液10mL、三蒸水5mL、胎牛血清5mL(其中，1640培养液终浓度约为10.3mg/mL，胎牛血清的浓度为12.5％)；
步骤五、配制3D甲基纤维素/琼脂糖水凝胶培养基：将按上述步骤二配制得到的3％甲基纤维素溶液和步骤四配制得到的1.5％琼脂糖溶液按体积比2:1的比例分别加入20和10mL至新容器并充分混合，得到甲基纤维素终浓度为2％，琼脂糖终浓度为0.5％的甲基纤维素(2％)/琼脂糖(0.5％)培养基即3D甲基纤维素/琼脂糖水凝胶培养基；
步骤六、细胞分离：
1.取血液5mL；
2.加Hanks液2mL适度稀释血液；
3.稀释血液
3.1.取淋巴细胞分离液置于离心管内，在分离液上层1cm处缓慢加入稀释血液(稀释血液与分离液体积比例为2:1)；
4.离心
4.1.离心条件：2500rpm，25min；
5.吸取白膜层；
6.洗涤白膜层
6.1.将白膜层吸取到新的离心管中，加两倍PBS稀释后离心(1500rpm，5min)；
6.2.离心(1500rpm，5min)后，再次弃去上清液，加同等量PBS再次洗涤；
7.计数
7.1.离心后，弃去上清液，加入1mL培养基吹打均匀；
7.2.将吹打均匀的细胞予以稀释(稀释比例为：10ul cell悬液+90ul培养基)；
7.3.计数得:细胞总数/4×10cells/mL；
8.细胞培养
8.1.配置细胞培养液：主要成份为1640培养基(10mg/mL)、胎牛血清(15％v/v％)；
8.2.每一百万细胞加1mL培养液(根据实验调整密度，最大密度不超过200万/mL)，如：计数为一千三百万，即加培养液10.3mL；
8.3.阴性对照：从上步已配好的细胞培养液中抽取1mL，作为阴性对照；
8.4.其它含细胞的培养液作为试验细胞培养标本，加入PHA(3ul/mL)，混匀待用；
步骤七、实施3D甲基纤维素/琼脂糖水凝胶培养基培养：将按上述步骤五配制得到的甲基纤维素(2％)/琼脂糖(0.5％)培养基14mL及与按步骤五获得的细胞培养液6mL混合，即混合比例为7:3，得到甲基纤维素终浓度为1.4％，琼脂糖终浓度为0.35％的甲基纤维素/琼脂糖培养基，室温下(25-30℃)放置30分钟形成水凝胶，然后放入二氧化碳培养箱(37℃，5％CO2)培养。
采用本发明实施例1配制的培养基对取自于3份不同供体样本的PBMC细胞分别进行培养，在培养第4天采取刃天青染色及酶标仪读取荧光读数(反映活细胞数量)，结果如图1和图2所示。
结果分析：
从图1阳性和阴性培养结果(阴、阳性的区别在于是否添加淋巴细胞增生刺激剂PHA)对比可以看出，在本发明提供的甲基纤维素/琼脂糖3D培养体系下，淋巴细胞在阴、阳性环境下均保持了细胞的活性；
从图2可知，本发明提供的甲基纤维素/琼脂糖3D培养体系下，阳性环境检测到的活性细胞荧光数显著高于阴性环境，表明可以反映代表细胞数量和活性，从而为体外定性和半定量检测淋巴细胞数量和活性建立基础。
另外，从检测结果可以看出，即使在相同细胞培养和检测体系下，即使在控制检测细胞数量基本相同的情况下，最终检测的数值都不相同，因此表面即使免疫细胞数量大体相同，但细胞活性确有明显的个体差异，因此要做相应检测并依此制定诊断和治疗方案。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，本领域普通技术人员对本发明的技术方案所做的其他修改或者等同替换，只要不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (4)

