RU2750928C1 - Способ выделения экзосом из кондиционированной среды культуры клеток - Google Patents
Способ выделения экзосом из кондиционированной среды культуры клеток Download PDFInfo
- Publication number
- RU2750928C1 RU2750928C1 RU2020119232A RU2020119232A RU2750928C1 RU 2750928 C1 RU2750928 C1 RU 2750928C1 RU 2020119232 A RU2020119232 A RU 2020119232A RU 2020119232 A RU2020119232 A RU 2020119232A RU 2750928 C1 RU2750928 C1 RU 2750928C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- minutes
- exosomes
- supernatant
- peg
- solution
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ выделения экзосом из кондиционированной бессывороточной среды культуры клеток, включающий в себя взятие кондиционированной среды от культур клеток, ее центрифугирование при 5000 g в течение 30 минут при 4°С, отделении надосадочной жидкости, ее центрифугирование при 12000 g в течение 90 минут при 4°С, повторное удаление надосадочной жидкости, ресуспендирование осадка, смешивание получившегося образца с 16% по массовой доле раствором полиэтиленгликоля 6000 в соотношении 1:1, инкубирование полученной смеси в течение 1 часа при 4°С с периодическим перемешиванием, центрифугирование получившегося раствора при 1500 g в течение 30 минут при 4°С, удаление надосадочной жидкости и ресуспендирование осадка в 300 мкл ФСБ, выделение экзосом. Изобретение позволяет выделить экзосомы из кондиционированной среды и ускорить процесс выделения экзосом. 5 ил.
Description
Изобретение относится к области молекулярной биологии, а именно к методам выделения экзосом для анализа микроРНК.
Экзосомы представляют собой внеклеточные везикулы диаметром 30-150 нанометров, которые выделяются в межклеточное пространство клетками различных тканей. Их особенность заключается в том, что они несут в себе ряд молекул, таких как фрагменты ДНК, различные типы РНК, белков и продукты метаболизма. С точки зрения диагностики, перспективно исследование микроРНК, малых некодирующих молекул РНК длиной 18-25 нуклеотидов, которые принимают участие в регуляции экспрессии генов. Для анализа микроРНК необходимо выделить экзосомы. До сих пор нет стандартизированного способа выделения экзосом, который был бы доступен большинству молекулярных лабораторий и обладал должной эффективностью.
В настоящее время есть несколько способов выделения экзосом. В результате проведенного патентного поиска нами были выявлены следующие прямые аналоги:
Способ выделения экзосом с помощью полиэтиленгликоля (ПЭГ) 10000. Сначала 25 г ПЭГ 10000 растворяли в 50 мл деионизированной воды путем ультразвукового воздействия в течение 1 часа для получения гомогенного водного раствора. Раствор ПЭГ центрифугировали при 5000 g в течение 20 минут при 4°С, полученный супернатант фильтровали через фильтр 0,22 мкм. Затем данный раствор ПЭГ смешивали с HeLa клеточной культурой до концентрации ПЭГ 10%. После инкубации при 4°С в течение 30 минут образцы центрифугировали при 3000 g в течение 10 минут. Выпавший осадок с экзосомами был суспендирован в фосфатно-солевой буфер (ФСБ), снова смешан с раствором ПЭГ до концентрации ПЭГ 10%. После инкубации при +4°С в течение 30 минут, образцы центрифугировали при 3000 g в течение 10 минут. Полученный осадок дополнительно собирался и ультрацентрифугировался при 120000 g в течение 2 часов. Супернатант осторожно удаляли, осадок промывали 20 мл раствора фосфатно-солевого буфера (ФСБ). Второй этап ультрацентрифугирования проводился с теми же параметрами /1, Effective Isolation of Exosomes by Polyethylene Glycol from_Cell Culture Supernatant for In-depth Proteome Profiling. / Weng, Y., Sui, Z., Shan, Y., et al. // Analyst. - 2016. - P. 4640-4646/. Недостатком данного способа является длительность выделения экзосом (более 7 часов) и использование для фильтрации клеточного дебриса дорогие фильтры с размером пор 220 нм.
Другим способом выделения экзосом является способ с применением ПЭГ 6000. Перед выделением экзосом клеточную среду с 10% фетальной бычьей сывороткой предварительно ультрацентрифугировали при 100000 g в течение 20 часов (4°С). 2 миллиона клеток линии HEK293T были высеяны на приготовленную клеточную среду, где они росли в течение 4 дней. Далее клетки в течение 2 дней были инкубированы при 37°С в атмосфере с 5% содержанием углекислого газа. После 2 дней роста клетки 1 раз промывали ФСБ, нагретым до 37°С. Затем в течение 2 дней клетки, культивировали в бессывороточной среде. Для приготовления раствора ПЭГ использовался ПЭГ 6000, который смешивали с отфильтрованной в системе очистки ELGA Purelab flex водой и хлоридом натрия (1 М) для получения 2х-концентрированного раствора ПЭГ. Непосредственно перед смешиванием с раствором ПЭГ приготовленная клеточная культура центрифугировалась при 500 g 5 минут, а затем при 2000 g 30 минут, при 4°С. После центрифугирования среду добавляли в равный объем 2х-концентрированного раствора ПЭГ при 4°С до достижения концентрации ПЭГ от 5 до 15%. Раствор тщательно перемешивали путем переворачивания. Далее он был инкубирован при 4°С на ночь (по меньшей мере, 12 часов). На следующий день образцы центрифугировали в настольной центрифуге на максимальной скорости в течение 1 часа при 4°С. Затем конические пробирки декантировали и давали стечь в течение 5 минут, периодически постукивая, чтобы удалить избыток ПЭГ. Полученный осадок суспендировали в 50-500 мкл ФСБ без частиц (рН 7,4). Подмножества образцов затем либо хранили при -80, либо дополнительно очищали с помощью осаждения ПЭГ во 2 раз, используя более низкую концентрацию ПЭГ, или путем повторного суспендирования в ФСБ и центрифугирования при 100000 g /2, ExtraPEG: A Polyethylene Glycol-Based Method for Enrichment of Extracellular Vesicles. / Rider, M.A., Hurwitz, S.N., Meckes, D.G., et al. // Nature Scientific Reports. - 2016. - P.l-14/. Недостатком данного метода является использование в качестве клеточной среды очищенной фетальной бычьей сыворотки, что увеличивает время и стоимость одного выделения.
Среди косвенных аналогов были найдены следующие: Патент РФ №2678988 /3/. Способ характеризуется тем, что к полученному супернатанту последовательно добавляют раствор, содержащий NaCl до конечной концентрации 0,48-0,6М в плазме крови, затем раствор, содержащий 1М Tris НС1 рН 7.0 до конечной концентрации 50 мМ, далее, к полученному раствору добавляют декстран синий с мол. массой 2000 кДа до конечной концентрации 4-8 мкг/мл, и ПЭГ с мол. массой 20 кДа, до конечной концентрации 1,5-5,0%. Недостатками способа являются высокое содержание в целевом продукте частиц неэкзосомального происхождения (диаметром более 150 нм), ограниченное количество экзосом, выделенных из сыворотки крови.
Патент РФ №2608509 /4/. Способ получения экзосом из крови, в котором кровь разделяют на плазму и клеточную фракцию с помощью центрифугирования при 600 g в течение 20 минут. Клеточную фракцию подвергают последовательной обработке буферным раствором ФСБ при рН 7,4, инкубации в течение 15 минут с последующим центрифугированием в течение 25 минут при 600 g, и сбором первого супернатанта. Затем проводят встряхивание с последующим центрифугированием в течение 10 минут при 500 g, и сбор второго супернатанта. Фильтрацию и ультрацентрифугирование выполняют одновременно с помощью ультрацентрифужных фильтровальных пробирок. Недостатками способа являются длительность выделения экзосом (более 6 часов), ограниченное количество экзосом, выделенных из сыворотки крови, присутствие в растворе и других везикул.