1.一种PBMC体外3D甲基纤维素/琼脂糖水凝胶培养基，其特征在于，所述培养基含有以下组分：1640培养基、胎牛血清、甲基纤维素、琼脂糖；各组分含量如下：1640培养基溶液10mg/mL，胎牛血清10-20v/v％，甲基纤维素1-1.5wt％，琼脂糖0.3-0.5wt％。
2.一种权利要求1所述PBMC体外3D甲基纤维素/琼脂糖水凝胶培养基的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一、配制4％甲基纤维素溶液：(1)取10mL三蒸水加到250mL的三角瓶中，放入90℃水浴锅加热10min至80-90℃；(2)称量1.2g甲基纤维素粉末，在晃动下慢慢地加入到上述三角瓶中，持续晃动，直至所有甲基纤维素粉末润湿且分散均匀；(3)加入4℃的三蒸水20mL在冰水浴中持续搅拌至少30min；(4)采用高温高压灭菌锅进行灭菌，灭菌结束后，室温下降温后加适量三蒸水定容到30mL；冷却后置于冰箱内4℃保存过夜待用；
步骤二、配制3％甲基纤维素溶液：取上述配制4％纤维素溶液30mL，依次加入8×1640培养液5mL、胎牛血清5mL，混匀后放置冰箱4℃保存待用；
步骤三、配制3％琼脂糖溶液：称取0.6g琼脂糖溶液，准备100mL试剂瓶加入20mL三蒸水，将称取完成的琼脂糖溶液缓慢撒入三蒸水溶液内，进行溶解；采用高温高压灭菌锅灭菌，灭菌结束后，取出放入50℃水浴箱60min，冷却至50℃，待用；
步骤四、配制1.5％琼脂糖溶液：取步骤三配制的3％琼脂糖溶液20mL，依次加入经过滤灭菌的4×1640培养液10mL、三蒸水5mL、含胎牛血清的1640培养液5mL；
步骤五、配制3D甲基纤维素/琼脂糖水凝胶培养基：将按上述步骤二配制得到的3％甲基纤维素溶液和步骤四配制得到的1.5％琼脂糖溶液按体积比分别加入至新容器并充分混合，即得3D甲基纤维素/琼脂糖水凝胶培养基。
3.根据权利要求2所述PBMC体外3D甲基纤维素/琼脂糖水凝胶培养基的制备方法，其特征在于，步骤三中琼脂糖溶液溶解操作为微波炉低火2min。
4.权利要求1所述PBMC体外3D甲基纤维素/琼脂糖水凝胶培养基实施培养的具体操作为：将PBMC体外3D甲基纤维素/琼脂糖水凝胶培养基与已经配制好的淋巴细胞培养液按比例混合，充分混合后25-30℃下30-45分钟形成水凝胶，然后放入二氧化碳培养箱，37℃，5％CO2条件下培养。
CN202010227815.9A 2020-03-27 2020-03-27 Pbmc体外3d甲基纤维素琼脂糖水凝胶培养基及其制备方法 Pending CN111334469A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010227815.9A CN111334469A (zh) 2020-03-27 2020-03-27 Pbmc体外3d甲基纤维素琼脂糖水凝胶培养基及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010227815.9A CN111334469A (zh) 2020-03-27 2020-03-27 Pbmc体外3d甲基纤维素琼脂糖水凝胶培养基及其制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN111334469A true CN111334469A (zh) 2020-06-26

Family

ID=71178540

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010227815.9A Pending CN111334469A (zh) 2020-03-27 2020-03-27 Pbmc体外3d甲基纤维素琼脂糖水凝胶培养基及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111334469A (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111334470A (zh) * 2020-03-27 2020-06-26 郑州鲲鹏健康科技有限公司 Pbmc体外3d甲基纤维素水凝胶培养基及其制备方法
CN112961821A (zh) * 2021-02-24 2021-06-15 四川大学华西医院 高效三维培养血管内皮细胞的方法
CN113897333A (zh) * 2021-09-26 2022-01-07 华中科技大学同济医学院附属协和医院 一种软性免疫细胞的制备方法及应用
CN113980325A (zh) * 2021-09-15 2022-01-28 苏州市立医院(北区) 一种可提高中性粒细胞趋化效率的凝胶制备方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1997046682A2 (en) * 1996-06-07 1997-12-11 Genetics Institute, Inc. Polynucleotides from human adult pbmc encoding secreted proteins
CN101918532A (zh) * 2007-08-22 2010-12-15 普罗柏欧贞股份公司 用于体外测试免疫原性和免疫功能的培养系统和方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1997046682A2 (en) * 1996-06-07 1997-12-11 Genetics Institute, Inc. Polynucleotides from human adult pbmc encoding secreted proteins
CN101918532A (zh) * 2007-08-22 2010-12-15 普罗柏欧贞股份公司 用于体外测试免疫原性和免疫功能的培养系统和方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
AMELIE DELABY ET AL.: "3D reconstruction of granulomas from transmitted light images implemented for long-time microscope applications", 《JOURNAL OF IMMUNOLOGICAL METHODS》 *
YANTO LUNARDI-ISKANDAR ET AL.: "Abnormal In Vitro Proliferation and Differentiation of T Cell Colony-forming Cells in Patients with Tropical Spastic Paraparesis/Human T Lymphocyte Virus Type I (HTLV-I)-associated Myeloencephalopathy and Healthy HTLV-I Carriers", 《THE JOURNAL OF EXPERIMENTAL MEDICINE》 *
肖志锋等: "细胞共培养体系及其在骨科基础研究中的应用", 《中国中医骨伤科杂志》 *