Патент РФ №2556825 /5/. Кровь разделяют на плазму и клеточную фракцию. Далее клеточную фракцию крови подвергают последовательной двухстадийной обработке сначала буферным раствором ФСБ, содержащим 5 мМ этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА), с последующим центрифугированием и сбором супернатанта. Обрабатывают клетки равным объемом 0,15-0,35% раствора трипсина в ФСБ, с последующим центрифугированием и сбором супернатанта. Плазму и полученные супернатанты из клеточной фракции объединяют, удаляют клеточный дебрис центрифугированием при 15000-17000 g в течение 10-20 минут. Удаляют примесь частиц не экзосомального происхождения путем фильтрации через фильтры с диаметром пор 0,1 мкм, а суммарный пул экзосом осаждают ультрацентрифугированием при 100000-160000 g в течение 60-120 минут. Недостатками данного способа являются недостаточный выход и чистота целевого продукта, а также высокая стоимость его выделения.
Технической проблемой, решаемой данным изобретением, является создание способа выделения экзосом из кондиционированной среды культуры клеток, доступного в осуществлении, не требующего больших материальных затрат, проводимого в короткие сроки и с выделением экзосом размерами до 150 нм.
Сущность изобретения заключается во взятии кондиционированной бессывороточной среды от культур клеток меланомы человека, центрифугировании кондиционированной среды при 5000 g в течение 30 минут, изъятии надосадочной жидкости с помощью микропипетки, центрифугировании надосадочной жидкости при 12000 g в течение 90 минут, удалении надосадочной жидкости, ресуспендировании осадка, смешивании получившегося образца с 16% раствором ПЭГ 6000, инкубировании раствора, его центрифугировании при 1500 g в течение 30 минут, удалении надосадочной жидкости и ресуспендировании осадка.
Изобретение поясняется рисунками.
Фиг. 1. Экспериментальный образец из группы №2 с молекулярной массой ПЭГ 6000 16%. Исследование путем сканирующей электронной микроскопией, увеличение 51 000. Выявлены микровезикулы шарообразной формы, размером 46-71 нм, что соотносится с размерами экзосом.
Фиг. 2. Экспериментальный образец из группы №2 с молекулярной массой ПЭГ 6000 16%. Исследование путем сканирующей электронной микроскопией, увеличение 25000. Выявлены микровезикулы шарообразной формы, размером 46-71 нм, что соотносится с размерами экзосом.
Фиг. 3. Экспериментальный образец из группы №3 с молекулярной массой ПЭГ 6000 32%. Исследование путем сканирующей электронной микроскопией, увеличение 17000. В образцах обнаружено множество полиморфных объектов, различных размеров, из-за чего невозможно обнаружить микровезикулы.
Фиг. 4. Экспериментальный образец из группы №1 с молекулярной массой ПЭГ 6000 8%. Исследование путем сканирующей электронной микроскопией, увеличение 20000. Выявлено незначительное количество образований различной формы и размеров. Экзосомы не обнаружены.
Фиг. 5. Контрольный образец из группы №2 с молекулярной массой ПЭГ 6000 8%. Исследование путем сканирующей электронной микроскопией, увеличение 32100. Выявлено незначительное количество образований различной формы и размеров. Экзосомы не обнаружены.
Было проведено исследование выделения экзосом с помощью преципитации полиэтиленгликолем 6000 (ПЭГ 6000) в различных концентрациях.
Способ осуществлялся следующим образом.
Культура клеток меланомы человека после очищения от клеточного дебриса и микровезикул путем отмывки в ФСБ, была переведена на бессывороточную питательную среду для исключения попадания в кондиционированную среду микровезикул из сыворотки крови. Через 3 дня культивирования из флакона с культурой клеток была изъята кондиционированная среда в объеме 15 мл, которая была разделена на 3 группы по 5 мл в каждой. В качестве контроля для каждой группы использовали образец с деионизированной водой. Общее количество образцов - 6.
Далее образцы были центрифугированы при 5000 g в течение 30 минут, при 4°С, после чего с помощью микропипетки надосадочная жидкость была изъята. Затем образцы подвергались повторному центрифугированию при 17000 g в течение 1,5 часов, при 4°С. Удалив надосадочную жидкость из образцов, мы получили осадок, который был ресуспендирован в 30 мкл ФСБ. Затем полученные образцы были смешаны с раствором ПЭГ 6000 в ФСБ, и были разделены на 3 группы, в зависимости от массовой доли ПЭГ 6000 в растворе: для первой группы доля ПЭГ 6000 составила 8%, для второй - 16%, для третьей - 32%. Объемное соотношение образцов к ПЭГ 6000 составляло 1:1. В таком виде образцы инкубировались при 4°С в течение 1 часа и периодически перемешивались с помощью вортекс-центрифуги. Далее образцы центрифугировались при 1500 g в течение 30 минут, при температуре 4°С, для осаждения ПЭГ 6000 с адсорбированными на его поверхности экзосомами. После удаления надосадочной жидкости, осадок ресуспендировали в 300 мкл ФСБ.
Для визуализации экзосом использовалась сканирующая электронная микроскопия (СЭМ). Приготовление образцов к СЭМ осуществлялось по следующему протоколу: центрифугирование при 1500 g в течение 15 минут, удаление надосадочной жидкости, ресуспендирование осадка в 300 мкл 3,2% раствора глутарового альдегида, инкубирование полученных растворов в течение 50 минут при температуре 4°С, центрифугирование при 1500 g в течение 15 минут, удаление надосадочной жидкости, ресуспендирование осадка в 300 мкл ФСБ, центрифугирование растворов при 1500 g в течение 15 минут, удаление надосадочной жидкости, повторное ресуспендирование в 300 мкл ФСБ, центрифугирование при 1500 g в течение 15 минут и удаление надосадочной жидкости. После осадок ресуспендировался в 300 мкл ФСБ. Получившиеся образцы наносили на предварительно обезжиренную с помощью этилового спирта алюминиевую фольгу и оставляли на 17 часов при комнатной температуре (24°С). После фольгу с образцами последовательно помещали на 5 минут в 50% этиловый спирт, на 5 минут в 70% этиловый спирт, на 10 минут в 96% этиловый спирт, на 10 минут в 100% этиловый спирт, на 10 минут в ацетон, на 2 минуты в амилацетат для удаления лишних органических соединений. Затем фольга с образцами подвергалась сушке в критической точке CO2 (SPI-Dry Critical Point Dryer, США) для удаления остатков жидкости. Образцы перед исследованием напыляли слоем золота (SPI Module™ Sputter Coater, США), после чего они исследовались при помощи сканирующей электронной микроскопии (Hitachi-S3400N, Япония).
По результатам СЭМ была определена оптимальная массовая доля ПЭГ 6000 в растворе ФСБ для выделения экзосом из кондиционированной среды - 16%. При этой массовой доле ПЭГ 6000 были обнаружены микровезикулы шарообразной формы, размером 46-71 нм, что соотносится с размерами экзосом (Фиг. 1, Фиг. 2). При массовой доле ПЭГ 6000 32% в образцах обнаружено множество полиморфных объектов, различных размеров, из-за чего невозможно обнаружить микровезикулы (Фиг. 3). При массовой доле ПЭГ 6000 8% экзосомы не были обнаружены (Фиг. 4). В контрольных образцах всех групп не было обнаружено экзосом (Фиг. 5).
Пример осуществления способа.
Культура клеток меланомы человека после очищения от клеточного дебриса и микровезикул путем отмывки в ФСБ, была переведена на бессывороточную питательную среду для исключения попадания в кондиционированную среду микровезикул из сыворотки крови. Через 3 дня культивирования из флакона с культурой клеток была изъята кондиционированная среда в объеме 15 мл, которую центрифугировали при 5000 g в течение 30 минут, при 4°С. После этого с помощью микропипетки была изъята надосадочная жидкость, которую вторично подвегли центрифугированию при 12000 g в течение 90 минут, при 4°С. Затем надосадочная жидкость была удалена, а осадок ресуспендирован в 30 мкл ФСБ. Получившийся образец смешали с 16% раствором ПЭГ 6000 в соотношении 1:1, инкубировали в течение 1 часа при 4°С с периодическим перемешиванием, центрифугировали раствор при 1500 g в течение 30 минут, при 4°С, удаляли надосадочную жидкость и ресуспендировали осадок в 300 мкл ФСБ.