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111334470A (zh) * 2020-03-27 2020-06-26 郑州鲲鹏健康科技有限公司 Pbmc体外3d甲基纤维素水凝胶培养基及其制备方法
CN112961821A (zh) * 2021-02-24 2021-06-15 四川大学华西医院 高效三维培养血管内皮细胞的方法
CN112961821B (zh) * 2021-02-24 2023-05-30 四川大学华西医院 三维培养血管内皮细胞的方法
CN113980325A (zh) * 2021-09-15 2022-01-28 苏州市立医院(北区) 一种可提高中性粒细胞趋化效率的凝胶制备方法
CN113897333A (zh) * 2021-09-26 2022-01-07 华中科技大学同济医学院附属协和医院 一种软性免疫细胞的制备方法及应用
CN113897333B (zh) * 2021-09-26 2023-08-22 华中科技大学同济医学院附属协和医院 一种软性免疫细胞的制备方法及应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Goh et al. Microcarrier culture for efficient expansion and osteogenic differentiation of human fetal mesenchymal stem cells
CN111334469A (zh) Pbmc体外3d甲基纤维素琼脂糖水凝胶培养基及其制备方法
Yan et al. Dispersible and dissolvable porous microcarrier tablets enable efficient large-scale human mesenchymal stem cell expansion
US20160206780A1 (en) Matrix Scaffold for Three-Dimensional Cell Cultivation, Methods of Construction Thereof and Uses Thereof
CN114317443B (zh) 乳腺癌类器官培养液及其培养试剂组合和培养方法
CN107446885B (zh) 一种间充质干细胞体外成骨诱导分化的支架材料及其应用
WO2005014774A1 (ja) 動物細胞の培養担体と、該培養担体を用いた動物細胞の培養方法および移植方法
CN104651305A (zh) 一种利用脐带间充质干细胞获取生物活性蛋白的方法
Nguyen et al. Tissue regeneration of human mesenchymal stem cells on porous gelatin micro-carriers by long-term dynamic in vitro culture
CN106399235A (zh) 一种人脐带间充质干细胞的分离方法
KR102578640B1 (ko) 미세유체 칩을 활용한 오가노이드의 제조 방법
CN109876194B (zh) 一种可调节降解速率的poss-peg杂化水凝胶及其制备方法和其应用
CN114686421B (zh) 一种肺组织脱细胞外基质微载体的制备方法及其应用
CN111321117A (zh) 一种三维培养扩增造血干细胞的方法
CN113736737B (zh) 一种原代胶质瘤相关成纤维细胞培养方法
CN111334472A (zh) Pbmc体外3d胶原蛋白水凝胶培养基及其制备方法
CN115838685A (zh) 一种白血病患者来源的骨髓间充质干细胞的培养基与培养方法
CN112430568B (zh) 一种脐带间充质干细胞饲养上皮来源类器官的方法
CN113817683A (zh) 一种肺癌类器官的培养基及其应用
CN111334471A (zh) Pbmc体外3d琼脂糖水凝胶培养基及其制备方法
CN113654863A (zh) 一种透射电镜观察用原位体外培养细胞的样品处理方法
CN112961821A (zh) 高效三维培养血管内皮细胞的方法
CN111334470A (zh) Pbmc体外3d甲基纤维素水凝胶培养基及其制备方法
Le Clainche et al. The disc-shaped microcarriers: a new tool for increasing harvesting of adipose-derived mesenchymal stromal cells
CN111394301A (zh) 白皮杉醇在增加多能干细胞分泌外泌体数量及生物活性中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20200626