Технический результат использования способа:
1. Возможность выделения экзосом из кондиционированной среды, в отличие от указанных аналогов, выявленных при патентном поиске.
2. Низкая стоимость реагентов на одно выделение экзосом. Себестоимость метода при оценке с существующими аналогами в 2-2,5 раза меньше, при расчете на одно выделение.
3. Простота способа: протокол выделения экзосом не требует специального дорогостоящего оборудования.
4. Быстрота выполнения - 4 часа.
Литература
1. Effective Isolation of Exosomes by Polyethylene Glycol from_Cell Culture Supernatant for In-depth Proteome Profiling. / Weng, Y., Sui, Z., Shan, Y., et al. // Analyst. - 2016. - P. 4640-4646.
2. ExtraPEG: A Polyethylene Glycol-Based Method for Enrichment of Extracellular Vesicles. / Rider, M. A., Hurwitz, S. N., Meckes, D. G., et al. // Nature Scientific Reports. - 2016. - P. 1-14.
3. Патент №2678988 C1. Коношенко Мария Юрьевна, Лехнов Евгений Анатольевич, Брызгунова Ольга Евгеньевна и др. Способ выделения внеклеточных везикул из биологических жидкостей. Дата начала действия патента: 5.03.2018.
4. Патент №2608509 С1. Кастарнова Елена Сергеевна, Оробец Владимир Александрович. Способ получения экзосом из крови. Дата начала действия патента: 11.02.2016.
5. Патент №2556825 С1. Тамкович Светлана Николаевна, Лактионов Павел Петрович, Тутанов Олег Сергеевич и др. Способ получения экзосом из крови. Дата начала действия патента: 15.09.2014.
Claims (1)
- Способ выделения экзосом из кондиционированной бессывороточной среды культуры клеток, включающий в себя взятие кондиционированной среды от культур клеток, ее центрифугирование при 5000 g в течение 30 минут при 4°С, отделение надосадочной жидкости, ее центрифугирование при 12000 g в течение 90 минут при 4°С, повторное удаление надосадочной жидкости, ресуспендирование осадка, смешивание получившегося образца с 16% по массовой доле раствором полиэтиленгликоля 6000 в соотношении 1:1, инкубирование полученной смеси в течение 1 часа при 4°С с периодическим перемешиванием, центрифугирование получившегося раствора при 1500 g в течение 30 минут при 4°С, удаление надосадочной жидкости и ресуспендирование осадка в 300 мкл ФСБ, выделение экзосом.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2020119232A RU2750928C1 (ru) | 2020-06-03 | 2020-06-03 | Способ выделения экзосом из кондиционированной среды культуры клеток |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2020119232A RU2750928C1 (ru) | 2020-06-03 | 2020-06-03 | Способ выделения экзосом из кондиционированной среды культуры клеток |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2750928C1 true RU2750928C1 (ru) | 2021-07-06 |
Family
ID=76820236
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2020119232A RU2750928C1 (ru) | 2020-06-03 | 2020-06-03 | Способ выделения экзосом из кондиционированной среды культуры клеток |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2750928C1 (ru) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN114214316A (zh) * | 2021-12-27 | 2022-03-22 | 安龄(上海)生物科技有限公司 | 一种脂肪间充质干细胞的外泌体rna提取方法 |
CN114700186A (zh) * | 2022-03-17 | 2022-07-05 | 中国科学院海洋研究所 | 一种刺参体液样品外泌体分离的方法 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2556825C1 (ru) * | 2014-09-15 | 2015-07-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химической биологии и фундаментальной медицины Сибирского отделения Российской академии наук (ИХБФМ СО РАН) | Способ получения экзосом из крови |
RU2608509C1 (ru) * | 2016-02-11 | 2017-01-18 | Елена Сергеевна Кастарнова | Способ получения экзосом из крови |
-
2020
- 2020-06-03 RU RU2020119232A patent/RU2750928C1/ru active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2556825C1 (ru) * | 2014-09-15 | 2015-07-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химической биологии и фундаментальной медицины Сибирского отделения Российской академии наук (ИХБФМ СО РАН) | Способ получения экзосом из крови |
RU2608509C1 (ru) * | 2016-02-11 | 2017-01-18 | Елена Сергеевна Кастарнова | Способ получения экзосом из крови |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
RIDER M.F. et al. ExtraPEG: A Polyethylene Glycol-Based Method for Enrichment of Extracellular Vesicles, Nature Scientific Reports, 2016, p. 1-14. * |
RIDER M.F. et al. ExtraPEG: A Polyethylene Glycol-Based Method for Enrichment of Extracellular Vesicles, Nature Scientific Reports, 2016, p. 1-14. WENG Y. et al. Effective Isolation of Exosomes by Polyethylene Glycol from_Cell Culture Supernatant for In-depth Proteome Profiling, Analyst., 2016, p 4640-4646. * |
WENG Y. et al. Effective Isolation of Exosomes by Polyethylene Glycol from_Cell Culture Supernatant for In-depth Proteome Profiling, Analyst., 2016, p 4640-4646. * |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN114214316A (zh) * | 2021-12-27 | 2022-03-22 | 安龄(上海)生物科技有限公司 | 一种脂肪间充质干细胞的外泌体rna提取方法 |
CN114700186A (zh) * | 2022-03-17 | 2022-07-05 | 中国科学院海洋研究所 | 一种刺参体液样品外泌体分离的方法 |
CN114700186B (zh) * | 2022-03-17 | 2023-04-18 | 中国科学院海洋研究所 | 一种刺参体液样品外泌体分离的方法 |
NL2034093B1 (en) * | 2022-03-17 | 2023-09-29 | Inst Oceanology Cas | Method for separating exosomes from apostichopus japonicus body fluid sample |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2750928C1 (ru) | Способ выделения экзосом из кондиционированной среды культуры клеток | |
CN108841788B (zh) | 蛋白交联纳米硅及制备方法和外泌体分离纯化方法及应用 | |
CN114591905B (zh) | 一种人红细胞制备凋亡囊泡的方法与应用 | |
CN112899218A (zh) | 一种用于外泌体提取的双重切向流过滤体系及外泌体的制备方法与应用 | |
JPWO2019039179A1 (ja) | エクソソームの単離方法およびエクソソームの単離キット | |
CN111658775B (zh) | 长链非编码rna在干细胞成骨分化和成脂分化中的作用 | |
CN111057705B (zh) | 一种提取游离核酸的试剂盒及使用方法 | |
CN105713900A (zh) | 基于磁性石墨烯纳米复合物的核酸提取方法 | |
CN111321108A (zh) | 一种高纯度外泌体密度梯度离心的方法 | |
CN111154835A (zh) | 一种ATAC-seq测序文库的构建方法 | |
CN114540297A (zh) | 一种间充质干细胞外泌体的分离和miRNA分析方法 | |
CN112029705B (zh) | 促内皮细胞产外泌体的方法、外泌体制剂和应用 | |
CN114657184B (zh) | 一种多价适体功能化dna纳米结构探针及其制备方法和应用 | |
CN114507642B (zh) | 一种动物神经系统周细胞单细胞的分离方法 | |
CN114736855B (zh) | 一种干细胞外泌体高纯度提取方法 | |
WO2019112028A1 (ja) | マイコプラズマの有無の検査方法 | |
CN115651076A (zh) | 人骨髓间充质干细胞来源凋亡囊泡的表面标志物及其应用 | |
CN114703120A (zh) | 一种动物神经系统血管平滑肌细胞单细胞的分离方法 | |
JP2019103401A (ja) | マイコプラズマの有無の検査方法 | |
RU2803918C1 (ru) | Способ получения очищенных сывороток культуральных, обеднённых факторами роста | |
RU2742053C1 (ru) | Способ получения нуклеината натрия из биомассы микроводоросли Chlorella vulgaris Beijerink | |
CN114958750B (zh) | 一种从胰腺癌组织提取外泌体的方法 | |
KR102629851B1 (ko) | 생물학적 물질 수용 공간을 포함하는 고분자 구조체 및 이를 이용한 생물학적 물질의 정제 방법 | |
EP4273229A1 (en) | Method for isolating exosomes with high efficiency and high purity | |
RU2749986C1 (ru) | Способ выделения кардиомиоцитов из ткани сердца человека |